Сорбционно-спектроскопическое определение аналитов с использованием желатиновых пленок, модифицированных 3,4,5-тригидроксифлуоронами тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ

Анисимович, Полина Владимировна АВТОР
кандидата химических наук УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ
Краснодар МЕСТО ЗАЩИТЫ
2015 ГОД ЗАЩИТЫ
   
02.00.02 КОД ВАК РФ
Автореферат по химии на тему «Сорбционно-спектроскопическое определение аналитов с использованием желатиновых пленок, модифицированных 3,4,5-тригидроксифлуоронами»
 
Автореферат диссертации на тему "Сорбционно-спектроскопическое определение аналитов с использованием желатиновых пленок, модифицированных 3,4,5-тригидроксифлуоронами"

На правах рукописи

Анисимович Полина Владимировна

СОРБЦИОННО-СПЕКТРОСКОПИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНАЛИТОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЖЕЛАТИНОВЫХ ПЛЕНОК, МОДИФИЦИРОВАННЫХ 3,4,5 - ТРИГИДРОКСИФЛУОРОНАМИ

02.00.02 - Аналитическая химия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

2 9 ИЮЛ 2015

Краснодар - 2015 005571Ю1

005571101

Работа выполнена на кафедре аналитической химии факультета химии и высоких технологий Кубанского государственного университета

Научный руководитель: доктор химических наук, профессор

Темердашев Зауаль Ахлоович ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный университет»

Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор

Дмнтриенко Станислава Григорьевна, МГУ имени М.В. Ломоносова

кандидат химических наук, старший научный сотрудник Михайлова Алла Владимировна ГЕОХИ РАН

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Саратовский

государственный университет имени Н.Г.Чернышевского»

Защита диссертации состоится «24» сентября 2015 г. в 16 часов 00 минут на заседании диссертационного совета Д.212.101.16 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный университет» по адресу: 350040, Краснодар, ул. Ставропольская, д. 149, ауд. 3030Л.

С диссертацией и авторефератом можно ознакомиться в научной библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный университет» и в сети Интернет Минобрнауки РФ http://vak.ed.gov.ru и ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный университет» http://www.kubsu.ru

Автореферат разослан июля 2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат химических наук ^ Киселева Н.В.

Актуальность работы. Сочетание концентрирования и определения аналитов с использованием органических реагентов, иммобилизованных в твердой фазе, позволяет улучшить метрологические характеристики методик сорбционно-спектроскопического и тест-определения веществ. Особенно интересны оптически прозрачные сорбенты, позволяющие регистрировать спектры поглощения с помощью несложных аналитических приборов; прозрачные твердофазные реагенты в виде пленок пригодны для визуальной колориметрии и могут быть использованы как чувствительные элементы сенсорных устройств.

Одним из перспективных прозрачных полимерных материалов, используемых для этих целей, является отвержденный желатиновый гель, нанесенный на прозрачную полимерную основу. Развитая поверхность и наличие функциональных групп кислотной и основной природы в структуре желатина способствуют иммобилизации аналитических реагентов, а прозрачность твердого носителя и механическая прочность готовых пленок позволяют создавать на их основе чувствительные оптические сенсоры для тест-определения веществ и применять желатиновые пленки для разработки чувствительных методик сорбционно-спектроскопического определения аналитов.

К настоящему времени число органических аналитических реагентов, иммобилизуемых в отвержденный желатиновый гель для последующего определения аналитов, относительно невелико. Представляется перспективным создание оптически прозрачных пленочных материалов с иммобилизованными в отвержденный желатиновый гель 3,4,5-тригидроксифлуоронами -пирогаллоловым красным (ПГК) и бромпирогаллоловым красным (БПГК), обладающими кислотными свойствами по сульфо- и гидрокси-группам и используемыми для спектрофотометрического определения некоторых тяжелых металлов и белков. Для разработки чувствительных элементов необходимы исследования влияния среды желатинового геля на химико-аналитические свойства реагентов, изучение сорбционной способности

\0

V

желатина по отношению к важнейшим аналитическим реагентам, особенностей аналитических реакций, протекающих в желатиновой среде, и оценка возможности применения полученных модифицированных пленок в сорбционно-спектроскопическом и визуально-тестовом анализе.

Работа выполнена в рамках Госзадания Минобрнауки РФ в рамках базовой части государственного задания (проект 359) и гранта РФФИ № 13-03-96505-р_юг_а с использованием научного оборудования ЦКП «Эколого-аналитический центр».

Цель работы - создание на основе отвержденного желатинового геля, модифицированного 3,4,5-тригидроксифлуоронами, оптически прозрачных чувствительных элементов и исследование возможности их применения для сорбционно-спектроскопического и тест-определения аналитов.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

- изучение сорбционной способности желатина по отношению к 3,4,5-тригидроксифлуоронам, получение и исследование свойств желатиновых пленок, модифицированных 3,4,5-тригидроксифлуоронами;

- исследование модифицирующего действия желатиновой среды на оптические, кислотно-основные и комплексообразующие свойства иммобилизованных реагентов;

- изучение взаимодействия модифицированных желатиновых пленок с белками и тяжелыми металлами на примере РЬ(И) и Си(П);

- получение оптически прозрачных чувствительных элементов на основе модифицированного 3,4,5-тригидроксифлуоронами желатинового геля для сорбционно-спектроскопического и визуального тест-определения аналитов и оптимизация условий проведения индикаторных реакций;

- разработка методик определения РЬ(П) и белков в реальных объектах.

Научная новизна. Получены и исследованы оригинальные прозрачные индикаторные пленки на основе отвержденного желатинового геля, модифицированного ПГК и БПГК, для создания чувствительных элементов для определения аналитов различной природы.

Изучено влияние среды желатинового геля на химико-аналитические свойства 3,4,5-тригидроксифлуоронов - ПГК и БПГК, оценены константы диссоциации реагентов, иммобилизованных в желатиновый гель, установлен состав комплексов и константы равновесия процессов комплексообразования с участием твердофазных реагентов на примере РЬ(П) и Си(П). Получен оптически прозрачный чувствительный элемент для сорбционно-спектроскопического и тест-определения свинца.

На основании исследований взаимодействия иммобилизованного в желатиновую пленку ПГК с белками разработан оптически прозрачный чувствительный элемент для сорбционно-спектроскопического определения общего белка в биологических жидкостях.

Практическая значимость. На основе иммобилизованных в желатиновую пленку ПГК и БПГК получены прозрачные, механически прочные, простые в изготовлении, стабильные при длительном хранении чувствительные элементы для определения РЬ(И) и белков. Индикаторные желатиновые пленки позволяют снизить трудоемкость, способствуют повышению экспрессности анализа, позволяют проводить испытания вне лаборатории и могут многократно использоваться для получения градуировочных зависимостей и построения цветовых шкал сравнения.

Разработана и апробирована методика сорбционно-спектроскопического определения общего белка в биологических жидкостях с использованием чувствительного элемента на основе ПГК, иммобилизованного в отвержденный желатиновый гель.

Разработан способ определения свинца (II) в водных средах с бромпирогаллоловым красным, иммобилизованным в желатиновую пленку, способ защищен патентом РФ.

Отдельные результаты диссертационной работы внедрены в образовательный процесс в КубГУ.

Автор выносит на защиту:

— результаты исследования сорбции ПГК и БПГК в отвержденный желатиновый гель, сорбционные характеристики желатина по отношению к ПГК и БПГК;

- результаты исследований по синтезу и изучению свойств твердофазных реагентов на основе желатиновых пленок, модифицированных 3,4,5-тригидроксифлуоронами (сорбционная способность и морфология их поверхностей);

— результаты исследования оптических и протолитических свойств ПГК и БПГК, иммобилизованных в желатиновую матрицу, а также данные по их комплексообразующим свойствам по отношению к тяжелым металлам на примере Pb(II) к Cu(II);

— методики сорбционно-спектроскопического и визуального тест-определения свинца (II) в водных средах, их метрологические характеристики;

- результаты изучения взаимодействия иммобилизованного в желатиновую матрицу ПГК с белками;

- методику сорбционно-спектроскопического определения общего белка в биологических жидкостях с использованием прозрачного чувствительного элемента на основе ПГК, иммобилизованного в желатиновую матрицу.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены на VIII Всероссийской конференции по анализу объектов окружающей среды "Экоаналитика-2011» (2011 г., Архангельск); III Всероссийском симпозиуме «Разделение и концентрирование в аналитической химии и радиохимии» с международным участием (2011 г., Краснодар); Всероссийской конференции по аналитической спектроскопии с международным участием (2012 г., Краснодар); Школе молодых ученых по аналитической химии (2012 г., Краснодар); II съезде аналитиков России (2013 г., Москва); IV Всероссийском симпозиуме «Разделение и концентрирование в аналитической химии и радиохимии» с международным участием (2014 г., Краснодар).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 статей, 11 тезисов докладов, получен 1 патент на изобретение.

Структура и объем работы. Диссертационная работа изложена на 186 страницах машинописного текста, содержит 20 таблиц и 60 рисунков, состоит из введения, литературного обзора, экспериментальной части, 4 глав обсуждения результатов, общих выводов и списка цитируемой литературы из 419 наименований.

Личный вклад автора состоял в постановке и выполнении экспериментальных исследований, интерпретации данных, написании статей, подготовке докладов и выступлениях на конференциях, практической апробации полученных результатов.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во Введении обоснована актуальность работы, сформулированы ее цели и задачи, научная новизна и практическая значимость.

В Литературном обзоре обсуждены сорбенты, используемые для сорбционно-спектроскопического определения аналитов, способы детектирования аналитического сигнала с использованием твердофазных сорбентов, подходы к иммобилизации реагентов. Отдельное внимание уделено оптически прозрачным полимерным материалам, в том числе отвержденному желатиновому гелю, как матрице для проведения аналитических реакций. Рассмотрено влияние организованных сред на оптические, протолитические и комплексообразующие свойства иммобилизованных реагентов, обсуждены протолитические и комплексообразующие свойства представителей 3,4,5-тригидроксифлуоронов - ПГК и БПГК.

В Экспериментальной части описаны объекты исследования, материалы, реактивы и методики проведения анализа. Использованные в экспериментальных исследованиях реактивы имели квалификацию «хч» или «чда»; для определения белка использовали стандартные образцы -калибраторы «Альбумин» и «Общий белок» (ООО «Агат-Мед» сер. 11409/230514). В работе использовали бесцветные, прозрачные и

механически прочные пленки, полученные на основе фотографической пленки для офсетной печати фирмы AGFA с толщиной желатинового слоя ~ 20 мкм. Оптическую плотность получаемых пленок измеряли на спектрофотометре UV-1800 («Shimadzu», Япония). Поверхностный слой желатина с иммобилизованными реагентами и их комплексами с металлами изучали с помощью сканирующего электронного микроскопа JEOL JSM-7500F («JEOL», Япония) и волно-дисперсионного рентгенофлуоресцентного анализатора ARL-Perfom'X («Thermo Fisher Scientific», США). Элементные определения металлов при изучении процессов комплексообразования проводили с использованием атомно-абсорбционного спектрометра АА-6800 («Shimadzu», Япония). Визуальную оценку интенсивности окраски полученных пленок проводила группа из 14-15 независимых наблюдателей.

Сорбция ПГК и БПГК в отвержденный желатиновый гель. Время иммобилизации реагентов в отвержденный желатиновый гель устанавливали по результатам кинетических исследований. Равновесие в системе «раствор/желатиновая пленка» для обоих реагентов наступает примерно через 50 мин контакта пленок с раствором (рис. 1). Оптическая плотность полученных пленок максимальна в диапазоне pH от 2.5 до 4.5 (рис. 2).

2.о ■

1.5 ■

1,0 •

0.5 ■

0.0 ■

:0 40 60 S0 100 120

Т. MIIH

Рисунок 1. Зависимость оптической

А

2.0 -1,?

1.0 -0,5 -0.0

S pH

Рисунок 2. Зависимость оптической

плотности желатиновых пленок от времени плотности желатиновых пленок от pH выдерживания в 2.0-10"^ М растворах раствора после выдерживания в 2.0-1 (Г4М

БПГК, 580 нм (1) и ПГК, 540 нм (2), pH 4.5 растворе БПГК (X 580 нм)

Степень извлечения БПГК и сорбционная емкость желатина по отношению к БПГК выше, чем к ПГК. Изотермы адсорбции имеют вид, характерный для непористых сорбентов с однородной поверхностью, полученные экспериментальные данные аппроксимировали изотермой Фрейндлиха. В присутствии ионогенных ПАВ (катионного - цетилпиридиний хлорида, анионного - додецилсульфат натрия) сорбционная способность желатина и степень удерживания реагентов заметно снижается.

Влияние желатиновой матрицы на протолитические свойства реагентов. Пирогаллоловый красный и бромпирогаллоловый красный относятся к 3,4,5-тригидроксифлуоронам и обладают кислотными свойствами по сульфо- и гидрокси-группам в положении 3,4,5:

Пирогаллоловый красный Бромпирогаллоловый красный

Подтверждением взаимодействия красителя со средой желатинового геля из растворов с различным рН является батохромное смещение максимумов поглощения на 15-20 нм в спектрах поглощения реагентов, иммобилизованных в желатиновую пленку. Аналогичный эффект батохромного смещения наблюдается и в присутствии в растворе КПАВ.

Результаты исследования влияния кислотности среды на спектральные характеристики модифицированных пленок позволили предположить, что в случае обоих реагентов в желатиновую матрицу преимущественно сорбируется форма Н3Я", что согласуется со значением изоэлектрической точки используемого желатина, равной 4.5.

Кислотно-основное равновесие в гетерогенной системе «раствор/желатиновая пленка» в общем виде описывали уравнением реакции:

нк<=>к+н\

где чертой над формулами обозначены частицы, находящиеся в фазе желатина (заряд частиц красителя опущен). Оценку «кажущихся» констант диссоциации К" проводили спектрофотометрическим методом с контролем рН фазы раствора при 1=0.1 (КС1), значения рК" рассчитывали по формуле

рк°; = Рн+, (1)

Аня

где Ак и Апл - оптические плотности пленок, содержащих только форму И. или Ш1; А - оптическая плотность пленки, содержащей обе формы.

Проверку постоянства значений констант в растворе и плёнке проводили путем изучения зависимости логарифма индикаторного отношения ^([НАп]/[Ап~]) от рН. Во всех случаях были получены линейные зависимости с коэффициентами корреляции, близкими к единице, что подтверждает постоянство значений рКа как для растворов, так и для пленок.

Как видно из табл. 1, иммобилизация реагентов в отвержденный желатиновый гель приводит к усилению кислотных свойств реагентов. Этот эффект коррелирует с эффектом, наблюдаемым в присутствии КПАВ.

Таблица 1. Константы ионизации ПГК и БПГК в растворах и двухфазной системе «раствор/желатиновая пленка» (Р = 0.95, п = 15-20)

Среда Значения рКс реагентов в различных средах

Пирогаллоловый красный Бромпирогаллоловый красный

Без ПАВ КПАВ АПАВ Без ПАВ КПАВ АПАВ

рК»1 раствор 2.8 ±0.1 2.6 ±0.1 3.1 ±0.1 1.6 ±0.2 - -

пленка 2.3 ±0.1 2.2 ±0.1 2.2 ± 0.2 - - -

РК„ 2 раствор 6.6 ±0.1 5.6 ±0.3 6.6 ± 0.2 4.6 ±0.1 4.0 ±0.2 4.9 ±0.2

пленка 4.7 ±0.1 4.8 ± 0.2 5.0 ± 0.2 2.4 ±0.1 2.1 ±0.2 2.3 ±0.3

рКа 3 раствор 10.4 ±0.3 10.8 ±0.1 10.2 ±0.1 9.3 ± 0.2 8.9 ±0.3 9.4 ±0.1

пленка - - - 4.9 ±0.1 4.8 ±0.1 5.1 ±0.2

РКа 4 раствор - - - 11.2 ±0.2 11.0 ±0.3 11.3 ±0.1

пленка - - - - - -

Влияние желатиновой матрицы на комплексообразующие свойства 3,4,5-тригидроксифлуоронов. Комплексообразование в гетерофазных системах «раствор/желатиновая пленка» и влияние желатина на комплексообразующие свойства ПГК и БПГК изучали на примере РЬ2+ и Си2+, с которыми 3,4,5-тригидроксифлуороны образуют интенсивно окрашенные комплексы. Данные, полученные при изучении поверхностного слоя желатина, показывают, что реагенты и их комплексы равномерно распределяются по поверхности пленки (рис. 3). Результаты исследований, полученных при поперечном сканировании желатиновых пленок, свидетельствуют, что процесс комплексообразования происходит в большей степени в поверхностном слое желатина. Ни реагенты, ни их комплексы не проникают в слой полимерной матрицы.

Рисунок 3. Микрофотографии поверхностного слоя желатина с иммобилизованным комплексом РЬ - БПГК

Модифицированные желатиновые пленки при погружении в растворы, содержащие РЬ(П) или Си(П), приобретают синюю окраску за счет образования комплексных соединений, при этом в спектрах наблюдаются максимумы поглощения при 580-610 нм. После 40 мин контакта твердофазных реагентов с раствором оптическая плотность металлокомплексов в пленках меняется незначительно, равновесие в гетерогенных системах с участием обоих реагентов наступает через 60 мин. Наибольшие значения оптической плотности наблюдаются в диапазоне рН 3.0-4.5

Состав и устойчивость комплексов РЬ" и Си с ПГК и БПГК. образующихся в растворах с различной кислотностью и в двухфазной системе «раствор/желатиновая пленка», устанавливали методами Асмуса, изомолярных серий и молярных отношений. Установлено, что стехиометрическое соотношение в составе комплексов Ме:ПГК и Ме:БПГК в растворах равно 1:1,

в случае комплексообразования в гетерогенной системе «раствор/желатиновая пленка» число координируемых Ме2+ частиц реагентов не изменяется. Условную константу (/?') равновесия процесса взаимодействия Ме(П) с твердофазным реагентом (заряд частиц опущен)

Ме + Я о МеК

?

рассчитывали как: в' =-, (2)

с г *

^ Не ^ /?

где СМе - остаточная концентрация металла в растворе после извлечения пленок с реагентом, СМеК и Ск* - молярные концентрации комплекса и несвязанного в комплекс реагента в объемной фазе желатинового геля. Условные константы равновесия процессов комплексообразования, а также значения коэффициентов распределения (О) металлов в двухфазной системе «раствор/желатиновая пленка» и степени извлечения (II) металлов одним образцом индикаторной пленки (площадь 1.4 см2) представлены в таблице 2.

Таблица 2. Комплексообразующие свойства ПГК и БПГК, иммобилизованных в желатиновую пленку

Среда Ме рн Б Ме:Я е-10"4 (л/(моль-см) (п = 5-7, Р = 0.95)

БПГК

РЬ 3.5 1:1 0.32 ±0.02 5.1 ±0.1

Раствор Си 1:1 0.86± 0.07 5.7 ±0.2

РЬ 4.5 1:1 0.34 ±0.02 5.2 ± 0.2

Си 1:1 1.03 ±0.03 6.0 ±0.1

РЬ 3.5 112 ±14 6.0 ±0.8 1:1 0.63 ±0.20 2.7 ±0.2

Пленка Си 220 ±4 11.0 ±1.0 1:1 0.97 ±0.09 5.6 ±0.1

РЬ 4.5 159 ±17 8.3 ±1.0 1:1 1.08 ±0.12 3.2 ±0.1

Си 323 ±4 15.0 ±1.0 1:1 1.37 ±0.10 5.9 ±0.3

ПГК

РЬ 3.5 0.030±0.004 4.2±0.1

Раствор Си 0.17 ±0.04 4.6 ±0.2

РЬ 4.5 1:1 0.040 ±0.004 4.7 ±0.1

Си 1:1 0.36 ±0.04 5.1 ±0.3

РЬ 3.5 134 ±14 9.2 ±0.9 1:1 0.14 ±0.03 1.7 ±0.2

Пленка Си 390 ±9 18.0 ±1.0 1:1 0.33 ±0.09 4.5 ± 0.2

РЬ 4.5 243 ± 10 12.1 ±2.0 1:1 0.16± 0.02 1.9 ±0.1

Си 613±13 26.0 ±1.0 1:1 0.44 ±0.07 4.9 ±0.2

Влияние среды желатина проявляется в случае свинца (II) и меди (II) по-разному. Несмотря на «кажущееся» снижение устойчивости комплексов свинца при переходе реагентов из раствора в желатиновую матрицу, индикаторная пленка с иммобилизованными ПГК и БПГК способна эффективно извлекать и удерживать исследуемые ионы, что свидетельствует о перспективности использования указанных материалов в качестве оптически прозрачного твердофазного реагента. Бромпирогаллоловый красный образует более прочные комплексы с обоими металлами и в растворах, и в пленках по сравнению с пирогаллоловым красным.

Анализ проб, содержащих свинец и медь, должен предполагать определение одного из компонентов после маскирования второго с последующим определением их суммы. Экспериментально установлено, что в диапазоне суммарных концентраций металлов от 1.010-6 до 8.0' 10~5 М оптическая плотность металлокомплексов в пленках является величиной аддитивной.

По масштабам выброса в атмосферу свинец занимает ведущее место среди токсичных микроэлементов, поэтому контроль за содержанием этого металла, токсичного во всех своих формах нахождения в окружающей среде, - одна из актуальных задач в области охраны окружающей среды. Выбор того или иного метода определения обусловлен содержанием свинца в анализируемом объекте, а также необходимой точностью, временем определения и технической оснащенностью лаборатории.

С учетом изложенных выше результатов по взаимодействию иммобилизованных в желатиновую матрицу 3,4,5-тригидроксифлуоронов с тяжелыми металлами на примере РЬ(П) и Си(П), нами изучена возможность сорбционно-спектроскопического и тест-определения свинца (II).

Для выбора оптимальных условий визуального тестирования готовили цветовые шкалы с шагом, равным 2, в диапазоне концентраций свинца (II) от 1.0-10"7до 1.0-10"4 М, варьируя рН и концентрацию реагента в модифицирующем растворе. В оптимальных условиях интервал ненадежности обнаружения РЬ(П)

составляет 1.9—3.7 мкМ, относительная ширина интервала соответствует значению 0.95. Узкий интервал ненадежности подтверждает хорошие аналитические свойства выбранной тест-реакции и свидетельствует об устойчивости тест-системы к внешним воздействиям. Экспериментальную кривую эффективности одинаково хорошо описали функции нормального, логнормального распределений и функция распределения Вейбулла, что характерно для тест-систем с узким интервалом ненадежности. Значения предела обнаружения Ст;п и предела определения Сщп РЬ(П) составили 3.2 мкМ и 3.9 мкМ соответственно.

Проверку правильности методики проводили на модельных растворах (табл. 3), в которые погружали по три образца БПГК-пленок, содержание свинца устанавливали 5 наблюдателей с помощью цветовой шкалы, полученной для концентраций РЬ(П): 0; 4.0; 8.0; 16; 32; 64 мкМ (рис. 4).

Рисунок 4. Цветовая шкала, полученная после выдерживания пленок в растворах, содержащих РЬ(П): 0; 4.0; 8.0; 16; 32; 64 мкМ

Таблица 3. Результаты тестового определения свинца(П) в стандартных растворах (п = 15)

Введено Срьш>'106,М 4.8 6.0 12 19 38 50

Найдено СрьшгМ6, М 4.4 6.1 11 18 40 43

Интервал разброса результатов ДСРЬ(Щ-106,М 4.0-8.0 4.0-8.0 8.0-16 16-32 32-64 32-64

В оптимальных условиях сорбционно-спектроскопического определения зависимость оптической плотности пленок от концентрации свинца при рН 4.5 имеет линейный характер в диапазоне от 1-10~6 до МО"4 М, предел обнаружения 3.8-10~7 М.

Разработанные методики сорбционно-спектроскопического и визуального тест-определения свинца апробировали при анализе воздуха рабочей зоны

типографии ООО «Биотех-Юг» (г. Краснодар) и завода ЗАО «КубаньЦветмет» (п. Холмский Краснодарского края). После кислотного вскрытия фильтров и создания необходимой кислотности в полученные растворы погружали индикаторные пленки, концентрацию свинца оценивали визуально и спектрофотометрически. В табл. 4 приведены полученные результаты в пересчете концентраций на реальный объект.

Таблица 4. Результаты сорбционно-спектроскопического и визуального тест-определения РЬ(П) в воздухе рабочей зоны

Объект № пробы Срь(п> в воздухе, мг/м3 (ПДК свинца в воздухе рабочей зоны 0.01 мг/м3)

визуальное тестирование (интервал разброса результатов, п = 15) индикаторные пленки (СФ) (Р = 0.95, п = 3) ААС

ЗАО НПП «КубаньЦветМет» 1 0.041 (0.032+0.064) 0.035 ± 0.003 0.035 ± 0.002

2 0.039 (0.032+0.064) 0.034 ±0.002 0.033 ± 0.002

3 0.020 (0.016+0.032) 0.022 ± 0.003 0.021 ± 0.002

4 0.010 (0.008+0.016) 0.011 ±0.002 0.011 ±0.001

Типография ООО «Биотех-Юг» 1 0.023 (0.021+0.042) 0.021 ± 0.003 0.021 ± 0.003

2 0.009 (0.008+0,016) 0.013 ± 0.003 0.011 ±0.003

3 0.010 (0.008+0.016) 0.009 ± 0.002 0.009 ±0.001

4 0.007 (0.005+0.010) 0.008 ± 0.002 0.008 ± 0.002

Взаимодействие 3,4,5-тригидроксифлуоронов с белками. Среди органических красителей для определения белка в биологических жидкостях наиболее широко используется ПГК. При проведении реакции ПГК с белком в среде сукцинатного буфера с рН 2.5 в присутствии молибдат-ионов наблюдается заметный батохромный сдвиг максимума поглощения (рис. 5).

Рисунок 5. Спектры поглощения растворов ПГК в сукцинатном буферном растворе (рН 2.5) в отсутствие (1) и в присутствии альбумина (2). Смо(У1) = 4.0'10~

5М; Сальбумина= 1.0 г/л

Наблюдаемый спектральный эффект в растворах рядом авторов объясняется образованием тройного комплекса Мо(\Т)-ПГК-белок. Аналогичный батохромный сдвиг наблюдался нами при замене ПГК на БПГК.

Исследование реакции иммобилизованного в желатиновый гель ПГК с белком показывает, что молекулы белка не проникают в желатиновый слой, и взаимодействие в гетерогенной системе «раствор/желатиновая пленка» происходит в растворе. В присутствии белка пленки сохраняют прозрачность, интенсивность синей окраски пленок уменьшается с увеличением концентрации белка в растворе.

Для сорбционно-спектроскопического определения общего белка в биологических объектах оптимальной является концентрация красителя в исходных растворах в диапазоне от 1.0-1 (Г4 до 1.0-10"3 М. Для дальнейших исследований, с учетом динамики формирования аналитического сигнала, выбрано время контакта модифицированных ПГК желатиновых пленок с раствором белка в сукцинатном буфере с рН 2.5 в присутствии 4.0' 10~5М Мо(У1) 20 мин. Метрологические характеристики методики определения белка с пирогаллоловым красным, иммобилизованным в отвержденный желатиновый гель, приведены в табл. 5.

Таблица 5. Метрологические характеристики методик определения белка с пирогаллоловым красным в биологических объектах (Р = 0.95, п = 6)

Среда Уравнение зависимости аналитического сигнала от концентрации, С белка, г/л Диапазон определяемых концентраций, г/л г с г/л

Раствор А=(0.50±0.01)хС + (0.020±0.001) 0.05-1.20 0.997 0.020

Желатиновая пленка А=(8.20±0.02)хС - (0.040±0.001) 0.007-0.070 0.996 0.006

Предлагаемая методика позволяет расширить диапазон определяемых концентраций и снизить предел обнаружения общего белка в биологических жидкостях. Проверку правильности определения общего белка проводили на

модельных растворах (табл. 6), методика апробирована на образцах плазмы крови (табл. 7).

Таблица 6. Результаты определения общего белка в модельных растворах (Р = 0.95, п = 5)

Проба Введено х-102, г/л Найдено (х±4С™Х))-Ю2,г/л •VII вг

1 2.0 2.2±0.2 0.06

2 4.0 3.8±0.3 0.04

3 5.0 4.8±0.3 0.06

Таблица 7. Результаты определения общего белка в различных образцах плазмы крови * (Р = 0.95, п = 5)

Образец плазмы Введено (х), г/л , , ИР.ГгаСхХ , Найдено (х ± ——), г/л Ун вг

крови

1 - 43±3 0.05

30 67±5 0.06

2 - 40±3 0.05

20 54±6 0.08

3 - 41±4 0.07

10 49±4 0.06

*Данные таблицы приведены в пересчете концентраций на реальный объект.

Полученные результаты свидетельствуют о возможности использования прозрачных сорбентов на основе отвержденного желатинового геля, модифицированного пирогаллоловым красным и бромпирогаллоловым красным, для сорбционно-спектроскопического и визуального тест-определения аналитов в водных средах. Прозрачность, механическая прочность твердофазных реагентов, простота изготовления и стабильность окраски при длительном хранении делают разработанные чувствительные элементы удобными для определения аналитов в объектах окружающей среды и в сложных биологических объектах.

Выводы

1. Изучены особенности получения оригинальных прозрачных чувствительных элементов на основе желатиновых пленок, модифицированных пгк и БПГК, для определения аналитов различной природы. Определены время установления гетерогенного равновесия в системе «раствор/желатиновая пленка» и характер влияния этилового спирта и поверхностно-активных веществ на процесс сорбции ПГК и БПГК. Максимальная оптическая плотность модифицированных желатиновых пленок наблюдается в диапазоне рН от 2.5 до 4.5.

2. Исследовано модифицирующее действие желатиновой матрицы на оптические, кислотно-основные и комплексообразующие свойства иммобилизованных ПГК и БПГК. Наблюдаемое батохромное смещение максимумов поглощения диссоциированных форм реагентов (20 нм) свидетельствует о возможности образования в двухфазной системе «раствор/желатиновая пленка» ионных ассоциатов. Установлены значения «кажущихся» констант диссоциации ПГК и БПГК, иммобилизованных в отвержденный желатиновый гель. Показано, что среда желатинового геля, как и КПАВ, усиливает кислотные свойства ПГК и БПГК, а присутствие АПАВ в пределах погрешности не влияет на кислотные свойства изученных 3,4,5-тригидроксифлуоронов.

3. Изучены реакции комплексообразования закрепленных на желатиновой матрице ПГК и БПГК с тяжелыми металлами (РЬ(П) и Си(П)). В оптимизированных условиях установлены стехиометрические соотношения Ме:ПГК и Ме:БПГК в растворах (1:1), при извлечении металлокомплекса из раствора в желатиновую матрицу число координируемых Ме2+ частиц реагентов не изменяется. Оценено влияние среды желатинового геля на константы равновесия образования комплексных соединений в гетерогенных системах. Исследована морфология поверхности желатиновых пленок, модифицированных ПГК и БПГК и их металлокомплексами.

4. Изучено взаимодействие модифицированных ПГК и БПГК желатиновых пленок с белками, оптимизированы условия проведения индикаторной реакции в слое твердого сорбента, выбран состав буферного раствора, концентрация реагента для иммобилизации и время контакта модифицированных желатиновых пленок с растворами белка.

5. Разработаны методики сорбшшнно-спектроскопического и тест-определения свинца (II) в водных средах с использованием полученных сорбционных материалов. Указанные методики успешно апробированы для определения свинца (II) в воздухе рабочей зоны промышленных предприятий. Разработана и апробирована методика сорбционно-спектроскопического определения общего белка в биологических жидкостях на основе ПГК, иммобилизованного в отвержденный желатиновый гель.

Основные результаты диссертационной работы изложены в следующих публикациях:

1. Темердашев, З.А. Тест-определение свинца с помощью тонкослойных сорбентов РИБ-Металл-Тест / З.А. Темердашев, В.М. Островская, Т.Б. Починок, [и др.] // Экологический вестник научных центров Черноморского экономического сотрудничества (ЧЭС). - 2010. - № 2. - С. 80.

2. Починок, Т.Б. Использование тонкослойных сорбентов на основе пирогаллолового красного для тест-определения свинца / Т.Б. Починок, В.М. Островская, П.В. Тарасова (Анисимович), [и др.] // Экологический вестник научных центров Черноморского экономического сотрудничества (ЧЭС). -2010. - № 3. - С. 37.

3. Тарасова (Анисимович), П.В. О возможности создания оптического сенсора на основе отвержденного желатинового геля для определения свинца / П.В. Тарасова (Анисимович), М.А. Гостева // Всероссийская научная школа по аналитической химии. Материалы научной школы. Краснодар. — 2011. - С. 264.

4. Темердашев, З.А. Исследование иммобилизации бромпирогаллолового красного в желатиновую матрицу и оценка возможности создания на ее основе оптически прозрачного сенсора для определения металлов / З.А. Темердашев,

19

Т.Б, Починок, П.В. Тарасова (Анисимович), М.А. Гостева // Аналитика и контроль. - 2012. - Т. 16. - № 1. - С. 39.

5. Починок, Т.Б. Сорбционно-спектроскопическое определение РЬ(П) с бромпирогаллоловым красным, иммобилизованным в отвержденный желатиновый гель / Т.Б. Починок, П.В. Анисимович, З.А. Темердашев, Е.А. Решетняк // Аналитика и контроль. - 2013. - Т. 17. - № 4. - С. 477.

6. Анисимович, П.В. Визуальное тест-определение РЬ(П) с использованием индикаторной желатиновой пленки / П.В. Анисимович, З.А. Темердашев, Т.Б. Починок, [и др.] // Аналитика и контроль. - 2014. - Т. 18. - №3. -С. 328.

7. Анисимович, П.В. Иммобилизация пирогаллолового красного желатиновым гелем и использование композита для определения общего белка / П.В. Анисимович, З.А. Темердашев, Т.Б. Починок, Е.А. Решетняк // Сорбционные и хроматографические процессы. - 2015. - Т. 15. - Вып.2. - С. 724.

8. Темердашев, З.А., Тарасова (Анисимович) П.В., Починок, Т.Б. Сорбционно-спектрофотометрический способ определения свинца (II) // Патент РФ на изобретение № 2529660. 2014.

9. Починок, Т.Б. Сорбционно-спектрофотометрическое определение свинца с использованием пирогаллолового красного и его производных, иммобилизованных в желатиновую матрицу / Т.Б Починок, П.В. Тарасова (Анисимович), М.А. Гостева, В.М. Островская // VIII Всероссийская конференция по анализу объектов окружающей среды «Экоаналитика-2011». Тезисы докладов. - С. 229.

10. Починок, Т.Б. Сорбция пирогаллолового красного и его производных в желатиновую матрицу / Т.Б Починок, П.В. Тарасова (Анисимович), М.А. Гостева, В.М. Островская // Разделение и концентрирование в аналитической химии и радиохимии. Материалы III Всероссийского симпозиума. Краснодар. 2011.-С. 76.

11. Починок, Т.Б. Тонкослойный сорбент на основе бромпирогаллолового красного для определения свинца методом твердофазной спектроскопии / Т.Б. Починок, З.А. Темердашев, П.В. Тарасова (Анисимович), М.А. Гостева // Разделение и концентрирование в аналитической химии и радиохимии. Материалы III Всероссийского симпозиума. Краснодар. 2011. - С. 129.

12. Починок, Т.Б. Протолитические свойства бромпирогаллолового красного, сорбированного в отвержденный желатиной гель / Т.Б. Починок, М.А. Гостева, П.В. Тарасова (Анисимович), A.B. Акимова // Всероссийская конференция по аналитической спектроскопии с международным участием. Материалы конференции. Краснодар. 2012. - С. 257.

13. Тарасова (Анисимович), П.В. К вопросу об аддитивности оптической плотности прозрачного оптического сенсора на основе отвержденного желатинового геля / П.В. Тарасова (Анисимович), Т.Б. Починок // Всероссийская конференция по аналитической спектроскопии с международным участием. Материалы конференции. Краснодар. 2012. - С. 271.

14. Тарасова (Анисимович), П.В. Спектрофотометрическое исследование реакции Cu(II) с бромпирогаллоловым красным, иммобилизованным в отвержденный желатиновый гель / П.В. Тарасова (Анисимович), Т.Б. Починок, A.B. Акимова // Всероссийская конференция по аналитической спектроскопии с международным участием. Материалы конференции. Краснодар. 2012. - С. 272.

15. Тарасова (Анисимович), П.В. Оценка аддитивности аналитического сигнала прозрачного сенсора на основе желатина, иммобилизованного бромпирогаллоловым красным / П.В. Тарасова (Анисимович), Т.Б. Починок, О.Ю. Ломакина, Т.С. Смоленская // Второй съезд аналитиков России. Тезисы докладов. Москва. 2013. - С. 55.

16. Анисимович, П.В. Сорбционно-спектроскопическое определение общего белка с использованием твердого носителя - желатинового геля / П.В. Анисимович, Т.Б. Починок, Ю.В. Коркишко, К.Г. Бадалян // Разделение и концентрирование в аналитической химии и радиохимии. Материалы IV

Всероссийского симпозиума с международным участием. Краснодар. 2014. - С. 22.

17. Анисимович, П.В. Протолитические и комплексообразующие свойства красителей группы триоксифлуоронов, иммобилизованных в желатиновую матрицу / П.В. Анисимович, Т.Б. Починок, О.Ю Ломакина // Разделение и концентрирование в аналитической химии и радиохимии. Материалы IV Всероссийского симпозиума с международным участием. Краснодар. 2014. - С. 23.

18. Анисимович, П.В. Метрологические характеристики визуального тест-определения свинца на твердом носителе- отвержденном желатиновом геле / П.В. Анисимович, Т.Б. Починок, Т.С. Смоленская // Разделение и концентрирование в аналитической химии и радиохимии. Материалы IV Всероссийского симпозиума с международным участием. Краснодар. 2014. - С. 24.

19. Анисимович, П.В. Модифицированные 3,4,5-тригидроксифлуоронами желатиновые пленки для сорбционно-спектроскопического и тест-определения аналитов / П.В. Анисимович, Т.Б. Починок // Разделение и концентрирование в аналитической химии и радиохимии. Материалы IV Всероссийского симпозиума с международным участием. Краснодар. 2014. - С. 25.

Автор выражает глубокую и искреннюю благодарность к.х.н. Т.Б. Починок за оказанное содействие при постановке, выполнении и обсуждении результатов данного исследования; к.х.н. Е.А. Решетняк за участие в обсуждении результатов исследований и предоставленные образцы желатиновых пленок.

Автореферат

Анисимович Полина Владимировна

СОРБЦИОННО-СПЕКТРОСКОПИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНАЛНТОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЖЕЛАТИНОВЫХ ПЛЕНОК, МОДИФИЦИРОВАННЫХ 3,4,5 - ТРИГИДРОКСИФЛУОРОНАМИ

Формат 60х841/16. Бум. тип. № 1. Уч. изд. л. 1,5. Тираж 100 экз. Заказ № 2297.1 Издательско-полиграфический центр Кубанского государственного университета 350040, г. Краснодар, ул. Ставропольская, 149.