Синтез полифункциональных индолсодержащих соединений на основе индол-3-карбальдегидов и индолилкарбинолов тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

На правах рукописи

Королёв Александр Михайлович

СИНТЕЗ ПОЛИФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ИНДОЛСОДЕРЖАЩИХ СОЕДИНЕНИЙ НА ОСНОВЕ ИНДОЛ-3-КАРБАЛЬДЕГИДОВ И ИНДОЛИЛКАРБИНОЛОВ

02.00.10 - Биоорганическая химия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук

—-

Москва - 2004

Работа выполнена в лаборатории химической трансформации антибиотиков ГУ НИИ по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе РАМН.

Научный консультант: доктор химических наук, профессор

Преображенская Мария Николаевна

Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор

Юровская Марина Абрамовна

доктор химических наук, профессор Юркевич Александр Морисович

доктор химических наук, профессор Бакиновский Леон Владимирович

Ведущая организация: Российский химико-технологический

университет им. Д. И. Менделеева

Защита диссертации состоится " у " ОКуТИ^л) КаЯ 2004 г. в /Г часов на заседании Диссертационного Совета Д 212.120.01 при Московской государственной академии тонкой химической технологии им. М. В. Ломоносова по адресу: 119571, Москва, пр. Вернадского, д. 86.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МИТХТ им. М.В. Ломоносова (119831, г. Москва, ул. М. Пироговская, д.1).

Автореферат разослан

2004 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета, кандидат химических наук, старший научный сотрудник

Лютик А.И.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы В настоящее время известно значительное количество биологически активных производных индола, среди которых следует упомянуть триптофан, гетероауксин, различные триптамины и их производные, многочисленные индольные алкалоиды и индолсодержащие антибиотики. Большинство этих веществ синтезируют на основе 3-формилиндола и грамина, реже 3-метокси- и 3-гидроксиметилиндолов -производных индола, вступающих в реакции нуклеофилъного замещения с соединениями, образующими под действием оснований стабильные карбоанионы (производные малоновой кислоты, р-кетоэфиры, нитроалканы). З-Формил- и 3-гидроксиметилиндолы неустойчивы в кислой среде, и превращения, происходящие с ними в этих условиях, изучены недостаточно. З-Формилиндол легко образует соль дииндолилметилия, химические свойства которого не исследовались. З-Гидроксиметилиндол и его гомологи взаимодействуют между собой, образуя под действием кислот смеси веществ с поликонденсированными и олигомерными структурами, однако влияние структурных факторов на реакционную способность карбинолов и состав получаемых соединений исследованы мало. Изучение превращений 3-формил- и 3-гидроксиметилиндолов в кислой среде может открыть путь к ранее труднодоступным производным индола с ценными биологическими свойствами. С другой стороны, 3-гидроксиметилиндолы селективно взаимодействуют с L-аскорбиновой кислотой, образуя её 2-С-производные (аскорбигены), которые представляют особый интерес, поскольку они являются природными соединениями, биологическая роль которых в настоящее время изучается. Эти индольные производные могут в зависимости от условий отщеплять L-аскорбиновую кислоту или подвергаться другим трансформациям. Изучение свойств аскорбигенов, их аналогов и продуктов их трансформации может позволить получить вещества нового типа и существенно расширить представления о природе химических превращений в этом классе гетероциклических соединений. Установление таких закономерностей представляется весьма актуальным для целенаправленного поиска новых веществ с антиканцерогенными, противоопухолевыми и иммуномодулирующими свойствами.

Целью работы было систематическое изучение условий взаимодействия биологически важных соединений - 3-формилиндолов, индолил- , а также арилкарбинолов, генерирующих электрофильные карбокатионы (индолилметилий катион, скатильный и бензильный катионы), между собой или с L-аскорбиновой кислотой, исследование свойств полученных соединений, а также разработка мет ¡д^^^^^д^^д^^д^рлсодержащих аналогов природных соединений. БИБЛИОТЕКА |

¡ЯШа

Научная новизна работы и практическая значимость. Исследованы условия трансформации 3-формилиндолов в кислой среде и на их основе разработаны удобные методы получения ранее труднодоступных соединений - производных индоло[2,3-Ь]- и индоло[3,2-А] карбазолов, а также солей трииндолилметилий катионов, которые проявляют свойства антибактериальных антибиотиков. Предложены методы синтеза ранее неизвестных (индол-З-ил)метан- и (5-метоксииндол-3-ил)метансульфонамидов - сульфоаналогов гетероауксина, основанные на «индолин-индольном» методе, а также 2-азидо-2-аллил-3-(1-Вос-индол-3-ил)пропионовой кислоты - предшественника аналога триптофана. На основе полифункциональных арил- и индолилкарбинолов и Z-аскорбиновой кислоты синтезирован ряд 2-С-производных аскорбиновой кислоты и изучены их химические свойства. Разработан удобный метод синтеза 1-алкоксииндолов в условиях межфазного катализа, позволяющий получать N-метоксиаскорбиген (неоаскорбиген), идентичный природному, и его гомологи. Изучены превращения 2-С-производных L-аскорбиновой кислоты в слабощелочной среде. Впервые выделены и охарактеризованы индивидуальные продукты такой трансформации -производные 1-дезокси-1-арил-1-сорбозы и 1-дезокси-1-арил^-тагатозы. Открыт ранее неизвестный путь трансформации аскорбигенов в кислой среде, в ходе которой образуются 2-гадрокси-4-гидроксиметил-3-(индол-3-ил)циклопент-2-енон и его производные. Исследовано влияние структурных факторов на ход этих превращений, выделены промежуточные соединения и на их основе предложены механизмы образования производных циклопентенонов и индолсодержащих кетоз как примеры «домино» реакций. Разработаны методы получения труднодоступных соединений - арилпроизводных кетоз (сорбоз и тагатоз), а также циклопентенонов, которые могут войти в арсенал современной органической химии. В опытах in vivo совместно с биологами показано, что аскорбиген, введенный перорально, превращается в крови в производные a-L-сорбозы и а^-тагатозы, идентичные полученным синтетически, а также проявляет ранее неизвестную биологическую активность, повышая неспецифическую резистентность организма к инфекционным и токсическим агентам. В настоящее время аскорбиген подготовлен к использованию в медицинской практике как лекарственное средство, снижающее токсические побочные эффекты противоопухолевых препаратов (подавление иммунитета, кроветворения и др.).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Впервые детально исследованы условия превращений 3-формилиндола, уророзеина -[соли ди(иидол-3-ил)метшшя] и их аналогов в кислой среде. Получены ранее неизвестные производные индоло^З-^карбазола и индоло^Д-^карбазола, а также соли три(индол-3-ил)метилия и ряд других соединений.

2. Разработаны методы синтеза ранее недоступного (индол-З-ил)метансульфонамида и его 5-метоксипроизводного - сульфоаналогов гетероауксина, а также 2-азидо-2-аллил-3-(1-Вос-индол-3-ил)пропионовой кислоты - предшественника аналога триптофана.

3. Впервые получены новые 2-С-производные 1-аскорбиновой кислоты и различных полифункциональных арил- и гетероарилкарбинолов Изучены их химические свойства. Впервые получены новые производные 2-дегидроаскорбиновой кислоты и 2-гидроксиметилиндола и установлено их строение.

4. Детально изучены превращения 2-С-производных Ь-аскорбиновой кислоты в слабощелочной среде. Впервые выделены продукты трансформации - индивидуальные 1-дезокси-1 -индол ил-а-Ь-сорбозы и 1-дезокси-1-индолил- а-Ь-тагатозы.

5. Исследована трансформация 2-С-производных Ь-аскорбиновой кислоты в кислой среде. Открыта новая реакция трансформации аскорбигенов в кислоте, ведущая к 2-гидрокси-4-гидроксиметил-3-(индол-3-ил)циклопент-2-енону и его производным. На примере аскорбигена установлена динамика образования промежуточных и конечных продуктов этой реакции, которые были выделены и идентифицированы. Предложена схема превращений аскорбигена.

Апробация работы. Результаты работы докладывались на 15-том Международном конгрессе по гетероциклической химии, Тайпей, 1995 г.; 17-том Международном Конгрессе по гетероциклической химии, Вена, 1999 г.; 1-ой Всероссийской конференции по химии гетероциклов памяти А.Н.Коста, Суздаль, 2000 г.; 3-ем Всероссийском симпозиуме по органической химии "Стратегия и тактика органического синтеза", Ярославль, 2001 г.; 20-том Европейском коллоквиуме по Гетероциклической Химии, Стокгольм, 2002 г.; 2-ой Международной конференции «Химия и биологическая активность кислород- и серусодержащих гетероциклов», Москва, 2003 г.; Международном симпозиуме " Успехи в синтетической, комбинаторной и медицинской химии ", Москва, 2004 г.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 231 страницах машинописного текста, содержит 71 схему 10 рисунков, 26 таблиц и состоит из введения, литературного обзора, изложения и обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка литературы ( 235 наименований).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 2 обзора, 1 патент, 19 статей и 12 тезисов.

Представленная работа является частью проектов по фундаментальным исследованиям в области химии индольных соединений и выполнена при поддержке грантов Российского Фонда Фундаментальных Исследований: № 01-03-33028, № 01-03-33090 и гранта Международного Научно-Технического Центра, проект № 1910.

Основное содержание работы

1. Электрофильные реакции 3-замещённых индолов.

1.1 Превращения 3-формилиидолов под действием кислот.

Синтетические возможности при трансформациях 3-формилиндола (1а) в сильных кислотах ранее были недостаточно изучены. В сильных кислотах 1а способен к ipso -замещению при З-С-атоме, образуя соль дииндолилметилий катиона (уророзеин, 2а), который стабилен в растворах минеральных и органических кислот (рН <1), но в водно-метанольном растворе 2а неустойчив и трансформируется в смесь индолсодержащих соединений. Продукты трансформации уророзеина (2а) были выделены хроматографическими методами н идентифицированы с использованием методов 'Н и "С ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии (схема1). Колоночной хроматографией был выделен 6-(индол-3-ил)-5Н,7Н-индоло[2,3-b]карбазол (За) как основной продукт.

Схема 1

Препаративной ТСХ были выделены: ярко-оранжевая соль три(индол-3-ил)метилия (4а), ди(индол-3-ил)метан (5а), три(индол-3-ил)метан (6а) 2,3-дискатилиндол (7а), флуоресцирующий индоло^Д-^карбазол (8а) и 6-(индол-3-ил)-5НД1Н-индоло[3,2-^карбазол (9а). Присутствие незамещенного индола (10а) было показано методами ТСХ и ВЭЖХ.

При нагревании 3-формилиндола (1а) в растворе серной кислоты в присутствии

метанола образуется смесь, содержащая те же компоненты, что и при распаде уророзеина, но в этом случае среди продуктов реакции преобладал 4а (25%).

Аналогичным образом 1-метил-З-формилиндол (16) при нагревании в разбавленной серной кислоте превратили в М,Ы'-диметшгуророзеин (26) (схема 1). Нагревание 1б в смеси метанола с серной кислотой вновь дало 26 в качестве основного продукта. Соединение 26 оказалось гораздо более стабильным в растворе, чем уророзеин (2а), и распадалось только при нагревании в метанольном растворе при 50-60° С в течение нескольких часов. Основным продуктом является соль три(1-индол-3-ил)метилия (46). Был также выделен 5^1Ш-диметилиндоло[3,2-6]карбазол (86) и 5К,1Ш-диметил-6-(1-метилиндол-3-ил)индоло[3,2-^карбазол (9б).

Следует отметить, что при трансформации уророзеина (2а) происходило образование производных индоло^З-^карбазола, в то время как среди продуктов трансформации диметилуророзеина (26) выделены только производные индоло^Д-^карбазола, что можно объяснить электродонорным влиянием и стерическими затруднениями, вызываемыми N метильными группами.

Из 5-бром-З-формилиндола (11) с выходом 72% был получен 5,5'-дибромуророзеин (12), который распадался в растворе, но в более жестких условиях, чем 2а (при кипячении в

Схема 2

течение 2 часов) (схема 2). При нагревании 11 в смеси 35 % серной кислоты и метанола (1:2) в качестве основного продукта с выходом 32 % была выделена ярко-желтая соль три(5-броминдол-3-ил)метилия (13), а в ходе деградации 12 образовывался набор не менее чем из 10 веществ, в котором помимо 13 был также идентифицирован ди(5-бром-индол-3-ил)метан (14) с выходом около 10 % (схема 2). Строение вещества 4б,8б,9б и 12-14 было установлено с помощью методов 'Н и 13С ЯМР-спектроскошш и масс-спектрометрии.

1.1.1 Алкилирование 6-(индол-3-ил)-5Н.7Н-индоло[2,3-b]карбазола Индолокарбазолы также, как и индолы, образуют солеобразные соединения с щелочными и щелочноземельными металлами, которые используются в реакциях алкилирования и ацшшрования. Мы исследовали процесс алкилирования 6-(индол-3-ил)-

5Н,7Н-индоло[2,3-b]карбазола (За). Соединение За ранее не было описано, и представляет собой новый тип производных индолокарбазола.

При действии (СНзО^БСЪ ИЛИ СНз1 на соединение За в присутствии гидрида натрия с выходом 95% было получено 5,7,1^^^-триметильное производное 15а. Выделить моно- и диметильные производные не удалось (схема 3).

При аллилировании в тех же условиях происходило последовательное замещение протонов при атомах азота, причем в первую очередь при атоме азота наиболее доступного индольного заместителя в положении 6 с образованием 16, а затем последовательно замещались протоны при азотах в индолокарбазольной системе, что приводило к 5-аллил-6-(1-аллилиндол-3-ил)индоло[2,3-b]карбазолу (17) и 6-(1-аллилиндол-3-ил)-5,7-диаллил-индоло^З-^карбазолу (15б) (схема 3). Следует отметить, что реакция практически.

останавливалась на стадии моноаллильного производного 16, и лишь при добавлении большого избытка NaH и аллилбромида алкилирование проходило по пространственно затрудненным атомам N5 И N7 индолокарбазольного цикла. Моно-, ди- и триаллилпроизвод-ные 15б, 16,17 а также триметилпроизводное 15а были выделены из реакционной смеси с помощью препаративной ТСХ, их структуры были подтверждены данными Н ЯМР -спектроскопии и масс-спектрометрии.

При взаимодействии индолокарбазола За с NaH в течение 30 мин. без добавления алкилирующего агента затрагивался углеродный скелет молекулы (схема 4), поскольку За трансформировался в несколько соединений (по данным ВЭЖХ), последующее метилирование которых приводило к образованию сложного набора веществ, из числа которых был выделен с выходом 36% 5,7-диметилиндоло[2,3-Ь]карбазол (18).

К=Ме (а); СН2-СН=СН2 (б)

Схема 3

Схема 4

1.2. Синтез 2-азидо-2-аллил-3-(1-Вос-индол-3-ил)пропионовой кислоты 2-Азидо-2-алкилкарбоновые кислоты представляют значительный интерес как предшественники а,а-дизамещенных неприродных аминокислот, используемых в синтезах модифицированных биологически активных пептидов и пептидомиметиков, устойчивых к действию протеаз. Они применяются для разработки лекарств, регулирующих кровяное давление и свёртываемость крови, в качестве ингибиторов HIV-протеаз, иммуносупрессоров и агонистов нейропептидов.

Для синтеза 2-азидо-2-аллил-3-(1-Вос-индол-3-ил)пропионовой кислоты (19) мы использовали подход, основанный на модификации скатилпроизводного кислоты Мельдрума (20) (схема 5). (Индол-З-ил)метилиденовое производное 22, полученное при взаимодействии 3-формилиндола (1а) с кислотой Мельдрума (21), восстановили при гидрировании над Pd/C в скатильное производное 20. Его последующее С-алкилирование аллилбромидом в условиях межфазного катализа дало дизамещённую кислоту Мельдрума 23, при этом азот пиррольного кольца индола в этих условиях не затрагивался. Щелочной

гидролиз 23 привёл к дикарбоновой кислоте 24, которая декарбоксилировалась в ксилоле в токе Аг, образуя 2-аллил-3-(индол-3-ил)пропионовую кислоту 25. Последняя была этерифицирована в метиловый эфир 26 для последующего введения Вос-защиты по азоту индольного кольца. Эфир 27 получили, ацилируя 26 В0С2О в присутствии бис(триметилсилиламида)калия (КГМДС). Азидогруппу ввели в молекулу 27, используя 2,4,6-триизопропилфенилсульфоназид (трисилазид) и КГМДС, и получили 28 с 60% выходом. Щелочной гидролиз 28 привел к кислоте 19, в которой Вос-группа осталась незатронутой. Метиловый эфир 2-аллил-2-Вос-3-(1-Вос-индол-3-ил)пропионовой кислоты (29) выделили как примесь в реакции азидирования.

2. Электрофильные реакции 2- и 3-гидроксиметилиндолов и грамина.

2.1 «Индолин-индольный» метод синтеза (индол-З-ил)метапсульфонамида и его

5-метоксипроизводного

Замещение карбоксильных или карбамоильных групп сульфонамидными в биологический активных карбоновых кислотах, например, в п-аминобензойной кислоте, является одним из классических подходов в синтезе лекарственных средств, поскольку сульфонамидные аналоги более устойчивы к действию ферментов и часто проявляют свойства антиметаболитов. Поэтому несомненный интерес представляет синтез ранее неизвестного (индол-3-ил)метансульфонамида, являющегося серосодержащим аналогом амида гетероуксина. Для синтеза (индол-З-ил)метансульфонамидов 30 мы использовали «индолян-индольный» метод, который позволяет получить более устойчивые промежуточные сульфонамидные производные индолина, которые могут быть окислены в производные индола на последней стадии синтеза (схема 6).

Скатилсульфонат натрия (31а) или его 5-метоксипроизводное 316, синтезированные из соответствующих граминов 32, восстановили в иядолшшроизводные 33а,б действием NaBH3CN в трифторуксусной кислоте (ТФУ) (схема 6). Сульфоновую кислоту 33а при последовательном действии SOQ2 и трет-бутиламина трансформировали в трет-бутилсульфонамид 34а, который превратили в 35а. Однако индолины 34а и 35а не удалось дегидрировать до индолов 36а и 30а под действием 2,3-дихлор-5,6-дицианбензохинона или МпО2. Поэтому (1-ацетилиндолин-3-ил)метансульфонаты 37а,б, полученные из соответствующих индолинов 33, превратили в трет-бутилсульфонамиды 38а,б. Последние дегидрировали МпО2 до скатилсульфониламидов 39а,б. Защиту с сульфонамидной группы 39а и 396 удаляли в ТФУ, получив 40а и 406. 1-Ацетилскатилсульфонамид (40а) дезацетилировали до 30а MeONa в МеОН. 5-Метокси-гомолог 30б получили из 40б под действием NaOH.

2.2 Синтез и химические свойства 2-С-производных Ь-аскорбиновой кислоты 2.2.1 Синтез 1-М-(В-Р-глюкопиранозил)- и 1-К-(1-дезокси-2.3.4.5.6-иента-0-ацетил-Р-галактит-1 -ил) аскорбигенов. Синтез производных аскорбигена (41а) - 2-С-[(индол-3-ил)метил]-а-1-ксило-гекс-3-улофуранозоно-1,4-лактона, содержащих остаток моносахарида или полифункционального

спирта, связанного с индольным азотом, до настоящего времени не был описан. Эти соединения представляют интерес как гидрофильные производные аскорбигена нового типа, содержащие одновременно фрагмент К-гликозил- или К-полигидроксиалкилиндола

(индолъных аналогов нуклеозидов) и ^аскорбиновой кислоты (АК). В качестве исходных веществ мы использовали 1-^(2,3,4,6-тетра-О-ацетил-р^-глюкопиранозил)-3-формилиндол (42) и 1-^(1-дезокси-2,3,4,5,6-пента-О^-ацетилгалактит-1-ил)индол, полученные описанными ранее методами. Обычный метод синтеза аскорбигенов основан на конденсации 3-гидроксиметилиндола и его гомологов с АК в цитратно-фосфатном буфере (ЦФБ, рН 4.2) или этиловом спирте при 20-40° С.

Схема 7

З-Формилиндол 42 был восстановлен NaBH4 до соответствующего карбинола 43 (схема 7). Соединение 43 более стабильно, чем 1-алкил-З-гидроксиметилиндолы и в ЦФБ не образует аскорбиген 44. При дезацетилировании 43 под действием CH3ONa в метаноле был получен -гидроксиметилиндол (45), который при

взаимодействии с АК в ЦБФ в течение нескольких дней образовал глюкопиранозил)-аскорбиген (46) с выходом около 40%. Следует отметить, что пер-О-ацетилированные производные 1-N-(B-D-галактопиранозил)-3-гидроксиметилиндола и 1-№-(а-1-арабинопиранозил)-3-гидроксиметшшндола также не удалось ввести в конденсацию с АК.

Различия в реакционной способности карбинолов 43 и 45 могут быть связаны как с электроноакцепторным влиянием ацетильных групп и гликозидного кислорода, так и с стерическим затруднениями, которые создают ацетильные группы, или пониженной растворимостью 43 по сравнению с 45. Для изучения влияния этих факторов на реакционную способность 43 был синтезирован 1-^(1-дезокси-2,3,4,5,6-пента-О-ацетил^-галактит-1-ил)-

3-формилиндол (47), содержащий пер-ацетилированный К-полиольный заместитель примерно такого же объёма, как и в соединении 42, но не имеющий гликозидного атома кислорода (схема 8). 1-К-(1-Дезокси-2,3,4,5,6-пента-О-ацетил-Э-галактит-1-ил)-3-гидроксиметилиндол (48), полученный при восстановлении 47 КаВН4, обладал большей реакционной способностью, чем 43, и при конденсации с АК в ЦФБ в течение трех суток, образовал 1-К-(1-дезокси-2,3,4,5,6-пента-0-ацетил-Э-галактит-1-ил)аскорбиген (49) с 40% выходом. Это свидетельствует о том, что основным препятствием на пути образования аскорбигена 44 из 43, является совокупное электронное влияние ацетильных групп и

Схема 8

циклической системы с гликозидным атомом кислорода, а не стерические затруднения или факторы растворимости.

Строение всех полученных соединений было подтверждено данными ЯМР-спектров. Константа ^ ^ в глюкозидах 43 и 46, составляющая 8,9 Гц, свидетельствует о ди-транс-ориентации ГН и 2'Н атомов и, следовательно, о Р-.В-конфигурации и к6|н ф о р м а ц и и глюкопиранозного остатка в полученных соединениях.

2.2.2 Синтез и химические свойства К-алкоксиаскорбигенов К-Метоксиаскорбиген (неоаскорбиген) (50а) образуется в растительных тканях овощей из семейства крестоцветных в процессе аутолиза индолсодержащего алкалоида -неоглюкобрассещша. Химические и биологические свойства 50а ранее не исследовались.

Ключевым соединением в синтезе 50а и его гомологов является 1-гидроксиндол (51) - неустойчивое соединение, которое обычно выделяют в виде 1-алкоксииндолов 52. Существует два подхода к синтезу 51. Стратегия первого (А) заключается в синтезе орто-замещенных нитробензолов 53, которые при восстановлении циклизуются, образуя 51 (схема 9). Второй подход (Б) заключался в окислении индолина (54) в 51 30% перекисью

водорода в присутствии каталитических количеств вольфрамата натрия в водно-метанольных растворах (схема 9).

Первоначально мы использовали оба метода для синтеза 1-гидроксииндола (51), который на следующем этапе без очистки вводили в реакцию О-алкилирования алкилгалогенидами в ТГФ в присутствии гидрида натрия, получая гомолога 52. Так, при

Схема 9

синтезе 1-метоксииндола (52а) из о-нитротолуола (метод А) его выход составил 31% (считая на о-нитротолуол), при синтезе из 54 (метод Б) суммарный выход 52а равен 44%, 1-этоксииндола (526) - 41% , 1-н-пропоксииндола (52в) - 39,4%, 1-н-бутокси индола (52г) -38,1%, 1-н-гексилоксииндола (52д) - 20,9%.

Основным недостатком обоих методов был низкий выход 51, при алкилировании которого с удовлетворительным выходом образовывались 1-алкоксииндолы 52 только с небольшими алкильными радикалами.

Схема 10

Мы модифицировали метод Б, окисляя 54 в 51 в условиях межфазного катализа и без выделения алкилируя нестабильный 51 в той же системе (схема 10). Варьируя условия межфазного катализа и различные межфазные катализаторы, такие как четвертичные

аммониевые соли или краун-эфиры, мы определили оптимальные условия окисления 54. Было показано, что тип межфазного катализатора оказывает значительное влияние на выход конечного продукта. Лучшие результаты были получены при использовании вольфрамата натрия как катализатора окисления в системе дихлорметан - вода и триэтилбензиламмоний хлорида как межфазного катализатора при температуре 16-20° С. В этом случае суммарный выход 1-алкоксииндолов 52а-в на стадиях окисления и алкилирования составлял не менее 50%. Основными побочными продуктами при синтезе в условиях МФК являлись 1-алкилиндолины 55а-в, образовавшиеся при алкилировании соответствующими алкилгалогенидами пепрореагировавшего индолина, которые легко удалялись из смеси растворами кислот.

Структура 1-алкоксииндолов 52а-д, полученных разными способами, была подтверждена методами ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии.

11 = «. ОМе, 6. ОЕ(, в ОРг, г ОВц, д н-С4Н,3

Схема 11

1-Алкоксииндолы 52а-д превратили в соответствующие 3-формилпроизводные 56а-д Альдегиды 56а-в восстановили NaBH4» до 1-алкокси-З-гидроксиметилиндолов 57а-в. Последние конденсировали с АК и получили ^алкоксиаскорбигены 50а-в с выходами 6580% (схема 11) Помимо аскорбигенов 50 из реакционной смеси методом препаративной ТСХ были выделены аскорбиген (58а), его

^этокси- и N-пропокси - гомологи 58б,в с выходами 1-2%, а также соответствующие ди(1-алкоксииндол-3-ил)метаны 59а-в с выходами около 5% (схема 11)

^Этоксиаскорбиген (506) в метанольном растворе НС1 образовывал 3-ОМе-гликозид 60б с выходом 55% (схема 12). Под действием NaBH4 в соединениях 50б,в

восстанавливалась гемикетальная группа в С-3-положении и с выходами 60-65% образовывался лактон 2-С'[(1-этоксииндол-3-ил)метил]-1,-гулоновой кислоты (61б) или

Схема 1

2-С-[(1-н-пропоксииндол-3-ил)метил]-1,-гулоновой кислоты (61в) соответственно (схема 12). Характеристики Н ЯМР-спектров в соединениях 61б,в совпадают за исключением сигналов н-алкоксигрупп. Конфигурацию С-3 атома - (3R), в 61 установили с помощью ядерного эффекта Оверхаузера (ЯЭО).

Схема 1

Первичные амины расщепляли лактонное кольцо ^метоксиаскорбигена (50а), образуя бензиламид 62а (60%) или бутиламид 63а (55%) 2-С-[(1-метоксииндол-3-Ил)метил]-а-£-ксило-гекс-3-улофуранозоновой кислоты (схема 13).

2.2.3 Реакция (индол-З-ил)этандиола с Ь-аскорбиновой кислотой Взаимодействие (индол-З-ил)зтандиола (64), полученного из 3-гидроксиацетил-индола (65), и АК в водном этаноле при комнатной температуре ведет к смеси трех соединений (по данным ВЭЖХ) с общим выходом 73% (схема 14). Эти вещества при помощи препаративной ТСХ разделили на фракции, одна из которых содержала индивидуальный диастереомер 66, а другая - его изомер 67 и замещённый диоксаспирононан 68. Попытка разделить смесь смесь соединений 67 и 68 была неудачной: выделенные методом препаративной ТСХ индивидуальные соединения 67 и 68 дали опять смесь этих же соединений, что привело к предположению, что они находятся в равновесии.

68

Схема 14

Методами 'Н- И 13С ЯМР -спектроскопии было показано, что в соединениях 66 и 67 стабилизация молекулы с образованием второго фуранового цикла происходит не за счет 6-ОН и 3-кето-групп АК, как в аскорбигене 41а, а за счет СН2ОН группы соседней со скатильным углеродным атомом (1") и 3-кетогрупы АК, которые, создают гемикетальный фурановый цикл по одну сторону с соседним скатильным атомом. Эти соединения представляют собой новый тип производных АК.

Смещение сигналов Н-4 и С-4 в область сильного поля в ЯМР спектрах структурного изомера 68 показывает, что 4-С-ОН группа незамещена и следовательно лактонное кольцо разомкнуто, однако совпадение химических сдвигов протонов Н-5, Н-6а и Н-6б с аналогичными сигналами других аскорбигенов свидетельствует о существовании в молекуле полной кетальной структуры. Это позволило предположить, что продукт превращения диастереомера 67 образует спиросоединение 68 за счет кеталя в С-3 положении.

Смесь соединений 66-68 в безводных кислых условиях (НС1 в этаноле) трансформировали в соответствующие диастереомерные трициклические кетали 69 и 70, а также сложный эфир 71, которые разделили при помощи препаративной ТСХ (схема 15).

Абсолютную конфигурацию при 1" С-атоме в соединениях 66-71 определили, используя метод ЯЭО (схема 16). Возрастание интенсивности сигналов 4-Н (9%), 2"-Нв (1%) и 1"-Н (2%) наблюдалось для соединения 70, тогда как в соединениии 66 облучение 2'-Н протона вело только к возрастанию интенсивности сигналов 2"-Н, (4%) и 1"-Н (2%). Это свидетельствует о том, что в соединении 70 и следовательно в 67 индольный фрагмент

Схема 16

находится в эндо - позиции (Г^-конфигурация), в то время как в соединении 66 и, следовательно, в соединении 69 в экзо - позиции (1"^-конфигурация). Раскрытие лактонного кольца в 71 делает возможным менее жесткую конформацию для этого соединения. В спиросоединении 71 4-Н и 2'-Н протоны более отдалены друг от друга чем в 70. Это подтвердило облучение 2'-Н протона (метод ЯЭО), которое ведет только к возрастанию интенсивности сигналов протонов 1"-Н (2%) и 2И-Нв (0,5%), но не 4-Н. Существование равновесия между соединениями 67 и 68 предполагает 1"^ -конфигурацию соединения 68 и, следовательно, соединения 71.

2.2.4 Взаимодействие 2-гидроксиметилиндолов с L-дегидроаскорбиновой кислотой 2-Гидроксиметилиндолы 72 - структурные изомеры 3-гидроксиметилиндола, в отличие от последнего не образуют гипотетические аскорбигены 73. Однако при длительной инкубации (в течение 1 месяца) раствора смеси 72а и АК в водно-спиртовой среде при рН 44,5, в реакционной среде накапливалась L-дегидроаскорбиновая кислота (ДАК, 74), образующаяся при окислении АК кислородом воздуха, с которой 72а взаимодействовал, образуя тетрациклический продукт - 3-(1,2-дэтидроксиэтил)-За,10с-дигидрокси-За,5,6,10с-тетрагидро-ЗЯ-2,4-диокса-6-аза-циклопента-[с]флуорен-1-он (75а) с выходом 15-20% (схема 17). ДАК, полученная при окислении АК, например, кислородом на активированном угле в водно-спиртовой смеси, реагировала с 72а значительно быстрее, за несколько дней, и выходы 75а увеличивались до 50-60%. Аналогично реагировал 2-гидроксиметил-1-метилиндол (72б), превращаясь в 75б. Полученные вещества были выделены в

Схема 17

индивидуальном виде методом колоночной хроматографии. При взаимодействии 75а,б с ацетоном в присутствии п-толуолсульфокислоты, были получены кетали 76а,б с выходом 90% (схема 17).

Строение 75а,б и 76а,б установлено на основании данных 'Н и ,3С ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии высокого разрешения.

Выбор между структурами 75а,б и 77а,б был осуществлен на основании КССВ ^сн (13С ЯМР) и ядерного эффекта Оверхаузера (ЯЭО, Н ЯМР). Измеренные величины ЯЭО в 'Н ЯМР спектре 76б (9% для 3-Н при насыщении сигнала 5-СНа и 6% для 5-СНа при насыщении сигнала 3-Н) позволили высказать предположение о геометрии тетрациклической системы (цис-сочленепие фуранового и пиранового циклов) т.е. За Я, 10с 8 конфигурации 75 и 76.

2.2.5 Изучение взаимодействия РЬ-М-метил-В-гидрокситриптамипа с Ь-аскорбиновой кислотой

Функциональные группы, соседствующие с реакционным центром в 3-гидроксиме-тилиндолах, влияют не только на реакционную способность карбокатиона, но и различным образом взаимодействуют с АК после электрофильного присоединения по 2-С-положению. В отличие от (индол-З-ил)этандиола (64), образующего бициклические 2-С-производные АК, молекулы которых стабилизируются при замыкании 3-СО-гемикеталя с участием

СН2ОН фрагмента 64, взаимодействие D,L-N-метил-Р-гидрокситриптамина (78) с АК происходит последовательно через образование аскорбигена 79 - аналога 41а, в котором метиламиногруппа внутримолекулярно ацилируется лактоном, образуя диастереомерные 3-гидрокси-4-(иядол-3-ил)-1-метил-3-(2,3,4-тригироксибутирил)пирролид-2-оны (80а,б) с общим выходом 70-83% (схема 18). Компоненты смеси были разделены методом препаративной ТСХ.

Определение структур 80а,б проводилось спектральными методами. В спектрах ЯМР с использованием метода гетероядерной корреляции по дальним КССВ 13С - 'Н были получены кросс-пики между протонами ^СНз-группы и углеродным атомом карбонильной группы лактамного цикла. Фрагмент аскорбиновой кислоты С3-С6 присутствует в изомере 80а в виде циклического полукеталя, в то время как в изомере 80б - в

виде ациклического тригидроксибутироильного остатка. Наличие фуранозного цикла в изомере 80а было подтверждено 13С ЯМР спектроскопией.

Среди всех ассиметрических атомов 80а и 806, только конфигурации С-3 и С-4 атомов лактамного цикла не предопределены стереохимией АК. Пространственное расположение заместителей при С-3 атоме совпадает с конфигурацией С-2 атома лактонного кольца аскорбигена 79. Во всех известных реакциях 2-С-алкилирования АК присоединение карбокатиона проходило со стороны, противоположной объёмистому заместителю СНОН-СНгОН, за исключением 2-С-метилирования АК, когда из-за малого размера метильной группы образовывалась смесь 2S и 2R изомеров. Таким образом, для С-3 атома в соединениях 80а и 806 предполагается S-конфигурация.

Конфигурация С-4 атома в 80а и 806 определялась на примере их три-0-ацетильных производных 81а, б, полученных ацилированием 80а и 806 уксусным ангидридом в пиридине. В этой реакции ацетилирование проходит исключительно по гидроксильным группам углеводного остатка, не затрагивая третичную гидроксильную группу лактамного кольца (3-ОН). Дезацетилирование гидроксильных групп в 81а,б (MeONa в МеОН) приводило к образованию соответствующих индивидуальных исходных соединений 80а и 806 (ВЭЖХ).

Методом 'Н- и |3С ЯМР-спектроскопии было показано, что соединения 81а,б имеют открытый углеводный фрагмент, аналогичный таковому в 80б. Наличие хорошо разрешенного сигнала 3-ОН протона в ]Н ЯМР спектрах 81а,б в DMSO-d6 сделало возможным использование ЯЭО для определения конфигурации 4-С атома. Так, для 816 при насыщении сигнала 3-О-протона (6,73 мд) наблюдалось усиление сигнала мультиплст 4-Н протона (3,87 мд) на 8%, в то время как для 81а насыщение сигнала 3-ОН протона не влияло на сигнал 4-Н. На основании этих данных был сделан вывод, что в соединении 816 и, следовательно, 806 индольный и углеводный фрагменты находятся друг к другу в цис-положении, а в 81а и, следовательно, в 80а - в транс-положении, что соответствует 4R -конфигурации для 80а, 81а и 4S - для 80б,81б.

2.2.6 Синтез 2-С-бензильных аналогов аскорбигена и изучение их свойств

Гормоны ряда катехоламинов - адреналин и норадреналин, вырабатываются в надпочечниках человека и животных, где наиболее высоко содержание Ь-аскорбиновой кислоты. Мы предположили, что существует возможность взаимодействия между АК и катехоламинами в организме. Нам не удалось найти условия взаимодействия адреналина с АК в лабораторных условиях, однако 4-гидроксибензильные спирты 82, содержащие фрагмент структуры адреналина и норадреналина, могут быть рассмотрены, как простейшие модели для изучения такого взаимодействия.

Мы проводили конденсацию с АК в кислых водно-этанольной растворах, используя в

19

качестве исходных ряд замешенных бензоловых спиртов 82, которые восстанавливали гидрированием 4-гидроксибензальдегида (83а), 3,4-дигидроксибензальдегида (83б) и

И

ук 85а,б Ч^я

ОН ¿Н

84а,б,в-

а.Я = Н

б. И = ОН

в. Я«ОМе

Схема 19

4-гидрокси-З-метоксибензальдегида (83в) (ванилина) над никелем Ренея (схема 19). Используя оптимальные параметры реакции: рН ~ 1,0, 4-кратный избыток АК, инертные условия (аргон), температура 25° -30° С, мы синтезировали 2-С-(4-гидроксибензил)-а^-ксило-гекс-3-улофуранозоно-1,4-лактон (84а), 2-С-(3,4-дигидроксибензил)-а^-ксило-гскс-3-улофуранозоно-1,4-лактон (846) и 2-С-(4-гидрокси-3-метокси6ензил)-а^-ксило-гекс-3-улофуранозоно-1,4-лактон (84в) с выходами 16%, 51% и 25% соответственно.

При инкубации аскорбигенов 84а,б в растворе НС1 в МеОН (абс.) происходит метилирование полуацетального гидроксила в их лактонном кольце и образуются соответствующие 3-О-метил гликозиды 85а,б, структура которых была подтверждена физико-химическими методами (схема 19). Следует отметить, что в отличие от индолсодержащих аскорбигенов, метилирование которых проходит за 5-8 ч., реакция с гидроксибензильными аналогами 84 продолжалась более двух недель и не доходила до конца.

Недавние исследования показали, что некоторые арилсодержащие пирролы обладают биологическими свойствами, поэтому синтез и изучение производных диарилпирролов представляет значительный интерес. Мы исследовали реакционную способность моно- и дифенил(пиррол-3-ил)этанолов 87а-д, которые были получены восстановлением ацетилпирролов 86а-д NaBH4 (схема 20). Спирт 87а не реагировал с АК, а трансформировался в продукты неустановленного строения. 5-Фенил-пирролилэтанол 87б взаимодействовал с АК, но его 2-С-производное АК оказалось нестабильным и при выделении распадалось. 1,5-Дифенилпирролилэтанолы 87в-д взаимодействовали с избытком АК в 80% водном спирте в течение 30-60 мин, образуя смеси диастереоизомеров

2.2.7. Синтез 2-С-ниррольных производных L-аскорбиновой кислоты

он

н3сос и, Н3С1 1 Н3С м Я2 Н3С к

«3

86а-д

1*3 87 а-д

ЛК

а. РЬ, К2=Я3=Н

б. К1=К3=Н, К2=РЬ,

в. Я!=Н, 1*2=1*3= РЬ,

88в-д

г. Й,=Н, 112= м-МеОРЬ, Яз-РЬ,

д. Я,=Н, К2»м^02РЬ, К3=РЬ,

Схема 20

88в-д с 73-90% выходом (схема 20). Строение 88в-д было подтверждено методами 'НЯМР -спектроскопии и масс-спектрометрии.

3. Химическая трансформация 2-С-производных Ь-аскорбиновой кислоты в различных условиях

3.1 Изучение превращений аскорбигена и его аналогов в щелочной среде

Ранее было показано, что в водных растворах щелочей (рН 10-12) аскорбиген (41а) и его К-алкильные гомологи трансформируются в 1-деокси-1-(индол-3-ил)-а-Ь-сорбопиранозу (89а) и её производные 89б,в, которые были выделены в качестве основных компонентов с выходами 28-35% (схема 22). Строение 89а-в было подтверждено методами масс-спектрометрии и *Н ЯМР- спектроскопии при сравнении спектров углеводных фрагментов этих соединений и а-Ь-сорбопиранозы. Строение промежуточных соединений и других конечных продуктов реакции щелочного распада аскорбигенов не изучали.

Мы исследовали реакцию щелочного распада 2-С-производных АК более детально. Аскорбигены 41а,б в 5% водном растворе бикарбоната натрия раскрывали лактошюе кольцо, образуя анионы 2-С-[(индол-3-ил)метил]-а-Ь-ксило-гекс-3-улофуранозоновой кислоты (90а,б) (схема 21). Попытки выделить из реакционной смеси индивидуальные 90а,б не удались, поскольку после осторожного подкисления (рН 4) солей и экстракции ЕЮАс 90а,б превращались в исходные аскорбигены 41а,б с примесями продуктов щелочной трансформации. Однако при немедленной обработке кислот 90а,б дифенилдиазометаном

3.1.1 Получение 1-дезокси-1-индолилкетоз и их производных

Схема 21

они превращались в дифенилметиловые эфиры а^-ксило-гекс-З-улофуранозоновых кислот 91а,б с выходами 36% и 50% соответственно. Метилгликозиды аскорбигенов 92а,б более устойчивы к действию оснований (схема 21). Так, при инкубации 92а,б в 0,05 М водном растворе №ОН и последующем подкислении происходило образование кислот 93а,б, которые не замыкались в лактон в течение ~ 1ч. и не трансформировались в вещества типа 89. Кислоты 93а,б были также превращены в соответствующие дифенилметиловые эфиры 94а,б. Структуры эфиров 91,94 подтвердили методами ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии.

Трансформация аскорбигена и его гомологов в водных растворах неорганических оснований (щелочей, поташа, соды) проходила неодназначно, и образование многокомпонентных смесей делало невозможным количественное получение продуктов щелочного распада аскорбигена и его аналогов, поэтому нами была предложена новая методика синтеза этих соединений.

Мы показали, что аскорбигены 41а-в в 80% водном метаноле в присутствии эквимольного количества триэтиламина при температуре 40° С трансформировались в смеси, состоящие из 1-дезокеи-1-(индол-3-ил)-а^-сорбопираноз (89а-в) и минорных компонентов 95а-в в соотношении 1,7:1; 4:1; 8:1 соответственно (данные ВЭЖХ). Смеси 89а-в и95 а-в выделили на колонке с суммарными выходами 90%, 83% и 58%, поскольку разделить их на индивидуальные соединения не удалось (схема 22).

89 а-г 95 а-г

К = Н (а); СНэ (б); н-бутил (в); ОСН3(г)

Схема 22

Идентификацию соединений 89 и 95 (на примере смеси 89а и 95а) проводили методами Н- и 13С ЯМР - спектроскопии, используя методы двухимпульсной последовательности, гетероядерной и гомоядерной корреляции. Спектральные характеристики индолилсорбопираяозы 89а (её массовая доля в смеси с 95а в нашем опыте составляла 63%) выделили, сравнивая их с параметрами 1Н-ЯМР- спектра 89а, описанного ранее, а оставшиеся сигналы приписали минорному компоненту 95а. В соединениях 89а и 95а константы спин-спинового взаимодействия (КССВ) ( ^бц, ^,бе)> соответствующие транс-диаксиальным взаимодействиям протонов практически совпадают, однако КССВ 13 4 (3,2 Гц) в соединения 95а, отличается от в индолилсорбопиранозе 89а (9,2 Гц), поэтому

можно сделать вывод, что в минорном компоненте 95 а произошло обращение конфигурации 3-С атома с сохранением конформации 2сб, то есть 95а является 1-дезокси-1-(индол-3-ил)-а-Ь-татопиранозой - эпимером индолилсорбопирапозы 89а. Аналогично интерпретировали спектры 89б,в и 95б,в.

Конфигурацию гликозидного центра кетоз определили, используя ядерный эффект Оверхаузера (ЯЭО) (рис. 1). При селективном насыщении сигналов протонов 1-СН2 группы сорбопиранозы 896 в разностном спектре импульсной последовательности наблюдались отклики протонов 3-Н, 2'-Н, 4'-Н, свидетельствующие об их пространственным сближении с 1-СН2 группой. С другой стороны насыщение 6-Н атома тагатопиранозы 95а не влияло на изменение интенсивности сигналов протонов мостиковой 1-СН2 группы, которое должно было бы наблюдаться при пространственной близости. 1-Н и 6а-Н протонов в В-аномере. Такое пространственное протонов соответствует а-конфигурации аномерного центра.

Рис.1

3 1

-1 V-, Л л_

> И и дат

Рис2 ВЭЖХ продуктов щелочной трансформации аскорбигена в сыворотке крови крупного рогатого скота при 37° С через 1 ч. после начала инкубации: (1) - тагатоза 95а, (2)-№ соль 2-С-производного 3-гексулофуранозоновой кислоты 90а, (З)-сорбоза 89а, (4) -аскорбиген (41а).

Более детально процесс щелочного распада аскорбигена (41а) был изучен методом ВЭЖХ в модельных системах - 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,4) и в сыворотке крови крупного рогатого скота при 37° С. На рис.2 представлена хроматограмма, демонстрирующая состав реакционной смеси через 1 ч. после начала инкубации аскорбигена при 37° С в сыворотке крови крупного рогатого скота. Аналогичные компоненты - 2-С-производное 3-гексулофуранозоновой кислоты 90а (аскорбиген с раскрытым лактонным кольцом), индолилсорбоза 89а и индолилтагатоза 95а, образуются в фосфатном буфере (рН 7,4). Кислота 90а и лактон 41а находятся в равновесии и их соотношение зависит от кислотности

стоп-буфера, который использовали для остановки реакции перед выделением продуктов деградации (мы использовали фосфатный буфер с рН 5,3).

Неоаскорбиген (50а) был устойчив в щелочных условиях, описанных для аскорбигена (Е1;^, МеОН, 40-50°С), однако в калий-фосфатном буфере при рН 7,4, он трансформировался (по данным ВЭЖХ) в смесь 1-дезокси-1-(1-метоксшгадол-3-ил)-а-Ь-сорбопиранозы (89г) и 1-дезокси-1-(1-метоксииндол-3-ил)-а-1,-тагатопиранозы (95г) с суммарным выходом 50% (схема 22). Основные спектральные характеристики 89г и 95г близки с параметрами ЯМР-спектров смеси 89а+95а. Масс-спектр высокого разрешения смеси 89г и 95г содержит пик молекулярного иона [М]+.

К = Н(а); ОН (б); ОСН3(в)

Схема 23

При инкубации 2-С-бензшшроизводных АК 84а-в в водно-спиртовом растворе с триэтиламином, по аналогии с аскорбигенами 41, образовались смеси производных 1-дезокси-1-фенил-а-1-сорбопиранозы 9ба-в и 1-дезокси-1-фенил-а-1-тагатопиранозы 97а-в (схема 23). Отнесение сигналов в спектрах соединений 96, 97 проводили, как в случае индолсодержащих кетоз 89 и 95.

3.1.2 Изучение свойств 1-дезокси-1-индолилкетоз и их производных

Синтезированные нами индолилкетозы 89 и 95 представляют собой новый, ранее неизвестный тип производных мопосахаридов, которые, однако, до настоящего времени не были получены в индивидуальном виде.

Для этой цели мы исследовали ацетилирование смеси кетоз 89б и 95б (схемы 24,25). Взаимодействие смеси 896 и 956 с избытком Ас2О в течение 12 ч при комнатной температуре привело к пер-0-ацетилированию, открытию гшранозных циклов и образованию смеси (Е)-1-дезокси-1-(1-метялиндол-3-ил)-2,3,4,5,6-пента-О-ацетил-Ь-ксило

25

гекс-1-енитола (986) и (Е)-1-дезокси-1-(1-метилиндол-3-ил)-2,3,4,5,6-пента-О-ацетил-1-ликсо-гекс-1-еттопа (996) с общим выходом 58 % (схема 24). При разделении этой смеси колоночной хроматографией были получены индивидуальные 98б (40%) и 99б (18%). Аналогично из 89г и 95г были получены индивидуальные 98г (30%) и 99г (20%). Ацетилирование ^незамещенных индолилкетоз 89а+ 95а привело к более сложной смеси N незамещенных пента-О-ацетильных и гекса-N,О-ацетильных производных. Колоночной

Схема;

хроматографией и кристаллизацией были выделены: (Е)- 1-дезокси-1 -(индол-3-ил)-2,3,4,5,6-пента-О-ацетил-L-ксило-гекс-1-енитол (98а) (10%), (Е)-1-дезокси-1-(индол-3-ил)-2,3,4,5,6-пента-О-ацетил-L-ликсо-гекс-1-енитол (99а) (13%), и (Е)-1-дезокси-1-(1-ацетилиндол-3-ил)-2,3,4,5,6-пента-О-ацетил-L-ксило-гекс-1-енитол (98д) (4%). Е-Геометрия двойной связи была подтверждена методом ЯЭО: у 98а,б,г,д и 99а,б,г насыщение 3-Н протона приводило к увеличению интенсивности сигнала 1-Н протона на 12-14%, что свидетельствует о трансориентации индольного цикла и ацетилированого полиольного остатка. Структуры веществ 98а,б,г,д и 99а,б,г были также подтверждены масс-спектрами высокого разрешения.

Ацетилирование смеси 89б+95б избытком Ас2О в течение 1 ч. привело к другой смеси веществ (схема 25), при разделении которой колоночной хроматографией были

выделены частично 0-ацилированные кетопиранозы: 1-дезокси-1-(1-метилиндол-3-ил)-3,4,5-три-0-ацетил-а^-сорбопираноза (100б) (14%), 1-дезокси-1-(1-метилиндол-3-ил)-3,4,5-три-0-ацетил-а-1.-тагатопираноза (101б) (12%), а также открытая форма кетозы - 1-дезокси-1-(1-метилиндол-3-ил)-3,4,5,6-тетра-О-ацетил-1-сорбоза (1026) (21%). Индивидуальную открытую форму производного тагатозы выделить не удалось. Интересно отметить, что образование тетра-0-ацетильных производных кетопиранозных форм не было обнаружено.

Структуры веществ 100б, 1016, и 102б были подтверждены ЯМР спектрами. В *Н ЯМР спектрах соединения 100б, значение констант и ,Т4 5 соответствует транс-диаксиальному положению 3-Н и 4-Н атомов, что доказывает конфигурацию Ь-сорбопиранозы и 2С5 конформацию. Величина константы J34=3,4 Гц в спектре 101б соответствует аксиально-экваториальному взаимодействию этих атомов и L-тагатопираноз-ной конфигурации. Ациклическая структура 102б была установлена на основании 13С ЯМР спектров, в которых присутствует сигнал 2-СО группы при 200,96 м.д. Дезацетилирование 1026 привело к 896, что подтвердило то, что это соединение является производным Ь-сорбозы (схема 25).

При исследовании условия дезацетилирования индивидуальных пер-0-ацетилированных кетоз 98 и 99 было показано (методами ВЭЖХ и ЯМР-спектроскопии), что использование в реакции МеО№ или К2СО3 в метаноле вызывает эпимеризацию при 3-Сатоме, приводящую к образованию смеси 89 и 95. В смеси, полученной из 986,

преобладала индолилсорбоза 89б, а в смеси, полученной из 996, преобладала индолилтагатоза 95б. Только при использовании мягких оснований, таких как Ма2С03 или Е^ в метаноле, удалось получить из 986 индивидуальную 1-дезокси-1-(1-метилиндол-3-ил)-а-Ь-сорбопиранозу (896) (схема 26). Параметры Н ЯМР-спектра индивидуальной индолилсорбозы 896 совпадали с характеристиками компонента из смеси 896 и 956. При дезацетилировании в этих условиях 996, получали смесь таутомерных форм индолилмоносахарида 956. Н ЯМР спектр показал наличие а-Ь-пиранозной формы (~70 %), и ~30 % другой таутомерной формы, которая не была идентифицирована. Соотношение между а.-Ь- пиранозной и другой формой сильно зависело от растворителя и температуры. Смесь дезацетилированных продуктов 956 давала один пик при анализе методом ВЭЖХ, и после ацетилирования количественно приводила снова к индивидуальному 996. Дезацетилирование 98а или 99а также приводило к индивидуальным 89а и 95а. Аналогично 95а находился в равновесии со своим таутомером (схема 26). Эти результаты показывают, что 1-дезокси-(1-индол-3-ил)-а-1-тагатопиранозы (95а,б) конформационно нестабильны благодаря наличию двух соседних аксиальных гидроксильных групп, что приводит к равновесию в растворах между а-Ь-пиранозной и другими изомерными формами (открытыми или циклическими). Дезацетилирование соединений 98 и 99 сопровождалось также образованием 3-формилиндолов 1а,б (схема 26), которые становились преобладающими продуктами реакции при температуре выше 40°С. Образование 1а,б можно объяснить радикальным окислительным разрушением двойной связи.

БСА

89а,б ---Ьр^

МезБЮ 103аб К II

95а, б — • Н^¥0$1Мсз ЬЮвйЛез МезБЮ" "Н 104а,б СН2081Ме3 И= 8|Ме3(а); СН3(б) Схема 27

Персилилирование 896 при помощи бис-триметилсилилацетамида (БСА) в пиридине приводило к образованию тетратриметилсилильного производного 1036. В то же время, 956 образовывал в тех же условиях пентатриметилсилильное производное 1046 (схема 27). Аналогично, 89а давал пента- (103а), а 95а гекса- (104а) триметилсилильные производные,

28

что позволило приписать строение пиранозных производных 103а,б для персилилированных производных сорбозы и нециклических 104а,б для персилилированных производных тагатозы соответственно (строение соединений подтверждено данными масс-спектрометрии). Это свидетельствует о легком открытии тагатопиранозного цикла или присутствие открытой формы в соединениях 95а,б в отличие от производных сорбопираноз 89а,б.

3.2 Химическая трансформация 2-С-производных Ь-аскорбиновой кислоты в кислых условиях

3.2.1 Трансформация М-алкоксиаскорбигенов в кислой среде с выделением Ь-аскорбиновой кислоты.

Нами показано, что М-алкоксиаскорбигены 50а,б в кислой среде значительно стабильнее аскорбигена (41а). В отличие от 41а, который начинает распадаться уже при 37° С (10% через 3 ч.), М-метоксиаскорбиген (50а) исчезал в растворе только после нагревания до 60 °С в течение 4-5 часов. В этих условиях М-алкоксиаскорбигены 50а,б, подобно 41а, трансформировались по межмолекулярному механизму, включающему элиминирование АК и взаимодействие освободившихся скатильных катионов между собой с образованием бис(1-алкоксииндол-3-ил)метанов 59а,б (~30%) и других производных, из смеси которых был выделен 1-метокси-2,3-ди[(1-метоксииндол-3-ил)метил]индол (105а) (~1-2%), идентифицированный по масс-спектру, при этом соответствующий 5,11-диметоксииндоло[3,2-Ь]карбазол (106а) не образовывался (схема 28).

105а, б N

ОМе

а. И — ОМе, б. Н-СШ

Схема 28

3.2.2. Трансформация 2-С-производных АК в кислой среде без выделепием Ь-аскорбиновой кислоты.

При подавлении отщепления АК реализуется другой путь трансформации аскорбигенов 41 и 50 (схема 29). Мы показали, что при нагревании 41а до 60° С в водно-этанольном растворе АК (10-20 эквивалентов) образуется рацемический 2-гидрокси-4-гидроксиметил-3-(индол-3-ил)циклопент-2-енон (107а) с 10-15% выходом, а его гомологи-М-Ме-107б, М-гексил-107г, М-бензил-107д, были получены при этих условиях с более высокими выходами (таблица 2, метод А). Присутствие АК в этой реакции является необходимым условием, так как нагревание аскорбигенов 41а и 41д в смеси метанол — 1 М НС1 1: 1 (рН < 1) приводит к низким выходам соответствующих циклопептенонов 107а,д (таблица 2, метод Б). Вторыми основными компонентами, образующимися из аскорбигенов 41а,б, являются дииндолилметаны 5а,б (по данным ВЭЖХ).

М-Алкоксиаскорбигены 50а,б трансформировались аналогично (схема 29). В кипящей смеси ЕЮН-1М НС1 50а,б были превращены в соответствующие циклопентеноны 107ж,з (таблица 2, метод Б). В этих условиях выход циклопентенонов 107ж,з составлял 10-15%,

416. Я=СН3; 107а. И = Н; 1076,К=СН3;

41г И = С6Н,3; 107г К = С6Н,3; 107д. И = СН2С6Н5; 59а К = ОСН3;

41д И = СН2С6Н5; Ю7ж И = ОСН3; 107з. Л = ОС2Н5. 596. Я = ОС2Н5. 50а. И = ОСН3; 506 Л = ОС2Н5.

Схема 29

в то время как в горячем растворе АК их выход повышался до 27-30% (таблица 2, метод А).

Хроматографический и масс-спектрометрический анализ веществ, образующихся при

кислотном распаде М-алкоксиаскорбигенов 50, показал, что вторыми продуктами

трансформации являются ди(1-алкоксииндол-3-ил)метаны 59а,б.

Другим методом получения индолилциклопентенонов 107 является взаимодействие

индолилгликолевых кислот 108 с АК (схема 30). Индолилгликолевую кислоту (108а) и её N

метил-108б, М-гексил-108г, М-бензил- 108д и М-аллил-108е гомологи синтезировали,

восстановив МаВН4 соответствующие (индол-З-ил)глиоксалевые кислоты 109а,б,г,д,е.,

полученные после гидролиза их хлорангцдрцдов 110а,б,г,д,е. Последние синтезировали из

индолов 10а,б,г,д,е и оксалилхлорида. При нагревании 108б,г,д,е в 30% водно-этанольном

30

растворе АК (10-20 эквивалентов), подкисленном конц. НС1 до рН ~ 1,0, мы получили соответствующие 2-гидрокси-4-гидроксиметил-3-(индол-3-ил)циклопент-2-еноны 107б,г,д,е с 30-40% выходами (таблица 2, метод В). Циклопентенон 107а из индолилгликолевой кислоты 108а в тех же условиях получить не удалось. Во всех реакциях гипотети-

Од ^о-^о/0^ о/кн

Я К Я я

10а,б,г,д.е 110а,б,г,д,е 109а,б,г,д,е 108а,б,гд,е

-I 107б,г,д,е

1116,гд,е

б. К=СН3; г. К=СбН,3; д. К=СН2С6Н5; е. К=СН2СН=СН2

Схема 30

Таблица 2 Выходы циклопентенонов 107 полученных методами А, Б и В

Соеди нения Выход (%)

Метод А Метод Б Метод В

107а 12,5 2

1076 25 30

107г 40 30

107д 41 5 39

107е 32

107ж 27 10

1071 30 15

ческие промежуточные аскорбигены 111б,г,д,е не наблюдались. Однако при взаимодействии АК с метиловым эфиром индолилгликолевой кислоты 112 был получен один из изомеров нестабильного 2-С-[(индол-3-ил)(метоксикарбонил)метил]-а-1-ксило-гекс-3-улофуранозоно-1,4-лактона (113) (схема 31). Этот результат подтверждает предположение, что производные АК 111 (схема 30) являются промежуточными веществами, которые далее

трансформируются в циклопентеноны 107. Сложный эфир 113 при стоянии в течение 1 ч. распался с образованием неидентифицированных продуктов.

Схема;

Ваниломиндальная кислота - 2-(4-гидрокси-3-метоксифенил)-2-гидроксиуксусная кислота (114), является одним из важнейших метаболитов адреналина, образующимся при трансформации последнего под действием ферментов мопоаминооксидазы и мегилтрансферазы.

Схема 32

При нагревании смеси 114 и АК в течение 5 дней в 0,1 М НС1 при 50-60°С образовалась смесь соединений, из которой выделили 2-гидрокси-3-(4-гидрокси-3-меток-сифенил)-4-гидроксиметилциклопент-2-енон (115) (10%) и ванилин 83в (~20%) (схема 32). Структура 115 была подтверждена методами Н и 13С ЯМР спектроскопии и масс-спектрометрии. Полное установление структуры углеродного скелета молекулы 115 было проведено с помощью эксперимента по селективному переносу поляризации, позволяющему получить отклик атома углерода при насыщении протона, находящегося от него на расстоянии трех связей (рис. 3). Так, наблюдали отклик 3-С при насыщении 5-Н, 6-Н или 6'-Н протонов и отклик 2-С при насыщении 4-Н. В масс-спектре пер-силилированного циклопентенона 116 (схема 32) наблюдался молекулярный ион, свидетельствующий о наличии в его молекуле четырех силилированных гидроксильных групп.

н н

но

115

PИС.3

Спектральные характеристики фрагмента циклопентенона в соединениях 107a,б,г,д,e,ж,з, содержащих индольные радикалы, сходны с параметрами спектров 115.

Следует отметить, что циклопентеноны 107 и 115 обладали интенсивной флуоресценцией в ультрафиолетовом свете, что облегчало их выделение и очистку.

Механизм реакции образования циклопентенонов 107и 115 из 2-С-производных АК (на примере аскорбигена 41а) предполагает, что кислой среде у 41а частично расщепляется циклический гемикеталь и возникает равновесие между бициклической (41) и моноциклической (117а) структурами молекулы (схема 33). При проведении реакции в избытке АК лактон 117а, по-видимому, образуется как промежуточное соединение, поскольку элиминирование скатильных катионов в значительной степени подавляется и снижается вероятность их межмолекулярных взаимодействий. В реакционной среде накапливается достаточная концентрация лактонов с раскрытым фурановым кольцом 117а, которые являются исходными в синтезе циклопентенонов 107а. Следующим этапом реакции (путь 1) может быть образование линейной Р-кетокислоты 118а, хотя в слабокислой среде циклический сложный эфир устойчив и его гидролиз происходит в незначительной степени. В то же время в аскорбигенах лактонный цикл легко раскрывается в присутствии оснований и сохраняется при подкислении (раздел 3.1) в незамкнутом состоянии некоторое время, образуя 90а. В таком случае одновременное раскрытие гемикетального фуранозного цикла также приводит к 118а (путь 2).

Мы показали, что индолилциклопентенон 107а может быть получен с высоким выходом из раскрытой формы аскорбигена - 2-С-[(индол-3-ил)метил]-а^ -ксило-гекс-3-

3.2.3 Возможные механизмы образования производных циклопентенопа

и типы промежуточных соединений

улофуранозоновой кислоты (9 ц е н и я (схема 33).

Аскорбиген 41а подщелачивали триэтиламином в водном метаноле до полного раскрытия лактонного кольца, контролируя процесс методами ТСХ или ВЭЖХ, затем реакционную

смесь подкисляли до рН 2 - 2.5 и нагревали при 50-65° С некоторое время (45 мин, 2 ч. и 12 ч), контролируя ход реакции методом ВЭЖХ каждые 30 мин. Это позволило выявить динамику образования промежуточных и конечных продуктов этой реакции и, после их выделения и идентификации, предложить схему превращений, происходящих в слабокислой среде. После нагревания реакционной смеси в течение 45 мин. методом гель-хроматографии были выделены следующие соединения: 1-(индол-3-ил)-2,6-дигидроксигекса-1,4-диен-3-он (119а) - 20%, 2,5,6-тригидрокси-1-(индол-3-ил)гекс-1-ен-3-он (120а) - 16%, 2-гидрокси-4-гидроксиметил-5-(индол-3-ил)циклопент-2-енон (121а) - 8% и 2-гидрокси-4-гидроксиметил-3-(индол-3-ил)циклопент-2-енон (107а) - 15%. После нагревания реакционной смеси в течение 2 ч. выход циклопентенона (121а) составил 16%, циклопентенона (107а) - 20%; кроме того был выделен 5-гидроксиметил-2-[(индол-3-ил)метилен]тетрагидрофуран-3-он (122а) с выходом 7% и 2-[(индол-3-ил)ацетил]фуран (123а) с выходом 15%. После нагревания реакционной смеси в течение 12 ч исчезала исходная кислота и все промежуточные соединения и образовывался циклопентенон (107а) с выходом 45%, а также производные фурана 122а (15%) и 123а (15%), являющиеся конечными устойчивыми продуктами трансформации кислоты 90а. Аналогично при нагревании кислоты 90б, полученной из ^метиласкорбигена (41б) в течение 12 часов, был выделен 2-гидрокси-4-гидроксиметил-3-(1-метилиндол-3-ил)циклопент-2-енон (1076) с выходом 41%. Строение полученных соединений 119а-123а было подтверждено данными 1Н и 13С ЯМР -спектроскопии и масс-спектрометрии. Циклопентеноны 107а,б идентичны ранее полученным соединениям.

Можно представить себе следующий механизм превращений 2-С-[(индол-3-ил)метил]-а^-ксило-гекс-3-улофуранозоновой кислоты 90а, полученной из аскорбигена 41а под действием триэтиламина (схема 33). По-видимому, при достаточно быстром воздействии триэтиламина гемикетальное кольцо кетокислоты сохраняется. При подкислении кислоты 90а происходит раскрытие гемикетального фуранозного цикла и образующаяся ациклическая кислота 118а после декарбоксилирования и дегидратации дает таутомерные 1-дезокси-1-(индолил-3-)-2-кетогексозы 124 и 125. В кислой среде 125 не образует пиранозидов, как это происходит при рН>7 (это подтверждено ВЭЖХ). При таутомерном превращении 125 образуются два енона (120а и 126) с цис- и трансориентацией индольного кольца относительно 3-СО группы соответственно. Енон 120а был выделен и охарактеризован. Енон 126 (его выделить не удалось) дегидратируется с образованием диенона 119а, в котором индольное кольцо и карбонильная группа при 3-С остаются в транс-положении. Этот нестабильный енон 119а удалось выделить и охарактеризовать; при хранении в течение нескольких часов или при нагревании он

образовывал циклопентенон 121а, который в свою очередь быстро превращался в устойчивый циклопентенон 107а. Енон 120а при хранении или нагревании дегидратировался с образованием фуранона 122а и фурана 123а.

Исследовалось также, происходит ли образование 107а, 122а и 123а из кетоз 89а и 95а. При нагревании смеси 1-дезокси-1-(индол-3-ил)-а-Ь-сорбопиранозы (89а) и 1-дезокси-1-(индол-3-ил)-а-Ь-тагатопиранозы (95а) с п-толуолсульфокислотой было отмечено образование фуранона 122а в смеси с другими неидентифицированными продуктами, однако циклопентенон 107а среди этих соединений не был обнаружен.

3.2.4 Образование циклопентенонов из тозилированных тагатоз.

Индолилкетозы 89 и 95 - соединения устойчивые в кислой и щелочной среде, однако, как показано выше, при ацетилировании и силилировании они образуют ациклические производные моносахаридов (раздел 3.1.2). С другой стороны элиминирование гидроксильных групп моносахаридов можно инициировать, если превратить кетозы 89 и 95 в производные п-толуолсульфокислоты, из которых в щелочной среде могут отщепляться толуолсульфо-группы и образовываться ациклические еноны типа 119а. Мы использовали этот подход для синтеза индолилциклопентенонов 107 из кетоз 89 и 95.

При взаимодействии кетоз 89б+95б с тозилхлоридом в пиридине в атмосфере аргона образовалась смесь 1 -дезокси-1 -(1-метилиндол-3-ил)-(3,5-ди-О-тозил)-а-Ь-сорбопиранозы (127б) и 1-дезокси-1-(1-метилиндол-3-ил)-4,5-ди-О-тозил-а-1,-тагатопиранозы (128б), которая была выделена с 40 % суммарным выходом при помощи колоночной хроматографии (схема 34). Эту смесь разделили при помощи препаративной ВЭЖХ на индивидуальные компоненты 1276 и 1286. Аналогично после тозилирования смеси 89а+95а получили индивидуальные 127а и 128а.

Структуры полученных соединений были подтверждены масс-спектрометрией и ЯМР

- спектроскопией. Сравнение химических сдвигов сигналов углеводной части в 'Н ЯМР спектрах соединений 1276 и 1286 с химическими сдвигами соответствующих исходных кетоз 89б и 95б позволило заключить, что в производном сорбопиранозы 1276 тозилированые гидроксильные группы находятся в положениях 3 и 5, а в производном тагатопиранозы 1286

- в положениях 4 и 5. Структуры 127а и 128а были установлены по аналогии. В метанольном растворе №ОН соединение 128а распадался с образованием 2-гидрокси-4-гидроксиметил-3-(индол-3-ил)циклопентен-2-енона (107а), идентичного соединению, ранее полученному при кислотном распаде аскорбигена (схема 34). Аналогично, из 128б количественно образовывался индолилциклопентенон 107б. По-видимому, трансформация 128а,б в 107а,б происходит через промежуточное образование диенонов 119а,б с транс-ориентацией

89а,б+95а,б

R

Схема 34

индольного цикла и кето-группы. Образование промежуточного диенона 119 из 3,5-дитозилатов 127а,б невозможно и из них под действием щелочи щелочи образовывалась смесь соединений, среди которых отсутствовали циклопентеноны 107, что подтверждает предполагаемый механизм реакции.

4. Изучение биологической активности аскорбигена Многочисленные эпидемологические исследования показали, что употребление в пищу овощей семейства крестоцветных и особенно рода Brassica уменьшает риск развития злокачественных образований. Было установлено, что в этих овощах содержатся вещества, которые могут индуцировать ферменты, дезактивирующие канцерогены в организме животных или изменять метаболизм некоторых эндогенных веществ, например эстрогенов. Основной интерес исследователей к индол-содержащим веществам, определяющим их биологическую активность, был сосредоточен главным образом на 3-гидроксиметилиндоле и 5Н,11Н-индоло[3,2-Ь]карбазоле (8а), тогда как аскорбиген (41а) практически не исследовался. Аскорбиген не проявлял мутагенность в тестах со штаммами Salmonella typhimunum и не вызывал хромосомные аберрации и сестринский обмен хроматид. Отсутствие генотоксичности у аскорбигена (41а), а также понимание того, что он -основное индолсодержащее соединение, образующееся в растительных тканях овощей семейства крестоцветных, и главный источник 3-гидроксиметилиндола, 5Н,11Н-индоло[3,2-Ь]карбазола и других его метаболитов, стимулировало наш интерес к его химическим и биологическим свойствам.

Аскобиген (41а) был наработан и передан в Лабораторию фармакологии и химиотерапиии НИИ по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф.Гаузе РАМН (д.б.н., проф. Бухман В.М., с.н.с. к.б.н. Переверзева Э.Р., д.б.н. Мирчинк Е.П. и сотр.). Изучение биологической активности 41а выявило ранее неизвестную способность этого соединения повышать неспецифическую резистентность организма Опыты проводили на мышах, которым препарат вводили перорально.

Аскорбиген (41а) стимулировал кишечный иммунитет, проявляющийся в увеличении количества и активности клеток Панета и изменении характеристик клеточной морфологии кишечника, повреждённого после однократного внутрибрюшинного введения противоопухолевого препарата циклофосфана (циклофосфамида), в результате чего ускорялись процессы репарации повреждений слизистой оболочки тонкой кишки. Восстанавливался также уровень нейтрофилов циркулирующих в крови.

Внутрибрюшинное введение циклофосфамида также приводит к снижению общего количества лейкоцитов и стимулирует развитие глубокой цитопении. Пероральное введение 41а животным ускоряло восстановление показателей периферической крови до нормы и способствовало снижению кишечной токсичности последнего.

Была выявлена также антибактериальная активность аскорбигена (41а). В результате орального заражения 3-4 дневных мышей бактериальными культурами К Coli и Staphylococcus aureus отмечалась гибель животных в 15-20% случаев. Профилактическое пероральное введение 41а при бактериальном сепсисе у новорождённых мышат снижало проникновение патогенных микроорганизмов из кишечника в органы (печень, почки, селезёнку) и кровь. На мышах было также показано положительное влияние 41а на восстановление микрофлоры кишечника при дисбактериозе. Оральное введение 41а полностью прекращало диарею и восстанавливало количественные показатели анаэробной флоры к норме. Следует отметить, что грызуны, не получавшие аскорбиген, погибали в 80% случаев.

Проведённые исследования не дали точного ответа на вопрос, что определяет биологические свойства аскорбигена. Нами было проведено хроматографическое изучение экстрактов из сыворотки крови и внутренних органов • (печени, желудка и кишечника), выделенных из мышей, которые получали аскорбиген перорально. Сыворотка крови и экстракт из печени содержали аскорбиген и продукты его щелочной трансформации: аскорбиген с раскрытым лактонным циклом (90а), а также индолилсорбозу (89а), индолилтагатозу (95а) и неидентифицированные соединения (см 3.1). Одновременно было показано, что аскорбиген (41а) достаточно быстро (в течение 1 ч.) исчезает из желудка и кишечника мышей, причём в кишечнике продукты щелочной трансформации обнаружили в следовых количествах. Также в желудке не были обнаружены продукты кислотного распада аскорбигена, в том числе, 5Н,1Ш-индоло[3,2-Ъ]карбазол (8а). Пероральное введение

38

продуктов щелочной деградации аскорбигена в крови - смеси кетоз 89а и 95а, не вызывало повышение неспецифического иммунитета у мышей, однако нельзя исключить, что фармакологическая активность аскорбигена может быть связана как с самим аскорбигеном (41а), открытой формой аскорбигена 90а, продуктами его кислотной деградации в желудке или с неизвестным метаболитом, так и с совокупным влиянием нескольких соединений. В настоящее время аскорбиген подготовлен к использованию в медицинской практике как препарат для ускорения восстановления нормального функционирования органов и тканей (кроветворение, иммунореактивность, желудочно-кишечный тракт, волосяной покров), поражённых в результате побочного действия противоопухолевых лекарств и для повышения сопротивляемости к токсическим веществам.

ВЫВОДЫ

1. На основе 3-формилиндолов и солей дииндолилметилия (уророзеинов), вступающих в межмолекулярные электрофильные и окислительно - восстановительные реакции, получены производные индоло[3,2-Ь]карбазола и индоло[2,3-Ь]карбазола, соли трииндолилметилия, а также ди- и трииндолилметаны. Предложен механизм образования этих соединений.

2. При последовательном алкилировании 6-(индол-3-ил)-5Н,7Н-индоло[2,3-Ь]карбазола под действием аллилбромида и йодистого метила в присутствии МаН получены его моно-, ди- и триалкильные производные.

3. На основе 3-формилиндола и кислоты Мельдрума впервые синтезирована рацемическая 2-азидо-2-аллил-3-(1-Вос-индол-3-ил)пропионовая кислота - предшественник аналога триптофана.

4. При использовании «индолин-индольного» метода впервые синтезирован (индол-3-ил)метилсульфонамид и его 5-метоксипроизводное - сульфоаналоги амида гетероауксина.

5. Разработан метод синтеза 1-алкоксииндолов в условиях межфазного катализа, который позволил упростить существовавший способ получения этих труднодоступных соединений и значительно повысить их выход.

6. На основе индолилкарбинолов, 4-гидроксибензиловых спиртов и Ь-аскорбиновой кислоты синтезированы различные 2-С-производные аскорбиновой кислоты и исследовано влияние структурных факторов на ход реакции 2-С-алкилирования:

а) Разработаны методы получения аскорбигенов нового типа, содержащих одновременно фрагмент М-гликозил- или М-полигидроксиалкилиндола (индольных аналогов нуклеозидов) и Ь-аскорбиновой кислоты.

б) На основе 1-алкоксииндолов получена серия ^алкоксиаскорбигенов и изучены их химические свойства.

в) На основе (индол-З-ил)этандиола и L-аскорбиновой кислоты синтезированы структурные изомеры аскорбигена диастереомерные За,6а-дигидрокси-6-(1,2-дигидроксиэтил)-3-(Ш-индол-3-ил)тетрагидрофуро[3,4-b]фуран-4-оны и 4,8,9-тригидрокси-3-(Ш-индол-3-ил)-1,6-диоксаспиро[4.4]нонан-4-карбоновая кислота.

г) Показано, что при конденсации с L-дегидроаскорбиновой кислотой 2-гидроксиметил-индол образует 3-(1,2-дигадроксиэтил)-За, 10с-дигидрокси-За,5,6,10с-тетрагидро-ЗН-2,4-диокса-6-азациклопента-[с]флуорен-1-он.

д) Показано, что при взаимодействии L-аскорбиновой кислоты с B-гидрокситриптаминами -индольными аналогами адреналина, образуются её 2-С-производные или продукты их превращений — производные пятичленных индолиллактамов.

7. Показано, что при щелочном распаде 2-С-производные АК образуются соответствующие диастереомерные кетозы - Ьдезокси-^арил^^-сорбопиранозы и 1-дезокси-1-(арил)-а^-тагатопиранозы. Исследовано ацилирование кетоз уксусным ангидридом и тозилхлоридом. Из ациклических ацетилированных кетоз получены индивидуальные 1-дезокси-1-(индол-3-ил)кетопиранозы.

8. Открыта новая реакция трансформации аскорбигена, его ^гомологов и ^алкокси-аскорбигенов в 2-гидрокси-4-гидроксиметил-3-(индол-3-ил)циклопент-2-енон и его производные. Исследовано влияние различных факторов на скорость реакции и выходы циклопентенонов.

8. Показано, что 2-гидрокси-4-гидроксиметил-3-(индол-3-ил)циклопент-2-енон образуется в слабокислой среде с высоким выходом из раскрытой формы аскорбигена - 2-С-[(индол-3-ил)метил]-а^-ксило-гекс-3-улофуранозоновой кислоты. Изучена динамика образования промежуточных и конечных продуктов этой реакции и, после их выделения и идентификации, предложен механизм реакции.

10. Показано, что при взаимодействии ^алкильных гомологов индолилгликолевой кислоты с L-аскорбиновой кислотой образуются соответствующие 2-гидрокси-4-гидроксиметил-3-(индол-3-ил)циклопентен-2-еноны, идентичные соединениям, полученным при кислотном распаде аскорбигенов. При взаимодействии ваниломиндальной кислоты с L-аскорбиновой кислотой образуется 2-гидрокси-3-(4-гадрокси-3-метоксифенил)-4-гидроксиметил-циклопент-2-енон.

11. Установлено, что 1-дезокси-4,5-дитозил-1-(индол-3-ил)-а^-тагатопираноза и её N метильное производное в щелочных условиях трансформируются в 2-гидрокси-4-

гидроксиметил-3-(индол-3-ил)циклопентен-2-еноны, идентичные соединениям, полученным при распаде аскорбягенов в кислой среде.

12. В совместной с биологами работе впервые показано, что аскорбиген, введённый перорально мышам, повышает неспецифическую резистентность организма к бактериальным инфекциям и токсическим эффектам циклофосфана.

Основное содержание диссертации изложено в следующих публикациях:

1. Королев A.M., Лажко Э.И., Ярцева КВ., Плихтяк И.Л., Александрова Л.Г., Розынов Б.В., Преображенская МН. Превращения аскорбигена в кислой среде. // Биоорг. Химия. - 1991 -Т.17-С. 981-987.

2. Лажко Э.И., Королев A.M., Преображенская М.Н. Изучение продуктов превращения аскорбигена в кислой среде методами спектроскопии ЯМР. // ХГС. - 1993. - Т.З. - С. 353-359.

3. Королев A.M., Юдина Л.Н., Преображенская M.II. Превращения 3-формилиндрла под действием сильных кислот. // ХГС. - 1999. - № 5. (383). - С. 631-639.

4. Преображенская М.И., Королёв A.M. Индольные соединения в овощах семейства крестоцветных (Craciferae) (обзор). // Биоорг. Химия. - 2000. - Т.26. - № 2. - С. 97-111.

5. Юдина Л.Н., Королев A.M., Резникова М.И., Преображенская МН. Изучение неоаскорбигена. IIХГС. - 2000. - № 2 (392). - С. 178-186.

6. Лысенкова Л.Н., Резникова М.И., Королев A.M., Преображенская М.И. Изучение превращений 2-С-(индол-3-ил)метил-а-Х-ксило-гекс-3-улофуранозоновой кислоты (открытой формы аскорбигена) в кислой среде. // Известия Академии наук. Серия химическая. - 2001. - №7.-С. 1248-1252.

7. Преображенская МЛ, Лавренов С.Н., Королев А.М. Синтез l-N-({J-D-nnoKOirapaH03Hfl)- и 1 -N-( 1 - дезокси-2,3,4,5,6-пента-О-ацетил-В-галактит-1-ил)аскорбигенов. // ХГС. - 2002. - № 8 (422).- С. 1038-1043.

8. Юдина Л.Н., Лажко Э.И., Королев A.M., Преображенская М.Н. Алкилирование 6-(индол-3-ил)индоло[2.3-Ь]карбазола.//ХГС.-2002.- № 10.- С. 1364-1368.

9. Лакатош СЛ., Лавренов С.Н., Королев А.М., Преображенская МН. Синтез 1-алкоксииндолов методом МФК и метиловых эфиров (1-алкоксииндол-3-ил)-глиоксалевых кислот. // Избранные методы синтеза и модификации гетероциклов под ред. Карцева В.Г., Москва. - IBS PRESS. - 2003. - T.I. - С. 554

10. Лавренов С.Н., Королев A.M. , Турчин КФ., Преображенская М.Н. Стерео- и региоселективные реакции присоединения 2- и 3-гидроксиметилиндолов к аскорбиновой и

41

дегидроаскорбиновой кислотам. // Химия и биологическая активность синтетических и природных соединений. Кислород- и серусодержащие гетероциклы под ред. Карцева В.Г.Москва. - IBS PRESS. - 2003. - T.I. - С. 324-327.

11. Преображенская М.Н., Бухман В. М., Переверзева Э.Р., Королёв A.M., Резникова М.И., Трещалин М.И., Мирчинк ЕЛ., Бодягин Д.А., Садовников СВ., Соснов А.В. Способ повышения неспецифической резистентности организма. // Положительное решение по заявке на патент № 2003102235/14(002449) от 28.01.2003.

12. Preobrazhenskaya M.N., Bukkman V.M., Korolev AM., Efimov S.A. Study on ascorbigen and other indole-derived compounds from Brassica vegetables and their analogs as anticarcinogenic and immunomodulating agents (review). // Pharmacol. & Ther. - 1994. - V. 60. - P. 301-313.

13. Preobrazhenskaya M., Korolev A., IsaevaN., Lazhko E., Lomidze L. Polyfunctional indole-3-carbinol derivatives: l-(indol-3-yl)glycerols and related componds, P-hydroxytryptamines and ascorbigens. Chemistry and biological properties. // II Farmaco - 1995. - V.50. - P. 369-377.

14. Preobrazhenskaya M., Lazhko E., Korolev A. Reaction of (indol-3-yl)ethandioI with L-ascorbic acid. //Tetrahedron Asym. - 1996. - V.7. - P. 641-644.

15. Preobrazhenskaya M., Lazhko E., Korolev A., Reznikova M., Rozhkov I. Transformation of ascorbigen into l-dcoxy-l-(indol-3-yl)-a-L-sorbopyranose and l-deoxy-l-(indol-3-yl)-a-L-tagatopyranose. // Tetrahedron Asym. - 1996. - V.7. - P. 461-467.

16. Preobrazhenskaya M. N., Rozhkov I. I, Lazhko E. I., Yudina L N., Korolev A. M. Reaction of the vanillomandelic acid and 4-hydroxybenzyl alcohol derivatives with L-Ascorbic acid. // Tetrahedron. - 1997. - V. 53. - P. 6971-6976. Corrigendum: Tetrahedron.- 1999. - V. 55. - P. 1517.

17. Preobrazhenskaya M., Rozhkov I., Lazhko E., Korolev A. Interaction of L-ascorbic acid with DL-N-methyl-P-hydroxytryptamine. // Tetrahedron Lett. - 1998. - V. 39. - P. 109-112.

18. Preobrazhenskaya M., Korolev A., Pozhkov I., Yudina L., Lazhko E, Aiello E., Almerico A.-M., Mingoia F. From ascorbigens to indolocarbazoles. // II Farmaco. - 1999. - V. 54. - P. 265-274.

19. Reznikova M.I., Korolev A.M., Bodyagin D.A., Preobrazhenskaya M.N. Transformations of ascorbigens in vivo into ascorbigen acid and l-deoxy-l-(indol-3-yl)ketoses. // Food Chem. - 2000. -V. 71.-P. 469-474.

20. Korolev A. M., Yudina L.N., Rozhkov 11, Lysenkova L.N., Lazhko E.I., Preobrazhenskaya M.N. The formation of 2-hydroxy-4-hydroxymethyl-3-(indol-3-yl)cyclopent-2-enone derivatives from ascorbigens. // Carbohydrate Res. - 2001. - V. 330. - P. 469-477.

21. Lavrenov S.N., Korolev A.M., Reznikova Ml, SosnovA. V., Preobrazhenskaya M.N. Study of 1-deoxy-l-(indol-l-yl)-L-sorbose, l-deoxy-l-(indol-l-yl)-L-tagatose, and their analogs. // Carbohydrate Res. -2003. - V. 338. - P. 143-152.

22. Korolev A.M., Shchekotikhin A. E., Lysenkova L. N.. Preobrazhenskqya M. N. Synthesis of (mdol-3-yl)methanesulfonamide and its 5-methoxy derivative. // Synthesis.- 2003.- V. 3. - P. 320322.

23. Юдина Л.Н., Королёв AM. Превращения 3-формилиндолов под действием сильных кислот. // Тезисы докладов. Международная научная конференция « Органический синтез и комбинаторная химия».- 1999. - Москва, Звенигород, 4-7 марта. - С. П-175.

24. Королев AM. Синтез новых гетероциклических соединений на основе индол-3-карбинолов и L-аскорбиновой кислоты. // Iм Всероссийская конференция по химии гетероциклов памяти А-Н.Коста. - 2000. - Суздаль. - 19-23 сентября.- С. 34.

25. Лавренов С.Н., Королев AM, Преображенская М.Н. Получение 1-алкокси- и 1-гликозилоксииндолов. // Тезисы докладов. Школа молодых ученых "Органическая химия в 20-м веке",- 2000. - Москва, - Звенигород, 26-29 апреля. - С. 65.

26. Королев A.M., Преображенская М.Н., Переверзева Э.Р. Аскорбигены и их метаболиты как потенциальные лекарства или пищевые добавки лекарственного происхождения // Материалы V Международного симпозиума « Биологически активные добавки к пище и проблемы здоровой семьи». - 2001. - Красноярск. - Россия. - 27-29 июня. - С. 128.

27. Королёв A.M., Лысенкова Л.Н., Преображенская М.И.. 2-Замещённые производные 3-(индол-З-ил)прошюновых кислот. // Тезисы докладов.Третий Всероссийский симпозиум по органической химии: Стратегия и тактика органического синтеза. - 2001. - Ярославль. -Россия.-3-6марта. -С.61

28. Korolev A.M., Preobrazhenskaya MM, Isaeva N.N. The transformation of ascorbigen in acidic and alkaline media. // Abs., VII* European Carbohydrate symposium. - 1993. - EUROCARB VII. - Cracow. - Poland. - August 22-27. - P. A 003.

29. Preobrazhenskaya M.N., Lazhko E.I., Korolev AM. Stereochemistry of products of ascorbigens transformations. // Abs., 15th International congress of Heterocyclic Chemistry. - 1995.- Taipei. -Taiwan, August 6-11. - P01-072.

30. Rozhkov LI., Judina L.N., Korolev AM. and Preobrazhenskaja M.N. Transformations of Ascorbigen and its Indole-type Analogues into corresponding 1-Deoxyketozes. // Abs., XVII European colloqium on heterocyclic compounds chemistry. - 1996. - Regensburg. - Germany.-SH72.

31. Preobrazhenskya M.N., Yudina L.N., Rozhkov I.I., Korolev AM. From ascorbigens to indolocarbazoles. // Abs., VIII International conference on heterocyclic structures in medicinal chemistry. - 1998. - Palermo. - Italy. - P. 28-36.

32. Korolev A.M., Yudina L.N. Di(indol-3-yl)methylium salt (urorosein) as a synthon for the preparation of new condensed indole heterocycles. // Abs., 17th International congress of Heterocyclic Chemistry. - 1999. - Vienna. - Austria, August 1-6. - PO-285.

33. Korolev AM., Lysenkova L.N., Preobrazhenskqya M.N. l-Acetyl-3-chloromethylindoline as a synton for the synthesis of various polyfimctional and polycondenced indole-derived compounds. // Abs., XXth European Colloquium on Heterocyclic Chemistry. - 2002. - Stockholm, Sweden, August 18-21.-P. 28.

34. Preobrazhenskaya M. N.., Lakatosh S.A., Shchekotikhin A. R, Korolev AM. Indoline and indolenine intermediates in the syntheses of complex indole derivatives. // Abs., International Symposium " Advances in Synthetic, Combinatorial and Medicinal Chemistry ". - 2004. -Moscow, Russia. May 5-8. - V. 1. - P. 13

Принято к исполнению 19/08/2004 Исполнено 20/08/2004

Заказ № 290 Тираж: 150 экз.

ООО «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 Москва, Балаклавский пр-т, 20-2-93 (095) 747-64-70 (095)318-40-68 www.autoreferat.ro

• Í54J9

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ИНДОЛЬНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ В ОВОЩАХ СЕМЕЙСТВА

КРЕСТОЦВЕТНЫХ (литературный обзор).

1.1 Введение.

1.2. Индолилглюкозинолатные алкалоиды (глюкобрассицины) и их превращения.

1.3. Превращения 3-гидроксиметилиндола - (индол-З-ил)карбинола (13 С), и аскорбигена (ASG) в кислой и щелочной среде.

1.4. Биологические свойства 3-гидроксиметилиндола (13С) и продуктов его кислотной трансформации.

1.4.1 Метаболизм 13 С in vivo.

1.4.2 Биологические свойства 5НД1 Н-индоло[3,2-Ь]карбазола (ICZ).

1.4.3. Влияние I3C на метаболизм эстрогенов.

1.4.4 Влияние I3C на канцерогенез.

1.4.5 Собственные биологические свойства 13 С.

1.5. Биологические свойства аскорбигенов.

Актуальность проблемы В настоящее время известно значительное количество биологически активных производных индола, среди которых следует упомянуть триптофан, гетероауксин, различные триптамины и их производные, многочисленные индольные алкалоиды и индолсодержащие антибиотики. Большинство этих веществ синтезируют на основе 3-формилиндола и грамина, реже 3-метокси- и 3-гидроксиметилиндолов -производных индола, вступающих в реакции нуклеофильного замещения с соединениями, образующими под действием оснований стабильные карбоанионы (производные малоновой кислоты, p-кетоэфиры, нитроалканы). З-Формил- и 3-гидроксиметилиндолы неустойчивы в кислой среде, и превращения, происходящие с ними в этих условиях, изучены недостаточно. З-Формилиндол легко образует соль дииндолилметилия, химические свойства которого не исследовались. З-Гидроксиметилиндол и его гомологи взаимодействуют между собой, образуя под действием кислот смеси веществ с поликонденсированными и олигомерными структурами, однако влияние структурных факторов на реакционную способность карбинолов и состав получаемых соединений исследованы мало. Изучение превращений 3-формил- и 3-гидроксиметилиндолов в кислой среде может открыть, путь к ранее труднодоступным производным индола с ценными биологическими свойствами. С другой стороны, 3-гидроксиметилиндолы селективно взаимодействуют с ^-аскорбиновой кислотой, образуя её 2-С-производные (аскорбигены), которые представляют особый интерес, поскольку они являются природными соединениями; биологическая роль которых в настоящее время изучается. Эти индольные производные могут в зависимости от условий отщеплять ^-аскорбиновую кислоту или подвергаться другим трансформациям. Изучение свойств аскорбигенов, их аналогов и продуктов их трансформации может позволить получить вещества нового типа и существенно расширить представления о природе химических превращений в этом классе гетероциклических соединений. Установление таких закономерностей представляется весьма актуальным для целенаправленного поиска новых веществ с антиканцерогенными, противоопухолевыми и иммуномодулирующими свойствами.

Целью работы было систематическое изучение условий взаимодействия биологически важных соединений - 3-формилиндолов, индолил-, а также арилкарбинолов, генерирующих электрофильные карбокатионы (индолилметилий катион, скатильный и бензильный катионы), между собой или с L-аскорбиновой кислотой, исследование свойств полученных соединений, а также разработка методов синтеза новых индолсодержащих аналогов природных соединений.

Научная новизна работы и практическая значимость. Исследованы условия трансформации < 3-формилиндолов в кислой среде и на их основе разработаны удобные методы получения ранее труднодоступных соединений - производных индоло[2,3-6]- и индоло[3,2-6] карбазолов, а также солей трииндолилметилий катионов, которые проявляют свойства- антибактериальных антибиотиков. Предложены методы синтеза ранее неизвестных (индол-З-ил)метан- и (5-метоксииндол-3-ил)метансульфонамидов - сульфоана-логов гетероауксина, основанные на «индолин-индольном» методе, а также 2-азидо-2-аллил-3-(1-Вос-индол-3-ил)пропионовой кислоты - предшественника аналога триптофана. На основе полифункциональных арил- и индолилкарбинолов и L-аскорбиновой кислоты синтезирован ряд 2-С-производных аскорбиновой кислоты и изучены их химические свойства. Разработан удобный метод синтеза • 1 -алкоксииндолов > в условиях межфазного катализа, позволяющий получать, N-метоксиаскорбиген (неоаскорбиген), идентичный природному, и его гомологи. Изучены превращения 2-С-производных аскорбиновой кислоты в слабощелочной среде. Впервые выделены и охарактеризованы индивидуальные продукты такой трансформации - производные 1-дезокси-1-арил-1-сорбозы и 1-дезокси-1-арил-1-тагатозы. Открыт ранее неизвестный путь трансформации аскорбигенов в кислой среде, в ходе которой образуются 2-гидрокси-4-гидроксиметил-3-(индол-3-ил)циклопент-2-енон и его производные. Исследовано влияние структурных факторов на ход этих превращений, выделены промежуточные соединения и на их основе предложены механизмы образования производных циклопентенонов и индолсодержащих кетоз как примеры «домино» реакций. Разработаны методы получения труднодоступных соединений - арилпроизводных кетоз (сорбоз и тагатоз), а также циклопентенонов, которые могут войти в арсенал современной органической химии. В опытах in vivo совместно с биологами показано, что аскорбиген, введенный перорально, превращается в крови в производные а-I-сорбозы и a-Z-тагатозы, идентичные полученным синтетически, а также проявляет ранее неизвестную биологическую активность, повышая неспецифическую резистентность организма к инфекционным и токсическим агентам. В настоящее время аскорбиген подготовлен к использованию в медицинской практике как лекарственное средство, снижающее токсические побочные эффекты противоопухолевых препаратов (подавление иммунитета, кроветворения и др.). Основные положения, выносимые на защиту:

1. Впервые детально исследованы условия превращений 3-формилиндола, уророзеина -соли ди(иидол-3-ил)метилия и их аналогов в кислой среде. Получены ранее неизвестные производные индоло[2,3-6]карбазола и индоло[3,2-6]карбазола, а также соли три(индол-3-ил)метилия и ряд других соединений.

2. Разработаны метод синтеза ранее недоступного (индол-З-ил)метансульфонамида и его 5-метоксипроизводнош - сульфоаналогов гетероауксина, а также 2-азидо-2-аллил(индол-3-ил)пропионовой кислоты - предшественника аналога триптофана.

3. Впервые получены новые 2-С-производные /.-аскорбиновой кислоты и различных полифункциональных арил- и гетероарилкарбинолов Изучены их химические свойства. Впервые получены новые 2-С-производные Z-дегидроаскорбиновой кислоты и 2-гидрокси-метилиндола и установлено их строение.

4. Детально изучены превращения 2-С-производных /.-аскорбиновой кислоты в слабощелочной среде. Впервые выделены продукты трансформации — индивидуальные

1 -дезокси-1 -индолил-а-1-сорбозы и 1-дезокси-1-индолил- a-Z-тагатозы. 5. Исследована трансформация 2-С-производных Z-аскорбиновой кислоты в кислой среде. Открыта новая реакция трансформации аскорбигенов в кислоте, ведущая к 2-гидрокси-4-гидроксиметил-3-(индол-3-ил)циклопент-2-енону и его производным. На примере аскорбигена установлена динамика образования промежуточных и конечных продуктов этой реакции, которые были выделены и идентифицированы. Предложена схема превращений аскорбигена.

Апробация работы. Результаты работы докладывались на 15-том Международном конгрессе по гетероциклической химии, Тайпей, 1995 г.; 17-том Международном Конгрессе по гетероциклической химии, Вена, 1999 г.; 1 -ой Всероссийской конференции по химии гетероциклов памяти А.Н.Коста, Суздаль, 2000 г.; 3-ем Всероссийском симпозиуме по органической химии "Стратегия и тактика органического синтеза", Ярославль, 2001 г.; 20-том Европейском коллоквиуме по Гетероциклической Химии, Стокгольм, 2002 г.; 2-ой Международной конференции "Химия и биологическая активность кислород- и серусодержащих гетероциклов", Москва, 2003 г.; Международном симпозиуме " Успехи в синтетической, комбинаторной и медицинской химии ", Москва, 2004 г. Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 231 странице машинописного текста, содержит 71 схему, 10 рисунков, 26 таблиц и состоит из введения, литературного обзора, изложения и обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка литературы (235 наименований).

ВЫВОДЫ

1. На основе 3-формилиндолов и солей дииндолилметилия (уророзеинов), вступающих в межмолекулярные электрофильные и окислительно — восстановительные реакции, получены индоло[3,2-6]карбазолы, индоло[2,3-6]карбазолы и их производные, соли трииндолилметилия, а также ди- и трииндолилметаны. Предложен механизм образования этих соединений.

2. При последовательном алкилировании 6-(индол-3-ил)-5Н,7Н-индоло[2,3-£]карбазола под действием аллилбромида и йодистого метила в присутствии NaH получены его моно-, ди- и триалкильные производные.

3. На основе 3-формилиндола и кислоты Мельдрума впервые синтезирована рацемическая 2-азидо-2-аллил-3-(1-Вос-индол-3-ил)пропионовая кислота — предшественник аналога триптофана.

4. При использовании «индолин-индольного» метода впервые синтезирован (индол-Зил )метансульфонамид и его 5-метоксипроизводное - сульфоаналоги амида гетероауксина.

5. Разработан метод синтеза 1-алкоксииндолов в условиях межфазного катализа, который позволил упростить существовавший способ получения этих труднодоступных соединений и значительно повысить их выход.

6. На основе индолилкарбинолов, 4-гидроксибензиловых спиртов и /--аскорбиновой кислоты синтезированы различные 2-С-производные аскорбиновой кислоты и исследовано влияние структурных факторов на ход реакции 2-С-алкилирования: а) Разработаны методы получения аскорбигенов нового типа, содержащих одновременно фрагмент N-гликозил- или N-полигидроксиалкилиндола (индольных аналогов нуклеозидов) и /,-аскорбиновой кислоты. б) На основе 1-алкоксииндолов получена серия N-алкоксиаскорбигенов и изучены их химические свойства. в) На основе (нндол-З-ил)этанднола и /,-аскорбиновой кислоты синтезированы структурные изомеры аскорбигена диастереомерные За,6а-дигидрокси-6-(1,2-дигидроксиэтил)-3-(1 Я-индол-3 -ил)тетра-гидро фуро [3,4-6]фуран-4-оны и 4,8,9-тригидрок-си-3 -(1 Я-индол-3 -ил)-1,6-диоксаспиро [4.4] нонан-4-карбоновая кислота. г) Показано, что при конденсации с /,-дегидроаскорбиновой кислотой 2-гидроксиметил-индол образует 3-(1,2-дигидроксиэтил)-За,10с-дигидрокси-За,5,6,10с-тетрагидро-ЗН-2,4-диокса-6-азациклопента-[с]флуорен-1-он. д) Показано, что при взаимодействии /--аскорбиновой кислоты с Р-гидрокситриптаминами — индольными аналогами адреналина, образуются её 2-С-производные или продукты их превращений - производные пятичленных индолиллактамов.

7. Показано, что при щелочном распаде 2-С-производные АК образуются соответствующие диастереомерные кетозы - 1 -дезокси-1 -(арил)-а-Ь-сорбопиранозы и 1-дезокси-1-(арил)-а-Ь-тагатопиранозы. Исследовано ацилирование кетоз уксусным ангидридом и тозилхлоридом. Из ациклических ацетилированных кетоз получены индивидуальные 1-дезокси-1-(ин до л-3-ил)кетопиранозы.

8. Открыта новая реакция трансформации аскорбигена, его N-гомологов, и N-алкокси-аскорбигенов в 2-гидрокси-4-гидроксиметил-3-(индол-3-ил)циклопент-2-енон и его производные. Исследовано влияние различных факторов на скорость реакции и выходы ■ циклопентенонов.

9. Показано, что 2-гидрокси-4-гидроксиметил-3-(индол-3-ил)циклопент-2-енон образуется в слабокислой среде с высоким выходом из раскрытой формы аскорбигена - 2-С-[(индол-3-ил)метил]-а-Х,-ксшо-гекс-3-улофуранозоновой кислоты. Изучена динамика образования промежуточных и конечных продуктов этой реакции и, после их вьщеления и идентификации, предложен механизм реакции.

10. Показано, что при взаимодействии N-алкильных гомологов индолилгликолевой кислоты с /.-аскорбиновой кислотой образуются соответствующие 2-гидрокси-4-гидроксиметил-3индол-3 -ил)циклопентен-2-еноны, идентичные соединениям, полученным при кислотном распаде аскорбигенов. При взаимодействии ваниломиндальной кислоты с /--аскорбиновой кислотой образуется 2-гидрокси-3-(4-гидрокси-3-метокси фенил )-4-гидроксиметил-циклопент-2-енон.

11. Установлено, что 1-дезокси-4,5-дитозил-1-(индол-3-ил)-а-Ь-тагатопираноза и её N-метильное производное в щелочных условиях трансформируются в 2-гидрокси-4-гидроксиметил-3-(индол-3-ил)циклопентен-2-еноны, идентичные соединениям, полученным при кислотном распаде аскорбигенов.

12. В совместной с биологами работе впервые показано, что аскорбиген, введённый перорально мышам, повышает неспецифическую резистентность организма к бактериальным инфекциям и токсическим эффектам циклофосфана.

1.6. Заключение

Статистические данные, показавшие, что повышенное потребление капусты и других овощей семейства крестоцветных благоприятно для здоровья людей, стали основой для продолжения биологических исследований [15,57,62]. Важнейшим результатом работ в этом направлении к настоящему времени надо считать открытие естественных эндогенных и экзогенных агонистов Ah- рецептора, например ICZ, для которого раньше были известны лишь техногенные агонисты - TCDD и другие хлорсодержащие, ароматические углеводороды. Таким образом, биологическое значение 5Н,11Н-индоло[3,2-6]карбазола и его производных велико. В связи с этим особый интерес представляют разработка методов синтеза производных ICZ, и изучение их химических свойств, которые необходимы для выяснения метаболизма этих соединений в живых организмах.

Представляет значительный интерес возможность влиять с помощью I3C и (или) его метаболитов на пул эстрогенов в организме, не используя антагонисты гормонов или ингибиторы их биосинтеза. Клинические исследования показали способность этих соединений снижать содержание эстрогенов и контролировать рост гормонозависимых, опухолей. Была установлена также способность 13С подавлять активность гена CDK6, останавливая клетки в фазе Gi клеточного цикла.

В то же время остается еще много вопросов, которые ждут ответа. Биологические свойства аскорбигена - преобладающего индольного продукта распада алкалоида глюкобрассицина, остаются неизученными. Участие Ah-рецептора и его агонистов в внутриклеточной и межклеточной сигнальной системах только начинает изучаться.

Все эти исследования стали импульсом для поиска биологически активных веществ в новых классах индольных производных. Так, обнаружено высокое сродство 5,11-диметилиндоло[3,2-6]карбазола (diMeICZ) к Ah-рецептору. Получен N-метиласкорбиген (MeASG), иммуномодулирующие свойства которого связаны с влиянием на обмен арахидоновой кислоты и простагландинов. Ведется широкий поиск антиканцерогенных и противоопухолевых веществ среди аналогов 13 С, ICZ, DIM, а также линейных и циклических тримеров.

Широкое изучение свойств природных компонентов питания и типов диеты продолжает сохранять огромное значение, поскольку результаты такого анализа важны для профилактики здоровья людей. Обнаруженная связь между типом питания и частотой раковых заболеваний свидетельствует о необходимости разработки рекомендаций по стратегии питания. В ряде стран научные советы при правительственных органах выработали официальные рекомендации, предлагающие увеличить потребление капусты и других овощей семейства крестоцветных для снижения частоты возникновения злокачественных опухолей. Такие рекомендации, например, дал Комитет по диете, питанию и раку Национального Исследовательского Совета США в 1982 г [96]. Этот же вопрос обсуждался в специальном докладе "Природные противоопухолевые вещества", представленном Совету Скандинавских стран в 1996 г [15]. В то же время следует помнить, что суммарные эффекты диеты слагается из эффектов многих природных соединений, входящих в состав пищи или образующихся из нее в организме, и поэтому усиливать или ослаблять эти эффекты искусственно следует с большой осторожностью.

Часть П. ИЗЛОЖЕНИЕ И ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ*

Главы 2,3, 4 в части П имеют отдельную нумерацию схем, рисунков, таблиц и соединений, не являющуюся продолжением нумерации в главе I.

РОССИЙСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ БИБЛИОТЕКА

II.1. Электрофильные реакции 3-замещённых индолов.

II.1.1 Электр о фильное замещение в пиррольноим кольце индольных соединений.

Электрофильное замещение в молекуле индола широко изучено [118, 119, 120, 121, 122]. Особенность поведения молекулы индола (1) в реакциях электрофильного замещения заключается в том, что атаке может подвергаться как нейтральная, так положительно или отрицательно заряженная молекула гетероцикла (схема 1). Неравномерное распределение электронной плотности в молекуле индола приводит к тому, что; индол ведет себя как амфотерное соединение, являясь слабой кислотой (рКа =21,3 ) и слабым основанием (рКъ = -3,5), которые образуют анион 3 в сильно щелочных условиях и присоединяют протон в сильных кислотах в место наивысшей электронной плотности — положение 3 (катион 2). Индолы образуют солеобразные соединения со щелочными и щелочноземельными металлами. Предварительное получение таких солей используется в реакциях алкилирования и ацилирования. Образующийся амбидентный анион 3 (схема 1) может атаковаться электрофильным агентом как в положение 1, так и в положение 3. Направление замещения зависит от характера связи азот—металл. В случае солей щелочных металлов, где эта связь в сильной степени диссоциирована, замещение, как правило, идет по атому азота, а в случае, например, индолилмагнийгалогенидов, где связь азот—металл в значивведение) 3

Схема 1 тельной степени ковалентна, наблюдается замещение в положение 3. Протонирование можно рассматривать как первичную электрофильную атаку, а само замещение является следующим процессом, происходящим либо в бензольном кольце, либо в пиррольном, как в случае индолов с акцепторными заместителями (X = СНО, COR, СООН, CN) в положении 3, у которых возможно отщепление бокового радикала в виде катиона и замещение его протоном или другой электрофильной частицей (схема 2) [122, 123 ]. Н

-X

N Н Н

Схема 2

Индолы в условиях кислотного катализа алкилируются ароматическими альдегидами, образуя индолиларилметилкатион (4), который, либо взаимодействует с находящимся в растворе нуклеофилом, образуя производные 5, либо атакуется другой молекулой индола, давая ди(индол-3-ил)арилметаны 6 (схема 3)[123, 124]. Кинетический контроль процесса приводит к соединениям 5, термодинамический контроль - к устойчивым в условиях реакции димерам 6. Важную роль играет растворитель. Плохая

Аг

R=H, Alk, Ar Nu = OH, Hal

Схема 3 растворимость конечного соединения смещает реакцию к кинетическому продукту 5, тогда как при хорошей растворимости и (или) повышенной температуре образуется преимущественно термодинамически устойчивый дииндолилметан 6 [125].

З-Формилиндол (7а) широко используется как исходное вещество для получения различных биологически активных веществ, вступая, в частности, в реакции конденсации с соединениями, обладающими активной метиленовой группой [126]. Поляризация карбонильной группы, усиливающаяся в кислой среде, позволяет использовать его в виде енолята как С-нуклеофил, одновременно делая атом углерода этой карбонильной группы электрофильным, благодаря чему эти соединения могут играть роль С-электрофилов -синтетических эквивалентов катиона -НС+-ОН. Альдегид 7а в кислой среде сам способен атаковать третье положение другой молекулы 7а (ipso-замещение) с образованием метилидениндоленина 8а, который стабилизируется после отщепления муравьиной

N Н

СНО H2S04

7а

H2S04

СНО СН=

N Н N

8а

10а

-нсоон

HS04 9а

Схема 4 кислоты, образуя кинетический продукт реакции - нерастворимую соль ди(индол-3-ил)метилия (9а, уророзеин) (схема 4) [123, 127]. Следует отметить, что первоначально этому соединению приписали структуру 5Н,11Н-индоло[3,2-6]карбазола (10а) [128], но позже было показано [127], что в действительности в этих условиях образуется только 9а. Химические свойства ди(индол-3-ил)метилиевых солей оставались неизученными.

II.1.2 Химическая трансформация 3-формилиндолов и уророзеинов как источников индолилметилий катиона.

II.1.2.1 Превращения 3-формилиндолов под действием кислот [129-132].

Синтетические возможности при трансформациях 3-формилиндола (7а) в сильных кислотах недостаточно изучены, поэтому можно ожидать, что эти превращения приведут к различным гетероциклическим соединениям, включая 5Н,11Н-индоло[3,2-6]карбазол и его структурные аналоги, которые привлекли к себе в последние годы большое внимание исследователей, а также трииндолилметилий катионам, поскольку в этом классе гетероциклов обнаружены соединения с биологической активностью. Так, ядро индоло[2,3-а]карбазола является основой структур группы высокоактивных антибиотиков и алкалоидов, например, стауроспорина [133], а индоло[3,2-6]карбазол и его 6-формильное производное представляют собой естественные лиганды рецептора ароматических углеводородов (Ah) [64]. В отличие от производных индоло[1,2-а]карбазола методы синтеза и химические свойства индоло[3,2-Ь] и [2,3-Ь]карбазолов исследованы недостаточно [134, 135]. Недавно было показано, что генетически изменённая культура клеток Escherichia coli продуцирует антибиотик турбомицин А, структура которого представляет собой трииндолилметилий катион [136].

В настоящей работе исследовались вещества, образующиеся из 3-формилиндолов 7,18 при действии сильных кислот. Мы получили уророзеин (9а) из 3-формилиндола (7а) в 1М H2SO4 по описанному методу [128] (схема 4) и показали, что он стабилен в растворе метанола в присутствии сильных кислот при рН<1 (H2SO4 или НСООН) даже при кипячении в течение нескольких часов, но неустойчив в метаноле или ледяной уксусной кислоте без добавления сильных кислот и спонтанно распадается уже при комнатной температуре, образуя смесь индолсодержащих соединений. Полученные смеси удалось разделить методом ВЭЖХ (рис.1) и показать, что состав компонентов, образующихся в метаноле и уксусной кислоте, после 24 часов хранения раствора примерно один и тот же.

Продукты трансформации 9а были выделены последовательно колоночной и препаративной тонкослойной хроматографией и идентифицированы с использованием методов ЯМР-спектроскопии (таблица 1 и экспериментальная часть) и масс-спектрометрии (схема 5). Колоночной хроматографией с выходом до 43% был выделен 6-(индол-3-ил)-5Н,7Н-индоло[2,3-6]карбазол (11). Его строение было установлено по присутствию молекулярного иона в масс-спектре электронной ионизации высокого разрешения и с помощью 'н ЯМР иШ

Рисунок 1: ВЭЖХ метанольного раствора уророзеина через 20 часов при комнатной температуре: Rt 2.64 мин. 5Н,11Н-индоло[3,2-6]карбазол (10а); Rt 3.39 мин. индол (1); Rt 6.44 мин. ди(индол-3-ил)метан (14а); Rt 8.28 мин. три(индол-3-ил)метан (15а); Rt 10.44 мин. 6-(индол-3-ил)-5Н, 11 Н-индоло[3,2-6]карбазол (16а); Rt 11.88 мин. уророзеин (9а); Rt 14.40 мин. Соль три(индол-3-ил)метилия (12а); Rt 17.44 мин. 6-(индол-3-ил)-5Н,7Н-индоло[2,3-6]карбазол (И).

13 и С ЯМР-спектроскопии (экспериментальная часть). Сигналы были отнесены с использованием методов двумерной ЯМР спектроскопии - HETCOR, COSY, селективного

1. Van Poppel G., Verhoeven D.T., Verhagen H., Goldbohm R.A. Brassica vegetables and cancer prevention. Epidemiology and mechanisms. // Adv. Exp. Med. Biol. — 1999. — V. 472. P. 159168.

2. Wattenberg L. W., Loub W. D., Lam L. K., SpeierJ. Dietary constituents altering the responses to chemical carcinogens. // Fed. Proc. -1975. -V. 35. P. 1327-1331.

3. Stoewsand G. S„ Babish J. В., Wimberly H. C. Inhibition of hepatic toxicities from polybrominated biphenyls and aflatoxin В in rats fed cauliflower. // J. Environ Path Toxic. -1978.-V. 2. P. 399-406.

4. Wattenberg L. W. Inhibition of neoplasia by minor dietary constituents. // Cancer Res. -1983 -(Suppl.). V. 43. - P. 2448-2453.

5. BoydJ. N. Babish J. G., Stoewsand G. S. Modification by beet and cabbage diet of aflatoxin В induced rat plasma alfa-foetoprotein elevation, heptatic tumorogenesis, and mutagenicity of urine. // Food Chem. Toxicol. - 1982. - V. 2. - P. 47-50.

6. Bradfield C. A., Bjeldanes L. F. Effect of dietary indole-3-carbinol, on intestinal and hepatic monooxygenase, glutation-S-transferase and epoxide hydrolase activities in the rat. // Food Chem. Toxic. 1984. - V. 22. - P. 977-982.

7. Loub W. D., Wattenberg L. W, Davis, D. W. Aryl hydrocarbon hydroxylasa induction in rat tissues by naturally occuring indoles of cruciferous plants. // J. Natl. Cancer Inst. 1975. -V. 54. -P. 985-988.

8. Pantuck E.J., Pantuck C.D., Anderson K.E., Wattenberg L. W., Conney A.H., Kappas A. Effect of Brussels sprouts and cabbage on drug conjugation. // Clin. Pharmac.Ther. 1984. V.35. - P. 161-169.

9. Kail M. A., Vang O., Clausen J. Effects of Dietary Broccoli on Human Drug Metabolism. // Cancer Lett. 1997. - V. 114. - P. 169-170.

10. Gmelin R., Virtanen A. I. Glucobrassicin, the precursor of the thiocyanate ion, 3-indolylacetonitrile and ascorbigen in Brassica oleracea and related specees. // Ann. Acad. Sci. Finn., Ser. AII Chem. 1961. - V. 107. - P. 1-25.

11. McDanell R., McLean A. E., Hanley А.В., Heaney R. K, Fenwick G. R. Chemical and biological properties of indole glucosinolates (glucobrassicins): a review. // Food Chem. Toxic. -1988.-V. 26.-P. 59-70.

12. Verhoeven D.T.H., Verhagen H., Goldbohm R.A., Van den Brandt P.A., Van Poffel G. A review of mechanisms underlying anticarcinogenicity by brassica vegetables. // Chem. Biol. Interactions. 1997. - V. 103. - P. 79 -129.

13. Vang 0., Dragsted L. Naturally Occuring Antitumourigens. III. Indoles. TemaNord 1996:535. Copyright: Nordic Council of Ministers. Copenhagen, 1996. - P. 107-108,120.

14. Fahey J.W., Zhang Y., Talalay P. Broccoli spouts: an exceptionally rich source of inducers of ensymes that protect against chemical carcinogens. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. V. 94. -P. 10367-10372.

15. Bradfield C. A., Bjeldanes L. F. High-Performance liquid chromatographic analysis of anticarcinogenic indoles in Brassica oleracea. // J. Agric. Food Chem. 1987. - V. 35. - P. 46-49.

16. West L., Badenhop A., McLaughlin J. Allyl isothiocyanate and allyl cyanide production in cellfree cabbage leaf extracts, shredded cabbage and coleslaw. // J. Agric. Food. Chem. -1977. V.25.-P. 1234-1248.

17. Hrncirik К., ValusekJ., VeliSek J. A study on the formation and stability of ascorbigen in an aqueous system. // Food Chem. 1998. - V. 63. - № 3. - P. 349-355.

18. Piironen E„ Rtturi A., Virtanen A. I. The synthesis of ascorbigen from ascorbic acid and 3-hydroxymethylindole. //Acta Chem. Scand. 1962. - V. 16. - P. 14-15.

19. Bjdrkman R., Lonnerdal B. Studies on mirosinases. III. Ensymatic proporties of Myrosinases from Sinapis Alba and Brassica Napus Seeds. // Biochim. Biophys. Acta. 1973. - V. 327. - P. 121-131.

20. Fahey J.W., Zalcmann A.T., Talalay P. The chemical diversity and distribution of glucosinolates and isothiocyanates among plants. // Phytochemistry. 2001. - V. 56. - P. 5-51.

21. Ahmad B. Effect of boiling on the ascorbic acid content in cabbage. // Nature. 1935. - № 136. - P. 797.

22. McHenry E.W., Graham M.L. Estimation of ascorbic acid by titration. //Nature. 1935. - №. 135.-P. 871-872.

23. Pal J.C., Guha B.C. Combined ascorbic acid in plant food. // J. Indian Chem. Soc. 1939. -V. 16.-P. 871-872.2 6. Sen Gupta P.N., Guha B.C. The estimation of total vitamin С in food-stuffs. // J. Indian Chem. Soc. 1937. - V. 14. - P. 95-102.

24. Prochaska Z., Sanda V., Sorm F. Separation of individual ascorbigen. // Coll. Czech. Chem. Commun. 1957. - V. 22. - P. 333-334.

25. Kiss G., Neukom H. Uber die Struktur des Ascorbigens. // Helv. Chim. Acta. 1966. - V. 49.-P. 989-992.

26. Aleksandrova L. G., Korolev A.M., Preobrazhenskaya M. N. Study of natural ascorbigen and ralated compounds by HPLC method. // Food Chem. 1992. - V. 45. - P. 61-69.

27. AgerbirkN., Olsen C.E., Sorensen H. Initial and final products, nitriles and ascorbigen produced in mirosinase catalised hydrolysis of indole glucosinolates. // J. Agric. Food Chem.1998.-V. 46.-P. 1563-1571.

28. Bailey G.S., Hendricks J.D., Shelton D.W., Nixon J.E., Pawlowski N.E. Enhancement of carcinogenesis by the natural anticarcinogen indole-3-carbinol. // J. Natl. Cancer Inst. 1987. - V. 78.-P. 931-934.

29. Wall M„ Taylor H., Perera P., Want M. Indoles in edible members of the Cruciferae. // J. Nat. Prod. 1988. - V. 51. - P. 129-135.

30. Buskov S., Hansen L.B., Olsen C.E., Sorensen J.C., Sorensen H., Sorensen S. Determination of ascorbigens in autolysates of various Brassica species using supercritical fluid chromatography. // J.Agric. Food Chem. 2000. - V. 48. - P. 2693-2701.

31. Муханов В.И., Ярцева КВ., Кикотъ B.C., Володин Ю.Ю., Кустова ИЛ., Лесная Н.А., Софъина З.П., Ермакова Н.П., Преображенская М.Н. Изучение аскорбигена и его производных. // Биоорг. химия. 1984. - Т. 10. - С. 544-559.

32. Муханов В. И., Каганский М. М., Сорокин А. А., Антонян С. Г., Тананова Г. В., Михайлевская Л. Л., Кинзирский А. С., Преображенская М. Н. Синтез и изучение неоаскорбигена и его аналогов. // Хим.-фарм. журн. -1994. Т. 28. - С. 6-10.

33. Преображенская М.Н., Плихтяк И.Л. 2-С-Производные L-аскорбиновой кислоты. // Хим.-фарм. журн. 1993. - Т. 27. - С. 22-34.

34. Hudson Е.А., Howell L., Ball H.W. Mechanisms of action of indole-3-carbinol as a chemopreventive agent. // Biochem. Soc. Trans. 1998. -V. 26. - P. 370 -386.

35. Liu H., Wormke M., Safe S.H., Bjeldanes L.F. Indolo3,2-6.carbazole: a dietary-derived factor that exhibits both antiestrogenic and estrogenic activity. // J. Natl. Cancer Inst. 1994. - V. 86. -P. 1758-1765.

36. Dashwood. R.H. Indole-3-carbinol: anticarcinogenic or tumor promoter in brassica vegetables. // Chem. Biol. Interact. 1998.- V. 110. - P. 211-215.

37. Broadbent Т.A., Broadbent H.S. The chemistry and pharmacology of indole-3-carbinol (indole-3-methanol) and 3-(methoxymethyl)indole (part I). // Cur. Med. Chem. 1998. - V. 5. - №.56. -P. 337-352.

38. Grose K. R., Bjeldanes L.F. Oligomerization of indole-3-carbinol in aqueus media. // Chem. Res. Toxic. 1992. - V. 5. - P. 188-193.

39. Staub R.E., Bjeldanes L. F. Convenient synthesis of 5,6,11,12,17,18-hexahydrocyclononal 1,2-b:4,5-b ':7,8-6 ".triindole, a novel phytoestrogen. // J. Org. Chem. 2003. -V. 68. - P. 167-169.

40. Sanda V., Constantzas N., Prochazka Z. On the bound form of ascorbic acid. Effect of pH on ascorbigen. // Colin. Czech. Commun. 1962. - V. 27. - P. 554-558.;

41. Королев A.M., Лаэюко Э.И., Ярцева КВ., Плихтяк И.Л., Александрова JI. Г., Розынов Б. В. , Преображенская М. Н. Превращения аскорбигена в кислой среде. // Биоорг. химия. -1991. Т. 17. - С. 981-987.

42. Лажко Э.И., Королев A.M., Преображенская М.Н. Изучение продуктов превращения аскорбигена в кислой среде методами спектроскопии ЯМР. // ХГС. 1993. - №. 3. - С. 353359.

43. Preobrazhenskaya M.N., Korolev A.M., Lazhko E.I„ Aleksandrova L.G., Bergman J., Lindstrom J-O. Ascorbigen as a precursor of 5H,llH-dihydroindolo3.2-b.carbazole. // Food Chem. -1993. V. 48. - P. 57-62.

44. Matano K., Kato N. Synthetic ascorbigen as a source of Vitamin С for guinea pigs. // Acta. Chem. Scand. -1967. -V. 21. P. 2886-2887.

45. VirtanenA.I.,.KiesvaaraM. On the purity of ascorbigen preparation and their antiscorbutic effect. // Acta Chem. Scand. -1963. -V.17. P. 848-853.

46. Плихтяк И. JI., Ярцева И. В., Клюев Н.А., Преображенская М.Н. Превращение аскорбигенов в замещенные 1-дезокси-1-(индол-3-ил)-а-Х-сорбопиранозы. // ХГС. 1989. -№5.С. 607-610.

47. Плихтяк И.Л., Ярцева КВ., Хан З.Е., Преображенская М.Н. Взаимодействие аскорбигенов с аминами. // Биоорг. химия. 1988. - Т. 14. - С. 1437-1443.

48. Bradfield С. A., Bjeldanes L. F. Structure-activity relationships of dietary indoles: a proposed mechanism of action as modifiers of xenobiotic metabolism. // J. Toxicol. Environ. Health. 1987. — V. 21.-P. 311-323.

49. Bredlow H.L., Sepkovic D.W., Telang N.T., Osborne M.P. Multifunctional aspects of the actions of indole-3-carbinol as an antitumor agent. // Ann. N.Y. Acad. Sci. — 1999. — V. 889. P. 204-213.

50. Broadbent T.A., Broadbent H.S. The chemistry and pharmacology of indole-3-carbinol (indole-3-methanol) and 3-(methoxymethyl)indole (part II). // Cur. Med. Chem. 1998. - V. 5. — №. 6. - P. 469-492.

51. Stresser D.M., Williams D.E., Griffin D.A., Bailey G.S. Mechanism of tumor modulation by indole-3-carbinol: disposition and excretion in male Fisher 344 rats. // Drug Metab. Dispos. -1995.-V. 23. P. 965-975.

52. Ghen Y.-H., RibyJ., Srivastava P., Bartholomew J., Denison M., Bjeldanes L. Regulation of CYP1A1 by indolo3,2-6.carbazole in murine hepatoma cell. // J. Biol. Chem. 1995. - V. 270.- P. 22548-22555.

53. Mimura J., Fujii-Kurijama Y. Functional role of AhR in the expression of toxic effects by TCDD. // Biochim. Biophis. Acta. 2003. - V. 1619. - P. 263-268.

54. Herrmann S., Seidelin M., Bisgaard H.C., Vang O. Indolo3.2-6.carbazole inhibits gap junctional intercellular communication in rat primary hepatocytes and acts as potential tumor promoter.//Carcinogenesis.-2002.-V. 23.-№ 11.-P.1861-1868.

55. Rannung U„ Rannung A., Sjoberg U., Li H., Westerholm R., Bergman J. Structure elucidation of two tryptophan-derived, high affinity Ah receptor ligands. // Chem. & Biology. 1995. - V. 2. -P. 841-845.

56. Tholander J., Bergman J. Synthesis of 6-formylindolo3,2-6.carbazole, as an extremely effitient ligand for the TCDD (Ah) receptor. // Tetrahedron Lett. 1998. - V. 39. - P. 1619-1622.

57. Wei Y., Helleberg H, Rannug U., Rannug A. Rapid and transient induction of CYP1A1 gene expression in human cells by the tryptophan photoproduct 6-formylindolo3,2-6.carbazole. // Chem. Biol. Interact. 1998. - V. 110. - N. 1-2. - P. 39-55.

58. Wei Y.,Rannug A.,Rannug U. UV induced CYP1A1 gene expression in human cells by tryptophan. // Chem. Biol. Interact. -1999. V. 118. - P. 127-140.

59. Chen L., Safe S„ Bjeldanes L. Indole-3-carbinol and diindolylmethane as aryl hydrocarbon reseptor agonists and antagonists in T47D human breast canser cell. // Biochem. Pharmacol. -1996.-V. 51.-P. 1069-1076.

60. Christensen J.G., Le Blanc G.A. Reversal of multidrug resistance in vivo by dietary administration of the phytochemical indole-3-carbinol. // Cancer Res. 1996. - V. 56. - P. 574581.

61. Schmidt J., Huei-Ting G., ReddyJ. Characterization of a murine Ahr null allele: involvment of the Ah receptor in hepatic groth and development. // Proc. Natl. Acad. Sci. 1993. - V. 93. - №. 13.-P. 6731-6736.

62. Wattenberg L.W., Laub W.D. Inhibitors of polycyclic hydrocarbon induced neoplasia by naturally occurring indoles. // Cancer Res. - 1978. - V. 38. - P. 1410-1413.

63. Michnovicz J. J., Bradlow H. L. Induction of estradiol. // J. Natl. Cancer Inst.- 1990. -V. 82.-P. 947-949.

64. Lemon H.M. Estrogens. In Cancer Medicin. Ed. J.F. Holland, E. Frei III. 1973. Philadelphia. Lea and Febiger, P. 911.

65. Tiwari K., Guo Li., Bradlow L. H., Telang N. Т., Osborne M. P. Selective responsiveness of human breast cancer cells to indole-3-carbinol, a chemopreventive agent. // J. Natl. Cancer Inst. -1994.-V. 86.-P. 126-131.

66. Chang G.H-F., Riby J., Firestone G.L., Bjeldanes L.F. Ligand-independent activation of estrogen receptor function by 3,3'-diindolylmethane in human breast cancer cell. // Biochem. Pharm. 2000. - V. 60. - P. 167-177.

67. Riby J., Feng C, Chang G.H.-F., Schaldach C.M., Firestone G.L., Bjeldanes The major cyclyc trimeric product of indole-3-carbinol is a strong agonist of the estrogen receptor signaling pathway. // Biochem. 2000.- V. 39.- P. 910-918.

68. Stresser D.M., Bjeldanes I.F., Bailey G.S., Williams D.E. The anticarcinogen 3,3'-diindolylmethane is a inhibitor of cytochrome p-450. // J. Biochem.Toxicol. — 1995. V. 10. - P. 191-201.

69. Michnovicz J.J., Bredlow H.L. Induction of estradiol Metabolism by dietary indole-3-carbinol in humans // J. Natl. Cancer Inst. 1990. - V. 82. - P. 947-949.

70. Michnovicz J.J., Adlercreutz H., Bredlow H.L. Changes in levels of urinary estrogen metabolites after oral indole-3-carbinol treatment in humans. // J. Natl. Cancer Inst. -1997. -V.89. -P. 718-723.

71. Michnovicz J.J. Increased estrogen 2-hydroxylation in obese women using oral indole-3-carbinol. // Int. J. Obes. Relat. Metab.Disord. 1998. - V. 22. - P. 227-229.

72. Rosen C.A., Woodson G.E., Thompson J.W., HengestegA.P., Bradlow H.L. Preliminary results of the use of indole-3-carbinol for recurrent respiratory papillomatosis. // Otolaryngol. Head Neck Surg. 1998. - V. 118.-P. 810-815.

73. Newfield L., Goldsmith A., Bradlow H.L., Auburn K. Estrogen metabolism and human papillomavirus-induced tumors of the larynx: chemo-prophylaxis with indole-3-carbinol. // Anticancer Res. 1993. -V. 13. - P. 337-341.

74. Shertzer H.G., Senft A.P. The micronutrient indole-3-carbinol: implications for disease and chemoprevention.// Drug Metabol. Drug Interact. 2000. V. 17. -P. 159-188.

75. He Y.H., Smale M.H.E., Schut H.A. Indole-3-carbinol inhibits DNA adduct formation of the dietary carcinogen, 2-amino-l-methyl-6-phenylimidazo4,5-6.pyridine in female F344 rats. // Cell. Biochem. 1997. - V. 64. - P. 42-51.

76. Oganesian A., Hendricks J.D., Williams D.E. Long term dietary indole-3-carbinol inhibits diethylnitrosamine-initiated hepatocarcinogenesis in the infant mouse model. // Cancer Lett. -1997.-V. 118.-P. 87-94.

77. Srivastava B.H., Shukla Y. Antitumour promoting activity of indole-3-carbinol in mouse skin carcinogenesis. // Cancer Lett. 1998. - V. 134. - P. 91-95.

78. Dashwood R.H., Fong A.T., Arbogast D.N., Bjeldanes L.F., Hendricks J.D. Anticarcinogenic activity of indole-3-carbinol acid products: ultrasensitive bioassay by trout embryo microinjection. // Cane. Res. 1994. - V. 54. - №. 13. - P. 3617-3619.

79. Larsen S.S., Williams D.E. Dietary indole-3-carbinol inhibit FMO activity and the expression of flavin-containing monooxygenase form 1 in rat liver and intestine. // Drug Metab. Dispos. 1996. V. 24. - № 9. - P. 927-931.

80. Preobrazhenskaya M.N., Korolev A.M. Indole-3-carbinol. // J. Natl. Cancer Inst. 1992. - V. 84.- P. 1210-1211.

81. Park J.Y.K., Shigenaga M.K., Ames B.N. Induction of cytochrome P4501A1 by 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin or indolo3,2-Z>.carbazole (ICZ) is associated with oxidative DNA damage. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - V. 93. - P. 2322-2327.

82. National Research Council Diet, Nutrition and Cancer. Washington: National Academy Press, 1982.

83. Cover C.M., Hsieh S.J., CramEJ., Hong C., RibyJ.E., Bjeldanes L.F., Firestone G.L. Indole-3-carbinol and Tamoxifen Cooperate to arrest the cell cycle of MCF-7 human breast cancer cell. // Cancer Res. 1999. - V. 59. - P. 1244-1251

84. Staub R.E., Feng С., Onisko В., Bailey G.S., Bjeldanes L.F., Firestone G.L. Fate of indole-3-carbinol in cultured human breast tumor cell. // Chem. Res. Toxicol. — 2002. — V. 15. — P. 101-109.

85. Chinni S.R., Sarkar F.H. Act inactivation is a key event in indole-3-carbinol induced apoptosis in PC-3 Cells. // Clin. Cane. Res. -2002. V. 8. - P. 1228-1236.

86. Ge X.K., Yannai S., Rennert G., Gruener N., Fares FA. 3,3'-DiindolyImethane induced apoptosis in human cancer cell. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996. - V. 228. - P. 153158.

87. Kiesvaara M., Virtanen A.I. Synthetic ascorbigen as a vitamin С source for quinea pig and man. // Acta Chem. Scand. 1962. - V.l 6. - №. 2. - P. 510-512.

88. Prochazka Z, Feldheim W. Note on ascorbigen a source of vitamin C. // Acta Chem. Scand. — 1962. V. 16. - №. 10. - P. 2470-2472.

89. Virtanen A.I., Kiesvaara M. On the purity of ascorbigen preparation and their antiscorbutic effect. // Acta Chem. Scand. 1963. - V. 17. - №. 3. - P. 848-853.

90. Ефимов С.А. Изучение иммуномодулирующей активности 1-метил- и 1-этил-аскорбигенов. // Антибиотики и химиотерапия. 1989. Т. 34. - С. 125-129.

91. Efimov S. A., Shevchenko V. Е., Shchukin I. A. Preobrazhenskaya М. N. The influence of 1-methyl- and 1-ethylascorbigens on metabolism of arachidonic acid in murine spleen cells. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1993. - V. 190. - P. 895-900.

92. Malkova I. V., Bukhman V. M., Vinogradova I. V., Fomina Т. V., Korolev A. M., Preobrazhenskaya M. N. Prophylaxis of experemental bacterial infection in mice by 1-methylascorbigen. // J. Antimicrob. Chemother. 1991. - V. 28. - P. 935-936.

93. Березина JI.К., Посевая Т. А., Баринский М.Ф., Королев A.M., Захаров В. Е., Преображенская М. Н. Противовирусная активность 1-метиласкорбигена при экспериментальных арбовирусных инфекциях. // Хим.-Фарм. журн. 1993. - Т. 27. - С. 5559.

94. Bramwell В., Fergusson S., Scarlett N., Macintosh A. The use ascorbigen in the treatment of fibromyalgia patients. // Altern. Med. Res. 2000. - V.5 - P. 455-462

95. Stephensen P.U., Bonnesen C., Bjeldanes L., Vang O. Modulation of cytochrome P-4501A1 activity by ascorbigen in murine hepatoma cells. // Biochem. Pharmacol. 1999. - V. 58. - P. 1145-1153.

96. Houlihan W.J. Ed. Indoles, N.Y., John Wiley & Sons Inc. 1979. - Part I.

97. Houlihan W.J. Ed. Indoles, N.Y., John Wiley & Sons Inc. -1979. Part II.

98. Sundberg R.J. Indoles, N.Y., Acad.Presss. 1996. - P. 119-124, 136-139.

99. Кост A.H., Будылин B.A. Электрофильные реакции гетероароматического ядра. // ЖВХО. 1977. - Т. 22. - №. 3. - С. 315-323.

100. Будылин В.А., Юдин Л.Г., Кост А.Н. Электрофильное замещение в индольном кольце индольных соединений. // ХГС.-1980.-№. 9.-С. 1181-1199.

101. Remers W. Indole aldehydes and ketones, in "Indoles", ed. W.J. Houlihan, Part III, John Wiley & Sons. 1979. - P. 357-528.

102. Mahadevan A., Sard H., Gonzales M., McKew J.C. A general method for Сз reductive alkylation of indoles. // Tetrahedron. Lett. -2003 V. 44. - P. 4589-4591.

103. Коган H.A. Об устойчивости индолилфенилметилкатионов. // ХГС. — 1980. №. 4. - С. 489-492

104. Смит В., Бочков А., Кейпл Р. Органический синтез: наука и искусство. Мир. — 2001. -С. 102-104,197

105. Harley-Mason J., В и 'Lock K.L. Structure of urorosein.// Biochem. J.- 1952. -V. 51.- P. 430432.

106. Fearon W.R., Boggust W.A. Pigments derived from tryptophan: (1) Urorosein, (2) Tryptochrome.// Biochem. J. 1950.- V. 46. - P. 62-67.

107. Королев A.M., Юдина JI.H., Преображенская M.H. Превращения 3-формилиндола под действием сильных кислот. // ХГС. 1999. - №. 5 (383) - С. 631-639.

108. Preobrazhensfcaya М., KorolevA., Rozhkov I., Yudina L., Lazhko E„ Aiello E„ Almerico A.M., Mingoia F. From ascorbigens to indolocarbazoles. // И Farmaco. 1999. - V. 54. - P. 265-214.

109. Korolev A.M., Yudina L.N. Di(indol-3-yl)methylium salt (urorosein) as a synthon for the preparation of new condensed indole heterocycles. // Abs., 17th International congress of Heterocyclic Chemistry. 1999. - Vienna. - Austria, August 1-6. - P0-285.

110. Юдина JI.H., Королёв A.M. Превращения 3-формилиндолов под действием сильных кислот. II Тезисы докладов. Международная научная конференция « Органический синтез и комбинаторная химия». 1999. - Москва, Звенигород, 4-7 марта. - С. П-175.

111. Yang S., Cordell G. J. Biosynthesis of staurosporine: incorporation of glucose. //Natl. Prod. — 1996 V.59. - P. 828-833.

112. Kistenmacher A., Mullen. A direct synthesis of indolocarbazoles via new dinitrophenyl precursors. // J. Heterocyclic Chem. 1992. - V. 29. - P. 1237-1239.

113. Bergman J., Janosik Т., Wahlstrom N. Indolocarbazoles. // Adv. In Het. Chem. 2001. — V. 80.-P.1-71.

114. Von Pindur U., Midler J J. Zur Reaction von Сз-symmetrischen Trisindolylmetanen mit Trityltetrafluoroborat: Ein Hinweis auf einen Electronentransfer-Mechanismus. // Chemiker-Zeitung.- 1985.- Vol. 109. №.7. P. 265-267.

115. Morales-Rios M.S., Espineira J., Joseph-Nathan K. Magnetic resonance in chemistry. -1987,- Vol. 25.-P. 377.

116. HiinigS., Steinmetzer H. Kondensierte Stickstofifheterocyclen. // Liebigs Ann. Chem. 1976. -P. 1090-1102.

117. Calvaire A., Palland R. Preparation of some indole derivatives. // C. R. Acad.Sci. Paris.-1964.- V. 258.- P. 609-612

118. Robinson B. The Fischer indolization of cyclohexan-l,4-dione bisphenylhydrazone. // J. Chem. Soc. 1963. - P. 3097-3099.

119. Saito S., Ohwada Т., Shudo S. K. Superacid-catalyzed reaction of Substituted Benzaldehydes with benzene.// J. Org. Chem.-1996.- Vol. 61.- P. 8089-8092.

120. Olah G., Rasul G„ York C., Prakash S. Superacid-catalyzed condensation of Benzaldehyde with benzene. Study of protonated benzaldehydes and the role of superelectrophilic activation // J. Am. Chem. Soc.- 1995.-V. 117.-P. 11211-11214.

121. Bergman J. Reactions of indoles with ortho esrers, N,N-dimethylformamide and N,N-dimethylacetamide dialkyl acetals. // J. Heterocyclic Chem. 1985. V. 22. - P. 341-343.

122. Юдина JI.H., Лажко Э.И., Королев A.M., Преображенская M.H. Алкилирование 6-(индол-3-ил)индоло3,2-Ь.карбазола. // ХГС.-2002.-№.10.-С. 1364 -1368.

123. Kleman М., Poellinger L., Gustaffson J. Regulation of human dioxin receptor function by indolocarbazoles, receptor ligands of dietary origin. // J. Biol. Chem. — 1994. — V. 269.- N. 7. P. 5137-5144.

124. Tholander J., Bergman J. Synthesis of 6-substituted indolo3,2-6.carbazoles, including 6-formylindolo[3,2-6]carbazoles, as an extremely effitient ligand for the TCDD (Ah) receptor. // Tetrahedron. 1999. - V. 55. - P. 6243-6260.

125. Liskamp R.M.J. A new application of modified peptides and peptidomimetics: potential anticancer agents. // Angew. Chem. Int. Ed. Engl. -1994. V. 33. - № 3. - P. 305-307.

126. Waid Ph.P., Flynn G.A., Huber E. W., Sabol J.S. Constrained amino acid. An approach to the synthesis of 3-substituted prolines. // Tetrahedron Lett. 1996. V. 37. - № 24. - P. 4091-4094.

127. House И.О. Modern Synthetic Reactions, 2nd ed. TheBenjamin Cummings, Menio Park. — 1972.-Ch. 9.-P. 492-623.

128. Cheng-Chu Chan, Xian Huang. Synthesis of Isopropylidene dialkylmalonates under Phase-transfer catalyzed conditions. // Synthesis. 1982. - №. 6. - P.452-454.

129. Wasserman H.H. Ed. Organic Chemistry. V. 12-11.: Organic functional group preparations. Acad. Presss, 1986. - P. 333.

130. Kepu Ф., Сандберг P. Углублённый курс органической химии, Москва, «Химия» 1981, книга 1, С. 169-170; 191

131. БетелД., Голд В. Карбониевые ионы. «Мир» 1970., С. 58-72,116-122, 139-186.

132. Stock L.M., Brown Н.С. Advances in Physical Organic Chemistry, Vol.1, ed. by Gold, Academic Press, New York, 1963, P. 35-154.

133. Castedo L., Delamano J., Lopez C., Lopez V. В., Tojo G. Synthesis of five-membered heteroarylmethyl p-tolylsulfones from heteroarenemethanols under acidic conditions: scope and limitations. // Heterocycles.- 1994. V. 38. - № 3. - P. 495 - 502.

134. Матье Ж., Панико P. Курс теоретических основ органической химии, "Мир", 1975, С. 58-59, 297-298.

135. Amat-Guerri F., Martinez-UtriUa R., Pascual С. Condensation of 3-hydroxymethylindoles with 3-substituted indoles. Formation of 2,3-methylenediindole derivatives. // J. Chem. Res. Syn.1984.-V. 5.-P. 160-161.

136. Leete E„ Marion L. The hydrogenolysis of 3-hydroxymethylindole and other indole derivatives with lithium aluminium hydryde. // Can. J. Chem. 1953. - V. 31.- P.775 - 784.

137. Biswas KM., Jackson A.H. Electrophilic substitution in indoles V. Indolenines as intermediates in the benzylation of 3-substituted indoles. // Tetrahedron. — 1969. — V. 25. — P. 227241.

138. Casnati G., Dossena A., Pochim A. Electrophilic substituon in indoles: direct attack at the 2-position of 3-alkylindoles. I I Tetrahedron Lett. 1972. - №. 52. - P. 5277-5280.

139. Leete E. 3-hydroxymethylindoles. // J. Am. Chem. Soc. 1959. - V. 81. - P. 6023-6025.

140. Pindur U. Diindolylmethan-Leukobasen bei der van Urk-Reaktion mit physiologisch aktiven Indolen. // Archiv der Pharmazie . (Weinheim). 1984. - V. 317. - P. 502-505.

141. ThesingJ. Beitrage zur Chemie des indole, III. Mitteil: Uber die Einwirkung von Alkali auf quartare Salze des Gramins. // Chem. Ber. 1954. - V. 87. - P. 692-699.

142. Chini A. A., Burton G., Gros E.G. Catabolism of gramine in Hordeum vulgar е. H Phytochemistry.- 1990.-V.29.-№. 6.-P. 1781-1783.

143. Чупина JI.H., Шнер В.Ф., Грицина Г.И., Терехина А.И.,Суворов Н.Н. Производные индола. 124. 5-(2-Фенилэтенил)индолины и индолы. // ХГС. 1984. - №. 4. - С. 466-469.

144. Korolev A.M., Shchekotikhin А.Е., Lysenkova L.N., Preobrazhenskaya M.N. Synthesis of (indol-3-yl)methanesulfonamide and its 5-methoxy derivative. // Synthesis. 2003. - V. 3. - P. 320-322.

145. Preobrazhenskaya M. N., Lakatosh S.A., Shchekotikhin A. E., Korolev A.M. Indoline and indolenine intermediates in the syntheses of complex indole derivatives. // Abs., International

146. Symposium " Advances in Synthetic, Combinatorial and Medicinal Chemistry ".- 2004. -Moscow, Russia. May 5-8. V. 1. - P. 13

147. Silverman R.B. The organic Chemistry of Drug Design and Drug Actioa Academic Press: San Diego, 1992; Chapter 2. P. 108-118.

148. KingF.D. Ed. Medicinal Chemistry: principles and practice. The Royal Society of Chemistry. 1994.-P. 272-276.

149. Ariens E.J. Ed. Drug Design Vol. VII. Academic Press: New York, London. - 1976. -Chapter 3. The Design of Auxin-Type Herbicides. - P. 115-149.

150. Wieland Т., Fisher E, Moewus F. Natium-skatylsulfonat, ein antagonist von heteroauxin beim wurzelwachstum. // Liebigs Ann. Chem. 1948. - V. 561. - P. 47-49.

151. Coker N. The Sulfomethylation of Indole. I I J. Org. Chem. -1962. V.27. - P. 1881 - 1882.

152. King C.G., Burns J.J. Ed. Second conference on vitamin C. // Annals of the NewYork Academy of Scienses. NY. - 1975. - V. 258. - P. 48-69.

153. Koshiishi I., Takayama H., Aimi N., Yamaguchi JC, Toyoda H., Imanari T. A novel reactions of cyanate with dehydroascorbate. // Chem. Pharm. Bull. 1997.- V. 45. - №. 2. - P. 344-348.

154. Преображенская М.И., Королёв A.M. Индольные соединения в овощах семейства крестоцветных (Cruciferae) (обзор). // Биоорг. Химия. 2000. - Т. 26. - № 2. - С. 97-111.

155. Преображенская М.Н., Лавренов С.Н., Королев A.M. Синтез 1 -М-(Р-0-глюкопира-нозил)- и 1-№(1-дезокси-2,3,4,5,6-пента-0-ацетил-0-галактит-1-ил)аскорбигенов. // ХГС. — 2002. № 8 (422). - С. 1038-1043.

156. Преображенская М.Н., Толкачёв В.Н., Гелинг О.Н„ Костюченко Н.П. Синтез I-P-D-глюкопиранозидов 3-(2-аминоэтил)-индола и 3-(2-аминопропил)индола. // ЖорХ. 1974. -V. 10. - С. 1764-1768.

157. Преображенская М.Н., Муханов В.И., Манзон Л.Д., Суворов Н.Н. Синтез 1-дезокси-1- (I-индолил)-0-сорбита и I-дезокси- (1-индолил)-0-галактита. // ЖорХ 1972.- V. 8. - С. 26002604.

158. Преображенская М.Н., Толкачёв В.Н., Кудряшова В.А., Ярцева КВ. Синтез 3-замещенных 1-гликозилиндолов. // ЖорХ. 1975. - V.l 1. — С. 199-205.

159. Преображенская М.Н., Вигдорчик М.М., Суворов Н.Н. Изомеризация углеводного цикла 1-рибозилиндолов. // Химия природных соединений. — 1968. -V. 2. С. 128-130.

160. Юдина Л.Н., Королев A.M., Резникова М.И., Преображенская М.Н. Изучение неоаскорбигена // ХГС. 2000. - №.2 (392). - С. 178-186.

161. Лавренов С.Н., Королев A.M., Преображенская М.Н. Получение 1-алкокси- и 1-гликозилоксииндолов. // Тезисы докладов. Школа молодых ученых "Органическая химия в 20-м веке". 2000. - Москва. - Звенигород, 26-29 апреля. - С. 65.

162. Somei М. 1-Hydroxyindoles. // Heterocycles.- 1999. V. 50. - P. 1157-1211.

163. Some, M. Recent Advances in the Chemistry of 1-Hydroxyindoles, 1-Hydroxytryptofans, and 1 -Hydroxytryptamines. // Adv. In Heterocyclic Chem. 2002. - V. 82. - P. 101-155.18Э.Демлов Э., Демлов 3. Межфазный катализ. Мир. — 1987.- С. 168 —170.

164. Preobrazhenskaya М., Lazhko К, Korolev A. Reaction of (indol-3-yl)ethandiol with L-ascorbic acid. // Tetrahedron Asym. 1996. - V.7. - P. 641-644.

165. Spande T.F. Hydroxyindoles, Indole alcohols and indolethiols, in Indoles. Parth III. Houlihan. N.J. Ed. - John Wiley & Sons: New York - Toronto. - 1970. - P. 170.

166. Преображенская M.H., Жирнова КГ., Костюченко Н.П., Суворов Н.Н. Синтез и стереохимия 1-(3-индолил)алкандиолов-1,2. // ЖорХ. 1972. - №. 5. - С. 994-1001.

167. Илиел Э., Аллинжер Н., Энжиал С., Моррисон Г. Конформационный анализ. 1969. -Мир. - С. 247-250.

168. Preobrazhenskaya М., Rozhkov I., Lazhko E., Korolev A. Interaction of L-ascorbic acid with DL-N-methyl-p-hydroxytryptamine. // Tetrahedron Lett. 1998. - V. 39. - P. 109-112.

169. Preobrazhenskya M.N., Yudina L.N., Rozhkov /./., Korolev A.M. From ascorbigens to indolocarbazoles. // Abs., VIII International conference on heterocyclic structures in medicinal chemistry. 1998. - Palermo. - Italy. - P. 28-36.

170. Schidt M., Eger K. Michael reactions to ascorbic acid: Nitrostyrene as a Michael acceptor toward vitamin C. // Pharmazie. 1996. - V.51. - P. 11-16.

171. Булатова H.H., Суворов H.H. Взаимодействие 3-нитровинилиндолов с нуклеофиль-ными агентами. // ХГС. 1969. - С. 813-817.

172. Tsai M.-D., Floss Н., Rosenfeld И., Roberts J. Sterochemistry of reaction with catalized by indolyl-3-alkane-hydroxylase. // J. Biol. Chem. 1979. - V.254. - P. 6437-6442.

173. Преображенская M.H., Орлова Л.М., Старостина З.Г., Либерман С.С., Сухинина Г.П., Суворов Н.Н. Синтез и изучение фармакологической активности 1-(индолил-3)-2-алкиламиноэтанолов. //Хим.-Фарм. Журн. 1970. - №.10. - С. 5-10.

174. Pischetsrieder М., Larish В., Muller U., Severin Т. Reaction of ascorbic asid with aliphatic amines. //J. Agr. Food Chem. 1995. - V.43. - P. 3004-3006.

175. Preobrazhenskaya M. N., Rozhkov 1.1., Lazhko E. L, Yudina L. N. Korolev A. M. Reaction of the vanillomandelic acid and 4-hydroxybenzyl alcohol derivatives with L-Ascorbic acid. //

176. Tetrahedron. 1997. - V. 53. - P. 6971-6976. Corrigendum: Tetrahedron.- 1999. - V. 55. - P. 1517.

177. Kiss G., Neukom H. Formation of Ascorbigen-like product from ascorbic acid and p-hydroxybenzyl alcohol. // Experientia. 1968. - V. 24. - № 4. - P. 326-329.

178. Poss A., Belter R. Vitamin С in Organic synthesis: Reaction with p-hydroxybenzyl alcohol derivatives. // J. Org. Chem. -1988. V.53. - P. 1535-1540.

179. Букин Ю.В., Плихтяк И.Л., Драудин-Крыленко B.A., Ярцева КВ., Орлова Л.М., Преображенская М.Н. Аскорбиген и его производные — депо формы аскорбиновой кислоты. // Биоорг. Химия. 1987. - Т. 13. - №. 4. - С. 539-545.

180. Forrest Z, Janet Е., Kasparek S., Heacock R. Domino reactions m organic synthesis. // Can. J. Chem. 1969. - V.47. -№.11.- P. 2118-2121.

181. Khanna I. K, Weier R. M., Yu Y., Collins P. W., Miyashiro J. M., Koboldt С. M., Veenhuizen A. W. 1,2-Diarylpyrroles as inhibitors of cyclooxygenase-2. // J. Med. Chem. 1997. — V.40. — P. 1619- 1633.

182. Cirrencione G., Dattolo G„ Almerico A. M., Presti G., Aiello E. Polycondensed nitrogen heterocycles. Part 20. Reactivity of diazotized l-(2-aminophenyl)pyrroles. Pyrrolol,2-f.phenanthridines. // Heterocycles. 1986 - V. 24. - P. 3403 - 3408.

183. Preobrazhenskaya M., Lazhko E, Korolev A., Reznikova M., Rozhkov I. Transformation of ascorbigen into l-deoxy-l-(indol-3-yl)-a-L-sorbopyranose and l-deoxy-l-(indol-3-yl)-a-L-tagatopyranose. // Tetrahedron Asym. — 1996. V.7. - P. 461-467.

184. Reznikova M.I., Korolev A.M., Bodyagin D.A., Preobrazhenskaya M.N. Transformations of ascorbigens in vivo into ascorbigen acid and l-deoxy-l-(indol-3-yl)ketoses. // Food Chem. -2000.-V. 71.-P. 469-474.

185. Preobrazhenskaya M.N., Lazhko E.I., Korolev A.M. Stereochemistry of products of ascorbigens transformations. // Abs., 15th International congress of Heterocyclic Chemistry. — 1995.- Taipei. Taiwan, August 6-11. - P01-072.

186. Searle, P.A.; Molinski, T.F Phorboxazoles A and В : Potent Cytostatic Macrolides from Marine Sponge Phorbas Sp. // J. Am. Chem. Soc. 1995. - V. 117. - P. 8126-8131.

187. Smith A.B., Chen S.S.-Y., Nelson F.C., Reichert J.M., Salvatore B.A. Total Syntheses of (+)-Acutiphycin and (+)-trans-20,21-Didehydroacutiphycin. // J. Am. Chem. Soc.-1995. V. 117. -P. 12013-12017.

188. Ahmed F., Forsyht C.J. Convergent Synthesis of the C31-C46 Domain of the Phorboxazole natural Products. // Tetrahedron Lett. -1998. V. 39. P. 183-186.

189. Teitze L. Domino reactions in organic synthesis. // Chem. Rev. -1996,- V. 96. P. 115 - 130.

190. Lavrenov S.N., Korolev A.M., Reznikova M.I., Sosnov A. V., Preobrazhenskaya M.N. Study of l-deoxy-l-(indol-l-yl)-L-sorbose, l-deoxy-l-(indol-l-yl)-L-tagatose, and their analogs. // Carbohydrate Res. 2003. - V. 338. - P. 143-152.

191. Ertel W., Friedrich К Activated Ethylenes-New synthesis of Aromatic Aldehydes. // Chem. Ber. 1977. - V. 110. - P. 86-89.

192. Korolev A.M., Preobrazhenskaya M.N., Isaeva NN. The transformation of ascorbigen in acidic and alkaline media. // Abs., VIIth European Carbohydrate symposium. 1993. -EUROCARB VII. -Cracow. - Poland. - August 22-27. - P. A003.

193. Korolev A.M., Yudina L.N., Rozhkov I.I., Lysenkova L.N., Lazhko E.I., Preobrazhenskaya M.N. The formation of 2-hydroxy-4-hydroxymethyl-3-(indol-3-yl)cyclopent-2-enone derivatives from ascorbigens. // Carbohydrate Res. 2001. - V. 330. - P. 469-477.

194. Королёв A.M. Синтез новых гетероциклических соединений на основе индол-3-карбинолов и L-аскорбиновой кислоты. // Тезисы докладов. Iм Всероссийская конференция по химии гетероциклов памяти А.Н.Коста. — 2000. — Суздаль. 19-23 сентября .- С. 34.

195. Specter М„ Anthony W. The action ofoxalylchloride on indole: a new approach to tryptamines. // J. Am. Chem. Soc. 1954. - V.76. - P. 6208-6210.

196. Ames D., Ames A., Coyne C. The synthesis of some indolylalkylamines. // J. Chem. Soc. — 1959.-V. 81.-P. 3388-3391.

197. Фердман Д.Л. «Биохимия». M, Высшая Школа, 1966, С. 193.

198. Hasegawa S., Koynagi Н., Hirose Y. Decarboxylated ascorbigens in the heartwood of Chaemocyparis Pisifera. // Phytochemistry. 1989. - V.29. - P. 261-266.

199. Zhang J., Ulrich P. Directed approaches to reactive Millard intermediates: formation of a novel 3-alkylamino-2-hydroxy-4-hydroxymethyl-2-cyclopentenone «cypentodine». // Tetrahedron Lett. 1996. - V.37. - P. 4667-4670.

200. Навашин С.М., Вядро М.М. Модификаторы биологических реакций в терапии здлкачественных образований, серия «Онкология». Москва. 1989. - Т.21. - С. 136-146.

201. Sartori S., Trevisani L., Nielsen I., Tassinari D.,. Panzini I, Abbasciano V. Randomized trial of omeprazole or ranitidine versus placebo in the prevention of chemotherapy-induced gastroduodenal injury. // J.Clin.Oncol. 2000. - V. 18. - P. 463-467,

202. Blijlevens N.M., Donnelly J.P., de Pauw B.E. Empirical therapy of febrile nuetropenic patiens with mucositis : challenge of risk-based therapy. // Clin. Microb. Infect. 2001. - V.7. - suppl. 4.-P.47.

203. Woo P. С., Ng W. F„ Leung H. С., Tsoi H. W, and Yuen K. Y. Clarithromycin attenuates cyclophosphamide-induced mucositis in mice. // Pharmacol. Res. 2000. - V.41. -№. 5. - P. 527532.