Выделение, структурная идентификация и химическая модификация пектиновых веществ растения амарант и некоторых модельных соединений тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.03 ВАК РФ

Р^^рав^ц дгкописи

- 3 ЯНЗ 20С1)

Цепаева Ольга Викторовна

ВЫДЕЛЕНИЕ, СТРУКТУРНАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ХИМИЧЕСКАЯ МОДИФИКАЦИЯ ПЕКТИНОВЫХ ВЕЩЕСТВ РАСТЕНИЯ АМАРАНТ И НЕКОТОРЫХ МОДЕЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ

02.00.03 - органическая химия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

КАЗАНЬ - 2000

Работа выполнена в Институте органической и физической химии им. А. Е.Арбузова Казанского научного центра Российской академии наук.

Научные руководители:

академик РАН А.И.Коновалов

доктор химических наук, профессор В.Ф.Миронов

Оффициальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор П.А.Гуревич доктор химических наук А.Р.Бурилов

Ведущая организация:

Институт химии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук

)

Защита состоится декабря 2000 г. на заседании диссертационного Совета К 053.29.02 по химическим наукам Казанского государственного университета (г. Казань, ул. Кремлёвская, 18, КГУ, Буглеровская аудитория).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке КГУ.

Отзывы на автореферат просим присылать по адресу: 420008, г. Казань, ул. Кремлёвская, 18, Научная часть КГУ.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного Совета, кандидат химических наук

Г-^а-л /Г Г)

Актуальность темы. Биополимеры полисахаридной структуры — важнейший класс природных соединений, находящих практическое использование в различных областях науки и техники, в частности в качестве источника моносахаридов. Особое место среди растительных полисахаридов занимает пектин, который входит в состав структурных элементов клеточной ткани высших растений и выполняет функции связывающих и упрочняющих компонентов клеточной стенки, а также регулирует водный обмен. Велико значение пектина в повседневной жизни — он является универсальной пищевой добавкой, находит широкое применение в медицине как селективный детоксккант тяжелых металлов и регулирует обменные процессы в организме человека. Как правило, пектин получают из яблок и цитрусовых, что в климатических условиях России не рентабельно. Поэтому поиск новых источников пектиновых веществ является актуальным. Предварительные исследования травы амаранта — нетрадиционной культуры, дающей значительный прирост биомассы в условиях России, показывают, что она может явиться таким перспективным источником полисахаридов. С химической точки зрения пектин относится к одному из наименее изученных веществ в отличие от хорошо известных целлюлозы и крахмала. Исследование химических свойств этого сложного биополимера требует в свою очередь изучения свойств модельных соединений, таких как а-гидроксикарбоновые кислоты. Одними из наиболее важных направлений химической модификации как пектиновых веществ, так и модельных соединений, являются реакции этерификации, амидирования, аци-лирования и фосфорилирования. Последняя позволяет влиять на физико-химические характеристики пектиков, а также на сорбционную емкость и селективность комплексообразования, так как при этом появляются дополнительные центры координации. Поскольку пектиновые вещества, как правило, содержат в качестве элементарного звена природную а-гидроксикислоту - галактуроновую, казалось целесообразным исследовать закономерности реакции фосфорилирования и свойства образующихся при этом продуктов на соответствующих доступных модельных соединениях, таких как миндальная, молочная и некоторые другие гидроксикарбоновые кислоты. Необходимо также отметить, что фосфорили-рование самих гидроксикарбоновых кислот изучено на небольшом числе примеров.

Цель исследования. Целью исследования являлось 1) разработка способов выделения кислых полисахаридов из растения амарант, исследование их физико-химических характеристик, в том числе особенностей структуры методами ИКС и спектроскопии ЯМР, 2) разработка способов химической модификации пектиновых веществ (этерификация, амидирование, ацилирование, фосфорилиро-вание), исследование реакции фосфорилирования модельных гидроксикарбоновых кислот и продуктов на их основе, 3) выявление физиологической активности полученных соединений.

Научная новизна. Впервые разработаны способы получения пектина из травы амаранта в условиях гидролиза слабыми кислотами, такими как щавелевая, лимонная, молочная, янтарная и проведена их сравнительная характеристика. Методами ИКС и спектроскопии ЯМР |3С впервые исследована структура молекул пектина из амаранта. Показано, что он близок по своим свойствам к

яблочному пектин у. Впервые проведена химическая модификация пектином,; веществ амаранта: получены как высоко-, гак и низкометоксидированные образ цы пектина, а также фосфорилиро ванны; производные. Впервые предаожеш для алкилирования пектина ноЕые реагенты на основе хлорцролаколпиридиние вых солей, содержащих остатки фармакофобных групп. Впервые проведен детальное исследование процесса фосфорилирования природных а-гкдроксикар боновых кислот, выявлены условия образования циклических производных трех-, четырех-, пятикоординированным атоыом фосфора, показала зависимост результата от порядка смешения реагентоз и присутствия в реакционной сред гидрохлорида амина. Впервые выделен кристаллический „одастереомер фосфо рана со связью Р-Н, содержащий три хиральных центра, структура кото рол доказана методом РСА. Впервые найден* реакция расширения пятичленноп гетероцикла, содержащего фрагмент Р-О-С(О), до шестич ленного под действие» высокоактивных карбонильных соединении.

Практическая значимость работы заключается прежде всего в подтвержден*!! перспективности амаранта как промышленного источника пектиновых веществ I разработке новых способов их выделения с использозанием экологически прием лемых слабых кислот, а также в разработке: подходов для химической модификации пектиновых веществ амаранта. Пред пожен новый способ трансформацш фосфорилированных производных гидрокеикарбоновых кислот код действие*, карбонильных соединений, приводящий к получению функционально замещенных шесткчлешшх гетероциклов — 1,3,2- и 1,4,2-диоксафосфоринанов. Показан; перспективность дальнейшего изучения пектина из амаранта в качестве протек-тивного антидиабетического средства, повышающего процент выживаемо;™ животных, кардиопротекгорного средства против ишемнческой болезни.

Основные положения, выносимые на защиту: способы выделения пектиновы; веществ из амаранта и их структурно-химическое соответствие кислым полисахаридам; результаты спектрального изучения состава и сгрукгуры пектиновых ве-еств амаранта, их физико-химические характеристики; способы модификации пектинов и их спектральное подтверждение; результаты фосфорилирования модельных а—гидрокеикарбоновых кислот; спектральшя интерпретация структуры полученных гетероциклов.

Апробация работы и публикации. Результаты работы обсуждались на следующих конференциях: I и II международных симпозиумах "Ноше и нетрадиционные растения и перспективы их практического использования" (Пущине, 1995, 1997), международной конференции "Питание, экология, человех" (Москва, 1995), III Всероссийском национальном конгрессе "Человек, и лекарство" (Москва, 1996), на Научно-практической конференции "Амарант и люпин — источники новых пищевых и диетических продуктов" (Санкт-Петербург, 1996), молодежной научной школе по органической химии (Екатеринбург, 1999), XII международной конференции по химии фосфора (Киев, 1999), молодежной школе-конференции "Ме-талпоорганическая химия на рубеже XXI веке!' (Москва, 1999), в том числе на итоговых научных конференциях Казанского научного центра РАН (1995, 1999). По теме диссертации опубликовано 20 работ в том числе один патент РФ и 2 статьи находятся в печати.

Объем и структура диесертацни. Диссертация изложена на 180 страницах машинописного текста, содержит 36 таблиц и 19 рисунков. Список цитируемой литературы включает 282 наименований. Работа состоит из введения, литературного обзора, 1де рассмотрены »опросы получения, структурной идентификации, химической модификации и физиологической активности пектиновых веществ, обсуждения результатов собственных исследований, экспериментальной части, выводов, списка используемой литературы и приложения.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Разработка способов получения пектиновых веществ растения амарант. В

соответствии с перечисленными целями работы нами были предложены и апробированы в лабораторных условиях различные способы экстракции пектиновых веществ из фитомассн растения амарант: экстракция сильными минеральными кислотами, экстракция слабыми органическими кислотами, экстракция кислотами в условиях пргдгарнтельной водно-этанольной обработки исходного растительного сырья.

С целью разработки оптимальных условий гидролиза — экстрагирования протопектина амаргнта, обеспечивающих высокую молекулярную массу, высокую метоксилъную составляющую и высокий выход пектина, нами проведены исследования по извлечению пектина из этого вида сырья путем варьирования температуры, рН реакционной среды, продолжительности гидролиза, природы гидролизующего агент!. Предварительная водно-этанольная экстракция ускоряет процесс гидролиза протопектина и повышает выход целевого продукта. Это достигается путем частичного удаления белков, красящих веществ и других примесей. Установлено, что истин, извлекаемый из жома содержит минимальное число примесей и имеет высокую степень этерификации.

Для извлечения пекшна из растительной ткани в качестве гидролизующих агентов были исг.о^ьзоианы водные растворы следующих кислот различной концентрации: соляной, щавелевой, янтарной и молочной. В таблице I приведены основные фи.'зико-хямкчеекме характеристики пектинов, полученных гидролизом перечисленными кислотами и ферментативным гидролизом, а также оптимизированные параметры процесса гидролиза—экстракции.

Пектиновые препараты, обладающие максимально высокими молекулярной массой., степенью этерификации и соответственно желирующей способностью, получен путем гидролиза-экстракции пектиновых веществ из растительного сьгрья 0.5 % щавелевой кислотой при температуре гидролиза 55°С и продолжительностью 4 ч. Для очистки от низкомолекулярных веществ органической и неорганической природы пестиковые веиества были подвергнуты фильтрации на половожжонных мембранах, очистке на ионообменных колонках, а также перео-са;кдению ацетоном и этанолом из воды и лиофильной сушке. Полученные таким образом пгктиковые препараты по своим физико-химическим характеристикам подобны пектину, полученному ферментативным способом.

Интенсификацчя процессов гидролиза-экстракции пектиновых веществ была достигнута при проведении стадии гидропиза протопектина в роторно-

пульсационном аппарате (РПА) при использовании молочной или янтарной кислоты. При этом достигаются наиболее мягкие условия гидролиза—экстракции (рН 4.0 4.5) и соответственно высокая молекулярная масса.

Таблица 1. Условия экстракции пектиновых веществ и их характеристики.

Условия экстракции Характеристики

Гидролизующий pH Время Темпе- Соотно- Выход, Сте- Моле-

агент среды ч ратура шение сырье : экстра-гент % пень этери-фика-ции кулярная масса

HCl 1.0 22 45 1 : 18 3.5 45 13000

HCl 2.0 22 45 1: 20 3.7 65 15000

(СООН)2 1.65 2 70 1 : 10 3.5 66 2500030000

(СО онь 1.65 2 90 1 : 10 3.7 50 20000

0.5 % (СООН)2 4 55 1 : 8 4.5 70 4000050000

0.35 % (СООН)2 2.5 50 1: 16 4.3 70 4000045000

0.25 % (СООНЬ 1 45 1 : 13 3.9 72 4000045000

Ферментатив- 4.5 4 50-55 1 : 16 3.7 70 45000-

ный гидролиз 50000

(СН2СООН)2 4.04.5 0.05 45 1 : 10 8.5 72 90000

МеСН(ОН)СООН 4.04.5 0.05 45 1 : 10 8.7 4 75 50000

Таким образом, установлено, что по содержанию пектиновых веществ, их филики-ршмичсским характеристикам и физическим свойствам фишмасса растения амарант может служить в качестве потенциального промышленного источника их получения.

2. Изучение моносахаридного состава и структуры пектиновых веществ амаранта. Методами жидкостной хроматографии с использованием в качестве стандартов широкого набора Сахаров было выяснено, что основными кислыми и нейтральными моносахаридами пектинов амаранта являются следующие: галактуро-новая кислота (67 %), галактоза (7.7 %), рамноза (4.1 %), глюкоза (8.3 %), араби-ноза (6.6 %) и ксилоза (2.1 %). Интересно также отметить, что методом ГЖХ среди продуктов гидролиза пектина наряду с метанолом обнаружены небольшие количества этанола, бутанола и формальдегида.

Пектины, выделенные из амаранта, как было представлено, несколько отличаются, своими физико-химическими характеристиками в зависимости от способа выделения, что находит отражение в ИК спектрах, которые были зарегистрированы в таблетках КВг. На рис. 1 приведен типичный ИК спектр пектина из амаранта, полученного экстракцией щавелевой кислотой. Проведенный ста-

тистический анализ пектиновых образцов, амарантового цитрусового, яблочного, табачного пектинов, а также пектина из люпина, как впервые полученных и исследованных нами, так и описанных в литературе, позволил выявить основные группы полос поглощения амарантового пектина, обобщенные в табл. 2.

Рис. I. ПК спекп.р пектина из амаранта.

Таблица 2. Данные ИКС пектина из маранта, полученного гидролизом (СООН)2-

частота, см-' Преимущественные типы колебаний частота, см"1 Преимущественные типы колебаний

3452 v(OK)c, v(H)O) 1231 5(СН)К, 5(ОН)с, §(ОН)д, у(С-0-С)р,

3198 v.XCH),: 1145 у(С-О-С)

2949 v(CH)K 1J02 у(С-С) (С-О)к

2573 v(OH)c, v(OH)A, 1 1C.80 v, 5(С-ОН)с

1748 v(C=0)F 1050 у(С-С) (С-О)к

1634 8(H?0) 1°15 у(С-С) (С-О)к

1450 5„(CH0e 948 7(ОН)г

1400 v, S(C-OH)A || 900 Р(СН,)К

1331 iSfCHW 1825, 800,710, 1 1629, 529 Пульсационные колебания пиранозных колец

В области 3000-3600 см"1 наблюдается интенсивная широкая асимметричная полоса, соответствующая патентным колебания группы ОН. Смещение полосы в низкочастотную область по сравнению с частотой свободной гидроксильной группы (3670-3580 см1) \(ОН| объясняется ее участием в водородных связях. Воздушно-сухие пектиновые вещества содержат около 10 % воды, поэтому, валентные колебания еоды у(НгО) перекрываются полосами у(ОН)с гидроксилов пектина. В области 2600 см-1 наблюдается широкая сложная полоса, относящаяся к валентным колебаниям гидрокскльных групп карбоксилов у(ОН)д., связан-

ных водородной связью в карбоксил-карбоксильной димерной группировке. Область 2000-1500 см"1 - область колебаний С=0 группы. Здесь возможно поглощение v(C=0) трех групп: (1748-1739 см"1), (1700-1680 см-1), (1610-1550 см-'). Соотношение интенсивностей поглощения, соответствующих этим группам, может меняться в зависимости от того какая форма в структуре пектиновых веществ преобладает (эфирная, кислотная или ионная). Область 1200-1000 см-1 характерна для колебаний v (С-С, С-О) пиранозных колец. В области 950-960 см-1 находится полоса средней интенсивности, основной вклад в которую вносит колебание возмущенного водородной связью гвдроксила кольца у(ОН)с- Из-за сильного взаимодействия между структурными элементами молекулы в области спектра 400-850 см-1 возникают полосы, обусловленные сложными колебаниями, которые можно охарактеризовать как пульсационные колебания пиранозных колец, которые зависят от конформации звеньев полимерной цепи. Сопоставление полос пектиновых веществ, а- (888, 840, 770 см"1) и ß-Gal/> (927, 880, 780 см"1) с конформацией 4С( явно показывает, что пиранозные циклы в полимерных цепях амарантового пектина находятся в 4С1-а-конформации. Данные ИК спектроскопии позволяют сделать заключение, что пектиновые вещества, полученные из одного и того же источника (надземная часть амаранта) отличаются друг от друга различной степенью этерификации, т. е. содержат различное число метоксикар-бонильных и свободных карбоксильных и групп.

Более детальное изучение структуры пектинов проводилось методом спектроскопии ЯМР 13С. На рис. 2. представлен спектр образца пектина, полученного с помощью молочной кислоты в РПА. Можно отметить, что выделенный в этих очень мягких условиях пектин содержит большое количество нейтральных Сахаров и неоднороден по составу и структуре. Он включает кроме а-полигалактуро-новой кислоты остатки a—, ß—глюкозы, а—, ß—арабинозы, a—, ß—галактозы.

T-OCOOR \

» I v^uo

Р п НО A3.

I

150

I

100

т

50

5С м .д.

Рис. 2. Спектр ЯМР ,3С образца пектина из амаранта, полученного гидролизом молочной кислотой (11 — Н, ОСН

На рис. 3 приведена область аномерных углеродов, которая включает сигналы перечисленных Сахаров. Установлено, что очищенный пектин, полученный гидролизом янтарной кислотой, состоит из почти чистой полигалактуроновой кислоты с небольшим количеством нейтральных Сахаров (рис. 4). Интересной особенностью пектинов является их способность образовывать комплексы с молочной и янтарной кислотами, что видно из рис. 2, 4. Данные спектра ЯМР |3С очищенного пектина, полученного с помощью гидролиза щавелевой кислотой приведены в табл. 3.

Рис. 3. Область аномерных углеродов образца пектина из амаранта, полученного гидролизом молочной кислотой.

Исходя из величин КССВ ацетального углерода С1 нами установлено, что основное звено пектина — галактуроновая кислота является а-аномером. В а-аномере КССВ иНс -169.0-172.0 Гц, тогда как в ¡3-аномере она меньше (160-164 Гц). Присутствие в нативном пектине небольшого числа метоксилированных групп СООМе (-10-20 %) приводит к появлению соответствующих минорных сигналов 173.67 (СООМе), 107.73 (С'), 82.33 (С4), 55.74 (ОСН3).

Рис. 4. Спектры ЯМР 13с, 13С-{1щ образца пектина из амаранта,

106.0

100.0

92.0 бс м.д.

полученного гидролизом янтарной кислотой.

С2

Л--«» «г»

102

92

82

72

5С м .д.

Таблица 3. Данные спектра ЯМР ,3С образца пектина, полученного гидролизом

щавелевой кислотой.

№С б 5м.д. 1 Гц

СООН 174.44 с (уш. с) -

С1 102.77 уш. с: (уш. д) 169.0-171.0 (НС)

С* 80.86 уш. с (уш. д) 138.0-142.0 (НС)

С5 73.67 уш. с (уш. д) 139.0-143.0 (НС)

С?, С3 72.20 уш. с (уш. д) 139.0-143.0 (НС)

Таким образом, проведенный анализ спектров ЯМР 13С очищенного пектина позволяет заключить, что полученный биополимер полисахаридной природы является а-(1->4)-£)-полигалактуроновой кислотой с высокой уронидной составляющей. Полученный пектин, по всей видимости, имеет линейное строение и содержит небольшое число метоксилированных карбоксильных групп.

3. Химическая модификация пектиновых веществ амаранта. Отработав способы выделения пектина из амаранта, нами были предприняты попытки его химической модификации с целью получения пектиновых производных с новыми свойствами. Так, были проведены реакции полного гидролиза, метилирования, ацетилирования, амидирования, силилиронания, фосфорилироваыня, апеллирования некоторыми функционально замешанными алкилгалогенидами, а также получены соли пектовой и пектиновой кисгсот со щелочными металлами. Структурные изменения, вызванные введением в молекулу пектина ацетильных, амид-ных групп, а также ионов металлов исследовались методом ИК спектроскопии.

При ацилировании пектовой кислоты происходит ослабление полос у(ОН)с и незначительное их смещение б высокочастотную область. Из этого следует, что оставшиеся гидроксильные группы участвуют в водородных связях, природа которых с ацетилированием существенно не изменилась. В спектре амиди-рованного пектина присутствует очень широкая интенсивная полоса в области 2800-3500 см-1, обусловленная как валентными колебаниями групп М-Н, так и колебаниями у(ОН), у(Н20). В области 1650-1430 см1 присутствуют три интенсивные полосы, вызванные колебаниями амид л ой группы. Полоса у(С=0)а в (1749 см-1), обусловленная колебаниями карбонила ацетильных 1рупп, перекрывается с частотами у(С=0)д карбоксильных групп. Очень интенсивное поглощение, соответствует колебанию эфирной связи у(СОС)а (1250 ем"1). Ацшшрование существенно отражается на колебаниях пиранозных колец. Это можно объяснить тем, что валентные колебания пиранозных колец зависят от участия в системе водородных связей гидроксилов при С2 и С3. Более размытый характер полос: в области 1100-1000 см-1 в спектре амида говорит о влиянии состояния карбоксильных групп пектина на систему водородных связей макромолекулы. На основании стабильности спектра в области 650-900 см-1 для нектозой кислоты, ацети-лированного и амидированного пектинов можно утверждать, что введение ацетильных и амидных групп не нарушает 4Сгконфориацни пиранозных колец пектинов и а-конформации гликозидных связей.

/

о

/

Силилирование пектина гексаметилдисидазаном и триметилхлорсиланом приводит к незначительному введению в молекулу пектина триметилсилильных групп, которые а процессе выделения гидролизовались, что не вызывало сколь-нибудь существенного изменения свойств исходного пектина. Фосфорилирова-ние пектинов позволяет влиять на их физико-химические характеристики, сорб-ционную емкость и селективность особенно по отношению к ионам кальция. Фосфорилирование пектина с различной степенью этерификации (33 %, 58 %) и пектата натрия осуществлялось большим избытком 2-метокси-4-оксо-, 2-хлор-4-оксо- и 2-хлор-2,4-диоксо-5,6-бензо-1,3,2-диоксафосфоринанов — наиболее мягких и эффективных реагентов, используемых в химии углеводов и нуклеотидов. По данным элементного анализа максимальное количество фосфора введенного в пектин составляет 4-5 %. При этом независимо от природы производного фосфора (III или IV) образуются смеси фосфатов, которые выделяли переосаждением ацетоном из водных растворов. Учитывая известные и полученные в этой работе данные по фосфорилированию и ацилированию целлюлозы и других полисахаридов, можно предположить, что фосфорилирование, так же как и ацилиро-вание, протекает как во второе, так и третье положение пиранозного цикла.

Для алкилирования пектинов более сложными соединениями, которые могут нести фармакофобные группы были впервые предложены хлорпропанолпири-диниевые соли (1), полученные из эпихлоргидрина и пиридиниевых солей. Высокая алкилирующая способность соединений (1) была предварительно проверена на удобных модельных соединениях, таких как соли никотиновой и рицино-левой кислот. Строение полученных с количественным выходом функционально замещенных эфиров (2) доказано методом ИКС и ЯМР |3С (по появлению сигналов ОСН2 вместо CICH2). Процесс этерификации пектата натрия солями (1) протекает значительно сложнее, чем модельных соединений. Полученные произ-

водные (3) (Pect - остаток пектина) представляют собой с reo а или аморфны порошки, хорошо растворимые в воде и ДМ ФА в отличие от самого пектина пектата.

В ИК спектрах полученных образцов появляются интенсивные полосы пр 1730-1740 см-1, принадлежащие группам этерифицированного пектина. В спектр ЯМР 13С интенсивность сигналов ядер углерода фрагмента СОО-СНгСН(ОН) CHjN+ выше интенсивности сигналов ядер углерода СН пиранозных коле: пектиновых веществ. О степени протекания реакции можно судить по исчезно вению сигналов группы СН2С1 (6с 45.86 м.д., Чцс 152.0-152.4 Гц).

CICH2-CH-CH2 ■+ О

1 + RCOOK

HN

X

-KCl

+/Г\ . C1CH2 -CH-CH2N у X

он х

1

R-COOCH2CHCH2-N J ОН

X

X = Г jl , CF3(CF2.)3COO , ^^СОО СГ

R = СНз(СН2)5СНСН2СН=СН(СН2)7 ОН

Ск^О

■•ь-СТ.

-N

- ОН

1 ! +/Г\ -

Pect-COOK ---Pect-COOCH2~CH2-CH2-N / X

-KCl ,

Поскольку фосфоридирование самого пектина, как было выяснено, весьма сложный и неоднозначный процесс, перед нами стояла задача исследовать процесс фосфорилирования на простых модельных соединениях - природных гид-роксикарбоновых кислотах. В качестве таких кислог были выбраны миндальная и метилмолочнэя как наиболее доступные, а также их триметилсшшльные производные. Использование в качестве моделей галакгуроиовой и пдакуроновой кислот является весьма сложным, поскольку они содержат несколько гидрокси-льных групп, затрудняющих получение однозначного результата. В качестве фос-форилирующих реагентов были использованы различные производные Р(Ш), среди которых однозначные результаты были получены для трис(1,1,3-тригидро-перфторпропил)фосфита, 1,1,3-тригидроперфторпропнлдихлорфосфита и фенил-дихлорфосфита.

4. Синтез к неко торые рсамци фосфорсодержащих гетероциклов на основе а-гвдроксикарбонввых кислот. При исследовании процессов фосфорилирования миндальной и метилмолочной кислот выяснилось, что результат зависит от порядка смешения реагентов и присутствия солей аминов. Так, при добавлении тетрафторпропилдихлорфосфита к смеси миндальной кислоты и триэтиламина в эфирг пресс ходит необычная реакция окислительного фосфорилирования, приводящая к образованию спирофосфоранов (4,5).

РП оя а2РОРгР Р" о I 0 гь гн0 0 РЬ

I + 2 ЕЫч----- Г к | + Г К I

о он " -2К5№на \5А0 \0А0

4 5

Ргг = С(12СР?С?2Н

Аналогичный результат был получен при использовании бис-триметидси-лильного производного миндальной кислоты Мез5ЮСН(Р!1)С0051Мез.

Гидроспирофосфоран (4) бьш выделен в ^ кристаллическом виде и его структура подтверждена данными ЯМР 31Р (5Р -44.3 и -45.1 м.д., М ^НР 943-944 Гц, СН2С12). На рис. 5 преведена

геометрия молекулы согласно данным рентге-нос труктурного анализа. Следует отметить, что это первый случай установления конфигурации Р-Я-фосфораяа, содержащего три хиральных Рис. 5.. Геометрия молекулы (4). ценгра и две ангидридные связи Р—ОС(О). Оба

цикла занимают аксиально-экваториальную ориентацию, причем ангидридные гтомы кислорода аксиальны, протон находится з экваториальной позиции.

При изменении порядка смешения реагентов — добавлении триэтиламина к смеси фосфита и кислоты удалось получить производные Р(Ш) (6-8), строение которых подтверждено данными ЯМР 31Р (5Р 115-125 м.д.).

О ОН -2Е13№НС1

6-8

Н., Я], К2 - Ргр, Н, РЬ (6); РЬ, Н, РЬ (7); Р1\, Ме, Ме (8).

Из литературы известно, что близкие структурные аналоги полученных на-ли 4-окео-1,3,2-диоксафосфоланов (6-8) — фосфорилированные производные :алициловой кислоты — проявляют необычную реакционную способность в «акциях с карбонильными соединениями, образуя продукты расширения цикла,

причем наиболее однозначные результаты были получены для хлораляи гексаф-торацетона. Исходя из структурных особенностей диоксафосфоланов (6-8) (присутствие нуклеофильного атома фосфора и электрофильной карбонильной группы) можно было ожидать, что они также способны к реакциям расширения цикла с перечисленными карбонильными соединениями. Однако оказалось, что взаимодействие фосфоланов (6-8) с хлоралем и гексафторацетоном определяется прежде всего природой экзоцикличского заместителя при атоме фосфора и может приводить как к образованию продуктов расширения цикла, так и к соединений иной природы. Так, в реакции хлораля с 2-тетрафторпропокси-1,3,2-диок-сафосфоланом (6) (сЗ| : = 3 : 2) происходит неожиданно легкое образование продукта миграции тетрафторпропильного заместителя на атом кислорода хлораля - фосфоната (9) [РС, 5 80.84 д.д (с!,) (ЧРС 164.5, ЧНс 147.4); 80.63 д.д (сЩ ('Лрс 166.2, Оно 146.8); СС13, 99.33 д.д (¿0 (2-ГРСс 11-7, 21Нсс 3.0); 99.24 д.д <с12) (Орсс 11.7, '^нсс 3.0 Гц] с высокой степенью стереоселективности ((!] : с12 = 3 : 2). Этот результат, связан, с нашей точки зрения, с реализацией внутримолекулярного нуклеофильного замещения у экзоциклического атома углерода в промежуточном биполярном ионе (А), поскольку известно, что фторалкильные заместители очень трудно отщепляются в большинстве известных реакций ФОС, протекающих с образованием фосфорильной группы. Обычные фосфиты реагируют с хлоралем по реакции Перкова. Получив такой неожиданный результат, мы вовлекли во взаимодействие с хлоралем 2-фенокси-1,3,2-диоксафосфолан (7), который содержит фенильную группу, не проявляющую в обычных условиях склонности к отщеплению, аналогичному алкильной группе в реакциях ФОС. Оказалось, что взаимодействие фосфолана (7) с хлоралем также протекает в мягких условиях, но носит значительно более сложный характер, давая три продукта (10-12).

Ph

СС13СНО Г p-OR --->►

Ло'

о

6,7

PiW) -w0"^

Я

0 ° саз А

Ar/H

OR

(Т О

са3

о

Т | OPh О^О

R= Ph

_ 2 3 .

СС13

9, 10

CCI3

Ph. «о

11

R = ch2cf2chf2 (6,9); Ph (7,10-12)

12, следы

В качестве основного процесса наблюдается расширение пятичленного гете-роцикла до шестичленного (11) (5Р —6.0, -6.7 м.д. (3 : I)] (путь 2) (70-75 %). Несмотря на присутствие трудноотщепляемого фенильного заместителя, в незначительной степени также происходит образование фосфонатов (10) [5р 5.7, 4.6 м.д.

(10 : 1)1 - продукте ?, формальной мшрации фенильного заместителя на оксиани-онный центр- промежуточного биполярного иона (А) (путь 2) (20-25 %). По всей вероятности, этот процесс является внутримолекулярным и не имеет аналогий в химии эфирее; фосфора. И наконец, з следовых количествах происходит образование спирофэсфоранов со связью Р-С (12) [бр —37.8, —40 м.д. (52 : 9)] (путь 3). Таким образом, ешггегичесхий результат реакции с хлоралем зависит от природы заместителя у атома фосфора; процесс обладает высокой стереоселективностью.

С целью выяснения возможного влияния заместителей в пятичленном цикле на синтетический результат реакции нами было предпринято изучение взаимодействия фэсфорнлирозгнного производного метилмолочной кислоты — соединения (8) с хлоралем. В отличие ог производного миндальной кислоты, здесь процесс яшиется менее ретио- и сгсоеоселектшшым — реализуется три направления (1-1), причем пути 1,. 2 с сопоставимыми вкладами [13, 5р 13.0, 11.1 м.д. (15 : 14); 14, 5Р 6.0, 4.0 м.д. (87 : 17); 15, 5Р -32.0, -32.3 м.д. (9 : 7)].

Ме

,0

0А>'

8

Ме

I д

о о

Ме 0 Ме-Ь-0^/

О ° сн,

СС13

о

-орь х:сь

14

Ме

Ме.

Ме

.О

13

СС13

О^о^со, 15, следы

Значительное внимание было уделено исследованию взаимодействия 1,3,2-хиоксафосфолаиов (6-8) с гексафторацетоном, поскольку здесь процесс расширения гетеро цикла мог сопровождаться Р-С-0 Р-О-С-перегруппировкой, как >то имеет месго в ¡реакциях сатацнлфосфитов с гексафторацетоном. Реакция 2-гетрафгорпропокси производного (6) с гексафторацетоном протекает значительно :ложнее, чем с хлоралем, обладает низкой регио- и стереоселективностью и при-юдит к образованию четырех регион юмерных соединений — продуктов расши-?ения и сохранения фосфоланового цикла (16-19), образование которых проис-;одит, по-видимому, из биполярных ионов Р-С-0 (В) и Р-О-С (С) (направления Г-4). Изомерные соединения (16-19) идентифицированы на основании данных ШР 1Н, "С, 3|Р и ИК спектроскопии. Так, в спектре ЯМР 31Р им соответству-07 8 сишалоз (5Р 3 0, 2.6, -4.2, -4.8, -12.0, -13.1, -16.4, -17.4). В ИК спектре сме-:и имеется целая серия полос ог 1700 до 1790 см-1, свидетельствующая о сложно-фирном и кетоннсм окружении группы С=0. В спектре ЯМР |3С смеси соеди-(ений (16-19) имеются три типа углеродов С=0, принадлежащих кетонным руппам (6С 187.42, 187.35 м.д., Уросс 5.4-5.8 Гц) в фосфоринане (18) [и указы-аюшим на присутствие фрагмента С(0)-С(СРз)2-0-Р(0)], карбонильным груп-

пам, входящим в состав фосфоринана (16) в окружении С(0)-0-С(СРз)2-Р(0) (162.78 и 162.79 м. д., 3-1рсос 15.2-14.6 Гц), и наконец, карбонильным группам региоизомерных фосфонатов и фосфатов с пятичленным циклом (17, 19) (170.41, 169.82, 169-74, 169.4 м.д., ^РОс 7.1-8.4 Гц).

Лп'-

сг о

РОРгр.

о

СР3-С-СР3

6

РЪ^О^О

в

0-СН2(СР2)2Н

V

Дс

1

о

I ОРгр

16

СЪ

2 Р3

Г ;Р^0Ргг,

О'

о СРз 17

4 р^О 9 СРз

0^0 СРз 19

Только по двум направлениям протекает взаимодействие 4-оксо-5-фенил-2-фенокси-1,3,2-диоксафосфолана (7) с гексафторацетоном. При этом основным продуктом реакции является фосфоринан (20) [С=0, 187.40 м ((![) (^росс 7.7, 21Нсс 3.6, Чрссс 1.0-1.2), 188.04 м (Н2) (3-Ьпсс 7.9-8.1, 21нсс 3.5)], который образуется в результате нуклеофильного замещения атома кислорода у карбонильного углерода карбанионным центром биполярного иона ф). В следовых количествах также происходит присоединение второй молекулы гексафторацетона к этому иону с образованием фосфорана (21) [5р —75.1, —75.8 м.д. (16 : 5)].

О

СР3С-СР3 I ,Р-ОРЬ-^

РЬ^О^ОРИ

о

Д-о^сГ0'

СРз СРз

РЬ^-О^О

|ОР1)

О'"

СРз

О

ОРЬ

^ А

СГ ^О

СБз

СРз

В оличие от описанных процессов взаимодействие 2-фенокси-4-оксо-5,5-диметид- 1,3,2-диоксафосфолана (8) с гексафторацетоном неожиданно приводит к образованию только изомерных спирофосфоранов со связями Р-С (22) (бр -45.6 + -46.5 м.д.) и РОС (23) (5Р -73.2 м.д.) в соотношении 4 : 7. Очевидно здесь скорости перегруппировки Р-С-0 Р-О—С и присоединения промежуточных биполярных ионов (Е, Г) сопоставимы.

Ме

Ме-к 4

О

А

Р-ОРИ

о

СРз-С-СРз

Ме' Ме

О

Ме' Ме О

V0'

О ОРЬ

I СИз СИз

Е

, 0 { СРз-С-СРз

ОРИ СР3

СРзСРз 22

4- ОРЬ Ме"] V

СР3

О

! 11 | СРз-С-СРз

ОР1т Ср.

ЧоЧ~СР3

и СР3

23

5. Физиологическая активность пектиновых веществ амаранта. Изучены про-тективные свойства пектина, выделенного из амаранта, при экспериментальном диабете, вызванном у крыс. Установлено, что введение пектина крысам с аллок-сановым диабетом повышает гликемию и одновременно оказывает протективное (иммуностимулирующее) действие, проявляющееся в увеличении процента выживаемости животных по сравнению с контрольной группой.

В опытах на изолированном сердце крыс с ишемической болезнью показано, что применение амарантового пектина вызывает спазм коронарных сосудов, но не влияет на тонус сокращения сердечной мышцы. Пектин оказывает кардио-протекторное действие на сердечную мышцу при ишемической болезни.

Основные результаты и выводы.

1. Разработаны способы выделения высокомолекулярных полисахаридов - пектинов из травы амаранта в условиях ферментативного и кислотного гидролиза при использовании слабых кислот, показано, что их физико-химические характеристики соответствуют полисахаридам со средней молекулярной массой 2000060000, содержанием галактуроновой кислоты ~ 70 % и степенью этерификации 55-65 %.

2. Методами жидкостной хроматографии с использованием мембранной фильтрации, ИКС и спектроскопии ЯМР 13С впервые показано, что в состав пектиновых веществ амаранта кроме а-/)-галактуроновой кислоты входят рамноза, ара-биноза, глюкоза, ксилоза. Основная цепочка полимера содержит связанные

(1~»4)-гликозидной связью остатки Л-галак:гуронозой кислоты; нейтральные сахара могут присутствовать как в основной цепи, так и в боковых ответвлениях, о чем свидетельствует сложная спектральная картина в области ацетального углерода в спектре ЯМР 13С.

3. Предложены и апробированы новые мягше алкилнрующие реагенты для получения функционально замещенных сложных эфиров на основе доступных солей пиридиния, содержащих остатки карбоновых и фосфоповых кислот и зиихлор-гидрина, которые позволяют модифицировать природные карбоновые кислоты с гидрофобными заместителями, повышая растворимость модифицированных производных в воде.

4. Впервые получены модифицированные производные амарантового пектина нг основе реакций ацилирования, амидироаания и фоефорил ирования, а также алкилирования как традиционными алкилнрующимн средствами, так и новым» типами последних — хлорпропанолпиридикиевыми солями, содержащими остатки фармакофобных групп. Методом ИК спектроскопии выявлены косвенные данные, свидетельствующие о том, что при химической модификации пектино! конформация пиранозного цикла основного звена полисахарида - галакгуроно-вой кислоты — сохраняется; изменяется пгшъ система водородных связи! молекулы.

5. Выявлена высокая биологическая активность амарантового пектина: протек-тивная — у крыс с экспериментальным аллоксаиовмл диабетом, проявляющая» в увеличении процента выживаемости животных по сравнению с контрольно! группой, а также кардиопротекторная, которая установлена на шолирсваннои сердце крыс с ишемической болезнью.

6. Результат фосфорилирования а-гидроксикарбонопых кис.гют и их силильны: производных хлорангидридами и полными эфирами кислот Р(Ш) зависит о-порядка смешения реагентов и присутствия кислых примесей. При фосфорили ровании хлорангидридами и фосфитами исущссгамется процесс необычной окислительно-восстановительного диспропорционирования до спирофосфорано) и фосфатов; циклическое производное Р(Ш) можно получить с высоким выхо дом лишь при добавлении основания к смеси дихлорфосфита и а-щдроксикар боновой кислоты. Впервые выделен кристаллический изомерно чистый гидро спирофосфоран, содержащий три хиральмых центра и две эндоциклически ангидридные связи Р-ОС(О); методом РСА установлена его конфигурация.

7. Впервые показано, что взаимодействие 2-алкоксм-4-оксо- 1,3,2-диоксафосфо ланов, полученных из а-гидроксикарбоновых кислот, с хпоралем в зависимо«] от природы экзоциклического заместителя у атома фосфора протекает но дву? направлениям — по пути внутримолекулярного замещения лкбо у эндоцикличес кого карбонильного атома углерода, либо у экзоциклического углерода и приво дит к образованию либо 1,4,2-диоксафосфэринанов, лкбо 1,3,2-диоксафосфола нов с экзоциклической связью фосфор-углерод с высокой степенью стерео селективности. В реакции с гексафторацетоном происходит образование ка 1,3,2-диоксафосфоринанов, так и спирофосфоранов со связями Р—С и Р~0.

Основные результаты диссертации изложены в следующих публикациях:

I. Соснина H.A., Хазиев Р.Ш., Еаниокова И.И., Гарусов A.B., Цепаева О.В., Эфицеров E.H., Коновалов А.И. Пектиновые вещества Amarantos cruentus L // Кимия природных соединений. 1996. № 1. С. 7-10.

I. Десалень ТД., Цепаева О.В., Соснина H.A., Елкина Г.И., Левандовский И.А., Spaeoiia И.H., Офнцероз E.H., Коновалов А.И. Выделение пектина из Amarantos vuentus и изучение его влияния на работу изолированного сердца крыс // Бюллетень жспериментадьной биологии и медицины. 1997. Т. 123. № 1. С. 91-94. ?. Цепаева О.В., Миронов В.Ф., Еникеев K.M., Коновалов А.И. Сохранение фос-роланового гетероцикла в продукте реакции 4-оксо-2-(2,2,3,3—тетрафторпропок-:и)-5-фенил- J,3,2-д:юксафосфолана с хпоралем: неожиданно легкая миграция фтор-ыкильного заместителя на О-аниопный центр J/ ЖОХ. 2000. Т. 70. Вып. 3. С. 517518.

(. Миронов В.Ф., Иепаева O.E., Еникеев K.M., Коновалов А.И. Реакция 4-оксо-5-фенил-2-фенокси-1,3,2-диексафосфолана с гегсафторацетоном: расширение росфоланолого гетероцикла до фосфоринанового // ЖОХ. 2000. Т. 70. Вып. 3. С. 519-520.

5. Вандюкова И.И , Цепаева О.В., Соснина H.A., Офицеров E.H. Спектроскопическое изучение пектинов Amarantus cruentus. // I Международный симпозиум 'Новые и неградш(ионные растения и перспективы их практического использо-зания". Тезисы докладов. Пущине. 1S95. С. 30-31.

5. Соснина H.A., Цепаева О.В., E.H.Офицеров E.H., Коновалов А.И. Пектины метеный nuda Amarantus cruentus // I Международный симпозиум "Новые и не-градиционные растения и перспсстивы их практического использования". Гезисы докладов. Пущино. 1995. С. 32.

7. Konovalov A.I., Sosnina N.A., Tsepaeva O.V., Ofitserov E.N., Lapin A.A., Yacubov ih. M. Pcctins of Amaran tus cruentus L // Proceeding of the Fifth international Congress )f Leaf Protein Research "LeafPro-96". Russia, Rostov-on-Don. 1996. Vol. 3. P. 102104.

I. Коновалов А.И., Ашаева Л.А., Хазиев Р.Ш., Лапин A.A., Соснина Н.А, Цепа-;ва О.В., Якубов Ш.М. Протективные свойства пектиновых веществ Amarantus yuentus // III Российский национальный конгресс "Человек и лекарство". Тезисы шкладов. Москва. 1996. С. 140.

). Десалень Т Д., Цепаева О.В., Соснина H.A., Офицеров E.H., Гинс В.К. Исследование активности действия фракций Amarantus cruentus на модели изолированного :ердца крыс // III Российский национальный конгресс "Человек и лекарство". Гезисы докладов. Москва. 1996. С. 19.

10. Цепаева О.В., Миронов В.Ф., Магафурова И.В., Сохно C.B., Ведерникова Е.Ю.. Миронова 0.10., Офицеров E.H., Коновалов А И. Изучение комплексаобра-1ующих свойств амарантового пектина физико-химическими методами // Научно-фактическая конференция "Амарант и люпин — источники новых пищевых и шетических продуктов". Те шсы докладов. Санкт-Петербург. 1996. С. 85. П. Цепаева О.В., Лапин A.A., Миронов В.Ф., Магафурова И.В., Вандюкова 'l.И., Офицеров E.H., Коновалов А.И. Изучение особенностей структуры амаран-

/нового пектина // Научно-практическая конференция 'Амарант и люпин ■ источники новых пищевых и диетических продуктов". Тезисы докладов. Саню Петербург. 1996. С. 82.

12. Офицеров E.H., Костин В.И., Цепаева О.В., Пузырева Л .А., Коновалов АЛ Пектиновые вещества из Амаранта в качестве фиторегуллтэров /'/ И международ ный симпозиум "Новые и нетрадиционные растения: и перспективы их прают ческого использования". Тезисы докладов. Нущино. 1997. С. 12.

13. Соснина H.A., Еникеев K.M., Цепаева О.В., Минзанова С.Т., Миронов В.Ф Лапин A.A., Офицеров E.H., Коновалов А.И. О строении пектиновых вещесп растений рода Amaranthus cruenius fj II Международный симпозиум "Новые нетрадиционные растения и перспективь" их ripairrmecKoro использования Тезисы докладов. Пущино. 1997. С. 17-18.

14. Соснина H.A., Цепаева О.В., Минзанова СЛ., Миронов В.Ф., Лапин А..л Офицеров E.H., Коновалов А.И. Химический состав растений Амаранта как осн> ва разработки направлений его использования // II международный сим позиум Новые и нетрадиционные растения и перспективы их практического использов ния". Тезисы докладов. Пущино. 1997. С. 22-24.

15. Соснина H.A., Еникеев K.M., Цепаева О.В., Миронов В.Ф. Изучение стру туры пектиновых веществ и их производных методом спектроскопии ЯМР !Н и Ц Современные проблемы теоретической и экспериментальной химии. Тезис докладов. Саратов. 1997. С. 339.

16. Соснина H.A., Цепаева О.В., Миронов В.Ф Компиксообразующая способное) веществ растений рода Amaranthus cruentus // Современные проблемы теоретиче кой и экспериментальной химии. Тезисы докладов. Саратов. 1997. С. 342-343.

17. Коновалов А.И., Офицеров E.H., Соснина H.A., Шекуров В.Н., Цепас О.В., Лапин A.A., Минзанова С.Т., Бережной А.Н., Мутрисков А.Я. Спос получения пектина // Патент РФ № 2119497 (1998).

18. Цепаева О.В., Миронов В.Ф., Коновалов А.И. Фосфоримрование а-гидрокс карбоновых кислот прсизеоЛными трехвалентного фосфора // Молодежная научи школа по органической химии. Тезисы до к [адов. Екатеринбург. 1999. С. 62.

19. Tsepaeva O.V., Mironov V.F., Konovalov А.1., Musia R.Z , Enikcev K.M. The action of 2-tetrafluoropropocxy-4-oxo-5-j>henyl-i,3,2-dioxapho.jpkolane wilk carbonyl со pounds. Unexpectedly facile migration of the fluoroalkyl substituent on the O-aniatiic cut. // XII International Conference on Chemistry of Phosphorits Compounds. Kiev. 19 P. 39.

20. Цепаева О.В., Миронов В.Ф., Губайдуллин А.Т., Литвинов И.А., Коиовах А.И. Реакция производных миндшьной кислоты с трис(тетрафторпропил)- и те рафторпропилдихлорфосфитами. Структура 5-гидро-2,7-диот о-З,8-дифенш-), 9-тетраокса-5-фосфаспиро[4,4}нонана // Молодежная школа-конференция "N таллоорганическая химия на рубеже XXI века". Тезисы докладов. Москва. 19

Отпечатано с готового оригинал-макета. Печат ь ШБО. ' I' Бумага офсет № 1. Формат 60*84 1/16.

_Объем 1,25 пл. Тираж 100 экз. Заказ 12.

Отпечатано на полиграфическом участке издательства «Экоцентр», г. Казань, ул. К. Маркса. 70.

Введение

Глава. I Пектиновые вещества; получение, структурная идентификация и химическая модификация (лит. обзор)

2.1, Экстракция пектиновых веществ из растений

2.2 Структура пектиновых веществ

2.3 Пространственная структура молекул пектиновых веществ

2.4 Химическая модификация пектиновых веществ

2.5 Физиологическая активности рамногалактуронанов

Глава П. Обсуждение результатов

3.1 Структурное изучение пектиновых веществ с помощью ЖС

3.2 Структурное изучение пектиновых веществ с помощью ЯМР 1 ?С

3.3 Химическая модификация пектиновых веществ

3.4 Физиологическая активность пектиновых веществ

3.5 Фосфорилирование природных а- гид ро кс и кар б о н ов ых кислот

Глава Ш. Экспериментальная часть

Выводы

Биополимеры полисахаридной структуры - важнейший класс природных соединений, который можно рассматривать в качестве доступного источника практически-значимых органических соединений. Особое место среди растительных полисахаридов занимает пектин, который входит в состав структурных элементов клеточной ткани высших растений и выполняет функции связывающих и упрочняющих компонентов клеточной стенки, а также регулирует водный обмен.

Сложная экологическая обстановка, вызванная загрязнением окружающей среды отходами химических и микробиологических производств, наличие в ряде зон повышенного радиоактивного фона, широкое внедрение в медицину, ветеринарию и пищевые отрасли антибиотиков привели к снижению сопротивляемости человеческого организма к вредным факторам и изменили экологические взаимоотношения человека с микроорганизмами. В частности, меняется видовой состав микрофлоры, защищающей организм от инфекции и аллергических воздействий, развиваются различные виды условно-патогенных микроорганизмов, возникает состояние дисбактериоза. Поэтому сегодня, как никогда ранее, возрастает роль пектиновых веществ из-за их способности, образовывая комплексы, выводить из организма человека тяжелые металлы (свинец, ртуть, цинк, кобальт, молибден и др.) и долгоживущие изотопы цезия, стронция, иттрия, а также способность сорбировать и выводить из организма биогенные токсины, анаболики, ксенобиотики, продукты метаболизма и биологически вредные вещества, способные накапливаться в организме: холестерин, липиды, желчные кислоты, мочевину, продукты тучных клеток. Благодаря этому химическому свойству пектин является незаменимым веществом для использования в производстве пищевой продукции профилактического и лечебного питания, находит широкое применение в медицине как универсальный де-токсикант тяжелых металлов и регулирует обменные процессы в организме человека. Как правило, пектин получают из яблок и цитрусовых, что в климатических условиях России не рентабельно. Поэтому поиск новых источников пектиновых веществ является актуальным. Предварительные исследования травы амаранта -нетрадиционной культуры, дающей значительный прирост биомассы в условиях4России, показывают, что она может явиться таким перспективным источником полисахаридов. Необходимо отметить, что пектины относятся к одному из наименее изученных в химическом плане веществ, в отличие от хорошо известных целлюлозы и крахмала. К настоящему времени установлено, что количественный и качественный состав пектина зависит от источника его выделения. Молекулярная масса пектинов колеблется в пределах 25000-300000. Основа этого гетерополисаха-рида представлена £>-галактуроновой кислотой с о(1-»4)-связями, соединенной в полигалактуроновую кислоту. Часть имеющихся в ней карбоксильных групп эте-рифицирована метальными группами, а часть спиртовых групп может быть ацети-лирована. К основной макромолекуле в виде боковых ответвлений присоединены Х)-ксилоза, Х-арабиноза, ЛЗ-галактоза, Х)-глюкоза, а в главную цепь включена I-рамноза. Выявлена четкая корреляция и прямая взаимосвязь между иммуномодуля-торной активностью и структурными особенностями пектинов.

Одними из наиболее важных направлений химической модификации пектиновых веществ являются реакции этерификации, амидирования, ацилирования, комплексообразования с металлами и фосфорилирования. Последняя позволяет влиять на физико-химические характеристики пектинов, а также на сорбционную емкость и селективность комплексообразования, так как при этом появляются дополнительные центры координации. Поскольку пектиновые вещества, как правило, содержат в качестве элементарного звена природную а-гидроксикислоту - галак-туроновую, казалось целесообразным исследовать закономерности реакции фосфорилирования и свойства образующихся при этом продуктов на соответствующих доступных модельных соединениях, таких как миндальная, молочная и некоторых других гидроксикарбоновых кислотах, которые могут выступать в дальнейшем в качестве реперных соединений. Необходимо также отметить, что фосфорилирова-ние самих гидроксикарбоновых кислот изучено на небольшом числе примеров. В связи с вышесказанным целью исследования являлось 1) разработка способов выделения кислых полисахаридов из растения амарант, исследование их физико-химических характеристик, в том числе особенностей структуры методами ИКС и спектроскопии ЯМР, 2) разработка способов химической модификации пектиновых веществ (этерификация, амидирование, комплексообразование, фосфори5лирование), исследование реакции фосфоршшрования модельных гидроксикар-боновых кислот и продуктов на их основе, 3) выявление физиологической активности полученных соединений.

В соответствии с поставленными задачами нами впервые разработаны способы получения пектина из травы амаранта в условиях гидролиза слабыми кислотами, такими как щавелевая, лимонная, молочная, янтарная и проведена их сравнительная характеристика. Методами ИКС и спектроскопии ЯМР 13С впервые исследована структура молекул пектина из амаранта и показано, что он близок по своим свойствам к яблочному пектину. Впервые проведена химическая модификация пектина из амаранта. Впервые предложены для алкилирования пектина новые реагенты на основе хлорпропанолпиридиниевых солей, содержащих остатки фармако-фобных групп. Впервые проведено детальное исследование процесса фосфорилирования природных а-гидроксикарбоновых кислот и выявлены условия образования циклических производных с трех-, четырех-, пятикоординированным атомом фосфора и выявлена зависимость результата от порядка смешения реагентов и присутствия в реакционной среде гидрохлорида амина. Впервые выделен кристаллический диастереомер фосфорана со связью Р-Н, содержащий три хиральных центра, структура которого доказана методом РСА. Впервые найдена реакция расширения пятичленного гетероцикла, содержащего фрагмент Р-0-С(0), до шестичленного под действием высокоактивных карбонильных соединений.

Необходимо отметить несомненную практическую значимость данной работы, которая заключается, прежде всего, в подтверждении перспективности амаранта как промышленного источника пектиновых веществ и разработке способов их выделения с использованием экологически приемлемых слабых кислот, а также в разработке подходов для химической модификации пектиновых веществ амаранта. Предложен новый способ трансформации фосфорилированных производных гид-роксикарбоновых кислот под действием карбонильных соединений, приводящий к получению функционально замещенных шестичленных гетероциклов.6

Выводы,

1, Разработаны способы выделения высокомолекулярных полисахаридов — пектинов из травы амаранта в условиях ферментативного и кислотного гидролиза при использовании слабых кислот, показано, что их физико-химические характеристики соответствуют полисахаридам со средней молекулярной массой 2000060000, содержанием галактуроновой кислоты - 70 % и степенью этерификации 55-65 %.

2. Методами жидкостной хроматографии с использованием мембранной фильтрации, ИК и ЯМР 13С спектроскопии впервые показано, что в состав пектиновых веществ амаранта кроме о.- В ~ г ал актур о н ов о й кислоты входят рамноза, араби коза, глюкоза, ксилоза. Основная цепочка полимера содержит связанные (1-»4)-гликозидной связью остатки О-галактуроновой кислоты; нейтральные сахара могут присутствовать как в основной цепи, так и в боковых ответвлениях, о чем свидетельствует сложная спектральная картина в области ацетального углерода в спектре ЯМР 1:?С.

3. Предложены и апробированы новые мягкие алкшшрующие реагенты для получения функционально замещенных сложных эфиров ка основе доступных солей пиридиния, содержащих остатки карболовых и фосфоновых кислот и зпихлор-гидрина, которые позволяют модифицировать природные карбоновые кислоты с гидрофобными заместителями, повышая растворимость модифицированных производных в воде.

4, Впервые получены модифицированные производные амарантового пектина на основе реакций ацилирования, амидирования и фосфоршшрования, а также ал-килирования как трад ици о н ны ми ал кил иру ющи ми средствами, так и новыми типами последних — хлорпропанолпиридиниевыми солями, содержащими остатки фармакофобных групп. Методом ИК спектроскопии выявлены косвенные данные, свидетельствующие о том, что при химической модификации пектинов конформация пиранозного цикла основного звена полисахарида — галактуроновой кислоты — сохраняется; изменяется лишь система водородных связей молекулы. тивная — у крыс с экспериментальным аллоксановым диабетом, проявляющаяся в увеличении процента выживаемости животных по сравнению с контрольной группой, а также кардиопротекторная, которая установлена на изолированном сердце крыс с ишемической болезнью,

6. Результат фосфорилирования а-гидроксикарбоновых кислот и их силильных производных хлорангидридами и полными эфирами кислот Р(Ш) зависит от порядка смешения реагентов и присутствия кислых примесей. При фосфорилиро-вании хлорангидридами и фосфитами осуществляется процесс необычного окислительно-восстановительного диспропорционирования до спирофосфоранов и фосфатов; циклическое производное Р(Ш) можно получить с высоким выходом лишь при добавлении основания к смеси дихлорфосфита и а-гидроксикарбоновой кислоты. Впервые выделен кристаллический изомерно чистый гидроспирофосфоран, содержащий три хирапъных центра и две зндоцикли-ческие ангидридные связи Р-ОС(О); методом РСА установлена его конфигурация.

7. Впервые показано, что взаимодействие 2-алкокси-4-оксо-1,3,2-диоксафосфоланов, полученных из а-гидроксикарбоновых кислот, с хлоралем в зависимости, от природы экзоциклического заместителя у атома фосфора протекает по двум направлениям - по пути внутримолекулярного замещения либо у эндоциклического карбонильного атома углерода, либо у экзоциклического углерода и приводит к образованию либо 1,4,2-диоксафосфоринанов, либо 1,3,2-диоксафосфоланов с экзоциклической связью фосфор-углерод с высокой степенью стереоселективности. В реакции с гексафторацстоном происходит образование как 1,3,2-диоксафосфоринанов, так и спирофосфоранов со связями Р-С и Р-О.

155

1. Kertesz Z.1. The pectic substances.-New York-London: Inter-science publishers, 1951.628 P.

2. Joslyn M. A. if Adv. in Food Res.-1962.-Y. 11.-234 P.

3. Сапожникова E.B. Пектиновые вещества и пектолитические ферменты. М.: изд. ВИНИТИ.-1971.-Итоги науки. Биолог. серия-Т. 5.-120 С.

4. Grant G.T., Morris E.R., Rees D., Smith P.J.C., Thorn D. Biological interactions between polysaccharides and divalent cations: the egg-box model //FEBS Lett.- 1973.-V. 32.-N 4.-P. 195-198

5. ШелухинаН.П. Пектин и параметры его получения.-Фрунзе,-1987.-125 С.

6. ШелухинаН.П Научные основы технологии пектина.-Фрунзе,-1988.-95 С.

7. Практические работы по химии природных соединений; под ред. Г.А. Лазу-ревского. М.-1966.-167 С.

8. Турахожаев М.Т., Ходжаев М.А. Пектиновые вещества растений. Методы выделения пектиновых веществ//ХПС.-1993.-Т. 5-С. 635-643.

9. Кочетков Н.К., Бочков А.Ф., Дмитриев Б.А., Усов А.И., Чижов О.С., Шибаев В.Н. Химия углеводов. М.: Химия, 1967.-С. 523-539.lO.Ovodov Y.S. Structural chemistry of plant glycoronoglycans // Pure Appl. Chem.-1975.-V. 42.-P. 351-369.

10. Whistler R.L., Bushway A.A., Singh P.P., Nakahara W., Tokuzen R. Noncytotoxic, antitumor polysaccharides // Adv. Carbohydr. Chem. Biochem.- 1976.-V. 32.-P. 235275.

11. Aspinall G.O. The Biochemistry of Plants. A Comprehensive Tteatise. V.3 / Eds P.K. Stumpf, E.E. Conn. N.Y.: Acad. Press, 1980.-P. 473-500.

12. Stephen A.M. The Polysaccharides. V. 2 / Ed. G.O.Aspinall. N.Y.: Acad. Press, 1983.-P. 98-195.

13. Оводов Ю.С. Полисахариды цветковых растений: структура и физиологическая активность // Биоорганическая химия.-1998.-Т. 24.-N 7.-С. 483-501.

14. BeMiller J.N. Chemistry and Function of Pectins / Eds M.L. Fishman, J.J. Jen.

15. Washington, D.C.: Am Chem. Soc.,-1986.-P. 2-12.15616.0'Neill M.A., Albersheim P., Darvill A.G. The Biochemistry of Plants. Y. 2 / Ed. Dey. L.: Acad. Press,- 1990.-P. 415-441.

16. Azadi P., O'Neill M.A., Bergmann C., Darvill A.G, Albersheim P. The backbone of the pectic polysaccharide rharnnogalacturonan-I is cleaved by an endohydrolase and an endolyase // Glycobioligy.-1995.-V. 5.-P. 783-789.

17. Rees D.A., Wight A.W. Polysaccharide conformation. Part VII. Model building computations for a-l,4-galacturonan and the kinking function of L-rhamnose residues in pectic substances// J. Chem. Soc. B.-1971.-P. 1366-1371.

18. Zitko V., Bishop C.T. Structure of a galacturonan from sunflower pectic acid // Can. J. Chem. 1966.-V.44.-P. 1275-1282.

19. Мухитдинов 3.K., Халиков Д.Х., Григорьева E.E., Панов В.П. Структура гомога-лактуронана // ХПС.-1993.-Т. 5-С. 91-96.

20. Renard C.M.G.C., Lahaye М., Mutter М., Voragen F.G.J., Thibault J.F. Isolation and structural characterisation of rhamnogalacturonan oligomers generated by controlled acid hydrolysis of sugar-beet pulp // Carbohydr. Res.-1997.-V. 305.-P. 271-280.

21. Massiot P., Rouau X., Thibault J.F. Structural study of the cell-wall of carrot (Dauats-carota L). 2. Characterization of the extractable pectins and hemicelluloses of the cellwall of carrot//Carbohydr. Res.-1988.-V. 172.-P. 229-242.

22. Stevens B.J., Selvendran R.R. Structural investigation of an arabinan from cabbage (Brassica okrncea var. capitata) И Phytochemistry.-1980.-V, 19.-P. 559-562.

23. Renard C.M.G.C., Crepeau M.J., Thibault J.F. Structure of the repeating units in the ramnogalacturonic backbone of apple, beet and citrus pectins // Carbohydr. Res.-1995.-V. 275.-P. 155-165.

24. Bhattacharjee S.S., Timell Т.Е. A study of the pectin present in the bark of amabilis fir {¿hiesAmabiUs) // Can. J. Chem.-1964.-V. 43.-P. 758-765.

25. Aspinall G.O., Fanshawe R.S. Pectic substances from lucerne (Medicago sativd). Part I. Pectic acid // J. Chem. Soc.-1961.-P. 4215-4225.

26. Aspinall G.O., Jiang K.-S. Rapeseed hull pectin // Carbohydr. Res.-1974.-V. 38.-P. 247-255.

27. Kiyohara H., Yamada H. Characterization of methyl-ester distributions in galacturonan regions of complement activating pectins from the roots of angelica-acutiloba kitagawa //157

28. Carbohydr. Polym.-1994.-V. 25.-P. 117-122.

29. Mort A. J., Qiu F.j Maness N.O. Determination of the pattern of methyl esterification in pectin-distribution of contiguous nonesterified residues if Carbohydr. Res.-1993.-Y. 247.-P. 21-35.

30. Vries J.A. Structural features of appel pectic substances / Proefscrift, Wageningen,-1983.-294 P.

31. Walter R. (Ed) The chemistry and technology of pectin.-Academic Press, London-1991.-87 P.

32. Arslan N. Extraction of pectin from sugar-beet pulp and intrinsic viscosity molecular weight relationship of pectin solutions // J. Food Sci. Tech.-1995.-V. 32.-P. 381-385.

33. RenardM.G.H., Thibault J.-F. Structure and properties of apple and sugar-beet pectins extracted ba chelating-agents.// Carbohydr. Res.-1993.-V. 244.-P. 99-114.

34. Komalavilas P., Mort A.J. The acetylation at 0-3 of galacturonic acid in the rhamnose-rich portion of pectins. // Carbohydr. Res.-1989.-Y. 189.-P. 261-272.

35. Rihouey C., Morvan C., Borissova I., Jauneau A., Demarty M., Jarvis M. Structural features of CDTA-soluble pectins from flax hypoeotyls. // Carbohydr. Polym.-1995.-V. 28.-P. 159-166.

36. Renard C.M.G.C., Crepeau M.J., Thibault J.F. Glucuronic acid directly linked to galacturonic acid in the rhamnogalacturonan backbone of beet pectins. // Eur. J. Biochem.-l999.-V. 266.-P. 566-574.

37. Carpita N.C., Gibeant D.M. Structural models of primary-cell walls in flowering plants-consistency of molecular-structure with the physical-properties of the walls during growth. // Plant J.-1993.-V. 3.-P. 1-30.

38. Lau J.M., McNeil M., Darvill A.G., Albersheim P. Structure of the backbone of rhamnogalacturonan-I, a pectic polysaccharide in the primary-cell walls of plants. // Carbohydr. Res.-l985.-V. 137.-P. 111-125.

39. Schols H.A., Voragen A.G.J. Hairy (ramified) regions of pectins. 4. Occurrence of158pectic hairy regions in various plant-cell wall materials and their degradability by rhamnogalacturonase // Carbohydr. Res.-1994.-V. 256.-P. 83-95.

40. McNeil M., Darvill A.G., Albersheim P. Structure of plant-cell walls. 10. Rhamnoga-lacturonan-I, a structurally complex pectic polysaccharide in the walls of suspension-cultured sycamore cells//Plant Physiol.-1980.-V. 66.-P. 1128-1134.

41. Lerouge P., O'Neill M.A., Darvill A.G., Albersheim P. Structural characterization of endo-glycanase-generated oligoglycosyl side-chains of rhamnogalacturonan I // Carbohydr. Res.-1993.-V. 243.-P. 359-371.

42. Sakamoto T., Sakai T. Protopectinase-T-a rhamnogalacturonase able to solubilize protopectin from sugar-beet//Carbohydr, Res.-1994.-V. 259.-P. 77-91.

43. Yamada H.( Hirano M., Kiyohara H. Studies on antiulcer pectic polysaccharides from Bupleurum-fabatum.2. Partial structure of an antiulcer pectic polysaccharide from roots of Bupkurum-falcatum L // Carbohydr. Res.-1991.-V. 219.-P. 173-192.

44. Yamada H.> RaK.-S., Kiyohara H., Cyong J.-C., Otsuka Y. Structural charae-terization of an anti-complementary pectic polysaccharide from the roots of Bupleurum-faicatum L. //Carbohydr. Res.-1989.-V. 189.-P. 209-226.

45. Kiyohara H., Yamada H. Studies on polysaccharides from Angelica-acutihba. 10. Structure of an anticomplementary arabinogalactan from the root of Angelica acutihba Utagcma // Carbohydr. Res.-1989.-Y. 193.-P. 173-192.159

46. Eda S., Miyabe K., Akiyaraa Y., Ohnishi A., Kato K. A pectic polysaccharide from cell-walls of tobacco (.Nucotiana-tabacum) mesophyll H Carbohydr. Res.-1986.-V. 158,-P. 205-216.

47. Thomas J.R., Darvill A.G., Albersheim P. Structure of plant-cell walls. 25. Rhamnogalacturonan-I, a pectic polysaccharide that is a component of monocot cellwalls // Carbohydr. Res.-1989.-V. 185.-P. 279-305.

48. Thomas J.R., McNeil M., Darvill A.G., AlbersheimP. Structure of plant-cell walls. 29. Isolation and characterization of wall polysaccharides from suspension-cultured Douglas-fir cells // Plant Physiol.-1987.-Y.83.-P.659-671

49. Redgwell R.J., Melton L.D., Brasch D.J. Cell-wall polysaccharides of kiwifruit (Actinidia dekciosa): chemical features in different tissue zones of the fruit at harvest // Carbohydr. Res.-1988.-V. 182.-P. 241-258.

50. Stevens B.J.H., Selvendran R.R. Structural features of cell-wall polymers of the apple // Carbohydr. Res.-1984.-V. 135.-P. 155-166.

51. KeenanM.N.J., Belton P.S., Matthew J.A., Nowson S.J. A C-13-NMR study of sugar-beet pectin//Carbohydr. Res.-1985.-Y. 138.-P. 168-170.

52. Rombouts F.M., Thibault J.-F. Enzymatic and chemical degradation and the fine-structure of pectins from sugar-beet pulp // Carbohydr. Res.-1986.-V. 154.-P. 189-203.

53. Pressey R., Himmelsbach D.S. C-13-jNMR spectrum of a deuterium-galactose-rich polysaccharide from tomato fruit// Carbohydr. Res.-1984.-V. 127.-P. 356-359.

54. Redgwell R.J., Selvendran R,R. Structural features of cell-wall polysaccharides of160onion Allium cepii Carbohydr. Res.-1986.-Y. 157.-P. 183-200.

55. Bacic A., Harris P. J., Stone B.A. The Biochemistry of Plants. V.14 / Ed. J. Preiss. San Diego: Acad. Press,-1988.-P. 297-371.

56. Rihouey C., Morvan C.„ Borissova I., Jauneau A., Demarty M., Jarvis M. Structural features of CDTA-soiuble pectins from flax hypocotyls // Carbohydr. Polym.-1995.-V. 28.-P. 159-166.

57. Fry S.C. Cross-linking of matrix polymers in the growing cell-walls of angiosperms // Ann. Rev. Plant Physiol.-1987.-V. 37.-P. 165-186.

58. Kobayashi M., Matoh T., Azuma J. Two chains of rhamnogalacturonan-II are cross-linked by borate-diol ester bonds in higher plant cell walls // Plant Physiol.-1996.-V. 110.-P. 1017-1020.

59. Zablackis E., Huang J., Muller B., M,, Darvill A.G., Albersheim P. Structure of plant-cell walls. 34. Characterization of the cell-wall polysaccharides of Arabidopsis-thaliana leaves//Plant Physiol.-1995.-V. 107.-P. 1129-1138.

60. Edashige Y., Ishii T. Rhamnogalacturonan II from cell walls of Cryptomeria japomca If Phytochemistry.-1998,-V. 49.-P. 681-690.71 .Ishii T. Pectic polysaccharides from bamboo shoot cell-walls // Mokuzai gakkaishi 1995.-V. 41.-P. 669-676.

61. Ishii T., Matsunaga T. Isolation and characterization of a boron-rhamnogalacturonan-H complex from cell walls of sugar beet pulp // Carbohydr.Res.-1996.-Y. 284.-P. 1-9.

62. Doco T., Brillouet J.M. Isolation and characterization of a rhamnogalacturonan-II from red wine //Carbohydr. Res.-1993.-V. 243.-P. 333-343.

63. Pellerin P., Doco T., Vidal S., Williams P., Brillouet J.M., ONeill M.A. Structural161characterization of red wine rhamnogalacturonan H // Carbohydr. Res.-1996.-V. 290.-P. 183-187.

64. Whitcombe A.J., O'Neill M.A., Steffan W., Albersheim P., Darvill A.G. Structural characterization of the pectic polysaccharide, rhamnogalacturonan-II // Carbohydr. Res.-1995.-V. 271.-P. 15-29.

65. Stevensos T.T., Mc'Neill M., Darvill A.G., Albersheim P. Structure of plant-cell walls. 28. An analysis of the extracellular polysaccharides of suspension-cultured sycamore cells//Plant Phtysiol.-1986.-V. 80.-P. 1012-1019.

66. Stevensos T.T., Darvill A.G., Albersheim P. Structure of plant-cell walls. 22. 3-deoxy-D-lyxo-2-heptulosaric acid, a component of the plant cell-wall polysaccharide rhamnogalacturonan-H//Carbohydr. Res.-1988.-V. 179.-P. 269-288.

67. Stevensos T.T., Darvill A.G., Albersheim P. Structure of plant-cell walls. 23. Structural features of the plant cell-wall polysaccharide rhamnogalacturonan-II // Carbohydr. Res.-1988.-V. 182.-P. 207-226.

68. Hirano M., Kiyohara H., Yarnada H. Existence of a rhamnogalacturonan-II-like region in bioactive pectins from medicinal herbs ff Planta Med.-1994.-V. 60.-P. 450454.

69. Zhao J.F., Kiyohara H., Yamada H., Takemoto N., Kawamura H. Heterogeneity and characterization of mutogenic and anticomplementary pectic polysaccharides from the roots of Glycyrrhiza-uralsnsis fisch et dc If Carbohydr. Res.-1991 .-V. 219.-P. 149-172.

70. Aldington S., Fry S.C. Rhamnogalacturonan-ll-a biologically-active fragment // J. Exp. Bot.-1994.-V. 45.P. 287-293.

71. Karkhanis Y.D., Zeltner J.Y., Jackson J.J., Carlo D.J. New and improved microassay to determine 2-keto-3-deoxyoctonate in lipopolysaccharide of gram-negative bacteria // Anal. Biochem.-l 978.-V. 85.-P. 595-601.

72. Melton L.D., McNeil M., Darvill A.G., Albersheim P., Dell A. Structure of plant-cell walls. 17. Structural characterization of oligosaccharides isolated from the pectic polysaccharide rhamnogalacturonan-n//Carbohydr. Res.-1986.-V, 146.-P. 279-305.

73. Matoh T., Ishigaki K.I., Ohno K., Azuma J.L. Isolation and characterization of a boron-polysaccharide complex from radish roots U Plant Cell Physiol.-1993.-V. 34.-P. 639642.

74. Shimokawa T., Ishii T., Matsunaga T. Isolation and structural characterization of rhamnogalacturonan 11-borate complex from Pinus densiflora // J. of Wood science.-1999.-V. 45 .-P. 435-439.

75. Loomis W.D., Durst R.W. Chemistry and biology of boron // Biofactors.-1992.-V. 3.-P. 229-239.

76. Welch R.M. Micronutrient nutrition of plans// Crit. Rev. Plant Sci.-1995.-V. 14.-P. 4916382.

77. Aspinall G.O., Hunt K., Morrison I.M. Polysaccharides of soy-beans. Part V. Acid polysaccharides from the hulls // J. Chem. Soc.-1967.-P. 1080-1086.

78. Voragen A.G.J., Schols H.A., Gruppen H. Plant Polymeric Carbohydrates / Esd F. Meuser, D.J. Manners, W. Seibel. Cambridge, UK: Royal Soc. Chemistry,-1993.-P. 315.

79. Schols H.A., Bakx E.J., Schipper D., Voragen A.G.J. A xylogalacturonan subunit present in the modified hairy regions of apple pectin // Carbohydr. Res.-1995.-V. 279.-P. 265-279.

80. Kikuchi T., Sugimoto H. Studies on polysaccharides from soy sauce. 5. Detailed structure of an acidic polysaccharide in soy sauce, confirmed by use of 2 kinds of purified pectinases // Agr. Biol. Chem.-1976.-V. 40.-P. 87-92.

81. Weightman R.M., Renard C.M.G.C., Thibault J.F. Structure and properties of the polysaccharides from pea hulls. 1. Chemical extraction and fractionation of the polysaccharides//Carbohydr. Polym.-1994.-V. 24.-P. 139-148.

82. De Vries J.A. Gums and Stabilizers for the Food Industry / Eds G.O.Philips, D.J.Wedlok, P.A.Williams. Oxford: IRLPressr^SS.-P. 25-29.

83. Schols H.A., Voragen A.G.J. Pectins and Pectinases / Eds J.Visser, A.G.J.Voragen. Amsterdam: Elsevier,-1996.-P. 3-19.lOS.Fishman M.L., Cooke P., Hotchkiss A., Damert W. Progressive dissociation of pectin //Carbohydr. Res.-1993.-V. 248.-P. 303-316.

84. Walkinshaw M.D., Araott S. Conformations and interactions of pectins. 2. Models for junction zones inpectinic acid and calcium pectate gels // J. Mol. Biol.-1981.-V. 53.-P. 1075-1085.

85. Kirby A.R., Gunning A.P., Morris V.J. Imaging polysaccharide by atomic force microscopy//Biopolymers.-1996.-V. 38.-P. 354-366.

86. Jarvis M.C., Apperley D.C. Chain conformation in concentrated pectic gels-evidence from C-13 NMR// Carbohydr. Res.-1995.-V. 275.-P. 131-145.

87. Axelos M.A.V., Thibault J.F. Influence of the substituents of the carboxyl groups and of the rhamnose content on the solution properties and flexibility of pectins // Int. J. Biol. Macromol.-l991.-V. 2.-P. 77-82.

88. Axelos M.A.V., Lefebvre J., Thibault J.F. Conformation of a low methoxyl citrus pectin in aqueous solution // Food Hydrocolloids.-1987.-V. 1 .-P. 569-570.

89. Axelos M.A.V., Thibault J.F., Lefebvre J. Structure of citrus pectins and viscometric study of their solution properties//Int. J. Biol. Macromol.-l 989.-V. 3.-P. 186-191.

90. Cesaro A., Ciana V., Delben V., Manzini V., Paoletti S. Physicochemical properties of pectin acid. I. Thermodynamic evidence of the pH-induced conformational transition in aqueous solution//Biopolymers.-1982.-V. 21.-P. 431-449.

91. Harding S.E., Berth G., Bali A., Mitchell J.R., Garcia de la Torre J. The molecular weight distribution and conformation of citrus pectins in solution studied by hydrodynamics // Carbohydr. Polym.-1991.-V. 16.-P. 1-15.

92. Hourdet D., Muller G. Solution properties of pectic polysaccharides. П. Conformation and molecular size of high polygalacturonic acid content isolated pectin chains // Carbohydr. Polym.-1991.-V. 16.-P. 113-135.

93. Malovikova A., Milas M.„ Rinaudo M., Borsali R., Viscosimetric behavior of sodium polygalacturonate in the presence of low salt content // Am. Chem. Soc. Symp. Ser.-1994.-V. 548.-P. 315-321.

94. Catoire L., Derouet C., Redon A.M., Goldberg R., Herve du Penhoat C. An NMR study of dynamic single-stranded conformational of sodium pectate // Carbohydr. Res.-1997.-V. 300.-P. 19-29.

95. Catoire L., Goldberg R., Pierron M., Morvan C., Herve du Penhoat // An efficient procedure for studying pectin structure which combines limited depolymerization and 13C NMR//Eur. Biophys. J.-1988.-V. 27.-P. 127-136.

96. Grasdalen H., Kvam B.J. 23Na NMR in aqueous solutions of sodium polyuronates. Counterions binding and conformational conditions // Macromolecule.-1986.-V. 19.-P. 1913-1920.

97. Ravanat G., Rinaudo M. Investigation on oligo- and polygalacturonic acid by potentiometry and circular dichroism//Biopolymers.-1980.-V. 19.-P. 2209-2222.

98. Cros S., du Penhoat H., Bouchemal N., Ohassan H., Imberty A., Perez S. Solution conformation of a pectin fragment disaccharide using molecular modelling and nuclear magnetic resonance // M. J. Biol. Macromol.-1992.-V. 14.-P. 313-320.

99. Axelos M.A.V., Gamier C., Renard С., Thibault J.F. Interactions of pectins with multivalent cations: phase diagrams and structural aspects / In Pectins and Pectinases,-J.Visser, A.G.J.Voragen (Eds),-Elsevier Science,-1996.-P. 34-45.

100. Стоддарт Д. Стереохимия углеводов / Под ред. Ю.А.Жданова,-М.: Мир,-1975.-140 С.

101. Di Nola A., Fabrizi G., Lamba D., Segre A.L. Solution conformation of a pectic acid fragment by H-l-NMR and molecular-dynamics // Biopolymers.-1994.-V. 34.-P. 457462.

102. Gouvion C., Mazeau K., Heyraud A., Taravel F.R., Tvaroska. I. Conformational study of digalacturonic acid and sodium digalacturonate in solution // Carbohydr. Res.-1994.-V. 261.-P. 187-202.

103. Ruggiero J.R., Urbani R., Cesaro A. Conformational features of galacturonans. 1. Structure and energy minimization of charged and uncharged galacturonan dimeric units //Int. J. Biol. Macromol.-1995.-V. 17.-P. 205-212.

104. Braccini I., Grasso R.P., Perez S. Conformational and configurational features of acidic polysaccharides and their interactions witn calcium ions: a molecular modeling investigation // Carbohydr. Res.-1999.-V. 317.-P. 119-130.

105. Walkinshaw M.D., Arnott S. Conformations and interactions of pectins. 1. X-RAY-diffraction analyses of sodium pectate in neutral and acidified forms // J. Mol. Biol.-1981.-V. 153.-P. 1055-1073.

106. Brodhurst M., Cros S., Hoffman R., Mackie W., Perez S. Modeling a pentasaccharide fragment of ramnogalacturonan / In Pectins and Pectinases,-J.Visser, A.G.J.Yoragen (EdsX-Elsevier Science,-1996.-P. 517-525.

107. Perez S., Mazeau K., du Penhoat C.H. The three-dimensional structures of the pectic polysaccharides // Plant physiology and bioehemistry.-2000.-V. 38.-P.37-55.

108. Kouwijzer M., Schols H., Perez S. Acetylation of rhamnogalacturonan I ana gomogalacturonan; Theoretical calculations / In Pectins and Pectinases,-J.Visser, A.G.J.Voragen (Eds),-Elsevier Science,-1996.-P. 57-65.

109. Thakur B.R., Singh R.K., Handa A.K. Chemistry and uses of pectin // Crit. Rev. Food Sci. Nutr.-1997.-V. 37.-P. 47-73.

110. Dheu-Andries M.L., Perez S. Geometrical features of calcium carbohydrate interactions // Carbohydr. Res.-1983.-V. 124.-P. 324-332.

111. Alagna L., Prosperi T.s Tomlinson A.A.G., Rizzo R. Extended X-ray Absorption Fine structure investigation of solid and gel forms of calcium poly (a-D-galacturonan) // J.167

112. Phys. Chem.-1986.-V. 90.-P. 6853-6857.

113. Morris E.R., Powell D.A., GidleyM.J., Rees D.A. Conformations and interactions of pectins. 1. Polymorphism between gel and solid states of calcium polygalacturonate // J. Mol. Biol.-1982.-V. 155.-P. 507-516.

114. Jarvis M.C. Structure and properties of pectin gels in plant-cell walls // Plant Cell Environ.-l984.-V. 7.-P. 153-164.

115. Darvill A.G., McNeil M., Albersheim P. Structure of plant cell walls: a new pectic polisaccharides // Plant Physiol.-1978.-V. 62.-P. 418-422.

116. Mazeau K., Perez S. The preferred conformations of the four oligomeric fragments of Rhamnogalacturonan П Jf Carbohydr. Res.-1998.-V. 311.-P. 203-217.

117. Perez S., Delage M.M. A database of 3-dimensional structures of monosaccharides from molecular-mechanics calculations if Carbohydr. Res.-1991.-V. 212.-P. 253-259.

118. Mikol V., Kosma P., Brade H. Crystal and molecular-structure of ally. 0-(sodium-3-deoxy-alpha-D-manno-2-octulopyranosylonate-(2-]8)-0-(sodium-3-deoxy-alpha-D-manno-2-octulopyranosidonate)-monohydrate if Carbohydr. Res.-1994.-V. 263.-P. 3542.

119. Thibault J.F., Renard C.M.G.C., Axelos M.A.V., Roger P., Crepeau M.J. Studies of the length of homogalacturonic regions in pectins by acid-hydrolysis // Carbohydr. Res.-1993.-V. 238.-P. 271-286.

120. Kravtchenko T.P., Penci M., Voragen A.G.J., Pilnik W. Enzymatic and chemical degradation of some industrial pectins if Carbohyd. Polym.-1993.-V. 20.-P. 195-205.152.0бщая органическая химия / Под ред. Н.К.Кочеткова.-М.: Химия, 1986.-Т. 11.168227 C.

121. An J.H., Zhang L., O'Neill M.A., Albersheim P., Darvill A.G. Isolation and structural characterization of endo-riiamnogalacturonase-generated fragments of the backbone of rhamnogalacturonan-I // Carbohyd. Res.-1994.-V. 264.-P. 83-96.

122. BeMiller J.N. An introduction to pectins structure and properties // ACS Symp. Ser.-1986.-V. 310.-P. 2-12.

123. Kohn R.„ Furda I Distribution of free carboxyl groups in the molecule of pectin after esterification of pectin and pectinic acid by methanol // Collect. Czech. Chem. Commun.-1969.-V. 34.-P. 641-648.

124. Kratchanov С., Denev P., Kratchanova М. Reaction of appel pectin with ammonia // biter. J. Food Sci. Techn.-1989.-V. 24.-P. 261-267.

125. Sinitsya A., Copikova J., Prutyanov V., Skoblya S., Machovic V. Amidation of highly methoxylated citrus pectin with primary amines // Carbohyd. Polym.-2000.-V. 42.-P. 359-368.

126. Аймухамедова Г.Б., Ашубаева З.Д., Умаралиев Э.А. Химическая модификация пектиновых веществ / Фрунзе: Илим.-1974.-194 С.

127. Kohn R. Ion binding on polyuronates alginate and pectin // Pure Appl. Chem.-1975.-V. 42.-P. 371-397.

128. Rees D.A. // In M.T.P. International Review of Science. Biochemistry Series.-1975.-V. 5. Biochemistry of Carbohydrates. P.l. Butterworths, London and University Park Press, Baltimore, MD.-l 65 P.

129. Rees D.A. Polysaccharide shapes and their interactions some recent advances // Pure Appl. Chem.-1981.-V. 53.-P. 1-14.

130. Rees D.A., Welsh E.J. Secondary and tertiary structure of polysaccharides in solutions and gels // Angew. Chem. Intern. Ed. Engl.-1977.-V. 16.-P. 214-223.

131. Morris E.R., Norton I.I // In Aggregation Processes in Solution. -1983.-Jones E.W., Gormaly J., Elsevier Science Publishing Co., Amsterdam. 549 P.

132. Cesaro A., Delben F., Paoletti S. Interaction of divalent-cations with polyuronates // JCS Faraday Transactions 1.-1988.-V, 84.-N 8.-P. 2573-2584.

133. Smidsrod O., Haug A. Dependence upon the gel-sol state of the ion-exchange properties of alginates // Acta Chem. Scand.-1972.-V. 86.-P. 2063-2074.

134. Thorn D., Grant G.T., Morris E.R., Rees D.A. characterization of cation binding and170gelation of polyuronates by circular-dichroism // Carbohyd. Res,-1982.-V. 100.-P. 29-42.

135. Laing J.N., Stevens E.S., Frangou S., Morris E.R., Rees D.A. Cation-specific vacuum ultraviolet circular-dichroism behavior of alginate solutions, gels and solid films // Int. J. Biol. Macromol.-1980.-V. 2.-P. 204-208.

136. Braudo E.E., Soshinsky A.A., Yuryev V.P., Tolstoguzov V.B. The interaction of polyuronides with calcium ions. 1: binding isotherms of calcium ions with pectic sudstances//Carbohydr. Polym.-1992.-V. 18.-P. 165-169.

137. Kohn R., Larsm B. Preparation of water-soluble polyuronic acid and their calcium salts, and the determination of calcium ion activity in relation to the degree of polymerization // Acta Chem. Scand.-1972.-V. 26.-P. 2455-2468.

138. Angyal S.J. Haworthmemorial lecture sugar-cation complexes - structure and applications//Chem. Soc. Rev.-1980.-V. 9.-P.415-428.

139. Poonia N.S., Bajaj A.V. Coordination chemistry of alkali and alkaline-earth cations // Chem. Rev.-1979.-V. 79.-P. 389-445.

140. Алексеев Ю.Е., Гарновский А.Д.„ Жданов Ю.А. Комплексы природных углеводов с катионами металлов / Успехи химии.-1998.-Т. 67.-С. 723-744.

141. Smidsrod О., Haug A., Whittington S.G. The molecular basis for some physical properties of polyuronides // Acta Chem. Scand.-1972.-V. 26.-P. 2563-2570.

142. Kohn R. Binding of divalent-cations to oligomeric fragments of pectin // Carbohyd. Res.-1987.-V. 160.-P. 343-353.

143. Kohn R. Binding of lead cations to oligogalacturonic acids // Collect. Czech. Chem. Commun.-1982.-V. 47.-P. 3424-3431.171

144. Malovikova A., Kohn R, Binding of lead and chromium (HI) cations to pectin // Collect. Czech. Chem. Commun.-1979.-V. 44.-P. 2915-2927.

145. Cesaro A., Delben F., Flaibani A., Paoletti S. The interaction of lead (II) with glycuronans-UV absorption and circular dichroism spectra // Carbohyd. Res.-1988.-V. 181.-P. 13-21.

146. Aruga R. Structure of the galacturonate and glucuronate complexes with copper (U) in aqueous-solution a calorimetric study//Bull. Chem. Soc. Jpn.-1981.-V. 54.-P. 12331235.

147. DebongnierP., MestdaghM. An Electron-paramagnetic-res. and potentiometric study the complexation of copper ion by galacturonic acid and galacturonans // Carbohyd. Res.-1987.-V. 170.-P. 137-149.

148. Reisenhofer E., Cesaro A., Delben F., Manzini G., Paoletti S. Copper (0) binding by natural ionic polysccharides. 2. Polarographic data // Bioelectrochem. Bioenerg.-1984.-V. 12.-P. 455-465.

149. Manzini ,G-> Cesaro A., Delben F., Paoletti S., Reisenhofer E. Copper (H) binding by natural ionic polysccharides. 1. Potentiometric and spectroscopic data // Bioelectrochem. Bioenerg.-1984.-V. 12.-P. 443-454.

150. Malovikova A., Kohn R. Binding of cadmium cations to pectin // Collect. Czech. Chem. Commun.-1982.-V. 47.-P. 702-708.

151. Malovikova A., Kohn R. Binding of zinc cations to pectin and oligomeric fragments // Collect. Czech. Chem. Commun.-1983.-Y. 48.-P. 3154-3165.

152. Branca NÏ., Micera G., Dessi A. Reduction of chromium (VI) by D-galacturonic acid and formation of stable chromium (V) intermediates // Inorg. Chem. Act.-Bioinorg. Chem.-1988.-V. 153.-P. 61-65.

153. Deiana S., Erre L., Micera G., Piu P., Gessa C. Coordination of transition-metal ions by polygalacturonic acid-a spectroscopic study // Inorg. Chem. Act.-Bioinorg. Chem.-1980.-V. 46.-P. 249-253.

154. Anthonsen T., Larsen B., Smidsrod O. NMR-studies of the interaction of metal-ions with poly-(l.,4-hexuronates). I. Chelation of Europium ions by D-galacturonic acid // Acta Chem. Scand.-1972.-V. 26.-P. 2988-2989.

155. Samuelsen A.B., Paulsen B.S., Wold J.K., Otsuka H.> Kiyohara H., Yamada H.„ Knutsen S.H. Characterization of a biologically active pectin from Plantago major L. // Carbohydr. Polymer.-1996.-V. 30.-P. 37-44.

156. Sun X.B., Matsumoto Т., Yamada H. Anti-ulcer activity and mode of action of the polysaccharide fraction from the leaves of panax ginseng // Planta Med-1992.-V. 58.-P. 432-435.

157. Sun X.B., Matsumoto Т., Yamada H. Effects of a polysaccharide fraction from the roots oi Buphurum falcatum L. on experimental gastric-ulcer models in rats and mice // J. Pharm. Pharmacol.-1991 .-V. 43.-P .699-704.

158. Shin K.S., Kiyohara H., Matsumoto Т., Yamada H. Rhamnogalacturonan П from the leaves of Panax ginseng C. A. Meyer as a macrophage Fc receptor expression-enhancing polysaccharide//Carbohydr. Res.-1997.-V. 300.-P. 239-249.

159. Smee D.F., Verbiscar A.J. Effects of plant derived polysaccharides on murine cytomegalovirus and encephalomyocarditis virus infections in mice // Antiviral Chem. Chemother.-1995.-Y. 6.-P. 385-390.

160. Kiyohara H.„ Hirano M., WenX.G., Matsumoto Т., Sun X.B., Yamada H. Characterization of an antiulcer pectic polysaccharide from leaves of Panax-gimeng Ca-meyer // Carbohydr. Res.-1994.-Y, 263.-P. 89-101.

161. Matoh Т., Takasaki М., Takabe К., Kobayashi М. branunocytochemistry of rhamnogalacturonan П in cell walls of higher plants // Plant and Cell Physiol.-1998.-V. 39.-P. 483-491.

162. Tahiri M., PellerinP., Tressol J.C., Doco Т., Pepin D.„ Rayssiguier Y., Coudray C. The rhamnogalacturonan-П dimer decreases intestinal absorption and tissue accumulation of lead in rats // J. Nutrition.-2000.-V. 130.-P. 249-253.

163. Inohara H., Raz A. Effects of natural complex carbohydrate (citrus pectin) on murine melanoma cell properties related to galectin-3 functions // Glycoconj. J.-1994.-V. 11.-P. 527-532.

164. Platt D., Raz A. Modulation of the lung colonization of B16-F1 melanoma cells by citrus pectin//J. Natl. Cancer. lnst.-1992.-V. 84.-P. 438-442.

165. Hynes R.O. Integrins versatility, modulation and signaling in cell adhesion // Cell.-1992.-V. 69.-P. 11-25.

166. Raz A., Meromsky L., Lotan R. Differential expression of endogenous lectins on the surface of nontumorigenic, tumorigenic, and metastatic cells // Cancer Res.-1986.-V. 46.-P. 3667-3672.

167. Raz A., Bucana C., McLellan W., Fidler I.J. Distribution of membrane anionic sties on B-16 melanoma variants with differing lung colonizing potential // Nature.-1980.-V. 284.-P. 363-364.

168. Nosalova G., Strapkova A., Kardosova A., Capek P. Antitussive activity of a rhamnogalacturonan isolated from the roots of Althaea officinalis L, Var robusta // J. Carbo-hydr. Chem.-1993.-V. 12.-P. 589-596.

169. Darvill A.G., Albersheim P. Phytoalexins and their elicitors a defense against microbial infection in plants // Ann. Rev. Plant Physiol. Mol. Biol.-1984.-V. 35.-P. 243275.

170. Garcia-RomeraI., Fry S.C. The longevity of biologically-active oligogalacturonides in rose cell cultures: Degradation by exo-polygalacturonase // J. Exp. Bot.-1995.-V. 46.-P. 1853-1857.

171. Ryan C.A., Farmer E.E. Oligosaccharide signals in plants a current assessment // Ann. Rev. Plant Physiol. Mol. Biol.-1991.-V. 42.-P. 651-674.

172. Yamada H. Pectic polysaccharides from Chinese herbs structure and biological activity//Carbohydr. Polymer.-1994.-V. 25.-P. 269-276.

173. Yamada H,, Kiyohara H., Cyong I.e., Otsuka Y. Studies on polysaccharides from Angelica-acutibba. 4. Characterization of an anti-complementary arabinogalactan from the roots of Angelica-acutibba kiiagawa // Mol. Immunol.-1985.-Y. 22.-P. 295-304.

174. Wang N.L., Kiyohara H., Matsumoto T.„ Otsuka H., Hirano M., Yamada H Polyclonal antibody against a complement activating pectin from the toots of Angelica-acutibba II Planta Med.-1994.-V. 60.-P. 425-429.

175. Zhang Y.W., Kiyohara H., Matsumoto T., Yamada H. Fractionation and chemical properties of immunomodulating polysaccharides from roots of Dipsocus asperoides // Planta Med.-1997.-V. 63.-P. 393-399.

176. Wang N.L., Kiyohara H., Sakurai M.H., Yamada H. Antigenic epitope for polyclonal antibody against a complement activating pectin from the roots of Angelica acutiloba Kitagawa // Carbohydr. Polymer.-1999.-V. 39.-P. 257-264.

177. Stefifan W., Kovac P., Albersheim P., Darvill A.G., Hahn M.G. Characterization of monoclonal antibody that recognizes an arabinosylated (1 ->6)-beta -D-galactan epitope in plant complex carbohydrates // Carbohydr. Res.-1995.-V. 275.-P. 295-307.

178. Dogasaki C., Nishijima M., Ohno N., Yadomae T., Miyazaki T. Architecture of Alkaline-soluble and bioactive polysaccharide from the kernels of Prunus mume Sieb et Zucc assessed by anti P-l antibody // Biosci. Biotech. Biochem.-1996.-V. 60.-P. 8311836.

179. Sakurai M.H., Matsumoto T., Kiyohara H.„ Yamada H. Detection and tissue distribution of anti-ulcer pectic polysaccharides from Bupleurum falcatum by polyclonal antibody //Planta Med.- 1996.-V. 62.-P. 341-346.

180. Sugiyama K., Ueda H., Ichio Y.> Yokota M. Improvement of cisplatin toxicity and le-thalyty by "Juzen-Taiho-To" im mice // Biol. Pharm. Bull.-1995.-V. 18.-P. 53-58.

181. Nakano M., Itoh Y., Mizuno Т., Nakashima H. Polysaccharide from Aspalathus linearis with strong anti-HIV activity // Biosci. Biotech. Biochem -1997.-V. 61 .-P. 267271.

182. May C. D. Industrial pectins: sources, production and applications // Carbohydrate Polymers.-1990.-V. 12.-P. 79-99.

183. Marry M., McCann M.C., Kolpak F., White A.R., Stacey N.J., Roberts K. Extraction of pectic polysaccharides from sugar-beet cell walls // J. Scien. Food and Agricul.-2000.-У. 80.-P. 17-28.

184. Becker R., Wheeler E.L., Lorenz K., Stafford A.E., Grosjean O.K., Betschart A.A., Saunders R.M. A compositional study of amaranth grain // J. Food Sci.-1981 .-V. 46.-P. 1175-1180.

185. Bressani R., Gonzales J.M., Zuniga J., Breuner M., Elias L.G. Yield, selected chemical composition and nutritive value of 14 selections of amaranth grain representing four species // J. Sci. Food Agric.-1987.-V. 38.-P. 347-356.

186. Pedersen В., Kalinowski L. S., Eggum B.O. The nutritive value of amaranth grain (Amaranthus candatus). I. Protein and minerals of raw and processed grain // Qualitas Plantarum.-1987.-V. 36.-P. 309-324.

187. Teutonico R.A., Knorr D. Amaranth: Composition, properties and applications of a rediscovered food crop // Food Technology.-1985.-V. 39.-P. 49-60.

188. Коновалов А.И., Офицеров E.H., Карасева A.H., Хазиев Р.Ш., Карлин В.В. /

189. Способ получения рутина из надземных частей амаранта / Патент РФ №20412326.-1995г.251 .В.В.Коновалов А.И., Офицеров Е.Н., Соснина Н.А., Хазиев Р.Ш., / Способ получения пектина из надземных частей амаранта / Патент РФ №2101294.-1998г.

190. Коновалов А.И., Офицеров Е.Н., Соснина Н.А.,.Шекуров В.Н, Цепаева О .В., Лапин А.А., Минзанова С.Т., Бережной А.Н., Мутрисков А.Я. / Способ получения пектина / Патент РФ №2119497.-1998г.

191. Kacurakova М.> Capek P., Sasinkova V., Wellner N., Ebringerova A. FT-1R study of plant cell wall model compounds: pectic polysaccharides and hemicelluloses // Carbohydr. Polym.-2000.-V. 43.-P. 195-203.

192. Coimbra M.A., Barros A., Rutledge D.N., Delgadillo I. FT-IR spectroscopy as a tool for the analysis of olive pulp cell-wall polysaccharide extracts // Carbohydr. Res.-1999.-V. 317.-P. 145-154.

193. McCann M.C., Hammouri R, WilsonR, Belton P., Roberts K. Fourier-transform infrared microspectroscopy is a new way to look at plant cell walls // Plant Physiol.-1992.-V. 100.-P. 1940-1947.

194. Coimbra M.A., Barros A., Barros M., Rutledge D.N.? Delgadillo I. Multivariate analysis of uronic acid and neutral sugars in whole pectic samples by FT-IR spectroscopy // Carbohydr. Polym.-1998.-V. 37.-P. 241-248.

195. Westerlund E., Aman P., Andersson R., Andersson RE., Chemical characterization of water soluble pectin in papaya fruit // Carbohydr. Polym.-1991 .-V. 15.-P. 67-78.

196. Westerlund E., Aman P., Andersson R.E., Andersson R. Investigation of the distribution of methyl ester groups in pectin by high-field 13C NMR // Carbohydr. Polym.-1991.-V. 14.-P. 179-187.

197. Shashkov A.S., Senchenkova S.N., Nazarenko E.V., Zubkov V.A., Gorchkova N.M., Knirel J.A., Gorchkova R.P. Structure of the acidic polysaccharide chain of the lipopolysacchride of shewanella alga 48055 // Carbohydr. Res.-1998,-V. 309.-P. 103108.

198. Shashkov A.S., Arbatsky N.P., Gedzynski M.s Kaca W., Knirel J.A. Structure of an acidic O-specific polysaccharide of proteus mirabilis 05 // Carbohydr. Res.-1999.-V, 319.-P. 199-203.

199. Горшкова Р.П., Назаренко E.JL, Зубков B.A., Степаненко Л.С., Исаков В.В. Структурное исследование полисахаридов лишайников Cetraria cucullata и С. islandica //Биоорг. химия.-1997.-Т. 23.-№2,-С. 134-138.

200. Vinigradov Е., Воск К. Structural determination of some new oligosaccharides and analysis of the branching pattern of isomaltooligosaccharides from beer // Carbohydr. Res.-1998,-V. 309.-P. 57-64.

201. Perlin A.S., Casu В., Koch H.J. Configurational and conformational influences on the carbon-13 chemical shifts of some carbohydrates // Canad. J. Chem.-1970.-V. 48.-№ 16.-P. 2596-2606.

202. Gorin P.A.J., Mazurek M. Further studies on the assignment of signals in 13C magnetic resonance spectra of aldoses and derived methyl glycosides // Canad. J. Chem.-1975.-V. 53.-№ 8.-P. 1212-1223.

203. Dorman D.E., Roberts J.D. Nuclear magnetic resonance spectroscopy, Carbon-13 spectra of some pentose and hexose aldopyranoses // J. Amer. Chem. Soc.-1970.-V. 92.-№ 5.-P. 1355-1361.

204. Schwarcz J.A., Perlin A.S, Orientational dependance of vicinal geminal 13C-*H coupling // Canad. J. Chem.-1972.-Y. 50.-№ 22.-P. 3667-3676.

205. Breitmaier E., Voelter W. Carbon-13 NMR spectroscopy, High-resolution methodsand applications in organic chemistry and biochemistry ii Third ed., YCH Verlag. -1987.-Weinkeim, New-Jork, 515 P.

206. Общая органическая химия, M., Хмимя-1986-C. 148-150.

207. Hayes F.N., King L.C., Peterson D.E. // J. Amer. Chem. Soc.-1956.-V. 78. P. 25272528.

208. Breitmaier E., Voelter W. Carbon-13 NMR Spectroscopy. High-Resolution Methods and Applications in Organic Chemistry and Biochemistry. VCH Verlag, 1987. Weinheim, New-York, 515 P.

209. Денисов А.Ю., МаматюкВ.И. Спин-спиновое взаимодействие 13С-13С и ^С-'Н в спектрах ЯМР органических соединений. Новосибирск, Новосиб. институт орг. хим. СО АН СССР: 1989.-С. 366-389.

210. Лапин A.A., Коновалов А.И., Мустафин И.Г., Романенко О.М., Соснина H.A. Корректировка минерального состава крови пектиновыми веществами // IV Российский национальный конгресс "Человек и лекарство". 8-12 апреля-1997. Москва, С. 167.

211. Munoz A., Bernard G., Roberts W. Preparation de composes du phosphore tri- et pentacoordine a partir D hydroxyacides et D aminoacides // Phosphorus Sulfur-1978.-V. 4.-P. 47-52.

212. Фомин A.B., Коломиец А.Ф., Комаров B.A., Рапкин А.И., Кролевец A.A., Пасе