Терпеноиды и флавоноиды Pulicaria salvifolia и Pulicaria uliginosa тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН ИНСТИТУТ БИООРГАНИЧЕСКОН ХИМИИ ИМЕНИ АКАДЕМИКА САДЫКОВА А. С.

РГ5 ОД

* " Др{ * Им прапах рукописи

ЭШ БАКОВ А КОМИЛА АЛИБЕКОВНА

УДК 547.91:547.595.9:547.972.

ТЕРПЕНОИДЫ И ФЛАВОНОИДЫ PULICARIA SALVIIFOLIA И PULICARIA ULIGINOSA

02.00.10 — Биоорганическая химия, химия природных и физиологически активных веществ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

i

<

ТАШКЕНТ — 19%

Работа выполнена в Ордена Трудового Красного Знамени Институте химии растительных веществ АН РУ.

Научный руководитель: доктор химических наук,

профессор МАЛИ КО В В. М.

Официальные оппоненты: доктор химических наук,

профессор У. Н. Зайнутдинов

Ведущая организация: Ташкентский Фармацевтический

институт

В _ча^ио па ¿<и,сдапш1 \^.пси,палнстриваппи1 и ъиосм

Д 015.21.01 при Институте биоорганической химии им.акад. Садыкова А. С. АН РУ по адресу: 700143, Ташкент, ул. X. Аб-дуллаева, 83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИБОХ АН РУ.

кандидат химических наук старший научный сотрудник Ш. Ю. Исламбеков

Автореферат разослан <

1996 г.

Ученый секретарь Специализированного Совета доктор химических наук, проф.

Н. И. БАРАМ

- о -

Актуальность проблемы, Растительной мир в настоящее время также, ках и во времена зелисого Ибн Сипы, остается неисчерпаемым источником новых природных биологически активных веществ. Наряду с широким спектром физиологического действия растительные вещества обладают большим разнообразней углеродных скелетов, циклов, Функциональных групп и химических свойств, поэтому их химическое исследование всех'да актуально.

Цель работа. Целью диссертации было исследование двух представителей рода Pulicaria сен. Asteraceae: P.sal. vil folia и Р.uliginosa. выделение и разделение терпекоидов и флавоноидов. идентификация известных, установление строения новых соединений, изучение их химических и спектральных свойств, разработка способов получения наиболее физиологически активных компонентов.

Научная новизна работы заключается в том. что: -выделены и установлено строение 3 новых клсродановых днтерпе.чоидов и 1 нового флавона из P.salviifolia. . •

-вперзые подвергнут химическому исследованию вид Р.uliginosa, из которого выделены и идентнСицнровшш 1 сесквитерпено-вкй лактон и 1 флавон.

Практическая ця'ч:псть диссертация заключается в разработке нового способа получения гипогллкемгчеоксго препарата сальзифо-лтша. позволяющего увеличить его. выход '8.5 раз. На способ получено пояшпельное реаенке на заявку от 29.06.92 г. М 4943487. йа основа изучения дннакики накопления сальвифолина в различные периоды вегетации было показано, что максиыалмгае его содержание праходатся на период цветения-и начал» плодсновения.

На защиту. выносятся, следукдЕие- основный положения:

1. Результаты исследования по выделению и идентификации терай.чсидоЕ и флавонсидов дзух видов растений рода Pulicaria.

2. Доказательство строений! трех новых дитерпеноидов кдерадгшосого ряда и одного коеого Ф лапок а.

3. Разработка нового способа получения препарата "СальвифолтГа (увеличивающего его выход в 5 раз) .

4. Исследование динамики накопления сальвифолина в растении Pulicaria salviifolia в различные периоды его вегетации.

Публикация и апробация работы. Результаты исследования были опубликованы в 6 статьях в журналах "Химия природных соединенна". "Киме вг фармация". доложены на конференциях молодых уче-

ных ИХРВ АН РУз (1991.1992 г.), 1-ом Международном Узбекско-Ту-рецкон симпозиуме по химии растительных веществ (Тапхент, 1994Г).

Работа выполнена в лаборатории химии кумаринов и тсрпеноидов ордена Трудового Красного Знамени Института хгаши растительных веществ АН Республики Узбекистан.

При выполнении дисс ертационной работы соискатель пользовался консультациями кандидата химических каук. старшего научного сотрудника Сагитдиновой Г. В.

Объем и структура диссертационной работы. Диссертация изложена ка 104 страницах и состоит из введения, литературного обзора (глава 1), обсуждения собственных исследований (глава 2), экспериментальной части (глава 3), выводов и списка литературы, включающего 100 источников и приложении. ; куда входят акты нспы-таний. Работа иллюстрирована 7 таблицами, 10 рисунками.

Литературный обзор состоит из четырех разделов, где впервые собран, систематизирован и обобщен материал но всем изученным видам Pulicaria.

ТЕГПЕНОКДЫ И СЯАВОНОКДЬГ Р'ЛЛСАГЛА SALVIIFO'uXA И PULICARIA ШЛЫКОВА Дптерпенскда Pulicaria salviiíclia

Pulicaria salviifolia Bgí ln Wem (блоиница ыалреслистная, сем. Asteraceae) многолетнее растение, достигающее высоты 1 к, имеет сильный специфический запах полыни, покрыто беловатым налетом. произрастает иг сухих каменисто-зебкистых склонах, на галэчниках и на выходах пестроцветных пород, в основном в Средней Азии.

F&HG& ксследсллаьа ¡¿¿.дзе^на** часть , йло^^цы lí^s^ccjIiíc í~

ной, собранной в стадии цветения вблизи селения Хо;:абад Папского района Наманганской области, при этом выделены 5 веществ: саль-вин. сальвини.ч. хардвнккиевая кислота, сальвифодин, сальвицин. Эти вещества имеют выраженный гипогликемический эффект. Из них сальвифолин показал самый высокий гипогликемический эффект.

Мы исследовали надземную часть Pulicaria salviifolia. собранную в разных местах произрастания. Предварительные исследования показали, что химический состав растения Р.salviifolia. соб-

раннего йз 5 мест произрастания (Ташкентской обл. окрестности Ллгрета. окрестности Чарвака. Республика Таджикистан, окрестности г. Айии, Самаркандской обл. по берегам р. Зарафяан, Наманганс-кой обл. село Пунган.) одинаковый, а корни из всех мест отличаются ст надземной части по химическому составу.

Из хлороформного экстракта надземной' часта наряду с ранее выделении« вещсстзанк, кногократным. хроматографирозанием выделили еще четыре нозых вещества: сальвицинин, сальвицинолнд А и В. пуликарин. По спектральным характеристикам и химическим свойствам они были отнеегкы к хлероданозым днтерпеноидам и флавонам.

Строение сальвицинина (I). С22Н305. хорошо растворяется в водных растворах бикарбоната натрия и щелочей, что свидетельствует о его кислотной природе.

ИК-спзктр:(см"1) 3600-3200 (гидроксильная группа). 1740 (слохкоэфирная карбонильная группа), 1570 (карбонильной группы).

Масс-спектр: а/г 378 СИ*). 360 (М-Нг0Г„ 333 «-СС0НГ.

Спектр ПМ? характеризуется следукжми сигналами: сянглетп по 38 третичных-мстильнух групп при 0,65 и 1,12 и.д.: дублет (ЗН) вторичного метила при 0,7 м.д., Д=6.5 Гц; трохпротон.чмЯ синглет мэтнлъной группы при дзойкоЗ связи при 1.62 м.д.; узкий трехпро-тоянкй.синглет протоков ацетильной группы при 1.96 м.д. Однопро-тоннг-гл ушфеннм? триплет при 7,04 м.д. с31=7,0 Гц относится к протону при двойкой сЕяги, сопряжзнноЗ.с карбонплом: при 5.2 м.д. резонирует сигкал олефинозс-гс- протона боковой алифатйчесхой цепи в виде триплета с 3Л=5,5 Гц. При 3.6 м.д. резонирует сигнал протона, гениального к гялроксильлоП группе, в виде одяопротсн-ного ушренкого триплета,-•• ^"6.23 Гц, Двухкротоньай - дублет при 4,42 м.д.'.;'.1=5,5 Гц. откосятся к чегшгеноией группе, связанной с ацетог.сильной группой.

Состав салызицшаша. количэстео и характер иегилыак групп в сочетании с сигналом олефжового протона при 7,04 м.д. (т.30 Гц) позволяет- отнести его к датерпеноидам клероданоного тина с боковой алифатической цепочкой. Действительно, при щелочном гидролизе из I получена. клероданоБля кислота сальвицин (П). иден-тифицкрозанная' по физико-химическим и спектральным параметрам. По составу сальБицян и сальвицинин различается иа одну ацетиль-нуи группу. Срагнеииа спектров ПНР I и II (таблица 1) указывает на то, что сальшщинш язлейтся моноацетатом сальвицина по

ТАБЛИЦА 1

ХС.нультнплетяость и КССВ протоноа в спектрах ПМР сальвицини-иаШ н его производных (О-ПЩС. 100 МГц. d. и.д. J. Гц)

Вещество и растворитель Положение протонов

11-3 !Ь6 11-14 |2Н-15 СИ3-16 СНз-17 СН3-16 СН3-20 0СН3 ОАс

СальвицишшШ" 7.04 # 3.6 5.2 4.42 1.62 0.7 1.12 0.65 - 1.36

CDC13 т 7.0 т ' • 6.25 Т 6.5 д 6.5 fi а.е\ Д 6.5 с с с

Сальвицин(И)'* 7.1 3.62 5.32 4.1 i-6 0.72 1.14 0.65 - - ■ - ;

COCI3 ;:т. т ■''. т ; Д с Д с с

7.0 6.0 6.5 6.5 , ЗИ 6.5

Лактон (III) 5.4 3.64 5.26 4.45 1.62 0.92 0.96 0.8 - " 2.0

CDCI3 т 5.6 дд ^ 12 4.0 т 7.0 Д 7.0 с Д 6.5 с с с

Метиловый эфир 5.78 3.63* 5.65 4.42 1.65 0.59 1.4 0.51 3.63 2.0

сальвицшшна(Ш Т !1 т Д С д с с с с,

C5D5!I 7.0 6.5 6.5 6.5 :

Диацетат мети- 5.78 4-7 5.25 4.5 1.64 0.77 1.32 0.7 3.6 1.92

лового эфира т дд Т Д с Д с с с с

сальвицктша(У) е.о 10 6.5 6.5 6.5 2.0

c5d5h 5.0 с

* Наложение снпшюз Н-6 и 0СН3.

*< Наблюдается также .сигнал протона карбсхснлмюй группы при 8.9 м.д.в виде уш. с

первичной гидроксильной группе при С-15. так как в спектре ПНР сальвицинина сигнал протоков Н-15 претерпевает низкопольный сдвиг на Д5 0,32 м.д. и соответственно наблюдается высокопольный сдвиг сигнала олефинового протона Н-14 на 0.12 м.д. Сигнал вторичной гидроксильной группы Н-6 не изменяется.

Таким образом, сальвицкнин имеет строение 6а-окси-15-ацеток-си-1Э-карбокси-тпргнс-клерода-3,13 (14)-диена (I).

При ацетилирсвании салы.кцкна и сальвицинина была выявлена способность этих вецеств к лактонизации. Из обоих веществ в присутствии уксусного ангидрида в пиридине при комнатной температуре был получен лактон III С22Нзг04 360 (Ч*). в КК-спектре которого наблюдается четкая полоса поглощения к-лактонкого нарбонила при 1780 см"1 и сложкоэфирного при 1745 см*1. В спектре ЛИР лак-тона III (таблица 1) наблюдается высокополькое смещение сигналов Н-3 к H-1S, лактс::ный протон резонирует при 3,64 м.д. в виде дублета дублетов с КССВ 12 и 4 Гц. Ги'гкалы боковой азгифати«ескоч цепи'практически не изменяют свой характер и положение (Н-14. 2Н-15. СН3-1б).

Химические превращения сальвицинина (I)

IV V

Ацетнлировать вторичную гидроксильную группу в сальвкишине удается только после предварительного метилирования карбоксильной группы диазометаном.

Строение сальвицинолида А (У!). С20Н2605, т. пл. 146-150°. В НК-спектре имеются полосы поглощения гидроксильной группы (3400 см"1), карбонила а.р-ненасыщекного ^-лактона (1752.1663 см"'), совокупность полос при 755 и 1669 см"1 характерна для а,6-ненасыщенной карбоновсй кислоты. Молекулярная пасса 348 установлена масс—спектрометрически.

Спектр ПМР близок к спектрам ПНР производных клеродана, ранее выделенных из этого растения.

В области сильных полей кабдадаются сигналы трех метальных групп (СН3 -17, СН7-18, СНя-20. см.табл. 2.3). При 7,06 м.д. (уи.т, ,1»4»0 Гц, 1Н).наблюдается характерный дли кяеродановых производных сигнал винильного протона в группировке -СН»С<[00К Количество и характер сигналов метальных групп, триплеткый сигнал винильного протона■позволяют отнести сальвнциладцд А к про игзодным клеродана. в области гакгкдроксилькых протонов наблида-егся однопрстоиныЛ упаренный триплет (Л*5,5 Гц) при 3.75 к. д. Отнесение сигналов Н-14 и Н-16 удалось сделать по результатам экспериментов с деотшм облучением. При снятии саектра 1ШР б двйтсром-гтаколе' кабледастгя • дальняя КССВ этих протонов.-' {Ьегино-вый протон Н-14 образует ■ шюхоразреюеннуа квннтстнуж структуру, которую по результатам экспериментов■с двойкам резонансом можно объяснить триплрт/триплр.тным растеплением с метиленовыми протонами 2Н-12 и 2К-16 с константами 1,5 и 2.0 Гц. Соответственно метиленовые протоны 2Н-12 обнаружены по развязке спин-спинового взаимодействия с Н-14 и 2Н-16 при 2.05 м.д. Сигнал Н-14 при подавлении протонов 2К-12 проявляет остаточное трнплетное, а 2Н-16 дублетное ..раздеаденае с .3 С Гц. Зто. взаимодействие протонов Н-14 и 2Н-16 также подтверждается двойным резонансом.

Совокупность данных {ПС- и спектров ПМР обнаруживает одновременное присутствие в молекуле 'Л трех основных кислородсодержащих функциональных групп: карбоксила, сопряженного с двойной связьи, вторичного гидрокскла и карбоикла а, ^-сопряженного •¡¡-лактона. "

При метилировании диазометаном в обычных условиях сальвициноллд к образует метиловый эфир УН.

Химические превращения еапьвицтюлида А (У1)

При ацаталироваши 'уксуснм.1 ангидридом в пиридине при коикатиой температуре, вместо .ожидаемого ацетата по вторичной гадрокснльной группе, образуется дидахтон VIII.

В ИК-слектре VIII наряду с полосой поглощения харбоннла исходного вещества при 1752 см"1 появляется интенсивная полоса поглощения. карбонида' Т(-лакгсна при 1760 см"1, а полоса поглощения гидроксила исчезает полностью.

Молекулярная касса вещества VIII уменьшается на 18 единиц ,(М*»330).• т.е. можно предположить, что;произошла дегидратация с последувщеЯ ф!клизац:!йй С-5 и С-19 и • образованием лактокного кольца.

Это подтверждается,и спектром ПМР вещества УШ: наибольшее изменение происходит в сигнале протона 11-3. который смещается в сильное поде на 0,62 м.д. (табл.2)

Ранее такая склонность к лактониьация была отмечена для сальвицинина.

Таким образом, для сальвицинолица А' предлагается строение 6-а-окси-19-каргокси-транс-клерода-3.13(14)диен.16.15-олида.

Таблица 2

ХС, мультиплетность, КССВ протскоз сальснцинолидоа A (YI) и й (IX) и их производных (0-ГМДС. 100 МГц, d.m. д. Л.Гц).

Вещество и растворитель

Протоны

YIII IX

YI YI YII

CDC13 CD30D CDC13 CDCI3 CDClj

Н-3 7.06 уш.т 6.83 т 6.70 т 6.44 т. 7.0 т

J=4.0 J-4.0 J-4.Q - >3.5 J=4.0

Н-6 3.75 уш.т 3.58 дд 3. 62 дд 3.66 дд 3,60 уш.т J-7.Ô

J=5.5 J»8.5; 6.5 J-11: 5.0 J=11.4:4.1

Н-14 7.10 уш.с 7.30 ТТ 7.05 п 7.05 ТТ 5.82 ДД

J=2.0; 1.5 J»1.5;2.0 J«2.5; 2.0 J=16.0:10.0

Н-15 5.14 Д J=i6.0: 5.01 . д J=10.0

Н-16 4.73 уш.С 4.77 дт 4. 73 дт 4.72 ДТ 1. 22 с

J=2.0; 1.5 j-2.0." 1.5 J=2.0: 1.8

Н-17 0.81 уш.Д 0.83 Д 0.30 д 0.94 д 0.73 Д

J-5.5 J-6.0 J-5.0 J-5.0

Н-18 1.18 С 1.18 с 1.17 с 0. 97 С 1.12 С

H-2Û 0.71 С 0.72 С 0.70 с 0.82 с 0.64 с

Строение сальвитнолиаа В (IX). Cg0Н3003, т. пл. 160-161°. ИК-спектр (ркс.6): 3600-3200 см"1 (гйдрбксильная группа), 1750 и 1680 см"1 (карбонильная группа а, р-кенасьццакного у-лахтона), Молекулярная масса 318 установлена . масс-спектрометрически. Спектр ПМР .(табл.2) позволяет отнести сальвицинолкд В также к );-лактонам клеродакоезго ряда, «о в. отличие от сальеищшолкда А с алк^тической боковой цепочкой. Строение брковоП алифатической цепочки становится ясным на основании спектров IM?.

Два дублета при 5,01 м.д, (J-10 Гц) и при 5,14 м.д. (J=16 Гц) относятся к протонам С-15 экзометиленовой группировки, у} которых больсие константы вицинального взаимодействия, а геминальные. близки к нулю. Однопротонный.дублет дублетов при 5.82 м.д. (J-16.0: 10.0 Гц) относится к вицинальному к ним протону при С-14, отсутствие дополнительных расщеплений в сигнале этого протона указывает на то, что соседний атом углерода С-13 четвертичный и сигналы очень характерны для такого фрагмента датерпешцюв. Последнее хорошо согласуется с тем, что при 1.22 м.д. наблюдается сигнал метила С-16 при атоме углерода.

связанном с кислородной Функцией. АВС-экзометиленовая система протонов при С-14 и с-15 также подтверждена методом двойного резонанса.

Таким образом, совокупность спектральных характеристик позволяет предложить для сальвицинолида В строение 13-ок-си-транс-клерода-3.14-диен-6-а.19-олида (IX).

Строение пуликярина (X).Колоночной хроматографией спиртового экстра1ста на силккагеле наряду с выделенными дитерпеноидами кле-роданового типа, мы вьшелили новое производное флавонола состава С, 9Н, 808 (X), т.пл. 180-181° и...назвали'его.пуликарином.

УФ-спектр [^^58, 272. 351 нм (lg t 3,61: 3.53: 3.77)] характерен для производных флавонола, замецениых по гидроксиль-ной группе при С-3. КК-сг.ег.тр: 3110.16S5.1610.1520.1470.1360 СМ"1. Масс-спектр: (m/z) (!Г)>=374, (Г~1)=373, (!Г-15)=359.

Спектральные данныепуднхарнна я его молекулярная масса, свидетельствуют о том, что пуликарин относится к дигидрокси-тет-раметоксифлавонам- Ион Ш*-1)=373 в масс-спектре соответствует иону, образованному при отрыве протона от 6-0Н-группы.

Анализ УФ-спектров пуликарина с ионизирующими и комплексооб-разущими яобавкаки Ä1C1-, А1С13+НС1, JlaQCH3, CH3C00Na. СН, С00-Na+H3B03 показывает, что в пуликарине в положениях 3.5, 7,4' отсутствуют свободные гидроксильные группы, т.е. эти группы метилированы.

В спектре ПМР (CDC1,, 100 МГц) наблюдаются сигналы, характерные для окси-метоксизамещенных флавонов; Мультиплет (2Н) при 7.55 м. д. соответствует протонам Н-21 и Н-61; дублет (1Н) при 6.95 м.д. относится к протону Н-51, синглет (Ш при 6,42 м.д. характерен для•протона Н-8, сигналы четырех метоксильных групп в виде четырех узких сшглетов (по ЗН) наблюдаются в области 3,75. 3.78, 3,82, 3.85 м.д., при 6,05 м.Д. в виде синглета (Iii) проявляется сигнал гидроксилыюй группы, который исчезает в спектре

IX

ацетата.

При ацетидирсшании пулик&рина образуется диацетат СгзН220]0 (XI), охарактеризованный спектрально.

Сплавление пуликарина со щелочью приводит к образованию изо-ванилиновой кислоты (XII). что однозначно определяет расположен ине метокси- и гадрокскгрупп в кольце В.

На основании вышеизложенных данных пуликарин имеет строение 6,31 -дигидрокси-3,5.7,4!-тетраметоксифлавона (X).

Химические превращения пуликарина (X)

ХК-'СЮИз

CHjOCO^Y^Y^OCH, óchj о

'XI

СЕСКВКТЕРПЕКОВД! И ОДАБСШЫ PULICARIA ULIGINOSA

Блошница болотная - Pulicaria uliginosa STEW (P.dysentirica) произрастает в Цектральнсй-Азии. Иране. Афганистане, юге Европы и ранее химическому исследованию не подвергалась.

Строение гайллардина (XIII) Мы исследовали надземную часть блошницы болотной, собранную ь Ферганской долине (Узбекистан) в период цветения. Для экстракции сырья использовали хлороформ.метанол. Сумму разделили колоночной хроматографией на силикагеле, из хлороформного экстракта выделили оптически неактивное кристаллическое вещество С17Н2г05, т.пл. 188-190°. [а]^ 0" (с 0.5; хлороформ).

Согласно ИК-спектру вещество отнесли к ацилкрованным '¡(-лак-тонам (3520, 1770, 1735. 1S80 см"1). Оно имеет ацетильную и гид-

хп

роксильную группы, что потверждает масс-спектрометрия и данные спектроскопии UfiP.

Б касс-слектре отмечаются пики ионов с u/z ЗОоОГ), 288 (К* -Н20). 247 (М* -ОСОСИз ).

Вещество не ацетилируется уксусным ангидридом в пиридине при нагревании, что свидетельствует о третичном характере его гидрокскльной группы.

В ПМР-спсктре ваблйдаются сигналы протоков метила при двойной связи (с 1.75 м.д.ЗН), протонов метила при гетероатоме (с 1.18 м.д.ЗН), протонов метила ацетильной группы (с 2.00 м.д.ЗН). лактонного протона (уш.д. J=10 гц.4.4 м.д. 1Н). протонов экзонети-леиа (два дублета при 5.47 и б.12 м.д. с J=3.5 гц. по 1Н каждый), два сигнала в виде сильно угиренных сикглетоз по 1Н при 5.24 и 5. 8 м.д. могут быть отнесены к гемацильному и олефиновому протонам.

Совокупность спектральных данных позволила предложить для lf-лактона несколько альтернативных структур. Для достоверного установления строения кы провели рентгеноструктурный анализ (FCA) кристалла списываемого "¡(-лактона, так как располагали всего несколькими кристаллами вещества.

По результата:.! РСА иссдедуемий ^-»Ч'тои оказался кдсюгичввд' тоЯлйзрпику (XIII). ранее ■ведел-гктсму иг Gaillardia pulcliella. Inula oculus-chriisti. Inula, britanica L.s. I. , Inula britanica L.var.cftinensis (Rnpr.) Regel. Растение Pulicaria uliginosa -бдсианкца болотная на содержание лактонов исследовалась впервые.

Строение сорб?'»о.ш5на (XIY). Продолтая исследование суммы надземной части растения Pulicaria uliginosa, из метанольного экстракта мы выделили флавон состава С1БН)г06, т. пл. 276-278°.

В НК-епектре флавона присутствуют полосы поглощения при 3360.1658.1625,1570.1520,1440.1350 см"1.

В У?-спектре им'яются максимумы поглощения при Хтзх 272 (lg е=3.64). 340 ни (lg t=3.80).

Масс-спектрометрячёская фрагментация : соединения характерна для распада молекул оксиметоксифлавонов под действием электронного удара: m/z 300 (М*), 299(М'-1). 285 (М*-СНЗ). 257 ОГ-СН3-СО>. В спектре ПНР (ДМСО. 100 МГц) тоже наблюдаются сигналы. характерные для оксйметоксизамещенных флавонов. Дублет при 7, 87 м.д. (J-S. 5 Гц. 2Н),соответствует протонам Н-2! и Н-Б!, дублет при 6. 87 м. д. (J*8.5 Гц. 2Н) относится к протонгл Н-3! и Н-51, синглет при 6.7 м.д. (1Н) характерен для протона Н-3. синглет при 6,5 м.д. (1Н) относится к Н-8. при 3.7 м.д. наблюдается трехпротонный узкий синглет протонов метоксильной группы.

Анализ УФ-спектров с добавками .метилата натрия и ацетата натрия, а также совокупность всех вышеизложенных спектральных характеристик позволили идентифицировать выделенный флавон с сорбифолином - 5, 6,4' -тригидрокси-7-метоксифлавоном (XIY). ранее выделенным из Sorbaria stellipita, Scoparia dulcís. Anvillea garcini, Pieocarphus revolutos.

Из растений рода. Pulicaria сораифолин выделен впервые.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ.СОДЕРЖАНИЯ САЛЬВИФОЛИНА В СЫРЬЕ

Из Pulicaria salviifolia была выделена кислота, имеющая кле-родановый скелет - сальвифолин. который обладает гнпогликемичес-кой активностью. Для выявления оптимальных мест и периода вегетации сырья мы изучили количественное содержание сальБИфолина из пяти мест произрастания растения.

Воздушно-сухую измельченную надземную часть Pulicaria salvi-ifolia. собранную в период конца цветения-начала плодоношения, экстрагировали этиловым спиртом.

После отгонки этанола, остаток обработали этилацетатом. затем раствором соды. После нейтрализации раствором серной кисло-

ты целевой продукт извлекали этилацетатом. Сальвифолин выделили препаративно на пластинках силуфол.

Аналогично количественное содержание сальвифолина определяли в разных местах произрастания, в различных органах растения и па периодам его вегетации.

В результате проведенных исследований было показано, что максимальное содержаниесальвифолина обнаружено в период цветения и начале плодоношения (таблица 3).

Таблица 3.

Содержание сальвифолина в растении Pulicaria salviífolia в зависимости от места произрастания и от периода вегетации.

Место произрастания

% Содержание от веса сухого сырья

фаза бурного роста

фаза бута низации

фаза цветения

фаза

начала

плод.

Фаза

конца

плод.

1 Окр.г.Намангана

/пос.Пунган/

2 Окр.г.Самарканда дол. р.Зарафшан

3 Окр. г. Ангрена ' /Ангренский разрез/

4 Ностанлик.р-н. таикент. обл.

5 Окр.г.Айни ■.-.-.-.■. Таджикистан

0,58 0,60

0,62 0.65

0,63

О, 97 0,98

0.97 0. 96 О, 99

0,99 0,55 1,00 0,57

0,99 0. 98 1,01

0.56

-•-Обозначение отсутствия Фазы, Установила, что его количество практически не зависит от места произрастания, а тазасс и наибольшее количество сальвифолина содержат цвоты и семена РаИсаг1а 5а1уйГоИа (таблица 4).

- Таблица 4. Содержание сальвифолина в отдельных органах растеш-я РиИсаг1а за1УШо11а

н п/п Органы растения Сальвифолин (в % от веса сухого сырья)

1 Стебель 0,30

2 Листья . 0.75

3 Цветы ; 0.99

4 Семена 1.00

НОВЫЙ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ САЯЬЗИ.ЭДИНА

Как указано вше, сальвифолия обладает гипогликемической активность» н для него ранее разработан способ получения. По предложенному способу удается выделить 13% сальвнфолнна от общего количества вещества, содержащегося в растении, а основная часть сальвифолина, как показали наши исследования, остается в осадке вместе с хлорофиллами. К недостаткам способа следует отнести использование длительного процесса колоночной хроматографии, при которой необходим постоянный контроль за фракциями методом ТСХ, объединение однородных фракций и т.д. При наработках большого количества вещества этот процесс мохет быть многодневным и непременно сопровождается потерями больших количеств веществ, необратимо адсорбирующихся на адсорбенте.

Мы разработали новый метод получения сальвифолина из растения с большим его выходам.

Поставленная цель достигается тем, что сальвифолнн как вещество, имеющее кислый характер, извлекается. непосредственно кз сухого изиельчекноф'растения. 1-3% раствором сода, содовый экстракт после прождашня гзксакем. подкисляется. выпавшая осадок отделяется, промывается, дастштуоаакной водой, сушится при комнатной -температуре;-'- затем растворяется в сухом хлороформе, при сгущении которого а васууне, "сальни^олич выпадает в осадок. Выход конечного продукта достигает 65% от общего содержания т.е.'в 5 раз больсе, .чем по изьестнсму способу.

Содержание сальвифолина в растения определено исчераьташцей экстракцией кз,'сырья содовый раствором и затем препаративной хронатографчгй, оно составляет 1% от веса сухого растения.' собранного в фазу начала плодококедая.

Общая схема получения сальвифодана по предлагаемому способу представлена на схеме 1.

Сальвяфогаи, голучепный предлагает® способен, идентифицирован по ИК, ПНР, масс-спектрам. его гипогликемическая активность подтверждена фардакологическ.чми исследованиями в отделе фармахо-логии и токсикологии ЙХРВ с.н.с.Хушоактсвой З.А. и м.н.с. Тааыу-хомедовой М. А.

Схема 1.

Обкая схема получения савьвифслина.

| РАСТВОРЕНИЕ 5 ХЛОРОФОРМЕ. СГУЕЕНИЕ } САЛЬВИФОЛИН!

Киолог^чейчаг апткяклсть изученных веществ. В спязи с тем, что в последние годы появился ряд сообщений о влиянии флавоиои-дов на организм при нарушении липидного обмена, представляет интерес провести фармакологические исследования по действию пули-карика на уровень холестерина и трнглицеридов в сыворотке крови Исследования были проведены в лаборатории фармакологам ИХРВ АН РУ с.н.с., к.б.н. Хушбактозой З.А. Полученные ею экспериментальные данные показывают, что введение пуликарина нормальным животным в течение 10 /шей способствует снижению уровня холестеонна ь сыворотке крови на 20%.

Применение пуликарина в условиях нарушенного липидного обмена способствует его нормализации. Так. если воспроизведение три-тоновой гипзр.,тпиде:ши сопровождалось увеличением уровня холестерина в 4 раза, предварительное введение пуликарина препятствовало увеличению его уровня на 19%. Введение же его животным с эндогенной гиперлипидеиией также способствовало снижению содержания холестерина в крови.

- IB -

В Ы В V) д ы

1. Проведено систематическое исследование терпеноидов и {шавонов двух видов Pulicaria. Р.uliginosa химическому исследованию подвергалась впервые.

2. Из P.salviifolia выделено 8 дитерпеноидов клеродановогр ряда. 5 из них идентифицированы с ранее выделенными веществами (сальвин. сальвинин. хардвиккиесая кислота, сальвифолин. сальвй-цин), а для 3 новых-сальвицинина ба-окси-15-ацетокси-19-карбокси -траис-клерода-3,13(14)-даена. сальвицинолида А б-а-окси-19-кар-бокси-транс-клерода-3.13(14)диек. 16.15-олида и сальвицинолида Б 13-оксн-транс-клерода-3,14-диен-6-а,19-слида, установлено строение на основе химических превращений, интерпретации спектральных характеристик как самых - веществ; '.-так- и их производных.

3. Впервые из P.salviifolia выделен новый флавон! для которого на основании изучения физико-химических свойств и спектральных характеристик как самого вещества, так и его ацетильного производного, установлено строение 6,3'-дагидрохси-3,5.7.4'-тст-раметокснфлавона. названного.пуликарином.

4. Из Р.uliginosa впервые выделены и идентнЗицироваяы гвая-нолид тайллардин и флавон сорбифолин.

5. fía основе изучения даваыики накопления сальвифолива в онтогенезе бьшо показано, чте. макскиальное содержание сальвифо-лина приходится на период цветения и начало плодоношения.

6. Разработан новый способ получения птогликемического препарата сальвифолина, на который получено положительное решение на заявку от 29.06.32 г. Н 4343487.

Содерхание:диссертации изложено в следующих работах:

1. Сагнтдинова Г.В., Эагбакова К.А. Хушбактова З.А., Маликов В.М., Олямсв В. Флавоноид пулнкарин из Pulicaria salviifolia и его гиполипидемнческая активность. //Химия природ.соед.-1992,- К 3-4.- С. 328-330.

2. Сагитдиноаа Г.В.. Эабакоьа К.А.. Капи;хв В.М. Дитерпено-ида Pulicaria salviifolia III. Строение смьвицинина. // Химия природ.соед. -1994. -N 2. -Р. 246-249.

3. Эшбакова К.А.. Сагитдинова Г.В. Маликов В.М.. Мукунов И.У.. Абдуаазаров С. Кандли диабетга карам препарат "Сальвифолин"нинг усишшкдаги микдорий анализ». //Киме ва

фармаиия. -1S95. -Н 1. -С. 16-18.

4. К. А. Эшбакова, Г. В. Сагитдинова, В. М. Маликов. С.Мелибаев. Флавон сорбифолин из Pulicaria uliginosa. //Химия природ.соед. - 1996. -Н 1.- С.100-101.

5. К.А.Эшбакова. М.К.Махмудов, Г.В.Сагатдшова, Б.Ташходза-ез. Кристаллическая и молекулярная структура гзайанолида гайл-лардина. //Химия природ.соед. -1996. -N 2. -С. 202-205.

6.К.А.Эибакова. Г.В.Сагитдинова, М.Г.Левкович. Б.Ф. Расулов, Я.Д.Абдуллаев, В.М.Маликов. Дитерпеноидн Pulicaria salviifolia IY. Строение сальвицинолидов А и В. //Химия.природ, сое-дин..-1996. -Н 6. -С. 855-858.

7. Сагитдинова Г. В., Эшбакова К.А., Таимухамедова М. А... Ма-матханов А.У.. Мелибоев С., Нурмухамедоза М. Р.. Абдуллаез Н.Д.. Маликов В.М., Хушбактова З.А., Сыров В.Н., Арипджанов А. К. Положительное решение на заявку от 29.06.92 г. N 4943437. "Способ получение 6-а-гидрокси-15.16-эпскся-19-карбокси-транс-клеро-да -3(4)13(16),14 -триен - дитерпеноидная кислота обладающая ги-погликемическая активность.

ХУЛ ОСА

К.А.Эзбакова

PULICARIA SALVIIFOLIA ВА PULICARIA ULIGINOSA УСКМЛИЯ-ЛАГйНИйГ ТЕРПЕК0ЯД ВА ФЛАВ0ШЩЛАРИ

Диссертация Pulicaria туркумига кирузчи усимяиклариинг 2 ту-ря!М, (ягни Pulicaria salviifolia ва Pulicaria uliginosa) терпе-ноид ва флгвсноид ноддаларини урганиага багкшлаиган. булиб. иы натигдсида 8 клеродан ь,аторига оид дигерпеноид, 2 флаеон ва 1 сескзнтераен лактон модцалари атратаб слинди.

4 янги (3 клеродан каторли датерпеноид ва i флавон) модда-ниаг тузилизш уларнияг кнмёеш» узгариаларини урганиш натижалари •Чакда физик текширж усуллари ёрдзмида исботланди. Биринчи марта Fulicaria uliginosa усимднги кинёзий жи^атдан урганилда ва бу усимлик таркибидан илк бора адабиётда маълум сесквнтерпеи лакто-нн гайллардин ва Флазок сорбифолинларни атратиб олинди.

Амалий медицина нуцтаи назаридан а^акиятли гипогликемию препарат " Сальвифолин "никг энг куп мш^дори уси,чликнянг усиш хойи, вегетация даври з^амда усичликнинг органлари б^йича ургаиилиб. унинг усимдикнинг гуллаа ва уру?ланиининг бошланиш даврига тугри

келиши анж?ландн. Шунингдех гипогликемии' препарат "Сальаифо-лин"нинг янги. унуми 5 маротоба ю^сри булган олиниш услубя ишлаб чии^лди ва авторлик гуво^номасига рухсатнома олннди.

Флавон пуликариикинг к,ондаги холестерин кикдорини 20% га ка-майтирши ани^ланди.

' Диссертация рус гилида ёзилган булиб, машинка ёзувидоги 104 бетли техстда баён этилган ва у ккриа, 3 боб, хулосалар хамда 100 номдаги бнблиографияли уз ичига олада.

Susaary

К. A. Eshhakova

TERFEH0IDS AKD FLAVONOIDS OF PULICARIA

SALVIIFOLIA AND PULICARIA ULIGINOSA

The thesis is devoted to the study of Pulicaria salviifolia

and Pulicaria uliginosa terpenoids and flavonoids. As a result

of the investigation there have teen isolated С clerodane diter-

penoids, 2 flavons and 1 sesquiterpenlsctone. The structures of

4 new compounds (3 . clerodane diterpenoids and l flavone) were

elucidated on the Eác'iá of cfceaical 'transioraatioii and spectral fi •

methods of investigation.

Chccical study of Pulicaria uliginosa has teen carried out for the first time. Sesquiterpenlactone gayllardin ana flavoae sorfcifolin were isolated from the plant.

It has been established the quantitative content of salvifo-lin depending on growing place ah* vegetative period and plant organs. The practical significance of this thesis consists of the í.ork out of mí? asthoi for an isolation of fcypoglyfcaenic preparation - "Sálviíplih* • free the plant with higher yield and the copyright receipt.

\