Трансформация глицирризиновой кислоты. Поиск новых физиологически активных соединений тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.03 ВАК РФ

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК УФИМСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР ИНСТИТУТ ОРГАНИЧЕСКОЙ ХИМИИ

Уч. № 209 На правах рукописи

Для служебного пользования

Экземпляр 9*0 О О 21

БАЛТИНА ЛИДИЯ АШРАФОВНА

ТРАНСФОРМАЦИИ ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ. ПОИСК НОВЫХ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ.

02.00.03 - Органическая химия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук

УФА -1995

' / / 4 / д

Работа выполнена в Институте органической зоиеш Уфимского научного центра Российской академии наук

Научный консультант: акадеыик РАН

Толстжов Г.А.

Официальные оппоненты: член-корреспондент РАН

Власов В.В.

доктор зо&зпеских наук, профессор, Зорин В.В.

доктор хтическнх наук, профессор, Абдрахианов И.Б.

Новосибирский институт органической зишии СО РАН

Ведущая организация:

Защита диссертации состоится

••¿¿••Ж

_1995 года в

на заседании диссертационного совета Д 002.14.01 при институте органической хнгды Уфииского научного центра РАН по адресу: 450054, Башкортостан, г.Уфа, проспект Октября, 71.

С диссертацией иоано ознакомиться в научной библиотеке Уфимского научного центра РАН. " •

Автореферат разослан " у " ка _19Э5 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор химических наук

Валеев О.А.

Общая характеристика работы

Актуальность работы: Создание новых высокоэффективных екарстиениых препаратов антивирусного, иммуностимулирующего, ротавоноспалшельного и противоязвенного действия с низкой жсичностью является одной из важнейших проблем медицины, армакологии и органической химии.

Несмотря на крупные успехи в области синтетических лекарств, жарстиениые препараты природного происхождения приобретаю* вес шьший вес п практической медицине.

Развитие исследований по синтетическим трансформациям южоактиваых природных соединений с цслыо получения еще более иных препаратов является одним из перспективных направлений при зработкс новых лекарственных средств. . Очень часто ансформированные природные соединения по активности значительно евосходят напшные вещества. Поэтому поиск новых [сокоэффектишмх препаратов направленного физиологического тстпия среди огромного разнообразия природных содинений и их дифицированных аналогов всегда оправдан.

1С числу природных соединений, представляющих большую ценность i медицины, относятся тритерпенопые гликозиды, широко :просгралсшцлс в. , растениях ,. различных ..видов и морских позвоночных.

Настоящая работа представляет собой одно из первых, в литературе ледояаний ,в области . синтетических трансформаций сложных шфункциоиальных. молекул - тритерпеновых гликозидов и является в м плане актуальной. С другой стороны, актуальность работы связана с работкой новых пысокопффскшвпых лекарственных препаратов па one доступного растительного пгакозида- глицирризинопой кислоты ) - основного ингредиента корней солодки голой (Glycyrrhizae glabra) и чьской (СЛ. uralensis), распространенных н азиате кой часта России и

стран СНГ. ГК, ее агликон - глицирретовая кислота и их производные известны своей высокой и разнообразной фармакологической активностью и уже нашли применение за рубежом в качеств« противовоспалительных, противоязвенных- и антивирусных средств Отечественных же препаратов из гликозида и его ггроизводны; практически нет, за исключением антифлогистика глицирама. Поэтом] проведение систематических исследований по силтетическт трансформациям гликозида и целенаправленному поиску новы: фармакологически активных производных ГК, представляющих интере для медицины, является актуальной задачей.

Работа выполнена в соответствии с планом научно исследовательских работ Института органической химии УНЦ РАН п темам "Синтез низко-молекулярных биорегуляторов" (№ гос. регистраци 01.85.0 050108), "Разработка эффективных путей и методов полног синтеза природных соединений и их аналогов с практически важно биологической активностью" (№ гос. регистрации 01.90.0 011565), РА] СССР от 19.06.1987 № 10103-987 НТО, проблема 0.74.05, задание ; "Разработать методы выделения, установления строения и синте: биорегуляторов и биологически активных веществ различного типа". Цель работы:

1 проведение синтетических трансформаций основного ингредиента кор! солодки - глицирризиновой кислоты; 2) синтез новых физиологичеа активных производных ГК, обладающих комплексом ценных д медицины свойств; 3) разработка способов получения гликопептидов Г

4) синтез гликопептидов ГК, содержащих пептидные фрагменты ] ацетилмурамилдипептида (МДП) и его иммуноактивных аналоге

5) синтез новых типов тритерпеновых гликозидов - аналогов Г

6) разработка технологического способа получения препарата - ниглии

7) разработка новых высокоэффективных лекарственных форм ювесш: препаратов на основе ГК.

Научная новизна. Осуществлен первый в литературе цикл [сследований, посвященных синтетическим трансформациям ритерненового глижозида - ГК, итогом которого явилась разработка бщих подходов к модификации тритерпеноидных гликозидоп на основе :ринципа сохранения природной связи аглижона и углеводной цепи.

Разработана и реализована программа целенаправленного поиска ювых фармакологически активных производных ГК, позволившая голучить соединения с видом активности исходного гликозида, но гревосходящие его по терапевтической ценности, а также обнаружить руппы веществ с другими видами фармакологической активности.

Синтезирован новый класс веществ - тритерпеновые гликопептиды, в :огорых моделируется амидный тип связи природных гликопротеинов, герспективных в качестве иммунорегулягоров. Разработаны новые )ациональные способы синтеза карбоксизащищенных: гликопептидоп ГК, :оторые могут быть использовапы для аналогичных превращений фиродных гликозидов и олигосахаридов, содержащих фрагменты кроновых кислот и карбоксильные группировки. Предложен экономичный летод синтеза гликопелтидов из ГК и свободных аминокислот и цшептидов по принципу "минимальной защиты" с использованием в сачестве конденсирующего агента "комплекса Р". Осуществлен синтез 'ликопентидов монометилового эфира ГК, содержащих дипептидные [венья известного иммуностимулятора - фрагмента клеточных стенок .шкобакгерий К-ацетилмурамилдипенгида (МДП) и его иммуноактивных шалогов.

Разработан, имеющий общее значите, подход к синтезу гритерпеновых амииогликозидов, основанный на применении методов элективного введения аминаой функции в углеводные фрагменты чгикозида. Синтезирована обширная группа производных ГК, зкшочающая эфиры,. ацилаты, триамиды, гликозиды с гетсро-диклическими фрагментами, уреиды, карбама'ш, ацилтиопроизводные, а

также продукты гомологизации агликона и углеводной части гликозид Расширены представления о клатратообразующей способности глицирризиновой. кислоты, что в итоге позволило разработа' высокоактивные противовоспалительные, утеротоническне и антадотнь препараты, действие которых основано на совершенствовании транспорт через биологические мембраны и защите от метаболизма на раиш стадиях. ' ' •

Практическая значимость. Предложены удобные препаративнь методы синтеза ряда производных глицирризиновой кислоп обладающих комплексом ценных для медицины свойств. Синтезирован более 250 новых производных ГК, направленный биоскрининг которы позволил отобрать для расширенных фармакологических испытаний ря препаратов мощного противовоспалительного (ПВ), противоязвенног (ГШ), иммуностимулирующего, утеротропного и антивирусного (aim ВИЧ) действия, имеющие ряд преимуществ перед известным фармакологическими аналогами.

Уреиды, карбаматы и ацилтиопроизводные ГК являются новым; классами малогоксичных высокоэффективных ПВ средств, не уступающи по активности преднизолону и волътарену. Ряд соединений сочетаю высокую ПВ активность с выраженным ПЯ действием, прсвосходящш эффект карбеноксолона, цимегидина и витамина У.

Соли н карбаматы ГК в виде 5% мазей являются хакж эффективными стимуляторами репаративной регенерации кожи.

Среда гликопептидов ГК обнаружены вещества, сгамулирующи» первичный иммунный ответ (выработку антителообразующих клеток АОК ) и клеточный иммунитет у мышей (тест гипсрчувствительносл замедленного типа, Г31) аналогично или эффективнее N-апетилмурамоилдипептида (МДП) и других известны) иммуностимуляторов. Ряд производных ГК являются эффективными ингибиторами вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) in vilro. Один ил

синтетических препаратов ГК - ниглизип рекомендован в качестве ингибитора ВИЧ. Разработан новый технологичный способ получения субстанции ниглизина (пента-О-никотината ГК), прошедший успешную шробацию на опытной установке. Выпущены опытные партии субстанции л лекарственной формы (таблетки) препарата дай клинических испытаний.

Предложены новые способы выделения и очистки гликозида из тромышленного сырья (экстракта солодки и глицирама). Получены эпытные партии ГК с содержанием 85-90%.

Найдено новое направление практического использования ГК в медицине. Предложены эффективные формы утеротропных препаратов, содержащие координационные соединения ГК с простагландинами. Получены комплексы ГК с известными нестероидными противовоспалительными средствами (НПВС), превосходящие исходные фармаконы по терапевтическому индексу, менее токсичные и не раздражающие слизистую оболочку желудка. Разработаны малотоксичные формы противоопухолевых препаратов. Найдены новые эффективные формы антидотлых средств.

Апробация работы. Результаты исследований доложены на VII и IX Советско-индийском симпозиуме по химии природных соединений [Тбилиси, 1983г.; Рига, 1989г.), Всесоюзной конференции "Проблемы эевоения лекарственных ресурсов Сибири и Дальнего Востока" [Новосибирск, 1983г.), XI Междунардном симпозиуме по органической симии серы (ФРГ, г. Линдау, 1984г.), XV Международном симпозиуме ЙЮПАК по химии природных соединений (Нидерланды, Хаги, 1986г.), V Всесоюзном симпозиуме по органическому синтезу (Москва, 1988г.), XVII всесоюзной конференции "Синтез и реакционная способность эргапичсских соединений серы" (Гбилиси, 1989г.), XIV Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Ташкент, 1989г.), II Европейском симпозиуме по органической химии (Югославия, Белград, 1989г.), XVII Международном симпозиуме по химии природных соединений (Индия,

Новый Дели, 1990г.), Всесоюзной конференции "Химия природны; низкомолекулярных биорегуляторов" (Ереван, 1990г.), IV Всесоюзно» симпозиуме "Изучение и использование солодки п народном хозяеетае' (Алма-Ата, 1991г.), Международной конференции по молехулярно биологическим аспектам диагностики и терапии СПИДа (Новосибирск 1991г.).

Публикации- По теме диссертации опубликованы 22 статьи, V тезисов докладов на конференциях и симпозиумах, получено 26 авторски: свидетельств па изобретения, 5 патентов Р.Ф.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложен; на 520 стр. машинописного текста и состоит из введения, литературной обзора, посвященного химии, фармакологии и распространению I природе растительных тритерпеиовых гликозидов, обсуждение результатов, фармакологической и 'экспериментальной частей, выводов содержит 7 рисунков и 93 таблицы. Список цитируемой литератур! состоит из 541 наименования. В приложение включены акты и заключение по фармакологическим свойствам новых производных ГК, спектры ЛМ1 13С и 'Н.

Основное содержание работы

1.Выделение и очистка глицирризиновой кислоты

В настоящее время доступным сырьем для получени глицирризиновой кислоты (ГК) являются промышленные экстракт! солодкового корня, выпускаемые Уральским заводом, и фармакопейны] глицирам - субстанция, выпускаемый ПО "Чимкентбиофарм".

Предложена схема выделения глицерризнновой кислоты (ГК) (1) и промышленного сухого экстакта корня солодки с содержанием ГК 26-28 позволяющая получать гникозид с содержанием 85-89% с выходом 42-45°/ (схема!) • -

СХЕМА1

Технический сухой экстракт солодки,

26-2а%ГК

Ацетон + 0,1 % HzS04

Ацетоновый экстракт

Ю%КОН/МеОН

ЗК-соль ГК

ЛУК, 95-100°С

1 К-соль ГК

Перекристаллизация

из н2о/еюн

Чистая 1'К-соль ГК

1% H;SQ4.98-100°С _

ГЛИЦИРРИЗИНОВАЯ КИСЛОТА

Выход42-45%, содержание основного вещества 85-89% поданным ВЭЖХ Разработаны способы получения ГК из фармакопейного глицирама (ВФС 42-419-75) (схема 2 а и б). По схеме 2а получают ГК с содержанием >95%, т.пл. 219-214°C,[ct]dm -1-55 - +60° (этанол) (хроматограф Du Pont, колонка p-Bondapak С-18, подвижная фаза: HiO-CHjCN-MeOH-CHiCOOH = 44:35:20:1 V%). По схеме 26 получают гликозид 89-92% чистоты, соответствующий предварительным нормативно-техническим требованиям. По последней схеме на базе опытного производства института была наработана опытная партия ГК (~ 10кг).

СХЕМА2

Глицирам

а) катиониты, 75% этанол

или б) 1,5% H2S04

Технический гликозид

1. Ацетон

2. КОН/МеОН КОН/ЕЮН

ЗК-соль ГК

а)ЛУК, 85-95QÇ

б)ЛУК, 98-Ю0°С

1 К-соль ГК

Перекристаллизация

из Н,0/ЕЮН

Чистая 1 К-соль ГК

1.1,5% H2SO4,98-100°С 2. Хлороформ

1.1%H2S04,10QQC 2. Хлороформ

ГЛИЦИРРИЗИНОВАЯ КИСЛОТА

а)выход47,1 -49,8%; б) Выход67-79%.

2. Изомеризация глициризиновой кислоты.

ГК (I) и ее агликон имеют две стереоизомерные формы: 18р-{цис) (1) и 18а -(транс) (4):

СООН

и уральской. а-ГК отличается от цис-ГК (1) лучшей растворимостью в воде и не образует гелей в водных растворах.

Проведена щелочная изомеризация ß-ГК (1) с контролем ВЭЖХ (ODS - колонка, ц-Bondapak CN, подвижная фаза: фосфатный буфер (pH 6,27)-ацетонитрил-диоксан: 210:15:10; детектор - УФ, X 254нм).

При изомеризации в 2N растворе КОН максимальная степень изомеризации достигала 56% через 12ч. При проведении реакции в органических растворителях в присутствии 2 N раствора КОН удалось поднять степень изомеризации до 80% (табл. I).

Таблица 1

Изомеризация 18 ß-ГК в 18а-ГК

№ п/п Условия реакции (кидячение 12ч) Смесь изомеров, % (а 4 0) Содержание а-изомера, %

1 2N раствор КОН. б! 55-60

2 2Ы раствор КОН в водном диоксане (50%) 58 60-65

3 2Ы раствор КОН в водном пиридине 450%) 59 75-80

3. Гидролиз р-глицирризиновой кислоты

Проведен гидролиз р-ГК 6% соляной и 2,5% серной кислотами при 00°С (схема 3). Гидролиз 6% НС1 проходит за 8 ч с общим выходом глихона, содержащего 5 веществ по данным ВЭЖХ, 93%. Содержание сновного вещества (!8Р-глицирретопой кислоты)(5) составило 90+2%, отчество примесей тритфпеновой природы - не более 5%. При ядролизе [}-ГК 2,5% НгЙО^ при 100°С получили агликон с выходом 83%, эдержащий смесь из пяти тритерпеноидов, из которой хроматографией на яликагеле выделена чистая 18р-глицирретовая кислота (65,7%).

Гидролиз Р-ГК Р-глкжуронидаэой из печени крупного рогатого сога марки А в ацетатном буфере (рН 5,2) при 37°С проходит с Зразованнем только 18р-глицирретовой кислоты (выход 46%). В щролизате (водная часть ) обнаружена О-шскуроновая кислота (О-1сриА).

он

4. Синтез и спектры ЯМР 13С производных глицирретовой кислоты. В литературе практически не освещен вопрос об использовании ектроекопии ЯМР !3С для установления структуры глицирризиновой

соон

СХЕМА3

слоты.

Спектры ЯМР |3С производных агликона необходимы в качестве моделей для интерпретации спектров производных ГК.

Получены ряд производных 18а- и 18р-глицирретовых кислот (6-28) * исследованы их спектры ЯМР 13С- Отнесение сигналов в спектраз производных глицнрреговой кислоты было сделано на основ« литературных данных, а также в соответствии с. характеристичным! сдвигами сигналов функциональных групп и' мульитлетности сигналов полученных- из спектров с частичным подавлением по протонам.

Так, карбоксильная группа Сзо в спектре 18р-глицирретовой кислои (5) наблюдается при 181,53 м.д., химический сдвиг (ХС) С» метиловы зфиров (б) имеет значение 176 м.д., изодианатная группа в спектр соединения (12) обнаруживается по синглегу 122,20 м.д. и т.д.

Модификация карбоксильной группы глицирретовой кислот приводит в основном ж изменению химических сдвигов а, р н у-углеродны атомов кольца Е (табл.2). Таблица 2

Углерод 86-85 810-85 811-85 812-85 815 - 85

Си -0,36 -1,40 -1,76 -1,88 +0,62

Сп -0,03 +0,01 +0,07 +0,14 +0,03

С18 +0,20 -0,94 -0,42 +3,95 + 1,60

С» +0,13 +3,63 +0,62 + 1,21 +2,32

С 2(1 +0,24 + 14,79 + 10,59 +8,59 +8,52

с2, +0,24 +3,90 +0,66 -1,17 -0,42

С22 + 0,03 -1,50 -0,59 -1,41 -1,76

С 29 0 +3,16 -1,15 -0,33 -0,04

(17) R = OCOCH-j, R1 = COOCH3;

â) R = ОН, R, = COOCH3, X = О; 7) R = O, R, = COOCH3, У, = О; S) R = GCOCH3, R-, = COOH, X = O; Э) R = OCOCH3, R, = COOCH3, X = O;

10) R = CH, R, = CH2OH,X = H2;

11)R = OCOCH3,R1=COCI,X = 0;

12) R = OCOCH3, R, = NGO. X ~0;

13) R = OCOCH3,R1 = NHCOOCH3,X = O;

14) R = OCOCH3, R, = NHCONHCgH5. X = O;

15) R = OCOCH3, R, = CH2OCOCH3> X = QCOCH3; 1S)R = H2,R1=COOCH3,X =0;

(18) R = OH, R, = COOH;

(19) R = OCOCH3, R1 = COOCH3;

(22) R = OH, R^ = COOH;

(23) R = OCOCH3, R, = COOH;

(24) R = OH. Rt = COOCH3;

(25) R = OCOCH3, R, = NICO;

(26) R = OCOCH3, R, = COCI;

(27) R = ОСОСНэ, R, = NHCONHC8H5;

(28) R = ОСОСИ3, R, = NHCOQCH3;

Скелетные преобразования молекулы и введение дополнительны циклов приводит к существенным изменениям в спектрах. Таи перемещение двойной связи с Си в положение Сц-С(8 в соединении (17 приводит к потере сопряжения с карбоксильной группой 1 дезэкранированию последней. В спектрах появляются синглетные сигналь Си и С18 при 132,28 и 132,78 м.д. Снятие (3-ОИ при Сз в соединении (16 приводит к смещению сигнала до 36,43 ы.д. в сильное поле.

Установлено, что наиболее чувствительными к изменении конфигурации Сю в спектрах производных глицирретовой кислоть

являются СИШаЛЫ С28 И С16.

5. Спектры ЛМР |3С производных глидирризиновой кислоты Исследованы спектры ЯМР 13С ГК (1), ее триметияового эфира (29), пента-О-ацетата триметалового эфира (30), перметилата (31) и пентабензоата (32).

Сигнал карбинольного углерода Сз агликона обнаруживается при 90,74 м.д. в спектре ГК (1). Эффект гликозилирования достигает 12 м.д. Сигналы двух СООН групп углеводного фрагмента наблюдаются в области слабого поля (172,29 и.д.). Сигнал С 2-, связанного со вторым глюкуроновым фрагментом дисахаридной части молекулы,

обнаруживается в более слабом поле (83,78 м.д.) по сравнению с другими углеродами углеводной части (табл. 3).

Сигналы аномерных протонов Сг и Сг в спектрах ГК (1) и ее эфиров обнаруживаются при 106-103 и 105-100 м.д., соответственно, что говорит о [¡-кофигурации глмкозидных связей в молекуле ГК и ее производных.

Таблица 3

Параметры спектров ЯМР 13С глицирризиновой кислоты (1) и ее эфиров (29-32) (СГ>С1э, 8, м.д., 25°С, 22,5 Мгц). (Углеводная часть).

Углероды 1 (СО*ОР) 29 30 31 32

С,- 106,01 105,78 103,43 104,25 102,94

С2- 83,78 89,95 77,15 86,95 76,51

Су 77,75 75,75 72,39 83,88 72,39

О 72,85 71,81 71,38 77,48 70,11

Су 76,05 76,64 72,85 73,96 72,39

Су 172,29 169,68 166,88 169,00 166,59

Сг - 52,99 52,91 52,29 52,68

С г 105,10 104,41 100,88 102,88 100,33

Сг 76,05 75,12 69,59 81,27 69,78

Сг 77,35 76,84 72,63 85,84 73,18

,С4».- 72,75 71,81 70,08 73,96 71,67

Су 77,09 76,64 74,12 80,68. 74,15

Сб" 172,29 170,18 170,07 169,00 169,07

С 7" - . 53,18 52,91 52,41 52,48.

6. Комплексы р-глицирризиновой кислоты с лекарственньит

• веществами как новые транспортные формы

В настоящее время успехи в создании новых лекарственных средств

связывают не только с синтезом новых соединений, но и в значительной

степени с оптимизацией уже существующих препаратов и, на их базе

разработкой новых лекарственных форм с направленной доставкой к

пораженному органу и контролируемым высвобождением лекарственного

вещества (система типа"пуля -мишень"). Одним из перспективных путей

нам представляется связывание лекарственного вещества (фармакона) в молекулярные комплексы, что может обеспечить его защиту от раннего метаболического распада, транспорт через мембраны и концентрирование. Молекула р-ГК имеет гидрофобную (тритерпеновую) и гидрофильную (углеводную) части, что. придает .ей уникальные физико-химические свойства: поверхностно-активные, гелеобразующие и др. В мицеллярном. состоянии в зависимости от среды молекулы Р-ГК могут быть циклическими за счет внутри и межмолекулярных водородных связей между СООН-хруппами агликона и глюхуроновых остатков. Размер образующейся полости зависит от природы среды и величины рН. Р-ГК предложена в качестве компдексообразующего агента для мономолекулярного капсулирования лекарственных веществ.

6.1 Комплексы Р-ГК с простагландинами - новый класс

утеротонически активных веществ

Среди лекарственных веществ особый интерес представляют простагяандины (ПГ). стимулирующие мускулатуру матки в очень малых дозах. Широкое применение ПГ в медицине и ветеринарии органичивается их нерастворимостью в водных средах, неустойчивостью и быстрым метаболизмом. Получены молекулярные комплексы ряда известных ПГ и •их синтетических аналогов с Р-ГК (33-38) и изучена их угеротоническая активность на матках крыс методом Магнуса в сравнении с исходными ПГ (в виде солей Иа).

Состав полученных комплексов подтвержден элементным анализом, ИК-спектрами и измерением молекулярных масс. Установлено, что комплексы ГК с простагландипами обладают в 2-3 раза более высокой утеротонической активностью ло сравнению с исходными ПГ йри введении в равных дозах.

ОН

я ■

со2н

(33)1:1,2:1,4:1 О

О-0-С,

СОМНЭОгМв

со2н

(36)1:1,2:1,

ОН

ОН

о / он

» . - П—у '

С—О—>^,ОН

ОН

Ц = р-гк (38)1:1.2:1,4:!

На основе комплекса Р-ГК с клопростенояом в институте разработан грепарат для ветеринарии "клатрапростин" с дозировкой ПГ в 5 раз ниже гринягой.

6.2 Комплексы Р-ГК с несгероидными противовоспалительными

средствами

Комплексы ГК с НПВС (аспирин, ортофен, бутадион, анальгин, тдометацин) получали в водно-спиртовой среде при 50-60°С при мольном оотношении ГК и аитифлогастика 1:1 или 2:1. В ИК-спектрах комплексов 39-43) наблюдается смещение максимумов поглощения ОН и С=0 - групп са .10-20 см-1 в низкочастотную область, что подтверждает образование гежмолекулярных Н-связей.

Обнаружено, что при микрокапсулировании НПВС с ГК оксичность препаратов снижается в 2-14 раз, а широта терапевтического

(противовоспалительного) действия возрастает в 2,8-4,2 раза. Эффективна доза (Езо) комплексных соединении также снижается. ,ососн3

~соон (39) 1:1,2:1

МаБ03СН2—N1

-СИ,

СН3

И = гк

(43)1:1

Комплексы ГК оказывают менее выраженное раздражающее действие т слизистую оболочку желудка, чем исходные НПВС.

6.3 Комплексы {3-ГК с производными пиримидина

Получены молекулярные комплексы Р-глицирризиновой кислоты (Р ГК) с производными пиримидаша (2-тиоурацилом , 6-амино-2 тиоурацилом, 4-амино-2-тиоурацилом, 6-метил-2-тиоурацилом, 5-окси-6-мстилурацилом, 5-аминоурацилом). Установлено,что комплексы {5-ГК превосходят исходные урацилы по широте фармакалогическото (антидотного) действия ~ в 2 раза и в 1,8-2,9 раза менее токсичны. Комплексные соединения обладают в 2,6-17,4 раз более высокой ангидотной активностью на модели отравления мышей нитритом натрия по сравнению с известным антидотом метгемоглобинообразующих ядов -цистамином.

6.4 Комплексы Р-ГК с противоопухолевыми веществами

Получены комплексы ГК с противоопухолевыми препаратами (5-фторурацилом, фгорафуром, рубомицином, фарморубомицином) состава 1:1 и 2:1 в 2-6 раз менее токсичные, чем исходные фармаконы.

Комплексное соединение ГК с фторафуром показало выраженную НО активность на трех штаммах экспериментальных опухолей (лимфосаркоме Плисса, мелаиоме В-16, карциноме Герена).

7. Соли Р-глицирризиновой кислоты

При обработке раствора ГТС или се монозамещенных солей в ацетоне или водном этаноле спиртовыми растворами щелочей образуются физамещенные соли (44-51).

„СОСЖ

(44) Я = N8

(45) Я = и

(46) И = Мд(ОМе)

(47) Р = Рг,= А1(0|-Рг)2

(48) Р = Ма, Я, = Ы

(49) R = 1ч1а, = К

(50) I* = К, = N8

(51) Я = К, Я., = и

(52)1? = Ыа.РЦ =Н

ОН

Три алкилокси-]^- и АЬсоли ГК (46) и (47) получены при обработке ГК в сухом спирте 1^-сгружкой н перегнанным А1(01¥)з-

8. Трансформации глицирризиновой кислоты

Проведены модификации Р-ГК по карбоксильным и пидроксилъньш группам с сохранением структуры гликозида и трансформации углеводной и агликоновой частей молекулы ГК, ведущие .к образованию новых типов гликозидов.

8.1 Синтез новых эфиров глицирризиновой кислоты.

Осуществлен синтез новых сложных эфиров Р-ГК (53-55) путем обработки гликозида алкшггалогенидами в среде ДМСО в присутствии КОН.

COOR

T---- Ч |

_г> I

COOR, О

OR

Строение соединений подтверждено спектральными методами (ИК, ЯМР 'Н и 13С ) и получением ацетатов (56-58). При алкилировании ГК избытком СН2=СН-СНгВг в смеси растворителей (ДМСО-ацетон-хлористый метилен-этанол) в присутствии 5% раствора КаОН и (СШ^дКВг получили октааллиловый эфир ГК (59) с выходом 40%.

8.2 Синтез новых ацилагов

Синтезированы новые сложные эфиры ГК путем ацилирования ОН-групп углеводной части молекулы ГК или ее производных (ЗМс эфира, ЗК, ЗИа- и 1 ЫН«+-солей) хлорангидридами ароматических кислот. В зависимости от условий проведения реакции и ацилирующих агентов наблюдалось образование либо полных ацилатов, либо ди- или тризамещенных эфиров ГК и ее ЗМе-эфира (60-72).

В спектрах ЯМР '*С ди-О-ацилатов (61) и (62) наблюдается диамагнитное смещение атомов Су и Сз- второго глюкуронового фрагмента, что говорит в пользу расположения замещающих групп при атомах Суи Сз\

Селективное ацилирование двух ОН-групп углеводной части гликозида наблюдалось при реакции ГК с хлорангидридами 2,4-

С001Ч

(60) р? = ме, гяг, = ыс>2-©-со-;

Ме

(61) я = ме. = ме-^со-;

„ Ме

(62)Р = Ме, 2^ = ^-802-;

N02

со-; он

(63)я=н, к,

(64)н = н,я1=©-со-; (бб^н.к, =©-сн=сн-со-;

(66) К = Н, к; = МеО-®-СН=СН-СО-; (67) я = н, 2Я, = N02-0-00-;

N02

(68)В = Н,2^ = Г^СО-; (69)Р = Н,2Я1 = ^-СО-: (70)Р = Н.2^ = <0>-ОСН2СО-;

(71)К = Н.ЗР, =0-СО-; (72)н = н.2р{,= ^со-.З^Ас; (73) Г* = Н.И, =Ас ОАс

динитробензойнон, изоникогиновой и никотиновой кислот в смеси пиридина - триэтиламина или трибутиламина (11из>3) при

комнатной температуре. При обработке ЗК-соли ПС хлорангидридом ацетилсалициловой кислоты при 50-60°С получили три-О-замещенный эфир (71) (95%).

8.3 Биологически активные амиды

Одним из простых гипов химических превращений ГК, который, тем не менее, может значительно повлиять на биоактивность гликозида, является получите амидов.

Синтезированы амиды ГК двух типов - защищенные. (75-84) и гетероциклические (85-93) со свободными ОН-группами.

Амиды (75-84) получены при нагревании трихлорангидрида пспта-О-ацетилтлицирризиновой кислоты (74) с избытком соответствующего амина 1ШНг в среде сухого бензола или диоксана (схема 4) (выход 52-90%). При ацилировании полифупкциональных аминов, содержащих

к = мн(сн2)5сн3, мн(сн2)аснэ, мн(сн2)16сн3,ын(сн2)20н, ынснгри, нсснгснгснз^,

N4-0' "О' "О5, 1ЧНР(1.

свободную ГШ^-группу, ПС с помощью >1,№-дициклогексилкарбодиимида (ДЦГК) в смеси диоксана - Ру или диметилформамида СДМФЛ) - Ру при комнатной температуре получали гетероциклические амиды ГК (85-93), содержащие фрагменты биогенных аминов, хинолинов, урацилов, антибиотиков с выходом 71-90%.'

Введение ароматических амиппмх трупп в молекулу ГК приводит к ;мегценшо сигналов атомов Сзо, и Сб" на 4-5 м.д. в сильное поле по ;равпсшпо со спектром исходного гликозида.

3.4 Синтез яцилгаопропзиодных пс:т1-0-!Зцетилглнн!!пр:]зя!!сзой

В качестве исходного соединения для синтеза использовали гриацилизотноцианат ГК (95), который полагали при кипячении грихлорангидрида (74) с КБСН в ацетонитриле (65%), Реакция (95) с первичными аминами и анилином проходит с образованием гриацшгсиомочевин (96-99) (выход 40-55%) в среде хлороформа при комнатной температуре (схема 5):

При ккпячешш триацилгаотаоциоиата (95) с гидразинами х хлористом метилене получены ацнлтиоссшссарбазиди (100-1Ü5) (еыхсд 4571%).

«3.5 Gsrrct tKuií^uwxiraasa^f'^sascECÜ ксгжяи

Осуществлена cxefiia превращений пента-О-сцетил ПС (73) с введением диазокетопных групп по СООН-фупкд1;;;м иолскулы с целые получения гомо-пронзводных ГК (схема 6). Езанмодейстсьч триллорангидрида (74) с избытком CH2N2B среде бензола - эфира при -1С --15°С проходит с образованием диазскстоаа (1С£), а при С°С п комиатасг: температуре - с образованием продукта перегруппировки (107) содержащей только одну ОЖг-группу (ИК, 2130 гаг1}, ирн сбработк« которого ПБг получен ионоброшеетон (110). Диазсхетсн (106) презраадив р галогенкетопы (!0S), (¡09) (НС! или НЕг в бензеле, выход 4£-5С%). Прз нагревании (106) с 1% NaCAc в ЛУК полу1!си ацетат кетола (1ПХ(55%> гомо-анаяог пента-О-ацетал ПС, е спектре ЯМР |3С которого появляхета дополнительные сишалы СНг боковых цепей (64-65 м.д.). Галогснкстснь (¡08-110) шаиыодейстауют с акнкаып с образованием кетоаминов (112 114), а с гиомечевиной образуют 2-М-Лс-£Ш1КогиЕзольнсе производи» ПС (1156) (УФ, Ътах:24 2,250, 300 mi; Л MP 13С, S, м.д.: 140,59 и 127-128, C=N С=С).

0.6 Спшз тргггегазгкошх гжжозидсх; ссгш стуотурш-лх тсзюв

0.6.1 Пегий Tira трстервеповых uovcoan п кербеглатов -

проазыудах 2-0-

^¿¡ксясЕяокираЕозхща

Исходным соединением для синтеза служил триизоцланат псита-0 ацетил ГК (116), который вводили в peazemno с аминами, спиртами i фенолом. Указанные превращения ГК позволили получить трнтерпеповы амипоглакозиды - производные ранее неописанного в литературе биозидг содержащего 5-дсзокси-5-аииноксвлопираиозилы1Ь!с звенья.

2J

RNHCH;

(115e)R = NH2CHIICH2CO-

S MHAc

3,\c

Реакция соединения (116) с первичными аминами, эфирами аминокислот, ашишном и аммиаком проходит с высоким выходом (86-96%) соответствующих мочевин(117-124) при кипячении в среде хлороформа или ТГФ в присутствии небольшого избытка амина (схема 7). В случае гидроялоридов аминокислот в реакционную смесь добавляли Е1зМ.

СХЕМА7

шсогшн

(117) И = — '(118) Г?

(119) Я = ^-СН2-;(120) Я = п-СчН9;

(121) Я = п-С12Н25;

(122) Г! = Г.г2СНСН2(СОгСН3)СН-;

(123) (I = СНзСНСОгСНз;

(124) R = СЯ35(СН2)2(С02СН3)СН-;

(125) Н = Н

Н Н«

ОАс

(12В) К = СН3; (127)Р = СН3СН2СН2-; (128^ = СН3(СН2)2СН2-; (129Ж=СН3(СН2)3СНг (130Ж=Не2СН-;

(131)К = Ь1г2СНСНг;

(132) ;

(133)Я=<^-СН2-;

(134)Н = СН3(СН2)6СНг-

(135) ч = н;

(136)К=@Н: (137Ж = (( )>-С0-

ОАс

Взаимодействие триизоцианата (116) с первичными алифатическими мшртами и фенолом происходит при нагревании в избытке спирта или в эастворе бензола. В отличие от опытов с аминами получение карбаматов тривело к смесям, из которых колоночной хроматографией (КХ) на :иликагеле были выделены целевые соединения(126-134) с выходом 45-58%.

Гидролиз (116) путем длительного кипячения в водном ацетоне при-!ел к получению аминогликозида (135), из которого получены триамиды ;136)и(137).

8.6.2 Синтез 3-0-[ [{-6-дезо1сси-6'-а1ЧИ1И»-1)-гл1окопирапозил(1-2)- 0-6"-

дсзокси-6"-амино-Г>-глюко1™ра110зид1-{Зр,20р)-11-оксо-20-ме10кси-

карбонилолеая-12-еи-З-ила.

Осуществлено селективное введение МНг-функций в углеводную часть

молекулы гликозида (схема 8) с получением нового тритерпсноного 6-дезокси-6-аминогликозида. При селективном восстановлении метокси-групп углеводной части ЗМе эфира (29) ЫаВН4 (КВШ) в водном метаноле получали 1>глюкопиранозидный аналог 1"К (138) (60-63%), из которого получен ацетат (139). В спектре ЯМР ,3С полученного гликозида присутствуют сигналы углеродов С=0 и СП}' карбометокси-группы агликона (178,78 и 52,39 м.д,).

Региоселекгавное мезилирование гликозида (138) СНзБОзС! в Ру при 0°С проходило с образованием бис-(6',6"-0-ме:шлага) (140), (выход 60%), который подвергали нуклеофилыюму замещению ^N3 в ДМФА при 65-75°С, получаи диаэид (141) (57%), при восстановлении которого Ш в присутствии 10% РсЕ/С образуется 6-дезокси-6-амиио-гликозид (142а), выделенный в виде ацетата (1426) (85%) (ИК, 1570 сжК ГШАс).

И.О. Оппеа тршериенОАЫОь 4-детоксм-4-пктр!й-глжо2!адоц

Осуществлен синтез: 4-дгзокси-4-нитро-гликоотдйых аналогов ГК путем окислшешлога раоцелленияЕ углеводной части ЗМе-.тфира: ГК (29) NaJ04 в водном ацетоне с последующей циклизацией образующихся альдегидов е нитромепаиомг в! метанолы го ,\г растворе №аОМс (схема 9).

Окисление ЗМе-афира! (29> избытком МаХО^ в течение' 24 ч цргоходило с расщеплением гликатидньм связей е образованием диаяьдежда (ИЗ), щюешшгетшна (144) и агдакона (6). При конденсации: диальдегида, (143) с СЩЫСН. при. 0°С получек 4-дезоксИ"4-нитрогликозид (146),. выделенный хроматографией с выходом 17,7%,, в; спектре ЯМР "С которого появ-ляегея дополнительный сигнал при; м;.д.,(С'-К€>2).

При окислешш ЗМе-эфира. (19)' ЫаЮ4 с юлгтрояем: пс ТСХ (5ч) получили тетрааладегид который конденсировался с СНзМОг,

образуя дииигрогликозвд (149)!, выделенный КХ в виде смеси диаетерсошошфоп с выходом' 38%. Экранирующее влияние" ИОг-трупп' отражается в сдвиге сигналов Сг и Сз" в спектре ЯМР |3С в более слабое . поле (89,6 и. 88,5 м.д.) по сравнению со спектром исходного ЗМс-эфира (29).

8.7* Йоесшмййййб* йййййй?

лвдридЪА*.

При1 " й'ос&^айЪйлс^й' т^ймШ'лсйШйойЪ^ эфира' (151)

лМизобуа^Ла211Ь^1иЙ1ТПр1гдЪМ (#Й1>АГ6К1) пфг - 1'5-6сС п эфи^гё Лолучнли т&раЗДГ (€ХеШ 10); прй обработке кб?дрог6> ¿Щ5¥овйм: раствором' НЙР образуется Р-0-01ср(1-2>- р-О-С1ср-011еа№енЧ [(12)-,1!3(18)-дйЬла: (153) с выходом' 65;б%, структура которого подтверждён^' спектральным^

методами (УФ, 241, 249, 25? нм). Спектр ЯМР 15С диена (153)

содержит сигналы олефиновых С-атомов (126,77; 126,99; 135,69 и 138,64 м.д.) и СНгОН-групп (~63 м.д.).

9.0 Тритсрпеиовые гликопептнды - новый класс иммуномодуляторов, обладающих комплексом ценных свойств 4 -

Разработаны удобные способы получения гликонептидов ГК .классическими и современными методами пептидного и гликопентидного синтеза. ' , ;. , г ^\ ■ ■ - ■

Получены глико пептиды двух структурных типов, путем взаимодействия карбоксильных групп углеводной часта и гид-юфобного агликона с аминогруппами эфиров аминокислот л динептнд'" . (тип Л) л с участием в реакции конденсации с аминокислотой составляющей карбоксилов только углеводной ласти гликозида (тип Б).

R, =.L-AliCT'a (154), L-A'-CIt (155), L-LeuC.'.te (156), L-LeuCEt(IST), L-Ph£CV3[1í£),L-VtíC^S(153), L- TyrCÁÍs (1C0), L-KeCV.s (161), L Г"':'.С;\"; (162), 0,L-HctCMa (163), D,L-SirC;i:E(1Si), D,L-Phr.Cr,'o(1C5), D,L-Vr.:c3« (1CS), D,L-/iaCEt (157), D,L-Lc«jCE( (1ST,), D.L-C!u(0;.fs)CH (1С«), D,L-(3vV-C.ït(17C), D,L-l'hrtCEt(17-!)>Q,L-F,?ti3îs)C>!»(17Z),

H = H

R, - L-A!¿C"E(173),L-LesjCr::(174), LT-iirC'^ (17C),L-"?tC"-(176), L-Tci(CH5CÎ.'=Jir7), L-TyrC?.iî(17C), L-Vf!CVe<17S), L-PsO;?d{1£S), L-Cys(S3ir,Cr.!c{131),L-C:u(Cr.'!c)Cr.:5(102)i ОЧ!1а(ОГ.!г)СГ'«(13а),

L-ProCrîi(1î5),|l-i,iC;j.-Cnî{iee>,GVir-L-Aîp(Cf.,.c)Cf.,:;(1CS), Cy-L-VrX!Xe(1B9}, L-Gto(CZzl)C!U(1C0), L-C^(Oî-!Il-)C:îi(191), L-C!a(OH}C"e(152>, Ь-^р;СГЕи)СГ!фаЗ),ЬАг:>(СН)е:.:з<18«), 1-Л1 rCC^in;), L-V^CtltJICC), L-C:u(CEí)OEt(1S7), L-t-'r.CPiïiSS), L-CLy{OPr)CPr<1S2), L-/Ji03u(2CC), L-VrlG3L{:01), L-C!u(C3ii)OBu(î02), G!yCE«2Û3y

Синтез гликопептндов типа Л проводили хлорангидридным и карбодиимидным методом пептидного синтеза и истодом активированных эфиров.

9.1 Хлоргшгпдридпый метод

Защищенные пгакопеитлды (154-171) были полнены взаимодействием трихлорангидрида (74) с небольшим избытком метиловых или этиловых эфиров аминокислот в виде хлоргидратов в присутствии EhN в безводном хлористом метилене при комнатной температуре с выходом 35-60%. В ИК-сиектрах всех гликопегггидов наблюдаются максимумы поглощения в области 3400, 1570-1520 (NH), 1760-1720 см-1 (COOR, ОАс).

Для проведения фармакокинетических исследований синтезирован глшсопсптид(172), содержащий DL-Met(OMe)(15S) с активностью 281БК/мг.

Дня провздгпкл фар'гг-какгшзгшчгсккх исследований спитезкаоза*. гласояапЕдО72), DL-I»Iet(OMe)(35S) с гкиоиостыэ 231БК/ьсг.

Деблоккрзгаяке гишсопсагедоз пгнхаздеталглшффршшовой кислоты осуществить пс удалось. В результате щелочной обработки обычно образозксалзсь трудноразделквиш смесь продухсгоз. Поэтому была осуществлена прямая повдгкзэдня ГК без предварительной защиты ОН-групп с эфяргзп! г:лшо:скслот и дапепхндзз с помощью конденсирующих атентоз, применяемых в пептидном синтезе.

9.2 Кар5одкл..:::П,иый ыегод.

ГСоидексацк» ПС с эфирамн аинногисяот (AIC) проводили в хлсрзстом iíeraoieae а присутствии ДЦГК прн комнатной температуре в прлзутегакы EiííT при мольном соотношении реагентов ПС/А1С/ДЦГК/Е1зН = 1,0/4,5/3^/4,5 ниоль. Образующаяся в ходе реахщш дкцкклогсксилыоэезгша отделялась фильтрованием. Выход конечных продуктов после очистки ЮГ. составил 43-45%.

В качестве акшвпровашюго лнтериедедта при использовании ДЦПС образуется О-ацятаэкочсздпш (204), виутримол^суллрная перс-грутгеролка которой приводит к N-гцилыэчевилс (205), которая затрудняет очистку целевых соединений - тлшгонеитидо:; ПС.

он

9.3 Метод ■. t:*":-.¿-o.. •.:; у г. г. -

9.2.1 Ксндсяачц-л с ïiotîciiît.îo rJ-rr.T?c-crrcyrav "rn:-^ - /ЩПС

рглрсбсгли iíoi:m"í спсссб ^ггсстс' -'.^гтидс:;"!'-!^.

ппхеиалпда- ПС вутг.гт гтгс::;;пг:',:гл: гхтгас"г~ г :¡c-i'

(rIOSu) при С +SfC л среде TP" г.:г- д-сксглг'з )- птггс'л^с::"::/:

пссясдасго с щг^еягсрадаьг*. пдлпг.оп"; тр.л-Сутллст.:.::; 3rr~.cz агязскпслст г;,тг! даггапгдез в пллjyrerисбсгг ;::лгс ггзСг.гг:"; (1-2 tuîojiî») EtjN (спзпа 11).

/".ее:-!

с::с:'ли

.cor«

+С„Н„ИПСИ!1С.!1||

- I j

GC;1 о о.

ПН

I /

CH

14/

"O

(173-233)

Активированный эфир (206) получали при соотношении реагентов nC/HOSu/ДЦГК = 2/10-10,4/6,0-6,8 ммоль и вводили в реакцию аминолиза аминокомпонентов . в виде раствора после отделения осадка дицшслогексилмочевины. Образования побочной N-ацилмочевины (205) не наблюдалось. Выход глшсопептндов, содержащих фрагменты метиловых эфиров аминокислот и дипептидов, составил 60-75%, после хроматографии ~53%. Выход гликопептидов, содержащих этиловые, пропиловые и бутиловые эфиры после КХ был ниже (32-48%).

Все полученные соединения были охарактеризованы ИК, УФ, ЯМР 13С-спектраг.ш и элементным анализом. Введение аминокислотных фрагментов в молекулу гликозида приводит к появлению дополнительных сигналов С=0 сложноэфирных груш в области 172-175 м.д.

Метод конденсации с использованием HOSu-ДЦГК прост в экспериментальном исполнении и проводится в мягких условиях. Однако недостатком этого способа является возможность протекания побочной реакции, подобной перегруппировке Лоссена, приводящей к образованию нежелательных продуктов, что снижает выход целевых соединений и требует в ряде случаев применения КХ для получения аналитически чистых образцов.

9.3.2 Конденсация с помощью N- гидроксибензотриазола - ДЦГК Разработан новый селективный способ получения карбокси-защищенных гликопептидов ГК путем активации карбоксильных групп гликозида с помощью М-гидроксибсшотрназола (HOBt) - ДЦГК и последующей конденсацией актизи ровашюго ингермедиата (207) с эфирами аминокислот, получаемыми in situ изих солей в присутствии оснований (EtjN, N-ыстилморфолина, B113N)

Реакция проводилась при соотношении реагентов ГК/НОВ1/ДЦГК = 1/3-4/3-4 ммоль в срсде диоксана или ТГФ. В качестне аминокомпонентов использовали метиловые, бензиловые (4-нигробензиловые) и трет-бушловые эфиры аминокислот и дипептидов в виде их солен. Образования

СОР

\ (207),

г (236)

Я = 1-А1аОВг1(208), ЬРПеОВгКгОЭ), Ы.еиОМВг(210). L-TyЮNBz(211), Ц-Ои(ОВй)ОВг] (212), 1_-МеЮВг1(213). |5-А1аауОВ21(214), С1у-1.-1.еиСВ;г1(215), 1.-РИеСК-Ви(217), 1_-МеЮ1-Ви(218), 1-Уа101-Ви(219), Ы!е01-Ви(220). 1_-РгоОЫ311(221), 1-А1а(222), Ь-РЬе(223), Ы.еи(224), ■ (_-Туг(225), 1-аи(22Б), 1-МеЦ227), (?-А1аС1у(230), 1.-Уа1(231), Ы1е(232). 1.-Рго(233).С1у-1.-РИе(234), Е1и-1.-1еи(235),

побочных продуктов нс наблюдалось. Выход карбоксизащшценных гликопептидов 79-95°/!. Наиболее высокие выходы продуктов были получены при использовании в качестве оснований 1М-метнлморфодипа и

Оптическая активность продуктов, синтезированных с помощью ПОВ(-Д1 Ц К, соотиетстнуст образцам, выделенным КХ.

9.4 Синтез гликоиешидов ПС с использованием бензиловых (4-нитробензиловых) н грст-бутиловых эфиров аминокислот Гликопегггиды ПС, содержащие алкиловые эфиры аминокислот, оказались нерастворимы в воде. Поэтому были синтезированы гликопептиды ГК с использованием легко удаляемых бензиловых (4-нитробензиловых) и трет-бутиловых эфиров аминокислот и дипептидов. Конденсацию проиолили с помощью НОШ-ДЦГК(соедннсния 208-215) или НОБи-ДЦГК (соединения 216-221). В качестве оснований использовали ЕЫЧ, и М-иетил(этил)морфолины. Сложноэфирные бензильные (4-иитробензильиые) группы удаляли каталитическим гидролизом в присутствии 10% Р(1/С н 75%-ной СНзСООН. Деблокированные

хликопептиды (222-230, 235) выделены в индивидуальном состоянии КХ ш силикагеле с выходом 65-75%.

Применение третгбутиловых защитных групп для С-конце аминокислот значительно упрощает процесс деблокирования, который сводится к обработке пшкопегггидов (216-221) СГзСООН в течение 0,5-1 ч.

9.5 Конденсация с помощью комплекса F. Синтез свободных

гликопептидов

Синтез свободных тритерпеновых гликопептидов является актуальным для получения водорастворимых ин'екционных форм. Все рассмотренные выше способы синтеза гликопептидов ГК- требуют дополнительной стадии деблокирования. Поэтому разработан новый экономичный способ синтеза свободных гликопептидов ГК с использование^ "минимальной защиты" амин око мнанецта, исключающий процессы деблокирования.

Для временной защип,i СООН-груип аминокислот и пептидо! использовали их Na-соли, образующиеся при обработке аминокислот i ДМФА IN раствором NaOH. Активацию СООН-групп ГК проводили с помощью комплекса пентафторфенола с ДЦГК состава 3:1 (комплекс F). Выход свободных гликопептидов (222, 226, 227, 231, 232, 234, 235) послс очистки КХ составил 44-58%. Из свободных гликопептидов получены натриевые соли, пригодные для изготовления ин'екционных форм.

9.6 Синтез гликопептидов монометилового эфира глицирризиновой

кислоты

Осуществлен синтез гликопептидов второго структурного типа (Ь) -производных монометилового эфира ГК (ММЭ ГК), содержащих по два аминокислотных или пептидных фрагмента, связанных амидной связью с диглюкуропидной частью молекулы ГК .

Конденсацию ММЭ ПС (237) с эфирами аминокислот или пептидом проводили с помощью реагента Вудворда К, ДЦГК или методом активированных зфиров. Эфиры аминокислот и динептидов вводились в

>еакцию в виде трифторацегатов, гидрохлоридов или гидробром1 дов в фисугствии избытка EtзN или пиридина.

Соединения (238-240) получены ДЦГК-методом с выход' м 37-55% юеле хроматографической очистки.

^СООМэ

Я = ОН(237), 1-А1аОМе(238), Ы_еиОМе(239),Ы31и(С>В2))ОН<240), 1-6!и(ОН)ОН(241 ),1_-А1аОИ Вг(242), 1.-ЛаОН(243), 1_-Да-0-аи(ОВа)МН2(244), 1-/Уа-0-61и(ОН)МН2(245),иЛа-1-С1и(ОВ21)МН2(24б)1 1-Ла-1-С1и(ОН)МН2(247).ЬА1а-1-С1и(ОМв)ОМе(248), 1-<Ча-0-Яи(ОМе)ОМе(249), 1-А1а-О-С1и(ОВг1)ОН(250)| 1_-А1а-0-в1и(0Н)0Н(251)

Сиптез гликопептидов (242, 244, 246, 249) осуществлен с помощью реагента Вудворда К в ДМФА в присутствии избытка. Е1зГ>1. Выходы ащищешшх гликопептидов составили 60-69%. Удаление бензилэфирных рупп проводили посредством гидрогенолиэа над 5 или 10% Р(1/С в 75% ЛЬСООН. Деблокированные гликопептиды выделены 1СХ на силикагеле с ыходом 48-52%. Строение соединений подтверждено данными лемешного и аминокислотного анализа и спектральными сследованиями.

Среди синтезировашшх гликопептидов ММЭГК наибольший нтерес представляет гликопептид (245), содержащий дипептидные звенья ,-Л1а-Е>-Сг1и-ЫН2 и его Ь-изоглугаминовый аналог (247). Известно, что Ь-Ла-О-^и-ШЬ входит в состав Н-ацетилмурамилдипептида (МДП), оторый представляет собой минимальное структурное звено ептидогликанов клеточных стенок микробактерий, ответственных за их ммуноадьювантную активность. Синтез пептидных производных

3-5

ММЭПС включал стадии получения защищенного пептида, удаления N112 защитных (Вос)-групн и конденсацию с СООН- 1руппами углеводной части гликозида. Выбор пептидных цепей был сделан на основан ш-литературных данных по синтезу МД11 и его иммуноактивных аналогов.

I 'лшеопептиды (248) и (249) получены методом активировании? зфирон с выходом 5В (Нот-ДЦГК) и 39% (НОЗи-ДЦГК) соответствепно(ггосле очистки КХ).

Н спектрах всех исследован их соединений в области 176-178 м.д идентифицируются сишалы карбонилов Сзо агликоновой части и -52 м.д (Си СООСНз-грунп). Сигналы С-О групп концевых аминокислоты; остатков пептидных цепей обнаружены в области 172-174,5 м.д., СО>Щ групп пептидов - 169-174 м.д.

10 Разрабипса технологичного способа получения субстанции препарата ииглизин

Ниглизин-пента-О-никотинат Г К (252) - новое синтстическо! малотоксичнос производное ГК, рекомендованное фармакологами БГМГ (Насыров Х.М.) в качестве противовоспалительного средства. Препара прошел клинические испытания в качестве препарата для лечепи: ревматоидных артритов.

Разработан технологичный способ получения субстанции ниглизин; из промышленного сырья -хлицирама (ГМ) (ВФС 42-419-75) или ЗК-сол1 нугем »цитирования хлоргидратом хлорангндрида никотиновой кислом. (ХХНК) в среде грибугаламипа при 75-80°С в течение 3-4 ч при мольнои соотношении реагентов 1'М/ХХНК = 1/7,4-7,6 с последующе! регенерацией растворителя (выход 82-85%) (схема 12)

Способ прошел успешную апробацию на опытной установке Выпущена' опытная партия препарата (субстанции и таблеток) дт клинических испытаний.

11. Фармакологические свойства производных глинирризиновон ислоты

Токсико-фармакологачсскис свойства новых производных и комплексных соединений ГК были изучены в лаборатории новых лекарственных средств института, кафедре фармакологии и военной кафедре Башкирского медицинского инсгитуга, НПО "Вектор" (г. Новосибирск), Киецскрм НИИ фармакологии и токсикологии..

11.1. Острая токсичность производных глицирризиновой кислоты На основании Постановления Госкомитета стандартов СМ СССР от

20.03.1976 №579 все исследованные производные ГК относятся к НЫУ классу малоопасных веществ.

11.2. Противовоспалительная и противоязвенная активность . Химические модификации гликозида приводят в большинстве

случаев к повышению противовоспалительной (ПВ) и противоязвенной (ПЯ) активности соединений.

ПВ активность большинства солей ГК в дозах 100 мг/кг аналогична преднизрлону и более выражена, чем у ГК. Наиболее высокой ПВ активностьк> обладает К-2Ы-соль ГК (48). Высокая активность солсй ГК сочетается с выраженным ПЯ действием. 1№(52); К-2Гл(48) и А1-(47) - соли

ГК превосходят по активности циметидан и карбеноксолон. Соли ГК являются также эффективными стимуляторами репаративной регенерации кожи в виде 5% мазей (эффективнее дермазина и метилурацила).

Азот- и серосодержащие производные ПС обладают высокой ПВ активностью, не уступающей, а в ряде случаев превосходящей аналогичную активность известных антифлогп стеков (преднизолон, вольтарен, бутадион).

ПВ активность амидов ГК (75-84) аналогична вольтарену. В отличие от вольтарена амиды ПС являются практически нетоксичными веществами (1Л>5о 5000-8000 мг/кг).

Уреиды (116-123) угнетают формалиновый и каррагениновый отеки лапок крыс, а также уменьшает объем экссудата м пролиферата подобно преднизолону и вольтарену и активнее бугадиона и ПС. ПВ действие карбаматов ПС(125,128,129) аналогично эффекту вольтарена на моделях * воспаления, вызванных формалином и яичным белком. Карбаматы также стимулируют репаративную регенерацию кожи после термического ожога активнее сингомициновой эмульсии.

ПВ активность гликопептидов ГК аналогична эффекту преднизолона и вольтарена и в большинстве случаев превосходит эффект противовоспаления ГК в дозах 25- 100мг/кг (мывм). Наиболее высокую ИВ активность обнаружили гликопептиды (175) и (202). Высокая Г1В активность ряда синтетических производных ГК сочетается с мощным противоязвенным действием, что выгодно отличает эти соединения от известных антифлогистиков. Так, ацюгшопроизводные ГК предохраняют слизистую оболочку желудка крыс от изъязвлений при введении в дозе 200 мг/кг эффективнее циметидина и ГК.

Высокая ПВ активность ряда гликопептидов ГК и ММЭГК сочетается с противоязвенным и иммуностимулирующим действием. ПЯ активность гликопептидов ГК аналогична карбеноксолону в дозе 100 мг/кг и более выражена, чем у ГК.

Пснтакоричный (65) и мстоксикоричвьм (66) эфиры ГК об лад. нот ПВ цейсшием, аналогичным ортофсну. в дозах 10-100 мг/кг и превосходят но активности ГК и ниглизин.

11.3. Иммуноиодулирующис свойства производных

Г'ЛИЩфрИЗИНОВОЙ кислоты

Установлено, что гликопептиды (173, 174. 176, 182, 186. 188), »держащие фрагменты метиловых зфироп аминокислот, стимулируют нпитслогснсз в 2-3 раза но сравнению с контролем. Гликопешиды 173,174,182) стимулировали выработку АОК эффективнее МДП при шутрибрюшинном введении в дозе 2 мг/кг у мышей линии СВА.

Гликопептиды ГК- с L-AlaOMe(l 73) и I.-Glu(OMe)2 (182) шмулировали клеточную иммунную реакцию в тесте ГЗТ к бычьему ывороточному альбумину активнее Т-акгивина.

При профилактическом введении гликопептиды (173) и (182) в дозе 2 [г/кг стимулируют неснецифическую резистентность к инфекнии seudomonas aeruginosa в 2-2,5 раза эффективнее МДП. •

Гликопептиды ММЭГК (243, 245, 247) увеличивают титр глютииинов и вес иммунокомпешгшьтх органов (селезенки, тимуса, нмфоузлов) в дозе 50 мг/кг эффективнее метилурацила.

Гликопегггид ГК (182) представляет интерес для медицины в качестве гршективного малотоксичного иммуностимулятора.

11.4. Ашн-СНИД акгавность производных глнциррнзицовой кисло™

• Анти-ВИЧ - активное», ряда производных ГК была изучена в отделе шьтивирования и диагностики ретровируеов ШХО "Век юр" .б.п.Покровский Л Т.) в хулыуре клеток МТ-4 и хронически 1фицированных ВИЧ-1 моноцитах человека И-937, Установлено, что все :слсдопаиныс производные ГК эффективно ингибируют репродукцию 44-1 (95-100%) в культуре клеток МТ-4 в концентрациях ог 0,5 до 1,0 7мл аналогично азидотимидину (АЛ). В отличие от последнего юизводпые ГК нетоксичны для клеток. На модели хронической

''л

инфекции гликопеНтиды ПС были эффективнее АЗТ. ГК неактивна на модели хронической инфекции.

Ниглизин эффективно ингибирует репродукцию ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в культуре клеток М'1'-4 и превосходи! АЗУ па модели хронической инфекции. Препарат рекомендован в качестве ингибитора ВИЧ.

ВЫВОДЫ

1. Впервые осуществлена программа по целенаправленным синтетическим трансформациям глицирризиновой кислоты, в результате которой найдены общие подходы к модификации тритерпеновых гликозидов с сохранением гликозидной структуры и получены новые классы ценных для медицины физиологически активных вещестн.

2. Проведены трансформации гликозида по карбоксильным группам с введением азот- и серосодержащих фунциональных групп в углеводную и агликоновуго части молекулы ГК, позволившие получил, неописанные ранее тритерпеновые уреиды, карбаматы, амиды, ацилгиомочевины и ацилтиосемикарбазиды.

3. Осуществлен синтез тритерпеновых гликопешидов - соединений нового класса, н которых' моделируется амидный тип связи природных ишкопротешшл. Разработаны удобные способы получения карбокензащйщенных гликопептидов ГК, базирующиеся на активации карбоксильных групп с помощью Ы-гидр ок си сукцщ ш м ида (]М-пуфокс.ибензо'фиазола)-Ы,№-дипИкло-гексилкарбодиимида и использованием разлишнлх защитных групп для С-копца аминокомпонентов. Предложен экономичный способ синтеза' гликопептидов из ГК и свободных аминокислот и диаептидов но принципу "минимальной защиты" с использованием и качестве конденсирующего реагента комплекса К '

4. Осуществлен синтез гликонситидол мономе шлоного эфира ГК, содержащих аминокислотные и дипёптидные фрагмент^ извссшого

иммуностимулятора - М-ацсгилмурамиллипеитида и его иммуно-активных аналогов.

5. Синтезированы новые типы тритерпеновых аминогликозидов, содержащих 5-дезокси-5-амипо-0-ксило- и б-дсзокси-б-амино-D-глтокопиранозильпые звенья. Предложен метод селектипного введения амшшой функции в углеводную часть гликознда.

6. Разрабо тан подход к синтезу тритерпеновых 4-дезокси-4-питрох-ликозидов, основанный на окислительном ращеплеиии углеводной части молекулы гликозида и последующей циклизации образующихся альдегидов с нитромеганом.

7. Проведена схема превращении пента-О-ацегилглицирризиповой кислотЪ1 с введением диазокетопных групп iío карбоксильным функциям молекулы гликозида с целыо получения гомо-аналогов. Осуществлен синтез гомо-пронзводиых ГК, содержащих галоген (хлор, бром), кетонные, ацетокеикстольпыс, кстоамииные и 2-N-ацегиламинотиазольные фрагменты.

8. Получена новая ipynna сложных зфиров Г'К путем ацилирования гидрок сильных групп углеводной части молекулы хлораигидридами ароматических и биоактивных кислот. Найдены условия для селективного и полного ацилирования.

9. Предложены новые способы. получения чистой ГК (85-95%) из промышленного сырья (экстракта солодки и фармакопейного глицерама). Гликозид охарактеризован получением ряда лоно- и тризамещенных солей, простых и сложных эфиров. Получена опытная партия гликозида на базе опытного производства института.

10.Paapaooiaii новый технологичный способ получения субстанции препарата шплтизин (пента-О-пикотината ГК) из фармакопейного глицирама, прошедший успешную апробацию па опытной усншовкс. Выпущена опытная партия субстанции и лекарственной формы (таблетки) для клинических испытании.

П .Фармакологические исследования ряда новых прои'шодных ПС показали, что трансформации пшкозида, связанные с внедением азот- и серосодержащих группировок приводят в большинстве случаев к повышению противовоспалительной и противоязвенной активности. Уреиды, карбаматы, амиды, гликопепчиди и ацилпроизводные ГК являются новыми классами малотоксичных противовоспалительных средств, не уступающих по активности преднизолону и вольтарену. Высокая прошвовоспалшсльная активность ряда соединений сочетается с выраженным противоязвенным действием. Гликопептиды 1 "К являются новым классом иммуномодуляторов с комплексом цепных свойств. Среди производных ГК обнаружены эффективные ингибиторы вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) in vitro. Препарат ниглизин рекомендован в качестве ингибитора ВИЧ.

12.11айдено новое направление практического использования 1'К при разработке новых, лекарственных форм. Обнаружены эффекты снижения токсичности и повышения терапевтического индекса лекарственных препаратов при комшгексообразоваиии ГК. Предложены новые эффективные и малотокекчпые формы лекарственных препаратов утеротронного, противовоспалительного и ангидотного действия.

Основные результаты диссертации изложены в следующих

публикациях:

ЬБалтина Л.А., Кондратенко P.M., Толсхиков Г.Л. Трансформации тлицирризиновой кислоты. 1. Поиый тин тригерпеновых мочевин у, карбаматов - производных 2-0-[l-D-2,3,4-1 ри-0-ацстил-5-дезокси-5-ам1шоксилоиира1]озил-о(.-1)-3,4-ди-0-а1детил-5-дезокси-5-аминоксилоиирапошда// Жур.общ.хим.- 1984.- Т.54.- Вып.П. - С.2573 2579.

2. Паеьхров Х.М., Бал шна Л.А., Кондра leinco l'.M., Толсхиков Г.А Исследование противовоспалительной активности ' ряда урсидо

производных псптаацетил-глипнрризиновой кислоты // Хим.фарч.жур,-!985,№8.-С.971-974.

3. ТолстикопГ.Л., В.ипипа JT.A., -Халидов Л.М., Кондрат лжо P.M., Панасснко Л.Л., Васильева М.В. Спектры ЯМР |3С ряда ншга- и гскспциклнческих тритерпепоил.он - производных глицирр стопой кислоты //Химия прир.соед.- 1985, №5.- С.645-653.,

4. Кгьтшнл Л. -V, Давыдова В.А., Чикаева И.Г., Шяяхмегова P.M., Капина Л.П., Лазарева Д.Н.,Толстиков Г'.Д. Синтез и противовоспалительная активность защищенных гликопептидов глицирризинопой кислоты // Хим.фарм.жур.- 1988,№6,- С.694-697.

5. 1>алтина Л.А., Кондратенко P.M., Кувагов Ю.Г., Муринов Ю.И., Толсшков Г.А. Си in c i меченного ссрой-35 гликопептида 1 'линирризиновой кислоты с метиоиином //Радиохимия.- 1988,№ 2.-С.288-289.

6. Халилов Л.М., Ьалтина JI.A., Слшрихин Л.В., Васильева ii.li., Кондратенко P.M., Панасснко А. А.-, '1 олешков Г.А. Спектры ЯМР |ЛС биологически активных соединений. VIII. Стереохимия гритерпенопого г.тикозида - глицирризипоной кислоты и ее производных //Химия прир.соед,- 1989,№4.- С.500-505. '

7. Налгана JI.A., Давыдова В.Д., Толсгикова T.I'., Чарудий Ф.С., Кондратенко P.M., Пасырон Х.М., Лазарева Д.П., Толстяков Г.А. Новые амиды пейтаацетилглииирризиноиой кислоты и их противовоспалительная активность // Хим.фарм.'жур.- 1989,№9.- С.1067-1070.

8. Толстяков Г.А., Балтина Л.А., Кондрате!¡ко Г.М., Насыров ХгМ. и др. Трансформации глииирризиновой кислозы. Н. Сишез гликопеплидои мономегилового эфира глицирризииовой кислоты, проявляющих лрогиновосиалиюлыюс и иммуностимулирующее дейслшс // Биоорган.хим.- 1989.Т.15,№3.-С.392-398.

• j

9. Толстиков Г.Л., Муринов Ю.И., Балшпа Л .А. Комплексы ß-глицнрризипопой кислоты с лекарственными веществами как новые транспортные формы //Хим.фарм.жур.- 1990. - Т.24,№8,- С.26-27.

Ю.Балтина Л.А., Сахаутдинова Г.М., Зарудий Ф.С., Лазарева Д.Н., Толстиков Г.А., Давыдова В.А. Синтез гликоиептидов глицирршиновой кислоты и их иммуномодулирующие свойства // Хим.фарм.жур,- 1990. -Т.24,№2,-С. 119-121.

П.Ьалтина Л.Д., Давыдова В.Л., Толстикова Т.Г., 'Орудий Ф.С.., Муринов Ю.И., Толстиков Г.А. Тршамещашые соли ß-глицирризиновой кислоты, обладающие противовоспалительной и противоязвенной активностью //Хим.фарм.жур,- 1991.-Т.25,№3.-С.45-48.

12,Давыдова U.A., Балтииа JI.A., Чарудий Ф.С., Муринов Ю.И., Кондрапмшо P.M., Толстиков Г.А. Соли ß-глмцирризиновой кислоты -стимуляторы рспарахивной регенерации кожи Н Хим.фарм.жур.- 1991.-Т.25,№5.- С.39-41.

[ЗЛ'олстиков 1 .А., Муринов !О.И., Ьалтина Л.А., Саитова М.Ю., Зарудий Ф.С., Давыдова H.A., Лазарева Д.П. Комплексы ß-пшцирризиновой кислоты с просгагландинами - новый класс угеротонически активных веществ // Хим.фарм.жур.- 19Sl.-T.25.Jfe3.- С.42-44.

М.Толстиков Г.А., Ьалтина Л.А., Муринов К).И., Давыдова H.A., Толстикова Т.Г'., Бондарен А.И., Зарудий Ф.С., Лазарева Д.П. Комплексы ß-глицирризиновой кислоты с пестсроидными противовоспалительными средствами как новые транспортные формы // Хим.фарм.жур,- 1991 ,-Т.25,№2.- С.29-32.

15.Ьалтина Л.А., Толстиков Г.А. Трансформации глицирршиновой кислоты. 111. Синтез новых гликопептидов, содержащих метиловые офиры L-аминокислот //Жур.общей хим.- 1991,- Вып.5.- С.1227-1232.

16.Ьалтина J I.A., Дапыдова В.А., Толстикова Т.Г., Зарудий Ф.С., Кондратенко P.M., Толстиков Г.А. Сшпсз ацилшопроизводаых цента-

О-ацилглицирризшювой кислоты. Прогивовоспалитслы. .лс и противоязвенные свойства // Хим.фарм.жур.- 1991.-Т.25,№10,- С.33-35.

7.Плясунова O.A., Егоричсва И.П., Фсдгок И.В., Покровский А.Г., Ьалтииа Л.А., Муринов Ю.И., Толстиков I .A. Изучение анги-ВИЧ активности ß-глицирризиновой кислоты // Вопр.вирусол.- 1992,№5-6. С'. 235-238.

8.Балтика Л.А., Рыжова СЛ., Васильева Е.В., Капица Л.П., Толстяков Г.А. Трансформации глипирризиноной кислота. IV. Новый способ получения карбоксизащищенных гликонептадов // Жур.общей хим.-

1993.- Т.63,№9.- С.2140-2147.

9.Калтина Л. А., Рыжова С. А., Васильева F.B., Толстиков Г. А. Трансформации глицирризиповой кислоты. V. Синтез тритерпеновых гликопептидоп // Киоорг.хии.- 1994.- Т.20,№1.- С.55-62,

10.Калгана Л.А., Сердюк II.Г., Краснова Л.В., Кондратенко P.M., Толстиков ГА. Получение глицирризиповой кислоты из экстракта солодки // Хим.фарм.жур.- 1994.-№9.- С.51 -54.

П.Давыдова В.А., Зарудин Ф.С., Балтина Л.А., Рыжова С.А., Толстиков Г.Л. Фармакологические свойства новых гликопептидов глицирризиповой кислоты .// Хим.фарм.жур,-1995,№1С.41-44. 12.Балтипа Л.А., ]»1,гжова С.А., Васильева IIB., Толстиков Г.А., Сахаутдинова Г.М., Зарудий Ф.С. Трансформации глицирризиповой кислоты. VIII. Синтез иммуномодулиругощих гликопептидоп с использованием трет-бугиловых эфиров аминокислот И Биоорг.хим.- '

1994,- Т.2(),№! 2,- (\ 1365-1374.

!З.Балтина Л.А., Кондратенко Р.М, Толстиков Г.А. Синтез новых тритерпеновых гликопептидов / Тезисы докладов VII Советско-Индийского симпозиума по химии природных соединений.-Тбилиси, 1983. (.'.28-29. !4.Пасыров Х.М., Кондратенко P.M., Лазарева Д.П., Толстиков Г.А., Калтина Л. А.. Джемилен У.М., Юханова А.Ш. Производные

глицирризиновой кислоты как биологически активные вещества Тезисы докладов Всесоюзной конф. "Проблемы о слоения лекарственны: ресурсов Сибири и Дальнего востока",- Новосибирск, 1983.- С.210. 25.1'olstikov G.A., BalLina 1..А., Kondratenko R.M. The Synthesis of Nev Sulphur Containing Glycopeptides as Ciiycyrrhizic Acid Derivataves // Absti of Xl-th International Symposium on the Organic Chemistry of Sulphur. FRG, Unday, 1984. - P. 100. 26.Baltina L.A., T olstikov G.A., Kondratenko R.M., Nasyrov Kh.M. Nev biologically active derivatives of Glvcyrrhizic Acid/ Abslr. of the XV-t! IUPAC International Symposium on the Chemistry of Natural Products. Nederlands, Haque, 1986.-P. 1722. 27.1»алтина Jl.A., Шарииова Ф.В., Толсшков Г.А. О восстановлснш производных глицирризиноиой кислоты диизобутилалюминий гидркдог.;/ Тезисы докл. V Всесоюзного симпозиума по ораничсском; синтезу.- Москва,! 9К8.- С:. 152-1 ¿3.

28.Ьалтипа Л.А., Кондратенко P.M., 'Голстшсоп Г .А. Сиптст новы: иммуномодулирующих гликонептидов глицирризиновой кислоты Тезисы докл. IX Советско-Индийского симпозиума по химии природны: соединений.- Рига, 1989. С.22-23.

29.Балгипа Л.А., Шарипова Ф.В., Муриноп Ю.И.; Афзалетдинова Н.Г. Хисамутдинов Р.А., Давыдова В.А., Зарудий Ф.С., Толстиков Г.А Ссросодержащие производные глицирризиновой кислоты. Синтез комплексы, биологическая активность / Тезисы докл. XVII Всесоюзно! конференции " Синтез и реакционная способность органически; соединений серы."-Тбилиси, 1989.-С.160.

30. Толстиков Г.А., Муринов К).И., Кашина Л.Л.. Зарудий Ф.С., Давыдов; . В.А., Бондарев Л.И., Толстикова Т.Г., Саитова М.Ю., Лазарева Д.11

Комплексы [i-глицирризиноиой кислоты как новые транспортаы формы лекарственных веществ / Тезисы докл. XIV Мспдслсевскок съезда по общей и прикладной химии.- Ташкент, 1984.- (1497.

1.Балтика Л. А., Сахаутдилова Г.М., Давыдова В.Л., Толешксла Т.Г., Зарудий Ф.С.. Лазарева Д.Н.. Толстикоп Г.А. Трансформации глицирризиновой кислоты. Синтез попых биологическ.. активных производных / Тезисы докл. XIV Менделеевского съезда по общей и

прикладной химии.- Ташкент, 1989.-С.406.

• ■ (

2.Саха\тдинова Г.М., Балшна JI.A., Зарудий Ф.С., Толсгнков 1 .Л. ! 'лгтшеп'тды - производные глицирризиновой кислош - новые иммуностимуляторы / Тезисы докл. VI съезда фармакологов Укр.ССР,-Харьков,1990- С.270.

G.Ballina L.A., Tolslikov G.A. The Synthesis of New Glyeopcptidcs of P-Glycyrrhizic Acid. Immunomodulating properties / Abstr. of the XV-th lUPAC International Symposium on the Chemistry оГ Natural Products.-New Delhi, 1990,- P.192. (4.Балп1иа JI.A., Зиновьева С.А., СахаугдшюваГ.М., Покровский А.Г., Плясунопа О.Д.. Толстикоп Г.А. Гликопептиды глинирризиповой кислоты - новый класс иммуностимуляторов и анш-ВИЧ агентов / Течисы чокл. Всесоюзной конф. "Химия природных низкомолекулярных биорегуляторов." -L'pcuaxi, J990. -С.84. !5.Толстиков Т. А., Ьалтина Л.Л., Рыжова С.А., Покровский Л.Г.. Плясунопа О.А., Муринов Ю.И., Сапдахчисл Л.С. Разработка новых средств для борьбы с. ВИЧ-инфекцней на основе глицирризиновой кислоты / В сб. IV Всесоюзного симпозиума "Изучение и использование солодки в СССР"-Алма-АтаЛ991.-С.160-161. J6.To!stikov Ст.Д., Baltina L.A., Rychm-n S.A., Murinov Ун.!.. Pokrovsky A.G., Plyasunova O.A.. Sandakhtchiev L.S. Development of new anti-HIV agents based on glvcyrrhizic acid / Abstr. of International conference on , molecular biology aspects of diagnostics and tcrapy of AIDS / Novosibirsk, 1991.-P.14.

J7.A.C. 1094325, СССР. Тринсшид иста -О-ацсти лглицир ризи 11 о в ой кислоты с 1,-«-ял;шином. проявляющий противовоспалительную

активность и стимулирующий ^моральный фактор иммунитета Толстиков Г.А., Ьалтина Л.А., Насыров Х.М., Кондратенко Р.М Бикбулатов Н.Т., Ерохииа А.И., Ьасчснко П.Ж.*

38. A.C. 1069403, СССР. Способ получения нсша-О-никотинат глицирризиповой кислоты /' Голстиков I .A., Ьалтила JI.A., Кондратенко P.M., Шакироаа А.М.,Насыроа Х.М*.

39.A.C.. 10805211, СССР. Трипептад пента-О-апетилглицирризиново! кислоты с мегионином, проявляющий противовоспалительную i противоязвенную активность / Толегиков I.A., Башина Л.А., Насыро Х.М., Кондратенко P.M., Лазарева Д.П.*

40.А.С. 1469824, СССР. Гликонепшд. пентаацешлгдицирризиново1 кислоты с метиловым эфиром L-фенилаланина, проявляющие противовоспалительную активность и стимулирующим рспаративнук регенерацию кожи / Балтаиа Л.А., Чикасва И.Г., Шаяхметова P.M. Муринова М.Ю.. Васильева 1г.В., Лазарева Д,П., Толстиков Г.А.*

41.A.C. 1415747, ССС :Р. Триизобутилкарбамат пентаацетилглицирризи новой кислоты, проявляющий продивовосналительную активность Ьалтина J1.А., Давыдова В.А., Чикаева И.Г., Шаяхметова P.M. Муринова М.Ю., Шакирова A.M., Васильева Е.В., Лазарева Д.II. Толстиков I .A.*

42.А.С. 1499902, СССР. Триамиды пептаацешлглициррюиновой кислоты проявляющие противовоспалительную активность / Ьалтина Л.А. Давыдова В.А., Толстшсова Т.Г., Муринов Ю.И., Шарипова Ф. В. Лазарева Д.Н., Толсгикои Г.А. - Опубл. 07.05.91 - Ьюлл. изобр. - 1991 №17.

43.А.С. 1513881, С ССР. Монокалий-дилитиевая соль глицирризиповой кислоты, проявляющая противовоспалительную и противоязвсипугс активность / Балтина Л.А., Давыдова В.А., Муринов Ю.И., Толстикова Т.Г., Муринова М.Ю., Шарипова Ф. В., Лазарева Д.И., Толстиков 1 '.А.*

4.A.C. 1513882, СССР. Амид пентаацстилглицирризинопой кислоты с октадецшк;...:ином, проявляющий противовоспалительную активность / Балтина Л.А., Давыдова H.A., 'Голстикова Т.Г., Лазарева Д.IV,Муринов Ю.И., Шарипова Ф. U., 1олсгиков Г.А. - Опубл. 07,05.91 - Ьюлл. изобр..-1991,№17.

5.A.C. 1536785,- (XXV. Моионатрисиая соль 18(1-глицирри.чипоиой кислоты, обладающая противоязвенным действием и стимулирующая репаративнуто регенерацию кожи /• Балтина Л.А., Давыдова U.A., Муринов Ю.И., Голстикова Т.Г., Чик'асва И.Г., Муринопа М.Ю., Лазарева Д.Н.. Голстикои Г.А. - Опубл. 07.05.91 - Кюлл. изобр. - 1991, №17.

6. А.С. 1616925, СССР. Комплексное соединение индометацина с глицирризиновой кислотной, проявляющее противовоспалительную 'актшшосп, / Балшна Л.А., Кондратенко P.M., Пасырон Х.М., Зарудин Ф.С., Муринов Ю.И., Голстиков Г'.А. - Опубл. 01.09.90 - Нюлл. изобр. -1990, №48.

7.A.C. 1610840, СССР. Триоктшпсарбамат пентаацетилглицирризиновой кислоты проявляющий противовоспалительную и противоязвенную активность и стимулирующий рс-паратиппую регенерацию кожи / Налгана Л.А., Давыдова Л.А., Голстикова Т.Г., Кондратенко P.M., Иасыров Х.М., Зарудий Ф.С.. Муриноиа М.Ю., Голстиков Г.А., Лазарева ДЛ1.*

8.А.С. 1625882, СССР. Способ получения гликопепгидов глицирризиновой кислоты / Калгана Л.А., Шакиропа A.M., 'Голстиков Г.А. -Опубл. 07.02.91.-Бюлл. изобр.- 1991, №5.

9.А.С. 1602019, СССР. Гликопеитид глицирризиновой кислоты с ДИМСП1ЛОВЫМ эфиром L-UiyiaMHIiOBOii кислоты, ешмулирующий нервичный иммунный отвеги неспецифичную резистентность / Ьалтина Л.А., Сахаутдииова Г.М., Давыдова В.А., Зарудий Ф.С., Лазарева Д.II., Тола икон А .А.*

50.Л.С. 1566696, СССР. Комплексное соединение I -фенил-2, 3-ди м с i ил -метиламинопиразолон-5-мегансульфата натрия с глипирризинов< кислотой, проявляющее противовоспалительную и анальгезирующу активноеш / Балшна J1.А., Шаринова Ф.В., Давыдова H.A., Толстико1 Т. Г., Зарудий Ф.С., Муринов Ю.И., Лазарева Д.Н., Толстиков Г..л Бондарев А.И. - Опубл. 07.05.91. - Бюлл. изобр. - 1991, №17.

51.A.C. 1566700, СССР. Комплексное соединение ацетчеалицйлове кислоты с глицирризиновой кислотой, проявляющее против воспалительную, противоязвенную и жаропонижающую активности Балгана Л.А., Давыдова В.А., Толсткова Т.Г., Шаринова Ф.Е Муринов Ю.И., Чарудий Ф.С., Лазарева Д.Н., Толстиков i .A., Бондар(

A.И. - Опубл. 07.05.91. - Бюлл. изобр. - 1991, №17.

52.A.C. 1566699, СССР. Комплексное соединение натриевой соли 2-[(2, дихлорфс1шл)амино]фенилуксусной кислоты с глицирризиноы кислотой, проявляющее противовоспалительную активноегь / Балгш Л.А., Давыдова U.A., Толстикова Т. Г., Шарипоиа Ф.В., Чарудий Ф.С Муринов Ю.И., Лазарева Д.Н., Толстиков I .A., Бондарев А.И. - Опуб 07.05.91. - Бюлл. изобр. - 1991, №17.

53.A.C. 1566698, СССР. Комплексное соединение 1,2-дифешш-4Н-бут ииразолидона-3,5 с iлшцирризиновой кислотой, проявляющее против воспалигельную актиниость / Балшна Л.А., Шаринова Ф.В., Давыдо!

B.А., Толстикова Г.Г., Муринов К).И., Зарудий Ф.С., Лазарева Д.1 Толстиков Г.А.*

54.А.С 1573Я35, ('Cd*. Комплексное соединение 5-1идрокти-мстилурацила с глициррнзиновой кислотой, обладают' мсмбраностабилизирующей активностью / Балгана Л.А., Мышкип Н./А Муринов Ю.И., Бондарев А.И.. Шаринова Ф.В., Башкатов С. А Вакарица А.Ф., Толстиков 1 '.А., Казаков В.П., Алехин ПК.*

55. A.C. 1587873, СССР. Комплексное соединение глипирризиновс кислоты с 5-аминоурадилом, проявляющее антидотную активность

Балтика Л.Л., Мыпнсин П.Л., Муринов Ю.И., Бондарев Л.И. ТТГар.птова Ф.В., Башкатов С.Л., Вакарица А:Ф., Срубилин Д.В., Толстиков I .A., .Алехин Г!.К.*

J.A.G. 1582391. СССР. Способ получения средства, оСладающего утеротоиической активностью / Толстшсов Г.Л., Муринов Ю.И., Лазарева Д.П., Млфтахон М.С., Балтипа Л.Д., Муршюва М.Ю., Востриков Н.С., Давыдова H.A., Ьагаева С.Г., Казаков В.И., Леплянин Г.В.*

7.А.С. 1Ъ74539, СССР. Способ получения глицирризиновой кислоты / Балтипа Л.А., Шаяхиетрва P.M., Султанмуратона O.P., Муринов Ю.И., Берг A.A., Толстикон I.A.*

8.А.С. 1679772, СССР. Комплексное соединение ß-глициррюиновой кислоты с 3-цис-9-оксо-13-транс-15а-окси-17(2-фурил)-18,19,20-трипор-га-гомопроетеновой кислотой состава 4:i, проявляющее утеротоническуго актапность ! Толстяков Г.А., Балтика Л.А.,Муринов ГО.И., Саитова М.Ю., Адлер М.А., Мифтахов М.С., .Чарудий Ф.С., Давыдова U.A., Лазарева Д.Н., Востриков U.C.*

59,A.C. 1744809, СССР. Средство для синхронизации охоты и регуляции родовой деятельности сельскохозяйственных животных / I олешков Г.А., Мифтахов М.С., Востриков Н.С., Муринов Ю.И., Лазарева Д.И., Муринова М.Ю., Давыдова .В.А.. Кузнецов О.М.. Сингизова В.Х., Хабибуллин И.Г., Балтипа Л .А.* вО.Л.С. ' 1626663. СССР. Коричный ■эфир р-пппдарриишоной кислоты, проявляющий противовоспалительную и противоязвенную активность./ Балтина Л.Л.. Давыдова НА., Толстикова Т.Г., Чарудий Ф.С., Шакирова A.M., Толстиков Г.А.* 61.A.C. 1777333, СССР. Гликопептид ß-глицирризиновой кислоты с метиловым :>фиром Ь-фенмлалапина, проявляющий прогиво-

воспалительную п иротшшяшшную активность / Балтика . JI.A. Давыдова В.А.. Зарудий <!>.(:.. Лазарева Д.Н., Т'олстиков Г.А.*

62.А.С. 1777334, С.ССР. Три амид ß-глицирршшювой кислоты с 6 аминохинолином проявляющий противоязвенную активность / Балтиш Л.А., Давыдова В.А., Зарудий Ф.С., Шакирова A.M., Толст икон Г .А.* ,

63.Пагент РФ 2024547. Амид ß-глицирриэиновой кислоты с 6-амино-2-тиоурадалом, проявляющий анш-СПИД активность I Балтина Л.А., Покропский АЛ ., Плясунова O.A.. Тодстикои Г.А.

64.Патент РФ 2024546. Гликопептид р-пшиирршти юиои кислоты с дибутиловьш эфиром Г-глутаминоиой кислоты, проявляющий aura-СПИД акшнноеи. / Толстикои Г.Л., Балтина JI.A., Покровский А.Г., Плясунова O.A., Сандахчиеп JI.C.

(>5.11атспт РФ 2024545. Амид |>ч лш<ирри:шно»ой кислоты с. 6-амшюурапилом, проявляющий алтм-СПИД активностт. ! Толстиков I .A., Балтина Л.Д.. Покровский А.Г., Плясунова O.A.. Муринов Ю.И., Сандахчиеп Л.С'.

(iö.liaieiii РФ 2024544. Гликоием [ид fi-глицирриэиновой кислогм с димстилопым чфн'ром L-ашарпшовой кислоты, прояъляющий аши-СПИД актиипооп, / Толстиков 1 .А.,'Балтина J1.A:, Покропский АЛ '., Плясунова O.A., Муринов Ю.И.

67.Патент РФ 2024542. Гликопептид [i-i лицирриэйнокой кислоты ' с метиловым эфиром i лмцил-Т-иалшш, ¡¡рояилиющий аши-СПИД-активной! 1. / Балтина JI.A..' Покровский А.Г.. Плясупопи О.Д., Tojicimkoh Г'.А. ' • ','•.•

* Без права публикации в открытой печати ,, ,

Соискатель '