Выделение и исследование кислых компонентов липидов древесной зелени пихты (Abies sibirica) и ели (Picea sibirica) тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

На правах рукописи

Хуршкайнен Татьяна Владимировна

Выделение и исследование кислых компонентов липидов древесной зелени пихты (Abies sibirica) и ели (Picea sibirica)

02.00.10 - Биоорганическая химия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Москва - 2004

Работа выполнена в лаборатории лесохимии Института химии Коми научного центра Уральского отделения Российской Академии Наук.

Научный руководитель: член-корреспондент РАН, доктор

химических наук А.В. Кучин

Официальные оппоненты: доктор химических наук, В А Козлов,

кандидат химических наук Л.Б. Дмитриев

Ведущая организация: Московский государственный

университет, химический факультет

Защита состоится «2^>> декабря 2004 г. в */^часов на заседании диссертационного совета К 220.043.04 при Московской сельскохозяйственной академии имени К.А.Тимирязева по адресу: 127550, Москва, Тимирязевская улица, 49.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке НЦБ МСХА

Автореферат разослан

'Ж

ноября 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета МСХА, кандидат химических наук

Г.П.Токмаков

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Комплексное использование лесных ресурсов предусматривает переработку отходов древесной зелени, которые образуются в процессе лесозаготовок и лесопиления. Эти отходы являются потенциальным сырьем для производства лечебных и биологически активных препаратов.

Экстрактивные вещества, содержащиеся в зеленой и древесной частях хвойных растений, играют роль регуляторов целого ряда процессов, обеспечивающих жизнедеятельность растений. Так, хвоя и побеги пихты являются источником богатейшего набора тритерпеноидов, среди которых особенно ценные свойства проявили соединения кислотной природы. Биологические испытания тритерпеновых кислот пихты сибирской показали высокую эффективность воздействия их на сельскохозяйственные растения.

Технология экстракционной переработки древесной зелени заключается в извлечении из измельченного сырья различными растворителями биологически активных веществ. Недостаток экстракции органическими растворителями заключается в их пожароопасности и токсичности. Кроме того, при использовании органических растворителей выход экстрактивных веществ недостаточно высокий. Поэтому проблема разработки новых способов выделения экстрактивных веществ из древесной зелени актуальна.

Диссертационная работа выполнялась как раздел комплексной темы лаборатории лесохимии Института химии Коми НЦ УрО РАН «Химия и технология растительных веществ; научные основы переработки и использования низкомолекулярных компонентов из растительного сырья как источника химических продуктов для органического синтеза; изучение физиологических свойств полученных соединений» (№ 01.960.010008, № 01.2.00102727).

Цель работы. Разработка метода эмульсионной экстракции древесной зелени, изучение и анализ кислых компонентов пихты и перспективы их применения.

РОС НАЦИОНАЛЬНА*;

БИБЛИОТЕКА I

№

Научная новизна и практическая ценность. Предложен новый метод переработки древесной зелени хвойных пород с использованием водных растворов оснований. Проведены исследования закономерностей эмульсионного выделения низкомолекулярных компонентов из растительного сырья.

Разработан и запатентован способ выделения тритерпеновых кислот из древесной зелени пихты. На его основе получен новый высокоэффективный биопрепарат «Вэр ва», обладающий ростстимулирующим и фунгицидным действием на растения. Наработаны опытные партии биопрепарата и проведены успешные биологические испытания в НИПТИ АПК республики Коми, МСХА им. К.А.Тимирязева, в Саратовском институте биохимии и физиологии растений и микроорганизмов.

Публикации и апробация работы. Результаты исследований были доложены и обсуждены на 2-ом и 3-ем Всероссийском совещании «Лесохимия и органический синтез» (Сыктывкар 1996, 1998), 1-ой, 2-ой и 3-й Всероссийской конференции «Химия и технология растительных веществ» (Сыктывкар 2000, Казань 2002, Саратов 2004), на научно-технической конференции «Наука - производству. Внедрение новейших разработок научных и проектных организаций в промышленность» (Москва. 2001), XVII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Казань, 2003).

По материалам диссертации опубликовано две статьи, тезисы семи докладов на Всероссийских конференциях, получено три патента РФ.

Структура диссертационной работы. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов, списка цитируемой литературы и приложений. Библиография включает литературные ссылки на 123 научные публикации.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Поиск новых способов выделения экстрактивных веществ из древесной зелени имеет немаловажное значение. Традиционный способ бензиновой экстракции, разработанный в Санкт-Петербургской лесотехнической академии, имеет много недостатков: многократная обработка высушенного сырья при

температуре 80°С с выходом экстрактивных веществ 1-3 % от веса абсолютно сухого сырья (а.с с). Способ выделения, разработанный в Новосибирском институте органической химии, основанный на экстракции древесной зелени пихты смесью этилацетата с бензином и метилтретбутиловым эфиром, позволяет извлекать кислых компонетов липидов до 5-6 % от веса а.с.с.

В предлагаемом в данной работе способе выделения липидов из хвои экстрагирующей эмульсией не используются органические растворители. Размолотая древесная зелень (ДЗ) обрабатывается водным раствором основания, при этом происходит образование водорастворимых солей смоляных и высших жирных кислот, содержащихся в ДЗ. Соли смоляных кислот являются поверхностно-активными веществами (ПАВ). Соли высших жирных кислот относятся к мицеллообразующйм соединениям. Образующиеся мицеллы солюбилизируют, т.е. растворяют в себе те вещества - в данном случае неполярные липиды древесной зелени, - которые в воде не растворимы. В процессе массобмена в реакционной суспензии образуется эмульсия «масло в воде». Таким. образом извлечение кислых и нейтральных компонентов древесной зелени происходит в результате экстракции эмульсией.

Выделение экстрактивных веществ из ДЗ состоит из следующих стадий (схема 1):

Схема 1

1) измельчение древесной зелени, что обеспечивает вскрытие клеток и тканей, способствует проникновению водно-щелочного раствора и ускорению процесса экстрагирования в целом,

2) смешение измельченного сырья с водным раствором щелочи (ИаОН или КОН) или соды (№2СОз или К2С03),

3) стадия набухания - при использовании высушенного сырья,

4) перемешивание смеси и образование эмульсии,

5) фильтрация, отделение твердой фазы,

6) деэмульгирование,

7) экстракция нейтральных компонентов неполярньш растворителем (петролейным эфиром),

8) подкисление водной смеси раствором минеральной кислоты для перевода натриевых солей кислых компонентов в кислоты,

9) экстракция кислот полярным растворителем (диэтиловым эфиром)

В качестве объектов изучения способа эмульсионной экстракции растительного сырья нами использовались ДЗ ели и пихты

1. Влияние основания и других факторов на выход экстрактивных веществ

Влияние концентрации щелочных агентов на выход экстрактивных веществ из ДЗ пихты изучали в реакторе объемом 1 литр с механическим перемешиванием (скорость 300 оборотов в минуту). Концентрацию раствора щелочи NaOH варьировали от 0,5% до 20%. (рис 1)

О 5 10 15 20 25

концентрация ЫаОН, %

Рис.1 Зависимость выхода кислых компонентов из ДЗ пихты от концентрации раствора NaOH, a - гидромодуль 1/8, б-гидромодуль 1/10, в-гидромодуль 1/12

В проведенных опытах использовали гидромодуль (отношение массы сырья к массе раствора) от 1/8 до 1/12. Как следует из полученных результатов, наиболее полное извлечение кислых компонентов имеет место при концентрации раствора NaOH 5 % и гидромодуле процесса 1/10. Выход кислых компонентов при концентрации раствора NaOH 10-20 % не зависит от гидромодуля и составляет 4,5-5 % от веса а.с.с.

При использовании в качестве экстрагирующего агента раствора соды (рис. 2) выход экстрактивных веществ выше при гидромодуле процесса 1/10. Причем максимальный выход достигается при концентрации раствора соды 10%.

4.5

О -1-,-,-,-,

О 5 10 15 20 25

концентрация Ыа2С03, %

Рис. 2. Зависимость выхода кислых веществ из ДЗ пихты от концентрации раствора № 2С03, а-гидромодуль 1/8, б-щпромодуль 1/10.

Проведенные эксперименты показали, что при использовании раствора щелочи NaOH выход экстрактивных веществ почти в два раза выше, чем при использовании раствора соды №2СОз (рис.3). Разницу в выходах экстрактивных веществ в зависимости от использования растворов щелочи и соды можно объяснить тем, что в щелочном растворе в процессе интенсивного механического перемешивания происходит разрушение растительных тканей древесной зелени, что облегчает процесс извлечения кислых и нейтральных компонентов. Кроме этого в реакционной среде под действием раствора

щелочи протекает гидролиз сложных эфиров ДЗ, что также увеличивает выход кислых компонентов.

О 5 10 . 15 20 25

концентрация основания, %

Рис.3. Зависимость выхода кислых компонентов ДЗ пихты от концентрации гидроокиси и карбоната натрия.

В опытах с применением растворов гидроксида калия и карбоната калия использовали гидромодуль процесса 1/10 (рис.4). При сравнении выхода экстрактивных веществ с использованием оснований натрия и калия следует, что при исследовании экстракции растворами выход кислых

компонентов выше. Поэтому в дальнейших опытах использовались растворы №ОН и №2С03.

концентрация, %

Рис. 4. Зависимость выхода кислых компонентов из ДЗ пихты от концентрации растворов КОН и К.2СО3.

Разницу в выходах экстрактивных веществ при использовании растворов оснований натрия и калия можно объяснить влиянием ионной силы раствора.

Поскольку ионная сила растворов разная, то разным будет состав образующихся мицелл. Изменение состава мицелл ведет к изменению степени извлечения экстрактивных веществ.

Таким образом, исследования способа эмульсионной экстракции ДЗ пихты показали, что при использовании гидромодуля процесса 1/10 и 5%-ного раствора NaOH извлекается наибольшее количество кислых компонентов и составляет 6 % от веса а.с.с.

При изучении метода эмульсионной экстракции использовали также ДЗ ели (рис. 5).

о 3 т-1—-г-1-1-1-1-1-1-I-1-1

0123456789 10 11 концентрация №ОН, %

Рис.5. Зависимость выхода кислых компонентов из ДЗ ели от концентрации NaOH, a - гидромодуль 1/8, б-гидромодуль 1/10, в-гидромодуль 1/12.

На основании проведенных экспериментов можно сделать вывод, что наибольший выход кислых компонентов из ДЗ ели достигается при концентрации раствора щелочи №ОН 5% и гидромодуле 1/10 и 1/12. При этом выход кислых компонентов из ДЗ ели составляет 4,5 — 4,8 % от веса а.с.с.

Влияние продолжительности обработки ультразвуком на выход экстрактивных веществ.

Известно, что при действии УЗ эффективность экстракции повышается. Учитывая строение растительного сырья, которое представляет собой разветвленную систему капилляров, при воздействии ультразвука вследствие изменения давления при сжатии и разряжении возникает эффект «губки», улучшающий проникновение экстрагента в капилляры ДЗ.

Эксперименты на ДЗ ели проводили с использованием прибора УЗДН-А при частоте генератора и излучателя 22 ± 1,65 кГц. Проведенные опыты (рис. 6) показали, что оптимальным временем озвучивания является интервал от 10 до 20 минут. Увеличение времени обработки ультразвуком не приводит к повышению выхода экстрактивных веществ, что свидетельствует о полноте извлечения за 10-20 минут.

4 5,4

и

X « 5.2 - К

л о 5

5 ^ _ „

i ш 4'8 о I 4,6 3 I 4,4 ' | 4,2

5 4

Рис.6. Зависимость выхода экстрактивных веществ ДЗ ели от продолжительности воздействия ультразвука

Влияние поверхностно-активных веществ на выход экстрактивных веществ.

Снижение поверхностного натяжения благотворно сказывается на процессе экстрагирования. На рисунке 7 приведены результаты ряда опытов по выделению кислых веществ из ДЗ пихты эмульсионными системами, содержащими от 0,5 до 2,0 % экзогенных ПАВ. В качестве ПАВ использовали коммерческий алкилбензол-сульфонат натрия для CMC. ,

Как следует из полученных данных, добавление в реакционный раствор 1% ПАВ повышает выход кислых компонентов из ДЗ пихты на 2 % от веса а.с.с, дальнейшее увеличение количества ПАВ не приводит к существенному увеличению выхода экстрактивных веществ.

время обработки УЗ, мин

Рис.7. Зависимость выхода кислых компонентов из ДЗ пихты эмульсионными системами, содержащими ПАВ.

Выделение экстрактивных веществ в аппарате объемом 20 л.

В процессе изучения способа эмульсионной экстракции для разработки технологии переработки древесной зелени пихты был испбльзован аппарат объемом 20 л с механическим перемешиванием.

Рис.8. Выход экстрактивных веществ из ДЗ пихты в аппарате объемом 20 л, гидромодуль 1/10.

Выход экстрактивных компонентов (рис.8) в этом аппарате ниже, чем в лабораторном экстракторе, что можно объяснить изменением гидродинамических условий перемешивания. Максимальный выход кислых компонентов ДЗ пихты при использовании 5 % раствора NaOH составил 4,7 % от веса а.с.с.

Таким образом был изучен новый способ эмульсионной экстракции ДЗ пихты и ели. Установлено, что оптимальными условиями выделения кислых компонентов являются следующие:

1) 5%-ный водный раствор NaOH, гидромодуль 1/10.

2) Использование ультразвука в течение 10-20 мин.

3) Добавление 1 % ПАВ в раствор.

Главным преимуществом нового способа является то, что для выделения экстрактивных веществ из древесной зелени не используются пожароопасные и токсичные органические растворители. При этом степень извлечения экстрактивных веществ увеличивается по сравнению с бензиновой экстракцией в 1,5-1,8 раза. По сравнению со способом извлечения кислот древесной зелени, разработанным в Новосибирском институте органической химии выход кислот повышается в 1,2 раза. Необходимо также отметить, что для проведения эмульсионной экстракции нет необходимости в предварительном высушивании сырья, в отличие от экстракции органическими растворителями.

2. Исследование фракционного состава кислых компонентов, выделенных эмульсионной экстракцией из ДЗ пихты.

Согласно литературным данным сумма компонентов кислой части экстракта ДЗ пихты сибирской представляет собой сложную смесь тритерпеновых кислот ланостанового и биогенетически родственных ему структурных типов. Тритерпеновые кислоты находятся в сырье в виде сложной смеси и наиболее эффективным оказывается их разделение адсорбционной хроматографией на силикагеле.

Обработкой суммы кислых компонентов ДЗ пихты, полученных способом эмульсионной экстракции, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия были выделены «сильные» кислоты. Далее сумма «сильных» кислот была разделена методом колоночной хроматографии на 4 фракции и исследована методами ИК- и ЯМР-спектроскопии.

Во фракции I (7 %) суммы «сильных» кислот методом тонкослойной хроматографии при сравнении с эталоном обнаружены жирные кислоты. Состав жирных кислот был изучен методом ГЖХ их метиловых эфиров. Сумма жирных кислот состоит из пальмитиновой (23%), стеариновой (4%), олеиновой (18%), линолевой (35%), линоленовой (15%) кислот. По данным ЯМР-спектроскопии во фракции I содержится также дегидроабиетиновоя кислота.

В спектрах ЯМР фракции II (выход 22,5%) при сопоставлении полученных данных с литературными можно выделить сигналы тритерпеновой • дикетокислоты - фирмановой кислоты 1.

21

18 =

28 29

13

В спектре ЯМР С соединения 1 наблюдаются сигналы атомов углерода С3 (219 м.д.) и С23 (202 м.д.). Сигнал третичного атома С7 при двойной связи наблюдается в области 121,57 м.д..

После метилирования фракции II диазометаном из нее был выделен метиловый эфир фирмановой кислоты 2 (12% от суммы кислот), что было подтверждено данными ЯМР спектроскопии. По данным ПМР спектроскопии выделен цис-изомер метилового эфира фирмановой кислоты 2 - сигнал атома Н24 наблюдается в области 6,15 м.д. По литературным данным сигнал протона Н24транс-изомера должен находится в более слабом поле (7,05 м.д.).

По данным спектра ЯМР 13С во фракции III (45%) присутствуют 23-оксо-мариесовая кислота А (3), 23-оксо-мариесовая кислота Б (4), изофирмановая кислота (5), что согласуется с литературными данными. Для соединений 3 и 4 наблюдаются сигналы атома С3 в области 76,58 м.д. и сигналы атома С23 в области 202,04 и 202,50 м.д., сигнал атома С24 - 133,00 м.д. и С25 - 140,00 м.д. Наличие во фракции III соединения 5 подтверждается сигналом при 207,11 м.д.

в спектре ЯМР С, характерным сигналу а т о в этой кислоте. В ПМР спектре фракции III присутствуют сигналы атомов Н27 метиленовой группы при 5,55 м.д и 6,25 м.д..

По данным ИК-спектроскопии во фракции IV (24 %), элюированной ацетоном, присутствуют фенольные кислоты. В спектре наблюдаются колебания ОН-группы в области 3452 см'1, полосы поглощения 1622,1518, 1470, 918, 776 см'1 относятся к колебаниям бензольного кольца. Кроме того наблюдаются валентные колебания связи С-0 фенольной ОН группы (полоса'поглощения при и валентные колебания связи спиртовой ОН группы при

1020 и 1080 см"1.

Таким образом, «сильные» кислоты, выделенные эмульсионным способом из ДЗ пихты, примерно на 70% состоят из тритерпеновых кислот.

Из литературы известно, что тритерпеновые а-, |3-ненасыщенные у-кето-кислоты в жестких условиях (действие горячего этанольного раствора щелочи) подвергаются реакции фрагментации и образуют нейтральные тринортритерпеновые производные.

При хроматографическом разделении нейтральных компонентов, выделенных из раствора, полученного эмульсионным способом переработки ДЗ пихты и концентрированного упариванием под вакуумом и при температуре 55°С, было выделено кристаллическое соединение. При сравнении

спектральных данных полученного вещества с литературными данными осадок был идентифицирован как дикетон 6 (25, 26, 27-тринор-9|3-ланост-7-ен-3,23-дион), который является продуктом фрагментации фирмановой кислоты 1

При рассмотрении спектра ЯМР 13С установлено, что все сигналы атомов

#-ч22

углерода циклической части молекулы до атома С совпадают с таковыми для фирмановой кислоты 1 (рис 9)

Необходимо отметить, что при изучении нейтральных компонентов ДЗ пихты, выделенных эмульсионной экстракцией без последующего концентрирования, соединение 6 не было обнаружено

Реакция фрагментации в боковой цепи молекул тритерпеновых а-, {3-ненасыщенных у-кетокислот представляет интерес как метод получения тетрациклических тринортритерпеновых производных, а также для идентификации компонентов смеси тритерпеновых кислот Поэтому была проведена обработка всей суммы кислот пихты 5% раствором NaOH при температуре 70°С Полученная сумма нейтральных тритерпеновых производных проанализирована методом хроматомасс-спектрометрии

По данным хроматомасс-спектрометрии сумма тритерпеновых производных состоит из 3 основных соединений 6 (32%) , 7 (43%) ,8 (5%) (схема 2). Причем соединение 7 является продуктом фрагментации 23-оксо-мариесиовой кислоты А (3), а соединение 8 - продуктом фрагментации мариесиовой кислоты С

Рис.9. Спекгры.ЯМР С метилового эфира фирмановой кислоты 2 и дикетона 6.

Таким образом, при исследовании экстракта кислых компонентов ДЗ пихты, выделенных способом эмульсионной экстракции, установлено присутствие в нем тритерпеновых кислот 1, 3, 4, 5. По данным хроматомасс-

спектрометрии основными компонентами смеси являются фирмановая кислота (1) и 23-оксо-мар'иесиовая кислота А (4).

3. Биопрепарат из ДЗ пихты.

Изучение влияния различных биопрепаратов на жизнедеятельность растений показывает, что, как правило, они оказывают положительное влияние на ростовые процессы при использовании в малых концентрациях. Биологические испытания суммы тритерпеновых кислот ДЗ пихты показали

высокую эффективность воздействия их на сельскохозяйственные растения. Сотрудниками Новосибирского института органической химии разработан биопрепарат «Силк», действующим веществом которого являются тритерпеновые кислоты пихты. «Силк» получают экстракцией древесной зелени пихты метилтретбутиловым эфиром.

На основе эмульсионного способа переработки древесной зелени разработана технология получения нового высокоэффективного натурального биопрепарата «Вэрва» (аналога препарата «Силк»). Химический состав активной части препарата «Вэр ва» представляет собой смесь натриевых солей тритерпеновых кислот, выделенных из ДЗ пихты способом эмульсионной экстракции. Биопрепарат «Вэрва» в отличие от препарата «Силк» содержит также нейтральные (монотерпеноиды, полипренолы, каротиноиды) компоненты. Для изучения влияния кислых компонентов пихты на сельскохозяйственные растения были проведены испытания самого биопрепарата, а также четырех фракций кислот, описанных выше, и дикетона 6.

По результатам исследования влияния биопрепарата «Вэрва» и его компонентов на энергию прорастания семян овса сделаны следующие выводы:

1) самая эффективная ростстимулирующая доза действующего вещества (ДВ) биопрепарата - 2,5 мг/л;

2) все фракции кислых компонентов оказывают стимулирующее воздействие на энергию прорастания и всхожесть семян овса;

3) дикетон 6 не влияет на энергию прорастания и всхожесть семян овса, но стимулирует рост растений.

Изучение действия биопрепарата «Вэрва» на сельскохозяйственные растения.

Биопрепарат «Вэр ва» испытывался в течение пяти лет в Научно-исследовательском и проектно-технологическом институте агропромышленного комплекса республики Коми на посевах картофеля, капусты, моркови, многолетних трав. Основной способ использования препарата - опрыскивание

растений в фазу вегетации водными растворами «Вэр ва», а также замачивание семян в растворе биопрепарата перед посадкой.

Цель исследований: изучение влияние различных доз биопрепарата на рост, развитие, продуктивность, устойчивость к болезням сельскохозяйственных культур. Для сравнения растения обрабатывали также биопрепаратом «Силк».

Результаты испытания биопрепарата на посевах картофеля в период 2000-2003 г.г. показали, что обработка клубней и растений в период вегетации способствовала достоверному повышению ранней урожайности на 12-20 % и общей урожайности на 15-20 % (табл. 1).

Таблица 1

Продуктивность картофеля сорта Детскосельский

Дозировка ДВ препарата, г/га Урожайность на 65-й день Урожайность в периодуборки

т/га % к контролю т/га % к контролю

0,5 26,4 117 34,5 118

5 26,9 120 . 35,0 120

10 25,1 112 34,0 116

«Силк» 26,5 118 34,6 118

Контроль 22,5 100 29,0 100

НСРо,5* 3,1 3,8 ...

* НСРо5 - наименьшая существенная разница.

Исследованиями установлено, что обработка картофеля биопрепаратом снизила пораженность картофеля болезнями. В 2001-2003 г.г. во время вегетации не отмечено поражения фитофторозом, ризоктониозом и кольцевой гнилью

Использование биопрепарата «Вэр ва» положительно повлияло на облиственность, размер и массу моркови. Более интенсивный рост корнеплодов обеспечил более высокую урожайность (табл. 2).

Урожайность капусты увеличилась на всех растениях, обработанных биопрепаратом (табл.3), самый высокий урожай 50,1 т/га; что на 22% больше, чем в контроле.

Таблица2

Урожайность моркови сорта Нандрин (средняя за 2001-2003 г.г.)

Дозировка ДВ препарата,г/га Ранняяурожа йность (на 10 08 -15 08) Общийурожай Товарность, %

т/га % кконтролю т/га % к контролю

0,6 17,3 114,2 57,4 105,7 92,3

6 18,2 122,1 64,9 119,2 91,2

12 18,9 122,3 63,6 118,3 83,9

Силк 17,5 114,4 60,6 111,6 85,1

Контроль 15,3 100 54,3 100 82,7

• пер. 1,0 5,7

Таблица 3

Урожайность капусты белокочанной сорта Краутман в зависимости от обработки биопрепаратом (средняя за 2000-2003 г.г.)

Дозировка ДВ препарата, г/га Урожайность, т/га % к контролю Товарных кочанов, %

0,08 48,2 118 91,8

0,8 50,1 122 91,3

1,6 47,3 116 92,3

Силк 48,7 119 86,2

Контроль 40,9 100 85,8

пер. 2,9

Необходимо отметить, что в неблагоприятном по метеорологическим условиям 2000 году (холодная погода в мае, отсутствие осадков с 19 июня по 25 июля, резкое похолодание в августе и недостаточное количество осадков в сентябре) урожайность капусты составила 200 % к контролю, а вес кочанов быш в 2 раза выше по сравнению с контролем

Биопрепарат испытывался также на посевах многолетних трав В 1999 году семенная продуктивность клевера лугового была в 2-5 раз выше за счет увеличения количества семян и их веса на 10-12% по сравнению с контролем

Таким образом, показано, что в результате биологических испытаний биопрепарат «Вэр'ва» обнаружил комплекс полезных свойств Он увеличивает

урожайность сельскохозяйственных растений, повышает иммунитет растений к различным заболеваниям, уменьшает потери урожая при хранении.

Экономический эффект от использования биопрепарата «Вэр ва» В таблице 4 приведен расчет экономического эффекта от применения биопрепарата «Вэр 'ea»na посевах картофеля. Рассчетная себестоимость 1 кг (по действующему веществу) биопрепарата 13 тыс. рублей. Экономическая эффективность от применения биопрепарата на посевах картофеля по отношению к необрабатываемым участкам составляет 2,37 тысячи рублей прибыли с 1 гектара.

Таблица 4

Показатели экономической эффективности от применения биопрепарата «Вэр'ва»

Показатели Контроль Биопрепарат

Площадь посева, га 100 100

Урожайность, т/га 29 35

Объем производства, т 2900 3500

Дополнительный урожай, т 0 600

Цена реализации, руб./т 4000 4000

Валовой доход, тыс руб. 11600 14000

Дополнительный доход, полученный от применения биопрепарата, тыс. руб. - 2400

Дополнительные затраты на применение биопрепарата, руб. в том числе: - 30,9

Стоимость препарата, тыс. руб.* - 19,5

Затраты на применение, тыс. руб. - 11,4

Дополнительные затраты на уборку урожая (прибавки), тыс. руб. - 1

Чистая прибыль, тыс. руб. - 2369

В том числе на 1 га посевов, тыс руб. - 2,369

*Г1ри трехкратной обработке картофеля дозой 5г/га

выводы

1. Предложен новый эмульсионный способ извлечения низкомолекулярных компонентов из растительного сырья. Подобраны оптимальные условия выделения кислых компонентов из древесной зелени пихты и ели, позволяющие выделять экстрактивные вещества на 20-40 % больше по сравнению с известными методами.

2. Исследован состав кислых компонентов древесной зелени пихты и доказано, что в процессе эмульсионной экстракции выделяются тритерпеновые кислоты. Основными тритерпеновыми кислотами являются фирмановая кислота и 23-оксо-мариесиовая кислота А.

3. Показано, что при концентрировании раствора натриевых солей тритерпеновых кислот при температуре 55°С под вакуумом, происходит образование нейтрального продукта фрагментации фирмановой кислоты (25, 26, 27-тринор-9р-ланост-7-ен-3,23-диона).

4. Запатентован способ выделения тритерпеновых кислот из древесной зелени пихты. На основе выделенных компонентов предложен новый высокоэффективнный биопрепарат «Вэр'ва» (аналог препарата «Силк»).

5. Испытания биопрепарата «Вэр'ва» на различных сельскохозяйственных культурах показали, что при опрыскивании растений в период вегетации и замачивании семян перед посадкой урожайность повышается на 20-25 %, снижается заболеваемость растений, уменьшаются потери урожая при хранении.

6. При включении биопрепарата «Вэр'ва» в список разрешенных к применению на территории России пестицидов, рекомендуется использовать его в качестве регулятора роста на посевах картофеля, моркови, капусты, многолетних трав и других растений. Экономический эффект от применения биопрепарата на посевах картофеля составляет 2,37 тыс. руб. прибыли с одного гектара.

Основное содержание работы изложено в следующих публикациях:

1. Хуршкайнен Т.В., Кучин А.В., Карманова Л.П., Королева А.А., Кучин ВА Экстракция водным раствором основания как основа новой технологии получения фунгицидов и стимуляторов роста растений // "Химия и компьютерное моделирование. Бутлеровские сообщения". 2002. №7. - С. 61-64.

2. Хуршкайнен Т.В., Кучин А.В., Карманова Л.П., Королева А.А., Сычев Р.Л. Выделение липидов из хвойной зелени // «Лесохимия и органический синтез». Труды Коми НЦ УрО РАН. 1996. - № 144. - С. 53-60.

3. Хуршкайнен Т.В., Кучин А.В., Карманова Л.П., Королева А.А., Сычев Р.Л. Эмульсионный способ выделения липидов. Патент РФ № 2117487, 1998.

4. Хуршкайнен Т.В., Кучин А.В., Карманова Л.П., Королева А.А., Сычев Р.Л. Способ выделения липидов с использованием ультразвука. Патент РФ № 2119347, 1998.

5. Хуршкайнен Т.В., Кучин А.В., Карманова Л.П. Способ выделения'биологически активной суммы кислот из древесной зелени пихты. Патент РФ № 2161149, 2000.

6. Хуршкайнен Т.В., Кучин А.В., Карманова Л.П. Кислоты из древесной зелени ели // 2-е Всероссийское совещание «Лесохимия и органический синтез»: Тез. докладов. - Сыктывкар. 1996. - С. 37.

7. Хурщкайнен Т.В., Кучин А.В., Карманова Л.П. Выделение кислот из дрвесной зелени хвойных пород (Picea, Pinus, Abies) и березы (Betula). 3-е Всероссийское совещание «Лесохимия и органический синтез»: Тез. докладов. - Сыктывкар. 1998.-С. 51.

8. Хуршкайнен Т.В., Кучин А.В., Карманова Л.П., Королева А.А., Чудаков В.В. Природные терпеноиды и пигменты // 1-ая Всероссийская конференция « Химия и технология растительных веществ»: Тез. докладов. - Сыктывкар. 2000. - С. 80.

9. Хуршкайнен Т.В., Кучин А.В., Карманова Л.П., Королева А.А., Чудаков В.В. Новый высокоэффективный натуральный биопрепарат - стимулятор роста и защиты растений // Научно-техническая конференция «Наука - производству. Внедрение новейших разработок научных и проектных. организаций в промышленность»: Тез. докладов. - Москва. 2001. - С. 70.

10. Хуршкайнен Т.В., Кучин А.В., Карманова Л.П., Королева А.А., Кучин В.А. Экстракция водным раствором основания как основа новой технологии получения фунгицидов и стимуляторов роста растений // 2-ая Всероссийская конференция «Химия и технология растительных веществ»: Тез. докладов. - Казань. 2002. - С. 10.

11. Хуршкайнен Т.В., Кучин А.В., Карманова Л.П., Королева А.А., Кучин ВА Новая технология переработки растительного сырья // 2-ая Всероссийская конференция « Химия и технология растительных веществ»: Тез. докладов. - Казань. 2002. - С. 8.

12. Хуршкайнен Т.В., Королева А.А., Кучин В.А., Карманова Л.П., Кучин А.В. Химия и технология получения биорегуляторов. XVII Менделеевский съезд по общей и прикладной химии. Казань, 2003. Тез. докладов. - С.243.

13. Хуршкайнен Т.В., Скрипова Н Н., Кучин А.В. Эффективная технология получения продуктов переработки древесной зелени хвойных // 3-я Всероссийская конференция « Химия и технология растительных веществ»: Тез. докладов. -Саратов. 2004. - С. 289.

»23402

РНБ Русский фонд

2005-6 875

Заказ № 53 Объем 1,25 п л Тираж 100 экз

Участок оперативной полиграфии Коми научного центра УрО РАН 167982, г Сыктывкар, ул Первомайская, 48

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

2.1. Классификация химического состава древесной зелени.

2.2. Химическая переработка древесной зелени.

2.3. Методы исследования экстрактивных веществ древесной зелени.v.;.

2.4. Тритерпеноиды пихты.

2.5. Регуляторы роста растений.

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

3.1. Эмульсионный способ выделения экстрактивных веществ из древесной зелени пихты и ели

3.2. Влияние концентрации основания и других факторов на выход экстрактивных веществ.

3.3. Исследование фракционного состава кислых компонентов, выделенных эмульсионной экстракцией из древесной зелени пихты.

3.4. Биопрепарат «Вэр ва» из древесной зелени пихты.64'

4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ВЫВОДЫ.

Постоянное возобновление в процессе фотосинтеза является одним из главных преимуществ растительной биомассы перед невозобновляемыми источниками органического сырья в аспекте их будущего использования. Комплексное рациональное использование лесных ресурсов предусматривает переработку отходов древесной зелени, которые образуются в процессе лесозаготовок и лесопиления. Эти отходы являются потенциальным сырьем для производства лечебных и биологически активных препаратов.

Экстрактивные вещества, содержащиеся в зеленой и древесной частях хвойных растений, играют роль регуляторов целого ряда процессов, обеспечивающих жизнедеятельность растений. Так, древесная зелень и кора пихты являются источником богатейшего набора тритерпеноидов, среди которых особенно ценные свойства проявили соединения кислотной природы. Изучение их влияния на жизненный цикл важнейших сельскохозяйственных растений привело к выводу, что они способны повышать урожайность и устойчивость растений к стрессовым факторам.

Технология экстракционной переработки древесной зелени заключается в извлечении из измельченного сырья различными растворителями биологически активных веществ. Недостаток экстракции органическими растворителями заключается в том, что они пожароопасны, токсичны и обеспечивают невысокий выход экстрактивных веществ. Поэтому проблема разработки новых способов выделения экстрактивных веществ из древесной зелени актуальна.

Диссертационная работа выполнялась как раздел комплексной темы лаборатории лесохимии Института химии Коми НЦ: УрО РАН «Химия и технология растительных веществ; научные основы переработки и 4 использования низкомолекулярных компонентов из растительного сырья как источника химических продуктов для органического синтеза; изучение физиологических свойств полученных соединений» (№ 01.960.010008, №01.2.00102727).

Целью данной работы является разработка метода эмульсионной экстракции древесной зелени, изучение и анализ кислых компонентов пихты и перспективы их применений.

Новый метод переработки хвойных и лиственных пород изучался с использованием водных растворов оснований. Проведены исследования закономерностей эмульсионного выделения низкомолекулярных компонентов из растительного сырья. Разработан и запатентован способ выделения тритерпеновых кислот из древесной зелени пихты.

В ходе проведенных исследований разработан способ получения нового высокоэффективного биопрепарата «Вэрва» - стимулятора роста и защиты растений от инфекций и проведены успешные испытания в научно-исследовательском проектно-технологическом институте агропромышленного комплекса республики Коми, МСХА им. К.А.Тимирязева, Саратовском институте биохимии и физиологии растений и микроорганизмов.

Результаты исследований были доложены и обсуждены на 2-ом и 3-ем Всероссийском совещании «Лесохимия и органический синтез» (Сыктывкар 1996, 1998), 1-ой, 2-ой и 3-й Всероссийской конференции «Химия и V технология растительных веществ» (Сыктывкар 2000, Казань 2002, Саратов 2004), на научно-технической конференции «Наука — производству. Внедрение новейших разработок научных и проектных организаций в промышленность» (Москва. 2001), XVII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Казань, 2003).

По материалам диссертации опубликовано две статьи, тезисы семи докладов на Всероссийских конференциях, получено три патента РФ.

Диссертация состоит из введения, трех глав, выводов, списка литературы и приложений. Библиография включает литературные ссылки на 123 научные публикации. I.

5. Выводы

1. Предложен новый эмульсионный способ извлечения низкомолекулярных I компонентов из растительного сырья. Подобраны оптимальные условия выделения кислых компонентов из древесной зелени пихты и ели, позволяющие выделять экстрактивные вещества на 20-40 % больше по сравнению с известными методами.

2. Исследован состав кислых компонентов древесной зелени пихты и доказано, что в процессе эмульсионной экстракции выделяются тритерпеновые кислоты. Основными тритерпеновыми кислотами являются фирмановая кислота и 23оксо-мариесиовая кислота А.

1,

3. Показано, что при концентрировании раствора натриевых солей тритерпеновых кислот при температуре 55 °С под вакуумом, происходит образование нейтрального продукта фрагментации фирмановой кислоты (25, 26, 27-тринор-9Р-ланост-7-ен-3,23-диона).

4. Запатентован способ выделения тритерпеновых кислот из древесной зелени пихты. На основе выделенных компонентов предложен новый высокоэффективнный биопрепарат «Вэр'ва» (аналог препарата «Силк»).

5. Испытания биопрепарата «Вэр'ва» на различных сельскохозяйственных культурах показали, что при опрыскивании растений в период вегетации и t, замачивании семян перед посадкой урожайность повышается на 20-25 %, снижается заболеваемость растений, уменьшаются потери урожая при хранении.

6. При включении биопрепарата «Вэр'ва» в список разрешенных к применению на территории России пестицидов, рекомендуется использовать его в качестве регулятора роста на посевах картофеля, моркови, капусты, многолетних трав и других растений. Экономический эффект от применения биопрепарата на посевах картофеля составляет 2,37 тыс. руб. прибыли с одного гектара.

1. Ягодин В.И. Основы химии и технологии переработки древесной зелени. Издательство ЛГУ, Ленинград, 1981.

2. Левин Э.Д., Репях С.М. Переработка древесной зелени. Лесная промышленность, Москва, 1984.

3. Солодкий Ф.Т., Агранат А.Л. В кн.: Использование живых элементов дерева. Л., 1969, вып.1, № 119, с.ЗЗ.

4. Черняева Г.Н., Долгодворова С.Я., Степень Р.А. Утилизация древесной биомассы. Красноярск, ИЛиД СО АН СССР, 1987, с.49.

5. Мосягин В.И. Вторичные ресурсы лесного комплекса. Издательство ЛТА, Санкт- Петербург,, 1998, с.52.

6. Бергельсон Л.Д., Дятловицкая Э.В., Молотковский Ю.Г., Батраков С.Г., Барсуков Л.И., Проказова Н,В. Препаративная биохимия липидов. Наука, Москва, 1981, с.67.

7. Васильев С.Н., Рощин В.И., Выродов В.А. Состав экстрактивных веществ древесной зелени сосны обыкновенной. Издательство ВНИПИЭИЛеспром, Москва, 1991.

8. Пентегова В.А.,( Дубовенко Ж.В., Ралдугин В.А., Шмидт Э.Н. Терпеноиды хвойных растений. Наука, Новосибирск, 1987, с.4.

9. Рощин В.И., Баранова Р.А., Соловьев В.А. 'Терпеноиды хвои Picea Abies.// Химия природных соединений, 1986, № 2, с.168.

10. Ралдугин В.А., Деменкова Л.И., Пентегова В.А. Терпеноиды живицы ели Шренка.//Химия природных соединений, 1991, № 3, с.323.

11. Черненко Г.Ф., Шмидт Э.Н. Экстрактивные вещества коры некоторых видов хвойных семейства Pinaceae: выделение, состав, применение.//Химия в интересах устойчивого развития, 1997, № 5, с.95.

12. Репях С.М., Степень Р.А. Малоотходная технология переработки древесной зелени пихты.//Химия в интересах устойчивого развития, 1997, № 5, с.117.

13. Кретович В.Л. Основы биохимии растений. Москва, 1971, с. 168.

14. Солодкий Ф.Т., .Агранат A.JI. Производство хвойной хлорофилло-каротиновой пасты. JI., 1956, с.32.

15. Томчук Р.И., Томчук Г.Н. Древесная зелень и её использование в народном хозяйстве. Москва, 1973, с. 160.

16. Этцель М.С. К вопросу о концепции перспективного развития лесохимии.// Гидролизная и лесохимическая промышленность, 1991, № 1, с.1.

17. Юдкевич Ю.Д., Васильев С.Н., Ягодин В.И. Получение химических продуктов из древесных отходов. Издательство JITA, Санкт-Петербург, 2002, с. 83.

18. Пономарев В.Д. Экстрагирование лекарственного сырья. Издательство «Медицина», Москва, 1976, с.6.

19. Аксенова Е.Г., Дбиев Р.Ш., Островский Г.М., Васильев С.Н., Рощин В.И., Алябьева М.Ю. Извлечение экстрактивных веществ древесной зелени при резонансных колебательных воздействиях.//Лесной журнал; 1993, № 2-3, с. 176.

20. Патент № 2015150 RU. Рощин В.И., Васильев С.Н., Павлуцкая И.С., Баранова Р.А., Скачкова Н.М. Способ переработки древесной зелени хвойных пород.

21. Патент № 2041646 RU. Репях С.М., Воронин В.М., Ушанова В.М. Способ получения продуктов из хвойной древесной зелени.

22. Патент № 2163827 RU. Абрамов Я.К., Голицын В.П., Молокеев В.А., Сидоров С.И., Малютин В.Е., Борисов С.И., Белоус В.К. Способ экстрагирования материалов.

23. Рощин В.Н., Скачкова Н.М., Ляндрес Г.В., Максимчук П.Л. Углекислотный экстракт из древесной зелени сосны обыкновенной.//Химия природных соединений, 1988, № 4, с.529.

24. Бессонов А.Г., Бедрин А.К. Химия и использование экстрактивных веществ дерева. Горький, 1990, с.128.

25. Бедрин А.К., Косюкова JI.B. Состав углекислотного экстракта древесной зелени сосны Pinus sylvestris.// Гидролизная и лесохимическая промышленность. 1992, № 1,с.13.

26. Ушанова В.М., Воронин В.М., Репях С.М. Комплексная переработка древесной зелени хвойных.//Лесной журнал, 1997, № 6, с.88.

27. Химия биологически активных природных соединений. Под редакцией Преображенского Н.А. Издательство «Химия», Москва, 1976, с.202.

28. Искандаров Р.С., Аминов С.Н., Авезов Х.Т. Особенности экстракции эфирных масел из растительного сырья в присутствии : поверхностно-активных веществ.// Химия природных соединений, 1998, № 6, с.648.

29. Ширшова Т.И. Экстракция как метод выделения биологически активных соединений: краткий обзор .//Вестник института биологии Коми НЦ УрО РАН, 2002, №7, с. 10.

30. Левданский В.А':, Полежаева Н.И., Макиевская А.И., Кузнецов Б.Н. Безотходная переработка коры пихты.// Химия растительного сырья, 2000, № 4,с.21.

31. Даугавиетис М.О., Дерума В.Я. Выработка витаминной муки из древесной зелени.// Лесное хозяйство, 1978, № 6, с.60.

32. Ралдугин В.А., Хан В.А., Дубовенко Ж.В., Пентегова В.А. Схема группового разделения компбнентов живиц хвойных. Терпеноиды живицы Pinus Cembra.// Химия природных соединений, 1976, № 5, с.609.к

33. Хроматографический анализ в химии древесины. Издательство «Зинатне», Рига, 1975, с.101.

34. Баранов Т.В., Вахрушева А.И., Черняева Г.Н. Технология и оборудование производства пихтового масла (обзор). Москва, 1976, с.40.

35. Репях С.М., Степень Р.А. Возможности и перспективные направления утилизации древесной зелени пихты. Вестник СибГТУ, 1999, №1, с.66.

36. Norm Т. Some aspects of the chemistry of the order pinales.//Phytochemistry, 1972, vol.11, p. 1231.

37. Семенов A.A. Очерк химии природных соединений. Новосибирск, Наука, 2000, с. 220.i

38. S.Uyeo, J.Okada, S.Matsunaga and J.W.Rowe. The structure and the stereochemistry of abieslactone.// Tetrahedron, 1968, № 24, p.2859.

39. J.P.Kutney, N. D.Westcott, F.H.Allen, N.W.Isaacs, O.Kennard, W.D.S.Motherwell. The structure of abieslactone.//Tetrahedron Letters, 1971, № 37, p. 3463.

40. F.H.Allen, N.W.Isaacs, O.Kennard and W.D.S.Motherwell. Crystal and Molecular Structure of Abieslactone, (23R)-3a-Methoxy-5a,9B-lanosta-7,24-diene-26,23-lactone.//J.C.S.Perkin II, 1973, № 5, p.498.

41. Ралдугин В.А., Шакиров M., Друганов А.Г. Тритерпеноиды из видов Abies. Сообщение 18. Спектры ЯМР абиеслактона и его дегидропроизводного.//Известия Академии наук. Серия химическая, 1996, № 11, с.2790.

42. Рощин В.И., Ралдугин В.А., Баранова Р.А., Пентегова В.А. Новые тритерпеновые кислоты хвои Abies sibirica.// Химия природных соединений. 1986, № 5, с.648.

43. Ралдугин В.А., Гатилов Ю.В., Багрянская И.Ю., Ярошенко Н.И.1.

44. Тритерпеноиды из видов Abies. I. Абиесоновая кислота — тритерпеноид с новым углеродным скелетом из живицы Abies sibirica.// Химия природных соединений. 1986, № 5, с.584.

45. Ралдугин В.А., Гатилов Ю.В., Рыбалова Т.В., Рашкес Я.В. Тритерпеноиды из видов Abies hill. П. Абиесолидовая кислота новый 3,4-секоланостаноид из живицы Abies sibirica.// Химия природных соединений. 1986, № 6, с.688.

46. Ралдугин В.А., Кукина Т.П., Ярошенко Н.И., Пентегова В.А. Тритерпеноиды из видов Abies. III. 24-метилен-3,4-секо-циклоарт-4(28)-ен-3-овая кислота из хвои Abies sibirica.// Химия природных соединений. 1987, № 2, с.306.V

47. Ралдугин В.А., Шевцов С.А., Ярошенко Н.И., Гатилов Ю.В., Багрянская И.Ю., Деменкова Л.И., Пентегова В.А. Тритерпеноиды из видов Abies IV. Новые тритерпеновые кислоты хвои Abies sibirica.// Химия природных соединений. 1987, № 6, с.824.

48. Шевцов С.А., Ралдугин В.А. Тритерпеноиды из видов Abies. V. Строение и спектральные свойства основных 9Р Н-ланостановых кислот хвои пихты сибирской.//Химия природных соединений, 1988, № 3, с.364.

49. Ралдугин В.А.,. Шевцов С.А., Рощин В.И., Пентегова В.А. Тритерпеноиды из видов Abies. VI. "Изофирмановая" и (24Е)-ланоста-8,24-диен-3,23-дион-26-овая кислоты из хвои пихты сибирской.//Химия природных соединений, 1988, № 6, с.816.

50. Ралдугин В.А., Шевцов С.А., Шакиров М.М.,Рощин В.И., Пентегова В.А. Тритерпеноиды из видов Abies. VII. Новые ланостановые лактоны из хвои пихты сибирской.//Химия природных соединений. 1989, № 2, с.207.

51. Шевцов С.А., Ралдугин В.А. Тритерпеноиды из видов Abies. VIII.

52. Новый метокси мариесианоид и два 3,4-секомариесианоида из хвои Abies

53. SibiricaV/Химия природных соединений. 1989, № 2, с.212.

54. Ярошенко Н.И.,. Ралдугин В.А. Тритерпеноиды из видов Abies. IX. Тритерпеновые лактоны коры Abies Sibirica. Химия природных соединений. 1989, № 2, с.220.

55. Лейбюк Т.В., Шмидт Э.Н., Ралдугин В.А. Тритерпеноиды из видов Abies. X. Две новые 3,4-секотритерпеновые кислоты из живицы пихты белой.//Химия природных соединений, 1990, № 6, с.765.

56. Ралдугин В.А., Шевцов С.А., Лейбюк Т.В. Тритерпеноиды из видов Abies. XI. Легкая фрагментация в боковой цепи молекул тритерпеновых а-, р-ненасыщенных у-кетокислот.// Химия природных соединений, 1991, № 2, с.206.

57. Ралдугин В.А., Шакиров М.М., Гатилов Ю.В., Шевцов С.А.t

58. Тритерпеноиды из видов Abies. XIV. Спектры ЯМР З-кетомариесиа-7,14-диеновых и 3-кето-9Р-ланост-7-еновых производных.//Сибирский химический журнал, 1992, Вып.2,с.101.

59. Ралдугин В.А., Шакиров М.М., Шевцов С.А. Тритерпеноиды из видов Abies. XV. Биомиметический синтез ветчиолида из абиеслактона.// Сибирский химический журнал, 1992, Вып.З, с.65.

60. Гришко В.В., Багрянская И.Ю., Гатилов Ю.В., Шакиров М.М., Ралдугин В.А. Тритерпеноиды из видов Abies. Сообщение 16. Получение и кристаллическая структура нового тринорланос!таноида.//Известия Академии наук. Серия химическая, 1996, № 3, с.748.

61. Гришко В.В., Друганов А.Г., Шакиров М.М., Ралдугин В.А.

62. Гришко В.В., Шакиров М.М., Ралдугин В.А. Тритерпеноиды из видов Abies. Сообщение 24. Фотохимическая фрагментация тринор-мариесианового гидроксикетона.//Известия Академии наук. Серия химическая, 1999, № 7, с. 1401.

63. Ралдугин В.А., Шевцов С.А. Тритерпеноиды растений рода Abies НШ.//Химия природных соединений, 1990, № 4, с.443.V

64. S.Hasegawa, N.Kaneko and Y.Hirose. Triterpenes from the seed of Abies Firma.//Phytochemistry, 1987, vol.26, № 4, p. 1095.

65. M.H.Benn, L.J.Yelland. Ranunculin.//Canadian Journal of Chemistry, 1968, № 46, p. 729.

66. S. Hasegawa, T.Miura, Y.Hirose, Y.Iitaka. A new rearranged lanostanoid, mariesiic acid A, from the seed of Abies Mariesii.//Chemistry Letters, 1985, p. 1589.

67. S.Hasegawa, T.Miura, N.Kaneko, Y.Hirose, Y.Iitaka. Further new rearranged lanostanoids from the seeds of Abies Mariesii and A. Firma.//Tetrahedron, 1987, vol.43, № 8, p.1775.

68. WJ.Baas. Naturally occurring seco-ring-A-triterpenoids and their possible1..biological significance.//Phytochemistry, 1985, vol.24, № 9, p. 1875.

69. Исаев М.И., Горовиц М.Б., Абубакиров H.K. Тритерпеноиды циклоартанового ряда.// Химия природных соединений. 1985, № 4, с.431.

70. J.P.Kutney, D.S.Grierson, G.D.Knowles, N.D.Westcott, I.H.Rogers. The structures and absolute stereochemistry of cyclograndisolide and epicyclograndisolide, novel cyclopropane triterpene lactones.//Tetrahedron, 1973, № 29, p. 13.

71. J.-C.Muller and G.Ourisson. A new relative of grandisolide from the needles of Abies alba.// Phytochemistry, 1974, vol.13, p.1615.

72. W.Steglich, M.Klaar, L.Zechlin und H.J.Hecht. Abietospiran, das Triterpen der WeiBtannenride (Abies alba).//Angew.Chem., 1979, vol.91, № 9, p.751.

73. A.F.Barrero, J.F.Sanchez, E.J.Alvarez-Manzaneda, M.Munoz and A.Haidour. Diterpenoids and cyclolanostanolides from Abies marocana.//Phytochemistry, 1992, vol.31, №2, p.615.

74. A.F.Barrero, J.F.Sanchez, E.J.Alvarez-Manzaneda,; M.M.Dorado, A.Haidour.

75. Endoperoxide diterpenoids and other constituents from Abies marocana.// Phytochemistry,i1991, vol.30, №2, p.593.

76. R.Tanaka, A.Inosiri, M.Yoneda, T.Ishida, A.Numada, S.Matsunaga. A tetracyclic triterpene lactone and other constituents from the bark of Abies firma.// Phytochemistry, 1990, vol.29, >fe 10, p.3263.

77. R.Tanaka, S.Matsunaga. Triterpene lactones from the stem bark of Abies firma.// Phytochemistry, 1991, vol.30, № 6, p. 1983.

78. R.Tanaka, H.Aoki, S.Wada, S.Matsunaga. Two nowel lanostave-type triterpenes from the stem bark of Abies mariesii.// Journal of Natural Products, 1999, vol.62, p. 198.

79. R.Tanaka and S.Matsunaga. 9f3-Lanostane-type triterpene lactones from theьstem bark of Abies veitchii.//Journal of Natural Products, 1991, vol.54, № 5, p.1337.

80. R.Tanaka, S.Matsunaga. Veitchiolide, a tetracyclic triterpene lactone from Abies Veitchii.// Phytochemistry, 1990, vol.29, № 10, p.3267.

81. R.Tanaka, Y.Usami, Y.In, T.Ishida, S.Matsunaga. The structure of spiroveitchionolide, an unusual lanostane-type triterpene lactone from Abies veitchii.//Chem.Soc., Chem. Commun., 1992, p. 1351.

82. Patent DE 10035591, 2002. Ammon H., Schweizer S., Safayhi H. Production of tetracyclic and pentacyclic triterpene acids comprises precipitation from biological material, especially plant resin, with calcium or magnesium salt.:

83. Ильин С.Г., Шарыпов В.Ф., Стоник B.A., Антипин М.Ю., Стручковt

84. J.Takayasu, R.Tanaka, S.Matsunaga, H.Ueyama, H.Tokuda, T Hasegawa, A.Nishino and A.Iwashima. Anti-tumor-promoting activity of derivatives of abieslactone, a natural triterpenoid isolated from several Abies genus.//Cancer Letters, 1990, vol.53, p.141.

85. Kohoshima Т., Kozuka M. and Tokuda H. Studies on inhibitors of skin-tumor promotion. Inhibitions effects of triterpenes from Abies. J. Nat. Prod., 1987,50, p. 11671170.

86. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия. Изд.Просвещение, М., 1987,с.715.

87. Штильман М.И. Фитоактивные полимеры.//Соросовский образовательный журнал, 1998, №10, с.23.

88. Ларионов Г.И., Кулемин С.В. Регуляторы роста — в современные технологии.//Плодородие, 2003, № 1, с.21.

89. Шакирова Ф.М., Гилязетдинов Ш.Я., Хлебникова Т.Д., Кантюков В.А. Стратегия использования регуляторов роста растений.//Вестник АН РБ, 2003, т.8, № 1, с.14.

90. Соколов М.С. Биопестициды: использование и способы применения.//Агрохимия, 2000, № 5, с.85.

91. Гамбург К.З. Брассины стероидные гормоны растений.//Успехи современной биологии, 1986, т. 102, вып.2(5), с.314.ь

92. J.W.Mitchell, N.Mandava, J.F.Worley, J.R.Plimmer, M.V.Smith. Brassins -a New Family of Plant Hormones from Rape PollenV/Nature, 1970, vol.225, p.1065.

93. Муромцев Г.С., Чкаников Д.И., Кулаева O.H., Гамбург К.З. Основы химической регуляции роста и продуктивности растений. Издательство Агропромиздат, Москва, 1987, с.382.

94. T.H.Maugh. Synthetic analogs of brassinolide prove very effective, while the mystery of triacontanol s inconsistency may finally have been solved.//Science, vol.212, p.33.

95. Кораблева Н.П., Платонова Т.А. Биохимические аспекты гормональной регуляции покоя и иммунитета растений.//Прикладная биохимия и микробиология, т.31, № 1, с.103.1. V ;

96. Новожилов К.В., Рощин В.И., Смирнова И.М., Розова В.Н., Федорова С.П. Биопестициды на основе продуктов переработки древесной зелени хвойных пород.//Агрохимия, 1994, № 7-8, с.68.

97. Патент № 2154942 RU. Буров В.Н., Конюхов В.П., Черменская Т.Д., Новикова И.И., Быкова Г.А. .Способ получения средства защиты растений из хвои ели европейской (Picea excelsa L.)

98. Патент № 2108803 RU. Ралдугин В.А., Друганов А.Г., Климов В.П., Шубин А.Н., Чекуров В.М. Способ получения биологически активной суммы тритерпеновых кислот.

99. Патент № 2108107 RU. Ралдугин В.А., Друганов А.Г., Климов В.П., Шубин А.Н., Чекуров В.М Способ получения биологически активной суммы тритерпеновых кислот.

100. Патент № 2061487 RU. Ралдугин В.А., Шевцов С.А., Щукин Г.И., Ляндрес Г.В., Михеев К.А. Способ получения биологически активной суммы солей тритерпеновых кислот.

101. Патент № 2106090 RU. Чекуров В.М., Сычев И.П., Сычев А.И., Сычева В.П. Способ защиты растений сахарной свеклы от грибных болезней.

102. Патент № 2121272. Чекуров В.М., Самсонов Ю.Н., Киров Е.И., Макаров В.И., Ралдугин В.А., Друганов А.Г., Сычев И.П. Способ стимулирования роста и развития масличных культур.

103. Юртов Е.В., Королева М.Ю. Экстрагирующие эмульсии для извлечения веществ из водных сред.// Успехи химии, 1991, т.60, вып.11; с.2422.

104. Карманова Л.П., Королёва А.А., Хуршкайнен Т.В., Сычёв Р.Л., Кучин А.В. Выделение липидов из хвойной зелени.//Лесохимия и органический синтез (Труды Коми научного центра УрО РАН №144). Сыктывкар, 1996, с.53.

105. Способ выделенйя липидов с использованием ультразвука. Кучин А.В., Карманова Л.П., Королёва А.А., Хуршкайнен Т.В., Сычёв Р.Л. Патент № 2119347 РФ, бюл. № 27, 1998.

106. Эмульсионный способ выделения липидов Кучин А.В., Карманова Л.П., Королёва А.А., Хуршкайнен Т.В., Сычёв Р.Л. Патент № 2117487 РФ, бюл. № 23, 1998.

107. Кучин А.В., Карманова Л.П., Королёва А.А., Сычёв Р.Л. Выделениег

108. Васильев С.Н., Рощин В.И., Выродов В.А. Состав экстрактивных веществ древесной зелени сосны обыкновенной.//Лесохимия и подсочка. Москва, 1991, выпуск 1, с.5.

109. Шеремет Л.С., Гусинцева А.В., Зайцева Т.Л., Пармон С.В. Углекислотный экстракт торфа, химический состав, биологические особенности и . перспективы использования.//Химия твердого топлива, 1999, № 6, с.22.

110. Наканиси К. Инфракрасные спектры и строение срганическихсоединений. Издательство Мир, Москва, 1965.i

111. Карманова Л.П., Королева А.А., Кучин А.В. Выделение липидов издревесной зелени хвойных пород. Нейтральные вещества древесной зелени пихты.//Химия древесины, лесохимия и органический синтез. Сыктывкар, 1999, с. 6.

112. Бобкова К.С., Перчаткин П.А. Лесные ресурсы республики Коми и перспективы их использования.//Вестник Коми научного центра Уральского отделения РАН, выпуск 23. Сыктывкар, 2003, с. 121.

113. Колесников А.Л. Технический анализ продуктов органического синтеза. Издательство «Высшая школа», Москва, 1966, с.22.

114. Алексеев B.H. Количественный анализ. Издательство «Химия», Москва, 1972, с.53.

115. Синтезы органических препаратов. Т.2, с.174, 373.

116. Строна И.Г. Общее семеноведение полевых культур. Издательство «Колос», Москва, 1996, с.67.

117. Генкель П.А. Физиология растений с основами микробиологии. Москва, 1962, с.54.

118. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта (с основами статистической обработки результатов исследований). Издательство «Колос», Москва, 1979, с. 416.

119. Место проведения испытаний: опытно-производственное хозяйство научно-исследовательского и проектно-технологического института агропромышленного комплекса Республики Коми.

120. Цель проводимого исследования изучить влияние различных доз биопрепарата «Вэр'ва» на рост, развитие, продуктивность, устойчивость к болезням сельскохозяйственных культур, определение оптимальных доз препарата.

121. Установлено, что препарат «Вэр'ва» в оптимальных дозах повышает раннюю урожайность картофеля на 23 30 %; общую урожайность картофеля - на 22 - 25 %, моркови - на 26 %; капусты - на 20 %.

122. Биопрепарат «Вэр'ва» повысил сохранность моркови в период зимнего хранения на 18 30 %.

123. Председатель комиссии: моргунов Г.Т./

124. Члены комиссии: JO* ■ -/Машукова С.И./- /Коковкина С .В./