Выбор условий спектрофотометрического анализа смесей (лекарственных препаратов) с применением математического моделирования тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ

На правах рукописи

00344602 1

ШИЛОВА АННА ВЛАДИМИРОВНА

ВЫБОР УСЛОВИЙ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОГО АНАЛИЗА СМЕСЕЙ (ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ) С ПРИМЕНЕНИЕМ МАТЕМАТИЧЕСКОГО МОДЕЛИРОВАНИЯ

02 00 02 - аналитическая химия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

1 8 СЕЧ 2008

Томск - 2008

003446021

Работа выполнена на кафедре аналитической химии Омского государственного университета им. Ф М Достоевского

Научный руководитель

кандидат химических наук, доцент Власова Ирина Васильевна

Официальные оппоненты

доктор химических наук, Романенко Сергей Владимирович

кандидат химических наук, Гавриленко Наталья Айратовна

Ведущая организация

Пятигорская государственная фармацевтическая академия

Защита состоится 8 октября 2008 г в 14.30 часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 212.269 04 при Томском политехническом университете по адресу. 634050, г Томск, пр Ленина, 30, ТПУ, 2 корпус, химико-технологический факультет

С диссертацией можно ознакомиться в научно-технической библиотеке Томского политехнического университета по адресу: 634050, г Томск, ул. Белинского, 53

Автореферат разослан « { » сентября 2008 г.

Ученый секретарь совета Д 212 26<

кандидат химических наук, доцент

.Т.М Гиндуллина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. Среди различных направлений современной аналитической химии все большее значение приобретает анализ многокомпонентных смесей органических веществ Спектрофотометри-ческое определение компонентов без их предварительного разделения значительно сокращает продолжительность анализа смеси и нередко повышает его точность. Особое значение в последние годы приобрели методы анализа лекарственных препаратов, это связано с появлением большого количества новых лекарств, а также с наплывом на фармацевтический рынок фальсифицированной или некачественной продукции. Требуется всесторонний контроль состава лекарств, а, следовательно, разработка новых точных, высокочувствительных, экспрессных и недорогих методик анализа соответствующих смесей

Для спектрофотометрического анализа смесей при наложении полос поглощения компонентов используют метод Фирордта (МФ) Он применяется и в фармацевтическом анализе, но не получил широкого распространения, так как относительная погрешность результата довольно велика (порядка 10 %) и быстро растет при усложнении состава смеси Традиционным ограничением МФ является требование идеальной аддитивности светопоглощения компонентов, т е оптическая плотность смеси при любой длине волны должна равняться сумме оптических плотностей компонентов, измеренных порознь В реальных условиях могут наблюдаться отклонения от аддитивности (АА), в том числе статистически значимые, вызванные систематически действующими факторами «Факторами неаддитивности» могут быть химическое или сольватационное взаимодействие компонентов, влияние примесей, неверная градуировка измерительной аппаратуры и др В случае анализа многокомпонентных лекарственных препаратов неаддитивность может быть связана с присутствием наполнителей и/или с образованием ионных ассоциатов Каков бы ни был механизм возникновения значимых отклонений от аддитивности, применение МФ к анализу соответствующих смесей должно вести к результатам, отягощенным систематическими погрешностями. Хотя проблеме повышения точности МФ посвящен ряд работ (И Г Перь-ков, А И Гризодуб, М Г. Левин, А В Дрозд и др ), при выборе аналитических длин волн (АДВ) отклонения от аддитивности учитывают редко, детальные исследования в этой области не проводились

Цель работы. Цель данного исследования - изучить применимость метода Фирордта к анализу смесей, спектры которых могут содержать отклонения от аддитивности Результаты такого исследования могли бы привести к расширению границ применимости МФ, повышению его точности (за счет оптимизации условий анализа и др), а также к разработке новых методик анализа реальных объектов (лекарственных препаратов сложного состава)

В рамках данного исследования следовало решить следующие частные задачи.

> проверить, встречаются ли в УФ спектрах поглощения смесей, традиционно анализируемых по МФ, статистически значимые отклонения от аддитивности,

> разработать алгоритм прогнозирования погрешностей анализа, связанных с такими отклонениями,

> предложить алгоритм выбора АДВ, минимизирующий погрешности анализа Такой алгоритм должен учитывать не только коэффициенты поглощения компонентов и случайные погрешности оптических измерений, но и отклонения от ад дитивности,

> проверить возможность повышения точности спектрофото-метрического анализа смесей по МФ за счет использования нескольких разных наборов АДВ, с последующим усреднением результатов,

> исследовать влияние соотношения концентраций компонентов на точность результатов анализа смеси,

> с учетом полученных результатов выработать практические рекомендации, разработать новые методики анализа и апробировать их в анализе лекарственных препаратов

Объекты исследования - органические соединения, обладающие биологической активностью, а именно, анальгин (Ан), кофеин (Кф), хинина гидрохлорид (ХГ), парацетамол (Пр), папаверина гидрохлорид (ПГ), дибазол (Дб) и др, а также модельные двухкомпо-нентные смеси этих веществ Выбор модельных веществ обусловлен их широким применением в фармации и характеристиками поглощения в УФ области спектра Основным способом исследований в данной работе стало математическое моделирование погрешностей определения компонентов двухкомпонентных смесей при разной величине отклонений от аддитивности Учитывались также уровень и характер распределения случайных погрешностей

Тематика работы зарегистрирована во ВНТИЦентре (№ ГР 01 200.2 04679), исследования выполнялись при финансовой поддержке Министерства науки и образования (единый заказ-наряд) и Федеральной целевой программы "Интеграция"

Научная новизна

1 Установлено, что в спектрах некоторых смесей органических веществ, моделирующих состав известных лекарственных препаратов, имеются участки со статистически значимыми отклонениями от аддитивности

2 Разработан алгоритм прогнозирования возможности анализа смесей по методу Фирордта на одном наборе АДВ с погрешностями, не превышающими заданный предел

3 Предложен, теоретически обоснован и проверен новый способ выбора АДВ, позволяющий минимизировать погрешности анализа, связанные с отклонениями от аддитивности Способ применим при разном соотношении концентраций компонентов, а также в тех случаях, когда отклонения имеют случайный характер

4 Установлено, что результаты анализа одной и той же смеси, полученные на разных наборах АДВ, составляют нормально распределенную генеральную совокупность, причем наличие в спектре смеси участков с отклонением от аддитивности не меняет характера распределения результатов.

5 Предложен новый способ повышения точности анализа смесей по методу Фирордта - усреднение результатов, полученных с применением ряда ранее отобранных наборов АДВ

Практическая значимость. Разработана программа для быстрого поиска оптимальных условий анализа двухкомпонентных смесей по МФ. Разработаны методики одновременного определения двух активных компонентов в серийно выпускаемых лекарственных препаратах «Солпадеин», «Тетралгин», «Папазол-УБФ», «Панадол-ЭКСТРА» и «Анальгин-хинин» При использовании трех наборов АДВ относительная погрешность результатов анализа (порядка 1 %) достоверно меньше, чем у методик, ныне используемых для анализа тех же препаратов Разработанные методики могут быть использованы в контроле производства лекарственных препаратов и при их сертификации

Положения, выносимые на защиту:

1 Возможность применения метода Фирордта к анализу смесей, в спектре которых имеются статистически значимые отклонения от аддитивности

2 Алгоритм оптимизации условий анализа смеси по методу Фирордта с учетом отклонений от аддитивности

3 Алгоритм прогнозирования возможности одновременного определения компонентов с погрешностями, не большими заданного предела

4 Способ повышения точности анализа смесей по методу Фирордта, основанный на совместном использовании нескольких наборов АДВ

5 Методики спектрофотометрического анализа лекарственных препаратов, содержащих два одновременно определяемых активных компонента

Апробация работы. Основные результаты работы доложены на Всероссийской конференции «Аналитика России - 2004» (Москва, 2004), на VII конференции «Аналитика Сибири и Дальнего Востока» (Новосибирск, 2004), на Всероссийской конференции «Менделеевские чтения» (Тюмень, 2005), на III Всероссийской научной молодежной конференции «Под знаком сигма» (Омск, 2005), на 1-м Международном форуме «Актуальные проблемы современной науки» (Самара, 2005), на Международном конгрессе по аналитической химии 1СА8-2006 (Москва, 2006), на Всероссийской конференции «Аналитика России-2007» (Краснодар, 2007), на сессии Научного Совета Национальной академии наук Украины по проблеме «Аналитическая химия» (Харьков, 2007)

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 работ в виде статей и тезисов докладов

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, списка литературы (149 наименований) и 5 приложений Работа изложена на 133 страницах текста (с учетом приложений), содержит 20 рисунков, 26 таблиц Во введении кратко обоснована актуальность выполняемой работы, сформированы цель и задачи исследования Первая глава представляет собой обзор литературы по спектрофотометрическим методам определения индивидуальных веществ в неразделенных смесях, в частности, в многокомпонентных лекарственных препаратах Во второй главе теоретически

обоснованы новые алгоритмы анализа смесей по методу Фирордта, приведены результаты их проверки в компьютерном эксперименте В третьей главе описаны методики и результаты проверки предложенных алгоритмов при различном составе модельных смесей В четвертой главе описаны методики анализа лекарственных препаратов, разработанные с учетом результатов, полученных на модельных смесях аналогичного состава Сопоставлены метрологические характеристики разработанных и известных методик

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Выбор модельных объектов. Методики измерений. Объектами исследования являлись двухкомпонентные смеси ряда органических соединений, взятых попарно в различных массовых соотношениях При выборе этих соединений руководствовались их оптическими свойствами, применением в производстве лекарственных препаратов, растворимостью в воде и химической инертностью по отношению ко второму компоненту Соотношения компонентов задавали с учетом состава серийно выпускаемых лекарственных препаратов (табл 1)

Таблица 1

Состав модельных смесей

Компоненты Массовое соотношение Моделируемый препарат

Анальгин (Ан) -хинина гидрохлорид (ХГ) от 10 1 до 1 1 «Анальгин-хинин» (4 1)

Кофеин (Кф) - анальгин (Ан) от 10 1 до 1 10 «Тетралгин» (16)

Кофеин (Кф) - парацетамол (Пр) от 1 1 до 1 20 «Панадол-ЭКСТРА» (1 8) «Солпадеин» (117)

Папаверина гидрохлорид (ПГ) -дибазол (Дб) от 2 1 до 1 12 «Папазол-УБФ» (1 1)

Для приготовления смесей использовали реактивы х ч Исходные растворы готовили растворением точной навески (~ 0,05 г) реактива в 250,0 мл дистиллированной воды Рабочие растворы и модельные смеси готовили ежедневно путем разбавления Концентрации компонентов в модельных растворах составляли 10~5- Ю-6 моль/л Соотношения концентраций подбирали так, чтобы вклады компонентов в оптическую плотность смеси на аналитических длинах волн превышали утроенное стандартное отклонение оптической плотности смеси

Спектры растворов снимали на спектрофотометре СФ-2000-01, в кварцевой кювете (/ = 10,0 мм), в диапазоне 220-350 нм, раствор сравнения - дистиллированная вода

Все отобранные соединения поглощают свет в УФ области спектра, причем областей индивидуального поглощения компоненты соответствующих смесей не имеют. Нарушения закона Бугера-Лам-берта-Бера для растворов модельных соединений выявлены не были

Молярные (е) и удельные (к) коэффициенты поглощения модельных соединений вычисляли для разных длин волн, с шагом 5 нм Молярные коэффициенты поглощения разных соединений при Лтш близки между собой (значения /^е порядка 3,8 - 4,4) Для обеспечения большей точности использовали данные, полученные в ходе многократных измерений, при трех разных концентрациях Измерения оптической плотности (0,1 < А < 0,7) на фиксированной длине волны характеризуются нормальным распределением случайных погрешностей, при л = 5£г <0,003 Статистическую обработку результатов проводили традиционными методами, предполагающими нормальное распределение случайных погрешностей Доверительные интервалы рассчитывали для Р = 0,95 по 3 или 5 параллельным измерениям В расчетах преимущественно применяли удельные коэффициенты поглощения (к, мл • мг-1 см-1), а концентрации растворов выражали в мг/л (мкг/мл) Отметим, что в Государственной Фармакопее РФ под удельными коэффициентами понимается оптическая плотность раствора, содержащего 1 г вещества в 100 мл раствора

Значимость отклонений от аддитивности. Следовало проверить, имеются ли в спектрах модельных смесей участки со статистически значимыми отклонениями от аддитивности Для проверки в области 220-300 нм многократно регистрировали спектры поглощения модельных смесей и их компонентов по отдельности Для каждой смеси веществ X + У вычисляли отклонения от аддитивности на разных длинах волн А именно, АА = Ах+у— (Ах+Ау) Величину АА сопоставляли с утроенным стандартным отклонением выборки, содержащей значения оптической плотности (л = 5) той же смеси на той же длине волны, при повторном приготовлении и фотометрировании растворов. Выполнение неравенства АА > 3 5 свидетельствовало о статистической значимости отклонения (а < 0,01) Таким образом, было исследовано 47 модельных смесей разного качественного и количественного состава В спектрах большинства смесей участки со значимыми отклоне-

ниями обнаружены не были Примерами могут быть смеси ХГ—Ан (1 4) или Пр-Кф (1 8) Участки со значимыми (как правило, положительными) отклонениями от аддитивности были обнаружены в спектрах следующих смесей ПГ-Дб (1 1 и 1 4), Кф-Ан (2 1, 4 1 и 6 1) Конкретные причины возникновения отклонений в каждой системе требуют отдельного исследования, в рамках данной работы они не изучались Химические взаимодействия между компонентами модельных смесей в условиях анализа в литературе не описаны

Компьютерный эксперимент показал, что даже небольшие (порядка 5% по модулю), но хорошо воспроизводимые отклонения от аддитивности на аналитических длинах волн могут приводить к значительным (до 20% по модулю) систематическим погрешностям при расчете концентраций компонентов

Возможность определения компонентов с применением одного набора АДВ. При разработке методик анализа бинарных смесей важно заранее выяснить, удастся ли определить с требуемой точностью оба компонента на одном (общем) наборе АДВ или придется подбирать оптимальные наборы АДВ для каждого компонента отдельно Нужен алгоритм, позволяющий предсказать, будут ли концентрации Сх и Су определяться с необходимой точностью одновременно Искомые критерии можно вывести методами аналитической геометрии Примем следующие ограничения

• компоненты смеси (X и У) растворимы, их растворы устойчивы во времени и подчиняются закону Бугера—Ламберта—Бера, значения ионной силы, рН и температуры постоянны,

• погрешности определения коэффициентов поглощения X и У пренебрежимо малы по сравнению с отклонениями от аддитивности,

• вклады обоих компонентов в поглощение смеси при любых АДВ статистически достоверны, то есть области индивидуального поглощения компонентов отсутствуют

В МФ содержания компонентов Сх и Су определяют, решая систему уравнений

а, I Су + Ь, I Су = А.

X X I г х (1)

а2 I Сх +Ь2 I Су = Л2

Здесь а/, а2, Ь], молярные коэффициенты поглощения веществ X и У на 1 -ой и 2-ой длинах волн, I - толщина кюветы Если измеренные в ходе анализа значения оптической плотности смеси

(А *,) содержат статистически значимые отклонения от аддитивности АА, = А*, - А, (они могут быть как положительными, так и отрицательными), поглощение смеси описывается системой уравнений (2) [а, I с; + 6, I Су - А, + АЛ,

\аг 1 C'x+b2 1 С] - А2+ АА2

(2)

Найденные при решении системы (2) концентрации Сх и Су будут отличаться от истинных на А Сх и А Су Графическое решение систем (1) и (2) представлено на рис 1

* р щах

АСх Схист

Рис. 1. Графическое представление решений систем уравнений (1) и (2)

Каждая из систем уравнений задает пару прямых на плоскости СхОСу, причем пунктирные прямые, заданные системой (2), параллельны сплошным прямым, заданным системой (1) Точка (пересечение прямых 1 и 2) соответствует истинным значениям концентраций Сх ист и Су ист Если максимальные абсолютные погрешности определения X и У соответственно равны АСх"" и АСутах, область допустимых значений Сх и Су представляет собой прямоугольник АВСО с центром в точке Решение системы (2) приемлемо только тогда, когда соответствующая ему точка N будет лежать в прямоугольнике АВСО (положение точки N на рис.1 иллюстрирует случай, когда отклонения от аддитивности на обеих АДВ положительны) Таким образом, можно существенно сузить поиск АДВ, сравнивая длины отрезка N(2 с отрезками Ар и 11(3

Длину отрезка Ар (половину диагонали фигуры АВСБ) найдем по теореме Пифагора

Ав = у/(лсг)2 + (лсг)2 (3)

Если относительные погрешности определения обоих компонентов не должны превышать (по модулю) один и тот же заданный предел <5Стах, а компонент У в бинарной смеси находится в /71-кратном избытке (СУ = тСх), то получаем

АС;и = ёСтах Сх, (4а)

АС™" = т 8Стах Сх (46)

Подстановка (4а) и (46) в (3) приводит к выражению

= ЗС™* Сх л/1 + т2 (5)

Длину отрезка ИР можно вычислить, зная коэффициенты аи а2, Ь\,Ь2,а также отклонения от аддитивности АА\ и ДАг

= |Г1 \/(Ма2 +АЛ2а,)2 + (АЛД +АА2Ь2)2 , (6)

где г = (а26, -ахЬ2)г

Формулу (6) мы получили, выражая сдвиги прямых 1 и 2 через отклонения от аддитивности, рассматривая ряд треугольников, применяя теорему косинусов и, наконец, проводя необходимые алгебраические преобразования Детальный вывод формулы (6) приведен в диссертации, глава 2.

Сравнивая длину отрезка N(3 с АР и Яр, сформулируем следующие условия

А) Если N(2 < Яр, оба компонента определяются с погрешностями, меньшими ЗС™*

Это приводит к первому, строгому критерию

N(2 < ¿Стах • Сх (7)

Отклонения от аддитивности, соответствующие условию (7), являются «приемлемыми» и не помешают одновременному определению компонентов с заданной степенью точности

Б) если N<3 > АР, то оба компонента будут определяться с относительной погрешностью, превышающей заданный уровень 8Стах

Сопоставление Ыр и АР с учетом формулы (5) дает второй искомый критерий

Ир > 5Ст Сх л/1 + т2 (8)

Формула (8) показывает, что возможность одновременного определения обоих компонентов смеси по МФ с требуемой точностью зависит от соотношения компонентов, т. е. от т. Это приводит к необходимости подбирать (при больших т) оптимальные наборы АДВ отдельно для каждой смеси

Аналогичные выводы справедливы для диагонали MQ Если на длинах волн А.] и Х2, выбранных по общепринятым критериям МФ (например, максимальная разность отношений коэффи-

а\ °2 Л

циентов поглощения на двух длинах волн — —- ), выполняется од-

6, Ь2

но из условий, (7) или (8), то, поскольку спектр поглощения непрерывен, на длинах волн, близких к и А*, а точнее, имеющих близкие коэффициенты поглощения, это условие также будет выполняться

Проверку предложенного алгоритма проводили на смесях разного качественного и количественного состава. Соответствующие расчеты выполняли с помощью пакета программ «Excel» Наборы АДВ выбирали из областей максимального поглощения определяемых веществ Задавали различные по величине значения АА, в т.ч полученные в эксперименте, и вычисляли диагональ NQ по формуле (6) Затем проверяли выполнение неравенств (7) и (8) Сделанные прогнозы сравнивали с данными о погрешностях, полученными в ходе анализа реальных смесей (метод «введено-найдено») Прогнозы хорошо согласовывались с экспериментом (табл 2),

Таблица 2

Проверка возможности определения компонентов модельных смесей

Смесь и соотношение X:Y Прогноз (6СП°Х = 3%) Эксперимент

АДВ, нм Да / нет АДВ, нм Реальные погрешности дС, %

X Y

ПГ:Дб (1:1) 230/275 да 230 / 275 0,40 2,24

230 / 280 0,29 2,79

235/275 2,65 0,71

ПГ:Дб (1:10) 230/275 нет 230/275 -5,65 -4,36

230 / 280 -6,88 -3,73

235/275 -2,03 -4,61

Кф : Пр (1:8) 250 / 275 да 250 / 275 1,64 -0,20

245/280 1,68 -0,49

260/270 2,71 -0,14

Таким образом, можно считать доказанным, что данный способ прогнозирования позволяет адекватно оценивать возможность анализа двухкомпонентных смесей на общем наборе АДВ с заданной погрешностью Кроме того, оказалось, что выбор АДВ может зависеть не только от качественного, но и от количественного состава смесей, т е от соотношения компонентов, что приводит к необходимости выбирать АДВ для каждой конкретной смеси

Критерии выбора АДВ. Известен целый ряд критериев выбора АДВ, однако все они не учитывают влияния систематически действующих факторов, вызывающих отклонения от аддитивности Нашей задачей был поиск алгоритма выбора общих наборов АДВ для одновременного определения компонентов бинарных смесей, как в отсутствие, так и при наличии значимых отклонений от аддитивности

Влияние случайных погрешностей мы предлагаем учитывать, используя для выбора АДВ коэффициенты вариации (IV) при многократном измерении оптической плотности смеси на соответствующих длинах волн Чем меньше будут значения РУ/ и тем меньшие (при прочих равных условиях) случайные погрешности следует ожидать при определении X и У Необходимо также учитывать соотношение коэффициентов поглощения компонентов на выбранных АДВ С этой целью можно использовать критерий Ко

а, а2+Ь]-Ь2

К0 - соэ а = , —, (9)

В пространстве концентраций величина К0 соответствует косинусу угла между прямыми (1) и (2), которые описываются уравнениями Фирордта (см рис 1) Очевидно, чем ближе к О

величина Ко, тем

меньше будут при прочих постоянных условиях погрешности определения концентраций Если отклонения от аддитивности статистически незначимы, мы предлагаем выбирать АДВ с помощью критерия (10), который одновременно учитывает и величину случайных погрешностей, и их соотношение, и значения коэффициентов поглощения

-- ш

К* = К0 -г, (Ю)

2

где Щ ~ коэффициенты вариации при параллельных измерениях оптических плотностей смеси на соответствующих длинах волн (нумерация длин волн такова, что Щ > Оптимальными будут те наборы АДВ, которым соответствуют наименьшие значения критерия К*

Проверку применимости предложенного критерия вели на модельных смесях, для которых отклонения от аддитивности были статистически незначимыми Расчеты по выбору АДВ выполняли с помощью оригинальной компьютерной программы «Optic-Tablet», использующей пакет Microsoft Excel В ее основе - последовательный перебор решений системы двух линейных уравнений для разных наборов АДВ Результатами работы программы являются найденные для всех наборов длин волн значения критерия К*, концентрации (Сх и С/), а также относительные погрешности определения каждого компонента, SC, % Как пример, в табл 3 показана часть результатов для одной смеси, ранжированных в порядке роста критерия К* Видно, что наименьшие погрешности определения обоих компонентов отмечаются на наборах длин волн, с малыми значениями К (в таблице выделены курсивом), причем потенциально подходящими являются несколько наборов Аналогичные результаты получены и для других исследованных смесей В качестве АДВ были выбраны те наборы длин волн, которым соответствовали минимальные значения нового критерия, и именно на них обеспечивались минимальные погрешности определения обоих компонентов.

Таблица 3

Погрешности определения компонентов в модельной смеси анальгин - хинина гидрохлорид на разных наборах длин волн, вычисленные по программе «Optic-Tablet»

Äj, ни Л2, ни К* Найдено, икг/мл SC, %

ХГ Ан ХГ Ан

235 255 5,8 3,2 12,0 0,1 -0,8

240 260 6,0 3,2 12,7 -0,9 -0,9

235 260 6,1 3,2 12,7 0,4 -1,0

235 250 7,0 3,2 13,0 -0,6 1,2

240 280 7,2 3,0 13,1 -5,0 2,0

265 290 10,9 3,5 12,6 10,4 -1,3

230 300 11,0 2,7 13,9 -14,7 8,3

Действительные значения С\г~ 3,2 мкг/мл, СА„ = 12,8 мкг/мл

Приведем в качестве примера результаты определения кофеина в двух смесях, где его содержание в 6-8 раз меньше, чем содержание другого компонента (табл. 4)

Таблица 4

Правильность и прецизионность определения компонентов модельных смесей на аналитических длинах волн, выбранных по критерию К (п=3, Р=0,95)

Смесь АДВ, нм Вещество Введено, мкг/мл Найдено, мкг/мл д С, % 5>

1 260,285 Кофеин 3,2 3,2 0,7 0,09

Анальгин 19,2 19,3 0,5 0,05

2 250, 265 Кофеин 1,5 1,5 -0,9 0,05

Парацетамол 12,0 12,1 0,4 0,006

Как видно, даже при 8-кратном избытке одного из компонентов второй может определяться с не меньшей точностью Аналогичные результаты получены и для других исследованных смесей Во всех случаях погрешности определения компонентов не превышала 2 % отн , при Бг* 0,05

Таким образом, предлагаемый алгоритм выбора АДВ позволяет быстро и эффективно подбирать оптимальные условия анализа смесей, независимо от соотношения компонентов

Выбор АДВ при наличии значимых отклонений от аддитивности. По литературным данным, для одной и той же системы эффект «неаддитивности» может проявляться в разной степени, в зависимости от выбора длины волны, те ДА =/(Л) Очевидно, при выборе оптимального набора АДВ надо избегать тех участков спектра, на которых проявляются отклонения от аддитивности, а выбирать такие длины волн, при которых отклонения не наблюдаются или имеют случайный характер Мы предлагаем выбирать АДВ с помощью эмпирического критерия К, аналогичного критерию К* При вычислении К вместо коэффициентов вариации мы использовали относительные отклонения от аддитивности ¿А = АА /А

к = к0 + (11)

оАг

Индексы расставляют так, чтобы выполнялось условие \SAil > IКритерий К может иметь как положительные, так и отрицательные значения Очевидно, чем меньше будут значения 5А и чем ближе их отношение к 1, тем меньшими (по модулю) окажутся значения критерия Именно эти наборы АДВ и следует брать для проведения анализа Расчеты критерия (11) и выбор с его помощью опти-

мальных наборов АДВ также выполняли с помощью программы «Optic-tablet».

Таблица 5

Правильность и прецизионность определения компонентов модельных смесей на аналитических длинах волн, выбранных по критерию К (п = 3, Р = 0,95)

Смесь АДВ, нм Вещество Введено, мкг/мл Найдено, мкг/мл дС, % Sr

1 250, 265 Кофеин 6,4 6,5 1,3 0,05

Анальгин 3,2 3,2 0,8 0,05

2 230, 280 Папаверин 3,0 3,0 0,9 0,05

Дибазол 3,0 3,0 -0,3 0,07

Результаты анализа «неаддитивных» модельных смесей на АДВ, выбранных с применением критерия (11), приведены в табл 5 Во всех случаях выбранные АДВ находились вне участков спектра смеси, где отклонения от аддитивности были статистически значимы Систематические погрешности результатов анализа во всех случаях не превышают 3 % отн и статистически не значимы

В ходе исследования модельных смесей было установлено, что критерий К можно использовать и в тех случаях, когда отклонения от аддитивности носят чисто случайный характер, либо включают как случайную, так и систематическую составляющую Поэтому в работе были представлены результаты, полученные с использованием критерия .К"

Использование нескольких наборов аналитических длин волн В случаях, когда погрешность анализа смеси по МФ оказывается выше допустимой, обычно увеличивают число АДВ в наборе, что ведет к переопределенным системам уравнений, или определяют каждый компонент на своем наборе Однако возможен и более простой способ Можно заранее отбирать несколько наборов АДВ, не содержащих избыточных длин волн, а затем усреднять результаты единичных анализов, полученные с помощью разных наборов При той же точности анализа объем вычислений будет не больше, чем при решении переопределенных систем, а подбор АДВ - проще Но при этом надо убедиться, что результаты, полученные на выбранных наборах АДВ, не коррелированны между собой и не содержат значимых систематических погрешностей

Нами было изучено статистическое распределение результатов анализа, полученных с помощью программы «Optic-tablet», на разных наборах длин волн Близость распределения к нормальному характеризовали с помощью х2-критерия Во всех случаях, распределение результатов определения компонентов исследуемых смесей имело характер, близкий к нормальному, значения х2-критерия не превышало табличного К примеру, для смеси Кф-Пр (18) х эксп (Кф) = 4,40, Х2эксп(Пр)= 5,73, х2табл = 9,24 (Р = 0,95), при объеме выборки 113 Аналогичные результаты были получены для всех исследуемых смесей Отметим, что значения концентраций, полученные на выбранных по новому критерию К наборах АДВ во всех случаях попадали в центральные классы гистограмм

Однако близость характера распределения к нормальному еще не является доказательством того, что результаты, полученные на разных наборах длин волн, можно рассматривать как независимые На самом деле они, безусловно, коррелированны, но следовало выяснить степень их корреляции, в первую очередь, на тех наборах длин волн, которым соответствуют минимальные значения критерия К

Корреляционному анализу подвергали результаты определения компонентов, вычисленные на 15 наборах длин волн (с малыми значениями К) Во всех случаях экспериментальные значения коэффициентов корреляции намного меньше гтабл (например, для смеси ХГ-Ан состава 1 4, гЭ1ССП(ХГ) = 0,09; гэксп (Ан) = -0,04; гтабл= 0,51 (Р=0,95)) Иными словами, эти результаты, полученные на разных наборах АДВ, можно считать условно независимыми и относящимися к одной и той же нормально распределенной генеральной совокупности

Независимость результатов, полученных на разных «оптимальных» наборах АДВ, была подтверждена и для других изученных смесей - как «аддитивных», так и «неаддитивных» Таким образом, с помощью предложенного критерия К можно выбирать несколько наборов АДВ, проводить на них определение и считать полученные результаты независимыми Такой подход позволяет получать большее количество данных, не проводя дополнительных экспериментов, что сокращает время анализа и делает его дешевле

Анализ модельных смесей с усреднением результатов по трем наборам АДВ. Для каждой из исследованных смесей были отобраны по три набора АДВ с малыми значениями критерия К

Анализ модельных смесей проводили на каждом наборе АДВ трижды Дисперсии результатов анализа, полученных на трех наборах АДВ для каждой смеси, были однородны по критерию Кохрена Средние значения трех выборок статистически не различались (по критерию Стьюдента) Все это дает возможность усреднять результаты анализа В качестве примера, приведем результаты анализа смеси ХГ-Ан состава 1 4 Сравнивая данные, полученные на каждом из наборов, с усредненными данными (табл 6), можно видеть, что при этом уменьшается погрешность определения компонентов (вплоть до 0,1 %) и улучшается сходимость, т. е. повышается точность анализа в целом Аналогичные результаты получены для других исследуемых смесей, в т ч «неаддитивных» Наличие отклонений от аддитивности не влияло на правильность результатов, что доказывает, во-первых, принципиальную возможность применения МФ к анализу подобных смесей, во-вторых, подтверждает полезность нового критерия при выборе АДВ, в-третьих, доказывает целесообразность совместного использования нескольких наборов АДВ

Таблица 6

Правильность и прецизионность определения хинина гидрохлорида и анальгина смеси состава 1:4 на разных наборах АДВ {п=3,Р = 0,95)

Набор АДВ, нм Компонент

Хинина гидрохлорид, 3,2 мкг/ил Анальгин, 12,8 мкг/мл

SC, % Sr ÔC, % Sr

235 250 -0,61 0,09 1,20 0,06

235 255 0,09 0,09 -0,80 0,05

235 260 0,38 0,06 -1,02 0,05

Среднее по всем наборам -0,08 0,02 -0,29 0,01

Наборы АДВ, выбранные для модельных смесей, в дальнейшем использовали в анализе лекарственных препаратов с примерно тем же соотношением активных компонентов Известно, что лекарственные препараты являются объектами, состав которых колеблется в сравнительно узких пределах, регламентируемых нормативной документацией (как правило, допускаются колебания порядка 5-10 %, в зависимости от содержания активного вещества). В связи с этим мы проверили, можно ли использовать выбранные наборы АДВ к анализу смесей, если содержания компонентов будут отличаться от номинальных в пределах ± 20 %. Как правило, погрешности определения

компонентов в таких случаях также не превышали 3-5 %, что позволяет рекомендовать соответствующие наборы АДВ для анализа серийно выпускаемых лекарственных препаратов

Анализ лекарственных препаратов. В данной работе реальными объектами анализа являлись таблетированные лекарственные препараты, включающие два активных компонента из числа изученных (табл 1) Помимо лекарственных веществ, в состав таблетирован-ных лекарственных препаратов входят наполнители и вспомогательные вещества Оценка мешающего влияния шести наиболее распространенных наполнителей (вспомогательных веществ) магния оксида, крахмала, талька, глюкозы, сахара и натрия гидрокорбаната, показала, что они не будут мешать определению активных компонентов

Разработанные методики анализа всех лекарственных препаратов различались лишь способом подготовки фотометрируемых растворов и используемыми в ходе анализа наборами АДВ Все методики включали 1) измельчение содержимого одной упаковки анализируемого препарата (не менее 10 предварительно взвешенных таблеток), перемешивание и квартование полученного порошка, 2) взятие трех навесок порошка таблеток (около 0,1 г), растворение навесок в дистиллированной воде, фильтрование и доведение раствора до метки, 3) приготовление растворов для фотометрирования (при этом вводили подходящие буферные растворы), 4) измерение оптической плотности каждого раствора на трех предварительно отобранных наборах длин волн, 5) расчет результатов анализа для каждого набора АДВ с учетом заранее определенных удельных коэффициентов поглощения, 6) усреднение результатов анализа, полученных с применением разных наборов АДВ и разных навесок препарата Анализ одного препарата по такой схеме (с применением компьютерной программы) занимает не более 30 минут.

Во всех проанализированных препаратах содержание активных компонентов соответствовало номинальному, коэффициенты вариации не превышали 1-3 % В качестве примера в табл 7 приведены результаты анализа лекарственного препарата «Солпадеин» Проверка правильности определения активных компонентов исследуемых препаратов методом «введено-найдено» показала, что они определяются с относительной погрешностью, не превышающей 4 % Таким образом, присутствие наполнителей и других активных компонентов не повлияло на результаты анализа лекарственных препаратов по МФ

Таблица 7

Результаты количественного определения кофеина и парацетамола в таблетках «Солпадеин» (п = 5,Р- 0,95)

Набор АДВ, нм Найдено, г

Парацетамол Кофеин

230 280 0,502 ±0,012 0,030 ± 0,005

260 270 0,499 ±0,010 0,029 ± 0,006

260 275 0,499 ± 0,008 0,029 ± 0,004

Среднее по всем наборам 0,500 ± 0,004 0,029 ± 0,001

Допустимые пределы содержания, г 0,475 - 0,525 0,027 - 0,033

Нами было проведено сравнение разработанных методик анализа лекарственных препаратов по МФ с использованием трех наборов АДВ, выбранных по новому критерию К с методиками, в которых расчет концентрации активных компонентов ведут на одном наборе АДВ, выбранных по общепринятому в МФ критерию (разность коэффициентов поглощения), а также с методиками, описанными в Государственной Фармакопее (ФС) В качестве примера приведем результаты анализа препарата «Папазол-УБФ» по двум методикам разработанной (МФ 3) и ФС 42-1869-82 (табл 8) Результаты, полученные по разработанной методике, совпадают с результатами методики ФС (различия средних значений статистически не значимо 1ПГ = 0,14,1д6 = 0,03; ^бл = 4,30 (и = 3, Р = 0,95))

Таблица 8

Результаты количественного определения папаверина гидрохлорида и дибазола в препарате «Папазол-УБФ» по двум методикам

Методика Масса, г

ПГ Дб

ФС 0,029 ± 0,03 0,030 ±0,01

МФЗ 0,030 ±0,01 0,030 ± 0,01

Допустимые пределы содержания, г 0,027-0,033 0,027 - 0,033

Отметим, что согласно ФС 42-1869-82, в ходе анализа препарата «Папазол-УБФ» ПГ титруют в среде ледяной уксусной кислоты (токсикант'), а Дб определяют аргентометрическим методом Следовательно, переход к одновременному спектрофотометрическому определению обоих компонентов в данном случае ведет не только к сокращению продолжительности анализа при сохранении той же точности, но и к улучшению условий труда лаборантов, а также к экономии дорогостоящих реактивов

выводы

1. Метод Фирордта применим к анализу двухкомпонентных смесей (в т ч лекарственных препаратов) даже при наличии в их спектрах небольших, но статистически значимых отклонений от аддитивности Предложен и проверен расчетный алгоритм, с помощью которого можно прогнозировать возможность определения компонентов смеси на одном наборе длин волн с погрешностями, не превышающими заданный предел

2. Для выбора оптимальных наборов длин волн предложен критерий, учитывающий не только коэффициенты поглощения веществ и случайные погрешности анализа, но и статистически значимые отклонения от аддитивности Выбор АДВ зависит от соотношения компонентов в смеси Применение нового критерия приводит к снижению систематических погрешностей анализа

3. Статистическое распределение результатов определения компонентов смесей по методу Фирордта на разных наборах АДВ имеет характер, близкий к нормальному Результаты определения компонентов на разных наборах длин волн (с малыми значениями критерия) слабо коррелированы, что позволяет рассматривать их как независимые

4. Для повышения точности спектрофотометрического анализа смесей по методу Фирордта целесообразно усреднять результаты, полученные на нескольких наборах АДВ, отобранных по предложенному критерию, что уменьшает влияние случайных погрешностей

5. С использованием предложенных алгоритмов разработаны методики спектрофотометрического анализа пяти лекарственных препаратов, содержащих по два одновременно определяемых активных компонента Эти методики характеризуются незначимыми систематическими погрешностями (порядка 1 % отн и менее), по точности не уступают фармакопейным, основанным на титровании активных компонентов, и превосходят последние по экспрессности

Основное содержание диссертации изложено в следующих работах

1 Власова И В, Шилова А В, Кулакова С А Спектрофотометрическое определение кофеина, парацетамола и ацетилсалициловой кислоты при совместном присутствии // Заводская лаборатория Диагностика материалов, 2005 Т 71 №9 С 18-20

2 Власова ИВ, Шшова А В, Одинец ЕН, Рыжова С В Спектрофотометри-ческое определение папаверина гидрохлорида и дибазола в лекарственном препарате «Папазол» // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции сборник научных трудов (Пятигорская государственная фармацевтическая академия) Вып 60 Пятигорск, 2005 С 193-194

3 Власова И В, Шилова А В Критерий выбора аналитических длин волн при анализе двухкомпонентных смесей с малым содержанием одного из компонентов // Всероссийская конференция «Менделеевские чтения» Труды конференции Тюмень, 2005, С 427-430

4 Власова И В, Шилова А В Повышение точности определения компонентов в двухкомпонентных смесях по методу Фирордта // Вестник Омского университета, 2006 № 3 С 53-55

5 Власова ИВ, Шилова А В Новые подходы к спектрофотометрическому анализу многокомпонентных смесей // Вюник Харювского Нацюнального Ушверситету 2007 -№770 Ximw Вип 15(38) С 141-146

6 Власова И В, Поморцева А В (Шшова), Калеева Е Н Определение анальгина в лекарственных препаратах без предварительного разделения // Всероссийская конференция по аналитической химии «Аналитика России -2004» Тезисы докладов М , 2004 С 181

7 Власова И В, Поморцева А В (Шилова), Калеева Е Н Спектрофотомет-рическое определение анальгина в лекарственных препаратах без предварительного разделения // Материалы VII конференции «Аналитика Сибири и Дальнего Востока - 2004» Тезисы докладов Новосибирск, 2004 С 181

8 Шилова А В, Емельянова Л А Критерий выбора аналитических длин волн при анализе многокомпонентных систем // III Всероссийская научная молодежная конференция «Под знаком сигма» Тезисы докладов Омск, 2005 С 173-174

9. Власова И В, Шилова А В, Рыжова С В Применение многомерного регрессионного анализа к определению веществ в двухкомпонентных смесях // 1-й Международный форум «Актуальные проблемы современной науки» Тезисы докладов Самара, 2005 С 161-163

10 Vlasova IV, Shilova А V Bmaiy mixtures spectrophotometry analysis modeling according Firordt's method / International Congress on Analytical Sciences ICAS-2006 / Moscow 25-30 June 2006 P 534

11 Власова ИВ, Шилова А В, Масякова ЕН Хемометрический подход к анализу многокомпонентных смесей по УФ-спектрам поглощения // Всероссийская конференция по аналитической химии «Аналитика России - 2007» Тезисы докладов Краснодар, 2007 С. 287

12 Власова ИВ, Шилова А В, Масякова ЕН Новые подходы к спектрофотометрическому анализу многокомпонентных смесей // Сеая Науково1 ради HAH Украши з проблеми «Анаштична ximw» Тези доповщей Харкш, 2007 С 76.

Диссертант и его научный руководитель благодарят за ценные советы при постановке данного исследования и при подведении его результатов - канд физ- мат наук НА Исаченко и канд хим наук А В Дрозда, а также докторов хим наук В И Вершинина, А И Гризодуба и В И Дворкина

Подписано к печати 06 08 2008 Формат бумаги 60x84 1/16 Печ л 1,5 Уч-изд л 1,45 Тираж! 10 экз Заказ 267

Издательство ОмГУ

644077, г Омск-77, пр Мира, 55а, госуниверситет

Введение.

Глава 1. Спектрофотометрическое определение индивидуальных компонентов в лекарственных препаратах (смесях).

1.1. Способы и условия реализации спектрофотометрического определения органических веществ в их неразделенных смесях

1.1.1. Регрессионный анализ.

1.1.2. Метод Фирордта.

1.2. Критерии выбора аналитических длин волн.

1.3. Спектрофотометрические методы анализа многокомпонентных лекарственных препаратов.

1.3.1. Спектрофотометрия в УФ — области.

1.3.2. Спектрофотометрия в видимой области.

1.3.3. Спектроскопия в ИК — области.>i■<.

Актуальность. Среди различных направлений современной аналитической химии все большее значение приобретает анализ многокомпонентных смесей органических веществ. Спектрофотометрическое определение компонентов смесей без их предварительного разделения значительно сокращает продолжительность анализа и нередко повышает его точность. Особое значение в последние годы приобрел анализ лекарственных препаратов, это связано с появлением большого количества новых лекарств, а также с наплывом на фармацевтический рынок фальсифицированной или некачественной продукции. Требуется всесторонний контроль состава лекарственных препаратов, а, следовательно, разработка новых - точных, высокочувствительных, экспрессных и недорогих - методик анализа соответствующих смесей.

Для спектрофотометрического анализа смесей при наложении полос поглощения компонентов используют метод Фирордта (МФ). Он применяется и в фармацевтическом анализе, но не получил там широкого распространения, так как относительная погрешность результатов оказывается довольно большой (порядка 10%) и быстро растет при усложнении состава смеси. Традиционным ограничением МФ является требование идеальной аддитивности светопоглощения, т.е. оптическая плотность смеси при любой длине волны должна равняться сумме оптических плотностей компонентов, измеренных порознь. В реальных условиях могут наблюдаться отклонения от аддитивности (АА), в том числе статистически значимые, вызванные систематически действующими факторами. «Факторами неаддитивности» могут быть химическое или сольватационное взаимодействие компонентов, влияние примесей, неверная градуировка измерительной аппаратуры и др. В случае анализа многокомпонентных лекарственных препаратов неаддитивность может быть связана с присутствием наполнителей и/или с образованием ионных ассоциа-тов. Каков бы ни был механизм возникновения значимых отклонений от аддитивности, применение МФ к анализу соответствующих смесей должно вести к результатам, отягощенным систематическими погрешностями. Хотя проблеме повышения точности метода Фирордта посвящен ряд исследований (И.Г.Перьков, А.И.Гризодуб, М.Г.Левин, А.В.Дрозд и др.), при выборе аналитических длин волн (АДВ) отклонения от аддитивности учитывают редко, этот аспект проблемы никем ранее специально не рассматривался.

Цель работы. Цель данного исследования - изучить применимость метода Фирордта к анализу смесей, спектры которых могут содержать отклонения от аддитивности. Результаты такого исследования могли бы привести к расширению границ применимости метода Фирордта, повышению точности соответствующих методик (за счет оптимизации условий анализа и др.), а также к разработке новых методик анализа реальных объектов (лекарственных препаратов сложного состава).

В рамках данного исследования необходимо было решить следующие частные задачи: проверить, встречаются ли в УФ спектрах поглощения смесей, традиционно анализируемых по методу Фирордта, статистически значимые отклонения от аддитивности; разработать алгоритм прогнозирования систематических погрешностей, связанных с такими отклонениями; предложить алгоритм выбора АДВ, минимизирующий погрешности анализа. Такой алгоритм должен учитывать не только коэффициенты поглощения компонентов и случайные погрешности оптических измерений, но и отклонения от аддитивности; проверить возможность повышения точности спектрофотометриче-ского анализа смесей по методу Фирордта за счет использования нескольких разных наборов АДВ, с последующим усреднением результатов; исследовать влияние соотношения концентраций компонентов на точность результатов анализа смеси; с учетом полученных результатов выработать практические рекомендации, разработать новые методики анализа лекарственных препаратов и апробировать их.

Объекты исследования - органические соединения, обладающие биологической активностью, а именно, анальгин (Ан), кофеин (Кф), хинина гидрохлорид (ХГ), парацетамол (Пр), папаверина гидрохлорид (ПГ), дибазол (Дб) и др., а также модельные двухкомпонентные смеси этих веществ. Выбор модельных веществ обусловлен их широким применением в фармации и характеристиками поглощения в УФ области спектра. Основным способом исследований в данной работе стало математическое моделирование систематических погрешностей анализа смесей при разной величине отклонений от аддитивности. Учитывались также уровень и характер распределения случайных погрешностей.

Тематика работы зарегистрирована во ВНТИЦентре (№ ГР 01.200.2 04679), исследования выполнялись при финансовой поддержке Министерства науки и образования (единый заказ-наряд) и Федеральной целевой программы "Интеграция".

Научная новизна.

1. Установлено, что в спектрах некоторых смесей органических веществ, моделирующих состав известных лекарственных препаратов, имеются участки со статистически значимыми отклонениями от аддитивности.

2. Разработан алгоритм прогнозирования возможности анализа смесей по методу Фирордта на одном наборе аналитических длинах волн, с погрешностями, не превышающими заданный предел.

3. Предложен, теоретически обоснован и проверен новый способ выбора АДД позволяющий минимизировать погрешности анализа, связанные с отклонениями от аддитивности. Способ применим при разном соотношении концентраций компонентов, а также в тех случаях, когда отклонения имеют случайный характер.

4. Установлено, что результаты анализа одной и той же смеси, полученные на разных наборах АДВ, составляют нормально распределенную генеральную совокупность, причем наличие в спектре смеси участков с отклонениями от аддитивности не меняет общего характера распределения результатов.

5. Предложен новый способ повышения точности анализа смесей по методу Фирордта - усреднение результатов, полученных с применением ряда ранее отобранных наборов АДВ.

Практическая значимость. Разработана программа для быстрого поиска оптимальных условий анализа двухкомпонентных смесей по методу Фирордта. Разработаны методики одновременного определения двух активных компонентов в серийно выпускаемых лекарственных препаратах «Солпаде-ин», «Тетралгин», «Папазол», «Панадол-ЭКСТРА» и «Анальгин-хинин». При использовании трех наборов АДВ относительная погрешность результатов анализа (порядка 1 %) достоверно меньше, чем у методик, ныне используемых для анализа тех же препаратов. Разработанные методики могут быть использованы в контроле производства лекарственных препаратов и при их сертификации.

Положения, выносимые на защиту:

1. Возможность применения метода Фирордта к анализу смесей, в спектре которых имеются статистически значимые отклонения от аддитивности.

2. Алгоритм оптимизации условий анализа смеси по методу Фирордта с учетом возможности отклонений от аддитивности.

3. Алгоритм прогнозирования возможности определения компонентов на одном наборе АДВ с погрешностями, не большими заданного предела.

4. Способ повышения точности анализа смесей по методу Фирордта, основанный на совместном использовании нескольких наборов АДВ.

5. Методики спектрофотометрического анализа лекарственных препаратов, содержащих два одновременно определяемых активных компонента.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены на Всероссийской конференции «Аналитика России - 2004» (Москва, 2004), на VII конференции «Аналитика Сибири и Дальнего Востока» (Новосибирск, 2004), на Всероссийской конференции «Менделеевские чтения» (Тюмень, 2005), на III Всероссийской научной молодежной конференции «Под знаком сигма» (Омск, 2005), на 1-м Международном форуме «Актуальные проблемы современной науки» (Самара, 2005), на Международном конгрессе по аналитической химии ICAS-2006 (Москва, 2006), на Всероссийской конференции «Аналитика России-2007» (Краснодар, 2007), на сессии Научного Совета Национальной академии наук Украины по проблеме «Аналитическая химия» (Харьков, 2007).

Публикации. Результаты работы изложены в 14 публикациях (статьи и тезисы докладов).

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, 4 глав, выводов, списка литературы (149 наименований) и 5 приложений. Работа изложена на 133 страницах текста (включая приложения), содержит 20 рисунков, 26 таблиц. Во введении кратко обоснована актуальность выполняемой работы, сформированы цель и задачи исследования. Первая глава представляет собой обзор литературы по спектрофотометрическим методам определения индивидуальных веществ в неразделенных смесях, в частности, в многокомпонентных лекарственных препаратах. Во второй главе теоретически обоснованы новые алгоритмы анализа смесей по методу Фирордта, приведены результаты их проверки в компьютерном эксперименте. В третьей главе описаны методики и результаты проверки предложенных алгоритмов при

Выводы

1. Метод Фирордта применим к анализу двухкомпонентных смесей (в т.ч. лекарственных препаратов) даже при наличии в их спектрах небольших, но статистически значимых отклонений от аддитивности. Предложен и проверен расчетный алгоритм, с помощью которого можно прогнозировать возможность определения компонентов смеси на одном наборе длин волн с погрешностями, не превышающими заданный предел.

2. Для выбора оптимальных наборов длин волн предложен критерий, учитывающий не только коэффициенты поглощения веществ и случайные погрешности анализа, но и статистически значимые отклонения от аддитивности. Выбор АДВ зависит от соотношения компонентов в смеси. Применение нового критерия приводит к снижению систематических погрешностей анализа.

3. Статистическое распределение результатов определения компонентов смесей по методу Фирордта на разных наборах АДВ имеет характер, близкий к нормальному. Результаты определения компонентов на разных наборах длин волн (с малыми значениями критерия) слабо коррелированы, что позволяет рассматривать их как независимые.

4. Для повышения точности спектрофотометрического анализа смесей по методу Фирордта целесообразно усреднять результаты, полученные на нескольких наборах АДВ, отобранных по предложенному критерию, что уменьшает влияние случайных погрешностей.

5. С использованием предложенных алгоритмов разработаны методики спектрофотометрического анализа пяти лекарственных препаратов, содержащих по два одновременно определяемых активных компонента. Эти методики характеризуются незначимыми систематическими погрешностями (порядка 1 % отн. и менее), по точности не уступают фармакопейным, основанным на титровании активных компонентов, и превосходят последние по экспрессное™.

1. Luis, M.L. Simultaneous spectrophotometric determination of diuretics by using multivariate calibration methods/ M.L. Luis, J.M.G. Fraga, F. Jimenez, A.I. Jimenez, J.J. Arias. / TaIanta.-2000.- V.53, №4.- P.761-770.

2. Wang, Yu. Определение трех компонентов в компаундных таблетках хлорфенамина с применением факторного анализа с итеративным превращением мишени/ Yu Wang, Liu Shiging / Spectrosc. and Spectral Anal.-2001.- V.21, № 2,- P.254 -255.

3. Aberasturi, F.J. Simultaneous spectrophotometric determination of folic acid, pyridoxine, riboflavin and thiamine by partial least squares regression/ F.J. Aberasturi, A.I. Jimenez, J.J. Arias, F. Jimenez. / Anal. Lett.- 2002.- V.35, № 10.-P.1677- 1691.

4. Ткаченко, M.JI. Физико-химические исследования твёрдых смесей кофеина и парацетамола / M.JI. Ткаченко, JI.E. Жнякина, А.С. Космынин./ Химико-фармацевтический журнал.- 2003. -Т.37, № 8.- С.34-36.

5. З.Власова, И.В. Спектрофотометрическое определение кофеина, парацетамола и ацетилсалициловой кислоты при совместном присутствии / И.В. Власова, С.А. Кулакова, А.В. Поморцева./Заводская лаборатория. Диагностика материалов.- 2005.- Т.71, № 9.- С. 18-20.

6. Государственная Фармакопея СССР.-11 изд.- вып.1. Общие методы анализа.- М.Медицина.- 1991. 313с.

7. Марьянов, Б. М. Избранные главы хемометрики: учебное пособие для хим. фак. вузов./ Б. М. Марьянов,- Томск: изд-во Том. ун-та.- 2004.-166 с.

8. Вершинин, В.И. Планирование и математическая обработка результатов химического эксперимента: учебное пособие./ В.И. Вершинин, Н.В. Перцев.- Омск: изд-во ОмГУ.- 2005. 216с.

9. Дворкин, В.И. Метрология и обеспечение качества количественного химического анализа./В.И. Дворкин.- М.: Химия.- 2001.- 263 с.

10. Вершинин, В.И. Лекции по планированию и математической обработке результатов химического анализа: учебное пособие./ В.И. Вершинин.-Омск: изд-во ОмГУ.- 1999. 142 с.

11. Перцев, Н.В. Количественные методы анализа и обработки данных: учебное пособие./Н.В. Перцев.- Омск: изд-во ОмГУ.- 2002. 140 с.

12. Meloun, М. The effect of influential data, model and method on the precision of univariate calibration/ M. Meloun, J. Militky, K. Kupka, R.G.Brereton./ Ta-lanta.- 2002.- V.57, №4.- P.721-740.

13. Адамов, С.А. Спектрофотометрический анализ основных дериватов гемоглобина / С.А. Адамов, С.А. Александрова, А.Н. Денисов, Е.Ю. Мосур, Н.А. Семиколенова./ Биохимия.-1998.- Т. 63, № 10.- С. 1362-1366.

14. ЗО.Власова, И.В. Повышение точности определения компонентов в двухком-понентных смесях по методу Фирордта / И.В. Власова, А.В. Шилова. / Вестник Омского университета.- 2006.- № 2.- С.53-55.

15. Vlasova, I.V. Binary mixtures spectrophotometric analysis modeling according Firordt's method / I.V. Vlasova, A.V. Shilova./ International Congress on Analytical Sciences ICAS-2006.- Moscow, 25-30 June 2006.- P. 534-535.

16. Huggins, Z. Msimanga Determination of acetaminophen in analgesics by the standard addition method: a quantitative analytical chemistry laboratory (abstract) / Z. Huggins, W. Jilliann./The Chemical Educator.-2005.-V.10, № 6.- P. 430-436.

17. Гризодуб, А.И. Модифицированный метод Фирордта/А.И. Гризодуб, М.Г. Левин, В.П. Георгиевский./ Журнал аналит. химии.-1984.-Т.39, №11.-С.1987-1990.

18. Гризодуб, А.И. Оценивание сходимости результатов анализа в модифицированном методе Фирордта/А.И. Гризодуб, М.Г. Левин, В.П. Георгиевский./Журнал аналит. химии.-1986.- Т.41, № 11.- С. 1984-1988.

19. Левин, М.Г. Применение модифицированного метода Фирордта для контроля качества двухкомпонентных таблетированных лекарственных средств/М.Г. Левин, А.И. Гризодуб, В.П. Георгиевский./ Химико-фармацевтический журнал.-1987.- Т.21, №6.- С.748-751.

20. Гризодуб, А.И. Контроль качества препарата «Ингалипт»/ А.И. Гризодуб, М.Г. Левин, В.П. Георгиевский./Химико-фармацевтический журнал.-1985.-№2.- С.242-248.

21. Саушкина, А. С. Совершенствование количественного анализа препарата «Олазоль»/ А.С. Саушкина, В.А. Карпенко./Химико-фармацевтический журнал.- 2005.-Т. 39, №11.- С. 54-56.

22. Левин, М.Г. Относительный метод Фирордта / М.Г. Левин, А.И. Гризо-дуб, В.П. Георгиевский./ Журнал аналит. химии.-1989.-Т.44, №2.- С.234-242.

23. Гризодуб, А.И. Дифференциальный вариант модифицированного метода Фирордта/ А.И. Гризодуб, М.Г. Левин, В.П. Георгиевский./Журнал аналит. химии.-1986.-Т. 41, № 4. с.702 704.

24. Кац, М.Д. О количественном критерии для выбора оптимальных спектральных позиций при анализе многокомпонентных смесей по спектрам поглощения/ М.Д. Кац, М.Я. Розкин./ Заводская лаборатория. Диагностика материалов,-1972.- №6.- С.688-690

25. Перьков, И.Г. Выбор оптимальных длин волн и прогнозирование погрешностей в многокомпонентном спектрофотометрическом анализе/ И.Г. Перьков, А.В. Дрозд, Г.И. Арцебашев./ Журнал аналит. химии.-1987.-Т.42, №1.- С. 68-77.

26. Перьков, И.Г. Спектры аддитивных свойств и их модификация в неселективных методах анализа и исследования многокомпонентных систем/ И.Г.

27. Перьков./ Автореферат диссертации на соискание ученой степени докт. хим. наук.- Москва.- 1993.- 41с.

28. Перьков, И.Г. Спектры аддитивных свойств и их модификация в неселективных методах анализа многокомпонентных систем/ И.Г. Перьков./ Журнал аналит. химии.-1991.- Т.46, №10.- С.2069-2076.

29. Михайлова, Л.И. Использование математического аппарата двухкомпо-нентной спектрофотометрии для одновременного каталиметрического определения двух анионов/ Л.И. Михайлова, К.Н. Беликов, А.Б. Бланк./ Журнал аналит. химии.-2005.-Т.60, №1.- С.7-10.

30. Гризодуб, А.И. Априорный выбор аналитических длин волн в методе Фи-рордта/А.И. Гризодуб, М.Г. Левин, В.П. Георгиевский./Журнал аналит. ХИМИИ.-1987.-Т. 42, №9.- С.1589-1597.л

31. Дрозд, А.В. К выбору аналитических длин волн с минимизацией погрешности градуировки/ А.В. Дрозд, И.М.Баскир./ Вюник Харшвського Ушверситету.- 1999.- №437.- С.77-80.

32. Пилипенко, А.Т. Уточнение выбора аналитических длин волн методами планирования эксперимента при фотометрическом анализе многокомпонентных систем/ А.Т. Пилипенко, Л.И. Савранский, А.Н. Масько./Журнал аналит. химии.-1985.-Т.40, №2.- С. 232 236.

33. Гудым, В.К. Теоретическая оценка точности спектрофотометрического анализа многокомпонентных смесей/ В.К. Гудым, Г.А. Воробье-ва./Заводская лаборатория. Диагностика материалов.-1972.-№7.- С.778-781.

34. Гризодуб, А.И. Валидация спектрофотометрических методик количественного анализа лекарственных средств в соответствии с требованиями ГФУ / А.И. Гризодуб./ Фармаком.- 2002.- №3.- С.42-50.

35. Гризодуб, А.И. Стандартизованная процедура валидации методик количественного анализа лекарственных средств методом стандарта/ А.И. Гризодуб, Д.А. Леонтьев, Н.В. Денисенко, Ю.В. Подпружников./ Фармаком.-2004.-№3.- С.3-17.

36. Гризодуб, А.И. Стандартные процедуры валидации методик контроля качества лекарственных средств / А.И. Гризодуб./Фармаком.-2006.- №1/2.-С.35-44.

37. Wang, Hui-Qin. Определение анальгина в таблетках спектрофото-метрическим методом / Hui-Qin Wang, Zhen-Zhong Huang, Yong-Mei Zhu, Wu-Gen Huang./ Chin.J. Spectrosc. Lab.- 2002.- V.19, № 6.- P.777-780.

38. Сим, Г.С. Спектрофотометрическое определение лекарственных средств с использованием стандартных образцов свойств / Г.С. Сим, И.П. Рыкунова,

39. Jl.В. Курдыбаха, В.А. Ушакова./ Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник научных трудов (Пятигорская государственная фармацевтическая академия).-Пятигорск.- 2004.-вып. 59.- С. 216-218.

40. Qiao, Lan-xia. Количественное определение аспирина в таблетках с помощью спектрофотометрии / Lan-xia Qiao, Zhi-guo Gao, Qing Xing, Qiu-rui./ J. Hebei Norm. Univ.-2001.-V.25, № 2.- P. 219-220.

41. Dhake, A.S. Simultaneous determination of mefenamic acid and paracetamol from combined dosage forms by spectrophotometry / A.S. Dhake, D.B. Sonaje, Veena S. Kasture, P.T. Nikam, R.S. Talekar./ Indian J. Pharm. Sci.- 2001.-V.63, № 1.- P. 55-57.

42. Goyal, P. Simultaneous spectrophotometric estimation of isoniazid and rifam-picin from combined dosage forms / P. Goyal, S. Pandey, N. Udupa./ Indian J. Pharm.Sci.-2002.- V.64, №1.- P.76-78.

43. Nogowska, M. Simultaneous spectrophotometric deteiinination of acetylsali-cylic acid, paracetamol, and caffeine in pharmaceutical preparations/ M. Nogowska, J. Muszalska, M. Zajac./ Chim.anal-1999.- T. 44, № 6.-P. 10411048.

44. Erk, N. Simultaneous determination of analgine and paracetamol in tablets by spectrophotometric methods / N. Erk, F. Onur./ Anal.Lett.-1997.- V.30, № 6.-P. 1201-1210.

45. Erk, N. Spectrophotometric simultaneous determination of analgin and hyos-cine N-butil bromide in sugar coated tablets / N. Erk, F. Onur./ Anal. Lett.-1996.- V.29, № 3.- P. 369-380.

46. David, I.G. Analysis of eferalgan tablets by first-order derivative UV-spectrophotometry/ I.G. David, V. Dumitrescu./ Analele Universitatii din Bu-curesti (seria Chimie).- 2002.- V.2, № 11.- P. 79-84.

47. Uslu, Bengi. Spectrophotometric determination of melatonin and pyridoxine HC1 in binary mixture using first derivative of the ratio spectra method / Bengi Uslu, Sibel A. Ozkan, H.Y. Aboul-Enein./Anal. Lett.-2002.-V.35, №14.-P. 2305-2317.

48. Erk, Nevin. Spectrophotometric resolution metronidazole and miconazole nitrate on ovules using ratiospectra derivative spectrophotometry and RP-LC / Nevin Erk, M. Levent Altun./ J.Pharm. and Biomed. Anal.-2001.-V. 25, № 1.-P. 115-122.

49. Karpinska, J. Simultaneous quantification of promazine hydrochloride and its sulfoxide in pharmaceutical preparations / J. Karpinska./ Anal. Sci.-2001.-V.17, №2.- P. 249-253.

50. Sun, Zengxian. Spectrophotometric simultaneous analysis of analgin — adamon mixture in injectin preparations / Zengxian Sun, Ruizhen Li, Yongming Li, Kuixing Wang./ Spectrosc. and Spectral Anal.-2001.- V.21, № 5.- P.713-715.

51. Yucesoy, C. Simultaneous determination of buodopa and benserazide using derivative spectrophotometry/ Yongfeng Wei./ Ankara univ.eczacilik fak.derg.-1994.- V.23, №1-2.- C.l-10.

52. Манина, С.А. Совершенствование методов количественного определения фармацевтических препаратов/ С.А. Манина, В.В. Андросов, Е.В. Тимо-феева./Материалы IV Всесоюзного съезда. фармацевтов (тезисы докладов).- Воронеж.- 1981.- С.303-305.

53. Беликов, В.Г. Определение антипирина, амидопирина и анальгина методом дифференциальной спектрофотометрии в водно-щелочных растворах/ В.Г. Беликов, С.Х. Муцуева./Актуальные вопросы фармации.- Ставрополь." 1974.- С. 124-126.

54. Hou, Li. Определение парацетамола в тонизирующем препарате методом дифференциальной спектрофотометрии/ Li Hou./Pharm. Ind.-1988.-V.19, №4.- Р.222-224.

55. Вергейчик, Е.Н. Использование физико-химических и титриметрических методов в анализе фармацевтических препаратов и лекарственных форм/ Е.Н. Вергейчик, В.Е. Годяцкий, И.Л. Богдасарова./Лекарственные вещества.- 1979.- С.111-119.

56. Репрезенцева, C.M. Спектрофотометрические методы анализа и контроля качества медицинских препаратов/С.М. Репрезенцева, В.Л. Драгун. /Вопросы сушки и термообработки.- Минск.- 1976.- С.79-86.

57. Беликов, В.В. ВНИИ Химии и технологии лекарственных средств/ В.В. Беликов, Т.В. Точкова, Н.Т. Колесник.- Харьков.- 1987.- 154с.

58. Беликов, В.Г. Совершенствование фотометрических методов анализа лекарственных веществ/ В.Г. Беликов, Коковкин-Щербак, Е.Н. Вергейчик, Г.В. Алфавимова./Материалы IV Всесоюзного съезда фармацевтов (тезисы докладов).- Воронеж.- 1981.-С.301-302.

59. Бузланова, М.М. Фотометрическое определение полигексаметиленгуанина в водных растворах / М.М. Бузланова, И.В. Каранди, Д.Х. Китаева./ Заводская лаборатория. Диагностика материалов.- 2003.- Т. 69, № 4.-С. 18-19.

60. Бузланова, М.М. Фотометрическое определение полигексаметилен-гуанидина в водных растворах в виде комплекса с йодом/ М.М. Бузланова, И.В Каранди, Д.Х. Китаева./ Заводская лаборатория. Диагностика мате-риалов.-2003.- Т.69, №4.- С.18-19.

61. Garcia, С. Flow-injection spectrophotometric determination of diclofenac or mefenamic acid in pharmaceuticals / C. Garcia, C. Sanchez-Pedreno, I. Albero, C. Garcia./ Microchimica Acta.- 2001.- V.136, № 1-2.- P.67-71.

62. Коренман, И.М. Фотометрический анализ. Методы определения органических соединений/ И.М. Коренман. М.: Химия.- 1970.- 343с.

63. Мирзаева, Х.А. Экстракционно-фотометрическое определение димедрола и папаверина в лекарственных формах / Х.А. Мирзаева, М.С. Ахме-дова, А.Ш. Рамазанов, С.А. Ахмедов./ Журнал аналит. химии.- 2004.- Т.59, № з,- С. 245-249.

64. Богословская, О.Н. Экстракционно-фотометрический метод определения папаверина/ О.Н. Богословская, Ж.П. Котляр./ Методы анализа биологически активных и лекарственных веществ. Научные труды.- Пермь.-1975.- вып.9.- С.59-61.

65. Асаг, N. Spectrophotometric simultaneous analysis of analgin adamon mixture in injection preparations / N. Acar, F. Onur./ Anal. Lett.-1996.- V.29, № 5.- P. 763-773.

66. Мирзаева, Х.А. Экстракционно-фотометрическое исследование ионных ассоциатов папаверина и хинина с галлионом/ Х.А. Мирзаева, Н.И. Иванова./ Журнал аналит. химии.- 1984.- Т39, №9.- С.1691-1696.

67. Арстамян, Ж.М. Экстракционно-фотометрическое определение анальгина с кристаллическим фиолетовым в лекарственных препаратах/ Ж.М. Арстамян, М.А. Мкртчян./ Хим. журн. Армении.- 2006.- Т. 59, № 1.- С. 6467.

68. Сергеев, Г.М. Экстракционно-фотометрическое определение лекарственных веществ с использованием редоксреакции/Г.М. Сергеев, И.В. Дорофеева, Л.Г. Степанова./Журнал аналит. химии.-1986.-Т.51, №9.-С.1694-1697.

69. Alaa, S.A. Colorimetric procedure for the microdetermination of the anti-bilharzial drug praziquantel and its applications to pharmaceutical formulations (abstract) / S.A. Alaa, S. Ahmed Ibrahim./ Microchimica Acta.- 2001.- V.137, № 1-2,-P. 35-40.

70. Васюк, С.О. Спектрофотометричне визначення парацетамолу в лшарських формах / С.О. Васюк, М.Л. Алтунш, В.В. Петренко./Мед. xiM.-2004.-Т.6, № 1.- С. 77-80.

71. Валика, В.В. Спектрофотомтерическое определение томатозида в препарате паковирин / В.В. Валика, В.А. Юрасова, М.П. Филиппов, А.Г. Фул-га./ Химико-фармацевтический журнал.-2003.-Т.37, № 8.- С.48-51.

72. Красникова, А.В. Спектрофотометрическое определение пеницилли-новых антибиотиков / А.В. Красникова, А.А. Иозеп./ Химико-фармацевтический журнал.- 2003.- Т.37, № 9.- С. 49-51.

73. Филипева, С.А. Применение 1,2-нафтохинон-4-сульфоната натрия для спектрофотометрического определения некоторых лекарственныхсредств/ С.А. Филипева, Л.Н.Стрелец, В.В. Петренко, В.П. Буряк./ Журнал аналит. химии.-1989.- Т.54, №1.- С.131-134.

74. Farajzadeh, A. A simple and reliable spectrophotometric method for the determination of ascorbic acid in pharmaceutical preparations / A. Farajzadeh, S. Nagizadeh./J. of Analyt. Chem.- 2003.- V.58, № 10.- P. 927-932.

75. Григорьева, В.Ю. Нитроглицерин. Качественный и количественный анализ (обзор) / В.Ю. Григорьева, О.А. Ефременко, Ю.Я. Харитонов./ Химико-фармацевтический журнал.- 2004.- Т.38, №10,- С.39-43.

76. Akram, М. El-Didamony. Indirect spectrophotometric determination of diltiazem hydrochloride in pure form and pharmaceutical formulations / M. El-Didamony Akram. / Central European Journal of Chemistry.-2005.-V.3, № 3.- P.520-536.

77. Воскресенская, O.O. Изучение взаимодействия церия (IV) с димети-лантипирином/ О.О. Воскресенская, Е.Н. Наприенко, Н.А. Скорик./ Журнал неорг. химии.- 1999.- Т.44, № 9. С.1507-1510.

78. Наприенко, Е.Н. Изучение взаимодействия Fe3+ с антипирином и анальгином / Е.Н. Наприенко, Н.А. Скорик, И.Н. Шафоростова./ Журнал неорг. химии.-2000.- Т.45, № 8.- С.1344-1349.

79. Наприенко, Е.Н. Взаимодействие железе (III) с лигандами пирозолоно-вого ряда/ Е.Н. Наприенко./Автореферат диссертации на соискание ученой степени канд. хим. наук.- Томск.- 2001.- 22 с.

80. Ma, Weixing. Определение анальгина в лекарстве с помощью железо-родонатной спектрофотометрии/Weixing Ma./Spectrosc. and Spectral Anal.-1999.- V.19, № 4.- P. 638-639.

81. Kelani, Kahdiga M. Different spectrophotometric methods for the determination of cimetidine, ranitidine hydrochloride and famotidine / Kahdiga M. Kelani, Azza M. Aziz, Maha A. Hegazy, Fattah Laila Abdel./ Spectrosc. Lett.-2002.- V.35, № 4.- P.543-563.

82. Aman, Tehseen. Ammonium molybdate as a spectrophotometric reagent for the determination of indomethacine in pure and pharmaceutical preparations / Tehseen Aman, Fouzia Naureen, Asrar Ahmad Kazi./ Anal. Lett.-2002.- V.35, №6.-P. 1007-1020.

83. Suling, Feng. Sequential injection technique for the determination of chlor-promazine hydrochloride in pure form and pharmaceutical formulations / Feng

84. Suling, Li Cunhong, Fan Jing, Chen Xingguo./ J. of Analyt. Chem.-2007.-V.62, №3.- P.233 -237.

85. Nonoyata, Matsuo. Cycloauration and cuclopalladation of papaverin / Ma-tsuo Nonoyata./ Synth, and React. Inorg. and Metal, Org. Chem.-1999.- V.29, №1.-P. 119-124.

86. Aggarwal, S.G. Flow injection analysis of Zn and Co in beverages, biological, environmental and pharmaceutical samples / S.G. Aggarwal, K.S. Patel./ Fresenius'J. of Analyt. Chem.- 1998.- V.362, № 7-8.- P.571-576.

87. Siegfried, Wartewig. Pharmaceutical applications of Mid-IR and Raman spectroscopy/ Wartewig Siegfried, H.H. Reinhard, T. Neubert./ Advanced Drug Delivery Reviews.- 2005.- V.57.- P. 1144-1170.

88. Мустафин, Р.И. Модифицирование эудрагита Е включением его в ин-терполиэлектролитный комплекс/ Р.И. Мустафин, Г. Ван бен Моотер, В.А. Келенова./Химико-фармацевтический журнал.-2005.-Т.39, № 1.- С. 3941.

89. Дорофеев, B.JL Бетаиноподобная структура и инфракрасные спектры лекартвенных веществ группы фторхинолонов / В.Л. Дорофеев./ Химико-фармацевтический журнал.- 2004.- Т.38, № 12.- С. 50-53.

90. Kong, R. Быстрое разрешение перекрывающихся инфракрасных спектров путем обработки кривых методами линейной регрессии. (abstract)/ R. Kong, Н. Kim./ Analysis.- 2001.- № 3.- P. 20-22.

91. Сабко, B.E. Первый опыт практического использования экспресс-анализатора качества продукции на основе ИК-Фурье спектрометра ближнего диапазона / В.Е. Сабко./ Методи х1м1чного анал1зу.- Ужгород: ВАТ УкрНДЮВД. Видавництво Валер1я Падяка.- 2005. 54с.

92. Васильева-Александрова, П. О механизме реакции анальгин тетразо-лоновая соль. 1. Разделение продуктов щелочного гидролиза анальгина методом ТСХ/ П. Васильева-Александрова / Науч. тр. Пловдив, ун-т хим.-1981.- Т. 19, №9.- С.51-61.

93. Васильева-Александрова, П. О механизме реакции анальгин тетразо-лоновая соль. 2. Изолирование продуктов щелочного гидролиза анальгина/ П. Васильева-Александрова./ Науч. тр. Пловдив, ун-т хим.- 1981.- Т. 19, №3.- С.51-61.

94. Васильева-Александрова, П. О механизме реакции анальгин тетразо-лоновая соль. 3. Идентификация продуктов щелочного гидролиза анальгина / П. Васильева-Александрова./ Науч. тр. Пловдив, ун-т хим.- 1981.-Т.19, №3.- С.63-69.

95. Антонова, Т.В. Влияние катионов металов на определение полимерных флокулянтов с применением трифенилметановых красителей/ Т.В. Антонова, В.И. Вершинин, Ю.М. Дедков./ Журнал аналит химии.-2006.- Т.61, №5.- С.506-509.

96. Муравьев, И.А. Технология лекарственных форм / И.А. Муравьев. -М.Медицина.-1988.- 480с.

97. Машковский, М.Д. Лекарственные средства. 15 изд. / М.Д. Машков-ский.-М.: «Новая волна».- 2006.-1206с.

98. Бобылев, Р.В. Технология лекарственных форм/ Р.В. Бобылев, Г.П. Грядунова, Л.А. Иванова.-М.:Медицина.- 1991.- Т.2.- 65с.

99. Государственный реестр лекарственных средств.-М:Медицина.-2001.-1024с.

100. Арзамасцев, А.П. Создание национальной номенклатуры вспомогательных веществ в России/ А.П. Арзамасцев, А.В. Титова, А.И. Лутцева, В.Л. Багирова./ Химико-фармацевтический журнал.- 2002.- №9.- С.55-56.148. ФС 42-1869-82

101. Булатов, М.И. Практическое руководство по фотометрическим методам анализа -5-е изд./ М.И. Булатов, И.П. Калинкин. Л.: Химия.- 1986,- 432с.