Стереоизомерные комплексы платины(II), платины(IV) и палладия(II) с гидроксиаминокислотами - серином, треонином и аллотреонином тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.01 ВАК РФ

На правах рукописи

КОВТУНОВА Лариса Михайловна

СТЕРЕОИЗОМЕРНЫЕ КОМПЛЕКСЫ ПЛАТИНЫ(Н), ПЛАТИНЫ(1У) И ПАЛЛАДИЯ(П) С ГИДРОКСИ АМИНОКИСЛОТ АМН - СЕРИ НОМ, ТРЕОНИНОМ И АЛЛОТРЕОНИНОМ

02.00.01 - неорганическая химия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

- 9 ЛЕК 2010

Новосибирск 2010

004616457

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Новосибирский Государственный Университет»

Научный руководитель

доктор химических наук, профессор Крылова Людмила Федоровна

Официальные оппоненты

доктор химических наук, профессор Лавренова Людмила Георгиевна (Учреждение Российской академии наук Институт неорганической химии им. A.B. Николаева Сибирского отделения РАН, г.Новосибирск)

кандидат химических наук Фокин Сергей Викторович (Учреждение Российской академии наук Институт «Международный томографический центр» Сибирского отделения РАН)

Ведущая организация

Санкт-Петербургский Государственный технологический институт

Защита состоится «22» декабря 2010 г. в 10-00 на заседании диссертационного совета Д 003.051.01 в Учреждении Российской академии наук Институте неорганической химии им. A.B. Николаева Сибирского отделения РАН по адресу: просп. Акад. Лаврентьева, 3, Новосибирск, 630090

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской академии наук Института неорганической химии им. A.B. Николаева Сибирского отделения РАН

Автореферат разослан «12» ноября 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор физико-математических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Широкий интерес к комплексным соединениям платины и палладия появился после открытия Розенбергом в 1965г цитостатической активности чмс-[РКЪ1Н3)2С12] {цис-ДДП). До настоящего времени цис-ДДП является одним из противоопухолевых препаратов, применяемых в медицине. Однако ряд недостатков г/мс-ДДП, основным из которых является высокая токсичность, стимулирует поиск новых менее токсичных и более эффективных препаратов на основе комплексов РКП), Р1(1 V) и Рс1(Н). Перспективным представляется использование комплексов платины и палладия с лигандами - природными соединениями, присутствующими в организме и включенными в процессы обмена веществ. Примером таких лигандов являются аминокислоты -составные части белковых молекул.

Интерес к аминокислотам в качестве лигандов обусловлен не только их биологической ролью, но и разнообразием типов соединений с этими полифункциональными лигандами. Изучение комплексов РКП) и Рё(П), имеющих квадратное строение координационного узла, и октаэдрических комплексов РС(1У) позволяет разрабатывать фундаментальные основы координационной химии.

Значительная устойчивость комплексов Р^П) и Р1(1У) создает возможность выделить в индивидуальном состоянии большое число соединений с аминокислотами. Сочетание разнообразия типов соединений и их относительно высокой устойчивости позволяет синтезировать заранее намеченные последовательные ряды соединений, предназначенные служить предметом систематических исследований. Отметим, что комплексы Р1(1У) и Рс1(П) даже с рацемическими аминокислотами не изучены систематически, в отличие от комплексов Р^П).

Все а-аминокислоты, кроме глицина, содержат как минимум один асимметрический атом углерода. Поэтому в результате комплексообразования могут образовываться стереоизомерные соединения, которые мало изучены. Однако они могут представлять интерес как для координационной химии, так и для практического использования. Например, оптически активные комплексы платины(И), (IV) и палладия(П) могут представлять собой объекты для изучения корреляции между оптической активностью соединений и их биологической активностью.

Наличие дополнительной функциональной группы в гидрокси-аминокислотах позволяет сделать предположение о возможном существовании координационных соединений с участием гидрокси-группы. Более того, гидроксиаминокислоты занимают особое место в живых организмах, поэтому можно полагать, что комплексы с этими

аминокислотами обладают большей биологической активностью, чем комплексы с другими алифатическими а-аминокислотами.

Цель работы. Целью настоящего исследования являлось: изучение последовательных стадий синтеза стереоизомерных комплексов Pt(II) и Pt(IV) с гидроксиаминокислотами методом 195Pt ЯМР спектроскопии; разработка методов синтеза и выделения твердых фаз стереоизомеров Pt(II), Pd(II) и Pt(IV) с серином (SerH = HOCH2CH(NH2)COOH - а-амино-Р-гидроксипропионовая кислота), треонином (ThrH = HOCH(CH3)CH(NH2)COOH - трео-а-амино-р-гидроксимасляная кислота) и аллотреонином (alIoThrH - эритро-а-амино-Р-гидроксимасляная кислота); идентификация синтезированных комплексов элементным анализом, методами ЯМР- (на ядрах 195Pt, 13С, 'Н), ИК-спектроскопии и рентгеноструктурного анализа; исследование биологической активности некоторых комплексов Pt(II) и Pd(II).

Научная новизна. Изучены последовательные стадии синтеза стереоизомерных бисаминокислотных комплексов платины(Н) с гидроксиаминокислотами двух типов: цис-, TwpaHc-[Pt(R-L)(S-L)], цис-, m/?íwc-[Pt(S-L)2] и m/7awc-[Pt(R-L'H)(S-L'H)Cl2], транс-[Pt(S-L'H)2Cl2], где L = Ser, Thr, alloThr, L'H = SerH, alloThrH (R, S- абсолютная конфигурация асимметрического атома углерода, связанного с NH2-rpynnoñ). В ходе проведенного исследования были обнаружены формы, в которых координация гидрокси-а-аминокислот осуществляется посредством гидрокси-группы.

Разработаны методы синтеза новых стереоизомерных комплексов Pt(II) и Pd(II) с гидроксиаминокислотами.

На примере комплексов с треонином предложен новый способ окисления комплексных соединений Pt(II) для получения комплексов Pt(IV). С помощью 195Pt ЯМР спектроскопии изучены превращения в растворах комплексов Pt(IV) с треонином.

В ходе проделанной работы, было синтезировано 25 соединений, 23 из которых получены впервые. Проведено ИК спектроскопическое исследование синтезированных комплексов и детальное ЯМР спектроскопическое исследование методом одномерной и двумерной ЯМР спектроскопии на ядрах 'Н, 13С, 195Pt. Методом РСА охарактеризованы 12 соединений.

Практическая значимость работы заключается в возможности целенаправленного синтеза стереоизомерных комплексов Pt(II), Pt(IV) и Pd(II) с гидроксиаминокислотами. Предложен новый способ окисления комплексов Pt(II) для получения комплексов Pt(IV). Результаты рентгеноструктурного исследования диастереомерных комплексов Pt(II),

Р1(1У) и Рс1(П) с серином, треонином и аллотреонином включены в Кембриджскую базу структурных данных (ССОС) и могут быть использованы в качестве справочных материалов. Синтезированные соединения проявляют биологическую активность.

На защиту выносятся:

^ Пути синтеза стереоизомерных бисаминокислотных комплексов платины (II) и платины (IV) с гидроксиаминокислотами. Результаты исследования последовательных стадий синтеза этих комплексов методом 195Р1ЯМР спектроскопии.

^ Пути синтеза стереоизомерных бисхелатов палладия (II) с гидроксиаминокислотами.

^ Методики синтеза, позволившие получить и выделить в индивидуальном состоянии 23 новых комплекса Р^И), Рс1(П) и Р1(1У) с гидроксиаминокислотами.

^ Идентификация синтезированных соединений методами ЯМР-, ИК-спектроскопии, рентгеноструктурного анализа.

^ Исследование биологической активности некоторых стереоизомерных комплексов Р1(Н) и Рё(Н).

Апробация работы. Основные результаты работы представлены на следующих конференциях: ХЫ международной научной студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс» (Новосибирск, 2003), Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2005» (Москва, 2005), XXIII Международной Чугаевской конференции по координационной химии (Одесса, 2007), XXIV Международной Чугаевской конференции по координационной химии (Санкт-Петербург, 2009), XIX Международной Черняевской конференции по химии, аналитике и технологии платиновых металлов (Новосибирск, 2010).

Публикации. Результаты работы опубликованы в 3 статьях и тезисах 5 докладов.

Личный вклад. Все указанные в экспериментальной части методики синтеза индивидуальных стереоизомеров Р1(11), Р1(1У) и Рё(П) с гидроксиаминокислотами, а также получение монокристаллов, пригодных для РСА, выполнены диссертантом. Кроме того, автором проводились регистрация и анализ |95Р1 ЯМР спектров каждой стадии синтеза комплексов Р^Н) и Р1(1У), а также регистрация и анализ спектров ЯМР (на ядрах 'Н, 13С, 195Р0 всех синтезированных комплексов Р1(Н), Рё(П) и Р1(1У) с серином, треонином и аллотреонином. Автор участвовал в обсуждении результатов и написании научных статей.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 137 страницах, содержит 22 рисунка, 21 таблицу, 10 схем синтеза. Работа состоит из введения, обзора литературы (гл.1.), экспериментальной части (гл.2.), обсуждения результатов (гл.З.), выводов, списка цитируемой литературы (133 наименования) и приложений.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

Введение содержит обоснование актуальности работы и выбора объектов исследования, постановку цели исследования и основные положения, выносимые на защиту.

Первая глава диссертации содержит литературный обзор, который посвящен методам синтеза и идентификации физико-химическими методами комплексов РКП), Рс1(П) и Р1(1У) с аминокислотами. Кроме того, приведены некоторые сведения о биологической активности комплексов Р1(11), Р1(1У) и Рс1(И).

Вторая глава включает описание методик синтеза индивидуальных стереоизомерных бисаминокислотных комплексов Р^П), Рс1(П) и РК1У) с серином, треонином и аллотреонином, данные элементного анализа, условия регистрации ЯМР, ИК спектров и условия рентгеноструктурных экспериментов.

Третья глава разделена на три раздела: обсуждение основных путей синтеза геометрических и оптических изомеров комплексов Р^П), П(1У) и Рс1(Н), идентификация полученных стереоизомерных комплексов физическими методами и результаты исследования биологической активности некоторых комплексов РКП) и Рс1(П) с треонином и серином.

СИНТЕЗ СТЕРЕОИЗОМЕРНЫХ КОМПЛЕКСОВ РКП), Р(1(Н) И РК1У) С ГИДРОКСИАМИНОКИСЛОТАМИ

Список синтезированных соединений приведен в таблице 1.

Синтез диастереомерных транс-изомеров комплексов платины(И)

В качестве примера рассмотрим взаимодействие К2Р1С14 с рацемическим серином (схема 1). На первой стадии образуются три формы комплексов I, II, III. Сигналы в области б(195Р0 = -2289 и -2773 м.д. относятся к формам триаминокислотного типа [РК8ег)3]" (II), и тетрааминокислотного типа [Р^ег^]2' (I). Отметим, что сигнал 195Р1 в области -2440 м.д. появляется и при взаимодействии К2Р1С14 с треонином или аллотреонином. Мы предположили, что этот сигнал соответствует триаминокислотному комплексу [Р1(8ег)3]2" (III), в котором цикл образован через амино- и гидрокси-группу.

Вторая стадия синтеза включает взаимодействие форм комплексов (I), (II), (III) с НС1конц. В 195Р1 ЯМР спектре сначала обнаруживаются три сигнала, причем наибольшую интенсивность имеет сигнал 3('95Р() = -2505

Табл ица1

Список синтезированных комплексов П(И), РДОУ) и Pd(II)

Бисхелатные комплексы Р^Н) и Р<1(Н) методы*

/лранс-[Р1(8-8ег)2] (1) ЯМР, ИК

тра«с-[М(11-8ег)(8-8ег)] М = Р1 (2), Рс1 (3) РСА(2), ЯМР, ИК, ЭА

транс-[Щ$-Ш)2] М = Р1 (4), Рс1 (5) РСА(4), ЯМР, ИК, ЭА

трй»с-[М(Я-ТЬг)(8-1Ъг)] М = Р1 (6), Рс1 (7) РСА, ЯМР, ИК, ЭА

отранс-[Р1(К-а11оТ11г)(8-а11оТ11г)](8) РСА, ЯМР, ИК, ЭА

цис-[М(8-8ег)2] М = Р1 (9), Рс1 (10) ЯМР, ИК, ЭА

1/нс-[Р1(11-8ег)(8-8ег)] (11) ЯМР, ИК, ЭА

г/ис-[М(8-ТЬг)2] М = Р1 (12), Рс1 (13) РСА (12), ЯМР, ИК, ЭА

1/«с-[РКК-ТЬг)(8-ТЬг)] (14) РСА ЯМР, ИК, ЭА

1/ис-[М(К-а11оТЬг)(8-а11оТЬг)] М = Р1 (15), Рс1 (16) РСА, ЯМР, ИК, ЭА

Бисхелатные комплексы Р^ГУ)

т^анс-[Р1(3-ТЬг)2С12] (17) ЯМР, ИК, ЭА

т^с-[Р1(К-ТЬг)(8-П1г)С12] (18) ЯМР, ИК, ЭА

!/ио[Р1(8-ТЬг)2С12] (19) РСА, ЯМР, ИК, ЭА

Ч«С-[Р1(К-ТЬГ)(8-П1Г)С12] (20) ЯМР, ИК, ЭА

Комплексы Р^П) и РК1У) с монодентатной координацией лигандов

отрйяс-[Р1(8-8егН)2С]2] (21) ЯМР, ИК, ЭА

тракс-[Р1(11-8егН)(8-8егН)С12](22) ЯМР, ИК, ЭА

транс-[Р1(8-а11оТ11гН)2С12]** (23) /пранс-[Р1(К-а11оТЬгН)(8-а11оТЬН)С12]** (24) ЯМР, ИК, ЭА

транс-[РК8-ТЪгН)2С1„] (25) РСА, ЯМР, ИК, ЭА

и/зйис-[Р1(К-ТЬгН)(8-ТЬгН)С14] (26) ЯМР, ИК, ЭА

* — методы, которыми были охарактеризованы полученные соединения: ЯМР -ядерный магнитный резонанс (на ядрах 195Р1, 'Н, |3С); ЭА - элементный анализ; ИК - инфракрасная спектроскопия; РСА - рентгеноструктурный анализ. ** — смесь двух диастереомеров в соотношении 1:1

м.д., соответствующий комплексу (IV). При дальнейшем нагревании в растворе остаются только формы (V) и (VI), для которых 6(193Р1) практически не отличаются, и выпадает осадок тяранс-дихлорида (V). Образование транс-изомера из (IV) объясняется тем, что транс-ъптте (ТВ) СГ больше, чем ЫНо-группы, поэтому второй хлорид-ион замещает БегН, находящийся в транс-положении к СГ.

РЮ,*" + 48егИ + 401Г

Яег .ЫНХНСОО

XI,

Зсг

8<""1Ч) =-- -2436 м.д. (Ш) (50%)

рН >10

«учг1

8е/ ооб

5<"'Р0 = -22К9 м.д. (П) (30%)

Бег 8ег \р/

8("Р1> = -2713 мл. (1) (20%)

9й

ЭсгН СИ,

V ХИ

нсч|

БегА ХООС

«(вР1>- -2265 н.д. (Пж) (20?;)

НС1.

Йс^р узегн ЗсгЙ ЧС1

на

8("'Р1)= -2505 мл. (IV) (50?'.)

БегН БсгН

X

БегН

¡К'"П) - -2710М.Д.

а») 00%)

ЭегЙ

НС1

С1 /К-.9цгН'] 14 +

И-вег^ 4

С1

01^ в-ЗегН' Р1

З-Эсгн' ЧС1

М1"Р^=-2214м.д.

I

А?,О

С1Ч /К-8сгН 14

Б^сгН ЧС1

5('*'1Ч) = -2219м.д. (V)

I

ОН"

Я-Зе/^р/^К-всг + З-Эс/^р/ ^-Бег З-Зс/^р/Л^сг

\(У V \с>/ \К/ \<у

й('"Р0= -1631 м.д. (VII)

в(ЧЧ) = -1632 м.л.

(VIII)

Схема 1

Выделенный осадок содержит только один диастереомер /иранс-[Р1(11-8егН)(8-5егН)С12] (V), т.к. его растворимость значительно меньше, чем шранс-[Р((8-8егН)2С12] или транс-[Р1(11-8егН)2С12] (VI). Смесь последних была выделена из более концентрированного раствора. Из (V) при оттитровывании щелочью и нагревании образуется транс-бисхелат (VII).

Для получения другого диастереомера /и/?анс-[Р1(8-8егН)2С12] (или «1ранс-[Р1(К-8егН)2С12]) (см. схему 1) в качестве реагента использовали один из энантиомеров аминокислоты 8-8егН (или Я-БегН). Однако при

нейтрализации щелочью /и/;а//с-[Р1(8-8егН)2С12], твердая фаза бисхелата /ирш/с-[Р1(5-8ег)2] обычно содержала примесь №С1. Поэтому для нейтрализации транс-дихлорида вместо щелочи мы использовали Ag20. После отделения осадка AgCl и избытка Ag20 в фильтрате оставался единственный продукт /иранс-[Р1(8-8ег)2].

Схема 1 была использована для получения дихлоридных комплексов с аллотреонином типа (V) и (VI), но в этом случае нам не удалось разделить диастереомеры (23) и (24) из-за близких значений растворимости.

Отметим, что обязательным условием для получения /ираяс-бисхелатов по схеме 1 является выделение транс-дихлоридов. Однако в случае треонина выделить твердые фазы дихлоридных комплексов не удалось из-за их хорошей растворимости. Поэтому для синтеза /и/?а//с-бисхелатов с треонином и аллотреонином был использован другой путь, который включает взаимодействие К2Р1С14 с ТЬгН (аПоТЬгН) при постоянном рН~6 (схема 2).

' Р" ..........О

Р1С1,1" 2ЬН

рН-6

Р1

с( \

Я /

Р1

& ч'

ьн

ТВ(М1,)>ТВ(ОСО)

С1

\ /

Р»

|/ \

А

Р»

./ \г

Схема 2

На первой стадии происходит внедрение аминокислоты (ЬН). Отметим, что в данных условиях скорость замыкания цикла больше скорости внедрения второй аминокислоты ЬН, поэтому практически сразу происходит замыкание первого аминокислотного цикла с образованием хелатного комплекса. Далее с учетом кинетического эффекта трансвлияния лигандов происходит замещение СГ, расположенного в трансположении к аминогруппе и последующее замыкание второго цикла с образованием транс-бисхелата. Схема 2 была использована для получения т/зда/с-[Р1(11-Ь)(Б-Ь)] при взаимодействии К2Р1С14 с рацемической ЬН = ТЬгН (6), аПоТЬгН (8), и для получения комплекса транс-[Р^Б-ТИг^] (4) в реакции с Б-ТЬгН.

Синтез диастереомерных (<ис-бисхелатов Р((11)

Для синтеза разнолигандных цис-бисхелатов типа г/мс-[Р1(Я-Ь)(5-Ь)], где ЬН = БегН (11), ТЬгН (14) мы использовали взаимодействие транс-бисхелатов типа транс-[Р^-ЬЫ с Я-ЬН при рН~Ю (молярное отношение реагентов 1:2).

Для примера рассмотрим стадии синтеза г/ис-[Р1(И-Т11г)(5-ТЬг)] (14) (схема 3). Первая стадия включает образование форм (IX), (X), (XI), (XII). После добавления НСЮ4 до рН~ 3-4 в растворе исчезают формы (IX), (XI), (XII) и остается только форма (X). Дальнейшее нагревание приводит к замыканию аминокислотного цикла в (X) и образованию конечного продукта !/ис-[Р1(Н-ТЬгХ5-П1г)] (ХШ).

Грвкс-[РН8-ТЬг),| + 2Я-ТЫг1Г+20Ц

<Ц'"Р1) - -1645 мл.

СО о

о /Ш^Н

5('*Р1)= -1994 ид. (IX) (9«/.)

рм>Л) ее сн,

я-тьг касн-он'

чр/ тн Й-ТИг оос

-2291мл.

(x) (49%)

соо

I

в-ТЬг у^н^н сн,

X Я

И-ТЬт /«-ТЬг

/

5-ТЬг к-ТЬг

гс'й) = -2438 МЛ. 5(,МР|) = -2802 м.д. (ХП (39%) (ХН)(ЗГо)

рН-3-4 нею.

я-тъг

V

яЛ

в-ТИг

г°С.

8(1ИР1) = -2294 м.д. (X)

Схема 3

я-тЦ^р^^-тьг

8(ИР0= -1835 м.д. (ХШ)

Синтез г/кс-бисхелатов с одинаковыми лигандами типа г/ио[РК8-Ь)2] Ш = БегН (9), ТЬгН (12) можно описать схемой 4. Отметим, что в качестве реагента был выбран К2РН4, т.к. взаимодействие К2Р1С14 с Б-ЬН приводило к образованию смеси геометрических изомеров. В случае взаимодействия К2РЙ4 с Б-ЬН происходит образование г/мс-бисаминокислотного комплекса. При этом аминокислотные циклы не замыкаются. В присутствии соли серебра происходит замыкание аминокислотных циклов и образование цис-бисхелата.

Р(

I/ Ч

ш

тв(\н,)<тв(1)

I, ь

\ /

2-

рИ-6

^С/О

Схема 4

Синтез диастереомерных м/шнс-бисхелатов палладия(П)

Известно, что геометрические изомеры Рс1(11) с аминокислотами быстро изомеризуются в водных растворах даже при комнатной температуре. Поэтому синтез геометрических изомеров проводили при температуре, близкой к 0°С.

Один из путей получения разнолигандных транс-бисхелатов типа от/?д;/с-[Рс1(К-Ь)(8-Ь)], где ЬН - БегН (3), ТЬгН (7) описывается следующей реакцией:

К[Рс1(8-Ь)С12] + Я-ЬН /я/?а«с-[РсЗ(11-Ь)(8-Ь)] + КС1 + НС1

Отметим, что синтез /яранобисхелата с одинаковыми лигандами т/7анс-[Рс!(8-ТЬг)2] (5) включает взаимодействие К[Рс1(5-Т11г)С12] с З-ТИгН.

Синтез цис-бисхелатов палладия(П)

Из литературы известно, что константа равновесия процесса транс-цис изомеризации бисхелатов Pd(II) с a-аминокислотами при увеличении температуры уменьшается. Мы использовали эти данные для разработки способов синтеза z/ис-бисхелатов Pd(II) из транс-бисхелатов. Нагревание mpflHC-[Pd(S-L)2], где LH = SerH, ThrH, в воде при t ~ 80°С приводило к его полному растворению и установлению равновесия в растворе. Затем, реакционную смесь быстро охлаждали до ~ 0°С, чтобы увеличить равновесную концентрацию цис-бисхелата, при этом плохо растворимый транс-бисхелат выпадал в осадок. Далее из раствора ацетоном высаживали осадок, представляющий собой только iy«c-[Pd(S-L)2], где L = Ser (10), Thr (13).

Попытки использовать процесс изомеризации для получения разнолигандных yuc-[Pd(R-L)(S-L)] из /wpa//c-[Pd(S-L)(R-L)] приводили к получению смеси двух диастереомеров г/ис-изомера. Однако, нам удалось выделить индивидуальный i/uc-[Pd(R-alloThr)(S-alIoThr)] (16), что обусловлено различием растворимости диастереомеров г/ис-бисхелата в водно-ацетоновой смеси.

Синтез диастереомерных комплексов Pt(IV) с треонином

Для получения одного из диастереомерных комплексов Pt(IV) с монодентатной координацией треонина /npa«o[Pt(S-ThrH)2Cl4] (25) использовали реакцию окисления бисхелатных комплексов Pt(ÍI) транс-[Pt(S-Thr)2]. Отметим, что в качестве окислителя бисхелатов Pt(II) нами был впервые использован KN03 в НС1конц. Окисление разнолигандного юранс-бисхелата приводило к получению m/>a«c-[Pt(R-ThrH)(S-ThrH)Cl4] (26):

й

KNO,,HC1koiiu

8(™Pt)" -1644 мл

R-ThrH

8(™Pt)- -423 ид.

Первый путь синтеза диастереомерных бисхелатных комплексов Р1(1У) с треонином включает последовательное замыкание аминокислотных циклов в комплексах (25) и (26) при рН < 4 и образование бисхелатных комплексов транс-[Щ$-ТЪг)гС\2] (17) и /я/?анс-[Р^-ТЬг)(8-Т11г)С12] (18), соответственно:

R-rnTi,

6ПЧ)- -423мл

'S-Thr

R-TlHt. ^trjS-Tbr ¿1

8f"Pt)- 511 М.Д.

Второй путь синтеза диастереомерных комплексов Р1([У) с бидентатной координацией треонинат-иона включает реакцию окисления соответствующих бисхелатов Р^Н) с образованием [Р1(ТЬг)2(ОН2)2]2+ и последующую реакцию замещения Н20 на СГ. В результате могут быть получены диастереомерные бисхелатные комплексы цис-, транс-[РХ(К-ТЬг)(8-ТЬг)С12] (20), (18) и цис-, /и/?амс-[Р1(8-ТЬг)2С12] (19), (17):

н2о,+на

ОН, С1

«("14)« -1844 мд.

ЭН,

6С"Й)= 1410 мл

5('"Р1)= 341мл

идентификация стереоизомерных комплексов Р1(Н), Pd(Il) и П(1У) с гидроксиаминокислотами

Данные РСА

Методом рентгеноструктурного анализа было охарактеризовано 12 соединений. Для примера на рис.1 приведены структуры диастереомерных /иранс-бисхелатов Р1(Н) с треонином.

а)

б)

"^ЧД

г

Г

в) г)

Рис. 1. Строение молекул: а) транс-[Р1(К-ТИг)(8-ТЬг)] б) шранс-[Р1(8-ТЬг)2]. в) Укладка слоев в кристалле т£ю»о[Р1(Я-Т))гХ5-П1г)], г) каркас в структуре /яранс-[Р1(8-П1г)2]

С помощью правила старшинства заместителей можно определить, что асимметрические атомы углерода, связанные с ]МН2-фуппой, имеют разную абсолютную конфигурацию асимметрического атома углерода для »1ранс-[Р1(К-ТЬг)(8-ТИг)], в то время как для его диастереомера транс-[Р^Б-ТИг^] они имеют одинаковую абсолютную конфигурацию.

Отметим, что диастереомерные комплексы /иранс-[М(К-ТЬг)(8-ТЬг)], г/мс-[М(К-а11оТЬг)(8-а11оТЬг)], в которых М = Р1(П), изоструктурны комплексам, в которых М =

I9SPt ЯМР спектры

С помощью 19 Pt ЯМР спектроскопии можно идентифицировать геометрические изомеры бисхелатов Pt(II) и Pt(IV) (различие *(mPt) - 200 м.д.). Данные спектров некоторых комплексов приведены в табл. 2.

Заметное различие *(mPt) диастереомерных комплексов мы наблюдали только в случае i/мс-изомеров (i/wc-[Pt(S-Thr)2] и цис-[ Р t( R-Thr)(S-Thг)] в ДМСО-с16 различие -15 м.д., в D20 различие практически отсутствует). Отметим, что в случае бисхелатных комплексов Pt(IV) различие ö('95Pt) наблюдается даже в водных растворах и составляет ~ 10-15 м.д.

Различие ö('9~Pt) диастереомерных комплексов Pt(ll) и Pt(IV) трансконфигурации с би- и монодентатной координацией лигандов мало и находится в пределах погрешности измерения.

ПМР спектры

Более информативными для идентификации диастереомерных

На рис. 2 для примера приведен двумерный корреляционный

спектр OTjPüwc-ITtiS-SerH^Ch] в аueroHe-dg. Отнесения сигналов приведены над проекцией двумерного спектра. Отметим, что протоны NH2- и СН2 групп химически неэквивалентны

и в спектре ПМР присутствует по два сигнала этих протонов.

В табл. 2 приведены данные спектров для некоторых стереоизомеров Pt(II), Pd(II) и Pt(IV) с треонином.

Отметим, что различия

гис. двумерный н-и пмг спектр геометрических изомеров проявля-mpa/fc-[Pt(S-SerH)iCl2] в ацетоне-с)6 ются практически на всех группах протонов и находятся в пределах 0,005- 0,15 м.д. В случае диастереомеров наименьшие различия наблюдаются на сигналах протонов я?/?ямс-изомеров и находятся в пределах 0,005 м.д. Однако нами было показано, что примесь одного из диастереомера в другом можно зафиксировать в ПМР спектре.

На рис. 3 приведены ПМР спектры индивидуальных диастереомерных цис-бисхелатов Pt(II) с серином. Различия диастереомеров проявляются не только в химических сдвигах, но и мультиплетности сигналов.

комплексов являются ПМР спектры.

пь

ГЦ. ом

п А

и

•V TT ~ 1. » 1, . п. JT-*

Таблица2

Данные и 1Н ЯМР спектров некоторых комплексов ЩП), Р<1(11) и Р4(1У)

с треонином

Комплекс Раст- 195Р1Д 'Н, <5, м.д

ль м.д. СН, СН(Ш2) СН(ОН) ын2 ОН

транс-[Р1($-Ш)2] (4) 0М80 -¿6 -1668 1,12 2,95 4,03 4,81 6,18 5,09

транс-[1Ч(Я-ТЬг)(8-ТЬг)1(6) ЭМБО -1668 1,13 2,94 4,03 4,81 6,17 5,03

цис-СР^-ТЬгЬ] (12) ОМЭО ■А -1857 1,140 2,92 3,98 4,76 5,81 5,22

цнс-[$Ч(Я-ТЬг)(8-ТЬг)1 (14) омэо -сц -1842 1,143 2,87 4,03 5,05 5,66 5,25

транс- [Р<1(Я-Т11г)(8-ТЬг)1(7) Э20 - 1,254 3,47 4,28 - -

тра//с-[Рс1(5-ТЬг)2] (5) 020 - 1,258 3,46 4,29 - -

^-[ра^-тил (13) 020 - 1,253 3,48 4,30 - -

транс-[ Р1(8-ТЬг)2С12] (17) БМвО 580 1,228 3,480 4,049 6,171 8,856 5,32

»рдас-[Р1(К-ТЬг)(8-ТЬг)С1г] (18) омэо -Аб 577 1,229 3,466 4,051 6,087 8,899 5,36

Ч«С-[Р1(8-ТЬГ)2С12] (19) ЭМ80 ■А 413 1,197 3,481 4,036 6,022 8,576 5,69

|д/с-[Р1(К-П1Г)(8-ТЬг)С12] (20) 0М80 ■А 447 1,218 3,433 4,030 6,662 7,628 5,55

сн

На рис.4 приведены ПМР спектры бисхелата Рс1(11) !/ис-[Рс1(К-а11оТЬг) (Б-аНоТЬг)] и продуктов его превращений. Сразу после растворения образца в растворе содержится индивидуальный диа-стереомер (рис.4а).

Отметим, что наибольшие различия стерео-изомеров наблюдаются в области протонов СН3-группы. Со временем происходят процессы изомеризации и «рацемизации». В ПМР спектрах (рис. 4 Ь,

он

«н,

Ж.ь)

У V

СИ,

и

II

6.0 5.4 5.6 5.4 5.2 5.1» 4.« 4.6 4.4 4 2 -И> 5.4 3.4 >,2

СИ

N11,

II /

/ _

СИ,

'А.

сн,

X

1Л

<5.0 5.« 5.6 54 Я? 5.0 4.К 4.6 4.4 4.2 4л 3.8 Э.6 X* >.2ррт

Рис.3. Спектр I) чыс-[РК11-5ег)(8-8ег)] и И) 1/ио[Р1(8-8ег)2] в ДМСО^б я) область СН2-протонов; Ь) область СН-протонов;Х - сигнал воды

СН(ОН)

л

СП(ЫН,)

гЬЬ

гКггЧ^

сн> с) мы зафиксировали сигналы продуктов превращения исходного комплекса.

13С ЯМР спектры

В 13С ЯМР спектрах проявляется различие всех стереоизомеров (табл. 3). Из данных таблицы следует, что наибольшее различие цис- и транс-бисхелатов проявляется в области 3(иС) СОО-групп и составляет -1,5 м.д. Различия 8(пС)

диастереомеров меньше, чем геометрических изомеров, и находится в пределах ~ 0,1 м.д. Как правило, наименьшие различия диастереомеров в ЯМР спектрах характерны для транс-изомеров. Поэтому мы приготовили смесь двух диастереомеров (1) и (2) с молярным отношением 1:3. В 13С ЯМР спектре в области координированных СОО-групп были обнаружены два сигнала с отношением интенсивностей 1:3.

Таким образом, как ПМР, так и 13С спектры однозначно позволяют

Рис.4, а) ПМР спектр г/«с-[Ра(Я-а11оТЬг)(8-а1!оТЬг)] в (х - репер) Ь), с) область сигналов СНз-группы через 2 часа и 10 дней после растворения образца, соответственно.

о, □ - цис-, транс-[Р<1(11-а11оТЬг)(8-а11оТ11г)]; • ,■ - цис-, шранс-[Рс!(5-а11оТЬг)2], соответственно

ТаблицаЗ Данные 13С ЯМР спектров бисхелатов

Комплекс "С ЯМР, 5, м.д

СОО СН2 СН

отранс-[Р1(а-8ег)(5-5ег)] (2) 183,9 62,0 58,0

транс-[Р1(8-5ег)2] (1) 184,0 62,0 58,0

(2) + (1) = 1:3 184,0 183,9 62,0 58,1

цис-[Р«5-5ег)(Я-8ег)] (И) 182,5 61,6 59,9

»*ис-[Р1(8-аег)2] (9) 182,4 61,6 59,7

фиксировать наличие

возможной примеси одного диастереомера в другом,

в отличие спектров.

от

195

Р1 ЯМР

ИК-спектры

Для исследования твердых фаз синтезированных комплексов использовали ИК-спекгроскопию. В табл. 4 для примера приведены данные ИК-спектров некоторых комплексов Р1:(П) и Р1(1У) с треонином в области характеристичных колебаний МН2- и СОО-групп, а также РМ^, РМ} и К-С1.

В ИК-спектрах синтезированных комплексов присутствуют полосы \(ЫН) координированных аминогрупп (3500-3100 см"1) и у(СО) координированного карбоксилат-иона (1698-1560 см"1). В дальней области ИК-спектров комплексов появляются полосы у(Р(-Ы) (540-520 см"1)

и у(Р1-0) (460-420 см"1), подтверждающие координацию лигандов через ЫН2- и СОО-группы. Кроме того, для комплексов Р1(1\/) в области 340-360 см"1 обнаруживаются полосы валентных колебаний РьС!.

Таблица4

Данные ИК-спектров некоторых комплексов Pt(II) и Pt(IV) с треонином

Комплекс v(NH) + v(OH) v(CO)+â(Nty v(Pt-N) v(Pt-O) v(Pt-Cl)

/npaHc-[Pt(S-Thr)2] (4) 3482;3412; 3372M; 3231; 3099 1659; 1636; 1590 533, 500 464, 455,425 ■

mpawc-[Pt(R-Thr)(S-Thr)J(6) 3469; 3246; 3209m,; 3106 1660; 1629; 1553щ, 523, 495 468,440 -

4Kc-[Pt(S-Thr)2] (12) 3394;3279; 3264; 3208;3135 1698; 1659; 1641;1591; 1567;1551 538; 516 466; 448; 435;421 -

4MC-[Pt(R-Thr)(S-Thr)] (14) 3498; 3330; 3260; 3233M;3084 1684;1645; 1602 530; 490„. 422 -

транс-[ Pt(S-ThrH)2Cljl (25) 3579; 3507;3321; 3266; 3252; 3197 1731 517 - 346ш

mp<wc-[Pt(R-ThrH)(S-ThrH)Clj] (26) 3519; 3494;3274 3156 1734 517 - 343ш

mpûHC-[Pt(S-Thr)2Cl2] (17) 3219; 3166; 3080 1699; 1676 1568;1558 561; 527 461; 428; 415 360; 350лл

OTpo«c-[Pt(R-Thr)(S-Thr)Cbl (18) 3248;3172;3061 1656; 1579 570; 519 468;435 363;353

Из табл. 4 видно, что ИК-спектры как геометрических изомеров, так и диастереомеров отличаются количеством полос поглощения.

исследование биологической активности некоторых комплексов

Используя программу прогнозирования биологической активности PASS (Prediction of Activity Spectra for Substances, 2007, V. Poroikov, D. Filimonov and associates) было выявлено, что все полученные нами стереоизомерные комплексы типа i/mc-[M(L)2], где M = Pt, Pd; L = R-Ser, S- Ser, R-Thr, S-Thr, и z/mc-[M(R-L)(S-L)], где M = Pt, Pd; L = Ser, Thr, с 99,999% вероятностью должны обладать биологической активностью (в том числе противоопухолевой активностью).

Для î/Mc-[Pt(S-Thr)2], */Mc-[Pt(R-Thr)2], */«c-[Pd(S-Thr)2], Vwc-[Pd(R-Thr)2] проведены токсико-фармакологические исследования на лабораторных животных в лаборатории фармакологических исследований новосибирского института органической химии им. H.H. Ворожцова.

Первый этап исследования заключался в определении токсичности комплексов Pt(II) и Pd(II) с треонином. Было установлено, что при

однократном парентеральном введении мышам комплексов Pt(II) с треонином в дозах до 250 мг/кг, гибель животных не происходит. Комплекс 4t/c-[Pd(R-Thr)2] не вызывает гибели животных в дозе 125 мг/кг, при этом его энантиомер i/«c-[Pd(S-Thr)2] оказывает летальное действие в дозах менее 125 мг/кг.

Следующий этап - исследование противоопухолевой активности. Для этого использовали два менее токсичных комплекса Pî(IJ) 2/wi?-[Pt(S-Thr)2] и tyKc-[Pt(R-Thr)2].

В результате эксперимента было показано, что комплексы î/MC-[Pt(S-Thr)2] и !/MC-[Pt(R-Thr)2] не обладают стимулирующим влиянием на рост опухоли и в период до 10 суток после введения (на стадии формирования первичного узла опухоли) противоопухолевая активность комплексов Pt(II) с треонином в данной дозировке превышает таковую цис-ЩЩ.

Полученный нами комплекс yuc-[Pt(R-Ser)(S-Ser)] также был исследован на биологическую активность в институте иммунологии СО РАН [Мичурин, И.Е. Авторефер. duc. канд. мед. наук: / И.Е. Мичурин. Новосибирский научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН. - Новосибирск, 2004. 19 с]. Исследования показали, что ^Mc-[Pt(R-Ser)(S-Ser)] обладает более выраженным противоопухолевым действием по сравнению с цис-ЩЩ.

ВЫВОДЫ:

1) Методом 195Pt ЯМР спектроскопии изучены последовательные стадии синтеза и идентифицированы промежуточные формы комплексов Pt(II) с гидроксиаминокислотами. Показано, что в сильно щелочных растворах возможно образование промежуточных комплексов, в которых центральный атом Pt(II) связан с лигандом посредством ОН-группы.

Разработаны методики синтеза и выделения твердых фаз геометрических изомеров диастереомерных бисаминокислотных комплексов Pt(Il) с гидроксиаминокислотами двух типов:

а) цис-, /7j/?awc-[Pt(S-L)2] и цис-, mpaHc-[Pt(R-L')(S-L')] с бидентатной координацией лигандов L и L', где L- серинат или треонинат ионы; L' - серинат, треонинат или аллотреонинат ионы.

б) w/;cwcr-[Pt(S-LH)2Cl2] и ff//w/c-[Pt(R-LH)(S-LH)Cl2], где LH - серин или аллотреонин, с монодентатной координацией аминокислот.

Таким образом, синтезировано 13 стереоизомерных комплексов Pt(II) с гидроксиаминокислотами.

2) Предложены пути синтеза некоторых диастереомерных бисхелатов Pd(II) с гидроксиаминокислотами типа /wpaHC-[Pd(R-L)(S-L)] и цис-[Pd(S-L)2], где L - серинат или треонинат ионы; а также mpa/ic-[Pd($>-Thr)2] и цис-[Pd(R-alïoThr)(S-alloThr)]. Всего синтезировано 6 новых стереоизомерных соединений Pd(II).

17

3) Методом РСА охарактеризованы 12 новых комплексов. Показано, что однотипные комплексы Pt(II) и Pd(II) изоструктурны. Проведено обсуждение кристаллохимических особенностей комплексов разного типа.

4) Методом 195Pt ЯМР спектроскопии идентифицированы все промежуточные формы комплексов Pt(IV) с треонином на каждой стадии синтеза. Разработаны методики синтеза диастереомерных комплексов Pt(lV) с треонином двух типов:

а) комплексы цис-, /wpa«c-[Pt(S-Thr)2Cl2] и цис-, 7w/>aHc-[Pt(R-Thr) (S-Thr)CI2] с бидентатной координацией треонинат-иона;

б) комплексы mpa»c-[Pt(S-ThrH)2Cl4] и mpaHc-[Pt(R-ThrH)(S-ThrH)Cl4] с монодентатной координацией треонина. В качестве окислителя для синтеза комплексов Pt(IV) с монодентатной координацией треонина впервые был использован KN03 в НС1КОНц-

Синтезировано 6 новых диастереомерных соединений Pt(IV) с треонином.

5) Показано, что данные l95Pt ЯМР спектров позволяют идентифицировать геометрические и связевые изомеры, но не всегда позволяют различать диастереомеры, а с помощью данных ПМР, 13С ЯМР и ИК-спектроскопии можно идентифицировать как геометрические изомеры, так и диастереомеры.

6) Исследована токсичность энантиомерных комплексов Pt(II) и Pd(II) стреонином и противоопухолевая активность стереоизомерных комплексов Pt(II) с серином и треонином. Оказалось, что комплексы Pt(ll) с треонином менее токсичны, чем комплексы Pd(II) с треонином.

Показано, что комплексы z/HC-[Pt(R-Ser)(S-Ser)], t/Kc-[Pt(S-Thr)2] и цис-[Pt(R-Thr)2] обладают более выраженным противоопухолевым действием по сравнению с цис-ЩЩ.

Основные публикации по теме диссертации:

1. Крылова Л.Ф., Матвеева (Ковтунова) JI.M. Идентификация стереоизомерных комплексов Pt(II) и Pd(II) с аминомасляной кислотой // Ж. структ. химии. - 2005. - Т.46, №1. - С.77-90.

2. Крылова Л.Ф., Матвеева (Ковтунова) J1.M., Романенко Г.В. Стереоизомерные комплексы Pt(II) с серином //Ж. структ. химии. -2006.-Т.47,№4.-С .670-681.

3. Krylova L.F., Kovtunova L.M., Romanenko G.V. Pt(II) and Pd(II) Complexes with P-Alanine // Bioinorganic Chemistry and Applications, vol. 2008, Article ID 983725,10 pages, 2008. doi:10.1155/2008/983725

4. Матвеева (Ковтунова) JI.M. Комплексы Pt(II) и Pd(II) с аминомасляной кислотой // Материалы XLI международной научной

студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс». Новосибирск. 2003. С. 141.

5. Матвеева (Ковтунова) Л.М. Стереоизомерные комплексы платины и палладия с серином // Материалы международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов 2005». Том 2. Москва. 2005. С.87.

6. Крылова Л.Ф., Ковтунова Л.М., Ельцов И.В., Романенко Г.В. Бисаминокислотные комплексы Р1(П) и Р(1(П) с р-аланином // Тезисы докладов XXIII Международной Чугаевской конференции по координационной химии. Одесса. 2007. С.620.

7. Ковтунова Л.М., Крылова Л.Ф., Романенко Г.В., Шелудякова Л.А., Куратьева Н.В. Стереоизомерные бисаминокислотные комплексы РКП) и Рс!(11) с гидроксиаминокислотами - серином, треонином и аллотреонином // Тезисы докладов XXIV Международной Чугаевской конференции по координационной химии. Санкт-Петербург. 2009. С.80.

8. Ковтунова Л.М., Крылова Л.Ф., Романенко Г.В., Шелудякова Л.А. Стереоизомерные комплексы Р1(1У) с треонином // Тезисы докладов XIX Международной Черняевской конференции по химии, аналитике и технологии платиновых металлов. Новосибирск. 2010. С. 106.

Подписано в печать 26.10.2010 Формат 60x84 Уч.-изд. л. 1,25 Заказ № 277 Тираж 120 экз.

Редакционно-издательский центр НГУ 630090, Новосибирск-90, ул. Пирогова, 2

ВВЕДЕНИЕ

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Комплексы Р^П) и Рс1(П) с аминокислотами, связанными через донорные группы РШ2 и ОСО основной цепи

1.1.1. Моноаминокислотные комплексы Р1Щ) и РсЮТ)

1.1.2. Бисаминокислотные комплексы Р1Щ) и РсКИ)

1.1.2.1. Комплексы Р1(1Т) и Рс1(П) с одинаковыми аминокислотами

1.1.2.1.1. Бисаминокислотные комплексы Р1(П)

1.1.2.1.2. Бисаминокислотные комплексы Рс1(П)

1.1.2.2. Комплексы Р1:(П) и Рс1(П) с разными аминокислотами

1.2. Комплексы Р1:(1У) с аминокислотами

1.2.1. Моноаминокислотные комплексы РЩУ)

1.2.2. Бисаминокислотные комплексы РК1У)

1.2.2.1. Комплексы с бидентатной координацией аминокислот

1.2.2.2. Комплексы с монодентатной координацией аминокислоты

1.2.3. Три- и теграминокислотные комплексы РКТУ)

1.3. Идентификация комплексов Р^П), Р1(1У) и Рс1(И) с аминокислотами

1.4. Биологическая активность комплексов платины и палладия

ВЫВОДЫ:

1) Методом 195Р1 ЯМР спектроскопии изучены последовательные стадии синтеза и идентифицированы промежуточные формы комплексов Р1:(П) с гидроксиаминокислотами. Показано, что в сильно щелочных растворах возможно образование промежуточных комплексов, в которых центральный атом Р1(П) связан с лигандом посредством ОН-группы.

Разработаны методики синтеза и выделения твердых фаз геометрических изомеров диастереомерных бисаминокислотных комплексов Р^П) с гидроксиаминокислотами двух типов: а) цис-, ш/хг«с-[ТЧ(8-Ь)2] и цис-, транс-[Р1(К-Ь')(8-Ь')] с бидентатной координацией лигандов Ь и Ь', где Ь- серинат или треонинат ионы; Ь' -серинат, треонинат или аллотреонинат ионы. б) транс-\РК8-Ш)2С12] и транс-[Р1(Я-ЬН)(8-Ш)С12], где ЬН - серин или аллотреонин, с монодентатной координацией аминокислот.

Таким образом, синтезировано 13 стереоизомерных комплексов Р1(П) с гидроксиаминокислотами.

2) Предложены пути синтеза некоторых диастереомерных бисхелатов Рс1(И) с гидроксиаминокислотами типа трш/с-[Рс1(К-Ь)(8-Ь)] и цис-[Рс1(8-Ь)2], где Ь - серинат или треонинат ионы; а также транс-\РА(§-ТЬг^] и г/мс-[Р<1(К-а11оТ111*)(8-а11оТ11г)]. Всего синтезировано 6 новых стереоизомерных соединений Рс1(Н).

3) Методом РСА охарактеризованы 12 новых комплексов. Показано, что однотипные комплексы Р1.(П) и Р(1(И) изоструктурны. Проведено обсуждение кристаллохимических особенностей комплексов разного типа.

4) Методом 195Рг ЯМР спектроскопии идентифицированы все промежуточные формы комплексов Р1(1У) с треонином на каждой стадии синтеза. Разработаны методики синтеза диастереомерных комплексов Р1:(1У) с треонином двух типов: а) комплексы цис-, транс-[Р^З-ТЪг^СЬ] и цис-, гарш/с-[Р1;(Я-Т11г)(8-ТЬг)СЬ] с бидентатной координацией треонинат-иона; б) комплексы ш/?акс-[РК8-ТЬгН)2С14] и троне-[Р1(Я-ТЬгН)(8-Т11гН)СЦ] с монодентатной координацией треонина. В качестве окислителя для синтеза комплексов Р1(1У) с монодентатной координацией треонина впервые был использован КЬЮ3 в НС1К0Нц

Синтезировано 6 новых диастереомерных соединений Р1:(ГУ) с треонином.

5) Показано, что данные 195Р1 ЯМР спектров позволяют идентифицировать геометрические и связевые изомеры, но не всегда позволяют различать диастереомеры, а с помощью данных ПМР, 13С ЯМР и ИК-спектроскопии можно идентифицировать как геометрические изомеры, так и диастереомеры.

6) Исследована токсичность энантиомерных комплексов Р1(11) и Рс1(Н) с треонином и противоопухолевая активность стереоизомерных комплексов Р1;(П) с серином и треонином. Оказалось, что комплексы, Р^П) с треонином менее токсичны, чем комплексы Рс1(Н) с треонином.

Показано, что комплексы г^/с-[РС(К-8ег)(8-8ег)], г/г/с'-[Р1(8-ТЬг)2] и цис-[Р1(К-ТЬг)2] обладают более выраженным противоопухолевым действием по сравнению с цис-ДДЦ.

Заключение:

1. Комплекс Рс1(П) ^мс-[Рё(К-Т11г)2] менее токсичный по сравнению с его энантиомером г/г<с-[Рё(8-Т11г)2] в дозе до 125 мг/кг. В дозе 250 мг/кг оба энантиомера Рс1(Н) более токсичны, чем цис-ДДП.

2. Комплексы Р1;(И) с Я-треонином (отметим, в живых организмах присутствуют в основном 8-аминокислоты) на 10 сутки обладают большей активностью, чем аналогичные комплексы с 8-треонином.

3. В период до 10 суток после введения препаратов (на стадии формирования первичного узла опухоли) противоопухолевая активность комплексов г/г/с-[Р1(8-ТЬг)2] и г/г/с-[Р1(К-Т11г)2] превышает таковую цис-ДДП.

4. Исследования показали, что г/ио[Р1;(К-8ег)(8-8ег)] обладает более выраженным противоопухолевым действием по сравнению с цис-ДДП.

1. Rosenberg В, VanCamp L, Krigas T. Inhibition of cell division in escherichia coli by electrolysis products from a platinum electrode //Nature. -1965 Feb 13. 205. - P.698-699.

2. Rosenberg В., VanCamp L., Trosko J.E, Mansour V.H. Platinum compounds: a new class of potent antitumour agents //Nature. 1969 Apr 26 - 222(5191). -P.385-386.

3. Терней А. Современная органическая химия. M.: Мир, 1981. - T.2. -C.384-385.

4. Волштейн JI.M. Координационные соединения платины с аминокислотами //Коорд. химия. 1975. - Т.1. Вып.5. -С.595-619.

5. Kuman L., Kandasamy N.R., Srivastava T.S. Synthesis and spectroscopic studies of potential anticancer platinum(II)(2,2'-bypyridine)(amino acid).n+ (n = 1 or 2) complexes // J. Inorg. Biochem. 1985 - V.23(l). - P.l-l 1.

6. Волштейн JI.M., Крылова Л.Ф., Могилевкина М.Ф. Метионин в роли тридентатного лиганда в комплексном соединении двухвалентной платины //Док. Акад. Наук. 1968. - T.XIII. №3. - С.595-597.

7. Pettit L.D., Bezer M. Complex formation between palladium (II) and amino acids, peptides and related ligands // Coord. Chem. Rev. 1985. - №61. - P.97-114.

8. Крылова, Л.Ф. Разнолигандные изомерные комплексы платины(Н) с глицином и фенилаланином // Ж. неорг. химии. 1999. - Т.44. №1. - С.68-73.

9. Гринберг А.А. Исследования над комплексными соединениями двухвалентного палладия // Изв. Ин-та по изучению платины и др. благородных металлов АН СССР. 1933. - Т. 11. - С.95-109.

10. Erickson L.E., McDonald J.W. Proton magnetic resonance studies of amino acid complexes of platinum(II). I Synthesis, spectral interpretation,, and conformational implications // J. Am. Chem. Soc. 1968. - V.90. - P.6371-6382.

11. Волштейн JI.M., Слюдкин О.П. Дипролиновые соединения платины(П) // Ж. неорг. химии. 1972. - Т.17. №8. - С.2239-2244.

12. Крылова Л.Ф., Диканская Л.Д. Моноциклические комплексы платины(Н) и палладия(П) с аминокислотами ряда глицина // Коорд. химия. 1994. -Т.20. №1 - С. 57-59.

13. Крылова Л.Ф., Диканская Л.Д., Федотов М.А. Моногистидиновые комплексы платины(П) и палладия (II) // Координационная химия. 1994. - Т.20.№10. - С.780-785.

14. Волштейн Л.М., Крылова Л.Ф., Диканская Л.Д. О кинетике замыкания аминокислотных циклов в комплексах платины(И) // Ж. неорг. химии. -1975. Т.20. №10. - С.2758-2762.

15. Sullivan Е.А. Circular dichroism of palladium(II) and platinum(II) diamine complexes // Canad. J. Chem. 1979. - V.57. -P.67-71.

16. Гринберг A.A., Птицын Б.В. О геометрической изомерии циклически построенных соединений двухвалентной платины // Изв. ин-та поизучению платины и др. благородных металлов АН СССР. 1932. - Т.9. -С. 55-71.

17. Волштейн JI.M., Зегжда Г.Д. О взаимном превращении изомеров дивалиноплатины // Ж. неорг. химии. 1962. - Т.7. № 10. - С.2315-2319.

18. Гринберг A.A., Волштейн JI.M. О соединениях двухвалентной платины с а-аланином // Изв. АН СССР. Сер. хим. 1937. - № 4. - С.885-903.

19. Волштейн JI.M., Великанова Н.С. Цнс- и транс-изомеры внутрикомплексной соли двухвалентной платины с а-аминомасляной кислотой // Ж. неорг. химии. 1957. - Т.2. №10. - С.2383-2389.

20. Волштейн JI.M., Анохова JI.C. Комплексные соединения двухвалентной платины с лейцином // Ж. неорг. химии. 1963. - Т.8. №9. - С.2053-2058.

21. Волштейн JI.M., Просенко А.Е. Комплексные соединения двух валентной платины с норлейцином // Ж. неогр. хими. 1973. - Т. 18. №10. - С.2622-2626.

22. Крылова Л.Ф. Авторефер. дис. . доктора хим. наук: Циклические комплексные соединения платины(П) и палладия(Н) с аминокислотами и фенилпиримидинами / Л.Ф. Крылова. Новосибирский государственный университет. Новосибирск, 1991. — 47 с.

23. Крылова Л.Ф., Головин A.B. Исследование превращений в растворах комплексов Pt(II) и Pd(II) с аминокислотами методом ЯМР спектроскопии.

24. Глициновые комплексы // Ж. структ. химии. 2000. - Т.41. №2. С.300-311.

25. Крылова Л.Ф., Головин A.B. Исследование превращений в растворах комплексов Pt(II) и Pd(II) с аминокислотами методом ЯМР спектроскопии.

26. Бисаланинаты // Ж. структ. химии. 2000. - Т.41. №2. С.312-323.

27. Крылова Л.Ф., Купров И.С. Стереоизомерные комплексы Pt(II) с валином //Ж. неорг. химии. 2001. -Т.46. №4. - С.605-614.

28. Гринберг А.А., Волштейн JI.M. О комплексных соединениях двухвалентной платины с гликоколем // Изв. АН СССР. Сер. Хим. — 1937.-№1. — С.3-22

29. Волштейн JI.M., Володина И.О. Дис-изомер внутрикомплексной соли двухвалентной платины с а-аланином // Докл. АН СССР. 1960. - Т. 131. №2. — С.309-311.

30. Волштейн JI.M., Диканская Л.Д. Комплексные соединения платины(П) с (3-фенил-а-аланином // Ж. неорг. химии. 1975. - Т.20. вып.12. - С.3352-3356.

31. Волштейн Л.М., Ластушкина Т. Р. Изомеры дисериноплатины // Ж. неорг. химии. 1969. - Т. 14. вып:2. - С.480-483.

32. Watabe М., Kai М., Goto К. Preparation platinum(II) complexes with 1-serine using KI X-ray crystal structure, HPLC and I95Pt NMR spectra // J. Inorg. Biochem. 2003. - №97. - P.240-248.

33. Pinkard F.W., Sharral E., Wardlaw W. Isoerides of quadricovalent palladium and platinum // J. Chem. Soc.(A). 1934. - 24. - P. 182-186.

34. Сое J.S., Lyons J.R. Preparation and substitution reactions of bis(glycinato)palladium(II) complexes // J. Chem. Soc. Inorg. Phys. Theor. -1971. P.829-833.

35. Шестакова H.A., Голубовская Э.В., Мальчиков Г.Д. Новое соединение палладия(П) с глицином // Изв. СОАН сер. химия. 1977. - Т.4. - С.102-104.

36. Saraceno A.J., Nakagawa J. Infrared absorption spectra of inorganic coordination complex. XVI. Infrared studies of glycino-metal complexes // J. Am. Chem. Soc. 1958. - V.80. - P.5018-5021.

37. Balzani V., Carassity V., Moggi L. Photochemestry of coordinationQcompounds. XIII. Photochemical behavior and electronic spectra of some d glycinato complexes // Inorg. Chem. 1965. - V.4.№9 - P. 1243-1246.

38. Taubald U., Nagel U., Beck W. Dichloropalladium(II)-komplexe mit a-aminosauren, a-aminosaureestern, dipeptiden und dipeptidestern// Chem. Ber. — 1984. -V.l 17. P. 1003-1012.

39. Freeman H.C., Golomb M.L. The crystal structure of trans-bisglycinatoplatinum(II), Pt(NH2CH2COO)2 // Acta Cryst. 1969. - B25. -P.1203-1205.

40. Байдина И.А., Подберезкина H.B., Бакакин B.B. и др. Кристаллическая структура тригидрата z/иодиглицината Pd(II) // Журн. структур, химии. -1979. Т.20. №3. - С.544-548.

41. Байдина И.А., Подберезская Н.В. Кристаллическая структура 3-модификации «7ранс-глицината иалладия(П) // Ж. структ. химии. — 1982. — Т.23. №2 С.88-91.

42. Крылова Л.Ф., Диканская Л.Ф., Чупахин А.П., и д.р. Бисхелатные комплексы палладия(Н) с глицином // Ж. неорг. химии. 1995. - Т.40. №3. - С.433-439.

43. Kollmann J., Schroeter С. Preparation and characterization of some amino acid and peptide complex of gold (1ДП), palladium(II) and platinum(II) // J. Prakt. Chem. 1975. - V.317(3). -P.515-519.

44. Vagg R.S. The crystal and molecular structure of bis(L-serinato)palladium(II) // Acta Cryst. 1979. - V. B35. - P.341-344.

45. Charlson A.J., McArdle N.T. The Induction of filamentous Grouwth in Escherichina Coli by a palladium (II) complex of L-Serin // Inorg. Chimica acta. 1981. - V.56. -P.L35-L36.

46. Диканская JT.Д., Филипова Н.Н., Крылова Л.Ф. Изомерные соединения палладия с фенилаланином // Координ. химия. 1989. - Т. 15. вып.8. -С.1118-1126.

47. Крылова Л.Ф., Купров И.С. Стереоизомерные комплексы Pd(II) с валином // Ж. неорг. химии. 2001. - Т.48. №8. - С. 1288-1298.

48. Волштейн JI.M., Зегжда Г.Д. Смешанная внутрикомплексная соль аланиновалиноплатинита // Ж. неогр. химии. 1963. - Т.8. №1. - С.43-46.

49. Зегжда Г.Д. Авторефер. дис. . канд. хим. наук: / Г.Д. Зегжда. Новосибирский государственный университет. Новосибирск, 1963.

50. Yasui Т., Hidaka J., Shimura Y. Metal Complexes of Amino Acids. III. The Circular Dichroism of Cobalt(III) Ammine and Ethylenediamine Complexes with L-Amino Acids // Bull. Chem. Soc. Japan. 1966. - V.39. - P.2417-2424.

51. Ito Т., Marumo F., Saito J. The crystal structure of bis-(L-prolinato)palladium // Acta Crystallogr. 1971. - B27. - P. 1062-1066.

52. Слюдкин О.П., Адрианова O.H., Чельцов П.А., Волштейн Л.М. Оптическая активность комплексных соединений платины(И) с моно- и бидентатным L-пролином // Ж.неорг. химии. 1973 - Т. 18 №10. - С.2631-2635.

53. Слюдкин О.П., Адрианова О.Н., Волштейн Л.М. Оптическая активность смешанных пролин-гликолевых комплексов платины(П) // Ж. неорг. химии. 1973. - Т. 18 №11. - С.3028-3032.

54. Волштейн Л.М., Слюдкин О.П., Керженцев М.А. Два диастереомера соединения гараис-хлоропролинатопролинаплатины(П)// Ж. неорг. химии.- 1977. Т.22, №10. - С.2774-2778

55. Волштейн Л.М., Слюдкин О.П. Пролин-глициновые и пролиновые комплексы двухвалентной платины // Ж. неорг. химии. — 1974. Т. 19. №1.- С.131-134.

56. Волштейн Л.М., Керженцев М.А. Смешанные бисхелаты платины(П) с L-пролином и некоторыми другими аминокислотами // Коорд. химия. — 1976.-Т.2. №11.-С.1534-1537.

57. Слюдкин О.П., Миначева Л.Х. Круговой дихроизм бисхелатных комплексов платины(П) с циклическими аминокислотами. Кристаллическая структура m^7HC-Pt(L-Opro)2.-2H20 // Коорд. химия. — 1985. Т.11. №7. - С.963-973.

58. Крылова Л.Ф., Павлушко Т.А. Диастереомеры транс-изомеров комплексов Pt(II) с аланином и фенилаланином // Ж. неорг. химии. — 2003. -Т. 48. №11. — С.1790-1800.

59. Волштейн Л.М., Крылова Л.Ф., Диканская Л.Д. Кинетика реакций замыкания циклов в комплексах платины(П) с ß-фенил-а-аланином // Ж. неорг. химии. 1976. - Т.21. №7. - С.1796-1801.

60. Гринберг A.A. Введение в химию комплексных соединений. М.: Химия. -1966.

61. Bissinger Н., Beck W. //Z. Naturforsch. 1985. - 40В (4). - Р.507-511.

62. Могилевкина М.Ф., Казаков С.А., Логвиненко В.А., Черемесина И.М. Комплексные соединения платины(1У) с метионином // Коорд. химия. — 1979-Т.5., вып. 12. С. 1866-1871.

63. Гурьянова Г.П. Авторефер. дис. канд. хим. наук/ Г.П Гурьянова. — Ленинград, 1970.

64. Kazbanova Т.К., Mal'chikov G.D. // Russ.J.Inorg.Chem. 1981. - 26. - Р.540

65. Nikolaev A.V., Kazbanova Т.К., Mal'chikov G.D., Kazbanov Y.I. // Russ.J.Inorg.Chem. 1979. - 24. - P.60

66. Гринберг A.A. Об окислении геометрически-изомерных платодиглицинатов // Докл. АН СССР. 1941. - T.XXXII, №2. - С.57-61.

67. Гринберг A.A., Волштейн Л.М. Действие гликоколя на хлороплатинат калия // Изв. АН СССР. Отд. Хим. наук. 1941. - Т.З. - С.381-389.

68. Гринберг A.A., Кукушкин Ю.Н., Гурьянова Г.П. Комплексные соединения платины(1У) с аланином // Ж. неорг. химии. 1969 - TXIV, Вып.4 - 10241028.

69. Миначева JI.X., Слюдкин О.П., Сахарова В.Г., Порай-Кошиц М.А. Комплексные соединения с 1-оксипролином. Кристаллическая структура m/?a«<>Pt(Opro)2Cl2.2H20 // Коорд. химияю 1991. - Т. 17., Вып.З. -С.374-381.

70. Слюдкин О.П., Желонкина А.Г., Иванченко В.А. О различном взаимодействии хиральных 1-фенилаланиновых комплексов Pt(II) и Pt(lV) с фенилаланил-транспортной РНК-сиитетазой // Ж. коорд. химии. 1994.- Т.20. №10. С.774-779.

71. Могилевкина М.Ф., Нечепуренко С.Ф. Новые комплексы бис-(метионин)платины (IV) // Коорд. химия. 1990. - Т. 16. № 1. - С. 128-131.

72. Могилевкина М.Ф., Ельцин С.А., Коробейничева И.К. Полиметиониновые комплексы Pt(IV) // Коорд. химия. 1983. -Т.9.№11. - С.1544-1549.

73. Гринберг А.А., Юань Кан, Адрианова О.Н. Доказательство конфигурации цис-транс изомерных соединений PtGl2(NH3)2.Cl2 // Докл. АН СССР. -1963. 149, №4 - С.842-845.

74. Юань Кан. Автореферат канд. дис. Ленинград. — 1963.

75. Кукушкин Ю.Н., Гурьянова Г.П. Синтез и некоторые свойства комплексных соединений платины(1У) с а-аланином // Журн. неорг. химии. 1969. - T.XIV, Вып. 11. — С. 3043-3048.

76. Гринберг А.А., Юань Кан. Комплексные соединения четырехвалентной платины с гликоколем // Ж. неорг. химии. 1962. - Т.VII, вып. 10 -С.2304-2310.

77. Гринберг А.А., Юань Кан. О тригликолятах четырехвалентной платины// Док. АН СССР. 1964. - Т. 154, №1. - С.136-139.

78. Накамото К. ИК-спектры и спектры КР неорганических и координационных соединений. М.: Мир, 1991. - 259 с.

79. Nakamoto К., Morimoto Y., Martell А.Е. Infrared spectra of aqueous solutions. I. Metal chelate compounds of amino acids // J.Am. Chem. Soc. 1961. - V.83. №22.-P. 4528-4532.

80. Варшавский Ю.С., Инькова E.H., Гринберг A.A. Инфракрасные спектры и строение глициновых производных двухвалентной платины//Ж. неорг. химии. 1963. - Т.VIII, вып. 12. - С. 2659-2667.

81. Erickson L.E., Erickson M.D., Smith B.L. Conformational effects on three-bond and four-bond platinum-hydrogen coupling constants in platinum complexes of methylglycines // Inorg. Chem. 1973. - V.12, №2. - P.412-422.

82. Erickson L.E., Dappen A.J., Uhlenhopp J.C. Proton magnetic resonance studies of amino acid complexes of platinum(II). II. Kinetics of N-H and C-H proton exchange //J. Am. Chem. Soc. 1969. - V.91, №10. -P.2510-2513.

83. Priqueler Julien R.L., Butler I.S., Rochon F.D. An overview of 195Pt nuclear magnetic resonance spectroscopy // Applied Spectroscopy Reviews. — 2006. — V.41.-P. 185-226 '

84. Федоров M.A. Ядерный магнитный резонанс в растворах неорганических веществ. Новосибирск: Наука, 1986, С. 186

85. Rochon F.D., Morneau A. ,95Pt and 'H NMR studies of platinum (II) complexes with ethylenediamine derivatives // Mag. Res. Chem. 1991. - 29. -120-126.

86. Пожидаев А.И., Симонов M.A. Рентгеноструктурное исследование цис-диглицино платины(П) Pt(NH2CH2COO)2 // Ж. структ. химии. 1975. -Т.16. №6 - С.1080-1081.

87. Iarzab, Т.С., Hare, C.R. 7>am,-bis(L-valinato)palladium(II) monohydrate, CioH22N205Pd // Cryst. Struct. Commun. 1973 - V.2. - P.395-398.

88. Петнев B.3., Золотарев Ю.А. Кристаллическая и молекулярная структура комплекса z/woPd(Val)2.-H20 // Ж. структ. химии. 1992. - Т.ЗЗ. №1 -С.115-120.

89. Rosenberg В. Some Biological Effects of Platinum Compounds // Platinum Met. Rev. 1971. - VI5. №2 - P.42-51.

90. Jakupec M.A., Galanski M., Keppler B.K. Tumour-inhibiting platinum complexes-state of the art and future perspectives // Rev. Physiol. Biochem. Pharmaccol. 2003. - V.146. - P. 1-53.

91. Wong E., Giandomenico C.M. Current Status of Platinum-Based Antitumor Drugs // Chem. Rev. 1999. - V.99. - P. 2451-2466.

92. Sherman S.E., Gibson D., Wang A.H.J., Lippard S.J. Crystal and molecular structure of cis-Pt(NH3)2{pGpG}., the principal adduct from by cis-diamminedichloroplatinum(II) with DNA // J. Amer. Chem. Soc. 1988. -V.110. -P.7368-7381.

93. Sherman S.E., Lippard S.J. Structural aspects of platinum anticancer drug interactions with DNA // Chem. Rew. 1987. - V.87. - P.l 153-1181

94. Lippard S.J. Chemistry and molecular biology of cisplatinum anticancer drugs // Pure and Appl. Chem. 1987. - V.59. №6 - P.731-742.

95. Clear M.J., Hoeschele J.D. Antitimor platinum compounds. Relation between structure and activity // Plat. Met. Rev. 1973. - V. 17. - 2-13.

96. Clear M.J., Hoeschele J.D. Studies on the antitumor activity of group VIII transition metal complexes. Part I. Platinum(II) complexes // Bioinorg. Chem. — 1973. V.36. - 510-512

97. Farrell N., Ha T.T.B., Souchard J.P., Wimmer F.L. Cross S., Johnson N.P. Cytostatic ¿raw-platinum(II) complexes // J. Med. Chem. 1989. - V.32. -P.2240-2241.

98. Brabec V., Neplechova K., Kasparkova, Farell N. Steric control of DNA interstrand cross-link sites of trams platinum complexes:specificity can be dictated by planar nonleaving groups // J.Biol. Inorg. Chem. 2000. - V.5. -364-368.

99. Roberts J.D., Van Houten B.Qu.Y. Farell N.P. Interaction of novel bis(platinum) complexes with DNA // Nucleic Acid Res. 1989. - V.17. -P.9719-9733.

100. Farell N. Polynuclear platinum drugs // Met Ions Biol Syst. 2004. - V.42. -P.251-296.

101. Chen Y., Guo Z., Parsons S., Salder P.J. Stereospecific and kinetic control over the hydrolysis of a sterically hindered platinum picoline anticancer complex // Chem. Eur. J. 1998. - 38. - P.672-676.

102. Chen Y., Parkinson J.A., Guo Z., BrownT., Sadler P.J. A new platinum anticancer drug forms a highly stereoselective addact with duplex DNA // Angew. Chem. Int. Ed. 1999. - 38. -P.2060-2063.

103. Бельченко JI.А., Крылова Л.Ф. Ростингибирующая активность моноциклических комплексов Pt(II) и Pd(II) с аминокислотами ряда глицина//Изв. РАН. Сер. Биол. 1996 - №2 - С. 141-146.

104. Захарова И.А., Татьяненко Л.В., Могилевкина М.Ф. Мошковский Ю.Ш. Ингибирующая активность комплексов платины (И) с метионином // Ж. неорг. химии. 1981. - Т.26 №4. - С. 1138

105. Быстрова Е.И., Иванов В.Б., Чельцов П.А. Рост ингибирующая активность смешанных комплексов платины(П) с аммиаком и циклоалкиламинами // Изв. АН СССР. Сер.биол. 1991. - №6. С.829.

106. Rosenberg В., Van Camp L., Grimley E.B., Thomson A.J. The inhibition of growth or cell division in Escherichia coli by different ionic species of platinum(IV) complexes // J. Biol. Chem. 1967 Mar 25 - 242(6) - P. 13471352.

107. Zakharova I. A. Some aspects of biocoordination chemistry of palladium and platinum compounds // Rev. Roum. Chim. 1989 - V.34. №7. - P.1615-1630

108. Pneumatikalis G. // Polyhedron. 1984. - V.3.№1. - P.9

109. Ефименко И.А., Курбакова А.П., Иванова H.A. и др. Патент №5047273/04 // Б.И. 1994 -№21

110. Волштейн Л.М., Крылова Л.Ф., Беляев А.В. Кинетика замыкания гликоколевых циклов в комплексах платины(П) в связи с транс-вшятиш. II Ж. неорг. химии. 1973. - Т. 18, №4. - С. 1066-1070.

111. Крылова Л.Ф., Матвеева Л.М. Идентификация стереоизомерных комплексов Pt(II) и Pd(II) с аминомасляной кислотой методами ЯМР и ИК- спектроскопии // Ж. структур, химии. 2005. - Т.46.№1. - С.77-89.

112. L.F. Krylova, L.M. Kovtunova, G.V. Romanenko. Pt(II) and Pd(II) Complexes with P-Alanine // Bioinorganic Chemistry and Applications, vol. 2008, Article ID 983725, 10 pages, 2008. doi: 10.1155/2008/983725

113. Гюнтер, X. Ведение в курс спектроскопии ЯМР. М.: Мир, 1984. -С.284.

114. Терней, А. Современная органическая химия. М.: Мир, 1981. — Т. 1. — С. 154.

115. Накамото К. ИК-спектры и спектры КР неорганических и координационных соединений. М.: Мир, 1991. - 218 с.

116. Терней, А. Современная органическая химия. — М.: Мир, 1981. Т.1. — С.135.

117. Мичурин, И.Е. Авторефер. дис. . канд. мед. наук: / И.Е. Мичурин. Новосибирский научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН. Новосибирск, 2004. 19 с