Вольтамперометрическое определение витаминов в многокомпонентных сухих витаминизированных смесях тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ

На правах рукописи

МИХЕЕВА ЕЛЕНА ВАЛЕНТИНОВНА

ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНОВ В МНОГОКОМПОНЕНТНЫХ СУХИХ ВИТАМИНИЗИРОВАННЫХ СМЕСЯХ

02.00.02 - аналитическая химия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Томск-2005

Работа выполнена на кафедре физической и аналитической химии Томского политехнического университета

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ

кандидат химических наук, Слепченко Г.Б.

доктор химических наук, профессор Марьянов Б.М.

кандидат химических наук, Мордвинова Н.М.

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ Кубанский государственный

университет, г.Краснодар

Защита диссертации состоится «18» мая 2005 г. в 1630 часов

на заседании диссертационного совета Д 212.269.04 при Томском

политехническом университете (634050, г.Томск, пр.Ленина, 30).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Томского политехнического университета по адресу: ул. Белинского, 53.

Автореферат разослан «14» апреля 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат химических наук, доцент СГ^У Гиндуллина Т.М.

ZOOfe -4 4515

3 J/3M&Z

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Увеличение степени загрязнения окружающей среды, жесткая технологическая обработка производимых продуктов питания привели к существенному снижению содержания в потребляемых продуктах биологически активных веществ, а особенно, витаминов. На восстановление качества продуктов питания направлен закон РФ № 29-ФЗ «О качестве и безопасности пищевых продуктов» от 2 января 2000г. Приняты правительственные общероссийские программы:

• «Обогащение пищевых продуктов микроэлементами»;

• «Концепция здорового питания России», утвержденная постановлением Правительства № 247, одним из разделов которой является «Разработка быстрых и надежных методов контроля».

В настоящее время на рынке появилось огромное количество витаминизированных продуктов питания для человека и кормов для животных, представляющих собой сухие многокомпонентные смеси, ассортимент таких продуктов представлен достаточно широко. Это, прежде всего биологически активные добавки к пище, премиксы, комбикорма для животных и птиц, поливитаминные препараты. Критерием качества таких продуктов может являться их анализ на содержание витаминов и, особенно, таких жизненно необходимых, как водорастворимые витамины В,, В2 и жирорастворимый витамин Е, количество которых регламентируется нормативными документами и санитарными нормами качества.

Для определения витаминов применяют различные методы. Широко распространенные оптические методы анализа трудоемки, требуют больших затрат времени и дорогостоящих реактивов, применение хроматографических методов осложнено использованием дорогостоящего оборудования.

Электрохимические методы анализа в настоящее время переживают бурное развитие в связи с их применением для определения органических веществ. Одним из наиболее универсальных электрохимических методов определения следовых количеств веществ является вольтамперометрический метод анализа. В 1999 году данный метод приобрел статус арбитражного (вышел ГОСТ Р 51301-99) для определения тяжелых металлов в пищевых продуктах. Методы вольтамперометрии также нашли применение при анализе органических веществ, в том числе и витамина С. Однако, методики вольтамперометрического определения водорастворимых витаминов Вь Вг и жирорастворимого витамина Е практически отсутствуют.

Проведение исследований по оптимизации условий вольтамперометрического определения витаминов в присутствии сложной органической матрицы, создание методик количественного химического анализа витаминизированных продуктов питания для человека и животных на содержание витаминов методом вольтамперометрии и метрологическая аттестация разработанных методик является актуальным и имеет большую практическую значимость.

9QС НАЦИОНАЛЬНАЯ 1 БИБЛИОТЕКА I

»

/

Цель работы заключалась в исследовании электрохимического поведения водорастворимых витаминов Вь В2 и жирорастворимого витамина Е, разработке вольтамперометрических методик их количественного химического анализа в многокомпонентных сухих витаминизированных смесях.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

• установить рабочие условия вольтамперометрического определения водорастворимых витаминов Вь В2 и жирорастворимого витамина Е;

• исследовать физико-химические закономерности электрохимического поведения витаминов и оценить некоторые параметры электродной реакции (рК, п, 0п);

• изучить адсорбционную способность витамина В| с использованием метода двойного обратного интегрирования;

• провести оценку мешающего влияния сопутствующих примесей на аналитические сигналы определяемых компонентов и разработать алгоритм подготовки проб при определении витаминов;

• разработать и метрологически аттестовать методики количественною химического анализа многокомпонентных сухих витаминизированных смесей на содержание витаминов методом дифференциальной вольтамперометрии.

Научная новизна:

• Впервые предложен способ определения жирорастворимого витамина Е (а-токоферола ацетата), а также водорастворимых витаминов В| (тиамина) и Вг (рибофлавина) методом дифференциальной вольтамперометрии и установлены условия проведения электродного процесса.

• Проведена оценка некоторых физико-химических параметров электродного процесса с участием витаминов (рК, п, (Зп).

• Рассчитаны параметры адсорбции витамина В] методом двойного обратного интегрирования.

• Предложены условия по устранению мешающего влияния сложной органической матрицы.

• Разработан алгоритм подготовки проб для вольтамперометрическо1 о определения витаминов.

Практическая значимость работы состоит в том, что:

• на основании проведенных исследований предложены алгоритмы методик количественного химического анализа водорастворимых витаминов В], В2 и жирорастворимого витамина Е для широкого круга объектов: поливитаминных препаратов, витаминизированных подкормок и кормов для животных, биологически активных добавок;

• методики: «Витаминизированные корма и подкормки. Определение массовых. концентраций витамина В] методом вольтамперометрии»,

«Витаминизированные корма и подкормки. Определение массовых концентраций витамина В2 методом дифференциальной вольтамперометрии» и «Биологически активные добавки. Вольтамперометрический метод определение массовых концентраций витаминов С, Вь В2, Е и кверцетина» метрологически аттестованы, внесены в Федеральный Реестр МВИ.

На защиту выносятся:

• рабочие условия вольтамперометрического определения витаминов Вь В2 и Е;

• параметры электродной реакции с участием витаминов и их адсорбционную способность;

• способ подготовки проб, включая процедуру выделения определяемых органических веществ из многокомпонентных смесей;

• алгоритм методик количественного химического анализа MHOi окомпонентных сухих витаминизированных смесей на содержание витаминов методом дифференциальной вольтамперометрии.

Апробация работы Отдельные разделы диссертации докладывались на: симпозиуме «Теория электроаналитической химии и метод ИВ - 2000» (Томск, 2000); VI конференции «Аналитика Сибири и Дальнего Востока-2000» (Новосибирск, 2000); IV Всероссийской конференции по анализу объектов окружающей среды «Экоаналитика-2000» (Краснодар, 2000); II Всероссийской конференции по электрохимическим методам анализа с международным учасшем «ЭМА-2004» (Уфа, 2004); III Всероссийской научной конференции «Химия и химическая технология на рубеже тысячелетий» (г.Томск, 2004); 8th Korea-Russia International Symposium of Science and Technology (Tomsk, 2004); VII конференции «Аналитика Сибири и Дальнего Востока - 2004» (Новосибирск, 2004), а также на объединенных научных семинарах кафедры физической и аналитической химии и проблемной лаборатории микропримесей Томского политехнического университета.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 14 работ, в том числе 5 статей в рецензируемых научных журналах, 3 статьи в трудах симпозиумах и конференций, 5 тезисов докладов, получен 1 патент на изобретение РФ.

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 163 страницах машинописного текста, включая 41 рисунок, 22 таблицы, состоит из введения, пяти глав, выводов, приложения и списка литературы из 251 наименования.

Основное содержание работы

Введение. Обоснована актуальность проблемы, определены цели и задачи исследования.

Глава 1. Представлен обзор литературы по физико-химическим методам исследования и определения витаминов в различных объектах, в котором рассмотрены основные свойства наиболее важных водорастворимых витаминов В], Вт и жирорастворимого витамина Е, аналитические возможноеIи физико-химических и особенности электрохимических методов анализа водо- и жирорасгворимых витаминов, сформулированы задачи исследования.

Глава 2. Дана характеристика используемой аппарагуры, типов электродов, описаны объекты исследования и методика проведения эксперимента.

Глава 3. Выбор рабочих условий вольтампсрометрического определения витаминов.

Для определения витамина Е (а-токоферола ацетата) впервые предложен высокочувствительный метод дифференциальной вольтамнерометрии (ДВА), основанный на способности витамина электрохимически окисляться на углеродных электродах различных типов в неводных средах. В качестве индикаторных электродов использовали графитовый электрод (ГЭ), пропитанный смесью полиэгилена с парафином в вакууме, стеклоуглеродный (СУЭ) и углеситаловый (УСЭ) электроды. Высокую чувствительность определения, низкое значение остаточного тока и хорошую воспроизводимость аналитических сигналов наблюдали на СУЭ, который и был выбран в качестве рабочего Вольтамперограммы электроокисления витамина Е (а-токоферола ацетата) на стеклоуглеродном электроде представлены на рис. 1.

<11/ЛЕ, мкА/мВ

2 г-

1 2

1.6

Рис. 1. Вольтамперограммы электроокисления витамина Е (а-токоферола ацетата) на СУЭ, \у=20мВ/с:

1 - фон 0,1 М ЫаСЮ4 в ацетонитриле;

2 - С,-3,0 мг/дм3;

3 - С2=6,0 мг/дм3.

2

Е,В

Витамин Е относится к жирорастворимым витаминам, он нерастворим в воде, поэтому его электрохимическое определение возможно только в неводных средах. Исследование электрохимического окисления а-токоферола ацетата проводили в апротонных диполярных растворителях: диметилформамиде, диметилсульфоксиде, 1,4-диоксане, пропиленкарбонате, ацетонитриле и их смесях. Четкие пики окисления получены в ацетонитриле, пропиленкарбонате, имеющих широкую анодную область рабочих потенциалов. Тангенс угла наклона градуировочного графика в ацетонитриле в 3,26 раз больше, чем в пропиленкарбонате, что говорит о более высокой чувствительности определяемого компонента, поэтому рабочим растворителем выбран ацетонитрил.

В качестве фоновых электролитов применяли растворы перхлоратов натрия, калия, тетраметил-, тетраэтиламмония, сульфатов натрия, калия, аммония. Каждый из этих растворов можно использовать для количественного определения витамина, однако оптимальным является раствор перхлората натрия в ацетонитриле, на фоне которого регистрируются четко выраженные пики с хорошей воспроизводимостью, относительное стандартное отклонение Бг не превышает 0,05 (рис.2.).

¡11/¡¡Е, мкА/мВ

Рис. 2. Градуировочные графики зависимости тока электроокисления витамина Е (а-токоферола ацетата) в растворах различных фоновых электролитов в ацетонитриле, СУЭ, уу=20 мВ/с:

1 -0,1 МК2804;

2-0,1 МКа2804;

3-0,1 М(Ш4)2804;

4-0,1 МКСЮ4;

5-0,1 М(СН3)4СЮ4;

6-0,1 М (С2Н5)4СЮ4;

7-0,1 МЫаСЮ4.

С, мг/д

Для количественного определения водорастворимого витамина В2 (рибофлавина) использовали стеклоуглеродный электрод. Рабочими фоновыми электролитами выбраны растворы 0,1 М аммоний лимоннокислый двузамещенный (СбНй07Ы2) и 0,1 М натрий виннокислый кислый (С4Н50бЫа-Н20). Линейная зависимость фадуировочных графиков на указанных фонах сохраняется в широком диапазоне концентраций от 2,0 мг/дм до 28,0 мг/дм3. Электролит С4Н506ЫаН20 также является хорошим высаливателем водорастворимых белков, мешающих экспрессному определению рибофлавина в кормах. Вольтамперограммы электроокисления рибофлавина на стеклоуглеродном электроде представлены на рис. 3.

(II/dE, мкЛ/мВ

1 6r

04

08

1 2

электроокисления витамина B2

(рибофлавина) на СУЭ, w=20 мВ/с: 1 - фон 0,1 MC6H,407N2; 2-Ci=3,0 мг/дм3; 3 - С2=6,0 мг/дм3.

Рис. 3. Вольтамперограммы

0i—I_I—1_i.i.i_I_I

-0 6 -0 5 -0 4 -0 3 -0 2 -0 1

Е, В

Для вольтамперометрического определение витамина В] (тиамина) предложены два способа. Первый способ основан на способности витамина образовывать малорастворимые соединения (MPC) на поверхности ртутно-пленочного электрода (РПЭ) в стадии анодной поляризации ртути. Сконцентрированный осадок органического вещества со ртугью удаляли с поверхности электрода катодной поляризацией. Пик витамина Bt регистрировали в диапазоне потенциалов -(0,30 - 0,38) В. Вольтамперограммы электровосстановления MPC тиамина на ртутно-пленочном электроде представлены на рис.4.

/, мкА

Рис. 4. Вольтамперограммы восстановления MPC витамина В, (тиамина) на РПЭ, w=50 мВ/с:

1 - фон 0,1 M QHgCb;

2 - С,= 4,0 мг/дм3;

3 - С2= 8,0 мг/дм3.

i

о

02

04

06 -Е, В

Образование пленки малорастворимого соединения органического вещества со ртутью может возникнуть путем осаждения соли из приэлектродного слоя раствора при достаточно положительных потенциалах в условиях значительных токов электрорастворения металлической ртути т.е. путем перехода катиона ртути в раствор и последующей химической реакции, продукты которой осаждаются на электроде:

Hg->Hg2++ 2ё,

Hg2+ + 2 RS~->Hg(RS)2.

С другой стороны, образование осадка на поверхности ртутно-пленочного электрода может протекать непосредственно на поверхности электрода через стадию образования активированного комплекса электрохимической реакции:

Hg + 2RSadc-^'l-^L^c->Hg(RS)2 + 2e .

По нашему мнению, оба механизма являются вероятными, однако для веществ, обладающих повышенной адсорбционной способностью, более вероятен второй механизм.

При катодной поляризации электрода регистрируются пики восстановления осажденного малорастворимого соединения:

Hg{RS)2 + 2ё-> 2 RS' + Hg.

Предложенный способ вольтамперометрического определения тиамина в виде малорастворимого соединения имеет высокую чувствительность и рекомендован для разработки методик его количественного химического анализа в продуктах, содержащих остаточные количества витамина Bt.

Для вольтамперометрического определения тиамина в витаминизированных многокомпонентных смесях, содержащих большое количество органических веществ, способных также накапливаться на поверхности ртутно-пленочного электрода, использовали метод катодной вольтамперометрии, основанный на восстановлении тиамина при Е= -1,3 В. Вольтамперограммы электровосстановления витамина В, на ртутно-пленочном электроде представлены на рис.5.

С целью выбора рабочего фонового электролита исследовали электровосстановление тиамина в растворах: 0,1 М Na2HP04, 0,1 М (NH4)2S04, 0,1 М Na2B407, 0,1 М Na3P04, 0,1 М NaCI04, 0,1 М KN03, 0,1 М К2СО,, буферных растворах Бриттена-Робинсона с рН 6,01 - 10,41 (рис.6.). Все перечисленные электролиты можно использовать для

вольтамперометрического определения витамина Вь однако рабочим фоновым электролитом выбран 0,1 М Na2HP04 (рН 7,5-8,5), на фоне которого регистрируются четко выраженные и хорошо воспроизводимые пики восстановления.

¿11/йЕ, мкА/мВ

2 г

1.6 1.2 0.8 0.4

0

аийЕ,мкА/мВ 80 г-

0.8 1.2 1.6

-Е,В

Рис. 5. Вольтамперограммы электровосстановления витамина В| на РПЭ, \v-30 мВ/с:

1 - фон 0,1 М Ыа2НР04;

■Сг С2=

2,0 мг/дм ; 4,0 мг/ дм3

40 50 с, мг/дм3

Рис. 6. Градуировочные графики зависимости тока электровосстановления витамина В1 в растворах различных фоновых электролитов, РПЭ, \у=30 мВ/с

1-0,1 МЫа2В407;

2-0,1 М(№14)2804;

3-0,1 МЫа3Р04;

4-0,1 МЫаСЮ4;

5-0,1 МКЖ>3;

6-0,1 М Ш2НР04.

При определении витаминов использовали дифференциальный режим регистрации воль гамперограмм. Одним из преимуществ такого режима полярографирования является регистрация аналитического сигнала в виде четко выраженного пика и более точное измерение его величины.

Рабочие условия вольтамперометрического определения витаминов представлены в таблице 1. '

Важным фактором при определении органических веществ, оказывающим влияние не только на скорость электродного процесса, но и на его механизм, является рН среды.

Зависимость потенциала максимума анодного пика рибофлавина от рН имеет сложный характер (рис.7.). С увеличением концентрации гидроксид ионов происходит смещение потенциала пика в катодную область, т.е. способствует облегчению процесса электроокисления рибофлавина, что, по-видимому, связано с протеканием ступенчатой реакции депротопизации различных форм витамина В2. Депротонизация может предшествовать стадии отдачи электрона от молекулы деполяризатора к электроду или протекать одновременно с ней.

Таблица 1.

Рабочие условия вольтамперометрического определения витаминов Вь В2 и Е.

Компонент Витамин В; Витамин В2 Витамин Е

Способ определения ИВА Катодная ДВА Анодная ДВА Анодная ДВА

Индикаторный электрод РПЭ РПЭ СУЭ СУЭ

Фоновый электролит 0,1 МСбНвО, (рН 3,0 - 3,5) 0,1 м Ма2НР04 (рН 7,5 - 8,5) 0,1 М сбнмотыг (рН 4,0-5,0) 0,1 М №СЮ4 в ацетонитриле

Диапазон

определяемых 0,20 — 10,0 1,0 — 50,0 2,0 - 28,0 2,0 - 20,0

содержаний, мг/дм3

Ст1П,р, мг/дм3 0,08 0,58 0,48 0,35

Сн, мг/дм3 0,11 0,85 0,69 0,8

Диапазон развертки потенциала, В 0,1 +-0,5 -0,8--1,6 -0,6 --0,1 1,0-г 2,0

Потенциал пика, В -(0,35 ± 0,05) -41,3 ±0,05) -(0,35 ± 0,03) (1,65 ±0,15)

В водных растворах в зависимости от рН среды рибофлавин может находиться в катионной, нейтральной и анионной формах, а также в виде семихинонов. При рН<8 рибофлавин существует в трех катионных формах: АН/, АН3+, АН/.

В очень кислых растворах, при рН<4, рибофлавин находится преимущественно в катионных формах АН3+ и АН/ (протонирован атом азота в положении 1 и 10). С увеличением концентрации гидроксид ионов (рН>4), рибофлавин переходит в менее протонированную форму в виде АН2+ и АН/ (протонирован атом азота в положении 10). При дальнейшем увеличении кислотности среды в интервале рН>7 рибофлавин, по-видимому, существует в виде нейтральной молекулы АН и АН2. При рН>10 возможно образование анионных форм рибофлавина А" и АН2" (отсутствует протон у атома азота в положении 3).

Характер зависимости потенциала пика от рН обусловлен смещением протолитического равновесия органического вещества в растворе. Значения рН в точках пересечения продолжений прямолинейных участков

экспериментальной зависимости потенциала пика от рН соответствует величинам рК. Найденные значения рК рибофлавина составили: рК 1=3,6 и рК2=7,2. Вычисленные эффективные значения констант диссоциации различных форм рибофлавина удовлетворительно согласуются с литературными данными.

Тангенс угла наклона зависимости потенциала пика витамина В2 от рН равен 0,62, что свидетельствует об участии в электродном процессе одного электрона и одного протона.

Е, В

Е, В

-Обг-

-0 5

-0 4

-03

-02

-0 1

10

-1.12

-1 16

-1 28

-1.32

10

рН

рН

Рис. 7. Зависимость потенциала пика электроокисления витамина В2 от рН среды на СУЭ: С = 6,0 мг/дм3, \у=20 мВ/с.

Рис. 8. Зависимость потенциала пика электровосстановления витамина В) от рН среды на РПЭ: С = 5,0 мг/дм3, \у=30 мВ/с.

Величина тока электроокисления витамина В2 также зависит от рН, что можно объяснить изменением механизма электрохимического окисления органического вещества с увеличением рН среды.

Следует обратить внимание, что в кислых растворах при рН<4 на вольтамперограмме наблюдается появление дополнительного небольшого предпика при более отрицательном потенциале, что затрудняет использование кислых растворов для количественного определения витамина. Появление дополнительного предпика (меньшего по высоте) может быть связано с адсорбцией рибофлавина на поверхности электрода, занятой молекулами дегидрорибофлавина, а также наличием промежуточных соединений -комплексов с переносом заряда, образованных либо двумя идентичными семихинонами, либо молекулами окисленной и восстановленной форм. Для аналитических целей используют больший по величине пик, высота которого прямопропорциональна концентрации определяемого органического вещества в растворе.

Значение рН среды влияет и на механизм протекания электродного процесса при вольтамперометрическом определении витамина В]. Из зависимости потенциала максимума пика тиамина от кислотности среды следует, что с увеличением рН происходит смещение потенциала пика в катодную область (рис.8.), т.е. к затруднению процесса восстановления витамина.

Известно, что в водных растворах в зависимости от рН среды тиамин может существовать в виде катионной, молекулярной и анионной форм. При значениях рН<6 тиамин находится в растворе преимущественно в виде соли четвертичного основания, устойчивого в кислой среде.

С увеличением концентрации гидроксид ионов (рН 6-8) происходит размыкание тиазолового цикла молекулы с образованием открытой тиольной формы КвН. При рН>8 возможно образование анионной формы тиамина ИЗ .

Интервал рН от 8,1 до 8,6, по-видимому, соответствует состоянию протолитического равновесия: КБН - +//+.

Из экспериментальных данных впервые вычислено значение эффективной константы диссоциации, которое составляет К^ф = 6,2-10"9.

Зависимость тока электровосстановления тиамина от рН проходит через максимум. При увеличении рН от 6,0 до 8,0 ток восстановления растет и достигает максимального значения при рН 7,5 - 8,5, при дальнейшем увеличении концентрации гидроксид ионов ток уменьшается, что можно объяснить образованием малорастворимого соединения на поверхности электрода, затрудняющего процесс восстановления. Исходя из проведенных исследований, рабочим фоновым электролитом выбран раствор 0,1 М ЫаНгР04 (рН 7,5 - 8,5).

Таким образом, установлены рабочие условия вольтамперометрического определения витаминов В1, В2, и Е, которые были использованы для разработки методик их количественного химического анализа в многокомпонентных сухих витаминизированных смесях.

Глава 4. Исследование физико-химических закономерностей электрохимического поведения витаминов и оценка некоторых параметров электродной реакции.

Изучение обратимости процессов электроокисления витаминов В2 и Е проводили по экспериментальным данным. В расчетах использовали известные в литературе критерии и метод циклической вольтамперометрии.

Установлено, что процесс электроокисления витамина В2 на стеклоуглеродном электроде протекает практически обратимо, что подтверждает вид циклической вольтамперограммы. Высота аналитического сигнала рибофлавина при катодном и анодном реверсе потенциала практически одинакова, разнос гь потенциалов не превышает 20 мВ (рис.9.).

Из зависимости величины от со"2 вычислена адсорбционная

составляющая электродного процесса. Вклад адсорбционной составляющей невелик и составляет менее 9% суммарного тока, что свидетельствует о диффузионной природе тока, осложненной адсорбционными процессами.

Число электронов принимающих участие в электродном процессе, вычисленное из полулогарифмических зависимостей и по уравнению Левича,

Рис. 9. Циклические вольтамперограммы окисления-восстановления рибофлавина на СУЭ, \у=30 мВ/с:

1, Г-фон 0,1 МСбНм07^;

2, 2' - С |=2,0 мг/дм3; 3,3'-С2=4,0 мг/дм3; 4,4' - С3=6,0 мг/дм3; 5, 5' - С4=8,0 мг/дм3.

-Е, В

Таким образом, процесс электроокисления витамина В2 на стеклоуглеродном электроде при рН 4-5 является диффузионным, протекает с участием одного электрона и одного протона через образование катионной формы семихинона АН2+ и может быть осложнен как адсорбционными явлениями, так и предшествующими и последующими реакциями с участием органического вещества.

При исследовании обратимости процесса электроокисления витамина Е (а-токоферола ацетата) установлено, что при окислении токоферола на стеклоуглеродном электроде в ацетонитриле замедленной стадией является стадия переноса электрона. Подтверждением значительного отклонения процесса электроокисления витамина Е от обратимого является вид циклической вольтамперограммы. При анодной развертке потенциала наблюдается четко выраженный аналитический сигнал витамина При катодном реверсе потенциала пик восстановления витамина Е выражен очень слабо, отношение величины катодного тока к анодному составляет 1/6, разница между потенциалами анодного и катодного пика более 100 мВ.

Рассчитанные значения эффективных коэффициентов переноса, на фонах 0,1 М МаСЮ4 и 0,1 М (ИНОгБСи в ацетонитриле равны 0,41 ± 0,05 и 0,44 ± 0,07 соответственно. Число электронов, принимающих участие в электродном процессе, вычислено из полулогарифмических зависимостей (рис.10.) и составляет значение близкое к единице (п=1,19 ± 0,072).

Таким образом, электродный процесс электроокисления а-токоферола ацетата на СУЭ в ацетонитриле близок к необратимому, протекает с участием одного электрона через образование промежуточного радикала с

близко к единице и составляет 1,05±0,22.

последующими химическими превращениями до конечных продуктов, что соответствует литературным данным.

Рис.10. Полулогарифмические зависимости 1п 1/1пр-1 от потенциала пика электроокисления а-токоферола ацетата на СУЭ, фон 0,1 М №СЮ4 в ацетонитриле, со = 700 об/мин: 1 - С[= 2-10~3М; 2-Сг= 5-10"3М.

1п 1/1пР-1

Известно, что органические вещества, содержащие тиольную группу, обладают большой адсорбционной способностью. Для изучения адсорбции витамина В1 на ртутно-пленочном электроде впервые применили метод двойного обратного интегрирования емкостных токов.

Из анализа полученных данных следует, что в растворах 0,1 М Иа3Р04 и 0,1 М КОН имеет место анионный тип адсорбции витамина. Этот факт подтверждает известные в литературе данные о том, что в щелочных средах тиамин существует в виде аниона ЯБ . Потенциал десорбции витамина В| находится на отрицательной ветви электрокапиллярной кривой (рис.11.) и равен ЕД(;с= -0,7 В на фоне 0,1 М Ыа3Р04 и Едес=-1,05 В в растворе 0,1 М КОН.

лег -10?, д ж/см о

о

Рис. 11. Зависимость изменения величины поверхностного натяжения от потенциала РПЭ (витамин В]): 1 - фон 0,1 М№3Р04;

2-С! =5,0- 10'5 М;

3-С2=1,0- 10'4 М;

4-Сз =2,0- 10"4

5-С4 =3,0- Ю"41

6 - С5 = 4,0 ■

7 -Сб = 5,0 ■

М; 'М; 10"4 М; 10"4М.

Полученные опытные данные позволили оценить параметры адсорбции витамина В, (табл.2.), величина которых свидетельствует о вкладе адсорбционной составляющей в величину предельного тока восстановления тиамина с поверхности ртутно-пленочного электрода.

Таблица 2.

Параметры адсорбции витамина В] на ртутно-пленочном электроде.

Фон - Е, В К, дм'/моль Г.» ТО'0, моль/см2 ДС,, кДж/моль

0,1 МШ3Р04 0,0 95,0 1,5 -2,8

0,1 126,0 3,0 -2,9

0,1 МКОН 0,5 74,1 1,8 -2,6 -2,5

0,6 65,6 2,3

Глава 5 посвящена оценке мешающего влияния сопутствующих примесей на аналитические сигналы определяемых компонентов и разработке алгоритма подготовки проб при определении витаминов.

При разработке методик изучено влияние ряда соединений и ионов, оказывающих негативное влияние на величину аналитического сигнала. Показано, что присутствие сопутствующих органических веществ: витаминов А, Д, В6, Вс С, Р, РР, флавоноидов, полифенольных и других соединений; стократные избытки ионов Хп2+, Си2+, Мп2+, 8е4+, Ре+ не влияют на аналитические сигналы определяемых компонентов.

Мешающее влияние оказывают белковые примеси, прочно адсорбирующиеся на поверхности электрода и снижающие чувствительность, воспроизводимость и точность анализа. С целью освобождения от белковых примесей использовали метод высаливания. Электролит натрий виннокислый кислый (С^ОбИа-НгО), подобранный экспериментально, оказался лучшим высаливателем водорастворимых белков.

Для извлечения витамина Е из витаминизированных твердых сухих смесей предложен метод экстракции с использованием аппарата Сокслета, применение которого позволяет улучшить метрологические характеристики результатов анализа.

На примере определения витамина Е в витаминизированном премиксе для цыплят «Солнышко» методом дифференциальной вольтамперометрии проведена оптимизация процедуры пробоподготовки методом факторного планирования эксперимента. В качестве функции отклика выбрано содержание витамина в премиксе (г/кг). Исследуемые факторы на основном и двух уровнях представлены в таблице 3.

Для получения модели использовали полный факторный эксперимент. Полученное уравнение регрессии имеет вид:

у = 1,83 + 0,70X1 + 0,36Х2 - 0,014Х3 - 0,015X4

Проверка значимости коэффициентов регрессии показала, что значимыми факторами являются масса навески пробы прсмикса и время экстракции пробы.

Таблица 3.

Уровни и интервалы варьирования факторов._

Факторы Единицы измерений Уровни

Основной Верхний Нижний

Масса навески (X/) ш, г 2 3 1

Время экстракции (Х2) 1, мин 30 45 15

Объем аликвоты (Х3) уал, мл 0,3 0,4 0,2

Объем добавки (Х4) Удоб, мл 0,07 0,1 0,04

Из уравнения регрессии сделан вывод о необходимости увеличения значимых факторов. Полученные данные учитывались при разработке методик количественного химического анализа витамина Е.

Оценку предела обнаружения и нижней границы определяемых содержаний проводили с использованием Зс-критерия на современных вольгамперометрических анализаторах, оснащенных различными типами развертки поляризующего напряжения (табл.4.). Использование анализатора СТА с накопительной разверткой потенциала позволяет увеличить чувствительность определения витаминов более чем на порядок по сравнению с полярографами типа ГГУ-1.

Таблица 4.

Пределы обнаружения и нижние границы определяемых содержаний витаминов Е, В1 и В2 (п=10, Р=0,95)_ ___

Витамин Приборы Режимы полярографирования мг/дм3 с мг/дм3

Е Полярограф ПУ-1 постоянно-токовый 0,35 0,80

Анализатор С1А постоянно-токовый 0,12 0,38

накопительный 0,011 0,048

Анализатор ВАМ ступенчатый 0,058 0,12

в, Полярограф ПУ-1 постоянно-токовый 0,58 0,85

Анализатор СТА постоянно-токовый 0,55 0,92

дифференциально-импульсный 0,26 0,42

в2 Полярограф ПУ-1 постоянно-токовый 0,48 0,69

Анализатор СТА постоянно-токовый 0,44 0,68

накопительный 0,036 0,072

На основании проведенных исследований впервые разработаны экспрессные методики определения витаминов В1; В2 и Е в сложных многокомпонентных сухих витаминизированных смесях, таких как поливитаминные препараты, витаминизированные подкормки для животных и птиц, биологически активные добавки. Правильность разработанных методик подтверждена сравнением с методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (табл. 5.), а также методом «введено-найдено» (табл. 6.).

Таблица 5.

Сравнение результатов анализа проб биологически активных добавок на содержание витамина Е (ос-токоферола ацетата) двумя методами.

Анализируемая проба БАД Найдено а-токоферола ацетата, мг/г

Дифференциальная вольтам перометрия ВЭЖХ

«Формула женщины» 11,4 ± 2,2 10,8

«Дискавери» 2,5 ± 0,8 2,65

«Диенал» 1,8 ±0,4 2,05

«Маньчжу Айсинь» 6,3 ± 1,3 7,1

Таблица 6.

Результаты вольтамперометрического определения витамина В | в витаминизированных подкормках и премиксах методом «введено-найдено»

(Р=0,95; п=8)

Анализируемая проба Средний результат анализа пробы, мг/кг Введено мг/кг Средний результат анализа пробы с добавкой, мг/кг Найдено, мг/кг

Премикс для цыплят «Солнышко 114 ± 8 200 301 ±29 188 ±25

114 ±8 50 162 ± 17 48 ±8

11418 500 686 ± 72 502 ± 57

Премикс для гусей «Иван Иваныч» 54 ±4 100 155 ± 16 108 ± 15

54 ±4 50 108 ± 15 55 ±7

Витаминизированная подкормка для собак и кошек 820 ± 34 1000 1797 + 68 977±139

820 ± 34 500 1311 ±70 491 ±84

Предлагаемые способы вольтамперометрического определения витаминов имеют ряд преимуществ по сравнению с уже известными методами (табл. 7). Они просты, имеют высокую чувствительность, минимальный расход реакгивов, низкую величину стоимости приборов и оборудования и могут быть рекомендованы для разработки методик количественного химического анализа витаминов в пищевых продуктах, биообъектах, технологическом анализе сточных и природных вод производства лекарственных веществ и других отраслях промышленности.

Таблица 7.

Сравнение способов количественного химического анализа витамина Е.

Параметры Спектрофотометрический ФС 42-2192-93 ВЭЖХ ФС 42-2192-93 Газовая хроматография ФС 42-2192-93 Дифференциальная вольтамперометрия

Стш.в. мг/дм3 1,2 0,04 2,7 0,35

Линейность градуировоч-ных графиков, мг/дм3 7-35 1 - 100 15-150 2-20

Время анализа 4-5 часов 1-2 часа 1-2 часа 0,5-1 часа

Используемые реактивы 50 мл 95% С2Н5ОН, 3 мл 50 % КОН, аскорбиновая кислота, 250 мл эфира, 8 г №2504 безводн., 0,2 г палладиевого катализатора, 0,3 г силикагеля, 1мл 0,5 % спиртового раствора о-фенантролина, 1 мл 0,2 % спиртового раствора БеСЬ. Гексан, эфир Газ-носитель-гелий или азот особой чистоты, цетилпальмитат, 50 мл гексана 20 мл хлороформа, 10 мл ацетонитрила, N30104-

Используемое оборудование и его стоимость Водяная баня с обратным холодильником, делительная воронка, колба для отгона в токе азота или под вакуумом, спектрофотометр (20 тыс.-100 тыс. руб) Хроматограф для ВЭЖХ (400 тыс.-1500 тыс. руб) Газо-жидкостный хроматограф (200 тыс.-1000 тыс.руб) Вольтамперометри-ческий анализатор, три электрода. (40 тыс.-80 тыс.руб)

Способ определения концентрации Метод калибровочного графика Метод внешнего стандарта Метод внутреннего стандарта Метод добавок

Выводы

1. Впервые для определения витамина Е (а-токоферола ацетата) предложен метод дифференциальной вольтамперометрии, основанный на способности витамина электрохимически окисляться на углеродных электродах различных типов в неводных средах, что подтверждено патентом на изобретение. Установлены условия вольтамперометрического определения водорастворимых витаминов В1 (тиамина хлорида) и В? (рибофлавина).

2. Впервые изучена обратимость процессов электроокисления витаминов В2 и Е на стеклоуглеродном электроде, рассчитаны некоторые физико-химические параметры электродной реакции (рК, п, рп,), имеющие аналитическое значение, и предложены вероятные схемы электродного процесса.

3. Методом двойного обратного интегрирования изучена адсорбция витамина В) на ртутно-пленочном электроде. Показано, что в растворах 0,1 М Ыа^О., и 0,1 М КОН имеет место анионный тип адсорбции витамина. Дана численная оценка параметров адсорбции.

4. Предложены условия выделения определяемых органических веществ из многокомпонентных смесей. Показано, что присутствие сопутствующих органических веществ: витаминов А, Д, В6, В12, Вс, С, Р, РР, флавоноидов, полифенольных и других соединений; стократные избытки ионов 7,п2', Си2+, Мп2+, 8е4+, Ре3+ не влияют на аналитические сигналы определяемых компонентов. Предложены условия устранения мешающего влияния белковых примесей. Проведена процедура оптимизации пробоподготовки, включающая многофак горное планирование эксперимента в выборе наиболее значимых параметров, оказывающих влияние на результаты анализа.

5. Впервые разработаны и метрологически аттестованы методики количественного химического анализа многокомпонентных сухих витаминизированных смесей на содержание витаминов методом дифференциальной вольтамперометрии. Методики внесены в Федеральный Реесгр методик выполнений измерений, применяемых в сферах распространения государственного метрологического контроля, что подтверждается свидетельствами об аттестации.

Основное содержание диссертации опубликовано в следующих работах:

1. Михеева Е.В., Анисимова Л.С. Вольтамперометрическое определение водорастворимых витаминов В, и В2 в витаминизированных подкормках и кормах. //Материалы симпозиума «Теория электроаналитической химии и метод ИВ - 2000». - г.Томск, 2000. - С. 244 - 247.

2. Анисимова Л.С., Михеева Е.В. Определение водорастворимых витаминов В| и В2 в пищевых продуктах и кормах. //Материалы VI конференции «Аналитика Сибири и Дальнего Востока - 2000». - г. Новосибирск, 2000 г. -С. 367.

3. Анисимова JT.С., Михеева Е.В., Слипченко В.Ф., Филичкина О.Г. //Материалы IV Всероссийской конференции по анализу объектов окружающей среды «Экоаналитика-2000». - г.Краснодар, 2000. - С. 240 -242.

4 Анисимова Л.С , Михеева Е.В., Слипченко В.Ф. Определение рибофлавина в витаминизированных подкормках и кормах вольтамперометрическим методом. //Журн. аналит. химии. - 2001. - Т. 56, №7. - С.739 - 744.

5 Анисимова Л.С., Михеева Е.В. Способ количественного определения витамина Е (а-токоферола ацетата) методом дифференциальной вольтамперометрии. //Патент РФ № 2180747.; Приоритет от 14.12.2000.

6. Михеева Е.В., Анисимова Л.С., Десятое В.А. Вольтамперометрическое определение витамина Е в биологически активных добавках. //Изв. ВУЗов. Химия и хим. технология. - 2000. - Т.45, № 3. - С.71 - 74.

7. Михеева Е.В., Анисимова Л.С., Слепченко Г.Б. О возможности вольтамперометрического определения жирорастворимых витаминов в продуктах питания и фармпрепаратах. //Материалы II Всероссийской конф. по электрохимическим методам анализа с международным участием «ЭМА - 2004». — г. Уфа, 2004.-С.180- 181.

8. Михеева Е.В., Карбаинов Ю.А, Карбаинова C.II., Слепченко Г.Б., Куртенкова О.В. Адсорбционные процессы витамина Bt на ртутном пленочном электроде. //Материалы III Всероссийской науч. конф. «Химия и химическая технология на рубеже тысячелетий». - г.Томск, 2004. - С.208 -209.

9. Слепченко Г.Б., Романенко С.В., Десяюв В.А., Михеева Е.В. Электрод сравнения для вольтамперометрического определения органических веществ. //Материалы III Всероссийской науч. конф. «Химия и химическая технология на рубеже тысячелетий». - г.Томск, 2004. - С.222 - 223.

10. Slepchenko G.B., Anisimova L.S., Fedorchuk V.A., Slipchenko V.F., Slepchenko E.S., Mikheeva E.V., Akeneyev Y.A., Pikula N.P. Voltammetric determination of drugs in complicated multycomponent systems. //8th Korea-Russia International Symposium of Science and Technology. Korus 2004. -Tomsk,2004. -V.l. - P.84 - 88.

11. Михеева Е.В, Анисимова Л.С., Слепченко Г.Б. Вольтампсрометрический контроль витамина Bi в фармпрепаратах, биологических и других объектах. //Материалы VII конференции «Аналитика Сибири и Дальнего Востока - 2004». - г. Новосибирск, 2000 г. - С. 130.

12. Михеева Е.В, Анисимова Л.С, Пикула Н.П. Определение витамина Е в поливитаминных препаратах методом дифференциальной вольтамперометрии. //Фармация. - 2004. - №5. - С. 16 - 17.

13 Слепченко Г.Б., Анисимова Л.С., Слипченко В.Ф., Михеева Е.В., Пикула Н.П. Контроль качества биологически активных добавок ме ч одами вольтамперометрии. Определение витаминов Вь В?, С, Е, и квсрцетина //Хим.-фарм. журн. - 2005. - №2. - С.85 - 87.

14. Михеева Е.В., Анисимова Л.С. Физико-химические методы определения витамина Е в различных объектах (обзор). //Зав. лаборатория. Диагностика материалов. - 2005.-Т.71, №2. - С.З - 9.

Ц8- 6 5 4 2

РНБ Русский фонд

2006-4 4515

Подписано к печати 11 04 05 Бумага офсетная Печать RISO. Формат 60x84/16 Тираж 100 экз Заказ № 26-1104 Центр ризографии и копирования Ч/П Тиспенко О В. Св-во №14 263 от 21 01 2002 г, пр. Ленина, 41, оф № 7

Введение

Глава 1. Литературный обзор по физико-химическим методам исследования и определения витаминов в различных объектах.

1.1. Основные свойства водорастворимых витаминов Вь В2 и жирорастворимого витамина Е.

1.2. Современное состояние методов аналитического контроля витаминов.

1.3. Особенности электрохимических методов анализа витаминов.

Экспериментальная часть

Глава 2. Аппаратура и методика проведения эксперимента

2.1. Приборы, электроды, ячейки.

2.2. Приготовление растворов, посуды.

2.3. Объекты исследования.

2.4. Методика проведения эксперимента.

Глава 3. Выбор рабочих условий вольтамперометрического определения ряда витаминов.

3.1. Жирорастворимый витамин Е (а-токоферола ацетат).

3.2. Водорастворимый витамин Вг (рибофлавин).

3.3. Водорастворимый витамин В1 (тиамин).

Глава 4. Исследование электрохимического поведения витаминов и определение некоторых физико-химических констант. 68 4.1. Изучение механизма электрохимического поведения витаминов с использованием вращающегося дискового электрода и метода циклической вольтамперометрии. g 4.2. Изучение адсорбции витамина Bj методом двойного обратного интегрирования.

Глава 5. Разработка методик количественного определения витаминов в многокомпонентных сухих витаминизированных смесях.

5.1. Оценка предела обнаружения и нижней границы определяемых содержаний витаминов. t 5.2. Оценка мешающего влияния сопутствующих примесей на аналитические сигналы витаминов.

5.3. Применение многофакторного планирования эксперимента для оптимизации условий подготовки пробы при вольтамперометрическом определении витамина Е.

5.4. Методики количественного химического анализа 4 витаминов Bi, В2 и Е в многокомпонентных сухих витаминизированных смесях: поливитаминных препаратах, витаминизированных подкормках для животных, биологически активных добавках.

Обсуждение результатов.

Выводы.

Актуальность. Увеличение степени загрязнения окружающей среды, жесткая технологическая обработка производимых продуктов питания привели к существенному снижению содержания в потребляемых продуктах биологически активных веществ, а особенно, витаминов. На восстановление качества продуктов питания направлен закон РФ № 29-ФЗ «О качестве и безопасности пищевых продуктов» от 2 января 2000 г. Приняты правительственные общероссийские программы:

• «Обогащение пищевых продуктов микроэлементами»;

• «Концепция здорового питания России», утвержденная постановлением Правительства № 247, одним из разделов которой является «Разработка быстрых и надежных методов контроля».

В настоящее время на рынке появилось огромное количество витаминизированных продуктов питания для человека и кормов для животных, представляющих собой сухие многокомпонентные смеси. Ассортимент таких продуктов представлен достаточно широко. Это, прежде всего, биологически активные добавки к пище, премиксы, комбикорма для животных и птиц, поливитаминные препараты. Критерием качества таких продуктов может являться их анализ на содержание витаминов и, особенно, таких жизненно необходимых, как водорастворимые витамины Bj, В2 и жирорастворимый витамин Е, количество которых регламентируется нормативными документами и санитарными нормами качества.

Для определения витаминов применяют различные методы. Широко используемые оптические методы анализа трудоемки, требуют больших затрат времени и дорогостоящих реактивов, применение хроматографических методов осложнено использованием дорогостоящего оборудования.

Электрохимические методы анализа в настоящее время переживают бурное развитие в связи с их применением для определения органических веществ. Одним из наиболее универсальных электрохимических методов определения следовых количеств веществ является вольтамперометрический метод анализа. В 1999 году данный метод приобрел статус арбитражного (вышел ГОСТ Р 51301-99) для определения тяжелых металлов в пищевых продуктах. Методы вольтамперометрии также нашли применение при анализе органических веществ, в том числе и витамина С. Однако, методики вольтамперометричёского определения водорастворимых витаминов Вь В2 и жирорастворимого витамина Е практически отсутствуют.

Проведение исследований по оптимизации условий вольтамперометрического определения витаминов в присутствии сложной органической матрицы, создание методик количественного химического анализа витаминизированных продуктов питания для человека и животных на содержание витаминов методом вольтамперометрии и метрологическая аттестация разработанных методик является актуальным и имеет большую практическую значимость.

Цель работы заключалась в исследовании электрохимического поведения водорастворимых витаминов Bj, В2 и жирорастворимого витамина Е, разработке вольтамперометрических методик их количественного химического анализа в многокомпонентных сухих витаминизированных смесях.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

• установить рабочие условия вольтамперометрического определения водорастворимых витаминов Bj, В2 и жирорастворимого витамина Е;

• исследовать физико-химические закономерности электрохимического поведения витаминов и оценить некоторые параметры электродной реакции (рК, п, рп);

• изучить адсорбционную способность витамина В[ с использованием метода двойного обратного интегрирования;

• провести оценку мешающего влияния сопутствующих примесей на аналитические сигналы определяемых компонентов и разработать алгоритм подготовки проб при определении витаминов;

• разработать и метрологически аттестовать методики количественного химического анализа многокомпонентных сухих витаминизированных смесей на содержание витаминов методом дифференциальной вольтамперометрии.

Научная новизна:

• Впервые предложен способ определения жирорастворимого витамина Е (а-токоферола ацетата), а также водорастворимых витаминов Bi (тиамина) и Вг (рибофлавина) методом дифференциальной вольтамперометрии и установлены условия проведения электродного процесса.

• Проведена оценка некоторых физико-химических параметров электродного процесса с участием витаминов (рК, п, (Зп).

• Рассчитаны параметры адсорбции витамина Bi методом двойного обратного интегрирования.

• Предложены условия по устранению мешающего влияния сложной органической матрицы.

• Разработан алгоритм подготовки проб для вольтамперометрического определения витаминов.

Практическая значимость работы состоит в том, что:

• на основании проведенных исследований предложены алгоритмы методик количественного химического анализа водорастворимых витаминов Вь В2 и жирорастворимого витамина Е для широкого круга объектов: поливитаминных препаратов, витаминизированных подкормок и кормов для животных, биологически активных добавок;

• методики: «Витаминизированные корма и подкормки. Определение массовых концентраций витамина В] методом вольтамперометрии», «Витаминизированные корма и подкормки. Определение массовых концентраций витамина В2 методом дифференциальной вольтамперометрии» и «Биологически активные добавки. Вольтамперометрический метод определения массовых концентраций витаминов С, Bj, В2, Е и кверцетина» метрологически аттестованы, внесены в Федеральный Реестр МВИ.

На защиту выносятся:

• рабочие условия вольтамперометрического определения витаминов Вь В2 и Е;

• основные параметры электродной реакции с участием витаминов и их адсорбционную способность;

• способ подготовки проб, включая процедуру выделения определяемых органических веществ из многокомпонентных смесей;

• алгоритм методик количественного химического анализа многокомпонентных сухих витаминизированных смесей на содержание витаминов методом дифференциальной вольтамперометрии.

Апробация работы.

Отдельные разделы диссертации докладывались на: симпозиуме «Теория электроаналитической химии и метод ИВ - 2000» (Томск, 2000); VI конференции «Аналитика Сибири и Дальнего Востока- 2000» (Новосибирск, 2000); IV Всероссийской конференции по анализу объектов окружающей среды «Экоаналитика-2000» (Краснодар, 2000); II Всероссийской конференции по электрохимическим методам анализа с международным участием «ЭМА-2004» (Уфа, 2004); III Всероссийской научной конференции «Химия и химическая технология на рубеже тысячелетий» (г.Томск, 2004); 8th Korea-Russia

International Symposium of Science and Technology (Tomsk, 2004); VII конференции «Аналитика Сибири и Дальнего Востока - 2004» (Новосибирск, 2004), а также на объединенных научных семинарах кафедры физической и аналитической химии и проблемной лаборатории микропримесей Томского политехнического университета.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 163 страницах машинописного текста, включая 41 рисунок, 22 таблицы, состоит из введения, пяти глав, выводов, приложения и списка литературы из 251 библиографических названий работ отечественных и зарубежных авторов.

Выводы

1. Впервые для определения витамина Е (а-токоферола ацетата) предложен метод дифференциальной вольтамперометрии, основанный на способности витамина электрохимически окисляться на углеродных электродах различных типов в неводных средах. Установлены условия вольтамперометрического определения водорастворимых витаминов В] (тиамина хлорида) и В2 (рибофлавина).

2. Впервые изучена обратимость процессов электроокисления витаминов В2 и Е на стеклоуглеродном электроде, рассчитаны некоторые физико-химические параметры электродной реакции (рК, п, Рп), имеющие аналитическое значение, и предложены вероятные схемы электродного процесса. Методом двойного обратного интегрирования изучена адсорбция витамина Bj на ртутном пленочном электроде. Дана численная оценка параметров адсорбции.

3. Впервые предложены условия выделения определяемых органических веществ из многокомпонентных смесей. Показано, что присутствие сопутствующих органических веществ: витаминов А, Д, В6, В[2, Вс, С, Р, РР, флавоноидов, полифенольных и других соединений, стократные избытки ионов Zn2+, Cu2+, Mn2+, Se4+, Fe3+ не влияют на аналитические сигналы определяемых компонентов. Предложены условия устранения мешающего влияния белковых примесей.

4. Разработаны методики количественного химического анализа многокомпонентных сухих витаминизированных смесей на содержание витаминов методом дифференциальной вольтамперометрии. Проведена процедура оптимизации пробоподготовки, включающая многофакторное планирование эксперимента в выборе наиболее значимых параметров, оказывающих влияние на результаты анализа.

5. Методики количественного химического анализа витамина Е в биологических добавках и витаминов В) и В2 в витаминизированных подкормках и кормах метрологически аттестованы, зарегистрированы в Федеральном Реестре методик выполнений измерений, применяемых в сферах распространения государственного метрологического контроля, что подтверждается свидетельствами об аттестации. Разработанные методики внедрены в ряде аналитических лабораторий России и стран СНГ, что подтверждается актами о внедрении.

1. Витамины. Под. ред. Смирнова В.Г. -М.: Медицина, 1974. - 496 с.

2. Мелентьева Г.А. Фармацевтическая химия. М.: Медицина, 1976. - 828 с.

3. Березовский В.М. Химия витаминов. М.: Пищепромиздат, 1959. - 600 с.

4. Беликов В.Г. Фармацевтическая химия. — М.: Высш.шк., 1985. 768 с.

5. Фридман Я.Д., Долгашова Н.В., Назаров В.Ф. Полярографическое изучение комплексов никеля с рибофлавином. //Координационная химия.- 1978. -Т.4, № 12. С. 1873 - 1876.

6. Степанова Е.Н., Сапожникова Г.А., Нефедова Р.С. Сравнительное изучение различных методов определения рибофлавина в пищевых продуктах. //Вопросы питания. 1969. - Т.28, № 5. - С. 14-18.

7. Экспериментальная витаминология. Под. ред. Ю.М. Островского. — Минск, 1979.-С. 224-266.

8. Тутельян В.А., Суханов Б.П., Австриевских А.Н., Позняковский В.М. Биологически активные добавки в питании человека. Томск: Изд-во НТЛ, 1999.-296 с.

9. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1983.- 752 с.

10. Ю.Надиров Н.К. Токоферолы (витамины группы Е) биологически активные вещества. - М.: Знание, 1981. - 64 с.

11. Надиров К.С., Сансербаева Г.М., Журинов М.Ж., Жамалбекова Б. Электрохимическое исследование а-токоферола. Каз.хим.-технол.ин-т. Чимкент. 1986. - 9 с.

12. Пюльман Б., Пюльман А. Квантовая биохимия. М.: Мир, 1965. - 654 с.

13. Ксенжек О.С., Петрова С. А. Исследование электрохимического поведения рибофлавина методом тонкослойной вольтамперометрии. //Электрохимия. 1973. - Т.9, вып.9. - С. 1385 - 1390.

14. Полюдек-Фабини Р., Бейрих Т. Органический анализ. Л.: Химия, 1981. - 624 с.

15. Девятнин В.А., Солунина И.А. Определение токоферолов в растительных маслах. //Медицинская промышленность СССР. 1959. - №2. - С. 38-42.1 б.Щербакова М.Н. Определение витамина Е в масле китайского лимонника. //Аптечное дело. 1963. - Т.12, №1. - С. 33-36.

16. П.Григорьева М.П., Степанова Е.Н. Определение витамина Е в рыбе и рыбопродуктах. //Вопросы питания. 1979. - №1. - С. 59-63.

17. Кисилевич Р.С., Скварко С.И. Об определении витамина Е в крови //Лаб. дело. 1972. - №8. - С. 473-475.

18. Паранич А.В., Солошенко Э.Н. Определение витамина Е (токоферола) в сыворотке крови больных лекарственной болезнью. // Лаб. дело. 1987. -№9.-С. 682-685.

19. Карелина О.А. Одновременное флюориметрическое определение концентраций витаминов Е и А в сыворотке крови. //Гигиена и санитария. -1986.-№4.-С. 42-45.

20. Walily A.F.E1., El-Anwar F., Zamel S. Third-derivative spectrophotometry simultaneous determination of vitamin A and E in some pharmaceutical preparations. //Anal. chim. acta. 1991. - V.248, №2. - P. 583-587.

21. Gunaydi E., Tutem Т., Apak R. Spectrophotometric determination of vitamin H (tocopherols) by the copper (Il)-neocuproine reagent. //35 th IUPAC Congr. -Istanbul, 14-19 Aug., 1995: Abstr. II Sec. 4-6. Istanbul., 1995. - P. 1114.

22. Мощинский П., Пыч P. Определение токоферола в продуктах детского питания. //Вопросы питания. 1991. - №4. - С. 74-76.

23. Тульчинская К.З. и др. Методы определения витамина Е и изучение его обмена в организме. В кн. Вопросы биохимии белково-витаминного питания. И. - Рига. - 1960.

24. Thileman Н. Dunnschichtchromatografisce Trennung und Indentifizierung von Inhaltsstoffen des Multivitaminpraparates Summavit 10 an Fertigfolien UV 254. //Pharmazie. 1981. - V.36, №8. - P. 574.

25. Аскинази А.И. и др. Количественный анализ изомеров токоферола методом ТСХ. //Хим.- фарм. журнал. 1990. - Т.24. - №4. - С. 87 - 88.

26. Сурай П.Ф. Усовершенствованный метод определения витамина Е в пищевых продуктах. //Вопросы питания. 1988. -№3. - С. 69-71.

27. Бурнус З.И., Сурай П.Ф., Бурнус К.Г. Определение а-токоферола в сыворотке крови. //Лаб. дело. 1991. - №4. - С. 49-51.

28. Прохватилова С.С. и др. //Решение актуал. задач фармации на соврем, этапе: Тез. докл. Науч. конф. посвящ. 50-летию НИИ фармации. НИИ фармации. - М. 1994. - С.213.

29. Сурай П.Ф., Ионов И.А. Практические аспекты использования пластинок силуфол для анализа жирорастворимых витаминов. //Вопросы питания. 1987.-№2. -С. 66-70.

30. ФС 42-2192-93. Раствор а-токоферола ацетата (витамина Е ацетата) 5%, 10% и 30% в масле для инъекций.

31. Foldheim Walter, Schulz Harwig, Katerberg Ralf. Untersuchungen zur Bestimmung des Tocopherolgehalts im wererseifbaren Anteil von Lupineol. //Z. Lebensm.-Untersuch. und Forsch. 1984. - V.178, №2. - P. 115-117.

32. Gonzalez M., Ballesteros E., Gallego M., Valcarsel M. Continuous-flow determination of natural and synthetic antioxidants in foods by gas chromatography. //Anal. chim. acta. 1998. - V.359, № 1-2. - P. 47-55.

33. Ulberth Franz. Simultaneous determination of vitamin E isomers and cholesterol by GLS. //J. High. Resolut. Chromatogr. 1991. - V. 14, №5. - P. 343-344.

34. Мовсумов И.С. и др. Определение токоферолов методом ГЖХ в оливковом масле. //Фармация. 1993. - №1. - С. 52-54.

35. Deldime P., Lefebvre G., Sadin Y., Wybauw M. L analuse des tocopherols dans les nuiles vegetales parla chromatographi liquide haute performance. //Rev. franc, corps, gras. 1980. - V.27, №6. - P. 279-282, 292,293.

36. Gertz Christian, Herrmann Karl. Zur Analytik der Tocopherole und Tocotrienole in Lebensmitteln. //Z. Lebensm. Untersuch. und Forsch. 1974, №5.-P. 390-394.

37. Gertz Christian, Herrmann Karl. Hochdruckflussigkeitschromatographische Trennung individualler Tocopherole und Tocotrienole in Spesefetten und Speiseolen an Kurzsaulen. //Lebensmittelchem. und gerichte Chem. 1982. -V.36, №3. - P. 53-58.

38. Tiebach R.K.D., Toth L., Kellert M. Hochdruckflussigkeitschromatographische Trennung von Tocopherolen und Tocotrienolen und Anwendung der Methode zur vitamin E — Bestimmung. //Lebensmittelchem. und gerichte Chem. 1982. - V.36, №2. - P. 506-509.

39. Kato A., Yamaoka M., Gapor Ab., Berger K.G. Tocopherols of oil palm leaf. //J. Amer. Oil Chem. Soc. 1983. - V.60, №12. -P. 2000-2002.

40. Клюев C.A. Модифицированное определение витаминов А и E методом обращенно-фазовой ВЭЖХ. //Хим.-фарм. журн. 1996. - №4. - С. 52-53.

41. Rovellini P., Azzolini М., Cortesi N. HPLC determination of tocopherols and tocotrienols in vegetable oils and fats. //Riv. ital. sostanze grasse. 1997. -V.74, №1. - P. 1-5.

42. Mariani C., Bellan G. Sulla presenza di derivati dei tocoferoli negli oli. //Riv. ital. sostanze grasse. 1997. - V.74, №12. - P. 545-552.

43. Van Schaik F., Van Schoonhoven J., Schrijver J. HPLC of several retinoids, carotenoids and E vitamers. //18 th Int. Symp.Chromatogr. Amsterdam. -1990.

44. Якушина JI.M. и др. Использование методов высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения витаминов в биологических жидкостях и пищевых продуктах. //Вопросы питания. 1993. - №1. - С. 43-48.

45. Chuang Cherrg-Zee, Trosclair G., Lopez S.A. Adaptation of carotenoid procedure to analyse carotenoids, retinol and alpha-tocopherol simultaneously. //J. Liquid. Chromatogr. 1994. -V. 17, № 17. - P. 3613-3622.

46. Barua A.B., Furr H.C., Jamickbuckner D., Olson J.A. Simultaneous analysis of individual carotenoids, retinol, retinyl esters and tocopherols in serum by isocratic nonaqueous reversed-phase HPLC. //Food Chem. 1993. - V.46, №4. -P. 419-424.

47. Halmingh O., Kerkdijk H., Supel H. Automated determination of vitamin A and E in serum by on-line SPE-HPLC. //Pittsburg Conf. Anal. Chem. and Appl. Spectrosc. Atlanta. - 1997. PITTCONx97:Book Abstr. - P. 561.

48. Gamache P.H., Acworth I.N. Simultaneous analysis of fat-soluble carotenoids, retinoids, tocopherols, vitamin К and coenzyme Qi0 in plasma. //Pittsburg Conf. Anal. Chem. and Appl. Spectrosc. New Orleans. - 1998. PITTCON'98: Book Abstr. - P. 1619.

49. Mellurray C.H., Blanchflower W.J., Rice D.A. Influence of extraction techniques on determination of a-tocopherol in animal feedstuffs. //J. Assoc. Offic. Anal. Chem. 1980. - V.63, №6. - P. 1258-1261.

50. Афоныиин Г.Н., Хвощева С.М., Мешкова JI.A., Худякова Т.А. Сравнение различных методов определения витамина Е в масляных препаратах, премиксах и кормах для птицеводства. //Химия и химическая технология. 1996.- Т.39. - вып. 4-5. - С. 33-37.

51. Torrado Santiago, Jimenez Caballero Esperanza, Cadorniga R., Torrado J. A selective liquid chromatography assay for the determination of dl-a-tocopherol acetate in plasma samples. //J. Liquid. Chromatogr. — 1995. -V.18, № 6. P. 1251-1264.

52. Panfili G., Manzi P., Pizzoferrato L. High-performance liquid chromatographic method for the simultaneous determination of tocopherols, carotenes and retinol and its geometric isomers in Italian cheeses. //Analyst. 1994. - V.l 19, №6.-P. 1161-1165.

53. Konings E.J.S., Roomans H.H.S., Beljaars P.R. Liquid chromatographic foods and vegetables determination of tocopherols in margarine, infant foods and vegetables. //J. AO AS Int. J.Assoc. Offic. Anal. Chem.. 1996. - V.79, №4. -P. 902-906.

54. Krishna A.G.Gopala, Prabhakar J.V., Aitzetmiller K. Tocopherol and fatty acid composition of same Indian Pulses. //J. Amer. Oil Chem. Soc. 1997 - V.74, №12.-P. 1603-1606.

55. Wyatt C.J., Carballio S.P., Mendez R.O. a-and y-tocopherol content of selected foods in the Mexican diet. //J. Agr. and Food Chem. 1998. - V.46, №11.-P. 4657-4661.

56. Денисова JI.B. и др. Контроль содержания жирорастворимых витаминов в поливитаминных препаратах. //Заводская лаборатория. 1997. - Т.63. -№8.-С. 1-3.

57. Прохватилова С.С. Определение витамина Е в фармацевтических препаратах методом ВЭЖХ. //Фармация. 1998. - №3. - С. 41-44.

58. Прохватилова С.С. и др. Определение а-токоферола в препарате «Тыквеол» методом ВЭЖХ. //Фармация 1998. - №5. - С. 31-32.

59. Лутцева А.И. и др. Анализ и стандартизация жирорастворимых витаминов. //Фармация. 1999. - №6. - С. 37-39.

60. Risner Ch.H., Nelson P.R. Determination of a-tocopherol in environmental tobacco smoke. //J. Chromatogr. Sci. 1998. - V.36, №2. - P. 80-84.

61. Katsui Goichiro, Ohmae Masahiko //Yyakuhin kenkyu. 1984. - V.15, № 4. -P. 632-638.

62. Ben-Amotz A. Simultaneous profilig and idenfication of carotenoids, retinols and tocopherols by high-performance liquid chromatography equipped with three-dimensional photodiode array detection. //J. Liq. Chromatogr. 1995. -V.18, №14. -P. 2813-2825.

63. Abidi S.L., Mounts T.L. Normal phase high-performance liquid chromatography of tocopherols on polar phase. /J. Liq. Chromatogr. 1996. -V.19, №4. - P. 509-520.

64. Careri M., Lugari M.T., Mangia A., Manini P., Spagnoli S. Identification of vitamins A, D and E by particle beam liquid chromatography mass spectrometry. //Fresenius J. Anal. Chem. - 1995. - V.351, №8. - P. 768-776.

65. Strohschein S., Pursch M., Lubda D., Albert K. Shape selectivity of C30 phases of PR-HPLC separation of tocopherol isomers and correlation with MAS-NMR data from suspended stationary phases. //Anal. Chem. 1998. - V.70, №1. - P. 13-18.

66. Coors U., Montag A. Hochdruckflussigkeit-chromatographische Trennung von Tocopherolen und Tocopherienolen neben a-Tocopherolacetat. //Chem. Mikrobiol., Technol., Lebensm. 1981. -V.7, № 1. - P. 21-22.

67. Клюев С.А. Определение витаминов А и E методом ВЭЖХ с предварительным равновесным распределением двух несмешивающихся жидких фаз. //Журн. аналит. химии. 1996. - Т.51, № 9. - С. 961-963.

68. Kamman J,F., Labuza T.R., Warthesen J.J. Thiamin and riboflavin analysis by high performance liquid chromatography.//J. Food Sci. 1980. - V.45, №6. -P. 1497-1499.

69. Lumley I.D., Wiggins R.A. Determination thiamin and riboflavin in foodtuuffs using high performance liquid chromatography. //Analyst. 1981. - V.106, №1267. - P. 1103-1108.

70. Bognar A. Bestimmung von Riboflavin und Thiamin in Lebensmittel mit Hilfe Hochdruch Flussigkeits - Chromatografie (HPLC).//Detsch. Lebensmittel Rasch. - 1981. -V. 77, №12. - P. 431-436.

71. Bognar A. Bestimmung von Riboflavin und Thiamin in Lebensmittel mit Hilfe Hochdruch Flussigkeits - Chromatografie (HPLC).//Lebensmittechen und gerichte Chem. - 1982. - V. 36, №2. - P. 33-34.

72. Fellman J.K., Artz W,E. Simultaneous determination of thiamin and riboflavin in selected foods by high-performance liquid chromatography.//J. Food Sci. — 1982. V.47, №6. - P. 2048-2050.

73. Augustin Y. Simultaneous determination of thiamin and riboflavin in foods by liquid chromatography .//J. Assoc. Offic. Anal.Chem. 1984. - V.67, №5. -P. 1012-1015.

74. Wimmalasiri P., Wills R. Simultaneous analysis of thiamin and riboflavin in foods by high-performance liquid chromatography .//J. Chromatogr. 1985. -V.32, №18. P. 412-416.

75. Vidal-Valverde C., Reche A. Reliable system for the analysis of thiamin and riboflavin in foods by high-performance liquid chromatography and UV-detection.//J.Liquid Chromatogr. 1990. - V.13, №10. - P. 2089-2101.

76. Vandenberg H., Vanschaik F., Finglas P. 3rd EuMat intercomparison on methods for the determination of vitamins Bj, B2 and B6 in food. //Food Chem. 1996. V.57, №1. - P. 101-108.

77. Arella F., Lahely S. Liquid chromatography determination of vitamins Bi and B2 in foods. //Food Chem. 1996. - V.56, №1. - P. 81-86.

78. Ang Catharina Y.W., Moseley Frederick A. Determination of thiamin and riboflavin in meat products by high-pressure liquid chromatography. //J.Agr. and Food Chem. 1980. - V.26, №3. - P. 483-486.

79. Valls Falicidad, Sancho M. Teresa, Fernandez-Muino Migel. Determination of thiamin and riboflavin in cooked sausages. //J. Agr. and Food Chem. 1999. -V.47, №3.-P. 1067-1070.

80. Walkers M.C., Carpenter B.E., Cooper E.L. Simultaneous determination of thiamin and riboflavin in multivitamin product by high-performance liquid chromatography. //J. Pharm Sci. 1981. - V.70, №1. - P. 99-101.

81. Maeero D.Y., Wetzel D.L. Simultaneous determination of thiamin and riboflavin in enriched cereal based products by high-performance liquid chromatography using selective detection. //J. Chromatogr. 1984. - V.29, №1. - P. 281-287.

82. Amin M., Reusch J. High-performance liquid chromatography of water-soluble vitamins. Simultaneous determination of vitamins Bi, B2, Вб and B|2 in pharmaceutical preparations. //J. Chromatogr. 1987. - V.390, №2. - P. 448453.

83. Chase G. William, Soliman A. M. Analysis of thiamin and riboflavin, pyridoxine and niacine in multivitamin premixes and supplemens by high-performance liquid chromatography. //J. Microniet. Anal. 1990. - V.7, №1. -P. 15-25.

84. Тенчева Ж. и др. Способы количественного определения витаминов Вь В2, В6, РР в препаратах В-комплекса методом жидкостной хроматографии. //Фармация. 1990. - Т.40, №3. - С. 6-11.

85. Chase G.W., Landen О., Errenmitter R.R., Soliman A.G. Liquid chromatographic determination of thiamine, riboflavin and pyridoxine in infant formula. //J. AO AS. Int. 1992. - V.75, №3. - P. 561-565.

86. Ульянова C.B. и др. Анализ водорастворимых витаминов Вь В2, В6 и никотинамида в драже «Гексавит» методом ВЭЖХ. //Фармация». 1993. -Т.42, №3.-С. 50-51.

87. Лутцева А.И. и др. Анализ и стандартизация водорастворимых витаминов. //Фармация. 1998. - Т.47, №5. - С. 22-29.

88. Lopez-Anaya A., Mayersohn M. Qyalintification of thiamin and riboflavin in plasma and urine by high-performance liquid chromatography.//J. Chromatogr. Biomed. Appl. 1987. - V.423. - P. 105-113.

89. Kocs E., Fekete J. Bj-es, B2- vitamin meghatarozasa premixben hagyhatekonysaqy folyadekkromatografiaval. //Magy kem folyorirat. 1988. -V.94,№ 311. -P. 505-510.

90. Finglas P.M., Faulks R.M. The HPLC analysis of thiamin and riboflavin in potatoos. //Food.Chem. 1984. - V.15, №1. - P. 37-44.

91. Fernando Sharma M., Murphy Patricia A. HPLC determination of thiamin and riboflavin in soyeans and tofu. //J.Agr. and Food Chem. 1990. - V.38, №1. - P. 163-167.

92. Bianco-Gomes D., Fernandez-Rubio P. Use of high-performance liquid chromatographic-chemometric techniques to differentiate apples juices clarified by microfiltration and ultrafiltration. //Analyst. 1998. - V.123, №1. -P. 125-129.

93. Щукина О.Г., Моргун В.А., Левицкий Ю.А. Применение хроматографии в пищевой, микробиологической и медицинской промышленности. //Материалы Всес. конф. Геленжик. — 1990.

94. Tabekha М.М., El-Bastawesy М.А. A modified method for analysis thiamine, riboflavin and niacin content in rise and product by HPLC. //Food.Chem. 1995. - V.12, №5. - P. 34-37.

95. Barary Magda, Abdel-Hamid Mohamed, Hassan Ekram. Simultaneous determination of thiamin, pyridoxine and riboflavin in pharmaceutical multivitamin preparations. //Pharmazie. 1986. - V.41, №7. - P. 483-485.

96. Xu Yuechu, Wu Wenying, Zin Yuzhaam, Yan Hongming. //Acta. Nutr. Sir. -1992.-№3.-P. 301-306.

97. Ahmad Jgbal, Rapson David H. Multicomponent spectrophotometric assay of riboflavine and photoproducts. //J. Pharm. And Biomed. Anal. 1990. - V.8, №3.-P. 217-223.

98. Nevado J.J.B., Flores J.R., Lierena M.J.V. Simultaneous determination of• tatrazine, riboflavine, curcumin and erytrosine by derivative. //Fresenius'J. Anal. Chem. 1994.-V.350, №10-11.-P. 610-613.

99. Vedrina-Dragojevic Irena, Sebecic Blazenka. Modifid lumiflavin procedure for determination of riboflavin in soyabeat. //Z. Lebensm.-Untersuch. und Forsch. 1986. - V.182, №2. - P. 127-130.

100. Бекжанова E.E., Тахиров M.T. Определение рибофлавина в воде водоемов флуоресцентным методом. //Гигиена и санитария. 1993. - №6,• -С. 72-73.

101. Utecht Ronald Е. Identification and quatitation of riboflavin in vitamin tablets by total luminescence spectroscopy. //J. Chem. Educ. 1993. - V.70, №8. - P. 673.

102. Gong Zhikong, Zhang Zhenjun. An optosensor for riboflavin with С)8 silicagel a substrates/Anal. Chem. acta. 1997. - V.339, №1-2. - P. 161-165.

103. Hehderleiter Julie A., Hyslop Richard M. The analysis of riboflavin in urine• using fluorescence. //J. Chem. Educ. 1996. - V.73, №6. - P. 563-564.

104. Лоскутова И.М. Способ определения витамина В2 в молочных продуктах детского питания. Патент 2109279 Россия G 01 N 33/04.

105. Abd El-Gawad I.A., El-Abd М.М., Kagab F.H. Study on vitamin B2 in milk and some milk products .//Egypt. J. Food. Sci. 1998. - V.16, №1-2. - P. 175192.

106. Lumley J.D., Wiggins R.A. Determination of riboflavin and flavin• mononucleotide in foodstuffs using high-performance liquid chromatographyand a column-enrichment technique. //Fresenius Z. Anal. Chem. 1982. -V.312, №2. - P. 165-166.

107. Ashoor Samy H., Knox Michael J. Improved liquid chromatographic determination of riboflavin in milk and dairy products.//.!. Assoc. Offic. Anal. Chem. 1985. - V.68, №4. - P. 693-696.

108. Stancher В., Zonta F.J. High performance liquid chromatographic analysis of riboflavin with visible absorbance detection in Italian cheeses.//Food Sci. -1986. — V.51, №3. — P. 857-858.

109. Seki Т., Noguchi K., Yanagihara Y. Determination of riboflavine in human urine by the use of a hydrophilic gel column.//J. Chromatogr. 1987. - V.385. -P. 283-285.

110. Moll N. Reversed phase high-performance liquid chromatography determination of riboflavin in alcoholic beverages. //J. Assoc. Offic. Anal. Chem. 1988. - V.66, №3. - P. 753-769.

111. Hurst W. Jeffrey, Mekim J.M. The HPLS analysis of thiamin in milk chocolate. //Int. J. Vitam. and Nutr Res. 1983. - V.53, №3. - P. 239-242.

112. Whitworth Vivienne A., Metcalfe Lorraine. A rapid method for the determination of thiamine in various foods using high-pressure liquid chromatography. //Can. Inst. Food. Sci. and Technol. J. 1985. - V.18, №3.

113. Ujile Takashi, Tsutake Yukiko, Morita Kohei. //Vitamins. 1990. - V.64, №7.-P. 379-385.

114. Motoe K. //Vitamins. 1994. - V.68, №7. - P. 379-384.

115. Ofles Semik. Analysis of thiamin in foods by high-pressure liquid chromatography. //35th IUPAC Congr. Istambul. - 1995 - P. 15.

116. Blanco D., Laneza M.B., Gutternez M.D. A paired ion liquid chromatographic method for thiamine determination in selected foods. //J. Lig. Chromatogr. and Relat. Technol. 1996. - V.19, №13. - P. 2155-2164.

117. Vails Felicidad, Checa Martin A. //J. Agr. and Food Chem. 1999. - V.47, №1. - P. 170-173.

118. Bontemps Jose, Bettendorff Lucien, Lombet Jacques. //J. Chromatogr. -1984. V.295, №2. - P. 486-491.

119. Panijapan Bhinyo, Kimura Mieko, Itokawa Yoshihori. Separation and determination of thiamine by reversed-phase high performance liquid chromatography. //J. Chromatogr. 1983. - V.258, №2. - P. 307-309.

120. Bomtemps J., Bettendorff L., Dandrifosse G. Sensitization of thiamine analysis by the peak compression technique. //J. High Resolut. Chromatogr. And Chromatogr. Commun. 1984. - V.7, №8. - P. 490-491.

121. Katayama Y., Uemura Y., Ikegami Y. //Иякухин кэнкю. 1987. - №5. - P. 731-739.

122. Nicolas Edgar C., Peender Kathleen A. Fast and simple liquid chromatographic determination of thiamine in infant formula, milk and other foods. //J. Assoc. Offic. Anal. Chem. 1990. - V.73, №5. - P. 792-798.

123. Brunnekreft J.W.I., Eidhof H., Gerrits J. Optimized determination of thiochrome derivatives of thiamine in whole blood by reversed-phase liquid chromatography with precolumn derivatization. //J. Chromatogr. Biomed. Appl. 1989. - V.491, №1. - P. 89-96.

124. Srividya Kailasam, Balasubramanian Natesan. Indirect spectrophotometricdetermination of thiamine. //Chem. and Pharm. Bull. 1997. - V.45, №12. -P. 2100-2103.

125. Violet В., Reddy M., Sastry S. Spectrophotometric determination of thiamine hydrochloride using alizarin violet. //Indian J. Pharm. Sci. 1983. - V.45, №2. -P. 81-82.

126. Артемченко C.C., Петренко B.B. Способ количественного определения тиамина бромида. А.С. 1163225. СССР. - 1985. - МКИ G 01 N 21/78.

127. Fujita Y., Mori I., Fujita К., Nakahachi Y. Determination of chlorpromazinethiamine lincomycin, by ternary complex formation with eosin and palladium (II). //Chem. and Pharm. Bull. 1987. - V.35, №12. - P. 5004-5009.

128. Abdel-Hamid M., Barary M., Hassan E. Spectrophotometric determination of ascorbic acid and thiamine hydrochloride in pharmaceutical products using derivative spectrophotometry. //Analyst. 1985. - V.l 10, №7. - P. 831-835.

129. Sethi P.D., Chatterjee P.K. Simultaneous spectrophotometric determination « of vitamin Bi and B6 in presence B12. //Indian J. Pharm. Sci. 1985. - V.47,3. P. 118-119.

130. Sane Ramesh Т., Doshi Vipul J., Satish V. Simple colorimetric method for determination of thiamine hydrochloride in pharmaceuticals. //J. Assoc. Offic. Anal. Chem. 1985. - V.68, №1. - P. 83-85.

131. Viswanan M.V. A colorimetric method for the estimation of vitamin Bi in some pharmaceutical dosage forms. //Indian J. Pharm. Sci. 1986. - V.48,3.-P. 80-82.

132. Mohamed Abdel-Maboud I., Hussein Samiha A. Spectrophotometric assay of thiamine hydrochloride in injection and multivitamin preparations. //J. Assoc. Offic. Anal. Chem. 1988. - V.71, №6. - P. 1131-1133.

133. Nirmalchandar V., Balasubramatian N. Spectrophotometric determination of thiamine. //Indian Drugs. 1989. - V.26, №5. - P. 233-237.

134. Sane R.T., Ghorpade U.A. Colorimetric estimation of vitamin Bi pharmaceutical preparations. //Acta vitaminol et enzymol. 1983. - V.5, №1. -P. 29-34.

135. Racegly A. S., Eryilmaz H. Determination of vitamin Bi by the thiochrome reaction using copper (II). //Fen bilimler derg. Marmara Univ. 1987. - №4. -125-129.

136. Gonsales V., Rubio S., Gomes-Hens A. Fluorimetric determination of thiamine and cocarboxylase by a differential rate method. //Anal. Lett. 1988. - V.21,№6.-P. 993-1008.

137. Aydin A., Goksel F. Thiamine determination with hypobromide by the thiochrome reaction. //Chim. acta turc. 1988. - V.16, №3. - P. 313-325.

138. Saracogly A.S., Kunduz N. A new reagent for the conventional thiochrome reaction. //Fen bilimler derg. Marmara Univ. 1988. - №5. - P. 159-167.

139. Marquez M., Silva M., Perez-Bendito D. Performance of the continuous addition of reagent technique in fluorimetric reaction-rate methods. Determination of thiamine at the nanamolar level. //Anal. Lett. 1989. - V.22, №11-12.-P. 2485-2500.

140. Takasuka S., Kawahara A., Wakida S. //Бунсэки катаку. 1991. - V.40, №3. - P. 115-118.

141. Jie N., Yang J., Zhang Z. Fluorimetric determination of thiamine with cobalt (II). //Anal. Lett. 1993. - V.26, №10. - P. 2283-2289.

142. Goksin A., Goksel F., Ibis C. Thiamine determination. //35th IUPAC Congr. -Istambul. 1995. - P. 686.

143. Schulte E., Kauschees U. Bestimmung von thiamin in lebensmitteln als thiochrom unter verwendung eines organischen kationenaustauschers. //Lebensmittelchem. und gerichtl. Chem. 1983. - V.37, №6. - P. 148-150.

144. Sebecic В., Vedrina-Dragojevic I. Simple procedure for the determination of thiamine in food. //Nahrung. 1986. - V.30, №5. - P. 527-532.

145. Barary M., Abdel-Hamid M., Hassan E. Simultaneous spectrofluorimetric determination of thiamine in pharmaceuticals multivitamin preparations. //Pharmazie. 1986. - V.41, №7. - P. 483-485.

146. Lopez Gimenez J. M., Bosch Serrat Y.F. Nuevo metodo colorimetrico de determinacion de vitamina Bi en medicamentos. //An. Real. Acad. Farm. -1987. V.53, №2. - P. 261-268.

147. Будников Г.К., Улахович H.A., Медянцева Н.П. Основы электроаналитической химии. Изд-во Казанского ун-та. - 1986. - 288с.

148. Smith I., Kolhoff. //J. Amer. Chem. Soc. 1942. - V.64, №447. - P. 646.

149. Karrer P., Keller H. //Helv. chim. Acta. 1938. - V.21. - P. 1161.

150. Мискиджьян С.П., Кравченюк JI.П. Полярография лекарственных соединений. Киев: Вища школа. - 1976. - 232с.

151. Uchyama S., Kurokawa Y., Hasebe Y., Suzuki S. Rapid coulonometry of tocopherols in enhanol and chloroform using ferricyanide ion mediator. //Elektroanalysis. 1994. - V.6, № 2. - P.63-66.

152. Zvonimir J.Suturovic, Nikola J. Marjanovic //Elektroanalysis. 1999. -V.l 1, № 3. - P. 207-209.

153. Девятнин B.A. Методы химического анализа в производстве витаминов. М.: Медицина. 1964. - 360 с.

154. Выдра Ф., Штулик К., Юлакова Э. Инверсионная вольтамперометрия. М.: Мир.-1980.-290 с.

155. Надиров К.С. и др. Электрохимическое исследование а-токоферола. //Каз.хим.-технол.ин-т. Чимкент. - 1986. - 9 с.

156. Zhang Tian-Yi, Zhu Shi-Min. On-line electrochemistry liquid chromatography with UV absorbance detection for elucidating the electrochemical oxidation mechanism of a-tocopherol in methanol. //Anal, chim. acta.- 1995.-V.309,№ 1-3.-P. 111-115.

157. Берберова H.T., Назарова Т. А., Охлобыстин О.Ю. Способ количественного определения альфа-токоферола в тканях гидробионтов. Пат. 2102747, Россия, МКИ6 G 01N 33/12. Опубл. 20.01.98.

158. Michalkiewicz Slawomir, Titaj Monika, Kaczor Maria, Malyszko Jan. Electrochemical behavior of tocopherols on microelectrodes in acetic medium. //Electroanalysis. 2002. - 14, №4. - P. 297-302.

159. Sasaki K., Kitani A., Kunai A., Miyake H. Electrochemical aspect of a NADH/FAD model system. //Dull. Chem. Soc. Jap. 1980. - V.53, №12. -P. 3424-3429.

160. Успенская M.H. Полярография в анализе водорасворимых витаминов и их смесей. //Актуал. вопр. поиска и технол. лекарств. Укр.респ.науч.конф. -Харьков.-1981.-С. 161-162.

161. Pergola f., Foresti M.L., The riboflavin dehydroriboflavin system in aside medium on mercury. Part II. A polarographic investigation. //J. Electroanal. Chem. - 1982. - V.137, №2. - P. 355-366.

162. Milyaev Yu. F., Grigoriew V.I., Balyatinskaya L.N. High sensitive polarographical determination of riboflavin with adsorption and preconcentration on the electrode. //EURO-ANALYSIS. 5 th Eur. Cjnf. Anal. Chem. Crakow. - 1984. - P. 37.

163. Colugnati Luigi. Deternatione quantitative della vitamina B2 nei prodotti alimentary in polvere. //Boll. Chim. Ig. Parte sci. 1985. - V.36, №2. - P. 6571.

164. Wang Joseph, Luo Den-Bai, Farias Persio A.M. Adsorptive stripping voltammetry of riboflavin and other flavin analogues at the static mercury drop electrode.//Anal. Chem. 1985.-V.57,№1.-P. 158-162.

165. Sawamoto H. Vanodic and catodic adsorption stripping analysis of riboflavin. //J. Electroanal. Chem. 1985. - V.186, №1-2. - P. 257-265.

166. Григорьев В.И., Миляев Ю.Ф., Балятинская JI.H. Адсорбционное концентрирование и определение следовых количеств рибофлавина методом переменно-токовой вольтамперометрии. //Журн. аналит. химии. 1985. - Т.40, №4. - С. 736-739.

167. Sawamoto Н., Katsuragi Н. //Hunnoh kagaky kaucu. 1989. - №2. - P. 299301.

168. Yu Yijun. //Фэньси хуасюэ. 1989. - V. 17, №4. - P. 321-323.

169. Mastowska J., Malicka M. Woltmetryczna metoda oznakzania ryboflawiny w zastzyhach z uzyciem elektrody grafitowej. //Chem.anal. 1988. - V.33, №6. -P. 903-909.

170. Uehara Miyoshi, Ohta Hideo, Nakamoto Yasushi. Electrochemical behavior of riboflavin on the electrodes modified with tetranuclear iron-sulfur clusters. //J. heyrovsky Centennial Cong. Polarogr. Organ. 1990. - P. 108.

171. Ahmed Z.A. Adsorption stripping square-ware voltammetry of riboflavin at the static mercury electrode surface. //Bull. Electrochem. 1994. - V.10, №8. -P. 322-325.

172. Белый O.B., Бойко В.И. Импеданс процесса на поверхности стеклоуглеродного электрода в водных растворах рибофлавина. //Черкассы: Изд-во Черкас, гос. ун-та. 1996. - 10 с.

173. Бойко В.И. Исследование качества растворов витамина В2 вольтамперометрическим методом на стеклоуглеродном электроде. //Фармац.ж. 1997. - №3. - Р. 40-44.

174. Wang Y., Xu В., Zhu G., Wang E. Electrochemical quartz crystal microbalance study of the electrochemical behavior of riboflavin at the gold electrodes. //Electroanalysis. 1997. -V.9, №18. - P. 1422-1425.

175. Cakir S., Ertark E., Cakir O. Simultaneous square -wave voltammetric determination of thiamine hydrochloride, riboflavin, Folic acid and nicotinamide in multivitamin preparation. //Port. Electrochim. Acta. — 1997. -V.15.-P. 139-149.

176. Анисимова Jl.C., Слипченко В.Ф. Инверсионно-вольтамперометрический способ определения витамина В2. Патент 2090877 Россия МКИ G 01 N 27/26.

177. Agra-Gutierrez Cezar, Compton Richard G. Sonoadsorptive stripping voltammetry; Its application to the analysis of metals and organic compounds in aqueous media. //Electroanalysis. 1998. - V.l0, №9. - P. 603-612.

178. Рыжков Ю.Д., Вызова Р.Г., Дионисьев В.Д. Аналитический контроль витамина Bj в лекарственных формах. // Ростов-на-Дону: Изд-во Ростовс. мед. ин-та. 1983. - 5с.

179. Halvatzis S.A., Timotheou-Potamia М. Kinetic-potentiometric determination of ascorbic acid, biotin, pyridoxine hydrochloride, thiamine hydrochloride with N-bromosuccinimide. //Anal. chim. acta. 1989. - V.227, №2. - P. 405-419.

180. Hassan S.S.M., Elnemma E. Selective determination of thiamine in pharmaceutical preparations by direct potentiometric argentometric titration with use of the silber-silber sulphide ion-selective electrode. //Talanta. 1989. - V.36, №10. - P. 1011-1015.

181. Campiglio A. Potentiometric microtitration of vitamin Bj with phosphotungstic acid by using a phosphotungstate-sensitive electrode and itsapplication to the analysis in pharmaceutical preparations. //Analyst. 1994. -V.l 19, №10. - P. 2209-2212.

182. Петухова Ю.И., Зарегенский M.A. Потенциометрическое определение тиамина бромида в фармацевтических препаратах с использованием ионселективного электрода. //Журн. аналит. химии. — 1996. Т.51, №9. -С. 1018-1020.

183. Calu Cleopatra, Doniga Eugenta. Amperometric determination of thiamine. //Rev. roum. chim. 1982. - V.27, №5. - P. 667-671.

184. Zhang Xue-Ji, Zhang Wu-Ming, Zhou Xing-You. //Ниахие хиеваою. -1994. V.52, №4. - P. 362-366.

185. Sharma A., Chandel C., Guata C. polarographic studies of vitamin Bj and B6. //Trans. SAEST. 1990. - V.25, №4. - P. 136-140.

186. Ясников А.А., Сосонкин И.М., Вовк А.И. Взаимодействие анион-радикала кислорода с тиамином на вращающемся дисковом золотом амальгамированном электроде. //Докл. АН УССР. 1987. - №5 - С. 50-52.

187. Carabias M.R., Becerro D.F., Surra G.I., Herhandes M.J. Electrochemical respore of a polypyrrode-dodecylsulphate electrode with multicharged cations and vitamins B, and B6. //Anal. chim. acta. 1996. - V.336, №1-3. - P. 47-56.

188. Анисимова Jl.С., Филичкина О.Г. Инверсионно-вольтамперометрический способ определения концентрации витамина Bj. Патент 2091782 Россия, МКИ G 01 N27/26.

189. Cakir S., Erturk Е., Cakir О. Simultaneous square-ware voltammetric determination of thiamine hydrochloride, riboflavin, folic acid andnicotinamide in multivitamin preparation. //Port, electrochim.acta. 1997. -V.15.-P. 139-149.

190. Крюкова T.A., Синякова С.И., Арефьева T.B. Полярографический анализ. М.: Изд-во химической литературы, 1959. - 772 с.

191. Воскресенский П.И. Техника лабораторных работ. М.: Химия, 1964. -652 с.

192. Брайнина Х.З., Нейман Е.Я. Твердофазные реакции в электроаналитической химии. М.: Химия, 1982. - 264 с.

193. Фиалков Ю.Я., Житомирский А.Н., Тарасенко Ю.А. Физическая химия неводных растворов. JL: Химия, 1973. - 362 с.

194. Манн Ч., Барнес К. Электрохимические реакции в неводных средах. -М.: Химия, 1974.-479 с.222.0дрит JL, Клейнберг Я. Неводные растворители. М.: Изд-во иностранной лит-ры, 1955. - 320 с.

195. Мискиджьян С.П. Электрохимия неводных ионогенных систем, образованных из неэлектролитов. Киев: «Наукова думка», 1970. - 280 с.

196. Крешков А.П. Аналитическая химия неводных растворов. М.:Химия, 1982.-256 с.

197. Жданов С.И. Полярография в органических средах. //Успехи химии. -1973. -Т.42, вып.9.-С. 1698-1707.

198. Хейфец Л.Я., Безуглый В.Д. К вопросу о влиянии некоторых фонов на разницу потенциалов полуволн при восстановлении производных антрахинона. //Электрохимия. 1966. - Т.2, вып.7. - С. 800-804.

199. Каррер П. Курс органической химии. М. .Тосхимиздат, 1960. - 1218 с.

200. Органическая электрохимия: В двух книгах: Кн. 1. /под ред. Бейзера М. и Лунда X. Пер. с англ. М.: Химия, 1988. - 469 с.

201. Тарасевич М.Р., Радюшкина К.А., Богдановская В.А. Электрохимия порфиринов. М.: Наука, 1991. - 312 с.

202. Майрановский С.Г., Страдынь Я.П., Безуглый В.Д. Полярография в органической химии. Л.: Химия, 1975. — 592 с.

203. Водзинский Ю.В. Анодная вольтамперометрия органических соединений на графитовых электродах. Автореф. дисс. на соискание уч. степени докт. хим. наук. Казань, 1975. — 46 с.

204. Корытцева В.Ф. Определение лигнинов вольтамперометрическим методом на графитовом электроде. Автореф. дисс.на соискание уч.степени канд.хим.наук. Москва, 1982. — 24 с.

205. Kenji Капо, Kazuya Bunji Uno, Tanekazu Kubota. Voltammetric determination of acid dissociation constans of pyrroloquinoline quinine and reduced form under acidic conditios. //Bioelectrochemistry and bioenergetics. 1990.-V.24.-P. 193-201.

206. Брайнина Х.З. Инверсионная вольтамперометрия твердых фаз. — М.:Химия, 1972.- 192 с.

207. Брайнина Х.З., Белявская В.Б. Электрорастворение металлов с поверхности индифферентного электрода. IV. Экспериментальные критерии обратимости процесса растворения серебра. //Электрохимия. -1966.-Т.2, вып. 10. С. 1158-1164.

208. Брайнина Х.З., Белявская В.Б. Электрорастворение металлов с поверхности индифферентного электрода. V. Никель. //Электрохимия. -1968.-Т.2, вып.8.-С. 1283-1287.

209. Томилов А.П., Майрановский С.Г., Фиошин М.Я., Смирнов В.А. Электрохимия органических соединений. Л.: Химия, 1968. - 592 с.

210. Левич В.Г. //Ж. аналит.химии. 1944. - Т. 18. - С. 335-340.

211. Дамаскин Б.Б., Петрий О.А. Введение в электрохимическую кинетику. -М.: Высш.школа, 1983. 400 с.

212. Хмельницкая Е.Ю., Теадорадзе Г.А.,.Золотовицкий Я.М. К вопросу о механизме образования предволны в системе рибофлавин-дигидрорибофлавин. //Электрохимия. 1968, Т.4, вып.7. — С. 886-887.

213. Григорьев В.И., Миляев Ю.Ф., Балятинская J1.H. Адсорбционное концентрирование и определение следовых количеств рибофлавина методом переменно-токовой вольтамперометрии. //Ж.аналит.химии. -1985. -Т.15, вып.4. С. 736-739.

214. Карбаинов Ю.А., Карбаинова С.Н., Мамаева В.А., Бирюков М.С.,

215. Ивановская Е.И., Боблева Ю.В. //Электрохимия. 2002. - Т 38, № 12. -С. 1494- 1497.

216. Дамаскин Б.Б., Петрий О.А, Батраков В.В. Адсорбция органических соединений на электродах. М.: Наука, 1968.-334с.

217. Бланк А.Б. О нижней границе определяемых содержаний и пределе обнаружения. //Ж.аналит.химии. 1979. - Т.34, № 1. - С. 5-9.

218. Гринзайд E.JL, Зильберштейн Х.И., Надежина JI.C., Юфа Б.Я. О термине и способах оценки предела обнаружения в различных методах анализа. // Ж.аналит.химии. 1977. - Т.32, № 11. - С. 2106-2112.

219. Нейман Е.Я., Каплан Б.Я. Рекомендации по метрологической оценке результатов определений. //Ж.аналит.химии. 1978. - Т.ЗЗ, № 3. - С. 607609.

220. Каплин А.А., Кубрак В.А., Рубан А.И. Непараметрическая оценка предела обнаружения в методе инверсионной вольтамперометрии. //Ж.аналит.химии. 1978. - Т.ЗЗ, № 12. - С. 2298-2303.

221. Адлер Ю.П. Введение в планирование экспреримента. М.: Металлургия, 1968. - 155 с.

222. Красовский Г.И., Филаретов Г.Ф. Планирование эксперимента. -Минск: Изд-во БГУ, 1982. 302 с.

223. Адлер Ю.П., Маркова Е.В., Грановский Ю.В. Планирование эксперимента при поиске оптимальных условий. М.: Наука, 1976. -280 с.

224. Румшинский JI.3. Математическая обработка результатов эксперимента. -М.: Наука, 1971.-192 с.

225. Выражаю огромную признательность коллективу проблемной лаборатории микропримесей ТПУ, а также коллективу ООО «ИТМ» и его ведущему специалисту Десятову В.А. за помощь в проведении эксперимента.

226. ТОМСКИЙ ПОЛИТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ВНЕДРЕНЧЕСКАЯ НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННАЯ ФИРМА "ЮМХ" АККРЕДИТОВАННАЯ МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ СЛУЖБА ТПУаттестат об аккредитации № РОСС RU 01.00143-03 от 24.12.01)

227. СВИДЕТЕЛЬСТВО ОБ АТТЕСТАЦИИ МВИ №08-47/141взамен №08-47/115)

228. БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ДОБАВКИ. ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ ВИТАМИНОВ С, В1г В2, Е U КВЕРЦЕТИНАаттестована в соответствии с ГОСТ Р 8.563 (ГОСТ 8.010).

229. Аттестация осуществлена по результатам теоретического и экспериментального исследования МВИ.

230. В результате аттестации МВИ установлено, что данная МВИ соответствует предъявляемым к ней метрологическим требованиям и обладает следующими основными метрологическими характеристиками:

231. Диапазоны измерений, относительные значения показателей точности, повторяемости и воспроизводимости методики при доверительной вероятности Р=0,95

232. Продолжение Свидетельства № 08-47/141

233. Диапазон измерений, значения пределов повторяемости и воспроизводимости при доверительной вероятности Р=0,95

234. X среднее арифметическое значение результатов параллельных определений массовой концентрации компонента Х- среднеарифметическое значение результатов анализа, полученных в двух лабораториях

235. Дата выдачи свидетельства 15 января 2004 г

236. Метролог метрологической службы ТПУу

237. Э • 3 Н.П.Пикула "15" января 2004 г.1. СОГЛАСОВАНО»1. Главный метролог ТПУ1. Е.Н.Рузаев 2004 г.1. УТВЕРЖДАЮ»

238. Проректор по HP ТПУ V " ~ ~ *» ▼ "W7»»»""" • Jb1. СОГЛАСОВАНО»

239. Руководитель органаТМС," ( Главный метролог" *''*■■■ ' ч.; ФГУ «Томский ЦСМ»' • ; >Жi > М.М.Чухланцёва " < ^ \ 2004 г. /ч1. УТВЕРЖДАЮ»1. Директор ООО «ВНПФ «ЮМХ»

240. ТОМСКИЙ ПОЛИТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

241. ВНЕДРЕНЧЕСКАЯ НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННАЯ ФИРМА "ЮМХ" АККРЕДИТОВАННАЯ МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ СЛУЖБА ТПУаттестат об аккредитации № РОСС RU 01.00143-03 от 24.12.01)

242. СВИДЕТЕЛЬСТВО ОБ АТТЕСТАЦИИ МВИ08.47/088Авзамен 08-47/088)

243. ВИТАМИНИЗИРОВАННЫЕ КОРМА И ПОДКОРМКИ.

244. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ ВИТАМИНА В2 МЕТОДОМ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИИаттестована в соответствии с ГОСТ Р 8.563 (ГОСТ 8.010).

245. Аттестация осуществлена по результатам теоретического и экспериментального исследования МВИ.

246. В результате аттестации МВИ установлено, что данная МВИ соответствует предъявляемым к ней метрологическим требованиям и обладает следующими основными метрологическими характеристиками:

247. Диапазоны измерений, относительные значения показателей точности, повторяемости и воспроизводимости методики при доверительной вероятности Р=0,95

248. Витамин Вг От 10 до 3500 включ. 13 17 34

249. Диапазон измерений, значения пределов повторяемости и воспроизводимости при доверительной вероятности Р=0,95

250. Наименование определяемого компонента Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Предел^повторяемо-сти (для двух результатов параллельных определений), г Предел воспроизводимости (для двух результатов измерений), R

251. Витамин Вг От 10 до 3500 включ. 0,36- X 0,48• X

252. X среднее арифметическое значение результатов параллельных определений массовой концентрации элемента X - среднее арифметическое значение результатов анализа, полученных в двух лабораториях

253. Дата выдачи свидетельства 26 июля 2004 г

254. Метролог метрологической службы ТПУ1. ЬН.П.Пикула26 "июля 2004г.1. СОГЛАСОВАНО»1. Главный метролог ТПУ1. Е.Н.Рузаев 2004 г.

255. УТВЕРЖДАЮ» Проректор по HP ТПУ1. В.А.1. СОГЛАСОВАНО»

256. Зам.директора по метрологии ФГУ «Томский Руководитель

257. УТВЕРЖДАЮ» Директор ООО «ВНПФ «ЮМХ»

258. ТОМСКИЙ ПОЛИТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

259. ВНЕДРЕНЧЕСКАЯ НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННАЯ ФИРМА "ЮМХ"АККРЕДИТОВАННАЯ

260. МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ СЛУЖБА ТПУаттестат об аккредитации № РОСС RU 01.00143-03 от 24.12.01)

261. СВИДЕТЕЛЬСТВО ОБ АТТЕСТАЦИИ МВИ №08-47/089 Авзамен 0847/089)

262. ВИТАМИНИЗИРОВАННЫЕ КОРМА И ПОДКОРМКИ.

263. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ ВИТАМИНА В1 МЕТОДОМ ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИИаттестована в соответствии с ГОСТ Р 8.563 (ГОСТ 8.010).

264. Аттестация осуществлена по результатам теоретического и экспериментального исследования МВИ.

265. В результате аттестации МВИ установлено, что данная МВИ соответствует предъявляемым к ней метрологическим требованиям и обладает следующими основными метрологическими характеристиками:

266. Диапазоны измерений, относительные значения показателей точности, повторяемости и воспроизводимости методики при доверительной вероятности Р=0,95

267. Витамин В, От 50 до 3000, включ. 8 15 33

268. Диапазон измерений, значения пределов повторяемости и воспроизводимости при доверительной вероятности Р=0,95

269. Наименование определяемого компонента Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Предел повторяемости (для двух результатов параллельных определений), г Предел воспроизводимости (для двух результатов измерений), R

270. Витамин В1 От 50 до 3000, включ. 0,22• X 0,42• X

271. X • среднее арифметическое значение результатов параллельных определений массовой концентрации компонента X среднее арифметическое значение результатов анализа, полученных в двух лабораториях

272. Дата выдачи свидетельства 30 июля 2004 г

273. Метролог метрологическо службы ТП

274. Н.П.Пикул « 30 » июля 20041. СОГЛАСОВАНО»1. Главный метролог ТПУ1. Е.Н.Рузаев 2004 г.1. УТВЕРЖДАЮ»1. Проректор по HP Т!1 • Tvv"*1. СОГЛАСОВАНО^Г^да^Ч

275. Руководитель орга^рма' V" щ Зам.директора поd>rv «Тпмг.кмй IIHR/B^ г 'х/Щ !* 3'с05!1. УТВЕРЖДАЮ»1. Директор ООО «ВНПФ «ЮМХ»1. ООО «АРТЛАЙФ»1. АКТ

276. О внедрении методики «Биологически активные добавки. Вольтамперометрический метод определение массовых концентраций витаминов С, Bi, В2, Е и кверцетина», разработанной в Томском политехническом университете и ООО «ВНПФ «ЮМХ».

277. Методика обладает высокой чувствительностью, экспрессностью и соответствует приведенным метрологическим характеристикам. Подготовка пробы к анализу отличается простотой, малым количеством реактивов, что определяет невысокую стоимость анализа.

278. Заведующая лабораторией контроля//' качества и безопасности ООО «Арт|аи<|>>Р1. V ' . V N1. Шелеметьева О.В.ф

279. УПРАВЛЕНИЕ ГАСТЕ1ШЕВОДСТВА ХИМИЗАЦИИ И ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ РОССЕЛЬХОЗЛГЕНСТВА

280. ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ СТАНЦИЯ АГРОХИМИЧЕСКОЙ СЛУЖБЫ «ТОМСКАЯ» (Ф1УСАС «ТОМСКАЯ»)634063 г. Томск, ул. Беринга, 12а, тел. (факс) 66-49-45от2004г.1. ИНН 702200127121. АКТ1. О внедрении методик ЮСА

281. В результате проведенных испытаний кормов и витаминизированных подкормок на витамины В1 и В2 по вышеперечисленным методикам было отмечено:

282. Сокращение затрат на используемые в анализах реактивы и материалы;

283. Сокращение времени на подготовку проб к анализу и сокращение времени на сам анализ, что способствует быстрой выдачи результатов;

284. Процесс выполнения измерения на анализаторе СТА не вызывает затруднений.

285. Директор ФГУ САС.«Т6мская»ч1. ШйШШт