Фитоэкдистероиды растений рода Silene tomentella, Rhaponticum carthamoides и метаболиты экдистерона тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

АКАДЕМИЯ 11ЛУК РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН ИНСТИТУТ БИООРГАНИЧЕСКОЙ ХИМИИ им. АКАДЕМИКА А.С. СЛДЫКОВА

На правах рукописи

УДК 547.926

Рамазонов Нурмурод Шсралпсвич

ФИТОЭКДИСТЕРОИДЫ РАСТЕНИЙ РОДА БИепе ЬотеЫсИа, ЛИаропИсит саННатохйсз И МЕТАБОЛИТЫ ЭКДИСТЕРОНА

02.00.10 - "Биооргаиическая химия, химия природных и физиологически активных веществ"

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата химических наук

ТАШКЕНТ - 1998

Работа выполнена в ордена Трудового Красного Знамени Институте химии растительных веществ АН Республики Узбекистан.

Научный руководитель:

доктор химических наук 3. СААТОВ

Официальные оппоненты:

доктор химических наук, проф. Р.Ш. ШЛКИРОВ кандидат химических наук, старший научный сотрудник Ш.Ю. ИСЛАМБЕКОВ

Ведущая организация:

Ташкентский Фармацевтический институт

Защита состоится " iO" J/Afcfß^- 1998 г. в ^£<часов иг заседании Специализированного Совета Д 015.21.01 при Институте биоорганической химии им. академика Садыкова A.C. АН РУз не адресу: 700143, Ташкент, ул. X. Абдуллаева, 83). * ..

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Институт; биоорганической химии им. акад. Садыкова A.C. АН РУз.

Автореферат разослан " ty " Cpififul1998 г.

Ученый секретарь

Специализированного Совета ^__

доктор химических наук, профессор II.И. Б АР АР«'

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Среди разнообразных низкомолекуляр-ых биологически активных веществ, синтезируемых растениями, аметное место занимают зкдистеронды. В растительных объектах ни содержатся в значительно больших количествах, чем у ленистоногих, в которых они были впервые обнаружены в качестве ормонов линьки и метаморфоза и, по всей видимости, играют начительнуго роль в экологической системе растения - насекомые. Е>итоэкднстероиды по химической природе очень разнообразны и иироко распространены в растительном мире.

Выяснено, что экдистероиды проявляют различные виды ¡иологической активности. Они обладают тонизирующим эффектом, наболическим, гипогликемнческим, гепатопротекторным, адапто-енным, антиоксидантным действием, а также положительно влияют гри лечении миокардита, атеросклероза и переломов костей. При том не обнаруживают каких-либо гормрнальных и токсических |ффектов.

Актуальной задачей современной биоорганической химии шляется: поиск новых растительных объектов, богатых 1Кдистероидами; разработка рациональных схем выделения этих :оединений; установление строения; определение физико-симических характеристик и выявление физиологической активности ювых веществ и разработка на их основе новых лекарственных фепаратов.

Цель работы. Выделение и изучение структуры гормонов щньки насекомых и их производных из растении БИспе 1отс)йс11а и :емян НЬаропНсит сагИштоЫс5; разработка методов выделения шдивидуальных компонентов и доказательство их строения; шявление доступного источника сырья, богатого нелепым фодуктом; накопление эк/четероидов и передача их на 5иологические испытания; изучение процесса метаболизма ждистерона в организме животных (крыс).

В соответствии с поставленной целью решались следующие сдачи:

1. Выделение и идентификация экдистерондов нз растения ЧЛотспЬеНа и семян Rh.carthamoid.cs.

2. Изучение химических и спектральных свойств новых

соединений, доказательство их строения, выявление их структурным и стереохимических особенное'! _й.

3. Разработка схемы извлечения метаболитов экдистс-рона иг мочи крыс. (Впервые выделены и доказано строение трёх новым метаболитов экдистерона).

4. Накопление основных растительных экдистероидов I передача их на биологические испытания.

В ходе выполнения диссертационной работы выявилиа следующие результаты, имеющие научную новизну:

1) Изучены экдистероиды растений рода БЛотепКИа \ Ю1.саг11тто1(1е$. Впервые показано, что растение БЛотспЬеИс содержит экдистероиды. Разработана схема извлечения экдисте роидов из этих растительных источников.

2) Из растения БЛотспЬеИа изолировано 8 экдистероидов, и: которых два оказались новыми, установлены их структуры.

3) В семенах растения Л/г.сдгМаттгоп/ез обнаружены * экдистеронда, два из которых новые. Выяснено их строение V показано, что они являются представителями высокоокислеины? экдистероидов, что до сих нор считалось несвойствен ны> экднзоноподобным соединениям.

4) Впервые изучен метаболизм экдисгерона п организме крыс » выделены три новых метаболита экдистерона из мочи эти? животных.

5) При биологических испытаниях обнаружена противо язвенная активность некоторых из описанных экдистероидов.

Практическая ценность. Проведённые исследования выявил; высокое содержание экдистерона в . семенах МгаропИсип сагИшт(П(1са но сравнению с корнями. При этим нами разработа! метод выделения экдистерона из этих источников.

Изучение экдистероидов послужило основой для проиедени; большем! серии фармакологических экспериментов, в результат! изучения найден новый перспективный класс природных веществ, н; основе которых могут быть созданы высокоэффективны! лекарственные средства для лечения язвенных поражений желудка I двенадцатиперстной кишки.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена н; 114 страницах и состоит из введения, трёх глав, выводов и спнсю литературы, включающего 193 наименования. В дисссртацш

приведено 8 таблиц и M схем. В первой главе (обзор литературы) рассматриваются свойства экдистероидов и особенности их строения. Приведена таблица, включающая 121 известный экдистсроид. Вторая глава посвящена обсуждению собственных исследований по выделению и определению структуры изученных соединений. В гретьей главе приведены экспериментальные данные.

Апробация работы н публикации. Основные результаты работы докладывались на конференции Ташкентского Государственного Университета им. М.Улугбека (Ташкент, 1995) и на II Турецко-Узбекском международном симпозиуме (Эскншсхир-Гурция, 199G). По материалам диссертации опубликовано 5 научных статей и 2 тезиса.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Нами было проведено предварительное хроматографическое изучение растений Silène tomentella, S.nutans, S.supina, S.tatarica, S.viridiflora (сем. Caryophyllaceae) ira содержание экднетероидоз. Показано, что различные виды Silens отличаются как по качественному составу, так и по количественному содержанию экдистсроидов. Во всех исследованных растениях обнаружен экдистерои. Исходя из данных ТСХ для детального изучения отобрано растение Silcne tomentella.

1. Фитоэкдистероиды S tiene tomentella

Из надземных органов S.tomentella мы выделили 8 экдистероидов (табл.1).

Вещества 3-8 по своим физико-химическим константам и спектральным данным (ИК-, I1.-IP-, масс-) идентифицировал» соответственно с известными экдистероидами.

Выделение суммы фитоэкдистепоидов из Silène tomentella и сё разделение на индивидуальные компоненты проводили по схеме 1.

Строение томептестерона А (I)

В ИК-спектре имеются полосы поглощения 3420 см"1 (ОН) и 1G60 см"1, соответствующие частоте поглощения кетогрунпы; сопряжённой с двойной связью. Кроме того, в ИК-спектре

исследуемого соединения 1 имеются полосы поглощения при 1720, 1730, 1290, 1250, 1225 (сложноэфирная группа), 1610, 1590, 715 (бензольное кольцо). Об этом свидетельствуют также сигналы пяти ароматических протонов при 7.48 (ЗН) и .8.18 (2Н) м.д. в спектре ПМР (табл.2) и интенсивные пики ионов с ni/z 122 (С7Н6О2) и 105 (С7Н5О), свойственные бензойной кислоте в масс-спектре этого соединения. Кроме того, в ПМР-спектре имеется сигнал трёхпротонного синглета при 2.14 м.д., свидетельствующий о наличии в томентестероне А одной ацетильной группы (табл.2).

Таблица 1

Физико-химические свойства фитоэкдистероидов, выделенных из

Silene tombntelia

Назваш(е соединения . Суммарная формула Т. ПЛ., °С [«ID. 0 в СН3ОН Выход, %

Томентесгерон А (1) СзсНзоО? 139-140 0,0007

Томеитсстсрон В (2) ■ СяН48Об 145-147 0,0004

Витикостерон Е (3) C29H4(j08 195-196 +59.2 ± 2 0,0014 '

2-Дезокси а-экднзон (4) C27H44Oä 235-236 +93.2 ± 2 0,11

Полшюдин В (5) с27н44о8 252-254 +94.2 ± 2 0,022

Экдистерон (§) с27н44о7 241-242 +63.2 ± 2 0,03

, "Интсгрнстсрон Л (7) С27Н44°8 246-248 +36.1 ±2 0,02

Снленеозид Д (8) С33Н54О12 240-242 +91.4 ±2 —*- 0,018

Сравнительный анализ характеристик спектров ПМР экднетеровдов 1 и 4 указывает на их близость, за исключением химических сдвигов резонансных линий СН3-19,21, 26/27 и Н-22. Из величин химических сдвигов протонов (табл.2) видно, что е случае экдистероида 1 по сравнению с 4 сигнал СН3-Ш претерпевает диамагнитное смещение на "0.18 м.д. Подобное наблюдается при переходе от 5р-2-дезокси-экдистероида (4) к его 5а-изомеру (10). Отсюда мы делаем заключение", что кольца А и В в стероидной част! экднетероида I взаимно транс-сочленены, при этом Н-5 имееч сс-ориснтацию. Действительно, из продуктов щелочного гидролиза I выделили соединения 9 и 10, из которых 10 мы идентифицировали

по'

Г!0.

он

3

6

о

ж " 5и-2-дс;н)Кси-а-:)кднзон. В ИК-спектре другого продукта |дролнза, соединения 9, имеются характерные полосы поглощения рп 1735 и 1260 см"1, а в спектре ПМР резонансные линии одной (стильной группы, Н-22, СНз-21 и СН;}-2()/27 проявляются при .08, 5.33, 1.13 и 1.35 м.д., соответственно. Если сравнить эти лрактеристики с приведСчшымн в таблице 2 для 1, обнаруживается гсутствие в спектре 9 сигналов ароматических протонов, охранение химического сдвига Н-22 и СНз-21 и диамагнитное чещсние сннглета от СНз-26/27 .на 0.25 м.д. Эти данные с чётом значений химических сдвигов протопоп соответствующих ■>упн 5а-2-дсзокси-а-пкдпзона (10) и 2-дсзоксн-сс-эк;шзон-22-ацстата ^позначно свидетельствуют о том, что соединение 9 является 5а-2-гзокси-а -экднзон-22-ацетатом.

Сравнительный анализ всех спектральных характеристик, рнведенных в таблице (2), позволил заключить, что томептсстерон (1) представляет собой норчй экдпетероид - 22-0-ацетат-25-0--■н.чоат-5а -2-дезоксн-а-экдизо".

В ПК-спектре (2) кроме обычного для лкдистсроидои оглощения имелись полосы при 1712, 1292 и 1643, 1584, 713 см"1, вторые отвечают соответственно сложнолфнрпоп группе и ¡пзольному кольцу. Эти данные, а также интенсивные инки попои в

Строение томептестерона В (2)

Схема 1.

Схема выделения фитоэкдистероидов из надземных органов Silène tomentella

Надземные органы Silene tomentella

Сумма менее полярных фш оэкди стероидов

экстракция этанолом, упариоаине растворителя

. экстракция этилацетатом

колоночная хроматография на AljOj

рехромато графил на SiO,

Индивидуальные фстоакдпегеропды

Этакольный раствор суммы экстракпишых веществ, содержащий фитоэкдпетероиды

1. разбавление водой, отгонка этанола

2. экстракция гексалом

Очищенный водный

раствор суммы

фитоэкдистероидов

экстракция

бутанолом

> t

Сумма более полярных фитоэкдистероидов

колоночная хроматография на SiO.

Индивидуальные фитоэкдистероиды

С хм а 2

Химические превращения томентестерона А (1)

о

f 9

о

10

асс-спектре с m/z 122 (С7Нб02 (100%)), 105 (С7Н50) и 77 (С6Н5)

зидетельствуют о том, что экдистероид 2 содержит остаток энзойной кислоты. Сигналы пяти ароматических протонов при 8.22 2Н) и 7.49 м.д. (ЗН) в спектре ПМР указывают на присутствие иной бензоильной группы (табл.2).

В нейтральной фракции продуктов щелочного омыления экди--ероида 3 идентифицировали 5а-2-дезоксизкдизон (10), а в кислой юти гидролизата обнаружили присутствие бензойной кислоты.

Ацетилированием экдистероида 2 получили диацетильное эоизводное (11). В его масс-спектре наблюдаются интенсивные 1ки ионов . с m/z 374 (С23Н34О4) и 276 (C17H2iO j), шдетельствующне о то.-, что остаток бензойной кислоты находится боковой цепи экдистероида (схема 3). Действительно, при >авнешш характеристик спектров ПМР экдистероида 2 и 5а-2-!зоксиэкдизона (10) наблюдается значительное слабопольное ¡ещенне резонансных линий 26/27 метальных групп в спектре :рвого (табл.2). Аналогичное смещение мы наблюдали в спектре ментестерона А. Этот факт позволяет предположить, что в единении 2 бензойной кислотой этерифицирована оксигруапа при

Схема 3.

Химические превращения томентестерона В (2) 10

КНСОз '

Госос.н, Ас20/Г'у

11

Л

' Л/

ш

О.

хаЗт. 374 ' тУ/. 276

Для подтверждения структуры экдистероида 2, мы омылили диацетат 11 0.5%-ным водио-метанольным раствором бикарбоната калия. Как и следовало ожидать, в этих условиях ацетатная группа при С-22 осталась незатронутой и выделенный продукт реакции но своим физико-химическим константам (1^, ИК- и масс-спектры) совпал с томентестероном А (1).

Указанные данные свидетельствуют, что остаток бензойной кислоты'действительно присоединён к оксигрунне при С-25. Таким образом, новый экднстероид 2 является 5а-2-дезоксиэкдизон-25-0-бснзоатом.

Фитоэкднстероиды растения ЛкаропИситп сагНштоЫсв

Проведённые исследования

выявили высокое содержание экдистерона в семенах ПЬ.саНЬх то1с1е5 по сравнению с корнями.При этом нами разработан метод выделения э:сдистерона из этих источников После изолирования эвдистерона (6) мы выделили из

маточника одно известное - 24(28)-дегидромакнстерон А (12) и два новых экдистероида: картамостероны А (13) и В (14) (табл. 3).

Таблица 3

Физико-химические свойства фнтоэкдистероидов, выделенных из Rhaponticum carthamoidcs

Название соединения Суммарная формула Т.пл., сС lab, град (В СН3ОН) Выход, %

Картамостерон А (13) Картамостерон В (14) 24(28)-Дегидро-макисте-рон А (12) Экдистерон (9) С28Н44°10 С28Н44°9 С2ЗН,407 С27Н44О7 170-172° 179-182° 243-245° 240-242 +62.0±2° +61.2±2° 0.0007 0.0008 0.0004 1.5

Строение картамостеропа А (13)

В УФ-спектре наблюдался максимум поглощения при 245 им (Ige 4.01).

В РЖ-спектре присутствует широкая полоса поглощения при 3405 см"1 (ОН-группа), а также при 1674 см"1, соответствующая частоте поглощения кетогруппы, сопряжённой с двойной связью. Кроме того, при 1710 см"1 наблюдается полоса в виде перегиба, соответствующая карбонильной группе сложноэфирной функции. Об этом же свидетельствует присутствие в спектре ПМР картамостеропа А (13) трёх протонного еннглета карбометоксильной группы при 3.88 м.д. (табл. 4).

В масс-спектре картамостеропа А (13) пик молекулярного нона отсутствует. В то же время присутствуют пики ионов с т/г 379, 361," 343, 325, 317 к 316. свидетельствующие о наличии в стероидном ядре молекулы четырех оксигрупп. В спектре I1MP 13 обнаруживаются спиглетные сигналы протонов четырёх могильных групп при 1.15, 1.20, 1.49 и 1.59 м.д.. а также рс.-пнансцые линии одиночных протонов при 3.58 (Н-9), 3.88 (Н-22), 4.0-4.3 (Н-2,3) и С.26 м.д. (Н-7) (табл. 4).

Таблиц;-. ?.

Химические сдвиги , КССВ О) протонов томентестерона А (1), 2-дезокси- а-экдизона (4), 5а-2-дез'окси-а-зкдизон-22-ацетата (9), 5а-2-дезокси- а-экднзоиа (10), томентестерона В (2), 3,2 2-д и ацетата томентестерона В (11) и (5, м.д., С^зЬ!, 0-ТМС)

Оедииепне ПОЛОЖЕНИЕ ПРОТОНОВ

н-з Н-22 Н-7 СНз-18 СНГ19 СН3-21 СНз-26/27 Ид, ОЛ-:

1 4.10 5.34 6.19 0.74 ' 0.89 1.13 1.С0 7.48 (311) 2.14 (311)

Л=ЗГц Л=6.5 Гц 8.18 (2Н)

2 4.09 • 4.09 6.16 0.71 0.89 1.30 1.65 7.49 (ЗН) . —

Л=3 Гц >6 Гц 8.22 (21!)

4 4.13 4.13 6.16 0.75 1.07 1.31 1.43 — —

- ' ^-6.5 Гц

9 4.12 5.33 ' 6.14 0.72 0.90 1.13 ' 1.35 — 2.08 (ЗН)

Л=3 Гц >6 Гц -

10 4.05 4.05 6.18 0.73 0.93 1.27 1.41 — —

>3 Гц >6 Гц ■

И 4.71 4.91 5.91 0.67 0.87 0.84 1.59 7.47 (311) 2.04 (ЗН)

>3 Гц >6 Гц 1.61 8.01 (2Н) 2.06 (ЗН)

Сигнал СПз-21 группы -дублет, других метальных групп - енпглеты. Протон Н-7 в соедшч-.чиях 1, 2, 9, 10, 11 проявляется в виде дублета, в остальных случаях - в виде ушмретгого сннт.' сга; "сгг-льные сишали • ул г:тз'Г!т:ые мультиплеты.

Схема 4

Схема выделения экдистероидов из семян растения Ккаропйсит carthamoid.cs

Сопоставление характеристик указанных сигналов позволило выявить близость значений химических сдвигов большинства протонов соединения 13 и полиподина В (5), за исключением СН3-27.

Данные, приведённые выше, в совокупности позволяют отметить, что экдистероид 13 представляет собой природное производное полиподина В, содержащее карбометоксильную сложноэфирную группировку в боковой цепи.

Как видно из таблицы 4 при переходе от 5 к 13 значения химических сдвигов Н-2? и CH3-I8 не изменяются и к тому же в спектре ПМР соединения 13 присутствуют сигналы только четырёх метальных групп. Более того, один из синглетных сигналов метальных групп испытывает парамагнитное смещение на 0.12 м.д. Эти данные однозначно указывают на образование в молекуле 13 карбометоксйльной группы за счёт одной из метальных групп при С-25.

Новый экдистероид - картамостерон А является природным производным . полиподина ' В, содержащим при С-25 карбометоксильную группу.

Строение картамостерона В (14)

УФ-спектр описываемого соединения характеризуется максимумом при 245 им (Ige 4.00), свойственным a,ß-Heiia-сыщенным кетонам. '

-В ИК-спектре 14, кроме полосы поглощения при 3400 см"1, обусловленной гидроксильными группами и кето-группой, сопряжённой с двойной связью (1670 см"1), имеется полоса при 1710 см"1, отвечающая карбонильной группе сложноэфирного остатка. ■ - • '

В масс-спектре картамостерона В пик молекулярного иона . отсутствует и обнаруживаются следующие основные пики фрагментарных ионов с m/z: 4G0, 363, 345, 327, 301 и 300. Первый" пик осколочного фрагмента образован за счёт отщепления от молекулярного иона двух молекул воды и окиси углерода, г остальные характерны для распада стероидной части молекулы экдистерона. у

В об пасти резонанса метальных групп спектра ПМР картамостерона В, в отличие от экдистерона, присутствуют синглетные

лгналы протопоп только четырёх метальных групп при 1.07 СНз -19), 1.20 (СНз-18), 1.49 (СН3-27) и 1.59 (СН3-21) м.д. При .88 м.д. находится сипглет метила карбометоксильной группы, начения химических сдвигов остальных одиночных протонов дентичны таковым в спектре экдистерона (табл. 4).

Обращает на себя внимание тот факт, что при переходе от пектра ПМР экдистерона (6) к соединению 14 имеет место арамагнитное смещение СНз-27 на м.д.

Все приведённые выше данные позволили однозначно конста-ировать, что основу молекулы 14 составляет экдистерои с одним ишь отличием в строении боковой цепи - за сЧёт одной из стильных групп при С-25 в случае картамостерона В образована арбометоксильная группа.

Таким образом, новый экдистероид - картамостерон В является риродным 25-карбометоксиэкдистероном.

ИЗУЧЕНИЕ МЕТАБОЛИТОВ ЭКДИСТЕРОНА, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ МОЧИ КРЫС

В последнее время химиков и биологов очень интересует зученне метаболизма экдистероидов.

В связи с этим мы изучали метаболизм 'экдистерона в рганизме белых мышей. Качественным хроматографированием тнлацетатной фракции экстракта мочи, выявили пять веществ кднстероидной природы. Три из них являются главными компо-ентами экднстероидной суммы.

В ИК-спектре метаболитов 2-4 нет полосы поглощения при 640-1670 см"1, характерной для Л7-6-кетогруппировкп.

Пик молекулярного нона ик.-ет очень низкую интенсивность и аже отсутствует из-за нестабильности молекулярного иона к лектронному удару экдистероидов. Несмотря на отсутствие в ольшинстве масс-спектров электронного удара (ЭУ) пика М+ иона, гот метод играет существенную роль в предсказании структуры кдистероидов. Ключевым моментом здесь служит разрыв связи 1-20 - С-22, дающий с одной стороны ионы в, характеризующие остав стероидного ядра и заместителя при С-20, а с другой гороны - цепь С-23 - С-27 (ионы т/г 99 и 81).

16

Таблица 4

Значения химических сдвигов протонов в спектрах ПМР полиподина В (5), экдистерона (б), картамостсропов А (13) и В (14) (8, м.д., С505Ч 0-ТМС)

Соединение ПОЛОЖЕНИЕ ПРОТОНОВ

Н-2,3 Н-7 Н-9 Н-22 СНз-18 СНз-1Э СНз-21 СНз-26 СНз-27 СООСНз

5 4.0-4.3 6.23 3.59 3.85 1.20 1.15 1.58 * 1.37 1.37 —

6 4.0-4.3 6.26 3.58 3.88 1.21 1.06 1.58 1.36 1.36 —

13 4.0-4.3 6.26 3.58 3.88 ; 1.20 1.15 1.59 — 1.49 3.88

4.0-4.3 6.24 3.58 3.88 1.20 1.07 1.59 — 1.49 3.88

Сигналы протоков метильных групп носят енпглетный характер; протон Н-7 проявляется в виде уширенного . еннглета, остальные сигналы - как уширенные мультиплеты.

ö 2 >-

о

Ион в исходного экдистсрона (6) имеет состав С21Н31О5 (m/z 0; в спектрах метаболитов 2 и 3 этот ион имеет 349 а.е.м. к тав С21Н33О4 , а в спектре метаболита 4 35J а.е.м 02^3504. тьшая степень насыщенности ионов с m/z 349 и 351 по внению с ионом с m/z 363 и уменьшенное в их составе число мов кислорода свидетельствуют скорее всего о . восстановлении ппы Сб=0 до СНг (2 и 3) и о дополнительном становлении тс-связн Д7 (4). В спектрах же метаболитов 2-4 пики отсутствуют. Наибольшие по массовому числу в указанных ктрах следующие пики: m/z 448 (2), 433 (3) и 432 (4).

Второй по значимости ключевой стероидный фрагмент в масс-ктрах экдистероидов образуется при разрыве связи (а): С-17 -

0 с одновременным, как правило, удалением молёкулы полы от 4. Пики соответствующих ионов наблюдаются в спектрах 2-4 аболитов: m/z 287 (2;3) и 289 (4), разно как и продуктом их ледующей дегидратации - m/z 2G9, 251 (2;3) н 271, 253 (4).

1 означает, что 14-ОН группа в метаболитах 2-4 сохраняется.

Во всех трех спектрах наблюдаются пики ионов с m/z 99 и 81, ако этот факт не позволяет однозначно огределигь строение цепи

2 - С-27 метаболитов. В связи с этим в первую очередь бходимо было альтернативным путем установить молекулярные сы исследуемых образцов, для чего использовали метод масс-

спектрометрии вторичных ионов LSIMS. Спектры LSIMS сняты матрице из чистого глицерин.. (Гл) и в глицерине с добавление NaCl (Гл+NaCl). Для контроля в этих же условиях были получен спектры LSIMS экдистерона 6. В спектре LSIMS (Гл) наблюдаете пик протоннрованного молекулярного иона с m/z 481 и продую его последовательной дегидратации (m/z 463, 445, 427, 409 Интенсивность пиков ионов типа в подавляется, а коны типа (m/z 303-301) сохраняют свое положение и интенсивность i сравнению со спектром ЭУ. В спектрах LSIMS эхсдистерона 6 матрице Гл+NaCl высота пиков всех указанных ионов уменьшаете а 100%-ным по интенсивности стаксяштся пик иона (M+Na)+ m/z 503.

В аналогичных спектрах метаболитов (матрица - Гл) зарегис рированы следующие массовые числа ионов (М+Н)+ : m/z 467 (2 449 (3) и 469 (4), а при использовании матрицы Гл+NaCl ио! (M+Na)+ составляли 4S9 (2), 471 (3) и 491 (4) а.е.м. Все спект{ содержат интенсивные пики фрагментов (М+Н-Н2О)4", а пики ион лис малозначительны. В спектрах LSIMS 2 и 4 имеются пи; кластеров, содержащих молекулу глицерина: (М+Н+Гл)+ (M+Na+Гл)4.

Исходя из молекулярных масс метаболитов: 466 (2), 448 (; 468 (4), можно заключить, что цепь С-22 - С-27 у соединений 2 и совпадает с таковой исходного экдистерона 6. Это заключен подтверждается анализом фрагментов, образующихся при разры связен С-22 - С 23 и С-23 - С-24 в спектрах ЭУ данных метаболит (ноны с т/г.379, 361 (2) и 381, 363 (4) - разрыв С-22 - С-23; ио; с т/г 356, 357 (2) и 358, 359 (4) - разрыв С-23 - С-24).

Что касается метаболита 3, то цепь С-22 - С-27 в его молеку должна быть каким-либо путем дегидратирована: А22 или А2-. спектре ЭУ метаболита 3 отсутствуют пики ионов, харак ризующие распад боковой цепи но связям С-22 - С-23 и С-23 - Си присутствуют пики иона (M-C3HgO)+ с т/г 390 и продукта < дегидратации с m/z 372. Это может свидетельствовать лишь разрыве связи С-24 - С-25 и, следовательно, о невозможности iij сутствия Д25:связи. Интересно отметить, что аналогичный lipon протекает и:спектре LSIMS 3, где имеются пики ионов с m/z 3' 373 и 355. Актизирование разрыва С-24 - С-25 может происходит А2--связью.

Таким образом, метаболиты 2, 3, 4 являются соответственно --холест-7-ен-2р,Зр, 14,20,22,25-гексаокси, 5^-холест-7,22-дисн-2р, ,14,20,25-пентаокси, 5^-холестан-2р,3(3,14,20,22,25-гексаокси.

РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ИЗУЧЕНИЯ ПРОТИВОЯЗВЕННОЙ АКТИВНОСТИ ФИТОЭКДИСТЕРОИДОВ

Фармакологические испытания, проведённые в лаборатории рмакологии ИХРВ АН РУз. док. мед. наук В.Н. Сыровым, казали, что выделенные из растений S.tomentella и '.саг(/штогс/ез экдистероиды: 2-дезокси-а-экдизон (4), внтико-:рон Е (3), полиподин В (5), экдистерон (6), интегристерон А ), силенеозид Д (8) и 24(28)-дегидромакистерон А (12) обладают этивоязвенной активностью.

Полученные экспериментальные данные послужили основани-для проведения клинических испытаний экдистерона как шарата, способствующего ускорению регенеративных процессов в тает и патологического очага при язвенной болезни желудка и шадцатиперстиой кишки. Эти исследования показали хорошее ¡ебное действие препарата, что нашло своё отражение в ряде Зликаций последнего времени, а также в выпущенном ИХРВ АН з совместно с 1-ТашГосМИ МЗ РУз информационном сообщении 517 "Новое анаболическое средство растительного происхождения ераиин язвенной болезни двенадцатиперегной кишки".

Таким образом фитоэкдистероиды представляют собой не,шли киективный класс природных веществ для создания на их основе ¿окоэффективных лекарственных средств для лечения язвенных эажений желудка и двенадцатиперстной ;;;мнки.

ВЫВОДЫ

■ 1. Исследоианы на содержание фитозкдистероидов растения щ ЗИспс (отсп^Иа и ЯкаропИсшп сагИштогйеа. ЭЛотен^Иа •шческому изучению подвергалась впервые. Показано, что отеМс'Ла и Ш1.сагШато'и1е5 являются богатыми источниками щетероидов.

2. Разработана схема выделения экдистероидов из надземны органов S. tomentella. Выявлено, что растение содержит восем экдистероидов, шесть из которых идентифицированы с ране выделенными веществами - витикостероном Е, 2-дезокси-а экдизоном, полиподином В, экдистероном, интегристероном -А силенсозидом Д, и два новых экдистероида - томентестероны А>и Е Установлено их строение на основе химических превращений интерпретации спектральных характеристик как самих веществ, та и их производных.

3. Показано, что томентестерон А является 22-0-ацетат-25-С беизоат-5а-2-дезокси-а-экдизоном, томентестерон В - 5а-2-дезока экдизон-25-О-бензоатом.

4. Разработана схема выделения экдистероидов из семя Rh.carthamoides. Выделено два известных экдистероида - экд! сторон и 24(28)-дегидромакистерон А, два новых соединения картамостероны А и В.

5. На основе изучения физико-химических свойств спектральных характеристик веществ и их производные установлено, что картамостерон А является природным производны; полиподина В, содержащим при С-25 карбометоксильную группу, картамостерон В - природным С-25 карбометоксиэкдистсроном.

6. Изучены 3 новых метаболита экдистерона, выделенных и мочи крыс. Установлено, что метаболит 2 является 2р,3(: 14,20,22,25-гексаокси-5-холест-7-сном, метаболит 3 - 2р,3р,14,20,2! пснтаокси-5-холест-7,22-дисном и метаболит 4 - 2р,3р,14,20,22,2! гексаокси-5-холестаном.

7. Биологические испытания выявили, что экднетерон являете перспективным препаратом при лечении язвенной болезни желудк и двенадцатиперстной кишки.

Основиое содержание диссертации изложено в следующих работах: * - статьи:

ív Рамазанов Н.Ш., Максимов Е.С., Саатов 3., Абдуллае Н.Д, // Фитоэкдистероиды растений рода Silene. XVI Томентестерон А из Silene tomentella // Химия природ, соедш 1995., №5, С.714 719. '

2. Рамазанов H.III., Максимов Е.С., Саатов 3., Абдуллае Н.Д. Фитоэкдистероиды растений рода Silene. XVIII. Томентестерс

/Л

3 из Silene tomentella // Химия природ, соедин. 1996., W>1, С.59-31.

3. Рамазанов Н.Ш., Саатов 3., Сыров В.Н. // Изучение метаболитов экдистерона, выделенных из мочи крыс // Химия трирод. соедин. 1996., С.558-564.

4. Рамазанов Н.Ш., Максимов Е.С., Саатов 3., Маматханов л.У., Абдуллаев Н.Д. / / Фнтозкднстероиды растений рода Ahaponticum. Картамостерон А из Rhaponticum carthamoides // Химия природ, соеднн. 1997. С.392-394.

5. Рамазанов Н.Ш., Максимов Е.С.. Саатов 3., Абдуллаев [-1.Д. // Фнтозкднстероиды растений рода Rhaponticum. Картамостерон В из Rhaponticum carthamoides // Химия природ. ;осдин. 1997. С.395-396.

- тезисы:

3. Рамазанов Н.Ш., Саатов 3. // Фнтозкднстероиды эастений рода Silene tomentella // Тез. докл. конф. ТашГУ. Гашкспт. 1995. с.ИЗ.

7. Ramazanov N.Sh., Maximov E.S., Saatov Z., Abdullnev N.D. // Phytoecdysteroids of Siler(e tomentella plants // 5econd. nternational Symposium on the chemistry of natural compounds. 2-ld Turkish-Uzbek Symposium of the Chemistry of Natural Compounds. Eskisehir-Turkey. 1996. P.32.

Silene tomentella, Rhaponticum carthamoides усимлиЪсларининг фитоэкдистерондлари ва зкдистерошшнг

метаболитлари

Рамазонов Нурмурод Шсралиевич

Биоорганик кимё, табиий ва физиологик фаол моддалар кнмёси

мутахассислигн.

Caryophyllaceae ва Compositac оилаларига мансуб, айрим Тснмликларнннг экдистероид\ари урганилди.

S. tomentella, турнга кирувчи усимлик биринчи марта фганилиб, узида экдистсроид caiyvanm курсатиб берилди. ■¡.tomentella ва Rh.carthamoides усимликла ри/ли экдистероид — lapim ажратаб о,1лш схемалари шплаб чищлди. Урганилган

п

усимликлардан 12 экдистероид ажратиб о ли иди, шулардан 4 raci янги ?цнсобланади.

Аззсратиб олинган моддаларнинг тузилишлари физш тадк,ик;отлар усули (ПК-. УБ —, " масс — , ва 13С ЯМ1

спектроскопияси) ва кимёвий узгаришлар асосида исбо' х^илинди.

лдйвон организмидан биринчи марта экдистероинин; мстаболизми урганилди ва 3 та янги метаболит ажратилди Уларнинг тузилиши масс — спектри ёрдамида аншушнди.

S.tomentella ва Rh.carthanioid.es -усимликлари анаболт таъсирга эга булган "экдистен" препаратини олиш учун хом ami манбаси булиши мумкиилиги аникданди.

Фармакологик тадк;ик,отлар иатижасида экдистерон, 24(28) -дегидромакистерон А, полиподин В, шггегристерон А шуниигдс] витикостерон Е, силенеозид Д ва 2—дезокси —а —экдизонла] узларида ошк;озон ва ун икки бармок^ш ичак касаллнгига к;арш] фаолликка эга эканлиги курсатиб бсрилди. Шу модд^лар ичид экдистерон, оцщозон ва ун икки бармо1уш ичак ярасиш даволашда боищаларига нисбатан актив эканлиги аишу\анди. Ш модда асосида янги доривор препарат яратиш мак;садг мувофикдир.

Phytoccdysteroids of Silene tomentetlei, Rhaponticum carthamoides plants and metabolits of the ecdystcrone.

Ramazonov Nurmurod Shcralievich

Speciality "Bioorganic chemistry, chemistry of natural and physiological active substances ".

Ecdysteroids of. some plants of to Caryophyllaceae an Compositac families were studied.

The plant of Silena tomcntella family was studied first time an containing of ecdysteroids was showed. The scheme of ccdysteroic .separation from S.tomentella and Rh.carthamoidcs plants was workc out. 12 ecdysteruids were isolated from the studied plants, 4 of the! are considered now. The structure of isolated substances has bee

termined by using of spectral (IR-, UV-, mass-, !li and 13C M. 1R ectroscopy) data and chemical transformations.

The ecdysterone metabolism in the animal body was studied for e first time and 3 new mctabolits were separated. Its structure was ■fined by the mass-spectrometry methods.

It. was cleared out that S.tomentella and Rh.carthamoides plants e the source for getting anabolic "ecdysten" medicine.

Pharmacologic researches was showed that ecdysterone, 24(28)-:hydromakisterone A, polypodine B, integristerone A, viticosterone E, leneoside D and 2-deoxy-a-ecdysones contain activities against gastric id digestive ithesses. Also was proved that among these substances :dysterone is more active for treating gastric and large gut ulcer. In isic of this compounds the new medical prepárate deciding the aim for roduce.