Синтез, превращения и биологическая активность сульфонилзамещенных азотсодержащих гетероциклических систем тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.03 ВАК РФ

Па правах рукописи

КРАВЧЕНКО Дмитрий Владимирович

СИНТЕЗ, ПРЕВРАЩЕНИЯ И БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ СУЛЬФОНИЛЗАМЕЩЕННЫХ АЗОТСОДЕРЖАЩИХ ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИХ СИСТЕМ

02.00.03 - Органическая химия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук

Москва 2006

Работа выполнена в ООО "Исследовательский Институт Химического Разнообразия"'

Научный консультант: доктор химических наук, профессор, лауреат Государственной премии СССР и премии Совета Министров СССР, заслуженный изобретатель России Ивашенко Александр Васильевич

Официальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор Граник Владимир Григорьевич доктор химических наук, профессор Юровская Марина Абрамовша доктор химических наук, профессор Смушкевнч Юрий Исаевич

Ведущая организация: Институт органической химии РАН имени Н.Д. Зелинского

Защита состоится 03, оШ>£г, в /¿г. 30/пи (С на заседании диссертационного совета Д 212.203.11 в Российском университете дружбы народов по адресу: 117923, Москва, ул. Орджоникидзе. д.З, зал N 2.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.6.

Автореферат разослан _

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат Химических наук, доцент

г В.В. Курилкин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Актуальной проблемой современной органической химии является разработка методов синтеза и фуншионализации. оригинальных соединений, обладающих потенциальными практически значимыми биологическими свойствами и являющихся перспективными кандидатами для создания лекарственных препаратов. В частности, благодаря исключительно разнообразной физиологической активности, азотсодержащие гетероциклические системы занимают. лидирующее положение среди лекарственных средств. В . этом ряду соединений найдены многочисленные агонисты, антагонисты, модуляторы рецепторов, ингибиторы ферментов, онколитики, антибактериальные и противопаразитарные агенты и т.д. В настоящее время подавляющее большинство азотсодержащих гетероциклов относят к так называемым "привилегированным структурам" [Evans В. et. al. J. Med. Chem. 1988, 31, p. 2235-2246]. Устоявшийся за . последние 15 лет в литературе термин "привилегированные структуры" означает неизменную структурную часть определенного семейства молекул, определяющую их активность к большому количеству разнообразных биомишеней. В последнее время широко используется более точный термин "привилегированные фрагменты" [Mason J. et. al. J. Med. Chem. 1999, 42, p. 3251-3264], к которым относят фрагменты молекул, способные, за счет трехмерных характеристик- своей структуры, связываться с большим числом биомишеней, тогда как другие части данных молекул могут обеспечивать специфическое взаимодействие с определенной биомишенью [Horton D. et. al. Chem. Rev. 2003, 103, p. 893-930].

Следует отметить, что несмотря на огромное количество публикаций, посвященных синтезу, строению . и свойствам различных замещенных азотсодержащих гетероциклических систем. многие сульфонилзамещённые производные не описаны. Вместе с тем, сульфонильный фрагмент также принято относить к "привилегированным фрагментам". Введение данного фрагмента в органическую молекулу может .приводить к возникновению новой или модификации существующей биологической активности. Очевидно, что новые разнообразные сульфонилзамещенные азотсодержащие • гетероциклические системы могут найти применение в широком спектре фармакологических исследований, в частности.

связанных с поиском высокоэффективных ингибиторов каспазы-3 и созданием на их основе принцшшально новых кардиопротекторов, нейропротекгоров, гепатопротекторов для лечения и зашиты от широкого кр)та заболеваний, ключевым звеном которых является повышенная активация апоптоза (апогггоз — программированная гибель клетки с характерными морфологическими и биохимическими признаками).

В связи с этим, данное исследование посвящено разработке путей синтеза широкого круга новых азотсодержащих гетероциклических систем с сульфонильными фрагментами и созданию на их основе новых высокоэффективных ингибиторов каспазы-3.

Работа является частью систематических научных исследований, проведенных в ООО "Предприятие Контакт Сервис" в период 1997-2003 гг и проводимых в ООО "Исследовательский Институт Химического Разнообразия'' в период 2004-2006 гт в рамках программы «Биоскрининг активных веществ для создания готовых ' лекарственных средств и средств зашиты растений на базе ООО "Исследовательский Институт Химического Разнообразия"'», которая включена в Федеральные целевые программы Минпромнауки РФ "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники (2002-2006 годы)" и "Развитие медицинской промышленности в 1998-2000 гг и на период до 2005 года".

Цель работы. Развитие научного направления, связанного с комплексным использованием широкого круга органических реакций для целенаправленного синтеза новых сульфонилзамещенных азотсодержащих гетероциклических систем, открывающего путь к поиску новых физиологически активных веществ и созданию новых лекарственных препаратов. Для достижения данной цели в работе решались следующие задачи:

- разработка стратегии синтеза и изучение возможностей конструирования и функпионализации оригинальных азотсодержащих гетероциклических систем;

- разработка методов получения широкого набора структурных аналогов (комбинаторных библиотек) сульфамидных и сульфонилалкильных производных оригинальных азотсодержащих гетероциклических систем, пригодных для высокопроизводительного скрининга;

- доказательство структуры (идентификация) новых соединений;

- нахождение среди синтезированных соединений новых высокоэффективных ингибиторов капазы-3 непептидного типа и установление закономерностей влияния строения соединений на активность ингибирования каспазы-3 in vitro.

Научная новизна.

Разработана общая методология повышения разнообразия (увеличения химического . пространства) комбинаторных библиотек сульфонилзамещенных азотсодержащих гетероциклов. включающая трансформацию функциональных группировок исходных гетероциклических соединений, трансформацию "введенных" функциональных группировок и превращение исходных гетероциклических систем в другие гетероциклические системы. -

Осуществлен синтез комбинаторных библиотек производных азагетарилсульфамидов, " сульфамоилазагетарилкарбоксамидов,

сульфамоиламиноалкилкарбоксамидов, сульфамоилалкилкарбоксамидов и . других производных.

Разработан синтез новых гетероциклических систем - 9-бром-1,1,б-триоксоциклопента[3,4]пиридо[2.3-е][1,2,4]тиадиазина и пиридо(2,3-/][1.2,5] тиадназепин-1.1,4(5//)-триона. на основе которых были синтезированы соответствующие комбинаторные библиотеки.

Показана возможность использования 5-сульфамоилизатинов. изатин-5-сульфокислоты и 3,3-ДНХЛор-2-оксо-5-сульфа.моил-2,3-ДИП1дро-1Я-индаюв в качестве изатиновой компоненты в реакции Пфитцингера.

Осуществлен синтез неизвестных ранее замещенных 6-сульфамоилхинолин-4-карбоновых кислот. 6-сульфамошгхинолин-3.4-дикарбоновых кислот и 6-сульфа-моилхинолин-2,3,4-трикарбоновых кислот, которые в условиях параллельного жидкофазного синтеза превращены в комбинаторные библиотеки неизвестных ранее замещенных 6-сульфамоилхинолин-4-карбоксамидов.

На основе 6-сульфо- и 6-сульфамоилхинолин-3,4-дикарбоновых кислот впервые получены 1,3-лиоксо-8-сульфо- и 1,3-диоксо-8-сульфамоил-2.3-дигидрофуро[3,4-с]хинолины. которые действием первичных аминов, превращены в

неизвестные ранее 1,3-диоксо-8-сульфо- и 1,3-диоксо-8-сульфамоил-2,3-дигидро-Ш-пирроло[3,4-с]хинолины.

На основе синтезированных соединений и с использованием методов компьютерного моделирования создана сфокусированная библиотека потенциальных ингибиторов цистеиновых протеаз. Биологические испытания соединений из данной библиотеки in vitro позволили выявить ряд неизвестных ранее высокоэффективных ингибиторов каспазы-3. На основании изучения закономерностей влияния природы заместителей в 1,3-дноксо-2,3-дигидро-1//-пирроло[3>4-с]хинолинах на их ингибирующую активность, предложен механизм обратимого взаимодействия меркаптогруппы каспазного фермента с электрофильными карбонильными группами ингибитора. Доказано, что 1гЗ-Диоксо-2,3-днгидро-1Я-пирроло[3.4-с]хинолины являются медленно диссоциирующими (т = 50 мин) обратимыми и неконкурентными ингибиторами каспазы-3.

Практическая ценность.

Создан набор комбинаторных библиотек сульфонилзамещенных азотсодержащих гетероциклов, включающий пиррольные, индольные. изооксазольные, пиразольные, имидазольные, бензоксазольные. бензотиазольные, бензимидазольные, бензо[1,2,5]оксадиазольные. бензо[ 1,2,5]тиадиазольные. пиридиновые, хинолиновые, пиримидиновые, хиназолиновые. хиноксалиновые, бензо[1,4]оксазиновые. бензо[1.4]тиазиновые, бензо[й]азепиновые, бензо[6][1.4] оксазепиновые, бензо[6][1,4]тиазепиновые, Ш-бензо[6][1,4]диазепиновые. бензо[е][1,4]диазепиновые. тиено[2,3-г/] пиримидиновые. тиазоло[3,2-а]

пиримидиновые, [ 1,3,4]тиадиазоло[3,2-сг]пиримшиновые. (1,2.4]триазоло[ 1,5-а] пиримидиновые, бензо[с,^]индольные, хромено[3,4-£/]имидазольные и пирроло[3,4-с] хинолинновые фрагменты.

В ходе исследований синтезировано и идентифицировано (методами ЯМР и жидкостной хроматомасс-спектроскопии) более 20000 соединений, ранее не описанных в литературе. Разработанные методы синтеза этих соединений характеризуются высокими выходами, селективностью и чистотой целевых продуктов. Синтезированные соединения удовлетворяют основным требованиям

современной медицинской органической химии и могут быть использованы для высокопроизводительного биологического скрининга, что открывает новые возможности для нахождения биологически активных соединений и создания новых лекарств.

На основании исследований методом высокопроизводительного скрининга биологической активности синтезированных .= соединений показана высокая эффективность в качестве непептидных ингибиторов каспазы-3 1,3-диоксопирроло[3,4-с]хинолинов, 2-оксо- 1Н-хиноксалин-2-онов, 2,4-диоксо-1#-бензо[£]птеридинов, их 2-тиоксо аналогов и 3-(3-оксо-2-тиоксотиазолидин-5-ил1иен>-1,3-дигидроиндол-2-онов, что открывает возможности создания новых лекарств для лечения заболеваний, связанных с апогггозом. В результате оптимизации структуры 1.3-диоксо-2,3-дигидро-Ш-пирроло[3,4-с]хинолинов предложен набор

высокоэффективных (1С50 <10 нМ) ингибиторов каспазы-3, представляющих собой замещенные 8-сульфамоил-1,3-диоксо-2,3-дигидро-1 #-пирроло[3,4-с]хинолины. Антиапоптическая эффективность этих соединений была подтверждена как на примере нескольких клеточных линий, так и нервных клеток переднего мозга рыб (геЬгайзЬ).

Апробация работы и публикации. По теме диссертации опубликовано 24 статьи в отечественных и иностранных научных журналах, получено 10 патентов РФ и 1 международная заявка. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на 17-ом Международном симпозиуме по медицинской химии (Барселона, Испания, 2002), 20-ой Украинской конференции по органической химии, посвященной 75-летию со дня рождения академика А.В.Богатского (Одесса, Украина, 2004), 9-ой национальной конференции "Биологически активные гетероциклы и концепция открытия новых лекарств" (Раджкот. Индия, 2005), 229-ой национальной конференции отделения медицинской химии американского химического общества (Сан Диего, США, 2005), 20-ом международном конгрессе по гетероциклической химии (Палермо, Италия, 2005) и международной конференции по химии гетероциклических соединений, посвященной 90-летию со дня рождения профессора А.Н. Коста (Москва. Россия, 2005).

Вклад автора. Определение цели исследований, постановка задач и разработка методов их решения, непосредственное участие во всех этапах выполнения исследований. Описание и интерпретация результатов, формулировка основных выводов работы.

Положения, выносимые на защиту.

Методы высокопроизводительного синтеза комбинаторных библиотек и расширение химического пространства сульфонилзамещёкных производных азотсодержащих гетероциклических систем.

Региоселекгивный синтез сульфохлоридов азотсодержащих гетероциклических систем.

Взаимосвязь стр\тяуры и биологической активности 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1#-пирроло[3,4-с]хинолинов.

1,3-Диоксо-2,3-дигидро-1Я-пирроло[3,4-с]хинолины - высокоэффективные ингибиторы капазы-3.

Структура диссертации. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка литературы. Работа изложена на 347 страницах, включает 26 таблиц, 45 рисунков и 204 схемы. Список литературы включает 358 источников.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Разработка методов синтеза комбинаторных библиотек сульфонилзамешенных азотсодержащих гетероциклических соединений.

1-1 Синтез гетероциклических сульфохлоридов.

В настоящем исследовании была разработана и реализована идея создания

широкого набора комбинаторных библиотек азотсодержащих гетероциклов, содержащих сульфамидные 2 и сульфонильные 3 заместители исходя из азагегероциклических сульфохлоридов 1. Для реализации этой схемы было синтезировано 80 разнообразных азагегероциклических сульфохлоридов 1, в том числе 20 новых.

о о и 9

и II II

— в—С1 5—N »'—в— 1«.

II п \ II '

0 о К, о

1 2 3

где: XV = замешенные и незамещенные пирролы. индолы, оксазолы, пиразолы, нмилазол, бензазолы, азины, аннелированные азотсодержащие гетероциклы.

Основной подход к получению сульфохлоридов 1 состоял в синтезе гетероциклического субстрата и его последующем сульфировании или сульфохлорировании. Как правило, для введения сульфогруппы использовалась хлорсульфоновая кислота. Конверсия сульфокислоты в сульфохлорид в большинстве случаев протекала в более жестких условиях, чем сульфирование. В качестве дегидроксихлорирующих агентов использовались хлорсульфоновая кислота, пятихлористый фосфор и хлористый тионил.

Для определения наиболее вероятного направления реакции сульфирования азагетероциклических субстратов широко использовались квантово-химическне расчеты, включающие расчет эффективных зарядов на атомах углерода, а также величин вкладов р-орбиталей атомов углерода в высшую занятую молекулярную орбиталь (ВЗМО) - С2р,.

В связи с гидролитической нестабильностью сульфохлоридов положение сульфогруппы в гетероциклическом фрагменте устанавливалось по результатам исследования строения синтезированных на их основе сульфамидов (таблица 1) с применением современных ЯМР-спекгральных методов.

Разнообразие сульфонилзамещенных комбинаторных библиотек мы обеспечили не только широким спектром исходных реагентов, но и трансформацией функциональных группировок исходных гетероциклических соединений, трансформацией "введенных'" функциональных группировок, превращением исходных гетероциклов в другие гетероциклические системы.

1.2. Синтез сульфамидов.

Для получения набора комбинаторных библиотек азотсодержащих гетероциклических сульфамидов была использована методика параллельного жидкофазного синтеза в органических растворителях, включающая взаимодействие сульфохлоридов 1 с первичными и вторичными аминами различного строения 4 (рис. 1) в присуствии акцептора хлористого водорода. В зависимости от строения аминов 4 в качестве акцептора хлористого водорода использовался либо избыток самого амина, либо карбонаты щелочных металлов, либо пиридин (схема 1). В случае необходимости конечные сульфамиды 2 подвергались очистке с помощью

перекристаллизации, флэш-хроматографии или препаративных хроматографнческих

о "»«А о а

II 4 III / I'

о о

Схема 1

Всего была получена 61 комбинаторная библиотека азотсодержащих гетероциклических су льфамидов, включающих в общей сложности 15466 соединений (таблица 1).

<3 —\ ) "г'"—1 >

Н.\ И.% И,* НуЧ О ^ )-' —

- С» >2) <3> (4) . <5) (<| "» О ' »

/-о гуОггУ<ХУ

н,\ ил н_> н^ч нл

№ (Ю> (II» Ц1) <13-П> (18)

^чх^-о «а -

<14 (») 121) в2> (1И (2*») ВТ)

.^„кг™ :к> :кь .из

о-*

(29) I»-») (М> <И) <36) (ЗТ)

-С— <КУ ОО "Ол «О & -С" ж-

(*«» (45-5» (») (М) »55) (57) (Я-О

<£> О о -о. -сЯ »о^-о-^ -с

(Ы» (в*> ^ (611 1«) г41! ("П- (72)

Рис. 1. Примеры аминов 4, использованных в синтезе комбинаторных библиотек сульфамидов 2

Таблица X. Синтезированные азагетсроциклические сульфамиды 2 :

2(№) Формула Riï Rîï Rj № КБ Кол. соед. в КБ

О) Ri=Me; R2=H; R3=H; RrCOiEt CL4486 377

(2) R; \ R,,R^3= Me, R» = C02Et CL6194 loi ;

(3) 1 /~\ в. <f у—SO.NRjR4 Ri=Me, Et, cyclo-Сз, cvclo-C4; R2= H, Me CL2566 1457

(4) R,=H3C02C(CH2)2; R:= H CL2958 98 •

(5) RI=H3C02CCCH2)3; R;= H CL2959 22

(6) .о -' ^^SO.NRjR, Ri= Me, Et, cyclo-Cî, R2=H, Me СЫ063 675

(7) * Ri=H; R¿=H; CL2964 78

(8) R i=Me,R2=Mc,R3=M e С14643 150

(9) Ri=H,R2=H,R34Pr CL5486 172

(Ю) «.V Н^ /-SO-NR.K, C10662 30

(11) SO.-NRjR, H CL45I9 92

(12) J- Sfl.Mt.it, CL4945b 206

(13) ¡J-- —50гЧ1иЦ CL4945c i 60 1

(14) SO,V«,R, HjC-^WCH, \-о CL2509 745 !

(15) Rt=H CL2506 698 i

(16) N-N R,=Me CL2766 309

(17) CL28I1 459

(18) Ri=Me CL2034 60

(19) R,=Ph, Me CL2033 265

(20) Ri=H CL2968 846

(21) Ri=Alkyl CL4854 697

(22) CL2721 . 59

(23) CL2892 143 .

(24) ТЧ CL0765 395

(25) CL0766 231

(26) R,—F SOjVR^R, r/ R^R-^H CL2092 , 246

(27) Ri,Rj=H; R3=NH. CL4946 ; 10

(28) R,=NH2; R2=Br; R3=H CL4356 : 303

(29) <I> CL2781 ' 453

(30) H,C- W! О—у—SOAR,!», CL2625 133

(31) CL4490 ! 122

(32) _„COO", R3=H, Me, Et C19966 80

(33) CL3I45 j 57 ¡

(34) CL2041 650

(35) h £», 0=\ SOr\R,R, " Ъ CL0963 ' 205

i (36) 1 u /> N—" SO.Ml.R- i i C14894 300

(37) V « N - <f SO^SItR, w R,=Me, Et CL2527 444

(38) Ri=H CL2954 543

(39) J-ij-so,^*, R,=Et CL3292 98

(40) CL6228 140

(41) Чо.киЛ R,=H, Me, Et CL4555 294

(42) SOjNRjft, H CL4561 112

(43) 'Me CL4552 119

(44) SOjMCR, R[=H, Me CL5277 410

(45) i r4° ° V\ /"iSO.NR.R. к \=/ CL4497 39

1 (46) R, R. CL6093 66

(47) SO,NR,R4 Ri-R2=H,Me CL4763 260

! (48) o : CL3293 288

! (49) CL3139 98

i (50) VOL «í o Ri, R2=Me. Et ; CL4837 286

i (51) к.сД-Л ¡ CL4846 28

: (52) CH, Г N lili,Cv'""^ i CL1360 34

(53) CL1279 212

(54) о- о«, "«"-С», CL5451 90

(55) н cm "V-so^R,*, ■ О CL2058 - 153

(56) О, .!> CL4892 67

(57) О НООС^.. ^ „ «^NR.R, ■ Ri = Н, Me i CL0374 i 125 «

(58) C13509 1 223 !

(59) rwy^T™ ^ ' н C12033 307

(60) R о Л N о 1 Т I К,-С1ЬСП2ОСОСН3 C19030 ! 20

(61) i". Ri= ' C19031 j 26 i i

Строение синтезированных сульфамидов 2 подтверждено данными жидкостной хроматомасс-спектрометрии (ЖХ МС), масс-спектрометрии высокого разрешения (МС BP), спектроскопии ЯМР !Н и |3С. В некоторых случаях дополнительно использовалась ИК спектроскопия и рентгеноструктурный анализ. По данным ЖХ МС синтезированные соединения 1 Ли ели сигналы, соответствующие молекулярным ионам н чистоту более 95% (ELSD and UV254 „м детекторы).

U. Синтез сульфамидов трансформацией их функциональных групп.

Для повышения разнообразия функциональные группы азагетероциклических сульфамидов, приведенных в таблице 1, подвергались дальнейшим превращениям. Сульфамиды, содержащие сложноэфирные группы, гидролизом переводились в кислоты 6, которые последовательным взаимодействием с карбонилдиимидазолом (КДИ) в условиях жидкофазного синтеза (схема 2) превращались в имидазолиды 7, а

затем с аминами 4 дали комбинаторные библиотеки азагетероциклических сульфамоилкарбамидов 8.

"у"

-к

«У«, 5(1-7)

1)Ка0К,Н10,£ЮН

1>на

I О

о=р*> II

__Г и/4

-——

он -со,

6(1-7)

I

0=£=0 1

Схема 2

-К

О

7(1-7)

нмци, 4

н

-О

ПК. ^т N

I

о=в=о I

-ч

8(1-7)

С использованием этой схемы были получены 7 разнообразных комбинаторных библиотек амидов 8(1-7), включающих 3923 новых соединений.

Для увеличения разнообразия азагетероциклических . сульфамидов можно использовать трансформации групп N11 в их молекулах путем введения к атому азота структурных фрагментов, содержащих карбоксильные или сложноэфирные группы, с последующим синтезом на их основе амидов описанным выше методом (схема 3). По этой схеме может осуществляться и дополнительная трансформация атома азота сульфамидной группировки.

^из

N

I

О—¿—О \V-MI

а сооя ,к,со,

ю

а = н,снд

I

О—Б—О

9(8-10)

1) кди

2) НТч'К.К.

4

"I

О— 5=0

"К

О 1Ц 8(8-10)

Схема 3

С использованием данной схемы были получены дополнительно 3 комбинаторные библиотеки, содержащие 1180 соединений. Общие структурные формулы для соединений 8(8-10) приведены в таблице 2.

Таблица 2. Синтезированные комбинаторные библиотеки азагетероциклических сульфамоилкарбамидов 8

8 Структура №КБ К-во соед. в КБ 8 (№) Структура № КБ К-во соед. в КБ

1 н,с 9 .„, о К, С1Л487 619 6 су^ о «, СЬ2058 130

2 "Ц- д, СЬ6157 300 7 л И,—N ^^ О "ч С12456 411

3 0-1-О *оА<> СЬ4503а 503 8 н-сЧО СЬ2278 639

4 II—N н\ =о СЬ2560 1890 9 СЬ3442 130

5 о^о ° * я« СЬ3289 70 10 V кг"-«. С1Л771 411

Другим примером расширения разнообразия комбинаторных библиотек азотсодержащих гетероциклических сульфамидов могут служить трансформации метальных групп замещенных 3,5-диметилизооксазол-4-сульфамидов 2(14), конденсацией с (2,2-диметоксиэтил)диметиламином 11 (схема 4), в результате чего были получены новые замещенные 3-мегил-5-(2-агЯ*яноиинил)изооксазол-4-сульфамиды 12. Конденсация протекает региоспецифично только по группе 5-Ме с образованием 5-винильных производных 12, причем при использовании в качестве

исходных соединений монозамещениых сульфамидов 2(14: К2=Н), указанная реакция сопровождается метилированием монозамещенной сульфамидной группы с образованием дизамещенных сульфамидов 14. Переаминированием снамщпюго фрагмента 5-(2-диметиламиновинил)-3-метилизооксазол-4-сульфамидов 12 морфолином 4(64) были получены (схема 4) морфолиновинилзамещенные изооксазол-4-сульфамиды 15. Изооксазол-4-<лльфонилпиперидинкарбоксамиды 18 и 19 были синтезированы (схема 5) на основе этиловых эфиров метилизооксазол-4-сульфонилпиперидинкарбоновых кислот 12(1,2), которые предварительно переводили в свободные кислоты 16,17 кислотным гидролизом.

-К")

2(4)

^С(ОСНА МСН^ 11 -— " К N 12

ДМФА,

100-120"С,

Э 1,65%

Г

оО

15

СН.

I >

н,е

13

Схема 4

ос.н.

-Р сн,

(Н.С)^

12(14)

„ ОН X__К, .о СН,

о'

(Н.С)^'

0!=/" ысди А~ч

2. НМ»,|Ц / 1

4 Р.

.X 16,17

Схема 5

Б*. 18.1»

. На основе диметиламиновинилзамещенных изоксазолосульфамидов 12(1,2) были синтезированы комбинаторные библиотеки (3-метил-5-винилизооксазол-4-сульфоннл)пипсрид1шкарбоксамидов 20 и 21. включающих соответственно 34 и 297 соединений. Процесс включал дезаминирование винильной группы под действием ароматических и гетероциклических альдегидов ■ в водном растворе щелочи, кислотный гидролиз сложноэфирной группы и трансформацию соответствующих кислот 22. 23 методом one pot через стадию образования реакционноспособного имидазольного интермедиата в целевые карбамиды взаимодействием с аминами 4.

20 21

Для увеличения разнообразия комбинаторных библиотек азотсодержащих гетероциклических сульфамидов широко использовалась изложенная выше методология - получение эфиров азагетарилсульфониламинокислот 24, превращение их в соответствующие кислоты 25 - и производство на их основе жидкофазным параллельным способом комбинаторных библиотек амидов 26 (схема 6). Для получения эфиров 24 использовались сульфохлориды 1, а также эфиры аминокислот 27(1-2).

В случаях, когда свободные аминокислоты более доступны, чем их эфиры. азагетарилсульфониламинокислоты 25 получали в одну стадию взаимодействием сульфохлорида 1 со щелочным раствором соответствующей аминокислоты 27(3-15) с последующим подкислением.

>v-f|-a

IIY-COOEI 27(1,»

„ l.NtOH

ff 2-AíOH.Ha

\V—S—V—COOR --

II o

24

I.K1H

X HMtjR,

W—S—Y—COOH

«-¡rn

26

HY-COOH 27 (3-15)

HY-COOH

27:

r„5" ^ Л

Í5 H ^ NH, ¿„ .. ^ S

сил

-Л\ ó

"CH, f

7 8 CH,

•OjH

) Q

NM1 HjN

14 И

Схема 6

1.4. Синтез сульфамидов трансформацией их гетероциклических систем.

Целый рад комбинаторных библиотек сульфамидов азотсодержащих

гетероциклов был синтезирован трансформацией изатинового цикла в различных 5-сульфамоилизатинах.

Коммерческий 3,3-дихлор-2-оксоиндол-5-сульфохлорид 1(10) действием аминов 4 превращали в сульфамиды 2(10), гидролиз последних в кипящей смеси концентрированных соляной и >ксусной кислот приводил к 5-изатинсульфамидам 2(63) (схема 7). Синтезировать сульфамиды 2(63) непосредственно на основе изатина не удается, поскольку его сульфохлорирование или дегидроксихлорирование сульфокислоты приводит к образованию 3,3-дихлорпроизводных изатина.

1(10)

2(10)

Схема 7

2(63)

Синтезированные сульфамидные производные изатина 2(63) являются удобными объектами для структурной трансформации с образованием новых сульфамидов замещенных хинолиновых систем. Изатин-5-сульфамиды 2(63) по реакции Пфитцингера действием кетонов превращались в биоизостерно аналогичные сульфамоилкарбоновые кислоты 28а и 286. Последние действием аминов 4 (через стадию получения промежуточных имидазолилъных интермедиатов) превращались в соответствующие комбинаторные библиотеки сульфамоиламидов

хинолинкарбоновых кислот 29а,б (схема 8).

■»5 - Н. СН^. С(СИД,. |>« 0-2 Я, т РЬ-. ТИ-, МккГи-

Схема 8

Попытка провести встречный синтез сульфамидов 2(32) (таблица 1), полученных на основе 6-хлорсульфонил-2-хинодон-4-карбоксилата путём трансформации изатинов 2(63) [N11,Я,: К(Е1)2 или 4-метилпиперидинил] по реакции Пфитцингера с малоновым эфиром (схема 9) привела к неожиданному результату: продуктами реакции оказались 6-сульфамоилхинолин-4-карбоновые кислоты 30(1,2). Эти же кислоты образуются в качестве основного проду кта реакции при нагревании изатинов 2(63) в водно-спиртовой щелочи и в отсутствие малонового эфира. Нами показано, что в обоих случаях (схема 9) в качестве метиленактивного соединения выступает ацетальдегид, образующийся за счет окиления этанола изатинами 2(63).

На основе кислот 30(1,2) были синтезированы комбинаторные библиотеки 6-

(

аминосульфонилхинолин-4-карбоксамидов.

Схема 9

Для получения циклических сульфамидов нами широко использовались -трансформации с участием 2-амино-5-бром-3-пиридашсульфамидов. Так сульфамид 2(28) в присутствии янтарного ангидрида в кипящем о-ксилоле образует не описанный ранее 9-5ром-1,1,б-триоксоциклопента[3.4]пиридо[2,3-е][1,2,4]тиадиазин 31, который удалось выделить с выходом 59 % (схема 10). Взаимодействие тиадиазина 31 с карбонилдиимидазолом (КДИ) в диоксане при 70 "С приводит к раскрытию лакгамного щиша в соединении 31 с образованием промежуточного имидазольного производного, взаимодействием которого с аминами 4 была получена комбинаторная библиотека неизвестных ранее пропионамидов 32.

о

Схема 10

Другой неописанный гетероцикл - пиридо[2,3-/][1,2.5]тиадиазепин-1Л,4(5#)-трион 33 был полечен внутримолекулярной циклизацией имидазолида [(2-амино-5-

бром1шрид1ш-3-сульфоннл)м<етила.мино]>юлсной кислоты 25(3). Интересно отметить, что взаимодействие имидазолкда кислоты 25(3) с аминами 4 при 40 "С приводит к получению комбинаторной библиотеки ацетамидов 26(3), в то время как при нагревании до 100 °С образуется исключительно циклический продутсг 33. (схема 10).

1.5. Разработка методов синтеза замещенных азотсодержащих гетарнлсульфонилпроанонамидов.

В литературе описаны и достаточно хорошо изучены сульфонилалкановые кислоты и их разнообразные производные, обладающие высоким биологическим потенциалом. Однако, сведения об азагетарилзамещенньгх сульфонилалкановых кислотах и их производных в литературе до наших работ отсутствовали. В рамках данного исследования был разработан способ получения соединений указанного типа, основанный на последовательном проведении восстановления сульфохлоридов 1 действием сульфита натрия в щелочной среде при повышенной температуре, подкислгния образующегося! сульфината уксусной кислотой до соответствующих сульфиковых кислот 34 и присоединения последних к акриловым кислотам или их эфирам 35 (схема II). Таким образом, были получены 38 неизвестных ранее кислот 36. Взаимодействием кислот 36 с аминами 4 было синтезировано 27 новых комбинаторных библиотек азагетаэнлсульфонилалкановых производных, включающих 2395 соединений.

КМ.^Оз^СО, ^СН-С^-СОО^

2. АсОН 35

\v-soxi -»- \v-sOjH -

I 34 «)11,.И. = Н

в) ^-СНз

в) (I, - СНз, - Н

Схема 11

НС1

2. Новые ненеитидные ингибиторы каспазы-3.

2.1. Формирование сфокусированных библиотек методами компьютерного моделирования.

Синтезированные выше комбинаторные библиотеки • азотсодержащих гетероциклических соединений, содержащие сульфамидные, сульфамидные и амидные, сульфамидные и имидные, сульфонипаминоалкиламидные и сульфонилпропионамидные группировки были испытаны in silico с целью формирования сфокусированных библиотек, пригодных к биологическим испытаниям. Методология, при помощи которой отбирались соединения для сфокусированных библиотек и, соответственно, для начального этапа биологических испытаний, основана на построении классификационных моделей КССА (Количественная Связь Структуры и Активности) органических соединений при помощи алгоритма самоорганизующихся карт Кохонена [J. В. Kruskal. Phychometrika, 1964, 29, p. 115-129]. В качестве обучающей выборки была использована база данных, состоящая из 18703 соединений с экспериментально показанной активностью. Каждое соединение отнесено к одной из пяти групп по типу мишень-специфичного действия на следующие фармакологически значимые биомишени: 1) рецепторы, связанные с G-белками; 2) тирозиновые кнназы; 3) ион-канальные рецепторы; 4) протеазные ферменты: 5) фосфодиэстеразы. Все структуры были взяты из коммерчески доступной базы данных Prous Ensemble. Для каждого исследуемого соединения были рассчитаны пять молекулярных дескрипторов: MW (молекулярная масса), logP (логарифм коэффициента распределения вещества в системе 1-октанол/вода), HBD н НВА (число доноров и акцепторов водородной связи), Rot_B • число вращающюсся связен), которые в дальнейшем использовались для моделирования.

После построения общей карты (модели) поочередно выявлялись области локализации на ней каждой из пяти исследуемых мишень-специф1гчных групп. Найденные закономерности размещения мишень-специфичзшх групп использовались для выявления их активности по отношению к той или иной биомишени и для определения степени приоритетности каждого из синтезированных соединений для проведения его биологических испытаний. Методология профилирования состояла из

расчета для каждого из синтезированных соединений гиги дескрипторов, аналогичных использованным для построения модели, и последующего определения положения каждого соединения на карге Кохонена в режиме тестирования модели. На рис. 2 показан пример распределения производных хинолика &7) (зона I), 29 (зона II) и 2(60-61) (зона Ш) на фоне области, характерной для ингибиторов протеаз. Так. например, очевидно, что соединения 2(60-61), отвечающие III, практически

полностью попадают в область, типичную для ингибиторов протез:;.

IIa основании проведенных компьютерных вычислений для биологических испытаний была собрана сфокусированная библиотека, для кагор»:й с большой долей уверенности можно прогнозировать именно прогеазную активность.

0

25

50

■вея 75

мм* К»

■■ 125

<: и >

Зона I

Соединения 8(7)

Зона II

Соединения 29

Зона Ш Соединения 2(60-61)

1Y

.. V ; i

.R3

R4

ч Р О i

VN

/и

Рис. 2. Положение зон распределения соединений 8(7)) -jcsa '), 29 (зона II) и 2(60-61) (зона III) на фоне области, характерной для ингис-тт :ров протеаз.

2.2. Получение нового хемотипа ингибиторов касяазы-З. Отобранные в результате in silico скрининга комбинаторные Ожблиогекп азотсодержащих гетероциклических соединений, были иепктшы in vino на

активность по отношению к цистеиновым протеазам в составе сфокусированной библиотеки, включавшей 15338 гетероциклических соединений. Испытания проводились при помощи автоматизированного комплекса Btckman-Couher Biomek FX Automated Assay Workstation биолаборатории ООО "Исследовательский Институт" Химического Разнообразия".

Испытание in vitro проводили с использованием субстрата каспазы-3, модифицированного флуоресцентной меткой - 7-амино-4-метилкумарином (АМК). Сравнительный анализ активности проводился в присутствии потенциального ингибитора (тестируемое соединение) и без него в соответствии с экспериментальной методикой, описанной в работе [F. Durrieu, et al., Exp. Cell Res.. 1998,240. p. 165-175J.

В результате первичного высокопроизводительного скрининга сфокусированной библиотеки в концентрации 10 мкМ обнаружено 299 соединении, которые ингибировалп каспазу-3 более чем на 50 %. Таким образом, дачная сфокусированная библиотека обладала 1.9 % хитрейтом (относительный показатель активных соединений к общему' числу испытанных соединений), что в ¡00 раз лучше, чем средний хитрент для разнообразных библиотек. Этот факт неопровержимо доказывает правильность примененного нами алгоритма создан»« сфокусированных библиотек. Среди хитов оказалось 4 неизвестных ранее непептидных хемотипа ингибиторов каспазы-3.

Руководствовуясь теоретическими представлениями современной медицинской химии, соображениями оригинальности, патентной чистотой я производственной перспективой, для дальнейшей разработки высокоэффективных каспазных ингибиторов нами был выбран хемотип общей формулы 37 - гшррол о\ 3.4 -с ] х и полн н -1.3-дион. С целью изучения взаимосвязи структура - свойства синтезированных соединений указанного типа и для выявления среди них наиболее активных ингибиторов каспазы-3. был осуществлен синтез нескольких комбинаторных библиотек соединений, отвечающих этой общей формуле. Структурной модификации последовать ьно подвергались заместители в положениях 2, 4, 6 и 8 (сульфамоильный фрагмент) хемотипа 37.

37

Для изучения влияния заместителя в положении 2 в соединениях общей формулы 37 было получено <53 неизвестных ранее 4-метил-8-(морфолино-4-сульфонил)-1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Я-пирроло[3,4-с]хинолинов 38(1-63). Фиксация морфолиносульфонильного радикала в положении 8 объясняется известной фармакофорностыо морфолина и простотой получения полупродуктов. Синтез 38(1-63) осуществлен исходя из 6-(мюрфоли1Ю-4-сульфонил)-3,4-дикарбоновой кислоты 39 или 8-(морфолино-4-сульфонил)фуро[3.4-е]хинолин-1,3-диона 40 и 63 первичных аминов в М-метилпирролидоне в присугсвии КДИ (схема 12). Дикарбоновая кислота 39 получена по реакций Пфитцингера из соединения 2(63) и ацетоуксусного эфира.

Схема 12

Синтезированные соединения 38(1-63) показали достаточно высокую in vitro ингиоирующую каспазу-3 активность. Установлено, что эта активность сильно зависит от природы заместителей в положении 2 имидного фрагмента. Так, активность 2-алкилзамещенных соединений 38 изменяется более чем на три порядка. Наиболее активным является 2-(2-оксоимидазолидин-1-ил)зтильное производное с 1С5о — 20 нМ, а наименее активным - 2-диметиламиноэтильное с 1СУ0 = 5500 нМ. Соединения, имеющие в положении 2 объемные адамантильные заместители имеют более низкую активность (ICjo в пределах 152...196 нМ), чем большинство пространственно менее затрудненных аналогов. Наблюдаемая разница в активности,

вероятно, свидетельствует, что эти заместители располагаются в стерически затрудненной активной зоне каспазы-3. Установлено, что хиральность заместителей в положении 2 содинений 38 не оказывает заметного влияния на их активность. Установлено также, что соединения 38 с различными замещенными фенильными радикалами в положении 2 являются эффективными ингибиторами каспазы-3. Для данных соединений 1С5о изменяется в пределах 9...24 нМ. Ещё более активными ингибиторами в ряду соединений 38 являются 2-гетарил-),3-диоксо-2,3-дигидро-1Я-пирроло[3.4-с]хинолины (1С5()= 3... 18 нМ). Среди 2-гетарилпроизводных наиболее активными являются соединения, содержащие в положении 2 пиразол-4-ильные заместители (1С50 = 3...4 нМ), 1-фенилпиразол-5-ильные заместители (1С5о = 5 нМ) или 4-пиридильный радикал (1С50 = 3 нМ). Полярные функциональные группы, присуствующие в гетероциклических заместителях, могут предоставлять дополнительный нековалентно связывающий участок и позитивно влиять на взаимодействие с активной частью энзима.

Влияние природы заместителей в положении 6 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Д-пирроло[3,4-с]хинолинов было изучено на примере 2-(2-ацетоксиэтил)-4-метил-8н4-морфолиносульф01Шл)-1,3-диоксо-2,3-дигизро-1#-пирроло[3,4-с]хинолинов 41 и 2-пиразол-4-ил-производных 42. Соединения 41 и 42 получены нами по аналогии с соединениями 38 исходя из соответствующих 7-замещенных 3.3-дихлоризатинсульфохлоридов.

42 41 43

Было установлено, что введение в положение 6 1,3-диоксо-2,3-дигидро- '.Н-пирроло[3,4-с]хинолинов атомов хлора, брома или трифторметильной группы, хак правило, приводит к некоторому незначительному снижению активности базовой молекулы.

В качестве объектов исследования влияния природы заместителей в положении 4 для соединений обшей формулы 37 были выбраны 4-замещенные 2-(2-ацетоксиэтил)-13-Диоксо-8-<морфшино-4чульфонил>-2,3-ДНГ11Лро-1Я-пирроло[3,4-с] хинолины 43. Синтез 4-метнл- и 4-изопропюьпроизводных 43(18), 43(1) был осуществлен, как описано выше, на основе 5-морфолиносульфонидизатина 2(63). 4-Феннл- 43(2) и 4-<2-фурлл)- 43(3) производные были получены из натриевой соди 5-изатенсульфокисдоты 44. На первой стадии вместо ацетоуксусного эфира был использован, соответственно, бегооил- и 2-фуроидуксусный эфир (схема 13).

^'■уД/он'

к»-о"

RCOCH.CO.We мо.^;

о*

ру.100»с

ион. Н;0

44

45<«)

43(2) Я-РЬ 48(1-2) 47(1-2)

43(3) 1К-фурнл

Схема 13

4-[2Ч4-Трифтормет [фени.1 )винил]-1,3-диоксо-2.3-дил1дро-1 Я-пирроло [3.4-с].чинолин 43(4) был синтезирован конденсацией соответствующего 4-метил производног о 41 с 4-трифт0рметилбен5альдсп!Д0М в присуствии 2пС1г (схема 14).

гпа,

«3(1 е>

Схема 14

4-Хлор-1,3-диока>2 ,3-дигидро- 1//-пирроло[3,4-с]хинол1Ш 43(6) был синтезирован исходя из изатина 2(63) по схеме 15 и в дальнейшем был использован для получения серии 45-. 4А'-и 4С-зазмезщенных 1,3-диоксо-2.3-дигидро-1//-пирроло[3,4-с]хннолинов. Диииаипроизводное 49 получено конденсацией изатина с малонодмнитрилом. Трансформация соединения 49 в дикисдоту 50 была осуществлена кипячением в смеси концентрированных соляной и уксусной кислот. Последующая циклизация дикислоты 50 приводила к Получению ф\раидиона 51, который, взаимодействуя с этаноламином, давал соответствуют!!! имид 43(5). Последней стадией схемы 15 являлось взаимодействие 43(5) с хлорокисью фосфора, приводящее к целевому продукту - 4-х.шр-13-диоксо-2,3-дигндро-'.//-пирроло[3.4-с] хинолину 43(6).

**6t 43(5)

Схема 15

Взаимодействием хюрида 43(6) с нуклеофильными реагентами, такими как тномочевнна. метил меркап к ацетат. морфолнн. диэтил 2Я-2-амшк О-мепшеукцинат и 3-хлор-4-фгораш1лнн. были синтезированы соответствующие -S- 43(7,8) и 4.V-замешенные 1,3-диоксо-2,3-дипиро-Ш-гшрролю[3,4-с]чинолнны 43(9-11) (схема 16). Окислением сульфида 43(8) u-хлорпербензойной кислотой при С "С был получен сульфинат 43(12), а при 20--0 °С - сульфонат 43(13). И. наконец, го реакции Сузуки [Suzuki. А. Асе. Che/n. Res. 15, р. 178-184'j из 4-хлор- 1.3-диоке>2.5-дишдро-1 Н-пирроло[3,4-с)хинолина 43(6) и 3-хлор-4-фторфек,1.1-. 4-(Л'.Л-

лимегилалишокарбонил)фенгд- или 3-пиридилборных кислот в присуствии

Р<1С12(РРЬз)2 был осуществлен синтез соответствующих 4-арил- и 4-(3-пиридил)- 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Я-пирроло[3,4-с]хинолинов 43(14-16).

Я" ....... о*

О V

Р

.СНОСНА. СЯ.СО,

43(6)

43(8) CHfiOfiH, пьСРВА. CHjCIj.

СЛс

г

XX?:

AiStOH),. РаСЦ<РРМ,. МадСО,.

43(9-11)

43(7)

ьРЮН ' ОАс

CW1NH,

(CHjOCHj),

43(14-16)

43(9-11) NR1R2 в

. ¿rFt1

н

43(14-1«) R» "О^ («t "О

Схема 16

Для относительной оценки влияния природы заместителей на их активность был осуществлен синтез незамещенного в положении 4 1,3-диоксо-2,3-дигидро-Ш-пирроло[3,4-с]хинолина 43(17). Исходным реагентом служил 3,3-днхлор-5-(морфолин-4-сульфонил)-2-оксо-2,3-дигидро-Ш-индол 2(10), из которого в условиях реакции Пфитцингера с диэтиловым эфиром 2-оксоянтарной кислоты была получена 6-(морфолино-4-сульфонил)хинолин-2,3,4-трикарбоновая кислота 52. Трикарбоновая кислота 52 при нагревании превращалась в 8-(морфолино-4-сульфонил)фуро[3,4-с] хинолин-1,3-дион 53 (схема 17). Спектр этого соединения, зарегистрированный в присутствии Б20. соответствовал спектру соответствующей 8-(морфолиносульфонил)хинолин-3,4-дикарбоновой кислоты 54. В условиях ВЕРТ-эксперимента показано, что атомы утлерода, резонирующие при 153.27, 131.72. 129.31 и 126.83 м.д.. связаны с одним атомом водорода, причем сигнал самого слабопольного (153.27) из них отнесен к С-2. Эти данные, наряду с наблюдаемыми изменениями в спектральной картине продукта гидролиза ангидрида 53

(существенный сдвиг в слабые поля сигналов двух ароматических протонов при С-2 и С-5), свидетельствуют о том, что при нагревании трикислоты 52 происходит декарбоксилирование именно 2-, а не 4-карбоксильной группы, как можно было бы

предположить в качестве альтернативного направления реакции.

О/. V

I.SNNaOH

1 X

О.

СО,"

О»-/

43(17)

55а Схема 17

556

При взаимодействии фуро[3.4-с]хинодин-1,3-диона 53 с аминоэтанолом в пиридине при комнатной температуре по данным хроматомасс-спектроскопии наблюдалось образование смеси альтернативных моноамидов 55а, 556 (схема 17) в приблизительном соотношении 1:1, нагревание которой приводило к целевому продукту 43(17).

Синтезированные 4-замещенные 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1 Я-пирроло[3,4-с] хинолины 43(1-18) показали высокую vitro инпюирующую каспазу-3 активность (таблица 3). которая сильно зависит от природы заместителей в положении 4. Наиболее активными соединениями являются производные, содержащие в положении 4 водород 43(17), алкильный 43(1,4, 18), арильный 43(2,14,15) и гетарильный 43(3,16) радикалы, ингибирующая активность которых составляет IC50 = 20...58 нМ. 4-Хлор-1,3-диоксо-2.3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолин 43(6), 4-сульфанил производные 43(7,8) и их окисленные аналоги 43(12,13) являются менее активными ингибиторами с 1С5о в интервале 250...1300 нМ. Наименее активными в этом ряду соединений являются 4-гидроксп- 43(5), 4-алкиламино- 43(9,10) и 4-ариламино-43(11) производные с ICso в интервале 5...28мкМ.

Таблица 3. Строение и in vitro ингибирующая каспазу-3 активность синтезированных 4-замещенных 1,3-диоксо-2,3-дигидро-Ш-пиррояо[3,4-с]хинолинов43.

43(№) R4 ICso, нМ : 43(№) ! 1С*ъ R4 1 нМ

1 (СН;.)2СН 40 10 /ОЛИ, : 'у—со^м, | 5190 —N ( н i

2 о 27 11 ; 27900

3 о- 36 12 8(0)СН2С02СН3 352

4 чк 33 13 S02CH2C02CH3 362

5 он 10900 14

6 С1 294 15 : 33 CI •

7 SC(NH)NH2 255 16 О ; зз

8 sch2co2ch3 1290 17 H 27

9 | <ГЛ, ; ' 15300 18 снз : 23

2.3. 2-(1,3,5-Триметилпиразол-4-ил)-1.3-диоксо-2,3-дигидро-1 Н-пнрроло[3,4-с] хннолины н их биологическая активность.

Проведенное исследование влияния природы заместителей позволило установить, что в ряду 1,3-диоксо-2.3-дигидро-1Я-пирроло[3,4-с]хинолинов общей формулы 37 наиболее перспективными каспазными ингибиторами являются соединения, содержащие в положении 2 арильные или гетарильные заместители. Многие из соединений этого типа имеют 1С5() <10 нМ. В связи с этим, нами осуществлен синтез комбинаторной библиотеки 2Ч1,3,5-триметилпираэол-4-ил)-1,3-диоксо-2.3-дигидро-1Я-пирроло[3.4-с]хлнолинов 56(1-13), содержащих более

широкий набор заместителей в 4, б и 8 положениях (таблица 4). Как видно из таблицы 4, наиболее перспективными (с точки зрения увеличения каспазной активности) заместителями в положениях 6 и 8 соединений общей формулы 56 являются: сульфогруппа, сульфамоильная группа, алкилсульфонильная группа, нитрильная и карбоксильная группы.

Таблица 4. Строение и in vitro ингибирующая каспазу-3 активность 2-(1,3.5-три-метилп1фазол-4-ил)-1,3-диоксо-2,3-дигидро-1//-пирроло[3,4-с]хина1инов 56(1-13).

RS

№ R6 R4 R8 1С.ЧН нМ

56(1) CF, сн3 Н 1400

56(2) О Ь НО сн3 Н 14

56(3) н,с о о, сн3 Н 500

56(4) н сн3 вг 359

56(5) н сн3 N=— 16

56(6) н сн3 . .Я Na O-S-« О 137

56(7) н сн3 /=\. .Я 100

56(8) а сн3 о II H-N-S-* 2 И О 33

56(9) н •о V-v* о 65

56(10) Н ' •О к.» О й

56(11) н СН3 ■ ■ 8 90 нга-в-« о

56(12) а сн3 о Я н ню-я-« II о

56(13) а 1—1 о 7 /\ и ' о м-э-* ^ °

Соединения 56(1,2,4) были получены исходя из соответствующих изатинов

57(1-3) 58(1-3) 59(1-3) 56(1,2,4)

56-59:Я6=СРЗ, К8=Н(1);Иб=СООИ, К8=Н(2); 56:К6=Н, К8=Вг(4); 57,58:Я6=Н. Я8=Вг(3).

Схема 18

Метиловый эфир 56(3) был синтезирован исходя из соответствующей кислоты 56(2) с использованием КДИ для получения промежуточного активного имидазолильного производного. 8-Карбонитрил 56(5) был получен путём замещения брома в бромпроизводном 56(4) действием щелочи в ацетонииангидрнне в присутствии каталитических количеств одновалентной меди (микроволновое облучение в течение 40 мин при 190 °С). 8-Сульфонат натрия 56(6) получен высаливанием насыщенным раствором ЫаС1 сульфокислоты 56(11). которая, в свою очередь, была синтезирована из сульфоната пиридинм 56(7) (схема 19).

60 61 62 56(7)

Схема 19

Производные З-сульфонилпропноновой кислоты 56(9,10) были синтезированы из 3-[1,3-диоксо-4-фенил-2-(1.3,5-триметил-1Я-пиразат-4-1и)-2,3-дигидро-1Я-

пиррало[3,4-с]хинолин-8-сульфоната пиридиния 63 по схеме 20, представленной ниже.

Схема 20

Сульфохлорнд 64 был получен действием хлорокиси фосфора на пиридинивуто соль 63. Далее восстановлением сульфитом натрия и гидролизом соответствующей соли действием уксусной кислоты в воде была синтезирована сульфиновая кислота 65, которая при взаимодействии с метил акрил атом дала метиловый эфир 8-сульфонилпропионовой кислоты 56(9). Попытка гидролнзовать этот эфир в мягких условиях до кислоты 66 не удалась. При действии 1лОН в водном тетрагщрофуране при комнатной температуре одновременно с гидролизом сложноэфирной группы

происходил гидролиз имидной группы. Поэтому 8-сульфонилпропионовая кислота 66 была получена взаимодействием сульфиновой кислоты 65 с акриловой кислотой в воде при комнатной температуре. Действием хлористого тионила она была превращена в хлорангидрид 67, который стандартным образом взаимодействует с различными аминами, например с морфолином.

Соединения 56(8) и 56(13) были получены по схеме аналогичной схеме 12.

2.4. Связь между биологической активностью 1,3-Диоксо-2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хиналинов н электронным эффектом заместителей, находящихся в положении 8 хинолннового кольца.

Установлено, что существует прямая зависимость между электронным эффектом заместителя находящегося в 8 положении хинолннового кольца 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1//-пирроло[3,4-с]хинолинов и изучаемой биологической активностью данного типа соединений. Очевидно, что активность строго зависит от электроно-донорной способности заместителя в положении 8. Так, например, в ряду 2-незамещенных 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1#-пирроло[3,4-с]хинолинов 68(1-3) и 38(1) соединение 68(1) с К«=Н имеет 1С50 > 100 мкМ; соединения 68(2) с Ка=Р и 68(3) с Яг=Вг имеют 1С5о = 62.8 мкМ и 1С50 = 37.1 мкМ соответственно. 8-(Морфолино-4-сульфонил) 38(1) имеет 1С;о — 0.075 мкМ. В приведённом ряду соединений активность меняется более чем на три порядка в зависимости от природы заместителя К8. Аналогичные зависимости активности наблюдаются и для других серий 8-замешенных 1,3-диоксо-2.3-днгидро-Ш-пирроло[3,4-с]хинолинов. как представлено на рис. 3.

8'

щ 68(1), 68(2), 68(3), 38(1)

п 68(5), 68(6), 38(2)

• 68(7), 68(8), 68(9), 38(17)

о 68(11), 68(12), 68(13), 38(4)

0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 06 СТ.

Рис. 3. Связь между ингибирующей активностью (р1С50) и константами Гаммета ор заместителей в сериях 1,3-диоксо-2.3-дигидро-1Н-

пирроло[3,4-с] хинолинов

Полученные данные свидетельствуют о сильном влиянии элекгрофильности имидных карбонилов 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1//-пирроло[3,4-с]хинолинов на их активность. На основании этого можно предположить, что механизм ингибирования каспазы-3 включает присоединение цистеинового остатка фермента к одному из двух карбонилов (схема 21).

ЛЕВ

Схема 21

Ингибирование каспазы-3 представителями 1,3-диоксо-2.3-дигидро-1#-пирроло[3.4-с]хинолинов происход1гг обратимо. Это установлено на примере соединения 69 в экспериментах с разведениями. Из данных, представленных на рис. 4, видно, что если активность каспазы-3 в присутствии контрольной концентрации ингибитора не изменялась со временем (прямая горизонтальная линия), то после разбавления от 10-кратной до контрольной концентрации ингибиторная активность снижалась со временем до уровня контроля. Время полудиссоциации соединения 69, вычисленное в соответсвии с приближениями, описывающими кинетику диссоциации первого порядка, составляет примерно 50 мин.

Исследования ингибирования соединением 69, проведённые - при различных концентрациях субстрата (рис. 5). не выявили различий в концентрационных кривых ингибирования, что характерно для неконкурентного типа ингибирования. Из рисунка 5 видно, что для соединения 69 Ю50 составляет 23+6 нМ и практически не зависит от концентрации каспазного субстрата. Данное предположение подтверждается неизменным значением константы Михаэлнса (К„=6±2 мкМ) при различных концентрациях ингибитора (соединение 69), в то время как Ушах (максимальная скорость ферментативной реакции, ОФП/мин, ОФП - относительный флуоресцентный показатель) уменьшалась с увеличением концентрации ингибитора (рис.6), что также характерно для неконкурентного ингибирования.

120-|— 100

с.

I во

лз ш

§.60-

^40 X

з: 20

Л

[Су5|

• 2 ИКМ : л- 6 мкМ ;

^ 20 мкМ, э 60 мкМ'

10'' ^С 10"

10'

.0 67-0.06-

^ 005-х

^ 0.04-О 0 03; 5: о.ог, 0010.00 — -0.2

/

• 12 5 нМ о 25 нМ »50 нМ о 100 нМ г ' ■ контроль

У «ид. 69

.У

у

-0 1 0 0.1

0.2

Рис. 5. Концентрационные кривые ингибирования каспазы-3,

полученные в присутствии разных концентраций субстрата.

Рис. 6. Прямые Лайнуивера-Бэрка

Таким образом, наши эксперименты показали, что 1.3-диоксо-2,3-дигидро-Ш-пирроло[3,4-<?]хинолины являются медленно диссоциирующими (т = 50 мин) обратимыми, неконкурентными, высокоэффективными ингибиторами каспазы-3.

Антиапоптическая активность соединения 69 была определена на нескольких клеточных линиях и на рыбах ;ейго/?.г/1. Апоптоз индуцировался стауроспорином в клеточных линиях или ретиноевой кислотой в рыбах. Соединение 69 эффективно

предотвращало индуцированные етауроспорином измененния клеточной морфологии, а также индуцированную стауроспорином гибель клеток в нескольких клеточных линиях. Вещество также эффективно блокировало индуцированный ретиноевой кислотой апоптоз нервных клеток рыб, который проявлялся в виде черных точек в переднем мозге.

В клеточных тест-системах и тест-системах на рыбах, в отличие от тест-систем с использованием _ чистых белков, ингибитор начинал действовать в ' большей концентрации. Подобная разница может быть обусловлена множеством факторов: недостаточной проницаемостью клеточной мембраны, внутриклеточным метаболизмом, взаимодействием с другими белками и т.д.

В заключение следует отметить, что в процессе исследования связи структура -каспазная активность 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1#-пирроло[3,4-с]хинолинов нами было получено около 500 соединений и найдена серия высокоэффективных каспазных ингибиторов, имеющих ГС50 менее 10 нМ.

Основные результаты работы и выводы.

1. Разработаны методы мультистадийного синтеза новых азагетарилсульфохлоридов, включающих пиррольные, индольные, изооксазольные, пиразодьные. имидазольные, бензоксазольные, бензотиазольные, бензнмидазольные, бензо[1,2,5]оксадиазольные, бензо[1,2,5]тиадиазольные, пиридиновые, хинолиновые, пиримидиновые, хиназолиновые, хиноксалиновые, бензо[1,4]оксазиновые, бензо[1,4] тиазиновые, бензо[й]азепиновые, бензо[6][1,4]оксазепиновые, бензо[Ь][1,4] тиазепиновые, 1#-бензо[Ь][1,4]диазепиновые, бензо[е][1,4] диазепиновые, тиено[2.3-¿/¡пиримидиновые, тиазоло[3,2-а]пиримидиновые, [1,3,4]тиадиазоло[3,2-о] пиримидиновые. [1,2.4]триазоло[1,5-а] пиримидиновые, бензо[с\с(]индольные, хромено[3,4-(/]имидазольные и пирроло[3,4-с]хинолинновые фрагменты.

2. Взаимодействием полученных азагетарилсульфохлоридов с различными первичными и вторичными аминами циклического и ациклического строения в условиях жидкофазного высокопроизводительного параллельного синтеза получена 61 новая комбинаторная библиотека неизвестных ранее сульфамоильных производных.

3. Показано, что азагетарилсульфохлориды, содержащие алкоксикарбонильные группировки, могут рассматриваться как соединения с двумя потенциальными центрами структурного разнообразия. Превращением данных сульфохлоридов в соответствующие сульфамиды с последующим гидролизом алкоксикарбонильной группировки и проведением Ы-ацилирования в условиях жидкофазного комбинаторного синтеза получено 7 библиотек неизвестных ранее замещенных сульфамоилазагетарилкарбоксамидов.

4. Разработан метод синтеза комбинаторных библиотек неизвестных ранее замещенных 5-винил-4-сульфамоил-3-метилизооксазолов основанный . на взаимодействии 4-сульфамоил-3,5-диметилизооксазола с ароматическими и гетероароматическими альдегидами и с (2,3-диметоксиэтил)диметиламином .

5. При , взаимодействии >)-монозамещенных 4-сульфамоил-3,5-диметилизооксазолов с (2.3-диметоксиэтил)диметиламином реакция сопровождается метилированием 4-сульфамоильной группы. Показана возможность переаминирования диметиламиновинильного фрагмента в 5-(2-диметиламиновинил) замещенных изоксазолах.

6. Разработан подход к синтезу ранее неизвестных азагетарилсульфониламино-алкилкарбоксамидов основанный' на превращении азагетарилсульфохлоридов в соответствующие сульфониламиноалкилкарбоновые кислоты и аминировании последних аминами в условиях жидкофазного параллельного синтеза. Таким образом было получено 76 комбинаторных библиотек замещенных азагетарил-сульфониламиноалкилкарбоксамидов.

7. Осущестатен синтез новой гетероциклической системы 1.1,6-триоксоциклопента[3,4]пирндо[2,3-е][1,2,4]тиадиазина, на основе которой синтезирована комбинаторная библиотека неизвестных ранее 3-(7-бром-1.1-диоксо-1,4-дигидропиридо[2,3-е][1.2,4]тиадиазин-3-ил)пропиоамидов.

8. Разработан метод синтеза неизвестных ранее

азагетарилсульфонилпропионовых кислот из азагетарилсульфиновых и акриловых кислот или их эфиров. На основе азагетарилсульфонилпропионовых кислот в условиях параллельного жидкофазного синтеза получено 27 новых комбинаторных библиотек соответствующ1гх сульфонилпропионамидов.

9. Показано, что температура является фактором, определяющим реакционную способность имидазолида [(2-амино-5-бромпнрндин-3-сульфонил)метиламино] уксусной кислоты при взаимодействии данного соединения с различными аминами: в зависимости от температуры реакции протекает либо образование не описанных ранее структурных аналогов — ацетамидов, либо циклизация имидазолида в неизвестный ранее пиридо[2,3-/][ 1,2,5]тиадиазепин-1,1,4(5/0-трион.

10. Осуществлен синтез неизвестных ранее замещенных- 6-сульфамоилхинолин-4-карбоновых кислот, 6-сульфамоилхинолин-3,4-дикарбоновых кислот и 6-сульфамоилхинолин-2,3,4-трикарбоновых кислот из 5-сульфамоилизатинов и метиленактивных карбонильных соединений по реакции Пфитцингера. Хинолинкарбоновые кислоты в условиях параллельного жидкофазного синтеза превращены в комбинаторные библиотеки неизвестных ранее замещенных 6-сульфамоилхинолин-4-карбоксамидов.

11. На основе б-сульфо- и 6-сульфамоилхинолин-3,4-дикарбоновых кислот впервые получены 1,3-диоксо-8-сульфо- и 1.3-диоксо-8-сульфамоил-2,3-днгидрофуро[3,4-с]хинолины, которые действием первичных аминов превращены в неописанные ранее 1,3-диоксо-8-сульфо- и 1.3-диоксо-8-сульфамоил-2,3-дигидро-1Я-пирроло[3,4-с]хинолины.

12. Разработаны методы синтеза и получены комбинаторные библиотеки неизвестных ранее замещенных в положениях 2, 4, 6 и 8 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Я-пирроло[3,4-с]хинолинов, в том числе, содержащие в положении 2 водород, алкил, замещенный алкил. арил, гетарил, остаток аминокислоты и др.. в положении 4 водород, алкил, замещенные алкил, винил, арил. гетарил, гидрокил. хлор, замещенную аминогруппу', остаток аминокислот, замещенные сульфанильную, сульфинильную и сульфонильную группы, в положении 6 водород, Р, Вг. СРз и в положении 8 водород, И, Вг, СМ, БОзН. замещенные сульфамоильные и сульфанильные группировки.

13. Методом высокопроизводительного биологического скрининга синтезированных соединений 1,3-диоксопирроло[3,4-с]хинолинового ряда показана их высокая эффективность в качестве ингибиторов каспазы-3. В результате

оптимизации структуры 8-сульфамоил-1,3-диоксо-2,3-дигидро-1#-пирроло[3,4-с] хинолинов предложен ряд высокоэффективных (1С50< 10 нМ) ингибиторов каспазы-3. ' ... 14. Установлены закономерности влияния природы заместителей в 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1#-пирроло[3,4-с]хинолинах на их ингибируюшую активность. На основании этих данных предложен механизм обратимого взаимодействия меркаптогруппы каспазного энзима с элекгрофильными карбонилами ингибитора. Также доказано, что 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Я-пирроло[3.4-с]хинолины являются медленно диссоциирующими (т а 50 мин) обратимыми и неконкурентными ингибиторами каспазы-3.

Список публикаций по теме диссертации.

1. Патент РФ 2229475. Заявлено 03.06.2003 (номер заявки 2003 106 182/04). Опубликовано 27.05.2004. / Иващенко A.B., Кобак В.В., Кравченко Д.В. и др. // 6-Сульфамоилхлнолин-4-карбоновые кислоты, их производные и комбинаторная

•библиотека.

2. Патент РФ 2260002. Заявлено 08.08.2003 (номер заявки 2003 124 470/04). ■ Опубликовано 10.09.2005. / Иващенко A.B., Кобак В.В., Кравченко Д.В. и др. //

Замещенные-6-сульфо-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-4-карбоновые кислоты и их производные (варианты) и фокусированная библиотека.

3. Патент РФ 2259999. Заявлено 26.08.2003 (номер заявки 2003 125938/04). Опубликовано 10.09.2005. / Иващенко A.B., Хват A.B., Кравченко Д.В. и др. // 1-Сульфонил-1-3-дигидроиндол-2-оны, фармацевтические композиции (варианты), способы их получения и применения.

4. Патент РФ 2003125936. Заявлено 26.08.2003 (номер заявки 2003 125936/04). Опубликовано 20.03.2005. / Иващенко A3., Кравченко Д.В., Ткаченко С.Е. и др. // Фармацевтические композиции, способ их получения н применения.

5. Патент РФ 2257385. Заявлено 26.08.2003 (номер заявки 2003 125937/04). Опубликовано 27.07.2005. / Иващенко A.B., Кобак В.В., Кравченко Д.В. и др. // 1,31 Диоксо-2,3-дигндро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолины (варианты), фармацевтические

композиции (варианты), способы их получения (варианты) и способы лечения (варианты).

6. Патент РФ 2251546. Заявлено 29.08.2003 (номер заявки 2003 126299/04). Опубликовано 10.05.2005. / Иващенко А.В., Кобак В.В., Кравченко Д.В. и др. // Замещенные 3-оксо-1,2,3,4-тетрагидрохиноксалины. фармацевтические композиции (варианты), способы их получения и применения.

7. Патент РФ 2263667. Заявлено 27.05.2004 (номер заявки 2004 115855/04). Опубликовано 10.11.2005. / Дорогое М.В., Соловьев М.Ю., Кравченко Д.В. и др. У/ Гетероциклические соединения, включающие 2-аминопиридин-З-сульфоновый фрагмент, способы их получения (варианты), фокусированная библиотека и фармацевтическая композиция.

8. Патент РФ 2261246. Заявлено 15.04.2004 (номер заявки 2004 111522/04). Опубликовано 27.09.2005. / Дорогое М.В., Филимонов С.И., Кравченко Д.В. и др. '/ 7-Сульфонилбензо[В][1,4]диазепины (варианты), способы их получения (варианты), фокусированная библиотека и фармацевтическая композиция.

9. Патент РФ 2263666. Заявлено 08.04.2004 (номер заявки 2004 110614/04). Опубликовано 10.11.2005. / Дорогов М.В., Филимонов С.И., Кравченко Д.В. и др. 7 Гетероциклилсульфиновые кислоты и их производные, фокусированная библиотека и фармацевтическая композиция.

10. Патент РФ 2259364. Заявлено 01.04.2004 (номер заявки 2004 109819/04). Опубликовано 27.08.2005. / Иващенко А.В., Ткаченко С.Е., Кравченко Д.В. и др. / Азагетероциклы, включающие фрагмент пиперидин-2-ила, фокусированные библиотеки и фармацевтические композиции.

11. Международная заявка W02004078731 А1-2004-09-16. / Ivachtchenko A.V., Kobak V.V., Kravchenko D.V. et. al. li Quinoline-carboxylic acids and the derivatives there of, a focused library-

12. Kravchenko D.V., Kysil V.V., llvin A.P. et. al. l,3-Dioxo-4-methyl-2,3-dihydro-lH-pyrroIo[3,4-c]quinolines as potent caspase-3 inhibitors // Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters. - 2005.-V.15,№ 7. - P.1841-1845.

13. Kravchenko D.V., Kysil V.V., Tkachenko S.E. et al. Synthesis and caspase-3 inhibitory activity of 8-sulfonyl-1.3-dioxo-2.3-dihydro-lH-pyrrolo[3,4-c]quinoIines / Farmaco.-2005.-V.60. № 10. -P.804-809.

" ' 14. Kravchenko D.V., Kuzovkova Y.A.. Kysil V.V. et al. Pyrrolo[3.4-c]quinoline-1,3-diones as potent caspase-3 inhibitors: synthesis and SAR of 8-sulfamoyl-l,3-dioxo-2,3-dihydro-1 H-pyrroIo[3,4-c] quinolines // Lett. Drug Des. Disc.-2006.-V3, № 1. -P.61-70.

15. Kravchenko D.V., Kysil V.V-, Tkachenko S.E. et al. Pyrrolo[3,4-c]quinoline-1,3-diones as potent caspase-3 inhibitors. Synthesis and SAR of 2-substituted 4-methyl-8-(morpholine-4-suIfonyl)-pyrrolo[3,4-c]quinoline-l,3-diones // E. J. Med. Chem. — 2005. -V.40, № 12. - P. 1377-1383.

16. Kravchenko D.V., Kuzovkova Y.A., Kysil V.M. et. al. Synthesis and structure-activity relationship of 4-substituted 2-(2-acetyloxyethyl)-8-(morpholine-4-suIfonyl)-pyrrolo[3,4-c]quinoline-l,3-diones as potent caspase-3 inhibitors //' J. Med. Chem. - 2005. -V.48, №11. — P.3680-3683.

17. Kravchenko D.V., Kysil V.V., Ilyin A.P. et. al. Synthesis and chemical transformations of 6-(morpholine-4-sulfonyl)-quinoline-2.3.4-tricarboxylic acid // Synthetic Comm. - 2006. - V.36. № 7. - P. 911-917.

18. Kravchenko D.V., Kysil V.V., Tkachenko S.E. et. al. New variant of the Pfitzinger reaction. Synthesis and chemical transformations of substituted 2-aminomethylquinoIine-3,4-dicarboxylic acids // Heterocyclic Commun. - 2006. -V.12, № 1. -P. 15-19.

19. Ivachtchenko A.V., Kobak V.V., Kravchenko D.V. et. al. Parallel liquid-phase synthesis of N-substituted 6-aminosulfonyl-2-oxo-l,2-dihydroquinoline-4-carboxamide and 6-aminosulfonylquinoline-4-carboxamide derivatives // J.Comb.Chem. — 2005,- V.7, № 2. — P. 227-235.

20. Хахина М.Ю., Корсаков M.K., Кравченко Д.В. и др. Синтез и свойства оригинальных сульфамидов, содержащих фрагмент 1.3-диметил-1Н-хиназолин-2,4-днона. // Изв. Вузов. Химия и хим. технология. - 2003. - Т.46. № 8. - С. 12-18.

21. Тюнева И.В., Филимонов С.И., Кравченко Д.В. и др. Синтез, строение и свойства ряда тиофенсодержащих сульфамидокислот // Известия вузов. Химия и химическая технология. - 2004,- Т. 47. № 1. - С. 141-145.

22. Shkavrov S.V., Popov S.I., Kravchenko D.V. et al. A convenient synthesis of 1-amino-7-(piperidin-4-yl)isoquinoline // Synthetic Comm. - 2005.-V.35, № 5. - P. 725-730.

23. Тюнева И.В.. Филимонов С.И., Кравченко Д.В. и яр. Синтез и свойства амидов 2-[4-метил-(2-тиенилсульфонил)амино]уксусной кислоты //' Известия вузов. Химия и химическая технология. - 2004. — Т. 47, № 2. - С. 119-122.

24. Filimonov S.I., Korsakov М.К., Kravchenko D.V. et al. Convenient synthesis of novel 5-substituted 3-methylisoxazole-4-sulfonamides // J. Heterocycl. Chem.- 2006.-V.43,№3.- P. 663-671. -

25. Скоренко A.B., Дорогое M.B., Кравченко Д.В. и др. Синтез производных 1-метил-1Н-пиррола, содержащих карбонильный и сульфамидный фрагменты.// Известия вузов. Химия и химическая технология. - 2004. - Т. 47, № 8. - С. 96-100.

26. Kravchenko D.V., Dorogov M.V., Ivachtchenko A.V. et. al. A convenient synthesis of novel 3-(heterocyclylsulfonyl)propanoic acids and their amide derivatives // Synthesis. - 2004. - № 18. - P. 2999-3004.

27. Скоренко A.B.. Кобылинский Д.Б., Кравченко Д.В. и др. Синтез и свойства 4-сульфамидных производных этилового эфира 2,5-диметил-1Н-пиррюл-3-карбоновой кислоты // Известия вузов. Химия и химическая технология. - 2005. — Т. 48. № 6. - С. 93-96.

28. Филимонов С.И., Кравченко Д.В., Хахина М.Ю. и др. Синтез замещенных 2,4-диоксо-2,3,4,5-тетрапщро-1Н-бензо[6]диазепин-7-сульфамидов // Известия вузов. Химия и химическая технология. - 2005. - Т. 48. № 4. - С. 142-147.

29. Ivachtchenko A.V., Kravchenko D.V., Zheludeva V.I. et al. Synthesis of pinacol esters of l-alkyl-lH-pyrazol-5-vI- and l-alkyl-lH-pyrazol-4-yl borociic acids // J. Heterocycl. Chem.- 2004,- V.41. №6. - p. 931 -939.

30. Дорогое M.B., Соловьев М.Ю., Кравченко Д.В. и др. Получение новых конденсированных гетероциклов и комбинаторных библиотек на основе 2-амино-5-бромпиридин-3-сульфохлорида // Известия вузов. Химия и химическая технология. -

2005.-Т. 48. Л« 4. - С. 112-118.

31. Parchinsky V.Z.. Koleda V.V., Kravchenko D.V. et al. Practical outcome of azaphthaiimide reduction with Zn/AcOH at various temperatures // Lett. Org. Chem. -

2006.-№3,-P. 379-383.

32. Филимонов С.И., Корсаков М.К., Кравченко Д.В. и др. Синтез замешенных 4-сульфонилизоксазолов И Известия вузов. Химия и химическая технология. - 2005. -Т. 48. №5. -С. 131-137.

33. Кравченко Д.В_ Балакин К.В., Иваненков Я А. и др. Дизайн и синтез новых высокоэффективных непептидных ингибиторов каспазы-3 // Химико-фармацевтический журнал. - 2006. - Т. 40, № 3. - С. 36-38.

34. Okun I.M., Maliarchouk S., Kravchenko D.V. et al. Screening for caspase-3 inhibitors: 1. New class of potent small molecule inhibitors of caspase-3. // J. Biomol. Screen.-2006. - V. 11, №3. - P. 277-285.

35. Кравченко Д.В., Ивановский СЛ., Корсаков М.К. и др. Синтез замешенных 4-оксо-7-сульфамоил-2.3,4,5-тетрагидробензо[6][1,4]тиазепинов // Известия вузов. Химия и химическая технология. - 2005. - Т. 48. № 5. - С. 123-131.

36. Ivachtchenko A.V., Savchuk N.P., Kravchenko D.V. et. al. 3-(l,3-Dioxo-2,3-dihydro-lH-pyrroIo[3.4—c]quinoline-8-sulfonyl)-propionic acids and their derivatives// 9-th National Conference on "Bioactive Heterocycles and Drug Discovery Paradigm" - Rajkot. Gujarat (India). - 2005. Abstracts of Scientific Papers. - P. 106.

37. Ivachtchenko A.V., Savchuk N.P, Kravchenko D.V. et. al. Synthesis of 8-sulfamoy[-4-chloro-2,3-dihydro-1 H-pvrrolo[3,4-c]quinoIine-1,3-diones and their derivatives /7 9-th National Conference on "Bioactive Heterocycles and Drug Discovery Paradigm" - Rajkot. Gujarat (India). - 2005. Abstracts of Scientific Papers. - P. 161.

38. Ivachtchenko A.V., Kysil V.M., Kravchenko D.V. et. al. 1,3-Dioxo-2,3-: dihydro-lH-pyrrolo[3.4— c]quinoline combinatorial libraries // 9-th National Conference on

"Bioactive Heterocycles and Drug Discovery Paradigm"-- Rajkot. Gujarat (India). - 2005. 'Abstracts of Scientific Papers. - P. 184.

39. Balakin K.V., Dorogov M.V., Kravchenko D.V. et. al. Design of lead-like library of potential GPCR-ligands // Drags Fut.-2002.27 (Suppl. A): 17-th Int. Symp. on Medicinal Chem. - Barcelona (Spain). - Sept. 1-5, 2002., V.27. № 555 - P. 526.

40. Ivachtchenko A.V.. Ih in A.V.. Kravchenko D.V. et. al. A new insight into the Pfitzinger reaction. A facile synthesis of 6-sulfamoy!quinoline-4-carboxylic Acids : Тез.

докл. XX Украинская конференция по органической химии, посвященная 75-летию со дня рождения академика А.В.Богатского - Одесса, 2004-- Ч. I. С. 175.

41. Ivachtchenko A.V., Kysil V.M., Kravchenko D.V. et. al. Combinatorial libraries of substituted l,3-dioxo-l,3-dihydro:lH-pyrrolo[3,4-c]qumoIine-8-sulfonic acid and their amides : Тез. докл. XX Украинская конференция по органической химии, посвященная 75-летию со дня рождения академика А-В.Богатского -Одесса. 2004. -Ч.1,С. 176.

42. Ivachtchenko A.V., Kysil V.M., Kravchenko D.V. et. al. Parallel liquid-phase synthesis of N-substituted 6-aminosulfonyl-2-oxo-l,2-dihydroquinollne-4-carboxamides: Тез. докл. XX Украинская конференция по органической химии, посвященная 75-летию со дня рождения академика А.В.Богатского - Одесса, 2004. - Ч. 1. С - 179.

43. Ivachtchenko A.V.. Kysil V.M., Kravchenko D.V. et. al. Synthesis. of heterocycles with 2-aminomethylquinoline moiety: Тез. докл. XX Украинская конференция по органической химии, посвященная 75-летию со дня рождения академика А.В.Богатского-Одесса, 2004. - 4.1, С.-183.

44. Kravchenko D.V., Kuzovkova Y.A., Kyzil V.V. et. al. Synthesis and selective decarboxylation of 6-(morphoiine-4-sulfony\)-quinoline-2,3,4-tricarboxylic acid // 20-th International Congress of Heterocyclic Chemistry - Palermo (Italy). - 2005. Book of abstracts. - P. 316.

45. Kravchenko D.V., Kuzovkova Y.A., Kyzil V.V. et. al. Derivatives of 2-(2-acetyloxyethyl)-4-mercapto-8-(morpholine-4-sulfonyl)-p\TTolo[3,4-c]quinoline-1.3-diones

as potent caspase-3 inhibitors // 20-th International Congress of Heterocyclic Chemistry -Palermo (Italy). - 2005. Book of abstracts. - P. 323.

46. Kravchenko D.V., Kyzil V.V., Tkachenko S.E. et. al. Synthesis and SAR of 2-substituted 4-ше1Ьу1-8-(шофЬо1!пе-4-зи1Гопу1)-ругго1о[3,4-с]ци]поПпе-1.3-01опе5 as potent caspase-3 inhibitors // 20-th International Congress of Heterocyclic Chemistry -Palermo (Italy). - 2005. Book of abstracts. - P. 325.

47. Kravchenko D.V., Kuzovkova Y.A., Kyzil V.V. et. al. Synthesis of substituted 2-(2-hvdroxyethyl)-1,3-dioxo-2,3-dihydro-1 //-pyrrolo[3,4-c]quinoline-8-sulfonic acid amides as potent caspase-3 inhibitors U 20-th International Congress of Heterocyclic Chemistry -Palermo (Italy). - 2005. Book of abstracts. - P. 327.

: 48. Кравченко Д.В. Новые ингибиторы каспазы-3. Тез. докл. Международная конференция по химии гетероциклических соединений, посвященная 90-летию со дня рождения профессора А.Н. Коста,-Москва. 2005. - С.53.

49. Kravchenko D.V., Kvsil V.V.. Ilyin Л.Р. et. al. Pvrrolo[3.4-c|quinolme-l,3-diones as a novel chemotype of potent nonpeptide caspase-3 inhibitors. // 229th ACS National Meeting. Division of Medicinal Chemistry, San Diego. CA, march 13-17, 2005, abstract № 288.

50. Kravchenko D.V., Kuzovkova Y.A., Kysil V.V. et. al. 4-Substituted 2-[2-acethyloxyethyI]-8-[morpholine-4-sulfonyl]-p%Trolo[3,4-c]quinoline-l,3-diones as potent caspase-3 inhibitors. // 229th ACS National Meeting. Division of Medicinal Chemistry, San Diego, CA, march 13-17,2005, abstract№ 404.

51. Kravchenko D.V., Kuzovkova YA. Kysil V.V. et. al. Facile synthesis of 2-substituted 4-[morpholin-4-irnn-4-methyl]-1.3-dioxo-2,3-dihydro-lH-pyrrolo[3,4-c] quinolin-8-sulfonates as potent caspase-3 inhibitors. // 229th ACS National Meeting, Division of Medicinal Chemistry, San Diego, CA, march 13-17. 2005, abstract № 405.

Кравченко Дмитрий Владимирович (Россия) Синтез, превращения и биологическая активность сульфоиилзамещенных азотсодержащих гетероциклических систем.

Разработаны методы получения широкого набора структурных аналогов (комбинаторных библиотек) сульфамидных и сульфалкановых прозводных оригинальных азотсодержащих гетероциклических систем. Осуществлен синтез таких библиотек в жидкой фазе, общим числом более 20000 соединений, перспективных для поиска новых разнообразных биологически активных веществ. На основании исследований методом высокопроизводительного скрининга биологической активности синтезированных соединений показана высокая эффективность в качестве ингибиторов каспазы-3. отвечающей за апоптоз, 8-аминосульфамоил-1,3-диоксо-2.3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-с]хинолинов. Показано . что они являются новыми высокоэффективными (1С5о<Ю нМ). медленно диссоциирующими, обратимыми, неконкурентными ингибиторами.

Dmitry V. Kravchenko (Russia) Synthesis, chemical transformations, and biological activity of various sulfonylated nitrogen heterocycles.

For a number of structurally novel N-heterocyclic sulfone and sulfamide scaffolds, synthetic methodologies have been developed to enable production of combinatorial compound libraries. Such libraries (totaling over 20,000 compounds) have been produced using liquid-phase techniques to provide candidates for identification of biologically active entities. High-throughput screening of the compounds produced and subsequent kinetic studies allowed to identify 8-aminosulfamoyI-l,3-dioxo-2,3-dihydro-lH-pyrrolo[3,4-c] quinolines as potent (IC50 < 10 nM), slow-dissociating, reversible, and non-competitive inhibitors of caspase-3 - an enzyme responsible for apoptosis.

Подписано в печать-^, ¿'^^^Формат 60x84/16. Тираж экз. Усл. печ. л. . Заказ ^"/3

Типография Издательства РУДН 117923, ГСП-1, г. Москва, ул. Орджоникидзе, д. 3

ВВЕДЕНИЕ.

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

Реакция сульфирования (сульфохлорирования) в органической химии

1.1. Сульфирование.

1.1.1. Сульфирующие реагенты.

1.1.2. Механизм реакции сульфирования.

1.1.2.1. Сульфирующие реагенты и электрофильные частицы.

1.1.2.2. Механизм реакции.

1.1.2.3. Реакционная способность.

1.1.3. Сульфирование ароматических и гетероциклических соединений.

1.1.3.1. Сульфирование бензола и его замещенных аналогов.

1.1.3.2. Сульфирование гетероциклических систем.

1.2. Другие методы синтеза ароматических сульфокислот.

1.2.1. Ароматическое нуклеофильное замещение.

1.2.1.1. Механизм реакции активированного замещения.

1.2.1.2. Примеры синтеза сульфокислот.

1.2.2. Замещение в солях диазония.

1.2.3. Реакции присоединения.

1.3. Сульфогалогенирование и синтезы на основе сульфогалогенидов.

1.3.1. Сульфохлорирование ароматических и гетероциклических систем.

1.3.1.1. Механизм реакции сульфохлорирования.

1.3.1.2. Сульфохлорирование бензола и его гомологов.

1.3.1.3. Сульфохлорирование функциональнозамещенных бензолов.

1.3.1.4. Сульфохлорирование полиядерных систем.

1.3.2. Сульфохлорирование гетероциклических систем.

1.3.3. Другие методы введения в ароматические или гетероциклические ядра сульфохлоридных групп.

1.4. Ароматические и гетероциклические сульфамиды.

1.4.1. Нуклеофильное замещение при сульфонильном атоме серы.

1.4.2. Синтез сульфамидов.

1.4.2.1. Основные методики синтеза незамещенных сульфамидов.

1.4.2.2. N-Замещенные сульфамиды.

В настоящее время в области открытия новых лекарственных средств существует два подхода: классический - направленный синтез биологически активных соединений, основанный на накопленных знаниях о действии известных лекарственных средств на организм и новый метод, основанный на технологии высокопроизводительного скрининга (ВПС). Можно утверждать, что интенсивное становление технологии ВПС на рубеже второго и третьего тысячелетий произвело революционный эффект в области открытия новых лекарственных субстанций.

Колоссальное развитие робототехники в середине 90-х годов дало мировой фармацевтической науке роботы, позволяющие проводить десятки тысяч испытаний в день на различных биомишенях. Обычный высокопроизводительный перебор уже синтезированных соединений позволил с огромной скоростью выявлять из "руды" органических веществ "золотые крупинки" активных соединений. Дальнейшая оптимизация, полученных таким образом, активных соединений обычно проходит классическим способом.

Крупнейшие фармацевтические компании мира, обладая огромными материальными ресурсами, за несколько лет провели полный скрининг всех синтезированных на то время органических соединений. Поэтому уже к концу 90-х годов стал вопрос о таком же высокопроизводительном синтезе новых органических соединений.

Ответом химиков-органиков на возникшую потребность явилось появление методов скоростного синтеза. Это направление получило название комбинаторная химия. Комбинаторная химия также является сравнительно молодой научной дисциплиной. В последние годы она демонстрирует впечатляющие достижения, позволяя получать большие ряды комплексных структур (комбинаторные библиотеки) при минимальных затратах. Комбинаторная библиотека строится на основе серии базовых структур, в которых возможно многообразное и многократное модифицирование. Для этого они должны содержать несколько точек дериватизации, роль которых выполняют функциональные группы. Комбинаторная библиотека строится путем преобразования этих интермедиатов в большую серию производных путем стандартных и хорошо отработанных методик. При этом происходит постоянное совершенствование методов комбинаторного синтеза, интенсивно аккумулирующего лучшие достижения традиционных методологий. Это приводит к тому, что синтез многих сложных структур (например, антибиотиков, пептидов, олигонуклеотидов, молекул с хиральными центрами), еще недавно являвшийся областью безраздельного господства классических органохимических подходов, может быть успешно осуществлен посредством параллельных высокопроизводительных схем химических превращений в растворе или на твердой фазе. Указанные достижения привели в настоящее время к тому, что комбинаторный синтез в сочетании с методами высокопроизводительного экспериментального тестирования является основой исследовательских программ в химико-фармацевтической индустрии.

Однако в последнее время был осознан тот факт, что неограниченный рост размеров синтезируемых и тестируемых библиотек соединений не приводит сам по себе к интенсификации исследовательских программ, но даже способен приводить к неоправданным дополнительным издержкам. По мере почти неограниченного роста размеров «виртуальных» библиотек соединений становится очевидным, что их исчерпывающий синтез и анализ являются чрезвычайно трудоемким и экономически нецелесообразным решением. Даже в относительно простых случаях исследователю приходится прибегать к некоторому способу рационального отбора соединений-кандидатов для синтеза и последующих испытаний. Как следствие, выявилась потребность в досинтетическом анализе "виртуальных" библиотек соединений с целью рационального отбора структур, наиболее перспективных в свете конкретных задач предстоящего экспериментального тестирования. Возникла и постепенно приобретает все большую практическую значимость относительно молодая дисциплина -компьютерный "виртуальный" скрининг (от англ. virtual - возможный и screening - отбор, проверка).

В настоящее время развитие современной химико-фармацевтической индустрии во многом определяется триадой высокотехнологичных дисциплин, приходящих на смену традиционным методам поиска новых лекарств. Речь идет о технологиях «виртуального» скрининга, комбинаторного синтеза и высокопроизводительного биологического скрининга (ВПС).

Успешный опыт последнего десятилетия наглядно демонстрирует, что именно эта стратегическая триада исследовательских технологий способна в XXI веке поставить надежный заслон многим опасным заболеваниям, которые представляют серьезную угрозу для человечества.

Повышение роли ВПС в открытии новых лекарственных субстанций (ЛС)

40

3530i 25-з 20 + f 15 + 10 + 5 0 А Ч

0.45 4-0.4

0.35 + 0.3 025 0.2 0 15 0.1 0.05 О

1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 годы все низкомолекулярные ПС

ПС, открыть© при помощи ВПС

-удельная доля лекарств, открытых при помощи ВПС

В связи с этим, данное исследование посвящено разработке путей синтеза широкого круга комбинаторных библиотек азотсодержащих гетероциклических систем и созданию на их основе с использованием технологии ВПС новых высокоэффективных ингибиторов каспазы-3.

Работа является частью систематических научных исследований, проведенных в ООО "Предприятие Контакт Сервис" в период 1997-2003 гг и проводимых в ООО "Исследовательский Институт Химического Разнообразия" в период 2004-2006 гг в рамках программы «Биоскрининг активных веществ для создания готовых лекарственных средств и средств защиты растений на базе ООО "Исследовательский Институт Химического Разнообразия"», включенной в Федеральные целевые программы Минпромнауки РФ "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники (2002-2006 годы)" и "Развитие медицинской промышленности в 1998-2000 гг и на период до 2005 года".

Цель работы. Развитие научного направления, связанного с комплексным использованием широкого круга органических реакций для целенаправленного синтеза новых сульфонилзамещенных азотсодержащих гетероциклических систем, открывающего путь к поиску новых физиологически активных веществ и созданию новых лекарственных препаратов с помощью технологии ВПС. Для достижения данной цели в работе решались следующие задачи: разработка стратегии синтеза и изучение возможностей конструирования и функционализации оригинальных азотсодержащих гетероциклических систем с сульфанильными заместителями, включающей трансформацию функциональных группировок исходных гетероциклических соединений, трансформацию "введенных" функциональных группировок и превращение исходных гетероциклических систем в другие гетероциклические системы.

- разработка методов получения широкого набора структурных аналогов (комбинаторных библиотек) сульфамидных и сульфонилалкильных производных оригинальных азотсодержащих гетероциклических систем, пригодных для ВПС;

- доказательство структуры (идентификация) новых соединений; нахождение среди синтезированных соединений новых высокоэффективных ингибиторов капазы-3 непептидного типа и установление закономерностей влияния строения соединений на активность ингибирования каспазы-3 in vitro.

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР Реакция сульфирования (сульфохлорирования) в органической химии

Ввиду того, что данная работа посвящена синтезу и свойствам сульфонильных производных разнообразных гетероциклических систем в литературном обзоре собран накопленный материал по имеющимся представлениям о методах введения сульфогруппы, сульфирующих реагентах, механизме реакции сульфирования (сульфохлорирования), реакционной способности субстратов по отношению к реакции сульфирования, функционализации сульфо (сульфохоридной) группы.

Следует отметить, что ароматические и гетероциклические сульфоновые кислоты (сульфокислоты) являются ценными продуктами органического синтеза [1]. Сульфокислоты могут быть рассмотрены как промежуточные продукты, путем функционализации по сульфонильному атому серы превращающиеся в различные их производные. Сульфогруппа служит также для придания конечным продуктам синтеза (красителям, физиологически активным соединениям, поверхностно-активным и текстильно-вспомогательным веществам и др.) кислотных свойств и повышенной растворимости в воде [1].

Синтез сульфокислот рассмотрен в нескольких монографиях и обзорах [2-9]. Существуют несколько общих методов их получения. Одной из важнейших реакций органического синтеза является реакция сульфирования (сульфонирования), т.е. электрофильное замещение атома водорода в ароматическом ядре сульфонильной серой SVI.

Ar-H+S03-+Ar-S03H (1.1)

Сульфогруппу можно вводить в ароматическое ядро посредством нуклеофильного замещения атомов или групп атомов, причем ряд авторов также называют эту реакцию сульфированием [10]. Атомы галогенов и нитрогруппа замещаются в ароматических и гетероциклических системах при действии сульфитов (гидросульфитов) металлов по реакции £дАг:

Ar-X + S032" Ar-S03~ + Х~ (1.2)

Атомы водорода в ароматическом (гетероциклическом) ядре также могут подвергаться нуклеофильному замещению в присутствии окислителя

3].

Для синтеза сульфокислот, кроме указанных методов, применяется также способность аренов и гетероциклических систем присоединять нуклеофил SO32" (HS(V) к кратным связям С=С или C=N [1,3].

Другой подход заключается в использовании в качестве нуклеофильного реагента при замещении атомов галогенов или нитрогруппы соединений серы в более низком окисленном состоянии - SIV (сульфинильная сера) или S11 (сульфидная сера) с последующим окислением в сульфокислоты [1,3]: Ar-X + S2" —► Ar-S" + Х~ (1.3)

Диазониевая группа замещается подобным образом при действии сульфидов или диоксида серы:

Ar-N2+ + S„ —► Ar2-S„ + N2 —► Ar-SH (1.4)

Ar-N2+ + S02 Ar-S02" + N2 (1.5)

Рассмотрению основных подходов к синтезу ароматических и гетероциклических сульфокислот и их производных, а также выбору методов их получения и дальнейшей функционализации посвящен данный раздел работы.

1.1. Сульфирование

Основной реакцией получения сульфокислот является реакция сульфирования (сульфонирования), которую определяют как электрофильное замещение одного или более атомов водорода в ароматическом ядре на сульфо- (сульфонильную) группу SO3H действием серной кислоты и/или некоторых производных серы (VI) [1]. В данном разделе мы рассмотрим основные закономерности именно этой реакции.

Реакция замещения атомов водорода в ароматическом ядре на сульфогруппу относится к классической и является одной из наиболее распространенных реакций ароматических соединений [2-10]. Как уже отмечалось, механизм реакции квалифицируют [1] как электрофильное ароматическое замещение SeAt с участием 5-электрофилов. Природа последних определяется природой сульфирующего реагента, соответственно предполагаются особенности механизма и условий реакции.

1. Разработаны методы мультистадийного синтеза новых

азагетарилсульфохлоридов, включающих пиррольные, индольные,

изооксазольные, пиразольные, имидазольные, бензоксазольные,

бензотиазольные, бензимидазольные, бензо[1,2,5]оксадиазольные,

бензо[1,2,5]тиадиазольные, пиридиновые, хинолиновые, пиримидиновые,

хиназолиновые, хиноксалиновые, бензо[1,4]оксазиновые, бензо[1,4]

тиазиновые, бензо[6]азепиновые, бензо[6][1,4]оксазепиновые, бензо[^)][1,4]

тиазепиновые, 1//-бензо[^7][1,4]диазепиновые, бензо[е][1,4] диазепиновые,

тиено[2,3-(^]пиримидиновые, тиазоло[3,2-а]пиримидиновые, [1,3?4]

тиадиазоло[3,2-а] пиримидиновые, [1,2,4]триазоло[1,5-а] пиримидиновые,

бензо [с, б/] индольные, хромено[3,4-йГ]имидазольные и пирроло[3,4-с]

хинолинновые фрагменты. 2. Взаимодействием полученных азагетарилсульфохлоридов с

различными первичными и вторичными аминами циклического и

ациклического строения в условиях жидкофазного высокопроизводительного

параллельного синтеза получена 61 новая комбинаторная библиотека

неизвестных ранее сульфамоильных производных. 3. Показано, что азагетарилсульфохлориды, содержащие алкоксикарбо нильные группировки, могут рассматриваться как соединения с двумя

потенциальными центрами структурного разнообразия. Превращением

данных сульфохлоридов в соответствующие сульфамиды с последующим

гидролизом алкоксикарбонильной группировки и проведением N-

ацилирования в условиях жидкофазного комбинаторного синтеза получено 7

библиотек неизвестных ранее замещенных сульфамоил азагетарилкарбоксамидов. 4. Разработан метод синтеза комбинаторных библиотек неизвестных

ранее замещенных 5-винил-4-сульфамоил-3-метилизооксазолов,

основанный на взаимодействии 4-сульфамоил-3,5-диметилизооксазола с ароматическими и гетероароматическими альдегидами и с (2,3-

диметоксиэтил)диметиламином . 5. При взаимодействии N-монозамещеиных 4-сульфамоил-3,5-

диметилизооксазолов с (2,3-диметоксиэтил)диметиламином реакция

сопровождается метилированием 4-сульфамоильной группы. Показана

возможность переаминирования диметиламиновинильного фрагмента в 5-(2-

диметиламиновинил) замещенных изоксазолах. 6. Разработан подход к синтезу ранее неизвестных

азагетарилсульфониламино-алкилкарбоксамидов основанный на

превращении азагетарилсульфохлоридов в соответствующие

сульфониламиноалкилкарбоновые кислоты и аминировании последних

аминами в условиях жидкофазного параллельного синтеза. Таким образом

было получено 76 комбинаторных библиотек замещенных азагетарил сульфониламиноалкилкарбоксамидов. 7. Осуществлен синтез новой гетероциклической системы 1,1,6-

триоксоциклопента[3,4]пиридо[2,3-е][1,2,4]тиадиазина, на основе которой

синтезирована комбинаторная библиотека неизвестных ранее 3-(7-бром-1,1-

диоксо-1,4-дигидропиридо[2,3-е][1,2,4]тиадиазин-3-ил)пропиоамидов. 8. Разработан метод синтеза неизвестных ранее

азагетарилсульфонилпропионовых кислот из азагетарилсульфиновых и

акриловых кислот или их эфиров. На основе

азагетарилсульфонилпропионовых кислот в условиях параллельного

жидкофазного синтеза получено 27 новых комбинаторных библиотек

соответствующих сульфонилпропионамидов. 9. Показано, что температура является фактором, определяющим

реакционную способность имидазолида [(2-амино-5-бромпиридин-3-сульфо нил)метиламино]уксусной кислоты при взаимодействии данного соединения

с различными аминами: в зависимости от температуры реакции протекает

либо образование не описанных ранее структурных аналогов - ацетамидов.либо циклизация имидазолида в неизвестный ранее ниридо[2,3-/]

[ 1,2,5]тиадиазепин-1,1,4(5//)-трион. 10. Осуществлен синтез неизвестных ранее замещенных 6-

сульфамоилхинолин-4-карбоновых кислот, 6-сульфамоилхинолин-3,4-

дикарбоновых кислот и 6-сульфамоилхинолин-2,3,4-трикарбоновых кислот

из 5-сульфамоилизатинов и метиленактивных карбонильных соединений но

реакции Пфицингера. Хинолинкарбоновые кислоты в условиях

параллельного жидкофазного синтеза превращены в комбинаторные

библиотеки неизвестных ранее замещенных 6-сульфамоилхинолин-4-

карбоксамидов. 11. На основе 6-сульфо- и 6-сульфамоилхинолин-3,4-дикарбоновых

кислот впервые получены 1,3-диоксо-8-сульфо- и 1,3-диоксо-8-сульфамоил 2,3-дигидрофуро[3,4-с]хинолины, которые действием первичных аминов

превращены в неописанные ранее 1,3-диоксо-8-сульфо- и 1,3-диоксо-8-

сульфамоил-2,3-Дигидро-1Я-пирроло[3,4-с]хинолины,

12. Разработаны методы синтеза и получены комбинаторные

библиотеки неизвестных ранее замещенных в ноложениях 2, 4, 6 и 8 1,3-

диоксо-2,3-дигидро-1Я-пирроло[3,4-с]хинолинов, в том числе, содержащие в

положении 2 водород, алкил, замещенный алкил, арил, гетарил, остаток

аминокислоты и др., в положении 4 водород, алкил, замещенные алкил,

винил, арил, гетарил, гидрокил, хлор, замещенную аминогруппу, остаток

аминокислот, замещенные сульфанильную, сульфинильную и

сульфонильную группы, в положении 6 водород, F, Вг, CF3 и в положении 8

водород, F, Вг, CN, SO3H, замещенные сульфамоильные и сульфанильные

фуппировки. 13. Методом высокопроизводительного биологического скрининга

синтезированных соединений 1,3-диоксопирроло[3,4-с]хинолинового ряда

показана их высокая эффективность в качестве ингибиторов каспазы-3. В

результате оптимизации структуры 8-сульфамоил-1,3-диоксо-2,3-дигидро 341

1Я-нирроло[3,4-с] хинолинов предложен ряд высокоэффективных (ICso^ Ю

нМ) ингибиторов касназы-3. 14. Установлены закономерности влияния нрироды заместителей в 1,3-

диоксо-2,3-Дигидро-1Я-нирроло[3,4-с]хинолинах на их ингибирующую

активность. На основании этих данных предложен механизм обратимого

взаимодействия меркаптогруппы каспазного энзима с электрофильными

карбонилами ингибитора. Также доказано, что 1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Я пирроло[3,4-с]хинолины являются медленно диссоциирующими (х « 50 мин)

обратимыми и неконкурентными ингибиторами каспазы-3.

1. Горелик М.В., Эфрос J1.C. Основы химии и технологии ароматических соединений. М.: Химия, 1992. 640 с.

2. Сьютер И. Химия органических соединений серы, т.З. М.: Изд. ин. лит., 1951.

3. Джильберт Э.Е. Сульфирование органических соединений: Пер. с англ. под. ред. А.И. Гершеновича. М.: Химия, 1969. 414 с.

4. Cerfontain Н. Mechanistic Aspects of Aromatic Sulfonation and Deulfonation. N.Y.: Intersciens Publ. 1968. 314 p.

5. Салов Б.В., Гершенович А.И. В сб.: получение и свойства органических соединений серы. М.: Химия, 1998. С. 261-288. 7. 8.

6. Cerfontain Н. Rec. Trav. Chim. 1985. Vol. 104, N 6. P. 153-165.

7. Gilbert E. E. Sulfonation and Related Reaction. N.-Y.: Interscience, 1965.

8. Cerfontain H., Lambrechts H.J.A., Schaasberg-Nienhuis Z.R.H. J. Chem. Soc. Perkin 2,1985. N 5. P. 659-667.

9. Barrett G. C. In "Organic Compounds of Sulphur, Selenium, and Tellurium" / ed. D. H. Reid. London: The Chemical Society, 1975. Vol. 3. Ch. 1.

10. Anderson K.K. Sulphonic Acids and their Derivatives. In: Comprehensive Organic Chemistry / Eds. D.H.R. Barton, W. Ollis. Vol. 3. P. 331-342. Elsevier, Amsterdam. 1982.

11. Тодрес-Селектор З.В. Сульфирование солями сернистой кислоты. М.: Химия, 1965. 172 с.

12. Качурин О.И., Величко Л.И., Дубовая А.А. Молек. взаимодействия, структура, реакц. способн. орган, соединений. Киев: Наукова думка, 1989. С. 94-120.

13. Джонсон К. Уравнение Гаммета. Пер. с англ. М.: Мир, 1977. 240 с.

14. Maarsen P.K., Cerfontain H. / J. Chem. Soc. Perkin 2, 1977. N 8. P. 10031007.

15. Коптюг В.А. Изомеризация ароматических соединений. Новосибирск: Изд. СО АН СССР, 1963. 176. с.

16. Kobayashi Y., Kumadaki I., Yoshida Т. / J. Chem. Res. (S). 1977. N 8. P. 215.

17. Справочник химика. Л.: Химия, 1968. Дополнительный том. С. 249.

18. El Homsi A., Gilot В., Canselier J.-P. J. / Appl. Chem. Biotechnol. 1978. Vol. 28, N6. P. 405-410.

19. Хелевин P.P. / Ж. общ. химии. 1987. Т. 57, вып. 11. С. 202-207.

20. Emde Н., Blank Н. U./ Appl. 3114830 Germany (1983); С.А. 1983. Vol. 98, 53403.

21. Хелевин P.P. / Ж. орг. химии. 1984. Т. 20, вып. 2. С. 379-387.

22. Хелевин P.P. / Ж. прикл. химии. 1982. Т. 55, вып. 10. С. 2285-2290.

23. Багал И.Л., Салов В.В. / ЖВХО им. Д.И. Менделеева. 1984. Т. 29, вып. 5. С. 572-577.

24. Хелевин P.P. / Ж. орг. химии. 1987. Т. 23, вып. 9. С. 1925-1929.

25. Аллен Ч., Ван Аллан Дж. / В сб.: Синтезы органических препаратов. Сб. 4. // Пер. с англ. А.Ф. Платэ, под. ред. Б.А. Казанского. / М.: Издатинлит, 1949. С. 477-480.

26. Stubbs F.J., Williams C.D. / J. Chem. Soc. 1948. P. 10-65.

27. Pawelleck D., Behre H., Bonse G. / Ullmanns Encyklopadie der technishen Chemie. 4-te Aufl. B. 17. Weinheim: Verlag Chemie. 1979. S/ 83-126.

28. Физер Л. / В сб.: Синтезы органических препаратов. Сб. 2. // Пер. с англ. А.Ф. Платэ, под. ред. Б.А. Казанского. / М.: Издатинлит, 1949. С. 493-496.

29. Дашевский М.М. Аценафтен. М.: Химия, 1966. 460 с.

30. Клар Э. Полициклические углеводороды. / В 2 т.: пер с англ. М.: Химия, 1971. Т. 1.455 е.; Т. 2. 455 с.

31. Blancafort P., Castaner J. / Pat. 159084 ЧССР (1975); Chem. Abstrs. 1975. Vol. 84, 164536.

32. Clarke R. Т., Blackly M. / Appl. 2460243 Germany (1975); Chem. Abstrs. 1975. Vol. 83, 195240.

33. Morley J.O. / J. Chem. Soc. Perkin 2, 1976. N 13. P. 1560-1564.

34. Горелик M.B. Химия антрахинонов и их производных. М.: Химия, 1983. 295 с.

35. Скотт В., Аллен К. / В сб.: Синтезы органических препаратов. Сб. 2. // Пер. с англ. А.Ф. Платэ, под. ред. Б.А. Казанского. / М.: Издатинлит, 1949. С. 58-60.

36. Джоуль Дж., Смит Г. Основы химии гетероциклических соединений // Пер. с англ. под ред. В.Г. Яшунского. / М.: Мир, 1975. 398 с.

37. Пакетт JI. Основы современной химии гетероциклических соединений // Пер. с англ. под ред. В.Г. Яшунского. / М.: Мир, 1971. 352 с.

38. Пальм В.А. Основы количественной теории органических реакций. Л.: Химия, 1977. 359 с.

39. Adeniran М.А., Bevan C.W.L., Hirst J. / J. Chem. Soc. 1963. N 13. P. 5868-.

40. Табачникова Н.И., Карандашева H.H. / Ж. общей химии. 1961. Т. 31, вып. С. 1916-1920.

41. Fierz-David Н.Е., Blangey L. Fundamental Processes of Dye Chemistry. N.-Y.: Interscience, 1949.

42. Halfter G. /Z. anal. Chem. 1947. Bd. 128. S. 23.

43. Докунихин H.C. / ЖВХО им. Д.И. Менделеева. 1976. Т. 21, вып. 3. С. 292298.

44. Gistler М., Zollinger Н. / Angew. Chem. 1981. Bd. 93, N 2. S. 184.

45. Докунихин H.C., Гаева Л.А., Мезенцева Г.А. / Докл. АН СССР. 1972. Т. 206, №3. С. 624-626.

46. Мощицкий С.Д., Залесский Г.А., Кухарь В.П., Ягупольский Л.М. / Ж. орг. хим. 1976. Т. 11, вып. 5. С. 1134.

47. Dohrn М., Didrich Р. / Pat. 564786 Germany (1933); Chem. Abstrs. 1933. Vol.27, 1010.

48. Serradell M.N., Blancafort P., Castaner J. / Tenoxicam. Drugs Fut. 1982. Vol. 7, N 7. P. 493-497.

49. Evans R.F., Brown H.C., Van Der Plas. / Org. Syn. 1963. Vol. 24. P. 1329.

50. Petitcolas P., Sureau R. / Pat. 1012619 France (1954); Chem. Zentr. 1954. 7520.

51. Finzi C., Leandri G. / Ann. Chim. (Rome). 1950. Vol. 4o. P. 334.

52. Вейганд-Хильгетаг. Методы эксперимента в органической химии // Пер. с нем. под ред. Н.Н. Суворова. / М.: Химия, 1968. 944 с.

53. Seeboth Н. / Angew. Chem. 1967. Bd. 79, N 8. S. 329-340.

54. Горелик M.B., Шибряева JI.C. / Ж. орг. химии. 1976. Т. 12, вып. 12. С. 1327-1332.

55. Finley К.Т. The Chemistry of Quinonoid Compounds. Vol. 2. // Eds. S. Patai, Z. Rappoport. Chichester. / N.-Y.: Wiley, 1988. P. 537-717.

56. Asahi Y. / Chem. Pharm. Bull. (Tokyo). 1973. Vol. 11. P. 813-814.

57. Bevan C.W.L., Hirst J. / Pat. 919864 UK (1963); Chem. Abstrs. 1963. Vol.59. 8710.

58. Inoue I., Kojima M. / J. Pharm. Soc. Japan. 1951. Vol. 71. P. 939; Chem. Abstrs. 1952. Vol. 46, 8039.

59. Fahrenbach M. J., Collins К. H. / Pat. 2756230 USA (1957); Chem. Abstrs. 1957. Vol. 51,2886.

60. Inoue 1., Kojima M. / J. Pharm. Soc. Japan. 1951. Vol. 71. P. 549; Chem. Abstrs. 1952. Vol. 46,925.

61. Albert L. G. / Pat. 2690358 USA (1955); Chem. Abstrs. 1955. Vol. 49, 11721.

62. Минкин В.И., Симкин Б.Я., Миняев P.M. Квантовая химия органических соединений. Механизмы реакций. М.: Химия, 1986. 246 с.

63. Жидомиров Г.М., Багатурьянц А.А., Абронин И.А. Прикладная квантовая химия. М.: Химия, 1979. 296 с.

64. Травень В.Ф. Электронная структура и свойства органических молекул. М.: Химия, 1989. 384 с.

65. Клопман Г. Реакционная способность и пути реакций. Под. ред. Г. Клопмана: пер. с англ. М.: Мир, 1977. С. 63-174.

66. Bassin J.P., Cremlyn R.J., Swinbourne F.J. / Phosphorus, Sulfur and Silicon. 1991. Vol. 56. P. 245- 275.

67. Тарасов A.B., Москвичев Ю.А. / В сб.: Панорама современной химии России. Успехи в нефтехимическом синтезе полифункциональных ароматических соединений. М.: 2005. С. 214-229.

68. Ясницкий В.Ю. Ж. общей химии. 1953. Т. 23, вып. 1.С. 107-110.

69. Спрысков А.А., Кузьмина И.Л. / Ж. общей химии. 1958. Т. 28, вып. 1. С. 184-187.

70. Гнедин Б.Г., Иванов С.Н., Рудакова Н.И., Спрысков А.А. / Изв. вузов. Химия и хим. технология. 1975. Т. 18, вып 7. С. 1039-1042.

71. Гнедин Б.Г., Рудакова Н.И. / Изв. вузов. Химия и хим. технология. 1972. Т. 15, вып 5. С. 716-719.

72. Кошелев В.И., Бородаев С.В. / Ж. прикл. химии. 1980. Т. 53, вып. 10. С. 2298-2302.

73. Пальм В.А. / ДАН СССР. 1956. Т. 108, вып 4. С. 487-489.

74. Cavagna F., Grever Т., Jaenike О., Zeininger Н. / Chem. Ind. Tech. 1978. Vol. 50, N1. P. 51-52.

75. Гнедин Б.Г., Рудакова Н.И. / Изв. вузов. Химия и хим. технология. 1974. Т. 17, вып 12. С. 1820-1823.

76. Wagner R.B., Zook H.D. Synthetic Organic Chemistry. N.-Y.: Wiley, 1965. P. 822-857.

77. Адаме P., Конант Ж.В., Марвел C.C., Ноллер C.P., Кларк Г.Т., Уитмор Ф.С. / В сб.: Синтезы органических препаратов. Сб. 1. // Пер. с англ. А.Ф. Платэ, под. ред. Б.А. Казанского. / М.: Издатинлит, 1949. С. 469-470.

78. Blank H. U. / Pat. 2721429 Germany (1978); Chem. Abstrs. 1978. Vol. 90. 87032.

79. Schenk W., Blank H. U., Hagedorn F., Evertz W. / Pat. 2743540 Germany (1979); Chem. Abstrs. 1979. Vol. 91. 391286.

80. Blank H. U. / Pat. 2721429 Germany (1979); Chem. Abstrs. 1979. Vol. 91. 39129.

81. Гнедин Б.Г., Рудакова Н.И., Спрысков A.A. / Изв. вузов. Химия и хим. технология. 1971. Т. 14, вып. 10. С. 1530-1534.

82. Birum G. Н., Jansen R. F. / Pat. 4713489 USA (1989); Chem. Abstrs. 1989. Vol. 109. 6216.

83. Спрысков А.А., Гнедин Б.Г. / Ж. общей химии. 1963. Т. 33, вып. 4. С. 1082-1085.

84. Kulkarri А.В., Shah R.C. / J. Indian Chem. Soc. and News Ed. 1955. Vol. 18. P. 22-25.

85. Oten J., Schaeffer G. / Pat. 3686300 USA (1972); Chem. Abstrs. 1972. Vol. 77. 1396121.

86. In S., Kan S. D. / Appl. 58-162570 Japan (1983); Chem. Abstrs. 1983. Vol. 100. 51268.

87. Aurnhammer R., Koenig R. / Pat. 1 172258 Germany (1964); Chem. Abstrs. 1964. Vol. 61.6961.

88. Крылов E.H., Одинцова E.H. / Ж. орг. химии. 1982. Т. 18, вып. 9. С. 19361939.

89. Hodson Н. F., Batchelor J. F. / Pat. 4103015 USA (1978); Chem. Abstrs. 1978. Vol. 90. 22816.

90. Lee R., Forest P. / Pat. 3772373 USA (1973); Chem. Abstrs. 1973. Vol. 80. 26946.

91. Virnig M. J. / Pat. 4100163 USA (1978); Chem. Abstrs. 1978. Vol. 89. 215238.

92. Saito J., Tamura Т., Kurahashi Y., Uzawa S., Matsumoto N., Yamaguchi N. / Appl. 173918 EU (1986); Chem. Abstrs. 1986. Vol. 105. 56341.

93. Grever Т., Jaenike О. / Pat. 330247 Germany (1984); Chem. Abstrs. 1984. Vol. 102. 24282.

94. Schaefer G., Neumann P. / Pat. 3704932 Germany (1987); Chem. Abstrs. 1987. Vol. 109.210705.

95. Erickson A. E. / Pat. 2860168 USA (1958); Chem. Abstrs. 1958. Vol. 53. 9152.

96. Cremlyn R.J., Cronje T. / Phosphorus and Sulfur. 1979. Vol. 6. P. 495-499.

97. Спрысков А.А., Кузьмина И.Л. / Ж. общей химии. 1951. Т. 21, вып. 1. С. 1887-1891.

98. Leslie V., Rose J. / Pat. 3830781 USA (1974); Chem. Abstrs. 1974. Vol. 82. 171675.

99. Kalopissis G., Bouillon C. / Pat. 3917815 USA (1975); Chem. Abstrs. 1975. Vol. 84. 31898.

100. Farrar W.V. / J. Chem. Soc. 1960. N 8. P. 3063.

101. Bernard I.R., Chivers G.E., Cremlyn R.J., Mootoosamy R.G. / Aust. J. Chem. 1974. Vol. 27, N 1. P. 171-175.

102. Спрысков А.А., Гнедин Б.Г. / Ж. орг. химии. 1965. Т. 1,вып. 11. С. 19461949.

103. Спрысков А. А., Гнедин Б.Г. / Изв. вузов. Химия и хим. технология. 1964. Т. 7, вып. 6. С. 935-938.

104. Cremlyn R.J., Cronje Т. / Phosphorus and Sulfur. 1979. Vol. 6. P. 413-415.

105. Sullivan T. A., Witterholt V. G. / Pat. 4556733 USA (1985); Chem. Abstrs. 1985. Vol. 104. 148503.

106. Miller H. J., Sandeno J. L. / Pat. 3658965 USA (1972); Chem. Abstrs. 1972. Vol. 77. 48059.

107. Carpino L. A., Cohen B. / Pat. 4575541 USA (1986); Chem. Abstrs. 1986. Vol. 105. 7069.

108. Cremlyn R.J., Hornby R. / J. Chem. Soc. C. 1969. P. 1341-1345.

109. Jakob P., Anderson J., Meshul C.K., Shulgin A.T., Neal Castagnoli N. / J. Med. Chem. 1977. Vol. 20, N 10. P. 1235-1237.

110. Don J. / Pat. 512680 Spain (1983); Chem. Abstrs. 1983. Vol. 99. 104969.

111. Higuchi Т., Nishihata T. / Pat. 4470980 USA (1981); Chem. Abstrs. 1981. Vol. 101.216440.

112. Смайлз А., Стюарт Б. / В сб.: Синтезы органических препаратов. Сб. 1. // Пер. с англ. А.Ф. Платэ, под. ред. Б.А. Казанского. / М.: Издатинлит, 1949. С. 466-467.

113. Ясницкий В.Ю. / Ж. общей химии. 1956. Т. 26, вып. 9. С. 12346-2349.

114. Isono М., Itou Т., Suzuki Y. / Pat. 77-12697 Japan (1977); Chem. Abstrs. 1977. Vol. 87. 39114.

115. Iwasaki H., Ozawa O., Sasaki Y. / Pat. 77-12146 Japan (1977); Chem. Abstrs. 1977. Vol. 86.157722.

116. Cremlyn R.J., Hornby R. / J. Chem. Soc. Pakistan. 1969. Vol. 8. P. 409-412.

117. Cremlyn R. / J. Chem. Soc. C. 1967. P. 77-79.

118. Yoshioka Y., Nagao Y., Kawada M., Kosugi M., Izawa T. / Pat. 87-234059 Japan (1987); Chem. Abstrs. 1987. Vol. 109. 4493.

119. Philion R. E. / Pat. 2728641 Germany (1978); Chem. Abstrs. 1978. Vol. 90. 137468.

120. Cremlyn R.J./ J. Chem. Soc. C. 1968. P. 11-14.

121. Cremlyn R.J., Swinbourne F.J., Atherall J. / Phosphorus and Sulfur. 1980. Vol. 9. P. 155-158.

122. Brown J.R., Landquist J.K., Summers D.R. / J. Chem. Soc. 1978. Vol. 23B. P. 633-635.

123. Jackman G.B., Petrov V., Stephenson O., Wild A. / J. Pharm. Pharmacol. 1962. Vol. 14. P. 679-681.

124. Wilhelm M. / Pat. 2273974 USA (1942); Chem. Abstrs. 1942. Vol. 36. 3809.

125. Menard M., Mitchell L., Komlossy J. / Can. J. Chem. 1961. Vol. 39, N 3. P. 729-732.

126. Cremlyn R.J., Swinbourne F.J., Mguni R. / Phosphorus and Sulfur. 1980. Vol. 8. P. 321-324.

127. Cremlyn R.J., Pannel R.W. / Aust. J. Chem. 1978. Vol. 31, N. 10. P. 26692673.

128. Cremlyn R.J., Leonard D., Motwani R. / J. Chem. Soc. Perkin Trans. I. 1968. P. 500-504.

129. Chivers G.E., Cremlyn R.J., Guy R. / Aust. J. Chem. 1975. Vol. 28, N. 3. P. 413-416.

130. Akhtar N., Badami N.S., Cremlyn R.J., Goulding K.J. / Phosphorus and Sulfur. 1977. Vol.3. P. 293-298.

131. Тюленева И.М., Москвичев Ю.А., Миронов Г.С. и др. / Основ, орг. синтез и нефтехимия. Сб. науч. тр. Ярославль, 1975. Вып.2. С. 93-98.

132. Москвичев Ю.А., Сапунов В.А., Миронов Г.С. и др. / Ж. прикл. химии, 1980. Т, 43, вып. 7, С. 1619-1623.

133. Янота X., Москвичев Ю.А., Миронов Г.С. / Ж. орг. химии, 1985. Т, 21, вып. 2, С. 365- 368.

134. Thomas R. / Pat. 3845015 USA (1974); Chem. Abstrs. 1974. Vol. 82. 112647.

135. Nagao Y., Kawada M., Kosugi M. / Pat. 76-691230 Japan (1976); Chem. Abstrs. 1976. Vol. 85.159675.

136. Yoshioka Y., Nagao Y., Kawada M., Kosugi M. / Pat. 74-445034 Japan (1974); Chem. Abstrs. 1974. Vol. 81. 105009.

137. Nagao Y., Kawada M., Kosugi M. / Pat. 74-445035 Japan (1974); Chem. Abstrs. 1974. Vol. 81.105010.

138. Алов E.M. Дисс.д-ра хим. наук. Ярославль, 1997.

139. Cremlyn R.J., Shode О. J., Swinbourne F.J. / J. Chem. Soc. Perkin Trans. I. 1983. P. 2181-2183.

140. Cremlyn R.J., Swinbourne F.J., Shode O. J., Lynch J. / Heterocyclic Chem. 1987. Vol. 24, N 1. P.117-121.

141. Cremlyn R.J., Lynch J., Swinbourne F.J. / J. Phosphorus, Sulfur and Silicon. 1991. Vol. 57. P. 173-179.

142. Cremlyn R.J., Swinbourne F.J. / Indian J. Chem. 1983. Vol. 22B. P. 10291033.

143. Cremlyn R.J., Ellis L., Pinney A. / Phosphorus, Sulfur and Silicon. 1989. Vol. 44. P. 167- 175.

144. Cremlyn R.J., Swinbourne F.J., Shode O.O. / Pakistan J. Chem. 1986. Vol. 8, N3. P. 323-326.

145. Cremlyn R.J., Nunes R. / Gazz. Chim. Ital. 1987. 117. S. 183-185.

146. Cremlyn R.J., Swinbourne F.J., Graham S. / Phosphorus, Sulfur and Silicon. 1991. Vol. 60. P. 57-65.

147. Спрысков A.A. / Ж. общей химии. 1951. Т. 21, вып. 9. С. 2022-2025.

148. Morley J.O. / J. Chem. Soc. Perkin Trans. 2. 1976. Vol. 13. P. 1560-1563.

149. Dutta P.C., Mandal D. / J. Indian Chem. Soc. 1956. Vol. 33. P. 410-412.

150. Charles G., Adolf E., Heinrich B. / Pat. 2623050 USA (1954); Chem. Abstrs. 1954. Vol.48. 2778.

151. Willian E.T., Van Germent V., Willian B.W. / J. Org. Chem. 1978. Vol. 43, N l.P. 101-104.

152. Buzas A., Teste J. / Bull. Soc. chim. France. 1960. S. 793.

153. Терентьев А.П., Кадатский Г.М. / Ж. общей химии. 1954. Т. 21, вып. 8. С. 1524-1527.

154. Cymerman J., Faiers D. / J. Chem. Soc. 1952. P. 165-167.

155. Терентьев А.П., Кадатский Г.М. / Ж. общей химии. 1955. Т. 22, вып. 2. С. 153-157.

156. Lew N.Y., Noller R. / J. Amer. Chem. Soc. 1952. Vol. 72, N 11. P. 57155718.

157. Siedel W., Sturm K. / Pat. 1088509 Germany (1958); Chem. Abstrs. 1958. Vol. 56. P. 456.

158. Gronowitz S., Ander I. / Acta Chem. Scand. Vol. 29B. P. 513-523.

159. Siedel W., Sturm K. Pat. 1088508 Germany (1958); Chem. Abstrs. 1958. Vol. 56. P. 456.

160. Castaner J., Prous J., Lornoxicam. / Drugs Fut. 1992. Vol. 17, N 8. P. 683869.

161. Савин Е.Д., Неделькин В.И. / Ж. орг. химии. 1997. Т. 33, вып. 3. С. 327343.

162. Sone Т., Abe I., Sata N., Ebina M. / Bull. Chem. Soc. Jpn. 1985. Vol. 58, N 3. P. 1063-1064.

163. Mi Hie Yi, Sung Goo Lee, Kil-Yeong Choi, Jin Chul. / J. Polym. Sci.: Polym. Chem. 1988. Vol. 26. P. 1507-1517.

164. Ellis R. L. / Pat. 3932444 USA (1976); Chem. Abstrs. 1976. Vol. 84. 136515.

165. Baldwin J. J., Novello F. C. / Pat. 4110456 USA (1978); Chem. Abstrs. 1978. Vol. 90. 87462.

166. Gross P.E., Dickinson R.P., Parry M.G., Randall M.G. / J. Med. Chem. 1985. Vol. 28. P. 1427-1431.

167. Fischer R., Kleymann G., Betz U., Baumeister J., Bender W., Eckenberg P., Handke G., Hendrix M., Henninger K., Jensen A., Keldenich J., Schneider U., Weber O. / Pat. 19962532 Germany (1956); Chem. Abstrs. 1958. Vol. 56. P. 456.

168. Ohta M. / Chem. J. Pharm. Soc. Jpn. 1947. Vol. 67. P. 199-201.

169. Nakamura T. / Pat. 78-21171 Japan (1978); Chem. Abstrs. 1978. Vol. 89. 6238.

170. Chan M.F., Kois A., Verner E.J., Raju B.G., Castillo R.S., Wu C., Okun I., Stavros F., Balaji V.N. / Bioorg. Med. Chem. 1998. Vol. 6, N 12. P. 2301-2307.

171. Tanaka Т., Umekawa H., Saitoh M., Ishikawa Т., Shin Т., Ito M., Itoh H., Kawamatsu Y, Sugihara H., Hidaka H. / Mai. Pharmacal. 1986. Vol. 29, N 3. P. 264-267; Chem. Abstrs. 1986. Vol. 104. 184072.

172. Wei P. H. L., Mccaully R. J. / Pat. 3894003 USA (1975); Chem. Abstrs. 1975. Vol. 83. 206282.

173. Hashimoto H., Imamura K., Haruta J., Wakitani K. / J. Med. Chem. 2002. Vol. 45,N7. P. 1511-1519.

174. Brockunier L. L., Parmee E. R., Ok H. 0., Candelore M. R., Cascieri M. A., Colwell Jr. L. F., Deng L., Feeney W. P., Forrest M. J., Horn G. J./ Bioorg. Med. Chem. Lett. 2000. Vol. 10, N 18. P. 2111 -2117.

175. Barry W.J., Finar I.L., Khatkhat G.V. / J. Chem. Soc. (C). 1968. P. 11201122.

176. Barnish I.T., Cross P.E., Dickinson R.P. Barnish I.T., Cross P.E., Parry M.J., Randall M.J. / J. Med. Chem. 1981. Vol. 24, N 3. P. 959-964.

177. Brown D.L., Talley J.J., Bertenshaw S.R., Carter J.S., Graneto M.J., KoboldtC.M., Masferrer J.L., Norman B.H., Rogier D.J., Zweifel B.S., Seibert K. / Med. Res. Rev. 1999. Vol. 9, N 3. P. 199-204.

178. Talley J.J., Carter J.S., Kramer S., Penning Т., Collins P., Graneto M.J., Seibert K., Koboldt C.M., Masferrer J., Zweifel B. / Bioorg. Med. Chem. Lett. 1999. Vol. 9, N8. P. 1171-1176.

179. Puig D. C., Pujol N. F., Fernandez F. D. Puig D. C., Pujol N. F., Fernandez F.D. / Pat. 1973-506876 Japan (1973); Chem. Abstrs. 1974. Vol. 81. 105010.

180. Terrett N.K., Bell A.S., Brown D., Ellis P. / Bioorg. Med. Chem. Lett. 1996. Vol. 6, N 15. P. 1819- 1824.

181. Waetjen F., Drejer J. / Pat. 1973-501432 Japan (1973); Chem. Abstrs. 1974. Vol. 81. 105010.

182. Cremlyn R.J., Swinbourne F.J., Shode O. / J. Heterocyclic Chem. 1985. Vol. 22, N9. P. 1211- 1214.

183. Паращин Ж.Ж., Лубенец В.И., Новиков В.П. / Ж. орг. химии. 1998. Т. 34, вып. 2. С. 280- 284.

184. Libeer J., Depoorter Н., Nys J. / Bull. Soc. Chim. Beiges. 1971. Vol. 80. P. 43-58.

185. Федюк Д.В., Малетина И.И., Ягупольский Л.М. Укр. хим. журн. 1997. Т. 63, № 9. С. 29-39.

186. Erickson А. Е. / Pat. 3826036 Germany (1989); Chem. Abstrs. 1989. Vol. 11 1.57733.

187. Скопенко В.Н., Авраменко Л.Ф., Починок В.Я., Кругляк Н.Е. / Укр. хим. журн. 1977. Т. 53, №5. С. 518-521.

188. Li Q., Woods K.W., Steiner А. / Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 2002. P. 43.

189. Jung S.-H., Hwang H.S., Moon E.Y, Seong S.K, Choi C.H, Chung Y.H, Jung S.H. / Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998. Vol. 8, N 12. P. 1547-1551.

190. Hutton J., Jones A.D., Lee S.A., Martin D.M.G., Meyrick B.R., Peardon J.P., Powell L. / Org. Process Res. Dev. 1997. Vol. 1, N 1. P. 61-64.

191. Lee D., Long S. A., Murray J. H., Adams J. L., Nuttall M. E., Nadeau D. P., Kikly K., Winkler J. D., Sung C.-M., Ryan M. D., Levy M. A., Keller P. M., DeWolf W. E. / J. Med. Chem. 2001. Vol. 44, N 12. P. 2015-2019.

192. Teoh В., Dahanukar V.H., Criscione K.R., Grunewald, G.L. / J. Med. Chem. 1999. Vol. 42, N 11. P. 1982-1986.

193. Seiichi U., Tomofumi S., Takeshi S., Hiroshi H., Kazuhiro I. / J. Chem. Soc. Perkin Trans. 2. 1998. P. 2165-2173.

194. Toshimasa T, Kazuhinro I. / Anal. Chem. 1984. Vol. 56, N 13. P. 2461-2464.

195. Seiichi U., Tomofumi S., Kazuhinro I. / Chem. Soc. Perkin Trans. 2. 1999. P. 569-576.

196. Yoshitaka O., Teruo M., Motoyuki Y., Norio K. / Chem. Pharm. Bull. 1989. Vol. 37, N9. P. 2398- 2405.

197. Erickson A. E. / Pat. 2860168 USA (1958); Chem. Abstrs. 1958. Vol. 53. 9152.

198. Tonozuka M., lino S., Nitsuta K., Maruyama A. / Appl. 59-184161 Japan (1984); Chem. Abstrs. 1985. Vol. 102. 95555.

199. Al-Kindy S.M.Z., Miller J.N. / Anal. Chim. Acta. 1989. Vol. 227. P. 145-153.

200. Louffy M.A., Abu-Shady, Hamed A. / Pharmasie. 1977. Vol. 22, N 4. P. 240245.

201. Pfister Jurg R, Harrison Ian Т., Fried J. H. / Pat. 3989720 USA (1976); Chem. Abstrs. 1976. Vol. 86. 73443.

202. Pfister Jurg R., Harrison Ian Т., Fried J. H. Pat. 3989721 USA (1958); Chem. Abstrs. 1976. Vol. 86. 72444.

203. Воробера С.Л., Буянов В.Р., Левина И.И., Суворов Н.Н. / ЖВХО им. Д.И. Менделеева. 1989. Т. 34, № 13. с. 129-131.

204. Левина М.В., Воробьева Л.Г., Осипов Ю.Г. Авт. свид. 203887 СССР (1967); Бюлл. изобр. 1967, № 21.

205. Breant P., Marsais F., Queguiner G. / Synthesis. 1983. P. 822-824.

206. Auwers K. v., Kleiner H. / J. prakt. Chemie. 1927. Bd. 54. S. 67-79.

207. Savrda J., Ziane N. Guilhem J., Wakselman M. J. Chem. Research (S). 1991. P. 36-37.

208. Morikawa A., Sone Т., Asano N. / J. Med. Chem. 1989. Vol. 32, N 1. P. 4246.

209. Morikawa A., Sone Т., Asano N. / J. Med. Chem. 1989. Vol. 32, N 1. P. 4650.

210. Ishida Т., Asano T. / Drugs Fut. 1989. 1989. Vol. 14, N 12. P. 1159-1163.

211. Mitchell L.J. Jr., Burke В., Dagostino E. / Abstrs. of 218-th ACS Natl. Meet. (Aug. 22, 1999, New Orleans). 1999, MEDI 76.

212. Mitchell L.J. Jr., Burke В., Dagostino E. / Abstrs. of 218-th ACS Natl. Meet. (Aug. 22, 1999, New Orleans). 1999, MEDI 76.

213. Gilbert E.E. / Synthesis. 1969. P. 3.

214. Adams J., John B. / Pat. 4456469 USA (1975); Chem. Abstrs. 1976. Vol. 86. 73443.

215. Hidaka H., Matsuura A., Matsuzaki T. / Pat. 6153608 USA (1977); Chem. Abstrs. 1978. Vol. 89. 6238.

216. Levitt G., Pater Richard V. / Pat. 2159156 UK (1988); Chem. Abstrs. 1989. Vol. 111. 57733.

217. Green D.M., Davis R., Ewing W.R., Mason H.J., Ly C., Spada A., Liang G., Cheney D. / Bioorg. Med. Chem. Lett. 1999. Vol. 9, N 17. P. 2539-2545.

218. Ding C. Z., Rovnyak G. C., Misra R. N., Grover G. J., Miller A. V., Ahmed S. Z., Kelly Y., Normandin D. E., Sleph P. G., Atwal K. S / J. Med. Chem. 1999. Vol. 42, N 18. P. 3711-3719.

219. Douglass I.B., Johnson T.B. / J. Amer. Chem. Soc. 1938. Vol. 60, N 7. P. 1486-1489.

220. El-Hevehi Z. / J. prakt. Chemie. 1964. Bd. 23. S. 38-40.

221. Vrie H. de. / Rec. trav. chim. 1951. Vol. 70. S. 696-698.

222. Zincke Т., Frohenberg W. / Ber. 1909. Bd. 42. S. 272.

223. Roblin R.O., Klapp J.W. / J. Amer. Chem. Soc. 1950. Vol. 72, N 9. P. 48904998.

224. Little Jack C., Costales Mark J., Shankar Ravi В., Pews R. Garth, Mariam Kidisti G., Thompson Susan D. / Pat. 5391759 USA (1975); Chem. Abstrs. 1978. Vol. 90. 87462.

225. William Y. R. / Pat. 2744907 USA (1977); Chem. Abstrs. 1978. Vol. 89. 6238.

226. Little Jack C., Mariam Kidisti G., Thibos Patrici A., Thompson Susan D. / Pat. 5382674 USA (1985); Chem. Abstrs. 1985. Vol. 102. 95555.

227. Etienn A., Lomchanbon G., Benard C. / Bull. Soc. chim. France. 1976. N 2. S. 483.

228. Park Y.J., Kim Y.H., Shin H.H. / Chem. Lett. 1992. N 8. P. 1483-1486.

229. Козлов B.B., Вольфсон В.И., Козлова H.A., Тубянская Г.С. / Ж. общей химии. 1962. Т. 32, вып. 9. С. 3373-3376.

230. Ciuffarin Е., Senatore L. / Tetrahedron Lett. 1974. N 17. P. 1635-1636.

231. Cremlyn R.J., Gore P.H., Ikejiani A.O.O., Mottis D.F. / J. Chem. Research. 1982. P. 194-199.

232. Скрыпник Ю.Г., Гиленсон M.M., Безродный Ю.Г. / Ж. орг. химии. 1990. Т. 26, вып. 12. С. 2600-2605.

233. Безродный Ю.Г., Скрыпник Ю.Г. / Ж. орг. химии. 1996. Т. 32, вып. 4. С. 533-539.

234. Литвиненко Л.М., Шатская В.А., Савелова В.А. / ДАН СССР. 1982. Т. 265, вып. 1.С. 100-105.

235. Литвиненко Л.М., Савелова В.А. / Ж. общей химии. 1968. Т. 38, вып. 4. С. 747-756.

236. Литвиненко Л.М., Савелова В.А., Соломойченко Т.Н., Заславский В.Г. Структура, реакц. способы, орг. соедин. и механ. р-ций. Киев: Наукова думка, 1980. С. 3-68.

237. Кустова Е.П., Стерликова И.О., Клюев М.И. / Ж. общей химии. 2002. Т. 72, вып. 8. С. 1330-1332.

238. КустоваЕ.П. Автореф. . канд. дисс. Иваново, 2002.

239. Arcoria A., Ballisteri F.P., Musumarra G. / J. Chem. Soc. Perkin II. 1981. P. 221-227.

240. Maccarone E., Musumarra G., Tomaselli G.A. / J. Org. Chem. 1981. Vol. 39, N22. P. 3286-3288.

241. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Изд. 13-е. Т. 1,2. Харьков: Торогсин, 1997. 543 с. и 592 с.

242. Граник В. Г. Основы медицинской химии. М.: Вузовская книга. 2001. -384с.

243. Scozzafava A., Owa Т., Mastrolorenzo A., Scozzafava A., Supuran С.Т. / Curr. Med. Chem. 2003. Vol. 10, N 11. P. 925-953.

244. Supuran C.T., Casini A., Scozzafava A. / Med. Res. Rev. 2003. Vol. 23, N 5. P. 535-558.

245. Gross P.E., Dickinson R.P., Parry M.G., Randall M.G. / J. Med. Chem. 1985. Vol. 28. P. 1427-1431.

246. Toshimasa Toy'oka, Kazuhiro Imai. / Anal. Chem. 1984. Vol. 56. P. 24612464.

247. Банковский Ю.А., Цируле M.A., Красовска М.Э. / Изв. АН Латвийской ССР. 1971. №2. С. 176-178.

248. Hartman G.D., Halchenko V. / J. Heterocyclic Chem. 1989. Vol. 26, N 11. P. 1793-1798.

249. Hanna N.B., Dimitrijevich S.D., Larson S.B., Robins R.K., Revankar G.R. / J. Heterocyclic Chem. 1988. Vol. 25, N 11. P. 1857-1868.

250. Ohnishi H., Yamaguchi K., Shimada S., Himuro S., Suzuki Y. / Antimicrob. Agents Chemother. 1982. Vol. 22, N 1. P. 250-253.

251. Revankar G.R., Hanna N.B., Imamura N., Lewis A.F., Larson S.B., Finch R.A., Avery T.A., Robins R.K. / J. Med. Chem. 1990. Vol. 33, N1. P. 121-128.

252. Ponticello G.S., Freedman M.B., Habecker C.N., Holloway M.K., Amato J.S., Conn R.S., Baldwin J.J. / J. Org. Chem. 1988. Vol. 53, N 1. P. 9-13.

253. Jones Т.К., Mohan J.J., Xavier L.C., Blacklock T.J., Mathre D.J., Sohar P., Jones E.T.T., Reamer R.A., Roberts F.E., Grabowski E.J.J. / J. Org. Chem. 1991. Vol. 56, N 2. P. 763-768.

254. Chan, M.F., Kois A., Verner E.J., Raju B.G., Castillo R.S., Wu C., Okun I., Balaji V.N /Bioorg. Med. Chem. 1998. Vol. 6,N 12. P. 2301-2308.

255. Yoshino H., Ueda N., Niijima J., Sugumi H., Kotake Y., Koyanagi N., Yoshimatsu K., Asada M., Watanabe T. / J. Med. Chem. 1992. Vol. 35, N 13. P. 2496-2497.

256. Hunt J.T., Manne V., Ding C.Z, Ricca C. / Bioorg. Med. Chem. Lett. 2000. Vol. 10, N3. P. 273-277.

257. Manetti D., Manetti D., Ghelardini C., Bartolini A., Bellucci C., Dei S., Galeotti N., Gualtieri F., Romanelli M. N., Scapecchi S., Teodori E. / J. Med. Chem. 2000. Vol. 43, N 10. P. 1969-1972.

258. Graul A., Castaner J. / Drugs Fut. 1996. Vol. 21, N 12. P. 1224-1227.

259. Barn, D.R., Caulfield W.L., Cottney J., McGurk K., Morphy J.R., Rankovic Z., Roberts B. /Bioorg. Med. Chem. 2001. Vol. 9, N 10. P. 2609-2613.

260. Kawaguchi Т., Nomura S., Tsujihara K. / Pat. 6277992 USA (1986)

261. Wijnberg J.B.P.A., Speckamp W.N., Ubert J.C. / Tetrahedron 1975. Vol. 31. P. 1437-1441.

262. Isaac M., Slassi A., Xin Т., MacLean N., Wilson J., McCallum K., Wang, H., Demchyshyn L. / Bioorg. Med. Chem. Lett. 2000. Vol. 10, N 15. P. 1719-1735.

263. Nishida H., Tomoda H. / Chem. Pharm. Bull. 2001. Vol. 49, N 10. P. 12371239.

264. Wu C., Decker E. R., Blok N., Bui H., Chen Q., Raju В., Bourgoyne A. R., Knowles V., Biediger R. J., Market R. V., Lin S., Dupre В., Kogan T. P., Holland G. W., Brock T. A., Dixon R. A. F. / J. Med. Chem. 1999. Vol. 42, N 22. P. 44854490.

265. Ager E., Iddon В., Suschitzcky H. / J. Chem. Soc. C. 1970. P. 1530-1536.

266. Hiroyishi H., Masaki I., Sachiyo K., Yasuharu S. / Biochemistry. 1984. Vol. 23, N21. P. 5036-5041.

267. Kawaguchi Т., Nomura S., Tsujihara K. / Pat. 3991081 USA (1976); Chem. Abstrs. 1978. Vol. 89. 6238.

268. Cremlyn R.J., Swinbourne F.J., Goulding K.H. Kin-Man Yung. / Phosphorus and Sulphur. 1981. Vol. 10. P. 111-119.

269. Tadashi S. / Pharm. Bull. (Japan). 1953. Vol. 1. P. 339-342; Chem. Abstrs. 1955. Vol. 49. 1029.

270. Cremlyn R.J., Swinbourne F.J., Kin-Man Yung. J. / Heterocyclic Chem. 1981. Vol. 18, N9. P. 997-1006.

271. Kirkpatrick W.E., Okabe Т., Hillyard I.W., Robins R.K., Dren A.T., Novinson T. / J. Med. Chem. 1977. Vol. 20, N 3. P. 386-393.

272. Attia A. / J. prakt. Chemie. 1979. Bd. 321, N 6. S. 1039-1046.

273. Elslager E.F., Colbry N.L., Davoll J., Hutt M.P., Johnson J.L., Werbel L.M. / J. Med. Chem. 1984. Vol. 27. P. 1740-1743.

274. Harada H., Matsushita Y., Yodo M., Nakamura M., Yonetani Y. / Chem. Pharm. Bull. 1987. Vol. 35, N 8. P. 3215-3226

275. Ramage R., Green J. / Tetrahedron Lett. 1987. Vol. 28, N 20. P. 2287-2290.

276. Ramage R, Green J., Blake A.J. / Tetrahedron. 1991. Vol. 47, N 32. P. 63536370.

277. Nesi R, Chimichi S., Sarti-Fantoni P. / J. Chem. Soc. Perkin Trans. I. 1985. P. 1871-1874.

278. Toshio T, Eiji Y., Takanore S., Hiroyoshi H. / Biochemistry. 1983. Vol. 22, N5. P. 1030-1034.

279. Galemmo R.A., Wells B.L., Rossi K.A., Alexander R.S., Dominguez C., Maduskuie T.P., Stouten P.F., Wright M.R. / Bioorg. Med. Chem. Lett. 2000. Vol. 10, N3. P. 301-307.