СИНТЕЗ ПРОИЗВОДНЫХ 5,6,7,8-ТЕТРАГИДРОПИРИДО[3,4-D- И 5,6,7,8-ТЕТРАГИДРОПИРИДО[4,3-D]ПИРИМИДИНОВ тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

Кузнецов, Алексей Юрьевич АВТОР
кандидата химических наук УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ
Москва МЕСТО ЗАЩИТЫ
2006 ГОД ЗАЩИТЫ
   
02.00.10 КОД ВАК РФ
Автореферат по химии на тему «СИНТЕЗ ПРОИЗВОДНЫХ 5,6,7,8-ТЕТРАГИДРОПИРИДО[3,4-D- И 5,6,7,8-ТЕТРАГИДРОПИРИДО[4,3-D]ПИРИМИДИНОВ»
 
Автореферат диссертации на тему "СИНТЕЗ ПРОИЗВОДНЫХ 5,6,7,8-ТЕТРАГИДРОПИРИДО[3,4-D- И 5,6,7,8-ТЕТРАГИДРОПИРИДО[4,3-D]ПИРИМИДИНОВ"



На правах р)

Кузнецов Алексей Юрьевич

СИНТЕЗ ПРОИЗВОДНЫХ 5,6,7,8-ТЕТРАГИДРОПИРИДО[3,4-</]- И 5,6,7,8-ТЕТРАГИДРОПИРИДО[4,3-<АПИРИМИДИНОВ

02.00.10 - Биоорганическая химия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Москва 2006

Работа выполнена на кафедре органической химии Российского Государственного Аграрного Университета-МСХА имени К А Тимирязева и в ООО "АСИНЭКС-Медхим".

Научный руководитель-

кандидат химических наук, доцент Н Л Нам

Официальные оппоненты

доктор химических наук, профессор А В Варпамов

доктор биологических наук, профессор П Б Куралов

Ведущая организация Институт органической химии имени

Н Д Зелинского РАН

Защита диссетрации состоится ^^ " декабря 2006 г в/Г. час на заседапии да I ертационного совета К 220 043 04 при Российском Государствег I Аграрном Университете - МСХА имени К А Тимирязева 1ресу 127550, Москва, Тимирязевская ул , 49

С диссерта! > ожно ознакомиться в ЦНБ МСХА

Авторефер*.. р ~стан " /С "ноября 2006 г

Ученый секретгр

> совета

Диссертацис >го совета ^ П Токмаков

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Являясь структурными аналогами фолиевой кислоты, пиридо[<Цпиримидины эффективно ингибируют

дегидрофолатредуктазу, подавляя рост многих видов патогенных микроорганизмов (Pneumocystis carnii, Toxoplasma gondii, Parasitic protozoa и др.). Огромный интерес пиридо[с1]пиримщшны привлекли к себе в последние годы как селективные ингибиторы протеинкиназ. В настоящее время многие из этих соединений проходят последние стадии клинических испытаний в качестве противоопухолевых препаратов для лечения всех основных видов злокачественных опухолей. Кроме того, большинство таких соединений являются эффективными препаратами для лечения артритов, астмы, остеопороза, сердечной недостаточности, воспаления легких и атеросклероза.

Особый интерес представляют производные тетрагидропиридо[с!]пирими-динов, имеющие заместители у насыщенного атома азота. Среди соединений этого класса обнаружены вещества обладающие высокой противо-тромботической, противоопухолевой, церебральной активностью, а также антагонисты cti - адренорецепторов. При этом направление и эффективность биологического действия тетрагидропиридо[с1]пиримидинов во многом зависит от заместителей в их гетероциклическом ядре. Поэтому разработка новых универсальных методов синтеза тетрагидропиридо[с1]пиримидинов является актуальной проблемой.

Цель работы заключалась в разработке новых универсальных методов синтеза 5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-<1]- и [4,3-<!]пиримидинов, имеющих самые разнообразные заместители в положениях 2,4,6 и 7 пиридо[ё]пиримиди-нового ядра.

Научная новизна и практическая значимость.

1). Разработан универсальный метод синтеза новых 2-замещенных производных 5,6,7,8-тетрагидро-3#-пиридо[3,4-с1]- и [4,3-с1]пиримидин-4-онов на основе реакций амидинов и гуанидинов с 1-бензил- и \-mpem-бутоксикарбонил-замещенными производными З-оксопиперидин-4-этилкарбо-ксилата и 4-оксопиперидин-З-этилкарбоксилата.

2). Предложен новый эффективный метод мягкого аминирования ЪН-тетрагидропиридо[с!]пиримидин-4-онов по положению 4 пиридопиримидиново-го ядра, используя последовательные реакции 3#-тетрагидропиридо[с1]пири-мидип,! пчпп г тТОЭД^1^метансул ,с

имени К.А. Тимирязева ЦН5 имени н и. Железном Фонд научней лидературы

Над

фоновой кислоты и аминами.

3) Разработан новый универсальный метод синтеза разнообразных 6- и 7-арилметилзамещенных производных 5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-{1]- и [4,3-{Цпиримидинов на основе реакций 5,6,7,8-тетрагидропиридо[с1]пиримидинов с альдегидами в присутствии NaHB(OAc)3

4) Предложены методы синтеза новых гетероциклических систем на основе последовательных реакций ЗН-пиридо[с1]пиримидин-4-онов с ангидридом трифторметансульфоновой кислоты, гидразином и различными конденсирующими агентами (1,Г-карбонилдиимидазолом, ß-кетоэфирами, а-хлорацета-нилидами, этилксантогенатом)

В настоящей работе быт еде тан акцент на разработку методов синтеза и изучение свойств именно N-аршшетилзамещешшх тетрагидропиридо[с!]пи-римидинов, которые с одной стороны являются удобными синтонами для получения новых производных этого ряда, а с другой стороны сами интересны как потенциальные биологически активные вешества

В обшей стожности синтезировано и с помошыо элементного анализа, ИК и ЯМР 'Н спектроскопии и масс-спектрометрии доказано строение около 160 новых соединений Среди полученных соединений проведен поиск биологически активных веществ на основе комплексного подхода, включающего стадию предварительного компьютерного скринирования биологической активности (пакет программ SYBYL 7 2, Tripos Inc) и последующих испытаний на биомишенях серотониновых и дофаминовых рецепторов подтипа 5НТ1А и D2 , а также на ряде киназ GSK3B, Р38, Aurora A, CSK, LCK, JNK. и ВТК В результате проведенных испытаний in vitro выявлен ряд соединений, обладающих высоким процентом связывания серотониновых рецепторов (68-82%) и способных, в частности, оказывать терапевтическое воздействие при лечении вегетативных нервных расстройств Кроме того, обнаружено несколько веществ, являющихся селективными ингибиторами протеинкиназ GSK, JNK и LCK

Апробация работы Основные положения диссертации доложены на трех международных конференциях III Международной конференции по химии и биологической активности азотсодержащих гетеропиклов (Черноголовка, 2006), Международной конференщши "Органическая химия от Бутлерова и Бейльштейна до современности" (Санкт-Петербург, 2006) и I Европейском химическом конгрессе (Будапешт, 2006)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 статьи и 3 тезиса докладов на научных конференциях

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 173 машинописных страницах и состоит из введения, литературного обзора по синтезу и свойствам пиридо[<1]пиримидинов, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка цитируемой литературы. Диссертация содержит 9 таблиц и 3 рисунка. Библиография включает 126 ссылок.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Синтез новых 5,б,7,8-тетрагидро-ЗЯ-пиридо[<1]пиримидин-4-онов

Схема 1

з

Исследование реакций Р-кетоэфиров 1 и 2 с амидинами и гуанидинами в присутствии ЫаОЕг показало, что основными продуктами данных реакций с выходом 71-88% являются соответствующие 7-бензил-5,б,7,8-тетрагидро 3Н-пиридо[3,4-с!]пиримидин-4-оны За-ц и 6-бензил-5,6,7,8-тетрагидро-3//-пиридо[4,3-(1]пиримидин-4-оны 4а-] (схема 1) Аналогично были получены с выходом 75-86% новые соединения 1&-А и 8а-ё (схема 1), имеющие легко удаляемые при кистотном гидролизе трет-бутокси карбонильные заместители в положениях 6 или 7 тетрагидропиридопиримидинового ядра

7Ь(А)

Ьос

Ьос

"Ьос

7Ь(С)

Для соединений 3£ и 7Ь были проведении дополнительные иследования с привлечением градиентного метода НБОС 1'Н-'Н (Ю)Установленно, что в области 5н12-13 мд отсутствует ожидаемый сигнал, который можно было бы отнести к группе М-Н Этот факт позволяет утверждать, что в растворе БМСО-06 соединения 31 и 7Ь существуют в енольной форме 31"(С) и 7Ь(С)

2. Синтез 4-амино-5,6,7»8-тетрлгидропнридо[с1]пиримидинов

Наиболее распространенный метод синтеза 4-аминопиридо[с1]пирими-динов включает длительное (10-12 ч) кипячение ЗН-пиридо[с1]гшримидин-4-онов с 5ЮСЬ или РОС13 и последующее нуклеофильное замещение атомов хлора в промежуточно получаемых 4-хлорпиридо[(1]пиримидинах на аминогруппы Протекание последней стадии существенно затрудняется при наличии у 4-хлорпиридо[с1]пиримидинов сильных электроно-донорных заместителей в положении 2 пиридопиримидинового ядра.

С целью разработки эффективного метода синтеза 4-амино-тетрагидропиридо[(1]пиримидинов в мягких условиях нами были изучены реакция соединений За-Г и 4а,Ь,о с ангидридом трифторметансульфоновой кислоты и последующее нуклеофильное замещение СЛТ-группы аминами в 4-

трифторметансульфокситетрагидропиридо[(3]пиримидинах. Проведенное исследование показало, что добавление ангидрида трифторметансульфоновой кислоты к перемешиваемым при -70° С растворам соединений За-Г и 4а,Ь,<1,ё в сухом пиридине и последующее непродолжительное перемешивание реакционной смеси при комнатной температуре позволяет получать трифлатные производные 9а-Г и 10а-11 с выходом 78-92%, Последние при кипячении с аминами в растворе 1,4-диоксана в течение 3 ч образуют 4-аминотетрагидропиридо[с1]пиримидины 11а-я, 12а-и, 13а-1,14а-е, 15,1ба-с, 17 и 18а,Ь с выходом 72-86% (схемы 2 и 3).

Схема 2

N НЧ^Я1

И

13а-1, 14э-о, 16.

«Ж,!»,

-ОС" -ОТ

Мо

о

• -КОДОВОМ», щмлвл НЦВДКаСНаРП

.. «о^ ф .-оо »-оо

о— - ос - -^о -

11: МЯ'й*«

4а,Ь,с1,д

10а-с)

10а Р! = Ме юь (З^Ме,

16 Я з Ме N \l-Me

17 И^Ме МДДО .

18 2-Ру Ш'^-а N^_

10с

Ь- N

4-' М—*

10(1 Я " 2 Ру

•СЬ^

3. Синтез 4-амино-7-арилмстил-5,6,7,8-тстрагндропиридо|3,4-с1]-пиримидинов

Традиционные методы введения заместите пей в положение 7 5,6,7,8-тетрагидопиридо[3,4-с1]пиримидинов включают снятие каталитическим гидрированием бензильной группы при атоме азота в этом положении и последующее алкилирование вторичной аминогруппы хлор- тибо бром-алханами Такие реакции обычно протекают с выходом менее 60% Нами был разработан эффективный метод получения новых 7-арилметилзамещенных производных 5,6,7,8-тетрагидопиридо[3,4-<1]пиримидинов имеющих свободную амино группу в положении 4 на примере соединений 9с и 9(1 на основе реакции восстановительного аминирования альдегидов вторичными аминами в присутствии КаНВ(ОАс)3 (схемы 4 и 5)

Схема 4

от»

СМ.

ОМе

СН-ОН

. Г" ' о

ОЕ»

оме

ГЗ

и-

б

Кипячение трифлатных производных 9с,ё в смеси ДМФА с водным аммиаком в течение 12 ч давало амины 19 и 22 с выходом 70-75%. Гидрирование полученных аминов в растворе метанола в присутствии суспензии палладия на угле удаляло бензильные заместители, давая диамины 20 и 23 с выходом 80 и 88%. Последние легко взаимодействовали с альдегидами в присутствии НаНВ(ОАс)3 при перемешивании при комнатной температуре в растворах СЩСЬ, образуя целевые соединения 21а-г и 24а4 с выходом 72-78%,

Таким образом, нами впервые получены производные типа 21 и 24, содержащие в положении 4 еще один потенциальный реакционный центр — незамещенную аминогруппу. На наш взгляд, такие обьекты перспективны для дальнейших синтетических исследований в области тетрагидропиридо-пиримидинов.

4. Синтез 6-замещсннык-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-й1пирнмидинов

На примере соединений 4а,с,(1 в данной работе продемонстрирована также возможность варьирования разнообразных заместителей в положении 6 тетрагидропиридопиримидиновой системы. С этой целью вначале были синтезированы незамещенные вторичные амины 25а-с (схема 6).

Гидрирование соединений 4а,с,й в растворе метанола в присутствии суспензии палладия на угле удаляло бензильные заместители, приводило к аминам 25а-с с выходом 84-92%. Последние являются удобными исходными соединениями для синтеза разнообразных 6-замещенных производных 5,6,7,8-тетрагидро-ЗЯ-пиридо[4,3-с1]пиримидин-4-онов. Так, например, амины 25а-с

легко взаимодействуют с альдегидами в присутствии ЫаНВ(ОАс)з, образуя 6-арилметилзамешенные 5,6,7,8-тетрагидро-ЗН пиридо[4,3-с1]пиримидин-4оны 2ба-с1 с выходом 74-82% С другой стороны, ацилирование аминов 25а-с хлорангидридами карбоновых кислот позволяет получать разнообразные 6-ацилзамещенные производные 5,6,7,8-тетрагидро-ЗН-пиридо[4,3-с1]пиримидин-4-онов Используя данный тип реакций, нами были впервые получены соединения 27а-е с выходом 80-85%

Схема 6

о о

Я'СН=0

В2К Н/Рй С НЦ-"^"^ №НВ(ОАс>з

4а,с,с1 25а-с

№119 I

MвCN

25 а- Мй Ь

26 а к = ^ Ч0 _ —{' \

О Г

Ме

Ь Й = Ме рг = —р с я " Ме " —<» я - мв Я< .

- -Ьь-/-о - Ьт - сЛо

Таким образом, соединения 25а-с проявляют свойства типичные для вторичных диалкиламинов и являются удобными синтонами дтя получения 6-замещенныхтетрагидропиридо[4,3-сЦпиримидинов

5. Синтез 7-арилметилза,мешенных производных 2-пиридил-5,6,7,8-тетрагидро-ЗН-пиридо[3,4-«1]пиримиди11-4-онов

При поиске потенциальных биологически активных веществ особый интерес вызывали 2-пиридилзамещенные производные тетрагидропиридо[с1]-

пиримидинов, Однако, исследования реакций гидрирования соединений Зе^ показали, что наряду с удалением бензильной группы наблюдается частичное гидрирование пиридинового кольца, что приводит к образованию сложной смеси сразу нескольких продуктов. Поэтому в предшествующей части данной работы нами и был разработан метод синтеза соединений 7а-с, имеющих легко удаляемый при кислотном гидролизе отрет-бутоксикарбонильный заместитель в положении 7 тетрагидропиридопиримидинового ядра.

Схема 7

Кипячение соединений 7а-с в диоксане насыщеном НС1 в течение 2-3 ч приводило к аминам 28а-с с выходом 78-84% Полученные амины тегко взаимодействовали с разнообразными альдегидами в присутствии ЬаНВ(ОАс)3, образуя 7-арилметилзамещенные 2-пиридил-5,6,7,8-гетрагидро-ЗН-пиридо[3,4-<1]пиримидин-4оны 29а-Г, 30а-£ и 31а-1 с выходом 82-87% {схемы 7-9)

Строение соединений 29-31 было подтверждено необходимыми физико-химическими методами, в том числе с помощью ПМР спектроскопии и Е-С/МЙ - спектрометрии.

6. Синтез б-арнлметилзамещеиных производных 2-пириднл-5,6,7,8-тетрагидро-ЗН-пиридо[4,3-с!]пиримидин-4-онов

Аналогично описанному выше способу получения соединений 29а^, 30а-£ и 31а-1 нами были впервые синтезированы с выходом 78 84% изомерные тетрагидропиридопиримидины ЗЗа-Г, 34а-с и 35а-с, также представляющие интерес в качестве потенциальных ингибиторов вРСК рецепторов и киназ (схема 10)

Строение целевых продуктов 33-35 потверждено с помощью ПМР спектроскопии и ЬС/МБ - спектрометрии Общими для всех спектров ПМР является наличие уширенного сигнала Ы-Н в области 5 11-12 ч д и три сигнала СНг групп пиперидинового цикта синглет в области 5н 3,5 м д и два искаженных триплета в области 5н 2,7 м д

Ю

Резюмируя последние две части нашей работы, можно утверждать, что производные 28а-с и 32а-с являются удобными интермедиатами дтя по "чтения 7- и 6-арилметитзамешенных 2-пиридил-гетрагидропиридо[«1]пиримидинов

Схема 10

о I? о

9 о

X Ж.

9 м'^/^мн 14-оюхапа ни'

, НС1

ясно

ЫаНВ(ОАс),

ын

1 I 33а » х. ■>

он

я

34а-с N

О О

14-с1|охапв нн'^-^^мн

-I .

ИС1 -ч.

-О-0""

ясн-о

ИаНВ(ОАс),

Я

к.

7. 4-Амино-2-пиридил-5,6,7,8-тстрагидро1шрндо[11]пиримиднны

На примере 2-пиридилпиримидинонов 29а-31а и 33а, 35а нам представля-тось интересным изучить возможность модификации карбонильных групп в положении 4

Действительно, 5,6,7,8-тетрагидро-ЗН-пиридо[с1]пиримидин-4-оны 29а-31а и 33а, 35а оказались удобными исходными соединениями для синтеза разнообразных 4-аминозамещенных тетрагидропиридо[(1]пиримидинов Так, например, используя последовательные реакции этих соединений с ангидридом трифторметансульфоновой кислоты и аминами, нами впервые были потучены 4-аминотетрагидропиридопиримидины 36,37а-с1, 38, 39а,Ь и 40 с выходами 7486% (схемы 11 и 12)

Схема 11

i.Tf,0

N. 2.MeO(CHj)2NH2

29а

1.Tf,0

2.Me2N(CH2)jNHj

30a

1.Tf,0

2.Et,N(CHj)2NHj

37b N

1-TfjO

2.MejN(CHj)aNHMe F

MeN

37c

1-TfjO

2.МеаЫСНгС(СН3)2СН2ЫНх p

N

1.Tf,0

2.ЕЮ(СН2)гЫН2 F

31a

Строение цечевых продуктов 36-40 также подтвержденно ПМР спектроскопии и 1Х/М8 - спектрометрии Как и следовало ожидать, в отличие от исходных соединений 29а-31а и 33а, 35а в спектрах ПМР вешеств 36, 38-40 сигнал экзоциклического М-Н протона проявляется в более сильном поле приблизительно при 5ц 5-6 м д в виде триплета

8. Синтез новых гетероциклических систем на основе трнфлатных производных 5,6,7,8-тетрагидропиридо|4,3-с!]пиримидинов

Чтобы продемонстрировать возможности синтеза других гетероциклических систем на базе трифлатных производных тетрагидропиридопирими-динов 9а-Г и 10а-с на примере соединения 10с мы изучили взаимодействие с 2-фуранбороновой кислотой, а также реакцию с гидразином

При обработке трифлата Юс 2-фуранбороновой кистотой в гетрагидро-фуране в инертной атмосфере в присутствии поташа и каталитических количеств (5 мольных %) тетракис(трифенилфосфин)палладия с высоким выходом был синтезирован фурилзамехценный продукт 41

Непродолжительное кипячение трифлата 10с с гидразингидратом в этаноле давало 4-гидразино-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-с1]пиримидин 42 с выходом 65% (схема 13). Последний вступал в реакцию с этилксантогенатом калия при кипячении в этаноле, образуя тиол 43 с хорошим выходом. Алкилирование данного тиола 2-хлор-Ы-циклопропилацетамидом по БН-группе давало соединение 44 с выходом 60%. С другой стороны, реакция гидразина 42 с р-кетоэфиром при кипячении в этаноле в присутствии каталитических количеств толуолсульфокислоты приводила к образованию 4-пиразолил-замещенного производного 45 с выходом 67%. Гидразин 42 также легко вступал в реакцию с 1,1'-карбонилдиимидазолом при кипячении в этаноле, образуя с высоким выходом соединение 46. Наконец, кипячение гидразина 42 в триэтилортоформиате в течение 5 часов приводило к незамещенному по триазольному ядру гетероциклу 47 (схема 13).

Следует отметить, что соединения 43,44,46,47 являются представителями новой, неописанной в литературе, трициклической конденсированной системы 6,7,8,9-тетрагидро-1,2,3а,5,8-пентаазациклопента[а]нафталина.

Схема 13

Легкость протекания реакции нуклеофильного замещения СПТ-группы с последующей гетероциклизацией открьшает путь к ц с тому ряду новых гетероциклических систем с различным характером замещения в соответствующем гетероцикле Весьма интересной выглядит возможность снятия бензильной зашиты у насыщенного атома азота в случае соединений 41, 44-47, что открывает возможность их дальнейшей целенаправленной модификации

9. Квантовохимические и масс-спектрометрические исследования

С целью детального изучения свойств полученных новых соединений в работе были проведены квантовохимические исследования молекул пиридо-пиримидинов За-й, 4а-^ З'а-ц, 3"a-g н 4"а-] с помощью

полуэмпирического метода РМЗ Квантовохимические расчеты в частности показали, что протоны в положениях 5, б и 8 молекул За-« и соответствующие им протоны в положениях 5, 7 и 8 молекул 4а-Г имеют примерно одинаковые эффективные заряды Это согласуется с довольно близким сходством спектров ЯМР 'Н изомерных 5,6,7,8-тетрагидропиридопиримидинов За-д и 4а-Г в области 5 24 - 38 мд, где проявляются сигналы протонов их тетрагидропиридинового кольца

Сравнение значений рассчитанных полных энергий молекул наиболее вероятных таутомеров За^З'а-)* и 4а-]/4'а-] показало, что несколько более стабильными (на 0 4-0 5 ккал/моль) являются таутомерные формы Зд^ и 4а-Г Столь незначитечьное различие в энергиях для двух типов наиболее предпочтительных таутомеров указывает на то, что соединения За-й и 4а-Г в растворах при комнатной температуре могут находиться в динамическом равновесии с изомерными им таутомерами 3*а-й и 4'а-Г и вступать в реакции в ОН-формах Получение трифлатов 9а-Г из ЗН-пиридопиримидин-4-онов За-Г экспериментально подтверждает данный вывод В тоже время полная энергия таутомерных форм 3"а^ и 4"а-] выше на 8 1-8 3 ккал/моль и следовательно, присутствие этих таутомерных форм маловероятно

4 а-)

Анализ масс-спектров электронного удара (70 эВ) соединений 13а-1 показал, что независимо от заместителей в положении 4 тетрагидропиридо-пиримидинового ядра, данные соединения имеют общую схему фрагментации, включающую образование фрагмента Ф-187 (схема 14).

Схема 14

Ф-187 ф.

(12-17%)

Квантовохимические расчеты молекулы 13а и ее катион-радикала М(+ •) (КР-13а) показали, что данные молекулы имеют аномально большой валентный угол С(4а)-С(4)-М по-видимому вследствие отталкивания пирролидинового заместителя от атомов водорода пиперидинового кольца. .

При возбуждении молекулы 13а до состояния КР-13а наблюдается некоторое увеличение валентного угла С(4а)-С(4)-К и удлинение связей С(2)-N(3) и С(4а)-С(4) на фоне одновременного укорачивания связи С(8а)-Ы(1). Данные изменения геометрических параметров наглядно иллюстрирует начальную стадию элиминирования фрагментов Л^^-СЫ молекулами тетрагидропиридопиримидинов 13а-| при их возбуждении до состояний катион-радикалов.

КР-13а

С(4Э) - С(4) - N = 127.9°

д(3)" С(4) "

=111.1"

N(1)" С(8а) = 1.3310 А " =1.3688 А С(4)-С(4а) = 1.4443 А

9. Биологические испытания in silico и in vitro*

Важной составляющей данной работы было исследование биологических свойств полученных нами новых соединений В качестве биологических мишеней были выбраны нескочько доступных нам биологических объектов серотониновые рецепторы подтипа 5НТ1А и дофаминовые рецепторы подтипа D2, относящиеся к классу GPCR (G-Protein Coupled Receptor - рецептор, сопряженный с G-бетком), протеазные мишени подтипов DPP IV, CASPASE-3 и Cathepsin, протеинтирозинфосфатаза IB (РТР 1В) и панечь киназ включающая GSK3B, Р38, Aurora A, CSK, LCK, JNK и ВТК киназы

В результате проведенного предварительного компьютерного скрининга с использованием пакета программ SYBYL 7 2 были отобраны 63 соединения За-g. 4a-g, Ila-q, 12a-u, 311, 33e, 33f, 36 37a-d, 39a-b, 40 для тестирования m vitro на протеазных мишенях DPP IV, CASPASE-3 и Cathepsin, а также GPCR-мишенях Испытания m vitro соединений не выявили наличие у них какой- шбо заметной активности по отношению к мишеням DPP IV, CASPASE-3 и Cathepsin Однако три соединения (llq, 12s и 37b) показали процент ингибирования 5НТ1А-рецепторов более 50% (таблица 1)

Полученные данные биологических испытаний впервые показали, что замещенные по положению 2 5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-й]пиримщшны, содержащие в положении 6 заместитель бензильного типа также могут обладать высокой биологической активностью и представлять интерес для создания новых лекарственных препаратов При этом особенно перспективными являются 5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-й]пиримядины, имеющие метальную i ибо диметиламиногруппу или 3-пиршшл в положении 2 тетрагидропиридо[ё]пиримидинового ядра Биологическая активность 5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4^]пиримидинов также сильно зависит и от заместитетей в положениях 4 и 7 Особенно активными являются 5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-й]пиримидины, имеющие вторичные и третичные аминогруппы в положении 4 пиридопиримидинового ядра

• *автор выражает глубокую признательность сотрудникам лаборатории биоскрининга "АЗГЫЕХ-Медхим" Афанасьеву И И, Скосыреву ВС и Малышевой Н С за проведение биологических испытаний

Таблица 1.

Процент ингибирования СРСЯ-рецепторов некоторыми 5,6,7,8-тетрагидропирндо[3,4-с!]пиримидинами

№ Структура Ингибирование 5НТ1А, % Ингибирование Г)2, %

11с 5 0

« Ч Ма.ы-о 68 16

12с он 0 Ма2Ы ы ^ ^ 35 7

12$ сгк N 64 11 .

37а 41 0

37Ь 82 0

Таким образом, на основании биологических тестов нами впервые показано, что введение аминного фрагмента в положение 4 действительно приводит к увеличению процента ингибирования, в первую очередь дтя серотониновых рецепторов подтипа 5НТ1А

При виртуальном скрининге веществ на киназную активность использовался модуль Flex X программного пакета Sybyl 7 2 Отобранные в результате компьютерного скрининга соединения далее испытывались на биологическую активность в опытах in vitro Для тестирования киназной активности были выбраны терапевтически значимые ферменты двух подклассов серин-треони-новые киназы GSK3B, Р38, JNK, Aurora А, и тирозиновые киназы LCK, CSK

Результаты скрининга 163 веществ в отношение протеинкиназ обнаружили высокую активность 3 соединений (см табл 2) Наиболее низкие значения 1С<о показывают соединения ЗЗе, 33f против тирозиновых протеинкиназ, при этом выявлена их селективность по сравнению с серин-треониновыми киназами Напротив, соединение 311 селективно ингибирует серин-треони-новую киназу JNK3

Таблица 2

Тип

Ингибирование, % (IC50, цМ)

Структура

ингибируемой киназы

о

311

JNK

96 (9)

он

ЗЗе

CSK

97 (6)

ме

Me

33f

LCK

99(3)

Полученные результаты ярко демонстрируют возможность использования данного класса соединений с целью поиска новых лекарственных препаратов на основе ингибиторов протеинкиназ.

ВЫВОДЫ

1. На основе реакций 1-бензил-3-оксопиперидин-4-этилкарбоксилата и 1-бензил-4-оксопиперидин-З-этилкарбоксилата с замещенными амидинами и гуанидинами синтезирован ряд новых Ы-бензил-5,6,7,8-тетрагидро-ЗН-пиридо[3,4-ё] и [4,3-ё]пиримидин-4-онов с различными заместителями в положении 2 тетрагидропиридо[с!]пиримидинового ядра и легко удаляемой каталитическим гидрированием бензильной группой в положениях 6 или 7.

2. С помощью реакции 1-теретя-бутоксикарбонил-3-оксопиперидин-4-этилкарбоксилата и 1-/яре/л-бутоксикарбонил-4-оксопиперидин-3-этилкарбоксилата с пиридинкарбоксамидинами получены новые 6- и 7-/и/?ем-бутоксикарбонил-5,б,7,8-тетрагидро-3н-пиридо[3,4-с1] и [4,3-d]-пиримидин-4-оны с легко удаляемой кислотным гидролизом трет-бутоксикарбонильной группой в положениях 6 или 7.

3. Впервые показано, что последовательные реакции 5,6,7,8-тетрагидро-ЗН-пиридо[ё]пиримидин-4-онов с ангидридом трифторметансульфоновой кислоты и аминами позволяют получать в мягких условиях с высоким выходом соответствующие 4-амино-5,6,7,8-тетрагидропиридо[(1]пири-мидины.

4. Разработан универсальный метод введения разнообразных арилметиль-ных заместителей в положения 6 и 7 5,6,7,8-тетрагидропиридо[с1]-пиримидинов, используя последовательно реакции каталитического снятия бензильной защиты и последующего взаимодействия 5,6,7,8-тетрагидро-бН- и 7Н-пиридо[ё]пиримидинов с альдегидами в присутствии NaHB(OAc)3.

5. В общей сложности синтезировано более 150 новых 5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[с!]пиримидинов. Среди полученных соединений проведен поиск , биологически активных веществ с помощью предварительного компьютерного моделирования и последующих испытаний на биомшпенях серотониновых, дофаминовых рецепторов, а также протеазных и киназных мишенях in vitro. В результате проведенных испытаний выявлены 3 соединения, обладающие высоким процентом

связывания серотошшовых рецепторов подтипа 5НТ1А и 3 вещества являющиеся селективными ингибиторами киназ GSK3B, JNK и LCK.

Основное содержание работы изложено в следующих публикациях:

1 А Ю Кузнецов, ЮЛ Холопов, С В.Чапышев, НЛНам. Синтез 4-амино-замещенных производных тетрагидропиридопиримидинов // Известия ТСХА, 2006, Вып 2, С 119-125

2 А Ю Кузнецов, С В Чапышев, Н Л Нам Синтез 7-арилметилзамещенных производных тетрагидропиридопиримидинов // Известия ТСХА, 2006, Вып 3, С 90-97

3 А Ю Кузнецов, С В Чапышев, Н Л Нам Синтез 2-пиридилзамещенных производных тетрагидропиридопиримидинов // Известия ТСХА, 2006, Вып 4,С 135-140

4 А Ю Кузнецов, Ю А Холопов, С В Чапышев, Н Л Нам Новые 5,6,7,8-гетрагидропиридо[с1]пиримидины // Сборник докладов III Международной конференции "Химия и биологическая активность азотсодержащих гетероциклов", Черноголовка, 2006, С 162.

5 A Yu Kuznetsov, N L Nam, S V Chapyshev Синтез новых 5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-{1]пиримидинов // Сборник докладов Международной конференции "Органическая химия от Бутлерова и Бейльштейна до современности", Санкт-Петербург, 2006, С 294

6 М V Kopyshev, A Yu Kuznetsov, N L Nam, S V Chapyshev. Синтез новых 5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-<1]пиримидинов // Book, of Abstracts 1st European Chemisoy Congress, Budapest, 2006, P 329

1,25 печ т

Тир 100 экз.

Зак 780

Центр оперативной полиграфии ФГОУ ВПО РГАУ - МСХА имени К А Тимирязева 127550, Москва, ул Тимирязевская, 44