Аминокислоты в регио- и стереонаправленном синтезе физиологически активных соединений тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.03 ВАК РФ



Левит Галина Львовна

АМИНОКИСЛОТЫ В РЕГИО- И СТЕРЕОНАПРАВЛЕННОМ СИНТЕЗЕ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ

02.00.03 - Органическая химия

г~~

Автореферат | 0034"78237

диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук

На правах рукописи

аШг

Екатеринбург - 2009

003478237

Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте органического синтеза им. И-Я. Постовского Уральского отделения РАН (г. Екатеринбург).

Научный консультант доктор химических наук, профессор

Краснов Виктор Павлович

Официальные оппоненты: член-корреспондент РАН

Кучин Александр Васильевич

(Институт химии Коми научного центра УрО РАН)

доктор химических наук, профессор Бредихин Александр Александрович

(Институт органической и физической химии им. А.Е. Арбузова Казанского научного центра РАН)

доктор химических наук, профессор Сосновскнх Вячеслав Яковлевич

(Уральский государственный университет)

Ведущая организация Институт физиологически активных веществ РАН

(г. Черноголовка)

Защита состоится «19» октября 2009 г. в 15 : 00 на заседании диссертационного совета Д 212.285.08 в ГОУ ВПО «Уральский государственный технический университет-УПИ им. первого Президента России Б.Н. Ельцина» по адресу: г. Екатеринбург, ул. Мира 28, третий учебный корпус УГТУ-УПИ, аудитория Х-420. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке УГТУ-УПИ. Ваш отзыв в одном экземпляре, заверенный гербовой печатью, просим направлять по адресу: 620002, Екатеринбург, К-2, ул. Мира, 19, УГТУ-УПИ. Ученому секретарю совета Университета, тел. (343)3754574, факс (343)3754135, e-mail: orgchem @ mail.ustu.ru

Автореферат разослан «17» сентября 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, г-т~

кандидат химических наук

Т.А. Поспелова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Аминокислоты являются соединениями, входящими в состав белков и играющими важнейшую роль в биохимических процессах. В то же время аминокислоты широко используются в качестве хиральных строительных блоков в органическом синтезе, компонентов катализаторов асимметрического синтеза, хиральных разделяющих агентов и др.

В последнее время наблюдается новый подъем интереса к химической модификации известных лекарственных препаратов и вновь синтезируемых соединений природными аминокислотами. Присоединение фармакофорных групп к аминокислотам в ряде случаев позволяет получить препараты, обладающие высокой биологической активностью; а использование аминокислот в качестве транспортной функции способствует повышению избирательности действия и снижению токсичности лекарственных препаратов. Вместе с тем, разработке методов синтеза и исследованию свойств производных аминокислот, в которых а-амино- и а-карбоксильная группы оставались свободными не уделялось достаточно внимания.

Синтез индивидуальных стереоизомеров - стремительно развивающаяся область органической химии. Это обусловлено, в первую очередь, потребностями фармацевтической промышленности, поскольку использование экантиомерно чистых лекарственных средств позволяет повысить терапевтический эффект, одновременно уменьшив их побочное действие. Разработка новых подходов к синтезу энантиомерно чистых соединений и разделению рацематов способствует развитию новейших методов тонкого органического синтеза и более глубокому познанию особенностей механизмов органических реакций. Среди методов получения энантиомерно чистых соединений, используемых в промышленности, около 80% составляют методы разделения и только около 20% методы асимметрического синтеза. В последние годы существенное развитие получил метод оптического кинетического разделения (КР) рацематов. С использованием метода КР удалось получить значительное число энантиомеров соединений различных классов, однако возможности метода далеко не исчерпаны. Наиболее сложной проблемой использования этого метода остается невозможность предсказать, насколько эффективным будет применение конкретного расщепляющего агента. Природные аминокислоты являются доступным оптически активным сырьем, они разнообразны по строению, однако до наших исследований они практически не использовались для создания на их основе оригинальных реагентов для КР и исследовании такого рода процессов.

Таким образом, использование аминокислот для создания на их основе оригинальных лекарственных препаратов, так же, как и для решения разнообразных стереохимических задач, является весьма актуальным.

Целью работы являлась разработка подходов к использованию природных аминокислот в синтезе физиологически активных соединений, получении их регио- и стереоизомеров.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи: разработать методы синтеза региоизомеров Ы-алкилнитрозокарбамоил производных аминокислот со свободными а-амино и карбоксильной группами, изучить их свойства и биологическую активность для создания эффективного

противоопухолевого препарата; синтезировать и исследовать биологическую активность амидов (5)-напроксена, ибупрофена и индометацина (нестероидных противовоспалительных препаратов) с аминокислотами; синтезировать и исследовать свойства производных карборан-содержащих аминокислот в качестве потенциальных агентов для бор-нейтронозахватной терапии опухолей; а также изучить процессы кинетического разделения рацемических аминов под действием хиральных ацилирующих реагентов - производных аминокислот.

Научная новизна. Разработаны методы синтеза новых 1Ч-алкилнитрозо-карбамоил производных аминокислот со свободными а-амино и карбоксильной группами. Предложены способы получения индивидуальных изомеров положения нитрозогруппы - №-нитрозо-ЫЕ-[(2-хлорэтш1)карбамоил]-Ь-лизина и ЬГ-[(2-хлор-этм)-Ы-нитрозокарбамоил]-1-гЛизина, определяющих терапевтический эффект противоопухолевого препарата лизомустин. Выявлена взаимосвязь между структурой синтезированных К-алкилнитрозокарбамоил производных и их противоопухолевой активностью.

Впервые получены и охарактеризованы псевдопептиды 2-(3-амино-1,2-дикарба-ю?оз0-додекаборан-2-ил)уксусной кислоты и природных аминокислот; показана возможность выделения индивидуальных диастереомеров некоторых соединений.

Впервые установлено, что хлорангвдриды оптически активных кислот являются эффективными разделяющими агентами для кинетического разделения рацематов гетероциклических аминов. Наиболее эффективными разделяющими агентами являются хлорангидриды И-защищенных аминокислот (Ы-тозил-(5)-пролина и Ы-фталоил-(5)-аланина) и (5)-2-(6-метокси-нафтил-2)пропионовой кислоты. Впервые установлены факторы, влияющие на диастереоселективность кинетического разделения рацематов гетероциклических аминов; показано, что она зависит как от структуры разделяющих агентов и исходных аминов, так и от условий ацилироваиия. Варьируя структуру разделяющего агента можно избирательно получать смеси, обогащенные (Я)- или ©-изомером амина. Впервые синтезированы энантиомеры 2-метилиндолина.

Впервые получены стереоизомеры производных планарно-хиральных 1-метил-, 1-фенил- и Ьизопропил-З-амино-Ьг-дикарба-гао^о-додекаборанов. Разработаны методы анализа оптической чистоты энантиомеров и диастерео-мерных амидов 1-замещённых 3-амино-1,2-дикарба-югозо-додекаборанов с помощью !Н ЯМР спектроскопии и ВЭЖХ. Впервые получены энантиомеры 3-амино-1-метил-1,2-дикарба-югозо-додекаборана. Впервые изучено кинетическое разделение рацемических 1-замещённых 3-амино-1,2-дикарба-;<лозо-додекаборанов при ацилировании хлорангидридами оптически активных кислот. Впервые обнаружены явления рацемизации и деструкции карборанового ядра 3-амино-1,2-дикарба-ю/озо-додекаборанов в кислых условиях.

Практическая значимость. Разработан способ получения субстанции противоопухолевого препарата ЛИЗОМУСТИН. Составлена нормативно-техническая документация на производство субстанции препарата. В полном объеме проведены клинические испытания препарата лизомустин. Предложены методы контроля качества субстанции лизомустина, которые легли в основу Фармакопейной статьи предприятия. Министерство здравоохранения РФ

разрешило медицинское применение препарата лизомустин в качестве средства для лечения меланомы и рака легкого и его промышленный выпуск (Регистрационное удостоверение Р № 00364/01 от 01.12.03.). Лекарственная форма лизомустина зарегистрирована и внесена в Государственный реестр лекарственных средств (Регистрационное удостоверение № JIC-002311 от 01.12.2006).

Разработаны эффективные методы синтеза амидов (£)-напроксена, ибупрофена и индомегацина с производными аминокислот и короткими пептидами, позволяющие получать стерео- и региоизомеры целевых соединений. Среди синтезированных амидов выявлены соединения, не уступающие по анальгетическому и противовоспалительному действию используемым в клинике препаратам. Наиболее перспективным соединением является амид индометацина и метилового эфира L-метионина, который при экспериментальном сравнении с исходным препаратом показал сочетание высокой противовоспалительной и анальгетической активности и в десятки раз меньшей острой и гастротоксичности.

Разработаны эффективные методы оптического кинетического разделения рацематов гетероциклических аминов, позволяющие получать (/?)- и (S)-энантиомеры с высокими выходами и высокой оптической чистотой. Разработан способ получения (5)-2,3-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-4#-1,4-бензоксазина, ключевого интермедиата в синтезе левофлоксацина, современного антибактериального препарата.

Автор защищает перспективное научное направление в области химии аминокислот, заключающееся в регионаправленном введении фармакофорных групп в молекулы аминокислот с целью получения новых высокоактивных лекарственных средств, а также в создании на основе аминокислот эффективных реагентов для кинетического разделения рацематов и синтеза стереоизомеров физиологически активных соединений.

Апробация работы. По материалам диссертации опубликован 1 обзор, 1 глава в монографии, 27 статей, 2 авторских свидетельства и 4 патента; сделаны доклады с опубликованием тезисов на 25 международных и российских конференциях.

Диссертация выполнена как часть плановых научно-исследовательских работ, проводимых в Институте органического синтеза им. ИЛ. Постовского УрО РАН по темам: «Разработка методов стереоселективного синтеза соединений различных классов с использованием оптически активных аминокислот и их производных» (Гос. per. № 01.2.00 1 05150) и «Новые подходы к синтезу стереоизомеров 4-замёщенных 5-оксопролинов и карборанил-аминокислот» (Гос. per. № 0120.0 601954); в рамках проектов РФФИ (00-03-32776 «Изучение механизмов и закономерностей процесса кинетического разделения стереоизомеров в ряду гидрированных производных бензоксазина и хинолина», 03-03-33091 «Синтез и исследование энантиомеров 1-замещенных 3-амино-1,2-дикарба-клозо-додекаборанов», 06-03-32791 «Синтез левофлоксацина и его аналогов», 06-03-08177_офи «Разработка метода определения энантиомерной чистоты соединений, входящих в состав субстанции препарата лизомустин, и исследование противоопухолевой активности препарата в зависимости от энантиомерного состава», 07-03-00684 «Синтез карборан-содержащих пептидов»); а также в рамках выполнения

Государственных контрактов «Разработка технологий и выпуск опытных партий препаратов - противовирусного «триазавирин» и противоопухолевого «лизомустин», обладающих избирательным действием на генетический аппарат» (02.522.11.2003) и «Разработка технологий синтеза соединений фторхинолонового ряда и выпуск на их основе опытных партий антибактериального препарата левофлоксацина для лечения широкого круга инфекций» (02.522.12.2011); и Программы поддержки ведущих научных школ (грант НШ-3758.2008.3).

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, 5 глав и выводов, изложенных на 276 стр., включает 14 рисунков и 50 таблиц, список литературы (310 наименований).

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Глава 1. Создание физиологически активных соединений на основе производных природных аминокислот (краткие литературные сведения)

В первой главе приведены краткие литературные сведения по химической модификации некоторых физиологически активных соединений производными природных аминокислот.

Глава 2. Алкилнитрозомочевины на основе а,ш-диаминокарбоновых кислот. Синтез и изучение физико-химических свойств и противоопухолевой активности

Алкилнитрозомочевины (AHM) - широко используемый в клинической практике класс противоопухолевых препаратов. Они обладают высокой активностью, особенно, в комбинациях с другими противоопухолевыми препаратами, широким спектром противоопухолевого действия и в ряде случаев превосходят препараты иных классов. Характерной реакцией этих соединений, обуславливающей механизм их биологического действия, является гидролитический распад в условиях организма с образованием алкилирующих и карбамоилирующих частиц. Этими же особенностями химического поведения AHM в организме обусловлены и лимитирующие их использование отсроченная и кумулятивная токсичность, особенно, в отношении системы кроветворения. Основным путем снижения токсичности является подбор структуры AHM таким образом, чтобы обеспечить избирательный транспорт соединения в опухолевые клетки.

Одним из рациональных подходов к созданию соединений с высокой избирательностью противоопухолевого действия является присоединение цитотоксических фрагментов к молекулам-носителям, которые бы способствовали избирательной доставке препарата в опухолевые клетки. Нами было предложено синтезировать алкилнитрозокарбамоил (АНК) производные аминокислот, в которых цитотоксическая группа находится в боковой цепи аминокислоты, а а-амино- и карбоксильная группы, определяющие основные биохимические свойства аминокислот и являющиеся важными для активного транспорта через клеточные мембраны, сохранены. Наиболее удобными исходными веществами для синтеза такого рода соединений нам представлялись диаминокарбоновые кислоты.

2.1. Синтез №-нитрозокарбамоил кислот

производных диаминокарбоновых

•СООН

1)Си2*

2) ИЦСО

N4, п на

А

1ЯН-,

соо

Си

1) н*, н2$

2) МН„ОН_

Лч ^А. . Я н I

СООН

1) Н»,

2) N4,ОН

1

Гт

У ш,

СООН

1-9

и 2-хлорэтил-1-9 получали

1: В = СНЭ, X = N0, У = Н, А = (СН^ 2: И = СН3, X = N0, У = Н, А = (СН2)3 3: И = СН3, X = N0, У = Н, А= (СН2)2БСН2 4: И = С5Н„, X = Н, У = N0, А = (СН2)3 5: И = С6Н„, X = Н, У = N0, А = (СН2)2ЗСН2 6: Я = С1СН2СН2, X (У) = Н (N0), А = (СН2)2 7: Я = аСН2СН2, X (У) = Н (N0), А = (СН2)3 (Ь-форма) 8: И = С1СН2СН2, X (У) = Н (N0), А = (СН2)3 (О-форма) 9: Я = С!СН2СН2, X (У) = Н (N0), А = (СН2)2ЗСН2 Были разработаны методы синтеза метил-, циклогексил-нитрозокарбамоил производных аминокислот 1-9 . Соединения путем карбамоилирования медных комплексов диаминокислот (Ь-2,4-диаминомасляной кислоты, Ь-(и В-)орнитина и Ь-4-тиализина) соответствующим алкилизоцианатом с последующим разложением сероводородом и нитрозированием нитритом натрия в кислой среде.

Проведение нитрозирования карбамоилпроизводных при рН 1-2 обеспечивало защиту а-аминогруппы протонированием. Известно, что в этих условиях возможно образование изомеров положения нитрозогруппы. Направление нитрозирования в ряду синтезированных соединений определяется структурой алкильного заместителя и не зависит от структуры аминокислотного фрагмента. Установлено, что ншрозирование Г^-метилкарбамоил производных протекает региоселективно с образованием соединений 1-3 с нитрозогруппой у атома азота, связанного с СНз-группой. Нитрозирование №-циклогексшт-карбамоил производньк протекало региоселективно с образованием соединений 4-5 с нитрозогруппой у №)-атома аминокислотного фрагмента, что, по-видимому, обусловлено стерическим влиянием циклогексильного радикала.

СООН

сг^/

СООН

Нитрозирование №-(2-хлорэтил)карбамоил производных

СООН

СООН 7Ь (8Ь)

СООН

ЫН2 9Ь приводило

* Работы были начаты под руководством к.х.н. Лии Борисовны Радиной, которой автор выражает глубокую признательность и благодарность.

образованию смесей изомеров положения нитрозогруппы 6-9 а-Ь, причем строение аминокислотного фрагмента не влияло на соотношение образующихся изомеров, которое составляло (по данным ВЭЖХ) 74-80:26-20.

2.2. Синтез и свойства изомеров положения нитрозогруппы в (2-хлорэтил)нитрозомочевине на основе Ь-лизнна Первоначально на основе Ь-лизина в нашей исследовательской группе была получена смесь (2-хлорэтил)нитрозомочевин: Г^-нигрозо-ЬГЧф-хлорэтил)карбамоил]-Ь-лизин (10а) и 1Че-[(2-хлорэтил)-М-нитрозокарбамоил]-1.-лизин (10Ь).

В результате скрининга было установлено, что смесь соединений 10а и 10Ь, получившая название «лизомусгин», проявляет наибольшую активность в ряду синтезированных АНК производных аминокислот. С целью выяснения особенностей противоопухолевого действия и вклада каждого из изомеров в противоопухолевую активность смеси был проведен синтез индивидуальных изомеров 10а и 10Ь. Для получения изомера 10а были использованы различия в гидролитической устойчивости изомеров 10а и 10Ь (см. раздел 2.З.). Изомер 10а, содержание которого в смеси составляет около 80%, более устойчив в водных растворах, чем изомер 10Ь. Экспериментально были найдены условия, при которых происходило практически полное разложение изомера 10Ь при частичном разложении изомера 10а. Выход соединения 10а составлял 53%, считая на исходное количество изомера 10а в смеси.

Для синтеза изомера 10Ь использован региоселективный путь, основанный на применении «активированных» 1Ч-алкилнитрозокарбаматов. Образующийся при карбамоилировании медного комплекса Ь-лизина пентахлорфениловым эфиром Ы-(2-хлорэтил)-Н-нитрозокарбаминовой кислоты, медный комплекс разлагали сероводородом в разбавленной НС1 и выделяли соединение 10Ь нейтрализацией водным аммиаком. Очистку соединения 10Ь проводили дополнительным переосаждением из разбавленной НС1 водным аммиаком. Общий выход соединения 10Ь в расчете на гидрохлорид Ь-лизина составлял около 20%.

N0

N0

Н2Ы

■СООН

Н2Ы

■СОО Си

СивО,, кон

ЫН2- НС1

сва50сом(мо)сн2снга

.СОО Си 2) МЧ,,ОН

юь

Изомеры 10а и ЮЬ различаются по своим спектральным (УФ, ИК, *Н ЯМР) характеристикам, а также временами удерживания (ВЭЖХ).

2.3. Изучение кинетики гидролитического разложения

№-нитрозокарбамоил производных диаминокарбоновых кислот

Противоопухолевое действие AHM обусловлено их способностью к гидролитическому распаду в организме с образованием реакционно-способных цитотоксических продуктов. Причем биологическая активность и спектр противоопухолевого действия зависят как от скорости распада, так и от природы образующихся продуктов.

Таблица 2.1. Константы скорости реакции разложения (к) и периоды полураспада (7Ъ,5) №-нитрозокарбамоил производных диаминокарбоновых кислот (фосфатный буфер, 37 °С)

№ сое д. Формула pH fc<103, мин1 To, 5, мин

1 CH3N(NO)CONH(CH2)2CH(NH2)COOH 7,4 3,44 202

2 CH3N(NO)CONH(CH2)3CH(NH2)COOH 7,4 1,21 573

4 C6H1iNHCON(NO)(CH2)3CH(NH2)COOH 7,4 3,62 191

6а-Ь C1CH2CH2NHCON(NO)(CH2)2CH(NH2)COOH C1CH2CH2N(NO)CONH(CH2)2CH(NH2)COOH 7,4 9,45 73,3

7а-Ь ClCH2CH2NHCON(NO)(CH2)3CH(NH2)COOH ClCH2CH2N(NO)CONH(CH2)3CH(NH2)COOH 7,4 6,17 112

3 CHjNiNO^ONHiCHjbSCHjCHCNH^OOH 7,0 0,515 1350

5 QHi iNHCON(NO)(CH2)2SCH2CH(NH2)COOH 7,0 1,74 398

9а-Ь CICH2CH2NHCON(NO)(CH2)2SCH2CH(NH2)COOH ClCH2CH2N(NO)CONH(CH2)2SCH2CH(NH2)COOH 7,0 3,18 218

С целью изучения зависимости гидролитической устойчивости синтезированных АН К производных от их строения нами проведено изучение кинетики разложения в условиях, близких к физиологическим - при температуре 37 °С в фосфатном буферном растворе (при рН 7,4 или 7,0). Текущую концентрацию указанных соединений определяли спектрофото-метрически по величине оптической плотности, обусловленной наличием Ы-нитрозогруппы (в максимумах поглощения при 230 или 397 нм). Константы скорости реакции разложения (к) рассчитывали из зависимости текущей концентрации соединения (с) от времени (Т) в координатах 1п(с/с0) - Т {со -начальная концентрация) как константу скорости реакции псевдопервого порядка по методу наименьших квадратов (табл. 2.1.).

Поскольку скорости разложения изомеров положения нитрозогруппы в 2-хлор-этильных производных 6-9 различны и их содержание в смеси может меняться в зависимости от различных факторов, константы скорости разложения смесей изомеров, полученные спектрофотометрическим методом, не характеризуют в достаточной мере процесс гидролитического разложения указанных соединении. В связи с этим сравнительное изучение кинетики разложения отдельных изомеров в их смеси проведено с использованием метода ВЭЖХ*, позволяющего количественно определить текущую концентрацию каждого из изомеров.

* Исследования с использованием метода ВЭЖХ проведены совместно с kjc.ii. Гришаковым А.Н.

Изучение кинетики разложения смесей изомеров 7а-Ь, 9а-Ь, 10а-Ь проводили в фосфатном буферном растворе при рН 7,4 и температуре 37 °С (детектирование при 230 нм, внутренний стандарт - теофиллин). Константы скорости реакции разложения (к), рассчитанные по методу наименьших квадратов как константы скорости реакции псевдопервого порядка, и периоды полураспада (7о,5) представлены в табл. 2.2.

Таблица 2.2. Константы скорости реакции разложения (к) и периоды полураспада (Т0соединений 7а, 7Ь, 9а, 9Ь, 10а, ЮЬ (фосфатный буфер рН 7,4,37 °С)

№ соед. Формула fcxlO3, мин"1 Го.5, мин

7а ClCH2CH2NTHCON(NO)(CH2)3CH(NH2)COOH 4,06 171

7Ь ClCH2CH2N(NO)CONH(CH2)3CH(NH2)COOH 7,31 94,8

9а ClCH2CH2NHCON(NO)(CH2)2SCH2CH(NH2)COOH 6,15 113

9Ь ClCH2CH2N(NO)CONH(CH2)2SCH2CH(NH2)COOH 10,3 67,3

10а ClCH2CH2NHCON(NO)(CH2)4CH(NH2)COOH 3,36 206

ЮЬ ClCH2CH2N(NO)CONH(CH2)4CH(NH2)COOH 6,33 110

Полученные результаты позволяют сделать вывод о том, что на устойчивость синтезированных АНК a-аминокислот влияет строение как нитрозомочевинной группы, так и аминокислотного фрагмента. Метальные производные 1-3 обладают наибольшей стабильностью в каждой группе соединений по сравнению с другими АНК производными, по-видимому, из-за того, что электронодонорная СНз-группа затрудняет отрыв амидного протона за счет увеличения электронной плотности на атоме азота. В случае 2-хлорэтильных производных 7-9 электронодонорные свойства С1СН2СН2-замесгителя ослаблены за счет влияния атома С1. Отмеченное в литературе специфическое участие 2-хлорэтильной группы в распаде AHM, по-видимому, также увеличивает скорость разложения этих производных по сравнению с метальными и циклогексильными.

В случае изомеров положения NO-группы, 2-хлорэтильные производные 7b, 9Ь и 10b, в которых NO-группа находится у атома азота, соединенного с 2-хлор-этильным радикалом, менее устойчивы, чем их изомеры 7а, 9а и 10а.

Уменьшение числа метиленовых групп аминокислотного фрагмента приводит к снижению устойчивости АНК производных аминокислот, возможно, в связи с увеличением электроноакцепторного влияния а-аминогруппы. Введение атома серы в 4-е положение аминокислотного фрагмента также приводит к снижению устойчивости соединений, вероятно, за счет специфического участия серы в реакции разложения.

2.4. Противоопухолевая активность №-нитрозокарбамоил производных диаминокарбоновых кислот

Противоопухолевая активность соединений 2, 3, 5-9 в опытах in vivo изучалась в РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН к.б.н. Перетолчиной Н.М. на мышах с перевиваемыми солидными опухолями (аденокарциномой молочной железы Са-755, карциномой легкого Льюиса LLC) и лейкозами (L1210, La).

В результате сравнения с ближайшими аналогами: метилнитрозо-мочевиной (МНМ) и 1^-(метил-Н-нитрозокарбамоил)^-лизином установлено,

и

что ^-(метш1-М-нитрозокарбамоил)-Ь-орнитин (2) и КЦыелил-М-нитрозо-карбамоил)-Ь-4-тиализин (3), проявляя высокий противоопухолевый эффект как в отношении солидных опухолей, так и лейкоза Ы210 с индуцированной лекарственной устойчивостью к действию известных противоопухолевых средств, превосходят их по величине противоопухолевой активности.

2-Хпорэтильные производные на основе О-орнитина (8а-Ь) проявили меньшую противоопухолевую активность, чем производные Ь-орнитина (7а-Ь). При сравнении противоопухолевого действия смеси изомеров 7а-Ь и лизомустина (10а-Ь) установлено, что уменьшение длины алкильной цепи между аминокислотным и нитрозомочевинным фрагментом молекулы приводит к повышению токсичности без увеличения активности.

В результате экспериментального изучения противоопухолевой активности АНК производных Ь-4-тиализина (3, 6, 9) был сделан вывод о том, что величина противоопухолевого эффекта и спектр действия АНК производных существенно зависят от структуры алкильного заместителя уреидогруппы, а замена метиленовой группы на атом Б в 4-м положении аминокислотного фрагмента приводит к снижению противоопухолевой активности.

Сравнительное изучение противоопухолевой активности синтезированных нами АНК производных показало, что наиболее перспективной для дальнейшего продвижения в клинику является смесь изомеров 10а-Ь. 2.5. Разработка методов получения и контроля качества субстанции

противоопухолевого препарата лизомустин 2.5.1. Получение субстанции препарата лизомустин

В основу технологии получения субстанции лизомустина была положена разработанная ранее схема синтеза, которая включала карбамоилирование медного комплекса Л-лизина 1,3-бис(2-хлорэтил)-1-нитрозомочевиной, обработку образующегося медного комплекса 1ч -(2-хлорэтилкарбамоил)-Ь-лизина щавелевой кислотой в кислой среде и нитрозирование Г*Г-(2-хлорэтил-карбамоил)-Ь-лизина (без его выделения) нитритом натрия с последующей нейтрализацией кислого раствора водным аммиаком.

'С00Н кон. СивО^

32-36 °с

Си

С1СН2СНгМ(КО)СОННСН2СН2С|

Си НС), нгсго.

соон

10а

Лизомустин 10а - ХОЬ (75 : 25)

Замена 2-хлорэтилизоцианата 1,3-бис(2-хлорэтил)-1-нитрозомочевиной в качестве карбамоилирующего агента позволило избежать использование трудно-доступного и токсичного соединения. Для упрощения процесса получения и увеличения выхода субстанции лизомустина нами было предложено проводить нитрозирование 1ЧЕ-(2-хлорэтил)карбамоил-Ь-лизина без его выделения из кислого раствора. Получающийся в результате нейтрализации «технический» продукт содержит от 96 до 98 % основного вещества, примеси хлоридов аммония и натрия в количестве от 0,5 до 2,0 %, а также органические примеси в количестве до 1,5 %. Соотношение изомеров 10а-Ь в составляет примерно 80:20. Нами предложена процедура коррекции изомерного состава с одновременным увеличением содержания основного вещества в субстанции препарата путем переосаждения «технического» продукта из разбавленного раствора соляной кислоты. При получении субстанции препарата согласно разработанному нами методу выход продукта, содержащего не менее 98 % основного вещества и изомеры Юа-Ь в соотношении (77*74):(23-г-26), составляет около 40 % в расчете на гидрохлорид L-лизина.

На основании проведенных нами исследований разработаны лабораторный и опытно-промышленный регламенты (ОПР 04739512-2-2008) получения субстанции и Фармакопейная статья предприятия (ФСП 42-04944519-03) на субстанцию препарата с указанием показателей качества, которым она должна соответствовать, и методов их контроля. Найденные нами технические решения были успешно реализованы на предприятии ООО «АКАДЕМФАРМ» (г. Екатеринбург) и в ИОС им. И.Я. Постовского УрО РАН во время выпуска субстанции лизомустина.

2.5.2. Методы контроля качества субстанции лизомустина

Основными методами контроля качества субстанции препарата лизомустин являются определение содержания основного вещества и изомерного состава.

Лизомустин представляет собой многофункциональное соединение, содержащее в своем составе амино и карбоксильную группу, легко гидролизуемый атом хлора, хромофорную нитрозо группу. Все это делает возможным использовать для количественного определения различные методы: спектрофотометрический, полярографический, газообъемный, а также титрование амино и карбоксильной групп или ионов хлора. Однако, поскольку вещество является химически нестабильным, особенно, в водных растворах, большое значение имеет время пробоподготовки. В результате сравнения нами установлено, что наиболее простым, быстрым и удобным из перечисленных методов является спектрофотометрический метод, основанный на хромофорных свойствах нитрозо группы. Для определения содержания основного вещества предложено использовать полосу поглощения нитрозо группы с максимумом около 396 нм.

Существенным отличием лизомустина от применяемых в клинике препаратов класса AHM является то, что он представляет собой смесь изомеров. Разработка методов анализа изомерного состава субстанции лизомустина, обеспечивающих достаточную точность, стала возможна после получения нами индивидуальных изомеров 10а и 10Ь. Для контроля изомерного состава субстанции, являющегося важным показателем, определяющим терапевтический эффект препарата, нами предложено три метода: весовой,

аминокислотного анализа и ВЭЖХ.

Наиболее удобным и точным из них является метод анализа изомерного состава субстанции, основанный на использовании ВЭЖХ в обращенно-фазовом варианте. Относительная ошибка метода не превышает 2%, что позволило его использовать при составлении фармакопейных статей на субстанцию и лекарственную форму препарата.

Разработанные технологические регламенты получения субстанции препарата, основанные на использовании доступного сырья и стандартного оборудования, позволили обеспечить проведение его широких клинических испытаний.

2.6. Биологическая активность лизомустина и его изомеров

В ходе проведенных в РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН исследований было определено соотношение изомеров 10а и 10Ь, обеспечивающее оптимальный противоопухолевый эффект препарата. Противоопухолевая активность лизомустина оценивалась в сравнении с AHM, используемыми в клинике (МНМ и кармустином). Показано, что лизомустин проявляет высокий противоопухолевый эффект при лечении большого числа экспериментальных солидных опухолей и лейкозов, по величине и длительности противоопухолевой активности значительно превосходит МНМ, а по ряду показателей -и кармустин: обладает высокой избирательностью противоопухолевого действия; не имеет или имеет лишь частичную перекрестную резистентность с рядом широко используемых в клинике противоопухолевых препаратов; столь же эффективен при лечении развившихся опухолей, как и при лечении в ранние сроки.

В результате предклинического изучения фармакокинетики лизомустина были выбраны оптимальные дозы и режимы применения препарата в клинике. В ходе I фазы клинических испытаний определена терапевтическая доза препарата и выбран оптимальный режим введения: 400-500 мг/м2 1 раз в 4-6 недель или 300 мг/м2 в 1-й, 8-й дни, интервалы между курсами - 6 недель.

Клинические испытания препарата показали, что лизомустин хорошо переносится и проявляет высокую эффективность в отношении злокачественных меланомы, лимфосаркомы, а также при лечении больных раком легкого. Важной особенностью препарата лизомустин является низкая токсичность и антиметастатическое действие, особенно, в отношении метастазов рака легкого в печень и головной мозг. Это позволяет считать целесообразным применение лизомустина для лечения тяжелых больных, больных пожилого возраста и в амбулаторных условиях.

Министерство здравоохранения РФ разрешило медицинское применение препарата лизомустин в качестве противоопухолевого средства и его промышленный выпуск (Регистрационное удостоверение Р № 00364/01 от 01.12.03). Лекарственная форма лизомустина - «Лизомустин-лиофилизат для приготовления раствора для инфузий» зарегистрирована и внесена в Государственный реестр лекарственных средств (Регистрационное удостоверение № ЛС-002311 от 01.12.2006).

В настоящее время закончена II фаза клинических испытаний. Показана эффективность использования лизомустина в режиме полихимиотерапии в комбинации с цисплатином и вепезидом. Субстанция препарата лизомустин выпускается ООО «АКАДЕМФАРМ» (Екатеринбург), лекарственная форма -

ООО «Фирма ГЛЕС» (Москва). Проводятся НИОКР для организации полномасштабного производства препарата лизомустин на ООО «Завод МЕДСИНТЕЗ» (г. Новоуральск Свердловской области). В настоящее время проводятся исследования эффективности использования препарата для лечения больных с другими формами онкологических заболеваний. Глава 3. Синтез и изучение физиологической активности амидов (5)-напроксена, ибупрофена и иидометацина с производными аминокислот Для снижения побочных эффектов нестероидных противовоспалительных препаратов (НСПВП) нами предложено использовать природные аминокислоты в качестве транспортной функции.

НСПВП представляют собой уникальный класс лекарственных средств и являются наиболее назначаемыми препаратами. Механизм противовоспалительного и анальгетического действия НСПВП связан с их способностью ингибировать фермент циклооксигеназу (ЦОГ). Известно, что обычно назначаемые НСПВП в несколько раз сильнее ингибируют ЦОГ-1, выполняющую нормализующие функции в тканях, по сравнению с ЦОГ-2, которая индуцируется и быстро активируется в ответ на различные факторы воспаления. Такое действие НСПВП обусловливает их побочные эффекты, главным образом, гастротоксичность.

Ме |е МеО^Х-СООН

й^у^СООН ме Гру^СООН ^^ Ме

Напроксен 11 Ибупрофен 12 Индометацин 13 ^С!

Использование природных аминокислот для транспортировки фармакофорных групп (фрагментов известных НСПВП) представлялось перспективным, поскольку НСПВП будут переноситься в клетки воспаленных тканей, не затрагивая ЦОГ-1, что, по нашему мнению, может привести к снижению побочных эффектов. Нами проведена модификация наиболее часто назначаемых НСПВП: (5)-напроксена 11, (/?,5)-ибупрофена 12 и индометацина 13, производными аминокислот и дипептидов.

3.1. Синтез амидов (Х)-напроксена

Амиды 15-19 (5)-налроксена [(25)-2-(6-метоксинафт-2-ил)пропионовой кислоты] с алкиловыми эфирами Ь-метионина, Ь-фенилаланина, Ь-гистидина, Ь-лейцина и Ь-глутаминовой кислоты бьши получены с выходами от 50 до 80% путём конденсации хлорангидрида (5)-напроксена (14) с соответствующими алкиловыми эфирами аминокислот.

Ме

Ме ? Н

5 нгмс'нр)сооа', тэа

^^ О « ДМФА МеО^^- и R 15-19

МеО ^^ 14

15: R = CH,CH,SMe, R' = Ме {Met) 17: R =R' = Ме (His) 18: R = СН2СН(СН3)2, R' = Ме (Leu) 16: R = CH2Ph, R' = Ме (Phe) „О 19: R = (СН2)2СООВ, R1 = Et (Glu)

Региоизомерные амиды (5)-напроксена 21 и 24 с диаминокислотой, L-лизином, бьши получены в результате избирательного ацилирования ос- или е-аминогруппы хлорангидридом 14. В первом случае в качестве исходного

соединения использовали ЬР-формил-Ь-лизин (20).

Ма

^ ^ ^ ?°°Н 14, ТЕА . ---СООН

£ ХЮОГ 5 Н о 21

"20 МеО"^^"-^ О ^Х-ч^М^О 85%

Для получения амида 24 по е-аминогруппе в качестве исходного соединения использовали медный комплекс Ь-лизин а (22). Затем проводили разложение образующегося медного комплекса 23 разбавленным раствором соляной кислоты.

1С

.соон

25: Я =

выход 60%

24 выход 60%, считая на 22

Синтез амидов (5)-напроксена и аминокислот со свободной карбоксильной функцией (25 и 26) осуществлен путем избирательного гидролиза сложноэфирной группы метиловых эфиров 16 и 18 при 0 °С. Мягкие условия реакции позволяли избежать рацемизации по какому-либо из асимметрических центров молекул амидов 25 и 26, что доказано данными *Н ЯМР спектроскопии.

Ме Ме

Ме0АД^ 8 I аЧеТ0НУп1Д^ 5 I 26: Я = СН2СН(СН3)2

Ме° „ МеО ^ ^ выход 70%

15,18

Для получения амидов 27-29 (5>)-нагфоксена с дипептидами использовали как последовательное наращивание аминокислотной цепи, так и прямую конденсацию (5)-напроксена с метиловым эфиром дипептида.

Синтез (25,25,25г)-амидов 27 и 28 был осуществлён путём конденсации (25,25)-амида напроксена и Ь-фенилаланина 25 с метиловыми эфирами Ь-валина и Ь-аланина методом смешанных ангидридов. Реакцию проводили путем активации кислоты этилхлорформиатом (ЭХФ) в присутствии аминокомпоненты и третичного основания. Данный метод позволяет избежать значительной рацемизации по асимметрическому атому фенилаланина и получить целевой продукт с более высоким выходом и высокой степенью стереочистоты (йс около 97% по данным ВЭЖХ и !Н ЯМР спектроскопии).

Ме Ме о п

^СООН НС1*НгМ^СООМе А 27: И = СН(СНЭ)2

- еюсоо^мм выход 82%

X)

I, №.1М дмфа-тгф

МеО'

28: Я = СН3 выход 60%

(25,25,25)-Амид напроксена 29 получен прямой конденсацией хлорангид-рида (5)-напроксена с гидрохлоридом метилового эфира Ь-аланил-Ь-аланина: Ме уе

А1а-А1а-ОМе*НС1, ТЕА

--------- "СООМе

-ШТ

14

СН2С1,

н 5 Т

ГГУ^^

А-^Ч^ О М

29 50%

3.2. Синтез амидов ибупрофена

Амиды 31-33 ибупрофена [(Л5)-2-(4-изобутил)фенилпропионовой кислоты] с алкиловыми эфирами L-метионина, 1^фенилаланина и L-гистидина были получены путём конденсации хлорангидрида ибупрофена (30) с метиловыми эфирами соответствующих L-аминокислот.

Vе fVSr01 H?NC'H(R)COOMe ТЕА ме

ö 30 дафА мДЛ^1 о ñ .31-33

31: R = CH2CH2SCH3 (Mel); 32: R = CH2Ph (Pfte); 33: R= CH2 (H/s) выходы 50-57%

hOn

3.3. Синтез амидов индометацина

Синтез амидов индометацина [1-(4-хлорбензоил)-5-метокси-2-метилиндол-3-уксусной кислоты] (13) с производными аминокислот осуществляли различными методами: хлорангидридным, карбодиимидным и методом смешанных ангидридов.

MeCL ^ /—COCI MeCk^v. ----NH-^COOR'

'YVjC TlnfT I

H2NC'H(R)COOR' TEA^ ^^N^Me R

3« "" -

35: R = <CHj)jSMe, R' = Me (Mei); 36: R = CH2Ph, R' = Me (Pile); 37: R = (CH2)2COOEt, R' = Et (G/u)

Амиды 35-37 индометацина с алкиловыми эфирами L-метионина, L-фенил-аланина, L-глутаминовой кислоты получены путём конденсации хлорангидрида индометацина 34 с соответствующими производными аминокислот с выходами от 34 до 73%.

Амиды 35, 38-42 индометацина и метиловых эфиров L-серина, L-гистидина, L-аланина, L- и D-метионина, и Б-метил-Ь-цистеина были получены карбодиимидным методом в присутствии N,N' -дициклогексилкарбодиимида (DCC).

"'"тСпГ00" "•ушгг""^000"'

Me H2NCH(R)COOMe, DCC. TEA ° R

I ---■ N MS

^l^^ ch2ci2

13 Ца ХД.С| 35,38-42

35: R = (CH2)2SCH3 (L-Met) выход 51% 40: R = CH2OH (Set) выход 58% 38: R = (CH2)2SCH3 (D-Mel) выход 74% 41: R = Me {Ala) выход 61%

39: R= .CHJHis) выход 56% 42: R = CH2SCH3 (S-MeCys) выход 68%

F=T

HN^N

Методом смешанных ангидридов в присутствии ЭХФ были получены амиды 43 и 44 индометацина с Ь-аланил-Ь-аланином и его метиловым эфиром. Синтез амида 43 со свободной карбоксильной группой аминокислотного фрагмента проводили в смеси Н20-ТГФ в присутствии КОН и ТЭА, а амид 44 получали в смеси ДМФА-ТГФ в присутствии N-метилморфолина.

"VI—¡рсоон ша

ЧЛ --- I

А1а-А!а-0П. ЕЮС0С1

34

а

соон

43 (Н = Н) выход 85%

44 (Я = Мв) выход 68%

В отличие от амидов напроксена амид индометацина 34 со свободной карбоксильной группой аминокислотного фрагмента может быть получен только прямой конденсацией индометацина с аминокислотой или дипептидом. Щелочной гидролиз амида индометацина с алкиловым эфиром аминокислоты в условиях, описанных выше для гидролиза амидов напроксена, приводил к отщеплению хлорбензоильного фрагмента индометацина.

В результате предварительного изучения противовоспалительной активности синтезированных амидов в эксперименте на животных (раздел 3.4) амид индометацина и метилового эфира Ь-метионина 35 был выбран как наиболее перспективное соединение, обладающее высокой противовоспалительной актив-ностью и низкой токсичностью. С целью оптимизации синтеза указанного соединения проведено сравнительное изучение различных методов конденсации: карбодиимидного, хлорангидридного и метода смешанных ангидридов. Наилучшие выходы (67%) были получены при проведении конденсации индометацина с метиловым эфиром Ь-метионина в присутствии ОСС при О °С. Этот метод является наиболее простым и удобным из изученных методов создания амидной связи.

3.4. Физиологическая активность синтезированных амидов

Была исследована противовоспалительная и анальгетическая активность, а также острая токсичность 15 соединений .

Противовоспалительную активность соединений изучали на беспородных белых крысах на модели каррагенинового отека. Анальгетическую активность изучали на беспородных белых мышах на модели «уксусных корчей». Соединения вводили животным внутрибрюшинно (или перорально) в дозах, соответствующих ЕО30 исходных НСПВП с коэффициентом пересчета, учитывающим содержание препаратов в амидах. Острую токсичность соединений с вычислением ЛДзо определяли на беспородных белых мышах по экспресс-методике В.Б. Прозоровского. Полученные результаты сравнивали с активностью исходных препаратов.

Результаты проведенных исследований показали, что из семи исследованных производных напроксена только два - амиды напроксена с метиловыми эфирами Ь-гистидина 17 и Ь-лейцина 18 проявляют противовоспалительную активность, близкую к активности напроксена. Результаты теста на анальгетическую активность показали более выражеш!ую картину: из семи исследованных соединений четыре показали достоверное анальгетическое действие, не отличающееся от напроксена, причем амид 17, проявивший противовоспалительную, также проявил и высокую анальгети-

Исследование биологической активности синтезированных амидов проведено в Институте технической химии УрО РАН под руководством к.б.н. Л.В. Аникиной и в Естественнонаучном институте при Пермском государственном университете под руководством к.фарм.н. В.А. Сафина.

ческую активность. При определении острой токсичности соединений было установлено, что все соединения кроме амида 21 имеют ЛД50 выше 3000 мг/кг.

Амиды ибупрофена с метиловыми эфирами Ь-фенилаланина (32) и Ь-гистидина (33) показали анальгетический и противовоспалительный эффект, достоверно неотличимый от исходного препарата. При пероральном способе применения противовоспалительной активности не наблюдалось. Анальгетической активностью, достоверно не отличающейся от препарата сравнения, обладают все производные ибупрофена. Наибольшую активность проявил амид 33 ибупрофена с метиловым эфиром фенилаланина. При определении острой токсичности установлено, что ЛД50 всех исследованных амидов ибупрофена составляет более 3000 мг/кг.

Результаты проведенных исследований (табл. 3.1) показали, что все пять изученных производных индометацина проявляют противовоспалительную активность на модели каррагенинового отека, из них два соединения, амиды индометацина с метиловыми эфирами Ь-метионина 35 и Ь-гистидина 39, достоверно неотличимы по силе действия от индометацина. Наибольшую анальгетическую активность проявили амиды индометацина с метиловыми эфирами Ь-метионина 35 и Ь-фенилаланина 36, а соединение 40 (амид индометацина с метиловым эфиром серина) не показало анальгетической активности на данной модели.

Таблица 3.1. Острая токсичность, противовоспалительная и анальгетическая активность амидов индометацина 35-37,39,40

Противовоспалительная Анальгетическая

Соединение (аминокислота) ЛД50, мг/кг активность активность

Доза, мг/кг Торможение отека стопы по отношению к контролю, % Доза, мг/кг Торможение количества корчей по отношению к контролю, %

35 (МеЮМе) 36 (РЬе-ОМе) 37 (С1и-ОЕ0 39 (Шз-ОМе) 40 (Бег-ОМе) >3000 >3000 >3000 >3000 >3000 14.1 14,5 15.2 14,2 12,8 55,6 45,6 42,6 58,1 32,8 15.6 16,0 16.7 15,6 14,1 66,2 60,9 32,3 40,6 0,0

Индометацин 274 10,0 68,6 11,0 82,7

В ходе ряда специальных экспериментов было также установлено, что в сравнении с индометацином амид 35 обладает гораздо более низкой гастро-токсичностью, не оказывает антипролиферативного действия, не обладает гепатотоксичностью и токсическим действием на форменные элементы крови и компоненты иммунной системы. Исследование острой токсичности показало, что ЛД50 всех изученных амидов индометацина более 3000 мг/кг.

Полученные результаты позволяют сделать вывод о том, что модификация известных НСПВП производными Природных аминокислот приводит к существенному снижению побочных эффектов при сохранении высокой противовоспалительной и анальгетической активности. Глава 4. Синтез производных карборан-содержащих аминокислот -потенциальных агентов для бор-нейтронозахватной терапии опухолей

Бор-нейтронозахватная терапия (БНЗТ) - одно из важнейших современных направлений комбинированной терапии опухолей, в том числе не поддающихся хирургическому лечению. В последнее десятилетие активно

ведутся исследования, направленные на поиск новых агентов для БНЗТ. Весьма перспективными в этом отношении являются молекулы, содержащие в своей структуре остатки клозо-карборанов, отличающихся высоким содержанием бора. Актуальной проблемой является селективный транспорт карборанил-содержащих соединений в опухолевые клетки. Одним из возможных путей решения этой проблемы является модификация природных биомолекул остатками карборанов.

Наиболее перспективным направлением, на наш взгляд, является получение конъюгатов карборанов с аминокислотами, способными обеспечить направленную доставку соединений бора в опухолевые клетки. Особый интерес, в этом отношении, представляет карборан-содержащий аналог 45 у-аминомасляной кислоты (уАЬи) - 2-(3-амино-1,2-дикарба-кло5о-додекаборан-2-ил)уксусная кислота, строение которой позволяет включать ее в состав пептидов.

,соон

соон

• с,сн о в,вн

NH2 yAbu

45

4.1. Получение псевдо-дипептидов N-защищенной 2-(3-амино-1,2-дикарба-к/1030-додекаборан-2-ил)уксусной кислоты и алкиловых эфиров природных аминокислот

С целью получения конъюгатов с производными природных аминокислот проведен выбор оптимального метода конденсации N-защищённых карборанил-содержащих аналогов yAbu с алкиловыми эфирами природных аминокислот. Среди исследованных методов (хлорангидридный, карбо-диимидный, смешанных ангидридов) наибольшие выходы целевых продуктов (60-80%) были получены при использовании DCC в диметилформамиде при комнатной температуре в присутствии 1-гидроксибензотриазола (HOBt). В других случаях выходы целевых продуктов не превышали 30-40%.

-СООН COOAlk 50: Р = Ac, R = f'-Рг, Alk = Bu'

,CONH<

гппди, r 51: P = Ac, R = CH2Ph, Alk = Me

COOAlk DCC, HOBI, TBL i " „„ _ _ „.„.„„(

A,u 7** ff« 52: P = Form, R = i-Pr, Alk = Bu'

Ff NH2 ДМФА,20 С, 18 ч

53: P = Form, R = CH2Ph, Alk = Me 54: P = Bz, R = CH2Ph, Alk = Me 46: P = Ac 47: P = Form ' 50-56 55: P = Bz, R = (CH^NHCbz, Alk = Bu'

48: P = Bz 49: P = Boc 56: P = Boc, R = CH2Ph, Alk = Me

В качестве исходных соединений были использованы N-защшценные производные 46-49 (N-ацетил-, N-формил-, N-бензоил- и N-Boc-) З-амино-1,2-дикарба-юго5о-додекаборан-2-ил)уксусной кислоты. В качестве амино компонентов использовали соли алкиловых эфиров аминокислот: ацетат трет-бутилового эфира D-валина, гидрохлорид метилового эфира L-фенилаланина и гидрохлорид mpem-бутилового эфира ЬГ-карбобензокси-Ь-лизина.

Все полученные соединения 50-56 представляют собой смеси диастерео-меров, что подтверждено данными !Н ЯМР спектроскопии. Наиболее характерными сигналами, позволяющими различать диастереомеры, являются сигналы протонов эфирной группы. Соотношение диастереомеров в амидах 51

и 53-56, содержащих ароматические фрагменты, было также определено методом ВЭЖХ (детектирование при 230 нм).

В ряде случаев индивидуальные диастереомеры удалось выделить методом фракционной кристаллизации [(Л,Л)-50] или флеш-хроматографии [(Л,5)-56 и (5,5)-56]. Абсолютная конфигурация фрагмента карборана в соединениях (й,/?)-50 и (5,5)-56 определена методом рентгено-струкгурного анализа относительно известной конфигурации Б-валина и Ь-феннлаланина, соответственно (рис. 4.1).

50

кристаллизация^ АсНМШ^

ВосН

хроматография

СООСН3 ссмн "

(аэ)-56

5%,<1е95%

СОО'Ви

сн3 (Я,Я)-51 ООСН3 НЫОС'

15%. ¿е 92%

ЖВос

6,5%, <1е 68%

а б

Рисунок 4.1. Строение индивидуальных стереоизомеров (К,Я)-50 (а) и (5,5)-56 (б).

С целью получения псевдо-пептидов со свободной карбоксильной группой и оценки стабильности /шязо-карборанового ядра в условиях гидролиза проведено удаление С-защитных групп в амидах 50, 51,53 и 55. Показано, что гидролиз сложных эфиров как в кислых, так и в щелочных условиях происходит с сохранением одао-структуры карборанового фрагмента в продуктах 57-61, что подтверждено данными спектроскопии 'Н ЯМР и ТСХ (отсутствие нидо-производных в продуктах реакции).

Гидролиз /яреди-бутилового эфира производного Г^Г-СЬг-Ь-лизина 55 в трифторуксусной кислоте сопровождался удалением СЬг-защитной группы при е-аминогруппе. По данным 'Н ЯМР спектроскопии продукт реакции содержал преимущественно соединение 61 с обеими свободными группами фрагмента лизина (СООН и е-ЫН2). Соотношение продуктов 60 и 61 в реакционной массе, по данным спектроскопии *Н ЯМР, составляло 1:9. Соединение 61 в виде трифторацетата было выделено из смеси продуктов флеш-хроматографией на силикагеле с выходом 32%.

сог^соо'ви

соон

'СООМе

СРЛООН

20 С 2 ч

Ш№ОН ацетон, 5 °С, 24 ч

51,53

СР3СООН

20 °С, 4 ч

51,58: Р = Ас 54, 59: Р = Рогт

ЫН2*СР3СООН

СООМе

: 61 1:9

4.2. Получение псевдо-трипептидов 2-(3-амино-1,2-дикарба-«ла?0-додекаборан-2-ил)уксусной кислоты

Для получения псевдо-трипептидов были использованы два подхода. Первый заключается в конденсации №защищенных производных 2-(3-амино-1,2-дикарба-клозо-додекаборан-2-ил)уксусной кислоты с метиловыми эфирами дипептидов природных аминокислот. ,СООН

ЫНР °

= ^ ^ 62: Р = Рогтп; И = Н

48" р - 62 63: Р = Вг; Р1 = Ме

Однако конденсация И-формил и М-бензоил производных 47 и 48 с метиловыми эфирами глицил-Ь-фенилаланина и Ь-аланил-Ь-фенилаланина при действии ОСС в присутствии НОЕН в ДМФА при комнатной температуре сопровождалась образованием побочных продуктов и низкими выходами целеевых продуктов 62 и 63 (около 20%). Поскольку метиловые эфиры дипептидов были использованы в виде трифторацетатов, среди продуктов реакции преобладали амиды трифторуксусной кислоты и исходных дипептидов.

РГК РЬ

X

сош соон

ОСС, НОВ!, ТЕА

Х01ЧН

Н2М СОО'Ви ДМФА, 20 °С, 40 ч *СН3СООН

, г

Н3С сн3

СОО'Ви

64

ПЧНАс ¿СШЬ МНАс 58

Более удачным оказался путь последовательного наращивания

аминокислотной цепи. Конденсацию Ы-ацетил дипептида 58, полученного

щелочным гидролизом метилового эфира 51, с /ирет-бутиловым эфиром валина проводили карбодиимвдным методом в ДМФА. В этом случае выход продукта 64 был около 70%.

Глава 5. Кинетическое разделение рацемических аминов под действием производных природных аминокислот и других хиральных кислот

Метод кинетического разделения (КР) смесей энантиомеров, основанный на разности скоростей превращения индивидуальных стереоизомеров рацемата в реакциях с асимметрическим реагентом и/или катализатором, занимает особое место среди методов получения индивидуальных стереоизомеров органических соединений. Широкое применение в процессах КР нашли как ацилирующие ферменты (амидазы, протеазы, эстеразы и липазы), так и катализаторы хирального переноса ацила.

Альтернативой методам с применением ферментов и хиральных катализаторов в КР спиртов и аминов являются реакции с энантиочистыми ацилирующими реагентами. Нами впервые показано, что производные природных аминокислот могут служить эффективными разделяющими агентами в процессах КР. Хотя, ранее считалось, что КР аминов и спиртов производными оптически активных кислот имеет небольшое препаративное значение, в последние годы появились сообщения об использовании именно этих соединений в КР. В известной степени это связано с работами, выполненными в лаборатории асимметрического синтеза ИОС им. И.Я. Постовского УрО РАН.

5.1. Кинетическое разделение гетероциклических аминов с помощью

производных жирно-ароматических кислот

Первоначально нами в качестве хирального разделяющего агента для КР рацемических гетероциклических аминов - 2,3-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-4#-1,4-бензоксазина (65), 2,3-дигидро-3-метил-4#-1,4-бензоксазина (66), 2-метил-1,2,3,4-тетрагидрохинолина (67) и 2-метилиндолина (68), представляющих интерес в качестве фрагментов соединений, обладающих биологической активностью, было предложено использовать хлорангидрид (5)-напроксена

(14).

Особый практический интерес представляет получение (5)-2,3-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-4Н-1,4-бензоксазина, (5)-65, ключевого интермедиата и структурного фрагмента левофлоксацина, высокоактивного антибиотика ряда фторхинолонов.

5.1.1. Кинетическое разделение гетероциклических аминов с помощью хлорангидрида (5)-напроксена

В результате ацилирования аминов 65-68 хлорангидридом 14 в стехио-метрических количествах в бензоле в присутствии триэтиламина образуются

смеси диастереомерных амидов 69-72а-Ь с высокими выходами. Состав и строение диастереомерных смесей установлены на основе данных ВЭЖХ и 'Н ЯМР спектроскопии. Были найдены оптимальные условия анализа диастерео-мерного состава образующихся амидов методом ВЭЖХ.

,ОМе

R^fSlH -ев х Ч

NH + CI'

СН.

65-68

W. .3

TEA бензол, 20 °С ОМе

Г" ^ + R" ^f ^N

14

OMe

65, 69: R = F, X = -0-СН2-66,70: R = Н, X = -0-СНг-

S | Г i DO, «и; П = П, А = -и-ьп

СН3 S,S X V СН, RS 67,71: R = Н, X = -(СНг)2

3 69-72а 3 69-72Ь 68,72: R = Н, X =-СН2

Определение абсолютной конфигурации фрагментов гетероциклических аминов в (5,5)-амидах 69а, 70а и 72а проведено методом рентгеноструктурного анализа с учетом известной абсолютной конфигурации (5)-напроксена (см., например Рис. 5.1).

asi CI6I от) CMlcS

Рисунок 5.1. Строение молекулы (£,5)-амида 72а (а).

Отнесение стереоконфигурации в (5,5)-амиде 71а проведено путем сравнения удельного вращения (5)-изомера амина 67, полученного в результате кислотного гидролиза амида 71а, с литературными данными. Получение оптически чистого (£)-изомера амина 67 в результате гидролиза индивидуального (&5)-амида 71а свидетельствует об отсутствии рацемизации в процессе ацилирования хлорангидридом 14.

Наиболее характерными сигналами в спектрах !Н ЯМР, позволяющими судить о диастереомерном составе смеси амидов, являются сигналы метановых протонов и протонов метальных групп у асимметрических атомов углерода. Обнаружено, что в спектрах *Н ЯМР, зарегистрированных при комнатной температуре, сигналы СН3 и СН групп напроксенового и аминного фрагментов заметно уширены, вероятно, вследствие динамических процессов, скорости которых соответствуют области «промежуточного обмена» в шкале времени ЯМР. При регистрации *Н ЯМР спектров амидов 96-99 в растворе ДМСОч^ при 100 °С наблюдается сужение сигналов и удается получить хорошо разрешенные спектры, пригодные для количественного определения диастереомерного состава.

5.1.1.1. Влияние растворителей на процесс кинетического разделения гетероциклических аминов с помощью хлорангидрида (S)-напроксена

Методом ВЭЖХ изучено влияние растворителя на диастерео-

селективность процесса КР рацематов аминов 65-67 хлорангидридом 14. Реакцию ацилирования проводили при мольном соотношении амин -хлорангидрид 2:1 в соответствующем растворителе при 20 °С в течение 24 ч. В этих условиях избыток гетероциклического амина можно рассматривать как катализатор, действующий как по общеоснбвному, так и нуклеофильному механизму ацилирования.

Таблица 5.1. Влияние растворителя на диастереоселективность ацилирования гетероциклических аминов 65-67 хлорангидридом (5)-напроксена 14 при комнатной температуре

Растворитель Диастереомерный избыток (5,5)-амида, de (%)*

69а 70а 71а

Бензол 87,0 80,4 78,6

Хлористый метилен 79,0 55,8 62,6

Тетрагидрофуран 79,0 76,0 -

Ацетонитрил - 46,0 51,0

Диметилформамид 39,0 42,0 -

* По данным ВЭЖХ.

Как видно из приведенных в табл. 5.1 данных, во всех растворителях быстрее ацилируются S-энантиомеры аминов 65-67 и в продукте преобладает (5,5)-диастереомеры амидов 69-71а. Наибольшая диастереоселективность наблюдалась при проведении реакции в бензоле. Уменьшение диастерео-селективности происходит при переходе к более полярным растворителям -дихлорметану, тетрагидрофурану, ацетонитрилу и, особенно, к диметилформамиду.

5.1.1.2. Влияние оснований на процесс кинетического разделения гетероциклических аминов с помощью хлорапгидрида (5)-напроксена

С целью изучения влияния вспомогательного третичного основания на процесс КР рацемических гетероциклических аминов 66 и 67 под действием хлорангидрида (5)-напроксена реакцию ацилирования проводили в присутствии различных по строению и нуклеофильности третичных аминов: триэтиламина (TEA), N-метилморфолина (NMM), Ы-диизопропил-Ы-этиламина (DPEA), пиридина (Ру) и 4-(диметиламино)пиридина (DMAP) при мольном соотношении рацемический амин - хлорангидрид - основание 2:1:1 в различных растворителях при 20 °С в течение 24 ч.

При проведении реакций в бензоле наибольшую диастереоселективность ацилирования наблюдали в присутствии алифатических аминов - NMM в случае ацилирования амина 66 и TEA для амина 67. Диастереоселективность уменьшалась при переходе к гетероциклическим аминам - пиридину и, особенно, DMAP (табл. 5.2).

В полярных растворителях (хлористом метилене и ацетонитриле) диастереоселективность ацилирования зависела как от структуры гетероциклического амина, так и от свойств среды (катализатора и растворителя).

Общее действие вспомогательных оснований, по-видимому, определяется их способностью образовывать ацил-аммониевые соли (ААС) с хлорангидридом 14, что, в свою очередь, зависит как от/ полярности растворителя, так и от основности-нуклеофильности амина-катализатора. Так, в

неполярных апротонных растворителях (например, бензоле) роль третичных аминов (TEA, NMM, DPEA и пиридина) незначительна, они вступают в реакцию не на лимитирующей стадии, а в конце процесса, на стадии отрыва протона от промежуточного продукта. В случае DMAP в этих же условиях образуется крайне устойчивая ААС, взаимодействие которой с гетероциклическим амином является, по-видимому, лимитирующей стадией и происходит менее стереоселективно.

Таблица 5.2. Влияние основания на диастереоселективносгь ацилирования гетероциклических аминов 66 и 67 хлорангидридом (5)-напроксена 14 при комнатной температуре в различных растворителях

Соотношение амидов в смеси, (R,S-S,S) и

Растворитель Основание диастереомерный избыток (5,5)-амида*

70Ь-70а 70а (de, %) 71b-71a 71а (de, %)

- 9,8-90,2 80,4 10,7-89,3 78,6

TEA 8,2-91,8 83,6 8,9-91,1 82,3

Бензол NMM 7,1-92,9 85,8 9,6-90,4 80,8

DPEA 9,9-90,1 80,2 12,1-87,9 75,8

Ру 12,3-87,7 75,4 12,0-88,0 76,0

DMAP 40,0-60,0 20,0 42,5-57,5 15,0

- 22,1 - 77,9 55,8 18,7-81,3 62,6

Хлористый метилен TEA 13,1-86,9 73,8 19,7-80,3 60,6

NMM Py 18,2-81,8 22,6-77,4 63,6 54,8 19,4-80,6 19,7 - 80,3 61,2 60,6

DMAP 11,2-88,8 77,6 32,7 - 67,3 34,6

- 27,0 - 73,0 46,0 24,5 - 75,5 51,0

TEA - - 27,0-73,0 46,0

Ацетонитрил NMM Py 24,9 - 75,1 25,0-75,0 50,2 50.0 26,4 - 73,6 33,2 - 66,8 47,2 33,6

DMAP 14,9-85,1 70,2 25,4 - 74,6 49,2

* По данным ВЭЖХ.

5.1.1.3. Влияние температуры на процесс кинетического разделения 2-метнл-1,2,3,4-тетрагидрохинолина с помощью хлорангидрида (5)-напроксена

На примере ацилирования рацемического 2-метил-1,2,3,4-тетрагидро-хинолина (67) хлорангидридом (5)-напроксена изучено влияние температуры на диастереоселективность в процессе КР. Реакцию проводили при мольном соотношении амин - хлорангидрид 2:1 в толуоле при соответствующей температуре в отсутствии вспомогательного основания. Начальная концентрация рацемического амина 67 составляла 0,1 моль/л.

В толуоле, как и во всех других изученных растворителях с хлорангидридом (5)-напроксена быстрее реагирует (5)-энантиомер амина 67, и в образующемся амиде преобладает (5,,5>диастереомер 71а, а непрореагировавший амин

обогащен (Я)-энантиомером.

Диастереомерный избыток (de, %) образующегося (S, S> амида 71а определяли методом ВЭЖХ на силикагеле (Lichrosorb Si-60). После соответствующей обработки и выделения, методом ВЭЖХ на хиральной фазе (Chiralcel-OD-H), определяли энантиомерный избыток (ее, %) непрореаги-ровавшего амина (R)-67. Это позволило рассчитать значения конверсии (С, %):

С ----х 100%. и фактора стереоселективности (s):

еет-<ыш1 + "e(S.S)-aMiud

ks lnig-cxi-ggtf,^,)]

S~T~- 777;—-rr, характеризующих эффективность процесса KP

*к шЦ! - С д1 + )\

(табл. 5.3).

Таблица 5.3. Влияние температуры на диастереоселективность ацилирования рацемического амина 67 хлорангидридом 14

Условия ацилирования Диастереоселективность Конверсия, С, % Фактор селективности, s

Растворитель Т,°С Время реакции, ч (ЗД-71а, de, % (Д)-67, ее, %

бензол +20 24 85,6 79,9 48 31

толуол +20 24 86,8 79,6 48 35

толуол 0 6 90,4 73,5 45 45

толуол -20 24 91,4 70,9 44 47

толуол -40 24 93,7 69,5 43 64

Как видно из приведенных в табл. 5.3 данных, диастереоселективность ацилирования рацемического амина 67 хлорангидридом 14 несколько повышается при проведении реакции в толуоле по сравнению с бензолом при +20 °С (фактор селективности $ = 35 и 31, соответственно) при сохранении высокой степени превра-щения исходного рацемического амина (С 48%). При проведении ацилирования при низких температурах в толуоле диастереоселективность увеличивается значительно: до 93,7% при -40 °С (фактор селективности 5 = 64), однако при этом происходит уменьшение энантиомерного избытка непрореагировавшего амина [(/?)-94, ее 69,5%] и снижение конверсии исходного амина (до 43%). Это, очевидно, связано со снижением скоростей реакции обоих энантиомеров рацемического амина.

5.1.1.4. Препаративное кинетическое разделение рацемических гетероциклических аминов под действием хлорангидрида (З)-напроксена

Нами показано, что наиболее удобными в препаративном отношении условиями процесса КР являются - проведение реакции ацилирования в бензоле (толуоле) в отсутствии третичного основания при мольном соотношении амин: хлорангидрид 2:1 при комнатной температуре. В этом случае гетероциклический амин, находящийся в избытке по отношению к хлорангидриду, может катализировать процесс ацилирования. В результате с высокими выходами были получены смеси диастереомеров 69-72а-Ь, значительно обогащенные (5,5)-диастереомерами 69-72а. Не вступившие в реакцию (Я)-энантиомеры аминов 65-68 могут быть выделены после обработки реакционной массы с соответствующим энантиомерным избытком. Индивидуальные (Б, 5)-диастереомеры 69-72а высокой диастереомерной

чистоты (йе >99%) были получены в результате перекристаллизации из гексана (гексана-этилацетата) с высокими выходами (около 75%).

„ОМе

X-L Me

X-65-68

бензол, 20 "С

Me 14

ft f^

R LA JUk

i x— Me Me .„

Me

перекристаллизация

S.S

a de 87% 70ade81% 71а de 78% 72а de 76%

"XX

Г"

Me

(Я)-65 (Я)-66 (Я)-67 (Я)-68

69а de > 99% 70а de > 99% 71а de > 99% 72а de > 99%

HCI

АсОН, Д

■ДХ

(S)-65 ее > 99% (S)-66 ее > 99% I | (S)-67 ее >99% * >м (S)-68 ее > 99%

Синтез (5}-энантиомеров гетероциклических аминов 65-68 высокой оптической чистоты (ее >99%) и с высокими выходами (85-90%) проводили путем кислотного гидролиза (кипячение в смеси конц. HCI и лед. АсОН (1:1) в течение 10-15 ч) индивидуальных диастереомеров соответствующих (5,5)-амидов. Таким способом был впервые получен (5)-энантиомер 2-метил-индолина (68).

Для повышения эффективности разработанного метода нами предложен способ утилизации фракций, содержащих (Л)-энантиомер амина 65, заключающийся в рацемизации под действием серной кислоты в атмосфере аргона. Таким способом выход (5)-дифторбензоксазина 65 (ее около 99,5%), ключевого интермедиата в синтезе левофлоксацина, удалось довести до 60 %.

5.1.1.5. Теоретическое исследование взаимодействия (±)-2гЗ-дигидро-Э-метил-4//-1,4-бензоксазина с хлорангндридом (Х)-напроксена

С целью изучения стереоэлектронных взаимодействий энантиомеров хиральных гетероциклических аминов с оптически активным расщепляющим агентом проведено теоретическое исследование этих процессов с использованием комплекса квантово-химических методов .

Поскольку взаимодействие обоих стереоизомеров амина 66 с третичным основанием и растворителем протекает по одной схеме, диастерео- • селективность ацилирования, зависящая как от вспомогательного основания, так и от растворителя, может определяться на стадии образования комплекса «реагент-субстрат» либо зависеть от различий в энергиях диастереомерных продуктов реакции.

Моделирование геометрии комплексов «реагент-субстрат» выполнено аЪ initio методами DFT B3LYP/6-31G* в рамках программы Gaussian-98. Квантовые расчеты показали, что ароматические системы амина 66 и

* Эта часть работы выполнена совместно с кафедрой органической и неорганической химии Челябинского государственного университета под руководством к.х.н. В.А. Потемкина.

хлорангидрида 14 находятся в параллельных плоскостях в комплексе, ведущем к (5,5)-амиду 70а. Такое конформационное состояние не может реализоваться для молекулы (й,5)-диастереомера 70Ь вследствие стерических затруднений, вызываемых метальной группой в 3-положении бензоксазинового фрагмента. По данным расчетов полная энергия диастереомеров 70а и 70Ь различается на 0,3 кДж/моль. Очевидно, что столь малое различие в энергиях не может объяснить преимущественное образование (5,5)-амида и зависимость диастереоселективности от используемого растворителя и катализатора.

Моделирование геометрии комплексов «субстрат - реагент», выполненное в рамках генетического алгоритма Mech для поиска ассоциатов в силовом поле ММЗ с вероятностным учетом влияния среды в рамках модели MERA, показало, что структуры комплексов хлорангидрида (5)-напроксена с (/?)- и (5)-изомерами амина 66 не эквивалентны. Для геометрии комплекса (5)-стереоизомера с хлорангидридом 14 характерно близкое расположение атома водорода NH-ipynnbi бензоксазина и карбонильного кислорода хлорангидрида с образованием водородной связи, межъядерное расстояние между этими атомами составляет 2,35 А. Кроме того, ароматические системы обеих молекул находятся в параллельных плоскостях, что способствует их л-л взаимодейств ию.

Очевидно, что комплекс (Д)-изомера, образованный при л-л-электронном взаимодействии ароматических систем и С1'"Н взаимодействии, менее стабилен, чем комплекс (5)-изомера, который включает C-O 'H-N водородную связь. Действительно, ab initio DFT B3LYP/6-31G* расчеты показали, что суммарный заряд молекулы (Я)-изомера в комплексе с хлорангидридом (5)-напроксена составляет -0,0052, в то время, как для молекулы (5)-изомера он существенно ниже (-0,0138). Полная энергия комплекса хлорангидрида (5)-напроксена с (5)-изомером на 6,1 кДж/моль меньше энергии комплекса с (/?)-изомером. Эта разность демонстрирует большую вероятность реакции с (5)-формой субстрата и согласуется с данными о преимущественном выходе (5,5)-продукта 70а.

5.1.2. Сравнительное изучение различных методов конденсации гетероциклических аминов и (5)-напроксена в условиях кинетического разделения

На примере взаимодействия (±)-2-метил-1,2,3,4-тетрагидрохинолина (67) с (5)-напроксеном проведено сравнительное изучение результатов КР при использовании различных методов конденсации: хлорангидридного, смешанных ангидридов (А) и карбодиимидного (В). Мы полагали, что структура ацилирующего агента может повлиять на диастереоселекгивность процесса КР.

Методом ВЭЖХ определен диастереомерный состав образующихся амидов. Показано, что при конденсации амина 67 с (5)-напроксеном всеми изученными методами происходит преимущественное образование (5,5)-амида 71а. Наибольший выход и диастереоселекгивность процесса кинетического разделения наблюдается при конденсации амина 67 с (5)-напроксеном хлорангидридным методом (de 78,6%; выход 82%). Высокая стереоселективность наблюдалась также при конденсации амина 67 со смешанным ангидридом (5)-напроксена, однако смесь диастереомеров 71а-Ь была получена с более низким выходом (55 %).

ОМе

ЕЮ'

ОМе

(5,5)-71а de 75,1 выход 55%

(S,5)-71a de 47,0 выход 43%

Таким образом, КР рацемического амина 67 с использованием других методов конденсации уступает хлорангидридному как по выходам, так и по стереоселективности.

5.13. Кинетическое разделение гетероциклических аминов под

действием хлорангидрида (5)-1,2гЗ,4-тстрагидро-1-нафтойной кислоты

Изучена возможность использования в качестве расщепляющего агента хлорангидрида (5)-1,2,3,4-тетрагидро-1-нафтойной кислоты (73), конформа-ционно жесткого аналога хлорангидрида 14. Представляло интерес, каким образом дополнительные пространственные препятствия, обусловленные конформационной жесткостью молекулы соединения 73, повлияют на стереоселективность процесса.

Ввиду малой доступности энантиомерно чистой (5)-1,2,3,4-тетрагидро-1-нафтойной кислоты изучение диастереоселекгивности процесса кинетического разделения проведено с использованием хлорангидрида рацемической 1,2,3,4-тетрагидро-1-нафтойной кислоты, дающего в реакциях с аминами две пары диастереомеров - (5,5)/(й,й) и (5, /?)/(/?, 5).

беюол

COCI 73

NH

66, 67

66, 74: Х= -О

67, 75: Х= -СН,

74с, 75с 74с1,75а

В результате ацшшрования аминов 66 (67) хлорангидридом 73 в стехио-метрических количествах в присутствии пиридина образуются смеси диастереомеров 74а-Ь (74с-<1) и 75а-Ь (75с-<1), состав и строение которых были определены методами ВЭЖХ и 'Н ЯМР спектроскопии. Для отнесения

стереоконфигурации амидов 1,2,3,4-тетрашдро-1-нафтойной кислоты был осуществлен встречный синтез (5,5)-амидов 74а (75а) из индивидуальных (5)-энантиомеров аминов 66 (67) и хлорангидрида (5)-кислоты, что позволило идентифицировать диастереомеры методом ВЭЖХ.

При ацилировании рацемических аминов 66, 67 хлорангидридом 73 в бензоле при мольном соотношении реагентов 2:1 в присутствии третичных оснований или без них получали смеси диастереомеров 74 а,с - 74 Ь,б (75 а,с -75 М) (табл. 5.4).

Таблица 5.4. Соотношения диастереомеров и выходы амидов 1,2,3,4-тетрагвдро- 1-нафтойной кислоты

Гетероциклические амины

Основание 2,3-Дигидро-3-метил-4#-1,4- бензоксазин (66) 2-Метил-1,2,3,4-тетрагидрохинолин (67)

Соотношение амидов 74b(d)-74a(c) в смеси, R,S(S,R)-S,S(R,R) Выход смеси 74a-d, % Соотношение амидов 75b(d)-75a(c) в смеси, R,S (S,R) - S,S (R.R) Выход смеси 75a-d,%

- 32-68 72 31-69 69

TEA 32-68 69 32-68 59

DPEA 31-69 69 35-65 62

DMAP 70-30 35 57-43 40

При проведении реакции в отсутствии вспомогательного основания или при использовании в качестве катализаторов алифатических аминов: TEA и DPEA, смесь диастереомеров была обогащена (S,£)/(/?,К)-амидами (74а,с; 75а,с), причем диастереоселективность ацилирования практически не зависела от использованного основания. Интересно отметить, что использование DMAP приводило к обращению диастереоселективности и получению смеси диастереомеров, обогащенной (Л,5)/(5,Л)-амидами (74b,d; 75b,d). По-видимому, в случае использования алифатических аминов - TEA и DPEA с низкой нуклеофильностью реакция ацилирования протекает по общеосновному механизму. А в случае использования DMAP, образующего устойчивую ААС, механизм ацилирования меняется.

Диастереоселективность в случае хлорангидрида 73 оказалась существенно ниже, чем при использовании хлорангидрида (5)-напроксена. По-видимому, дополнительная жесткость молекулы разделяющего агента уменьшает разницу в энергиях активации при образовании стереоизомерных амидов, что ведет к выравниванию скоростей реакции хлорангидрида 73 с R- и S-энантиомерами аминов.

Таким образом, хлорангидрид (£)-1,2,3,4-тетрагидро-1 -нафтойной кислоты (73) является менее удобным в препаративном отношении разделяющим агентом по сравнению с хлорангидрадом (5)-напроксена.

5.2. Кинетическое разделение гетероциклических рацемических аминов с помощью хлорангидридов N-защищенных аминокислот Нами была изучена возможность использования хлорангидридов N-защшценных аминокислот: И-тозил-^-пролина, Н-тозил-(5)-5-оксопролина, (25,45)-Н-фенил-4-тозиламино-5-оксопролина и И-фталоил-О^-аланина в качестве хиральных агентов для разделения рацемических гетероциклических

аминов 67-69. Ранее в процессах KP указанные хлорангидриды не использовались.

5.2.1. Кинетическое разделение гетероциклических рацемических аминов под действием хлорангидрида ¡Ч-тозил-(5>)-пролина

Ацилирование аминов 67-69 хлорангидридом 1Ч-тозил-(5)-пролина (76) в стехиометрических количествах в бензоле в присутствии триэтиламина приводит к образованию смесей диастереомеров 77-79 а-Ь, состав и строение которых были подтверждены данными 'Й ЯМР спектроскопии.

Tos ff-^s, о Tos

r с

66-68

'!'Н ь \ 7 бензол, 20 °С Me 76

66, 77: Х= -ОСНг

67, 78: Х= -(СН2)2 68,79: Х= -СН2

Для изучения процессов кинетического разделения гетероциклических аминов под действием хлорангидрида 76 были разработаны методы анализа диастереомерных смесей амидов 77-79 а-Ь с помощью ВЭЖХ и 'Н ЯМР спектроскопии, проведено отнесение стереоконфигурации асимметрического центра во фрагменте амина. В результате экспериментального изучения выбраны наиболее удобные и эффективные условия проведения ВЭЖХ анализа диастереомерного состава образующихся амидов.

5.2.1.1. Влияние растворителей и вспомогательных оснований на

процесс кинетического разделения гетероциклических аминов хлорангидридом 1Ч-тозил-(5)-пролина

Методом ВЭЖХ изучено влияние растворителя на диастереоселек-тивность КР аминов 66 и 67 под действием хлорангидрида N-тозил-OS")-пролина. Реакцию проводили при мольном соотношении амин - хлорангидрид 2:1 в различных растворителях (бензоле, дихлорметане или ацетонитриле) при 20 °С в течение 24 ч в отсутствии основания.

Исследования показали, что во всех растворителях быстрее реагирует (R)-энантиомеры аминов, и в продуктах преобладают (/?,5)-диастереомеры (табл. 5.5). Наибольшая диастереоселективность наблюдалась при проведении реакции в бензоле, при переходе к более полярным растворителям -дихлорметану и ацетонитрилу, происходило снижение диастереоселективности, что наиболее выражено в случае амидов 78а-Ь. В отличие от КР под действием хлорангидрида (S)-напроксена в данном случае диастереоселективность процесса в большей степени зависела от структуры исходного рацемического амина.

При изучении влияния третичных оснований: TEA, NMM, DPEA, пиридина и DMAP, на процесс КР аминов 66 и 67 под действием хлорангидрида 76 (реакцию проводили при мольном соотношении гетероциклический амин-хлорангидрид-третичное основание 2:1:1 при 20 °С в течение 24 ч) показано, что диастереоселективность процесса КР зависит также и от третичного вспомогательного амина (табл. 5.5).

Диастереоселективность процесса КР амина 66 была существенно выше, чем при ацилировании амина 67. Это свидетельствует о том, что механизм ацилирования хиральных гетероциклических аминов хлорангидридами

оптически активных кислот является достаточно сложным. Таблица 5.5. Влияние растворителя и оснований на диастереоселективность ацилирования гетероциклических аминов 66 и 67 хлорангидридом №тозил-(5)-пролина (76) при комнатной температуре

Гетероциклические амины

Растворитель Основание 2,3-Дигидро-3-метил-4Н-1,4-бензоксазин (66) 2-Метил-1,2,3,4-тетрагидро-хинолин (67)

Соотношение амидов 77а-77Ь, 77 Ь, <1е,% Соотношение амидов 78а-78Ь, 78 Ь, (1е, %

- 9,9-90,1 80,2 17,1 - 82,9 65,8

ТЕА 8,7-91,3 82,6 10,0-90,0 80,0

Бензол ИММ 13,4-86,6 73,2 13,5 - 86,5 73,0

Ру 13,2-86,8 73,5 33,4-66,6 33,2

БМАР 42,9-57,1 14,2 53,7-46,3 (ЗД-78а 7,3

- 21,8-78,2 56,4 46,1 - 53,9 7,8

Хлористый метилен ТЕА ИММ Ру 15.5-84,5 19,0-81,0 25.6-74,4 69,0 62,0 48,8 36,2 - 63,8 49,3-50,7 27,6 1,4

ЭМАР 44,2-55,8 11,6 53,1-46,9 (ЗД-78а 6,2

- 28,5-71,5 43,0 47,8-52,2 4,3

ТЕА 27,3-72,7 45,4 - -

Ацетопитрил ИММ 38,1-61,9 23,8 45,7-54,3 8,6

Ру 39,2 - 60,8 21,6 65,3-34,7 (&5)-78а30,7

ОМАР Большое количество побочных продуктов 51,4-48,6 (ЗД-78а 2,8

В целом, результаты изучения различных факторов, влияющих на диастерео-селективность КР гетероциклических аминов хлорангидридом 14-тозил-(5)-пролина, свидетельствуют, что наиболее удобными в препаративном отношении условиями процесса являются - проведение ацилирования в растворе бензола без третичного основания. В этом случае гетероциклический амин, находящийся в избытке по отношению к хлорангидриду, выступает катализатором ацилирования.

5.2.1.2. Препаративное кинетическое разделение гетероциклических аминов под действием хлорангидрида 1Ч-тозил-(5)-пролина

-ТТ?М8 76 Т>Ме V

X-

66-68

2экв.

66,77: Х= -ОСН2 67,78: Х= -(СН2)2 68, 79: Х= -СН2

76

1 экв.

„о Мв

Я,5 77Ь бе 80% 78Ь бе 66% 79Ь бе 38%

ш (в)-66 (5)-67 (5)-68

перекристаллизация

77Ь бе >99%, выход 39% 78Ь бв >99%, выход 48% 79Ь бе >99%, выход 28%

НС1 АсОН, Д

№

Ме

(Я)-66 ее >97% (Я)-67 ее >97% (Я)-68 ее >97%

На основании найденных закономерностей был разработан метод получения энантиомеров гетероциклических аминов (й)-ряда. Ацилирование рацемических аминов 66-68 хлорангидридом 76 при мольном соотношении реагентов 2:1 в бензоле в отсутствии третичного амина приводило к преимущественному образованию (Я,5)-амидов 77-79 Ь.

Этим методом были получены смеси диастереомеров 77-79 а-Ь, значительно обогащенные (Л,5)-диастереомером 77Ь (78Ь, 79Ь), и непрореа-гировавший (S)-энантиомер аминов 66-68, который может быть вьаделен после обработки реакцион-ной массы с соответствующим энантиомерным избытком. Перекристаллизация амидов, обогащенных (/?,5)-диастереомером, из смеси гексан-этилацетат давала индивидуальные (/?,5)-диастереомеры 77-79Ь высокой степени оптической чистоты (<А? >99 %) с выходами 28-48 %.

Синтез (Л)-энантиомеров гетероциклических амипов 66-68, обладающих высокой оптической чистотой, проводили путем гидролиза индивидуальных (/г,5)-диастереомеров соответствующих амидов М-тозил-(5)-пролина. При проведении щелочного гвдролиза амидов №-тозил-(5)-пролина целевые (/?)-изомеры были получены с невысоким выходом. Кислотный гидролиз (R,S)-амидов 77b-79b проводили в условиях, аналогичных гидролизу (5,5)-амидов напроксена, в отличие от которых кислотный гидролиз (й,5)-амидов 77b-79b требует более длительного времени. Так, для достижения полного гидролиза амида 78Ь требуется кипячение в течение 40 ч. Такое длительное кипячение диастереомерно чистых (R,S)-амидов 77b-79b в кислых условиях приводит к некоторой рацемизации и частичной потере оптической чистоты (Ä)-изомеров аминов 66-68. Оптическая чистота полученных (/г)-изомеров аминов 66-68 бьша определена методом ВЭЖХ с предварительной дериватизацией хлорангидридом (5)-напроксена.

Несмотря на некоторую потерю оптической активности, гидролиз индивидуальных (7?,5> амидов Ы-тозил-(5)-пролина позволяет получать индивидуальные (/?)-энантиомеры аминов с достаточно высокой степенью оптической чистоты.

5.2.2. Кинетическое разделение рацемических гетероциклических

аминов под действием хлорангидридов производных №тозил-(5)-пролина

Tos

r^fKcc "V

Tos N-Tos-GlpCI N-Ph-(4-N-Tos)-GlpCI

80

8t

Изучена возможность использования хлорангидридов N-to3wi-(S)-5-оксопролина (80) и (25,45)-М-фенил4-тозиламино-5-оксопролина (81), структурных аналогов хлорангидрида 76, в качестве расщепляющих хиральных агентов при KP рацемического 2-метил-1,2,3,4-тетрагвдрохинолина (67). Хлорангидрид 81 получен из (5)-глутаминовой кислоты и, в отличие от хлорангидридов 76 и 80, имеет второй хиральный центр. Мы полагали, что наличие оксогруппы в 5-ом положении пролинового цикла в случае хлорангидрида 80 может оказать существенное влияние на стереоседективность процесса, а пространственные затруднения, накладываемые дополнительными

объемными группами в i/wc-положении относительно COCI группы, в случае хлорангидрида 81 позволят повысить эффективность кинетического разделения.

Ацилирование рацемического амина 67 хлорангидрндами 80 и 81

проводили при мольном растворителе при 20 °С.

ЧИе 2экв. 67

X-CI

80 81 s0^6^ rt

1 экв.

соотношении реагентов 2:1 в соответствующем

80, 82: X = N-Tos-Glp

81,83: Х= N-Ph-(4-N-Tos)-Glp

82b, S3b

Диастереомерный состав образующихся амидов в реакционной смеси определяли методом ВЭЖХ и 'Н ЯМР спектроскопии. Отнесение конфигурации в диастереомерных амидах 82-83а-Ь сделано при сравнении с амидами, полученными из (5)-энантиомера амина 67.

В результате ацилирования рацемата 67 хлорангидрндами 80 и 81 в бензоле были получены смеси диастереомеров 82 а-Ь и 83 а-Ь, обогащенные (/?,5)-диастереомерами 82Ь и 83Ь, и непрореагировавший (5)-энантиомер амина 67. При ацилировании рацемического амина 67 хлорангидрндами 80 и 81 диастерео-селективность процесса была существенно ниже (¿е 29% и 31%, соответственно), чем при использовании хлорангидрида 76. Перекристаллизация смеси диастереомеров 82 а-Ь не привела к получению индивидуальных изомеров.

Таким образом, КР рацемического амина под действием производных пролина существенно зависит как от структуры разделяющего агента, так и от условий реакции; а КР рацемического амина 67 под действием производных 5-оксопролина (хлорангидриды 80 и 81) протекает менее селективно по сравнению с хлорангидридом М-тозил-(5)-пролина (76).

5.2.3. Кинетическое разделение рацемических гетероциклических аминов под действием хлорангидрида Г^-фталоил-(5)-аланина

+

ме о

s,s 85а, de 40% 86а, de 53%

перекристаллизация

66,85: X = -О-67,86: X = -СН2-

85а, de 100% 86а, ote 100%

66, ее 100% (S)-67, ее 100%

Изучена возможность использования хлорангидрида №фталоил-(5)-аланина (84) в качестве разделяющего агента для рацемических аминов 66 и 67. Ацилирование проводили при соотношении реагентов 2:1 в бензоле при комнатной температуре. Образующаяся смесь диастереомерных амидов была обогащена (5,5)-диастереомером 85 а (¿е 40%), 86 а (ке 53%). Следует подчеркнуть, что, несмотря на меньшую диастереоселективность по сравнению с кинетическим разделением с помощью хлорангидрида (5)-напроксена (¿е

около 80 %), даже однократная перекристаллизация амидов из смеси гексан-этилацетат позволила получить индивидуальные (£5)-диастереомеры 85 а и 86 а очень высокой диастереомерной чистоты (¿1е около 100 %). Отнесение (¿^-конфигурации амидов 85 а и 86 а было проведено следующим образом: из индивидуальных (£,5)-амидов 85 а и 86 а в результате кислотного гидролиза были получены (5)-изомеры аминов 66 и 67, затем была проведена их дериватизация хлорангидридом (5)-напроксена с последующим ВЭЖХ анализом полученных амидов.

Кислотный гидролиз (5,5)-амидов Ы-фталоил-(5)-аланина (85а, 86а) в условиях, аналогичных гидролизу амидов (£)-напроксена, приводит к получению (¿^-энантиомеров аминов 66 и 67 с выходом 95 %. Установлено, что кислотный гидролиз (¿„^-амидов №фталоил-(5)-аланина также протекает без рацемизации и позволяет получать индивидуальные (5)-энантиомеры гетероциклических аминов высокой оптической чистоты и с высокими выходами.

5.3. Кинетическое разделение 1-замещенных 1,2-дикарба-ллдао-додекаборанов

Введение заместителя в 3-е положение молекулы 1-замещенных 1,2-дикарба-клозо-додекаборанов приводит к тому, что они становятся хиральными. Так, 3-амино-1-К-1,2-дикарба-югозо-додекабораны могут существовать в виде двух энантиомеров.

Разработанный нами метод кинетического разделения аминов под действием хиральных ацилирующих агентов был применен к синтезу энантиомеров 1-замещенных 3-амино-1,2-дикарба-клозо-додекаборанов (114116).

5.3.1. Оптическое разделение 1-замещенных 1^2-дикярба-клозо-додекаборанов через диастереомерные амиды Ацилирование 3-аминокарборанов 87-89 хлорангидридами хиральных кислот 14, 76, 84 при стехиометрическом соотношении реагентов в бензоле в присутствии триэтиламина приводит к образованию смеси диастереомерных амидов 90-108а-Ь.

В результате экспериментального изучения выбраны оптимальные условия анализа диастереомерного состава образующихся амидов методом ВЭЖХ. Диастереомеры амидов 90-108 а и Ь можно различать в спектрах 'Н ЯМР по характерным сигналам как кислотного, так и аминокарборанового фрагмента.

Смеси диастереомерных амидов 90а-Ь, 91а-Ь, 93-97а-Ь были разделены колоночной или флеш-хроматографией, в результате получены индивидуальные диастереомеры достаточно высокой стерео чистоты (йе от 85 до

100%). Фракционная кристаллизация смеси амидов 98 а-Ь дала индивидуальный диастереомер 98 Ь (/1е 100%). Амиды 92 а-Ь не удалось разделить ни колоночной хроматографией, ни фракционной кристаллизацией.

Отнесение конфигурации во фрагменте 3-аминокарборана в амидах 90а, 93Ь, 94а, 94Ь, 97Ь и 98Ь было сделано на основании данных РСА, исходя из известной конфигурации ацильного фрагмента (см., например, рис. 5.4).

Р

94а 94Ь

Рисунок 5.4. Строение соединений (5,5)-94а и (Й,£)-94Ь по данным РСА. 5.3.2. Ацилирование 1-замещенных 1,2-дикарба-кгсоз0-додекаборанов хлорангидридами хиральных кислот в условиях кинетического разделения

й

87, 90, 93, 96: И = Ме

88, 91, 94, 97: Р =

89, 92, 95, 98: Я = /-Рг

76, 93-95

84, 96-98

14,90-92

Реакцию ацилирования проводили при соотношении реагентов 2:1 при комнатной температуре. Диастереоселективность процесса оценивали методом ВЭЖХ и *Н ЯМР спектроскопии (табл. 5.6).

Таблица 5.6. Диастереоселективность ацилирования 3-аминокарборанов 87-89 хлорангидридами 14,76 и 84 в бензоле при комнатной температуре

З-Аминокарборан

Соотношение (5,5)- и (й,5)-диастереомеров в амидах 90-98 а-Ь

Хлорангидрид 14 Хлорангидрид 76 Хлорангидрид 84

87 (Я = Ме) 90а-90Ь 56:44 93а-93Ь 64:36 96а-96Ь 35:65

88(К = РЬ) 91а-91Ь 58:42 94а-94Ь 68:32 97а-97Ь 31:69

89(11 = ¿-Рг) 92а-92Ь 45:55 95а-95Ь 39:61 98а-98Ь 32:68

Наибольшую стереоселективность наблюдали при ацшшровании 3-амино-карборанов 87-89 хлорангидридами ¡Ч-защтценных аминокислот 76 и 84. Ацилирование 1-метил- и 1-фенил-З-аминокарборанов 87 и 88 хлорангид-ридом К-тозил (5>пролина (76) приводило к образованию диастереомерных смесей, обогащенных (5,5)-амидом 93а и 94а (при этом непрореагировавший аминокарборан обогащен (й)-энантиомером). При использовании хлорангид-

рида М-фталоил-(5)-аланина (84) происходило преимущественное образование (Й,5)-амидов 96Ь и 97Ь (непрореагировавший аминокарборан обогащен (5)-энантиомером). Ацилирование 1-изопропил-З-аминокарборана 89 всеми изученными хлорангидридами в условиях КР приводило к обогащению реакционной массы (/?,5)-диастереомером 92Ь (95Ь, 98Ь).

В случае амида 92а-Ь, для которого не удалось получить диастереомеры в оптически чистом виде, и диастереомеров амидов 91, 95 и 96, из которых не удалось вырастить монокристаллы для проведения РСА, отнесение конфигурации фрагментов 3-аминокарборанов в амидах бьшо сделано на основании данных ВЭЖХ. Для этого, не прореагировавшие в процессе КР, изомеры 3-аминокарборанов 87-89 выделяли после обработки реакционной массы, затем ацилировали хлорангидридами Ы-тозил-(5)-пролина (76) или 14-фталоил-(5)-аланина (84) при стехиометрическом соотношении реагентов в присутствии пиридина. Полученную смесь диастереомерных амидов анализировали методом ВЭЖХ на силикагеле. Нами также предложен метод определения энантиомерной чистоты 1-замещенных 3-амино-1,2-дикарба-тслозо-додекаборанов 87-89 методом ВЭЖХ на хиральных неподвижных фазах СЫга1се1 СЮ-Н и СЫга1рас АО, включающим предварительное фталошшрование 3-аминокарборанов.

С целью разработки аналитического метода определения энантиомерной чистоты получаемых 3-аминокарборанов 87 и 88 нами впервые систематически исследовано влияние хирального шифт-реагента (СБЯ) на химические сдвиги 'Н, 13С рацемических 3-амино-1,2-дикарба-гаозо-додекаборанов в спектрах ЯМР . Показана эффективность применения (+)-Еи(Ыс)3 (европий (III) трис[3-(гептафторпропил-гидроксиметилен)-(+)-камфорат]), коммерчески доступного и широко используемого СБЯ, для определения энантиомерной чистоты и найдены оптимальные условия с точки зрения максимальной дифференциации сигналов и минимального уширения линии ЯМР.

5.33. Изучение влияния растворителей и вспомогательных оснований на процесс кинетического разделения 3-амино-1-метил-1,2-дикарба-Алозо-додекаборана

Таблица 5.7. Влияние растворителя на диастереоселективность ацшшрования 3-аминокарборана 87

Хлорангидрид Соотношение диастереомеров (Я,Я - Я,5)

бензол СН,С12 CHзCN

(УЬнапроксена 14 К-т«зил-(5)-пролина 76 К-фгалоил-(5)-аланина 84 90а-90Ь 55,2-44,8 93а-93Ь 64,0-36,0 96а-96Ь 33,8-66,2 90а-90Ь 56,5-43,5 93а-93Ь 56,3-43,7 96а-96Ь 33,4-66,6 90а-90Ь 50,5-49,5 93а-93Ь 56,8-43,2 96а-96Ь 46,7-53,3

Методом ВЭЖХ изучено влияние растворителя на диастереоселективность КР рацемического 3-амино-1-метил-1,2-дикарба-к«озо-додекаборана (87) под действием хлорангидридов оптически активных кислот: (5)-напроксена (14), К-тозил-(5)-пролина (76) и Ы-фталоил-(5)-аланина (84). Реакцию проводили при мольном соотношении амин - хлорангидрид 2:1 в различных растворителях (бензоле, дихлорметане или ацетонигриле) при 20 °С в течение 24 ч.

* Исследование проведено совместно с с.н.с., к.х.н. Кодессом М.И.

В отличие от процесса КР гетероциклических аминов 65-68 с помощью хлорангидридов 14, 76, 84, когда наибольшая диастереоселективность наблюдалась при проведении ацилирования в бензоле, а уменьшение селективности происходило при переходе к более полярным растворителям (дихлорметану и ацетонитрилу), в случае КР 3-аминокарборана 87 диастереоселективность ацилирования в большей степени зависела от структуры разделяющего агента, чем от природы растворителя (табл. 5.7).

С целью изучения влияния вспомогательного основания на диастереоселективность КР ацилирование амина 114 хлорангидридами 40, 103, 111 проводили в присутствии различных по строению и нуклеофильности третичных аминов при мольном соотношении реагентов, равном 2:1:1, в бензоле при 20 °С в течение 24 ч (табл. 5.8).

В целом, в присутствии третичного амина процесс КР 3-аминокарборана 87 существенно усложняется. Можно сделать вывод, что в этих процессах в той или иной мере принимают участие молекулы как вспомогательного основания, так и энантиомеров амина 87. Сильная зависимость диастереоселективности ацилирования от условий обусловлена, вероятно, возможностью реализации нескольких механизмов ацилирования (как при прямом замещении, так и при взаимодействии с ААС), каждый из которых отличается собственной стереоселективностью.

Таблица 5.8. Влияние вспомогательного основания на диастереоселективность ацилирования 3-аминокарборана 87 в бензоле

Соотношение диастереомеров (S,S-R,S)

Хлорангидрид без основания TEA NMM Ру DMAP

(5)-напроксена 14 1Ч-тозил-(£)-пролина 76 М-фталоил-(5)-аланина 84 55,2-44,8 64,0 - 36,0 33,8-66,2 58.6-41,4 58,4-41,6 56.7-43,3 60,0-40,0 39,2-60,8 53,7-46,3 39,7 - 60,3 37,8-62,2 58,8-41,2 36,3 -63,7 39,3-60,7 56,6-43,4

Проведенные исследования позволяют считать, что эффективность КР соединения 87 может быть несколько повышена по сравнению с таковой в ранее найденных условиях за счет использования NMM, Ру или DMAP в случае ацилирования хлорангидридом (5)-напроксена 14 в бензоле. Оптимальные условия КР рацемического амина 87 хлорангидридами ДГ-тозил-(5}-пролина 76 и М-фталоил-(5)-аланина 84 - проведение процесса в бензоле без вспомогательного третичного амина.

5.3.4. Кислотный гидролиз амидов 1-замещённых-З-аминокарборанов

Me ]s

90а, 93а (5)-87

С целью получения энантиомеров 3-аминокарборанов проведен кислотный гидролиз их амидов в смеси ледяной уксусной и концентрированной соляной кислот при кипячении в течение 10-14 ч. Несмотря на то, что энангиомеры З-амино-1-метилкарборана 87, полученные в результате кислотного гидролиза амидов 90а, 90Ь и 93а с выходами от 63 до 77%, частично рацемизовались (табл. 5.9), это первый случай получения

энантиомеров гшанарно-хиральных 3-аминокарборанов. Оптическую чистоту карборана 87 определяли методами ВЭЖХ и 'Н ЯМР спектроскопии с предварительной дериватизацией хлорангидридом (£)-напроксена или Ы-тозил-(5)-пролина.

Таблица 5.9. Оптическая чистота энантиомеров 1-метил-З-аминокарборана 87, полученных в результате кислотного гидролиза амидов

Исходный амид (de, %) Амин Оптическая чистота амина (ее), %

90а (98,0) (5>87 83,0

90Ь (93,7) (R)-87 77,5

93а (92,0) (5)- 87 46,0

Следует отметить, что степень рацемизации карборана 87, образующегося в результате гидролиза амида №тозил-(5)-пролина 93а, была существенно выше, чем в случае гидролиза в тех же условиях обоих амидов (£)-напроксена 90а и 90Ь. В то же время, кислотный гидролиз индивидуальных диастереомеров такого же рода N-ацильных производных гетероциклических аминов проходил без рацемизации.

До наших исследований явление рацемизации в ряду 3-аминокарборанов не было описано в литературе. Поскольку механизмы рацемизации 3-амино-карборана 87 в кислой среде не являются очевидными, мы провели специальные исследования этого процесса. Было показано, что индивидуальные энантиомеры З-амино-1-метилкарборана 87 при нагревании в смеси уксусной и соляной кислот не рацемизуются, и в процессе кислотного гидролиза оптическая чистота исходного амида не меняется. Поэтому можно предположить, что рацемизация целевого амина происходит одновременно с разрывом амвдной связи. На данном этапе исследований можно сделать вывод, что на процесс рацемизации влияет, в первую очередь, природа ацильного заместителя у атома азота 3-аминокарборана (фрагмент напроксена или тозилпролина). Однако механизм рацемизации в таких планарно-хиральных структурах требует дальнейшего изучения.

В аналогичных условиях был проведен гидролиз амидов З-амино-1-фенил-1,2-дикарба-/отозе>-додекаборана. При кипячении амидов 94а-Ь, 97а в смеси кислот одновременно с разрывом амидной связи происходила деструкция карборанового ядра, заключающаяся в удалении атома бора из 6-го положения и образовании цвиттер-иона 99 (3-аммоний-7-фенил-7,8-дикарба-ни()о-ундекабората) с выходом 74%. Строение соединения 99 установлено на основании данных 'Н и ПВ ЯМР спектроскопии, включая 2D llB-nB COSY, гН-'H{UB} COSY^ и 'H-llB НМОС эксперименты. При проведении модельных экспериментов* методом 'Н и 'В ЯМР спектроскопии было установлено, что при кипячении аминокарборана 88 в смеси CD3COOD и DC1 в течение 20-25 ч происходит деборирование с образованием соединения 99. Для З-амино-1-метилкарборана 87 деструкция такого рода не наблюдалась ни в случае кислотного гидролиза его амидов, ни при нагревании рацемического карборана, что позволяет говорить о специфическом влиянии фенильного заместителя в 1-ом положении карборанового ядра на процесс деборирования.

Исследование проведено совместно с н.с. Ежиковой М.А.

94: Х=

94,97

97: X =

Т

Ме

При проведении кислотного гидролиза амидов 3-амино-1-изопропил-1,2-дикарба-кяозо-додекаборана (например, (Л,5)-амида 98Ь (<1е 100%)) в аналогичных условиях наблюдалась не только практически полная рацемизация целевого 3-аминокарборана 89, но и деборирование с образованием цвитгер-иона 100 (по данным *Н и ПВ ЯМР спектроскопии).

хнм

■•А

ЫРМИ Ме

(Я,£0-98Ь (с/в 100%) (т9 (ее 4%)

Если в случае амидов З-амино-1-фенилкарборана кислотный гидролиз приводил к образованию цвштер-иона 99 с выходом 74%, то в случае кислотного гидролиза амида 98Ь образование цвитгер-иона 100 происходило с выходом от 7 до 30% в зависимости от продолжительности и температуры гидролиза

Следует отметить, что при нагревании рацемического 3-аминокарборана 89 в смеси уксусной и соляной кислот мы не наблюдали деструкции карборанового ядра. По-видимому, деборирование и рацемизация целевого 3-аминокарборана 89 во время гидролиза его амида происходит одновременно с разрывом амидной связи.

Таким образом, степень деструкции и рацемизации амидов 1-замещенных 3-аминокарборанов существенным образом зависит как от структуры ацильного фрагмента, так и от строения заместителя в 1-ом положении карборанового ядра.

Однако, несмотря на трудности, возникшие при выделении энантиомеров 1-замещенных 3-аминокарборанов из диастереомерных амидов хиральных кислот, нам впервые удалось получить индивидуальные энантиомеры 3-амино-1 -мстил- 1,2-дикарба-к/гозо-додекаборапа.

В целом, разработанный нами подход позволяет получать энантиомеры аминов различных классов в результате КР рацематов под действием производных природных аминокислот и других хиральных кислот.

ВЫВОДЫ

1. Показано, что присоединение М-(2-хлорэтил)- или 1Ч-метил-нитрозо-карбамоильного фрагмента в №-положение природных диаминокарбо-новых кислот приводит к получению соединений, обладающих высокой противоопухолевой активностью и меньшей токсичностью по сравнению с известными препаратами класса алкилнитрозомочевин.

2. Разработан способ синтеза смеси изомеров положения нитрозогруппы -Н8-шггрозо-ЬГ-[(2-хлорэтил)карбамоил]-Ь-лизина и ММО-хлорэтил)-!*-нитрозокарбамоил]-Ь-лизина, на основе которого составлены технологические регламенты получения субстанции противоопухолевого препарата ЛИЗОМУСТИН. Предложены методы контроля качества субстанции лизомустина, которые легли в основу Фармакопейной статьи на субстанцию препарата. На основании проведенных клинических испытаний лизомустин разрешен в качестве средства для лечения меланомы и рака легкого. Лекарственная форма лизомустина зарегистрирована и внесена в Государственный реестр лекарственных средств.

3. Показано, что модификация известных нестероидных противовоспалительных препаратов (напроксена, ибупрофена и индометацина) природными аминокислотами является эффективным способом снижения их токсичности с сохранением противовоспалительной и анальгетической активности. Наиболее перспективным соединением является амид индометацина и метилового эфира (5)-метионина, который показал сочетание высокой противовоспалительной и анальгетической активности при низкой острой токсичности и гастротоксичности.

4. Впервые получены псевдопептиды 2-(3-амино-1,2-дикарба-оозо-додекаборан-2-ил)уксусной кислоты и природных аминокислот в качестве потенциальных агентов для бор-нейтронозахватной терапии опухолей; показана возможность выделения индивидуальных диастереомеров.

5. Впервые показано, что хлорангидриды оптически активных кислот являются эффективными разделяющими агентами для кинетического разделения рацематов гетероциклических аминов. Наибольшую эффективность в кинетическом разделении проявили хлорангидриды И-тозил-(5)-пролина и К-фталоил-(5)-аланина; и (5)-2-(6-метоксинафтил-2> пропионовой кислоты.

6. Впервые исследованы факторы, влияющие на диастереоселективность кинетического разделения рацематов гетероциклических аминов, и показано, что она зависит как от структуры разделяющих агентов и исходных аминов, так и от условий ацилирования. Варьируя структуру разделяющего агента можно избирательно получать смеси, обогащенные (Л)- или (Я)-изомером исходного амина. Впервые синтезированы энантиомеры 2-метилиндолина.

7. Разработан эффективный способ получения (5)-2,3-дигидро-7,8-дифтор-3-метил-4#-1,4- бензоксазина - ключевого интермедиата в синтезе левофлоксацина, современного антибактериального препарата.

8. Впервые получены стереоизомеры производных 1-замещенных З-амино-1,2-дикарба-етозо-додекаборанов. Разработаны методы анализа оптической чистоты их энантиомеров и диастереомеров с помощью 'Н ЯМР спектроскопии и ВЭЖХ.

9. Впервые изучено кинетическое разделение рацемических 1-замещённых 3-амино-1,2-дикарба-клозо-додекаборанов при ацилировании хлорангидри-дами оптически активных кислот. Наибольшая стереоселективность наблюдается при использовании хлорангидридов Ы-загцищеннмх аминокислот; а диастереоселективность процесса существенным образом

зависит как от структуры разделяющего агента и 3-аминокарборана, так и от природы растворителя и вспомогательного третичного основания.

10. Впервые обнаружены явления рацемизации и деструкции карборанового ядра 1-замещенных 3-амино-1,2-дикарба-клозо-додекаборанов в сильнокислой среде.

Основное содержание работы изложено в следующих публикациях:

Статьи

1. Левит Г.Л., Радина Л.Б., Краснов В.П. N-Алкилнитрозокарбамоил производные аминокислот. Синтез, свойства и противоопухолевая активность (Обзор) // Хим.-фарм. Ж. -1995. - Т. 29, № 8. - С. 5-18.

2. Левит Г.Л., Радина Л.Б., Краснов В.П., Гопко В.Ф., Перетолчина Н.М. N™-Алкилнитрозокарбамоил-а,(й-диаминокарбоновые кислоты. I. Синтез и противоопухолевая активность Ы^-метшшитрозокарбамоил- и №>-нитрозо-№'-циклогексил-карбамоил-а,и-диаминокарбоновых кислот // Хим.-фарм. Ж. - 1996. - Т. 30, № 2. -С. 7-10.

3. Левит ГЛ., Радина Л.Б., Краснов В.П., Гопко В.Ф., Перетолчина Н.М. Nffl-Алкилнитрозокарбамоил-а,<о-диаминокарбоновые кислоты. П. Синтез и противоопухолевая активность нитрозопроизводных Н^Чг-хлорэтилЭкарбамоил-а.оэ-диаминокарбоновых кислот// Хим.-фарм. Ж. - 1996. - Т. 30, № 4. - С. 15-17.

4. Левит Г.Л., Радина Л.Б., Краснов В.П., Гопко В.Ф., Никифорова Н.В., Перетолчина Н.М. ^-Алкшшитрозокарбамоил-а,са-диаминокарбоновые кислоты. Щ. Синтез и противоопухолевая активность №-нитрозо-Не-[№-(2-хлорэтш1)карбамоил]-Ь-лизина и №-[М'-(2-хлорэтил)-К'-китрозокарбамоил]-Ь-лизина И Хим.-фарм. Ж. -1996.-Т. 30,№5.-С. 23-25.

5. Левит Г.Л., Гришаков А.Н., Краснов В.П., Клочкова Т.И. ЬГ-Алкилнитрозо-карбамоил-а,ю-диамшюкарбоновые кислоты. IV. Изучение гидролитической устойчивости изомеров положения нитрозогруппы №Ч2-хлорэтил)карбамоил-а,о>-диаминокарбоновых кислот// Хим.-фарм. Ж. - 1996. - Т. 30, № И. - С. 19-20.

6. Левит Г.Л., Королева М.А., Краснов В.П. Синтез амидов 2-арилпропионовых кислот //Ж. Орган. Хим. - 1998. - Т. 34. - С. 378-382.

7. Charushin V.N., Krasnov V.P, Levit G.L., Korolyova MA., Kodess M.I., Chupakhin O.N., Kim M.H., Lee H.S., Paik Y.J., Kim K.-Ch. Kinetic resolution of (±)-2,3-dihydro-3-m.ethyl-4//-1,4-benzoxazines with (S>naproxen // Tetrahedron Asymmetry. - 1999. -V. 10 (14). - P. 2691-2702.

8. Гришаков A.H., Клочкова Т.И., Левит Г.Л., Краснов В.П., Радина Л.Б., Чупахин О.Н. Количественное определение содержания изомеров в субстанции и лекарственной форме препарата лизомустин методом ВЭЖХ // Аналитика и контроль. - 2001. - Т. 5, №2. - С. 143-145.

9. Краснов В.П., Авдюкова Н.В., Радина Л.Б., Левит Г.Л., Клочкова Т.И., Чупахин О.Н. Спектрофотометрическое определение содержания основного вещества в субстанции противоопухолевого препарата лизомустин // Аналитика и контроль. -2001. - Т. 5, №2. - С. 168-170.

10. Nizova I.A., Krasnov V.P., Levit G.L., Kodess M.I. Synthesis of (2S,4S)-4-phenylamino-5-oxoproline derivatives // Amino Acids. - 2002. - V. 22, № 2. - P.179-186.

11. Левит Г.Л., Аникина Л.В., Вихарев Ю.Б., Дёмин A.M., Сафин В,А., Матвеева Т.В., Краснов В.П. Синтез, противовоспалительная и анальгетическая активность

амидов напроксена с производными аминокислот // Хим.-фарм. Ж. - 2002.- Т. 36, № 5.-С. 12-15.

12. Аникина Л.В., Левит Г.Л., Дёмин А.М., Вихарев Ю.Б., Сафин В.А., Матвеева Т.В., Краснов В.П. Синтез, противовоспалительная и анальгетическая активность аминокислот, ацилированных ибупрофеном // Хим.-фарм. Ж. - 2002.- Т. 36, № 5. -С. 16-17.

13. Krasnov V.P., Levit G.L., Andreeva I.N., Grishakov A.I., Charushin V.N., Chupakhin O.N. Kinetic resolution of (±)-2-methyl-l,2,3,4-tetrahydroquinoline and (±)-2-methyl-indoline // Mendeleev Commun. - 2002. - V. 12 (1). - P. 27-28.

14. Krasnov V.P., Levit G.L., Charushin V.N., Grishakov A.N., Kodess M.I., Kalinin V.N., Ol'shevskaya V.A., Chupakhin O.N. Enantiomers of 3-amino-l-methyl-l,2-dicait>a-cfoio-dodecaboranes // Tetrahedron: Asymmetry. - 2002. - V. 13 (16). - P. 1833-1835.

15. Krasnov V.P., Levit G.L., Bukrina I.M., Demin A.M., Chupakhin O.N., li Uk Yoo Efficient large (ca. 40 g) laboratory scale preparation of (S)- and (fi)-valine iert-butyl esters // Tetrahedron: Asymmetry. - 2002. - V. 13 (17). - P. 1911-1914.

16. Krasnov V.P., Levit G.L., Bukrina I.M., Andreeva I.N., Sadretdinova L.Sh., Korolyova M.A., Kodess M.I., Charushin V.N., Chupakhin O.N. Kinetic resolution of (±)-2,3-dihydro-3-methyI-4#-l,4-benzoxazine, (±)-2-methyl-l,2,3,4-tetrahydroqumoline and (±)-2-methylindoline using iV-tosyl-(S)-prolyI chloride // Tetrahedron: Asymmetry. - 2003. -V. 14 (14). - P. 1985-1988.

17.Krasnov V.P., Levit G.L., Kodess M.I., Charushin V.N., Chupakhin O.N. W-Phthaloyl-(S>alanyl chloride as a chiral resolving agent for the kinetic resolution of heterocyclic amines // Tetrahedron: Asymmetry. - 2004. - V. 15 (5). - P. 859-862.

18. Potemkin V.A., Krasnov V.P., Levit G.L., Bartashevich E.V., Andreeva I.N., Kuzminsky M.B., Anikin N.A., Charushin V.N., Chupakhin O.N. Kinetic resolution of (±)-2,3-dihydro-3-methyl-4H-l,4-benzoxazine in the reaction with (S)-naproxen chloride: a theoretical study // Mendeleev Commun. - 2004. - V. 14 (2). - P.69-71.

19. Клочкова Т.И., Игнатьева E.B., Ярцева И.В., Кикоть Б.С., Романенко В,И., Куненкова Н.Ф., Краснов В.П., Матвеева Т.В., Левит Г.Л., Чупахин О.Н. Определение посторонних примесей в препарата лизомустин // Хим.-фарм. Ж. -2004.-Т. 38,№5.-С. 45-47.

20. Краснов В.П., Левит Г.Л., Королёва М.А., Букрина И.М., Садретдинова Л.Ш., Андреева И.Н., Чарушин В.Н., Чупахин О.Н. Кинетическое разделение гетероциклических аминов реакцией с хлорангидридами оптически активных кислот. Влияние условий реакции на диасгереоселективность ацилирования (±)-2,3-дигидро-3-метил-4Я-1,4-бензоксазина II Изв. АН, сер. хим. - 2004. - № 6. - С. 1203-1206.

21. Краснов В.П., Жданова Е.А., Солиева Н.З., Садретдинова Л.Ш., Букрина И.М., Дёмин A.M., Левит Г.Л., Ежикова М.А., Кодесс М.И. Изучение влияния природы боковой цепи эфиров а-аминокислот на диастереоселекгивность конденсации с 5(4Я)-оксазолоном в синтезе дипептидов с N-концевым Л'-ацетилфениладалином // Изв. АН, сер. хим. - 2004. - № 6. - С. 1278-1281.

22. Levit G.L., Krasnov V.P., Demin А.М., Kodess M.I., Sadretdinova L.Sh., Matveeva T.V., Ol'shevskaya V.A., Kalinin V.N., Chupakhin O.N., Charushin V.N. Kinetic resolution of 1-methyl- and l-phenyl-3-amino-l,2-dicarba-ctoio-dodecaboranes via acylation with chiral acyl chlorides II Mendeleev Commun. - 2004. - V. 14 (6). - P. 293295.

23. Levit G.L., Demin A.M., Kodess M.I., Ezhikova M.A., Sadretdinova L.Sh., Ol'shevskaya V.A., Kalinin V.N., Krasnov V.P., Charushin V.N. Acidic hydrolysis of N-acyl-1-substituted 3-amino-l,2-dicarba-c/ojo-dodecaboranes // J. Organometal. Chem. -2005. - V. 690 (11). - P. 2783-2786.

24. Kodess MX, Ezhikova M.A., Levit G.L., Krasnov V.P., Charushin V.N. NMR determination of enantiomeric composition of 1-substituted 3-amino-l,2-dicart>a-closo-dodecaboranes using Eu(hfc)31 I J. Organometal. Chem. - 2005. - V. 690 (11). - P. 27662768.

25. Ol'shevskaya V.A, Ayuob R., Brechko Zh.G., Petravskii P.V., Konotiova E.G., Levit

G.L., Krasnov V.P., Charushin V.N., Chupakhin O.N., Kalinin V.N. Synthesis of carborane analogues of y-aminobutanoic acid // J. Organometal. Chem. - 2005. - V. 690

(11).-P. 2761-2765.

26. Levit G.L., Krasnov V.P., Gruzdev D.A., Demin A.M., Bazhov I.V., Sadretdinova L.Sh., Ol'shevskaya V.A., Kalinin V.N., Cheong Ch.S., Chupakhin O.N., Charushin V.N. Synthesis of N-[(3-amino-l,2-dicarba-c/ojo-dodecaboran-l-yl)acetyl] derivatives of a-amino acids // Collection of Czechoslovak Chemical Communications. - 2007. - V. 72

(12).-P. 1697-1706.

27. Krasnov V.P., Nizova I.A., Vigorov A.Yu., Matveeva T.V., Levit G.L., Slepukhin P.A., Ezhikova M.A., Kodess M.I. Structure and Properties of 4-Amino Derivatives of 5-Oxoproline//Eur. J. Org. Chem. - 2008. - No. 10- P. 1802-1810.

28. Краснов В.П., Дёмин A.M., Левит Г.Л., Гришаков A.H., Садретдинова Л.Ш., Ольшевская В.А., Глухо в И.В., Калинин В.Н., Чарушин В.Н. Определение энантиомерной чистоты 1-замещенных 3-амино-1,2-дикарба-ююзо-додекаборанов методом ВЭЖХ на хиральных неподвижных фазах // Изв. АН, сер. хим. - 2008. - № 12.-С. 2484-2488.

Глава в монографии

29. Краснов В.П., Чупахин О.Н., Левит Г.Л., Радина Л.Б., Барышников А.Ю. Глава 5. Химические аспекты создания оригинального противоопухолевого препарата лизомустин // В кн. Экспериментальная онкология на рубеже веков. П/ред. М.И. Давыдова и А.Ю. Барышникова. - М., издательская группа РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, 2003. - 552 с. (с. 135-146)

Авторские свидетельства и патенты

30. Авторское свидетельство СССР № 1519177. №-Метил-^-нигрозопроизводные L-цитруллина и L-гомоцитруллина, проявляющие противоопухолевую активность / Радина Л.Б., Гопко В.Ф., Левит Г.Л., Софьина З.П., Перетолчина Н.М., Горелова Л. А., Аношина Г.М. - заявл. 23.04.84.

31. Авторское свидетельство СССР № 1785342. Способ определения содержания изомеров 9-(2-хлорэтил)-7-нитрозо-Ь-гомоцитруллина и 9-(2-хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллина в нитруллине / Радина Л.Б., Левит Г.Л. - заявл. 03.10.89.

32. Патент РФ № 1834006. МПК7 А 61 К 9/08, 31/17. Противоопухолевое средство / Перетолчина Н.М., Радина Л.Б., Горбачева Л.Б., Шишкина М.Я., Мкртчян Т.В., Соколова И.А., Краснова М.А., Софьина З.П., Белоусова А.К., Некрасова Е.Б., Сыркин А.Б., Шулепова Т.С., Сингин А.С., Беляев А.А., Краснов В.П., Левит Г.Л., Тарасов А.И., Ключанская Н.В., Переводчикова Н.И., Петухова И.Н., Зимахова

H.И. - № 4497231/14; заявл. 24.10.88; опубл. 27.10.96, Бюл. № 30. - 14 с.

33. Патент РФ № 1744946. МПК7 С 07 С 275/68, 273/18. Способ получения смеси изомеров 9-(2-хлорэтил)-7-нитрозо-Ь-гомоцитруллина и 9-(2-хлорэтил)-9-нитрозо-

L-гомоцитруллина / Радина Л.Б., Беляев А.А., Краснов В.П., Левит Г.Л., Тарасов А.И. - № 4744599/04; заявл. 03.10.89; опубл. 10.11.98. - 8 с.

34. Патент Японии JP 2000 178,265. МПК7 С 07 D 265/36. Preparation of (S)-benzoxazines and raceraization of (ft)-benzoxazines / Chupakhin O.N., Krasnov V.P., Levit G.L., Cham shin V.N., Korolyova M.A., Tzoi E.V., Lee H.S., Park Y.J., Kim M.N., Kim K.-Ch. - № ЛЧ 9980357910; заявл. 16.12.1998; опубл. 27.06.2000.

35. Патент Южной Кореи KR 2000 047396. МПК7 С 07 D 265/14. Method for preparing (S)-benzoxazinc derivative and a racemization method of (K)-benzoxazine derivative / Chupakhin O.N., Krasnov V.P., Levit G.L., Charushin V.N., Korolyova M.A., Tzoi E.V., Lee H.S., Park Y.J., Kim M.N., Kim K.-Ch. - № KR19990016338; заявл. 07.05.1999; опубл. 25.07.2000.

Тезисы докладов

36. Краснов В.П., Левит Г.Л., Радина Л.Б., Гопко В.Ф., Перетолчина Н.М. Синтез и противоопухолевая активность Н-(2-хлорэтил)нитрозомочевин на основе а,га-диаминокислот // Тезисы докладов П Российского национального конгресса "Человек и лекарство". - Москва, 1995. - С. 16.

37. Краснов В.П., Левит ПЛ., Гришаков А.Н., Клочкова Т.Н. Изучение гидролитической устойчивости Н-(2-хлорэтил)нитрозомочеиин на основе а,ш-диаминокислот // Тезисы докладов III Российского национального конгресса "Человек и лекарство". - Москва, 1996.- С.29.

38. Levit G.L., Korolyova М.А., Krasnov V.P. Synthesis of amides of nonsteroidal antiinflammatory drugs with potentially low gastrotoxicity // Int. Memorial I. Postovsky Conference on Organic Chemistry. - Ekaterinburg, 1998. - P. 91.

39. Краснов В.П., Левит Г.Л., Чупахин O.H. Синтез противоопухолевых соединений -нитрозоалкилмочевинных производных аминокислот // Тезисы докладов V Российского национального конгресса "Человек и лекарство". - Москва, 1998. - С. 579.

40. Левит Г.Л., Краснов В.П., Сафин В.А., Марданова Л.Г., Махмудов P.P. Синтез амидов нестероидных противоопухолевых препаратов с потенциально низкой ульцеротоксичностью // Тезисы докладов V Российского национального конгресса "Человек и лекарство". - Москва, 1998. - С. 579.

41. Krasnov V.P., Klochkova T.I., Levit G.L., Grishakov A.N. Aqueous decomposition of N-(2-chloroethyl)nitrosocarbomoyI diamino acids // Proceedings of 8th International Conference on Technology. - Paris, 1998. - P. 1247.

42. Krasnov V.P., Levit G.L., Andreyeva I. N.. Sadretdinova L.Sh., Charushin V. N., Chupakhin O. N. Kinetic resolution of (±)-2-methyf-l,2,3,4-tetrahydroqumolme with (5)-naproxen // Proceeding of the First Eurasian Meeting on Heterocyclic Chemistry. -Suzdal, 2000. -P. 39.

43. Марков B.M., Велик A.B., Потемкин B.A., Краснов В.П., Чарушин В.Н., Чупахин О.Н. Влияние диссимметрии сольватного окружения на диастереоселективность реакции II Тезисы докладов 1-й Всероссийской конференции по химии гетероциклов. - Суздаль, 2000. - С. 66.

44. Краснов В.П., Левит Г.Л., Садретдинова Л.Щ., Букрина И.М., Андреева И.Н., Чарушин В.Н., Чупахин О.Н. Влияние оснований на диастереоселективность ацилирования 1,4-бензоксазинов // Тезисы докладов научной конференции "Современные проблемы органической химии". - Новосибирск, 2001. - С. 127.

45. Левит Г.Л., Краснов В.П., Садретдинова Л.Ш., Букрина И.М., Андреева И.Н.,

Чарушин В.Н., Чупахии О.Н. Влияние растворителя на диастереоселекгивность ацилирования рацемических гетероциклических аминов // Тезисы докладов научной конференции "Современные проблемы органической химии". -Новосибирск, 2001. - С. 128.

46. Кодесс М.И., Левит ГЛ., Краснов B.IL Определение оптической чистоты и абсолютной конфигурации хиральных гетероциклических аминов методом ЯМР спектроскопии // Тезисы докладов XV Уральской конференции по спектроскопии. - Заречный, 2001. - С. 200.

47. Klochkova Т., Grishakov A., Levit G., Krasnov V., Romanenko V., Kunenkova N. High pressure liquid chromatography in Lysomustine pharmaceutical analysis and manufacture // Abstract Book "3-rd International Symposium on Pharmaceutical Chemistry". - Paris,

2001. - P.199-200.

48. Краснов В.П., Левит Г.Л., Радина Л.Б., Перетолчина Н.М., Чупахин О.Н. Синтез и противоопухолевая активность структурных аналогов лизомустина // Российский Биотерапевт. Ж. - 2002. - Т.1, № 2. - С.128. (Материалы Всероссийской научно-практической конференции "Отечественные противоопухолевые препараты")

49. Kodess M.L, Ezhikova М.А., Levit G.L., Krasnov V.P., Olshevskaya V.A., Kalinin V.N., Charushin V.N., Chupakhin O.N. Complete UB spectral assignment of chiral 1,2-dicarbo-ctoio-dodecaborane // IX International Conference on Boron Chemistry IMEBORON-2002. Programme and Abstracts. - Moscow, 2002. - P.l 13.

50. Krasnov V.P., Levit G.L., Charushin V.N., Grishakov A.N., Ol'shevskaya Y.A., Kalinin V.N., Chupakhin O.N. Enantiomers of 3-amino-l-methyl-l,2-dicarba-ctoio-dodeca-borane // IX International Conference on Boron Chemistry IMEBORON-2002. Programme and Abstracts. - Moscow, 2002. - P.l 19.

51. Potemkin V.A., Bartashevich E.V., Krasnov V.P., Levit G.L., Andreeva I.N., Charushin V.N., Chupakhin O.N. (±)-2,3-Dihydro-3-methyl-4H-l,4-benzoxazine interactions with (S)-naproxen and N-tosyl-(S)-proIyl chlorides. Theoretical investigations // Proceedings of the 2nd Eurasian Meeting on Heterocyclic Chemistry. - Novgorod the Great, Russia,

2002. - P.40.

52. Charushin V.N., Krasnov V.P., Levit G.L., Andreeva I.N., Bukrina I.M., Sadretdinova L.Sh., Chupakhin O.N. Kinetic resolution of heterocyclic amines using N-tosyI-(i)-prolyl chloride // Proceedings of the XXth European Colloquium on Heterocyclic Chemistry. -Stockholm, Sweden, 2002. - P.32.

53. Chupakhin O.N., Krasnov V.P., Demin A.M., Levit G.L., Kodess M.I. lH NMR Evidence for 5(4W)-oxazolone formation and racemization // Proceedings of the XXth European Colloquium on Heterocyclic Chemistry. - Stockholm, Sweden, 2002. - P. 112.

54. Chupakhin O.N., Krasnov V.P., Solieva N.Z., Zhdanova E.A., Bukrina I.M., Sadretdinova L.Sh., Levit G.L., Kodess M.I Dynamic kinetic resolution via 5(4Я)-oxazolone formation // Proceedings of the XXth European Colloquium on Heterocyclic Chemistry. -Stockholm, Sweden, 2002. - P. 113.

55. Дёмин A.M., Матвеева T.B., Левит Г.Л., Краснов В.П., Сафин В.А., Аникина Л.В., Вихарев Ю.Б. Новые амиды (5)-напроксена Синтез и биологическая активность // Тезисы докладов IV Всероссийского научного семинара и Молодёжной научной школы «Химия и медицина». - Уфа, 2003. - С. 46.

56. Краснов В.П., Левит Г.Л., Кодесс М.И., Ежикова М.А., Орлова О.Л., Оборотова Н.А., Барышников А.Ю., Чупахин О.Н. Изучение гидролитической устойчивости субстанции препарат лизомустин методом ПМР спектроскопии // Российский

Биотерапевт. Ж. - 2004. - Т.З, № 2. - С.23. (Материалы Всероссийской научно-практической конференции "Отечественные противоопухолевые препараты").

57. Kodess M.I., Ezhikova М.А., Levit G.L., Krasnov V.P., Charushin V.N. Use of lanthanide shift reagent in the elucidation of NMR signals from enantiomeric mixtures of 1-substituted 3-amino-l,2-dicarba-doio-dodecaboranes II The 3td European Meeting on Boron Chemistry EUROBORON 3. Programme and Abstracts. - Pruhonice-by-Prague, Czech Republic, 2004. - P33.

58. Krasnov V.P., Levit G.L., Demin A.M., Kodess M.I., Ol'shevskaya V.A., Kalinin V.N., Charushin V.N., Chupakhin O.N. Kinetic resolution of 1-substituted 3-amino-l,2-dicarba-cfoio-dodecaboranes // The 3rd European Meeting on Boron Chemistry EUROBORON 3. Programme and Abstracts. - Pruhonice-by-Prague, Czech Republic, 2004.- P38.

59. Levit G.L., Demin A.M., Kodess M.I., Ezhikova M.A., Sadretdinova L.Sh., Ol'shevskaya V.A., Kalinin V.N., Krasnov V.P., Charushin V.N. Hydrolysis of l-methyl-and l-phenyl-3-amino-l,2-dicarba-cfoso-dodecaborane amides // The 3rd European Meeting on Boron Chemistry EUROBORON 3. Programme and Abstracts. - Pruhonice-by-Prague, Czech Republic, 2004. - P39.

60. Krasnov V.P., Levit G.L., Korolyova M.A., Charushin V.N., Chupakhin O.N. Acylative kinetic resolution of chiral heterocyclic amines. A new approach // 7th SAC Seminar "Scientific Advances in Chemistry: Heterocycles, Catalysis and Polymers as Driving Forces". - Ekaterinburg, 2004. - C. 139.

61. Levit G.L., Krasnov V.P., Demin A.M., Charushin V.N., Chupakhin O.N. Kinetic resolution of racemic 3-aminocarboranes by using chiral heterocyclic compounds // 7th SAC Seminar "Scientific Advances in Chemistry. Heterocycles, Catalysis and Polymers as Driving Forces". - Ekaterinburg, 2004. - C. 140.

62. Krasnov V.P., Levit G.L., Demin A.M., Anikina L.V., Tolstikov A.G., Charushin V.N., Chupakhin O.N. Synthesis and anti-inflammatory activity of indomethacin amides with amino acid derivatives // 7th SAC Seminar "Scientific Advances in Chemistry: Heterocycles, Catalysis and Polymers as Driving Forces". - Ekaterinburg, 2004. - C. 146.

63. Краснов В.П., Левит Г.Л. Кинетическое разделение рацемических аминов и спиртов в результате реакции ацилирования // Всероссийская конференция «Техническая химия. Достижения и перспективы» Доклады. - Пермь. -2006. - Т. I. -С. 8-15.

64. Левит Г.Л., Краснов В.П., Чупахин О.Н., Орлова О.Л., Барышников A.IO. Оригинальный противоопухолевый препарат лизомуегин. Результаты и перспективы // Всероссийская конференция «Техническая химия. Достижения и перспективы». Доклады. - Пермь. -2006. - Т. 1. - С. 133-137.

65. Левит Г.Л., Демин A.M., Ежикова М.А., Матвеева Т.В., Садретдинова Л.Ш., Кодесс М.И., Краснов В.П. Рацемизация З-амино-1 -метил-1,2-дикарба-кдамо-додекаборана в процессе кислотного гидролиза его амидов // International Symposium on Advanced Science in Organic Chemistry. Abstracts. - Sudak, Crimea. -2006. - C-094.

66. Краснов В.П., Левит Г.Л., Жданова E.A., Солиева Н.З., Садретдинова Л.Ш., Чупахин О.Н. Кинетическое разделение рацемических производных пиперидина // Труды Третьей Международной конференции "Химия и биологическая активность азотсодержащих гетероциклов". -Черноголовка. - 2006. -Т.2. - С. 155-157.

67. Levit G.L., Krasnov V.P., Grnzdev D.A., Demin A.M., Bazhov I.V., Ol'shevskaya

V.A., Kalinin V.N., Cheong Ch.S., Chupakhin O.N., Charushin V.N. Synthesis of amides and N-acyl derivatives of 3-amino-l-catboxymethyl-l,2-dicarba-c/ojo-dodecaborane // EUROBORON4. Abstracts. - Bremen, 2-6 September. - 2007. - P. 137.

68. Krasnov V.P., Nizova I.A., Vigorov A.Yu., Levit G.L., Sadretdinova L.Sh., Charushin V.N. Kinetic resolution of (±)-2-methyl-l,2,3,4-tetrahydroquinoline by proline derivatives // The 15th European Symposium oil Organic Chemistry. Abstracts. - Dublin, Ireland.-2007.-P. 231.

69. Жданова E.A., Левит Г.Л., Гришаков A.H., Краснов В.П. Метод определения стереоизомерной чистоты компонентов лизомустина // Российский биотерапевтический журнал (Материалы VII Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты»). -2008. - С. 41.

70. Тумашов А.А., Левит Г.Л., Краснов В.П. Изучение кинетики разложения субстанции лизомустина в растворах // Всероссийский симпозиум «Хроматография и хромато-масс-спектрометрия». Тезисы. - Москва-Клязьма, 2008. - С. 115.

71. Жданова Е.А., Солиева Н.З., Левит Г.Л., Гришаков А.Н., Тумашов А.А., Краснов В.П. Метод определения стереоизомерной чистоты лизина /7 Всероссийский симпозиум «Хроматография и хромато-масс-спектрометрия». Тезисы. - Москва-Клязьма, 2008.-С. 116.

Подписано в печать 23.07.2009 Уся. печ.З. Тираж 150 экз. Заказ № 172

Типография «Уральский центр академического обслуживания» 620219, г. Екатеринбург, ул. Первомайская, 91

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. Создание физиологически активных соединений на основе производных природных аминокислот (краткие литературные сведения).

1.1. Алкилнитрозомочевины на основе а,о-диаминокарбоновых кислот. Синтез и изучение физико-химических свойств и противоопухолевой активности.

1.1.1. Синтез алкилнитрозокарбамоил производных аминокислот

1.1.2. Физико-химические свойства нитрозоуреидопроизводных аминокислот.

1.1.3. Химические свойства.

1.1.4. Биологическая активность.

1.2. Модификация нестероидных противовоспалительных препаратов производными аминокислот.

1.3. Модификация карборанов аминокислотами как путь создания химических агентов для бор-нейтронозахватной терапии опухолей (БНЗТ).

1.3.1. Ранние агенты для БНЗТ.

1.3.2. Бор-содержащие аминокислоты и пептиды.

1.3.2.1. Аминокислоты, содержащие остатки карборанов в боковой цепи.

1.3.2.2. Карборановые аминокислоты.

ГЛАВА 2. Алкилнитрозомочевины на основе а,со-диаминокарбоновых кислот. Синтез и изучение физико-химических свойств и противоопухолевой активности.

2.1. Синтез >Г-нитрозокарбамоил производных диаминокарбоновых кислот.

2.2. Синтез и свойства изомеров положения нитрозогруппы в (2-хлорэтил)нитрозомочевине на основе L-лизина.

2.3. Изучение кинетики гидролитического разложения Ми-нитрозокарбамоил производных диаминокарбоновых кислот.

2.4. Противоопухолевая активность ТчГ-нитрозокарбамоил производных диаминокарбоновых кислот.

2.5. Разработка методов получения и контроля качества субстанции противоопухолевого препарата лизомустин.

2.5.1. Получение субстанции препарата лизомустин.

2.5.2. Методы контроля качества субстанции лизомустина.

2.6. Биологическая активность лизомустина и его изомеров.

Экспериментальная часть к главе 2.

ГЛАВА 3. Синтез и изучение физиологической активности амидов

8)-напроксена, ибупрофена и индометацина с производными аминокислот.

3.1. Синтез амидов (^-напроксена.

3.2. Синтез амидов ибупрофена.

3.3. Синтез амидов индометацина.

3.4. Физиологическая активность синтезированных амидов.

Экспериментальная часть к главе

ГЛАВА 4. Синтез производных карборан-содержащих аминокислот - потенциальных агентов для бор-нейтронозахватной терапии опухолей.

4.1. Получение псевдо-дипептидов N-защищенной 2~(3-амино-1,2-дикарба-/с/гшо-додекаборан-2-ил)уксусной кислоты и алкиловых эфиров природных аминокислот.

4.2. Получение псевдо-трипептидов 2-(3-амино-1,2-дикарба-кугозо-додекаборан-2-ил)уксусной кислоты.

Экспериментальная часть к главе 4.

ГЛАВА 5. Кинетическое разделение рацемических аминов под действием производных природных аминокислот и других хиральных кислот.

5.1. Кинетическое разделение гетероциклических аминов с помощью производных жирно-ароматических кислот.

5.1.1. Кинетическое разделение гетероциклических аминов с помощью хлорангидрида (£)-напроксена.

5.1.1.1. Влияние растворителей на процесс кинетического разделения гетероциклических аминов с помощью хлорангидрида (5)-напроксена.

5.1.1.2. Влияние оснований на процесс кинетического разделения гетероциклических аминов с помощью хлорангидрида (5*)-напроксена.

5.1.1.3. Влияние температуры на процесс кинетического разделения 2-метил-1,2,3,4-тетрагидрохинолина с помощью хлорангидрида (^-напроксена.

5.1.1.4. Препаративное кинетическое разделение рацемических гетероциклических аминов под действием хлорангидрида (5)-напроксена.

5.1.1.5. Теоретическое исследование взаимодействия (±)-2,3-дигидро-3-метил-4Я-1,4-бензоксазина с хлорангидридом (^-напроксена.

5.1.2. Сравнительное изучение различных методов конденсации гетероциклических аминов и (£)-напроксена в условиях кинетического разделения.

5.1.3. Кинетическое разделение гетероциклических аминов под действием хлорангидрида (£)-1,2,3,4-тетрагидро-1 -нафтойной кислоты.

5.2. Кинетическое разделение рацемических гетероциклических аминов с помощью хлорангидридов N-защищенных аминокислот

5.2.1. Кинетическое разделение рацемических гетероциклических аминов под действием хлорангидрида ]\т-тозил-(£)-пролина

5.2.1.1. Влияние растворителей и вспомогательных оснований на процесс кинетического разделения гетероциклических аминов хлорангидридом К-тозил-^-пролина.

5.2.1.2. Препаративное кинетическое разделение гетероциклических аминов под действием хлорангидрида Н-тозил-(5')-пролина.

5.2.2. Кинетическое разделение рацемических гетероциклических аминов под действием хлорангидридов производных М-тозил-(6)-пролина.

5.2.3. Кинетическое разделение рацемических гетероциклических аминов под действием хлорангидрида N-фталоил-(^-аланина.

5.3. Кинетическое разделение 1-замещенных 1,2-дикарба-клозододекабораное.

5.3.1. Оптическое разделение 1-замещенных 1,2-дикарба-кж>зододекаборанов через диастереомерные амиды.

5.3.2. Ацилирование 1-замещенных 1 Д-дикарба-клозо-додека-боранов хлорангидридами хиральных кислот в условиях кинетического разделения.

5.3.3. Изучение влияния растворителей и вспомогательных оснований на процесс кинетического разделения З-амино-1-метил-1,2-дикарба-/сяозо-додекаборана.

5.3.4. Кислотный гидролиз амидов 1-замещённых-З-амино-карборанов.

Экспериментальная часть к главе 5.

Аминокислоты представляют собой уникальный класс органических соединений. С одной стороны, они являются хиральными соединениями, входящими в состав белков и играющими важную роль в биохимических процессах в живых организмах. С другой стороны, аминокислоты широко используются в качестве хиральных строительных блоков в органическом синтезе [1, 2], компонентов катализаторов асимметрического синтеза [3-5], хиральных разделяющих агентов и др.

В последнее время наблюдается новый подъем интереса к химической модификации известных лекарственных препаратов и вновь синтезируемых соединений природными аминокислотами. Присоединение фармакофорных групп к аминокислотам в ряде случаев позволяет получить препараты, обладающие высокой биологической активностью; а использование аминокислот в качестве транспортной функции способствует повышению избирательности действия и снижению токсичности лекарственных препаратов. Вместе с тем, разработке методов синтеза и исследованию свойств производных аминокислот, в которых а-амино- и а-карбоксильная группы оставались свободными не уделялось достаточно внимания.

Кроме того, синтез индивидуальных стереоизомеров - стремительно развивающаяся область органической химии. Это обусловлено в первую очередь потребностями фармацевтической промышленности, поскольку использование энантиомерно чистых лекарственных средств позволяет повысить терапевтический эффект, одновременно уменьшив их побочное действие. Разработка новых подходов к синтезу энантиомерно чистых соединений и разделению рацематов способствует развитию новейших методов тонкого органического синтеза и более глубокому познанию особенностей механизмов органических реакций. Среди методов получения энантиомерно чистых соединений, используемых в промышленности, около 80% составляют методы разделения и только около 20% методы асимметрического синтеза [6].

В последние годы существенное развитие получили методы оптического кинетического разделения (КР) рацематов. С использованием этого метода удалось получить значительное число энантиомеров соединений различных классов [7, 8], однако возможности метода КР далеко не исчерпаны. Наиболее сложной проблемой использования этого метода остается невозможность предсказать, насколько эффективным будет применение конкретного расщепляющего агента. Природные аминокислоты являются доступным оптически активным сырьем, они разнообразны по строению, однако до наших исследований они практически не использовались для создания на их основе оригинальных реагентов для КР и исследовании такого рода процессов.

Таким образом, использование аминокислот для создания на их основе оригинальных лекарственных препаратов, так же, как и для решения разнообразных стереохимических задач, является весьма актуальным.

Целью работы являлась разработка подходов к использованию природных аминокислот в синтезе биологически активных соединений, получении их регио- и стереоизомеров.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи: разработать методы синтеза региоизомеров N-алкилнитрозокарбамоил производных аминокислот со свободными а-амино и карбоксильной группами, изучить их свойства и биологическую активность для создания эффективного противоопухолевого препарата; синтезировать и исследовать биологическую активность амидов (£)-напроксена, ибупрофена и индометацина (нестероидных противовоспалительных препаратов) с аминокислотами; синтезировать и исследовать свойства производных карборан-содержащих аминокислот в качестве потенциальных агентов для бор-нейтронозахватной терапии опухолей; а также изучить процессы кинетического разделения рацемических аминов под действием хиральных ацилирующих реагентов - производных аминокислот.

Настоящая работа выполнена как часть плановых научно-исследовательских работ, проводимых в Институте органического синтеза им.

И.Я. Постовского УрО РАН по темам: «Разработка методов стереоселективного синтеза соединений различных классов с использованием оптически активных аминокислот и их производных» (Гос. per. № 01.2.00 1 05150) и «Новые подходы к синтезу стереоизомеров 4-замещенных 5-оксопролинов и карборанил-аминокислот» (Гос. per. № 0120.0 601954); в рамках проектов РФФИ (00-03-32776 «Изучение механизмов и закономерностей процесса кинетического разделения стереоизомеров в ряду гидрированных производных бензоксазина и хинолина», 03-03-33091 «Синтез и исследование энантиомеров 1 -замещенных З-амино-1,2-дикарба-клозо-додекаборанов», 06-03-32791 «Синтез левофлоксацина и его аналогов», 06-03-08177офи «Разработка метода определения энантиомерной чистоты соединений, входящих в состав субстанции препарата лизомустин, и исследование противоопухолевой активности препарата в зависимости от энантиомерного состава», 07-03-00684 «Синтез карборан-содержащих пептидов»); а также в рамках Федеральной целевой программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 20072012 годы» (Государственные контракты № 02.522.11.2003 «Разработка технологий и выпуск опытных партий препаратов - противовирусного «триазавирин» и противоопухолевого «лизомустин», обладающих избирательным действием на генетический аппарат» и № 02.522.12.2011 «Разработка технологий синтеза соединений фторхинолонового ряда и выпуск на их основе опытных партий антибактериального препарата левофлоксацина для лечения широкого круга инфекций»); и Программы поддержки ведущих научных школ (грант НШ-3758.2008.3).

Научная новизна. Разработаны методы синтеза новых N-алкилнитрозо-карбамоил производных аминокислот со свободными а-амино и карбоксильной группами. Предложены способы получения индивидуальных изомеров положения нитрозогруппы - Ке-нитрозо->1Б-[(2-хлорэтил)карбамоил]-Ь-лизина и Нс-[(2-хлорэтил)-]Ч-нитрозокарбамоил]-Ь-лизина, определяющих терапевтаческий эффект противоопухолевого- препарата лизомустин. Выявлена взаимосвязь между структурой синтезированных N-алкилнитрозокарбамоил производных и их противоопухолевой активностью.

Впервые получены и охарактеризованы псевдопептиды 2-(3-амино-1,2-дикарба-клозо-додекаборан-2-ил)уксусной кислоты и природных аминокислот; показана возможность выделения индивидуальных диастереомеров некоторых соединений.

Впервые установлено, что хлорангидриды оптически активных кислот являются эффективными разделяющими агентами для кинетического разделения рацематов гетероциклических аминов. Наиболее эффективными разделяющими агентами являются хлорангидриды N-защищенных аминокислот (ЪГ-тозил-(£)-пролина и М-фталоил-(£)-аланина) и (S)-2-(6-метоксинафтил-2)пропионовой кислоты. Впервые установлены факторы, влияющие на диастереоселективность кинетического разделения рацематов гетероциклических аминов; показано, что она зависит как от структуры разделяющих агентов и исходных аминов, так и от условий ацилирования. Варьируя структуру разделяющего агента можно избирательно получать смеси, обогащенные (R)- или (5)-изомером амина. Впервые синтезированы энантиомеры 2-метилиндолина.

Впервые получены стереоизомеры производных планарно-хиральных 1-метил-, 1-фенил- и 1-изопропил-3-амино-1,2-дикарба-/<-лозо-додекаборанов. Разработаны методы анализа оптической чистоты энантиомеров и диастереомерных амидов 1-замещённых 3-амино-1,2-дикарба-клозо-додекаборанов с помощью ЯМР спектроскопии и ВЭЖХ. Впервые получены энантиомеры 3 -амино-1 -метил-1,2-дикарба-/агозо-додекаборана. • Впервые изучено кинетическое разделение рацемических 1-замещённых З-амино-1,2-дикарба-ктгозо-додекаборанов при ацилировании хлорангидридами оптически активных кислот. Впервые обнаружены явления рацемизации и деструкции карборанового ядра 3-амино-1,2-дикарба-клозододекаборанов в кислых условиях.

Практическая значимость. Разработан способ получения и методы контроля качества субстанции противоопухолевого препарата ЛИЗОМУСТИН. Составлена нормативно-техническая документация на производство субстанции препарата. В полном объеме проведены клинические испытания препарата лизомустин. Предложены методы контроля качества субстанции лизомустина, которые легли в основу Фармакопейной статьи предприятия. Министерство здравоохранения РФ разрешило медицинское применение препарата лизомустин в качестве средства для лечения меланомы и рака легкого и его промышленный выпуск (Регистрационное удостоверение Р № 00364/01 от 01.12.03.). Лекарственная форма лизомустина зарегистрирована и внесена в Государственный реестр лекарственных средств (Регистрационное удостоверение № ЛС-002311 от 01.12.2006).

Разработаны эффективные методы синтеза амидов (б^-напроксена, ибупрофена и индометацина с производными аминокислот и короткими пептидами, позволяющие получать стерео- и региоизомеры целевых соединений. Среди синтезированных амидов выявлены соединения, не уступающие по анальгетическому и противо-воспалительному действию используемым в клинике препаратам. Наиболее перспективным соединением является амид индометацина и метилового эфира L-метионина, который при экспериментальном сравнении с исходным препаратом показал сочетание высокой противовоспалительной и анальгетической активности и в десятки раз меньшей острой и гастротоксичности.

Разработаны эффективные методы оптического кинетического разделения рацематов гетероциклических аминов, позволяющие получать (R)- и (5)-энантиомеры с высокими выходами и высокой оптической чистотой. Разработан способ получения (£)-2,3-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-4//-1,4-бензоксазина, ключевого интермедиата в синтезе левофлоксацина, современного антибактериального препарата.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

• Показано, что присоединение >Т-(2-хлорэтил)- или N-метил-нитрозо-карбамоильного фрагмента в ]Чш-положение природных диаминокарбоновых кислот приводит к получению соединений, обладающих высокой противоопухолевой активностью и меньшей токсичностью по сравнению с известными препаратами класса алкилнитрозомочевин.

• Разработан способ синтеза смеси изомеров положения нитрозогруппы -МЕ-нитрозо-Ке-[(2-хлорэтил)карбамоил]-Ь-лизина и Nc- [(2-хл орэтил)-М-нитрозокарбамоил]-L-лизина, на основе которого составлены технологические регламенты получения субстанции противоопухолевого препарата ЛИЗОМУСТИН. Предложены методы контроля качества субстанции лизомустина, которые легли в основу Фармакопейной статьи на субстанцию препарата. На основании проведенных клинических испытаний лизомустин разрешен в качестве средства для лечения меланомы и рака легкого. Лекарственная форма лизомустина зарегистрирована и внесена в Государственный реестр лекарственных средств.

• Показано, что модификация известных нестероидных противовоспалительных препаратов (напроксена, ибупрофена и индометацина) природными аминокислотами является эффективным способом снижения их токсичности с сохранением противовоспалительной и анальгетической активности. Наиболее перспективным соединением является амид индометацина и метилового эфира (£)-метионина, который показал сочетание высокой противовоспалительной и анальгетической активности при низкой острой токсичности и гастротоксичности.

• Впервые получены псевдопептиды 2-(3-амино-1,2-дшсароа-клозо-додекаборан-2-ил)уксусной кислоты и природных аминокислот в качестве потенциальных агентов для бор-нейтронозахватной терапии опухолей; показана возможность выделения индивидуальных диастереомеров.

• ' Впервые показано, что хлорангидриды оптически активных кислот являются эффективными разделяющими агентами для кинетического разделения рацематов гетероциклических аминов. Наибольшую эффективность в кинетическом разделении проявили хлорангидриды М-тозил-(£)-пролина и N-фталоил-(£)-аланина; и (5)-2-(б-метоксинафтил-2)-пропионовой кислоты.

• Впервые исследованы факторы, влияющие на диастереоселективность кинетического разделения рацематов гетероциклических аминов, и показано, что она зависит как от структуры разделяющих агентов и исходных аминов, так и от условий ацилирования. Варьируя структуру разделяющего агента можно избирательно получать смеси, обогащенные (R)- или (^-изомером исходного амина. Впервые синтезированы энантиомеры 2-метилиндолина.

• Разработан эффективный способ получения (£)-2,3-дигидро-7,8-дифтор-3-метил-4//-1,4-бензоксазина - ключевого интермедиата в синтезе левофлоксацина, современного антибактериального препарата.

• Впервые получены стереоизомеры производных 1-замещенных 3-амино-1,2-дикарба-к^озо-додекаборанов. Разработаны методы анализа оптической чистоты их энантиомеров и диастереомеров с помощью !Н ЯМР спектроскопии и ВЭЖХ.

• Впервые изучено кинетическое разделение рацемических 1-замещённых З-амино-1,2-дикарба-/<яозо-додекаборанов при ацилировании хлорангидридами оптически активных кислот. Наибольшая стереоселективность наблюдается при использовании хлорангидридов N-защищенных аминокислот; а диастереоселективность процесса существенным образом зависит как от структуры разделяющего агента и 3-аминокарборана, так и от природы растворителя и вспомогательного третичного основания.

• Впервые обнаружены явления рацемизации и деструкции карборанового ядра 1-замещенных 3-амино-1,2-дикарба-/сдозо-додекаборанов в сильнокислой среде.

1. Coppola G.M., Schuster H.F. Asymmetric synthesis. Construction of chiral molecules using amino acids / New York, Chichester, Brisbane, Toronto, Singapore: A Wiley-1.terscience Publication, 1987. - 393 p.

2. Najera C., Yus M. Pyroglutamic acid: a versatile building block in asymmetric synthesis // Tetrahedron: Asymmetry. 1999. - V. 10. - P. 2245-2303.

3. Tsogoeva S.B., Jagtap S.B., Ardemasova Z.A. 4-^гаш-Amino-proline based di-and tetrapeptides as organic catalysts for asymmetric C-C bond formation reactions // Tetrahedron: Asymmetry. 2006. - V. 17. - P. 989-992.

4. Paradowska J., Stodulski M., Mlynarski J. Catalysts based on amino acids for asymmetric reactions in water //Angew. Chem. Int Ed 2009. -V. 48. - P. 4288-4297.

5. Carey J.S., Laffan D., Thomson C., Williams M.T. Analysis of the reactions used for the preparation of drug candidate molecules // Org. Biomol. Chem. -2006. V. 4. - P. 2337-2347.

6. Kagan H.B., Fiaud J.C. Kinetic resolution // Topic Stereochem. 1988. - V. 18. -P. 249-330.

7. Keith J.M., barrow J.F., Jacobsen E.N. Practical considerations in kinetic resolution reactions // Adv. Synth. Cat. 2001. - V. 343. - P. 5-26.

8. Эмануэль H.M., Корман Д.Б., Островская Л.А., Горбачева Л.Б., Дементьева Н.П. Нитрозоалкилмочевины новый класс противоопухолевых препаратов // М.: Наука, 1978. - 295 с.

9. Блохин Н.Н., Переводчикова Н.И. Химиотерапия опухолевых заболеваний // М.: Медицина, 1984. 304 с.

10. Mitchell Е.Р., Schein P.S. Contributions of nitrosoureas to cancer treatment //cancer Treat. Rep. 1986. - V. 70. - P. 31-34.

11. Elliott R.D. Nitrosoureas // in,"Cancer Chemotherapeutic Agents", Ed. Foye W.O. Washington, DC: American Chemical Society, 1995. - P. 133-149.

12. Gnewuch C.T., Sosnovsky G. A critical appraisal of the evolution of N-nitrosoureas as anticancer drugs // Chem. Rev. 1997. - V.97. - P. 829-1013.

13. Johnston T.P., McCaleb G.S., Montgomery J.A. The synthesis of antineoplastic agents. XXXII. N-Nitrosoureas. I //J. Med. Chem.- 1963.- V. 6.- P. 669-681.

14. Machinami Т., Suami T. Potential antitumor N-carbamoyl-N'-methyl-N'-nitroso derivatives of amino acids // Bull. Chem Soc. Japan. -1975. V. 48 (4). - P. 1333-1334.

15. Луценко B.B., Климавичус K.B., Микульские П.П., Шимкявичене В.А. Синтез и противоопухолевая активность нитрозированных №(2-хлорэтил)-уреидокарбоновых кислот // Химиотерапия опухолей в СССР. -1982.-В. 36. -С. 217-219.

16. Ehresmann К., Zelezny О., Eisenbrand G. Syntheses of potentially antineoplastic amides and esters of N-N'-(2-chloroethyl)-N'-nitroso-carbamoyljamino acids, II // Arch. Pharm. 1984. - V. 317 (6). - P. 481-487.

17. Патент ФРГ 3,327,878. МКИ С 07 С 127/15. N-N'-(2-Chloroethyl)-N'-nitroso-carbamoyl.amino acid derivatives / Eisenbrand G., Ehresmann K., Zelezny O. -02.08.83.

18. Гопко В.Ф., Шустова Н.Д., Радина Л.Б. и др. Синтез и исследование а-нитрозоуреидокарбоновых кислот с потенциальной противоопухолевой активностью // Хим.-фарм. Ж. 1978. - Т.12 (5). - С. 53-59.

19. Montero J.-L., Leydet A., Messier-Munos A. Synthese et activite anti-neoplastique de nitrosourees derivant de la serine // Ann. Univ. Abidjan. 1981. -V.C17.-P. 113-125.

20. Kim J.C., Park M.T., Shin H.D. et al. Synthesis of N-(alkyl-N'-nitroso-carbamoyl)-amino acid ester derivatives and their anticancer activity // Yakhak Hoeji. 1984. - V. 28 (4). - P. 197-206.

21. Suami Т., Kato Т., Talcino H., Hisamatsu T. (2-Chloroethyl)nitrosourea. Congeners of amino acids amides // J. Med. Chem. 1982. - V. 25 (7). - P. 829-832.

22. Патент ФРГ 2623420. МКИ С 07 С 127/00, С 07 С 125/00. Verfahren ziir Herstellung un symmetriesch 1,3-disubstituierter Nitrosoharnstaffe / G. Eisenbrand. 25.05.76.

23. Eisenbrand G., Fiebig H.H., Zeller W.J. Some new congeners of the anticancer agent l,3-bis(2-chloroethyl-l-nitrosourea (BCNU) // Z. Krebsforscn. Klin. Oncol. 1976. - V. 86 (3). - P. 279-286.

24. Fiebig H.H., Eisenbrand G., Zeller W.J., Zentgraf E. Anticancer activity of new nitrosoureas against Walker carcinosarcoma 256 and DMBA-induced mammary cancer of the rat // Oncology. 1980. - V. 37. - P. 174-183.

25. Zeller W.J., Eisenbrand G. Examination of newly synthesized 2-chloroethyl-nitrosoureas on rat leukemia L 5222 // Oncology. 1981. - V. 33. - P. 39-42.

26. Tang W.C., Eisenbrand G. Synthesis of potentially antineoplastic derivatives of N-N-(2-chloroethyl)-N-nitrosocarbamoyl.amino acids // Arch. Pharm. 1981. -V. 314.-P. 910-917.

27. Патент ФРГ 3111048. МКИ С 07 С 15/12, С 07 Н 15/16. Verfahren zur Herstellung von N-N'-(2-Chlorathyl)-N'-nitroso.carbamoyl-aminsaure-glucos-amiden und -tetraacetylglucosamiden / G. Eisenbrand, W.G. Tang. 20.03.81.

28. Zeller W.J., Berger M., Eisenbrand G. et al. Chemotherapeutic activity of 2-chloroethylnitrosocarbamoyl derivatives of amino acids in a transplanted rat leukemia (L 5222) // Arzneim.-Forsch. 1982. - V. 32 (I). - P. 484-486.

29. Martinez J., Oiry J., Imbach J.L., Winternitz F. Activated N-nitrosocarbamates for regioselective synthesis of N-nitrosoureas // J. Med. Chem. 1982. - V. 25 (2).-P. 178-182.

30. Montero J.-L., Leydet A., Messiez-Munoz A. et al. Synthese et evaluation de l'activite antimitotique de nitrosourees derivees d'amino-acides. II: amino-acids libres // Eur. J. Chem.-chim. Ther. 1984. - V. 19 (6). - P. 512-518.

31. Rodriquez M., Martinez J., Imbach J.-L. Synthese peptiques lies de facon covalente a des entites cototoxlques nitrosourees et moutardes a d'asote // Eur. J. Chem.-chim. Ther. 1982. - V. 17 (4). - P. 383-387.

32. Патент Франции 2540491. МКИ С 07 С 127/00. Nouwelles nitrosourees, leur procede de preparation et leur application therapeutique / J. Martinez, M. Rodriguez, J.L. Imbach. 08.02.83.

33. Rodriguez M., Imbach J.L., Martinez J. Synthesis and evaluation of some, nitrosourea and nitrogen mustard amino acid derivatives // J. Med. Chem. -1984.-V. 27.-P. 1222-1225.

34. Патент США US4950651. МКИ A61K31/17; A61K38/00; A61K38/07. Nitroso-N-((3-chloroethyl)-carbamoyl peptides / H. Suli, K. Medzihradszky, H. Medzihradszky, K. Lapis, L. Kopper, A. Jeney. 19.04.1985.

35. Suli-Vargha H., Jeney A., Lapis K. et al. Synthesis and antitumor activity of N-terminal proline-containing peptide-(chloroethyl)nitrosoureas // J. Med. Chem. -1987.-V. 30(3).-P. 583-586.

36. Gallant G., Salvador R., Dulude H. Syntesis, anti-HIV and anti-proliferative activity of new urea and nitrosourea derivatives of amino acids // Antiviral Chem. Chemother. 1991. -V. 2 (5). -P. 313-319.

37. Barcelo G., Senet J.-P., Sennyey G. 1,2,2,2-Tetrachloroethyl carbamates: versatile intermediates for the synthesis or N-nitrosoureas // Synthesis. 1987. -No. 11.-P. 1027-1029.

38. Луценко B.B., Стумбрявичюте 3.A., Жимантене З.Л. Нитрозирование 5-циклогексил- и 5-гексилгидантоиновых кислот // Ж. Орг. Хим. 1978. - Т. 14(6).-С. 1203-1209.

39. Луценко В.В., Климавичюс К.А. Региоизомерия нитрозированных 2-N'-гексил- (и фенил-)уреидо.алкановых кислот // Труды АН Лит. ССР. Серия Б. 1988.-Т. 1(164).-С. 70-77.

40. Гопко В.Ф. Синтез и исследование нитрозоуреидопроизводных ааминокислот и их аналогов / Дисс. канд. хим. наук, Свердловск, 1979.

41. Гопко В.Ф., Радина Л.Б., Зубова Т.Э. N-Нитрозосоединения на основе ос-аминокислот. .VIII. Синтез и изучение противоопухолевой активности (3-п-(алкилнитрозоуреидо).-фенил-Ь-а-аланина // Химиотерапия опухолей в СССР. 1981. - В. 33. - С. 107-112.

42. Скрябина С.В., Гопко В.Ф., Аношина Г.М., Радина Л.Б. Синтез и изучение противоопухолевой активности алкилнитрозомочевинных производных L-фенилаланина//Хим.-фарм. Ж. 1984. - Т. 18, № 12. - С. 1431-1436.

43. Kim J.C., Cho I.-S. Preparation of s-N-(2-chloroethyl)nitrosocarbamoyl.-L-lysine // Yakhak Hoeji. 1983. - V. 24 (2). - P. 177-179.

44. Гопко В.Ф., Радина Л.Б. N-Нитрозосоединения на основе а-аминокислот. VII. Изучение положения нитрозогруппы в нитрозоуреидоаминокислотах и их структурных аналогах // Химиотерапия опухолей в СССР. 1981. - В. 33. - С. 101-106.

45. Гопко В.Ф., Стукалов Ю.В., Ярцева И.В., Радина Л.Б. Исследование изомерного состава нитрозоуреидоаминокислот методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и ПМР-спектроскопии // Химиотерапия опухолей в СССР. 1984. - В. 41. - С. 28-33.

46. Беляев А.А., Сингин А.С., Молдаванова Л.К., Радина Л.Б. Изомерный состав нитруллина, влияние условий получения, выделения и очистки препарата на соотношение изомеров // В сб.: Противоопухолевый препарат нитруллин. Свердловск, 1990. - Ч. 1. - С. 15-19.

47. Zeller W.J., Fruhauf S., Chen G. et al. Biological activity of hydroxylated chloroethylnitrosoureas // Cancer Research. -1989. V. 49 (12). - P. 3267-3270.

48. Hardegger E., Meier A., Stoos A. Eine praparative Synthese von Streptosotocine

49. Helv. Chim. Acta. 1969. - V. 52, Fasc. 8. - S. 2555-2560.

50. Meier A., Stoos P., Martin D. et al. Modifizierte Streptozotocine // Helv. Chim. Acta. 1974. - V. 57, Fasc. 8. - S. 2622-2626.

51. Barcelo G., Senet J.P., Sennyey G. Allcyl 1-chloroalkyl carbonates: reagents for the synthesis of carbamates and protection of amino groups // Synthesis. 1986. -No. 8.-P. 627-633.

52. Патент США 4,615,835. MKM С 07J1/00. Steroid esters of N-(2-haloethyl)-N-nitrosocarbamoylamino acids and peptides / G. Eisenbrand, J. Schreiber. -17.11.1983.

53. Eisenbrand G., Berger M.E., Fischer J. et al. N'-(2-Chloroethyl)-N'-nitrosocarbamoyl amino acid derivatives of steroid hormones // Cancer Treat. Rev. 1987. - V. 14 (3-4). - P. 285-290.

54. Eisenbrand G., Berger M.E., Fischer J. et al. Development of more selective anticancer nitrosoureas // Anti-cancer Drug Res. 1988. - V. 2 (4). - P. 351-359.

55. Eisenbrand G., Fischer J., Muehlbauer K. et al. Synthesis and characterization of steroid-linked N-(2-chloroethyl)nitrosoureas // Arch. Pharm. 1989. - V. 322 (12).-P. 863-872.

56. Шарф В.Г. Биотрансформация алкилнитрозомочевин // Хим.-фарм. Ж. -1989. -№ 10. С. 1157-1172.

57. Montgomery J.A., James R., McCaleb G.S., Johnston T.P. The modes of decomposition of l,3-bis(2-chloroethyl)-l-nitrosourea and related compounds // J. Med. Chem. 1967. - V. 10 (4). - P.668-674.

58. Montgomery J.A., James R., McCaleb G.S. et al. Decomposition of N-(2-chloroethyl)-N-nitrosoureas in aqueous media // J. Med. Chem. 1975.- V. 18 (6).-P. 568-571.

59. Colvin M., Bmndrett R.B., Cowens J.W. et al. A chemical basis for antitumor activity of chloroethylnitrosoureas // Biochem. Pharmacol. 1976. - V. 25 (6). -P. 695-699.

60. Sapse A.M., Allen E.B., Lown J.W. Quantum chemical studies of the products of decomposition of anticancer (2-haloethyl)nitrosoureas under physiological conditions // J. Am. Chem. Soc. 1988. - V. 110 (17). - P. 5671-5675.

61. Montgomery J.A. Chemistry and structure-activity studies of the nitrosoureas // Cancer Treat. Rep. 1976. - V. 60 (6). - P. 651-654. ,

62. Yoshida K., Yano K. Kinetics and mechanism of decomposition of N-methyl-N'-aryl-N-nitrosoureas and related compounds in aqueous buffer solution // Bull. Chem. Soc. Japan. -1982. V. 55 (7). - P. 2200-2203.

63. Snyder J.K., Stock L.M. Reactions of Alkylnitrosoureas in aqueous solutions // J. Org. Chem. 1980. - V. 45 (10). - P. 1990-1999.

64. Snyder J.K., Stock L.M. Influences of alkyl groups on the rates of decomposition of N-nitrosoureas in basic aqueous solution // J. Org. Chem. -1980. V. 45 (22). - P. 4494-4496.

65. Lown J.W., Chauhan S.M.S. Synthesis of specifically 15N- and 13C-labelled antitumor (2-haloethyl)nitrosoureas // J. Org. Chem -1981. -V. 46 (26). P. 5309-5321.

66. Lown J.W., Chauhan S.M.S. Discrimination between alternative pathways of aqueous decomposition of antitumor (2-chloroethyl)nitrosoureas using specific10 labeling 11 J. Org. Chem. 1982. - V. 47 (5). - P.851-856.

67. Singer S.S Decomposition reactions of (hydroxyalkyl)nitrosoureas and related compounds //J. Med. Chem. 1985. - V. 28 (8). - P. 1088-1093.

68. Saavedra J.E. Decomposition of 1 -nitroso-1 -alky 1 -3-(2-hydroxyalkyl)ureas // J. Org. Chem. 1990. - V. 55 (26). - P. 6373- 6374.

69. Lown J.W., Chauhan S.M.S. Mechanism of action of (2-haloethyl)nitrosoureas on DNA // J. Med. Chem. 1981. - V. 24 (3). - P. 270-279.

70. Lown J.W., McLaughlin L.W., Plambeck J.A. Mechanism of action of 2-haloethyl-nitrosoiureas on desoxyribonucleic acid. Nature of the intermediates from nitrosourea decomposition // Blochem. Pharmacol. 1979. - V. 28 (14). -P. 2115-2121.

71. Brundrett R.B. Chemistry of nitrosoureas. Intermediacy of 4,5-dihydro-l,2,3-oxadiazole in l,3-bis(2-chloroethyl)-l-nitrosourea decomposition // J. Med. Chem. 1980. - V. 23 (11). - P. 1245-1247.

72. Weinkam R.J., Lin H.-S. Reactions of l,3-bis(2-chloroethyl)-l-nitrosourea and l-(2-chloroethyl)-3-cyclohexyl-l-nitrosourea in aqueous solution // J. Med. Chem. 1979. - V. 22 (10). - P. 1193-1198.

73. Montgomery J. A. Chemistry of nitrosoureas // Nitrosoureas in Cancer Treatment / Int. Symp., Monpellier, Jan. 1981. Elsevier, Biomed. Press. - 1981. - P.13-20.

74. Suli-Vargha H., Bodi J., Meszaros M., Medzihradszky K. Decomposition of N-(2-chloroethyl)-N-nitrosocarbamoyl amino acid amides // J. Med. Chem. 1988. -V. 31 (8).-P. 1492-1495.

75. Гопко В.Ф., Радина JI.Б. N-Нитрозоуреидопроизводные на основе а-аминокислот. IV. Изучение кинетики распада нитрозоуреидоаминокислот // Химиотерапия опухолей в СССР. 1979. - В. 27. - С. 93-100.

76. Гопко В.Ф., Стукалов Ю.В., Шашкина М.Я. Кинетика разложения изомеров нитруллина // Химиотерапия опухолей в СССР. -1984. В. 41. - С. 34-38.

77. Скрябина С.В., Гопко В.Ф., Радина Л.Б. Изучение стабильности нитруллина//Химиотерапия опухолей в СССР. 1982. - В. 36. - С. 232-235.

78. Гопко В.Ф., Радина Л.Б. N-Нитрозоуреидопроизводные на основе а-амино-кислот. VI. Изучение продуктов разложения нитрозоуреидоаминокислот и их структурных аналогов // Химиотерапия опухолей в СССР. 1981. - В. 33. - С. 95-100.

79. Гопко В.Ф., Радина Л.Б. Изучение продуктов распада нитруллина в нейтральных и основных водных растворах // Химиотерапия опухолей в СССР. 1982. - В. 36. - С. 236-240.

80. Miyahara М., Miyata N., Hirobe М., Kamiya S. Degradation of 1,3-diaryl-l-nitrosoureas in aqueous solutions and in organic solvents // Chem. Pharm. Bull. 1987. - V. 35 (11). - P. 4418-4428.

81. Zeller W.J., Ehresmann K., Eisenbrand G. Antineoplastic activity of esters and amides of N-N'-(2-chloroethyl)-N'-nitrosocarbamoyl.-aminoacids // J. Cancer Res. Clin. Oncol. 1984. - V. 108. -P.249-251.

82. Шимкявичене В.И., Климавичюс K.-A.B., Кибурене Н.И., Луценко B.B. Исследование нового высокоактивного противоопухолевого агента 3-3-нитрозо-3(2-хлорэтил)уреидо.-3-фенилпропионовой кислоты // Химиотерапия опухолей в СССР. - 1987. - В. 48. - С. 139-143.

83. Шимкявичене В.И., Луценко В.В., Даугинтене С.С. Противолейкозная активность 3-3-нитрозо-3(2-хлорэтил)-уреидо.-3-фенилпропионовой кислоты // Химиотерапия опухолей. 1992. - В. 58, 59. -С. 20-22.

84. Bibby M.G., Double J.A. Activity of N-N'-(2-chloroethyl)-N'-nitroso-carbamoyl.alanine derivatives against transplantable adenocarcinomata of the mouse colon (MAC) // J. Cancer Res. Clin. Oncol. 1986. - V. 112. - P. 47-49.

85. Sosnovsky G., Rao N.U.M. In the search for new anticancer drugs. XXIV: Synthesis and anticancer evaluation of some dipeptides containing N-nitrosochloroethylamino and chloroethylamino moieties // J. Pharm. Sci. 1990. -V. 792 (4).-P. 369-370.

86. Friedman M.A. PCNU phase I study / New Drugs in Cancer Chemotherapy, Berlin e.a. 1981. - P. 125-129.

87. Willis L.L., Schein P.S., Woolley P.Y. Phase II study of PCNU in colorectal carcinoma // Cancer Treat. Rep. 1981. - V. 65 (11-12). - P. 1129-1130.

88. Decker D.A., Samson M.J., Baker L.H. PCNU in advanced adenocarcinoma of the ovary: a phase II study // Cancer Treat. Rep. 1983. - V. 67 (5). - P. 511-512.

89. Kalman L.A., Stoopler M.B., Casper E.S. et al. Phase II trial of PCNU in non-small cell lung cancer //Cancer Treat. Rep. 1983. - V. 67 (9). - P. 837.

90. Chapman R.A., Natale R.B., Young C.W., Wittes R.E. Phase II trial of l-(2-chloroethyl)-3-(2,6-dioxo-l-piperidyl)-l-nitrosourea in small cell cancer of the lung // Amer. J. Clin. Oncol. 1984. - V. 7 (5). - P. 413-414.

91. Stewart D.J., Grahovac Z., Russe N.A. et al. Phase I study of intracarotid PCNU // J. Neuro-Oncol. 1987. - V. 5 (3). - P. 245-250.

92. Rubins J.M., Taylor S.G. Phase II trial of PCNU in breast carcinoma // Investigational New Drugs. 1989. - No. 7. - P. 239-241.

93. McCormick J.E., McElhinney R.S. Nitrosoureas from Chemist to Physician: Classification and Recent Approaches to Drug Design // Eur. J. Cancer. -1990. -V. 26 (3).-P. 207-221.

94. Gundersen S., Dombernowsky P., Cavalli F. et al. TCNU (IS 2667), a new active drug in the treatment of advanced colorectal cancer // Eur. J. Cancer. Clin. Oncol. 1989. - V. 25. - P. 1095-1097.

95. Nolte H., Gjedde S.B., Lindegaard-Madsen E. et al. Phase II study of tauromustine in disseminated malignant melanoma // Eur. J. Cancer. Clin. Oncol. 1989. - V. 25. - P.655-657.

96. Gatzemeier U., Drings P., Edler L. et al. Chemotherapy with Tauromustine in advanced non-small cell lung cancer // Oncologic. -1990. V. 13 (3). - P. 186-189.

97. Delofre P., M. Paraire, Cudenne C.A. et al. Caracteristiques pharmacologiques d'une nouvelle nitrosouree: la fotemustine // Bull. Cancer. 1989. - V. 76 (5). - P. 550.

98. Jacquillat C., Khavat D., Banset P. et al. Final report of the French multicenter phase II study of nitrosourea fotemustine in 153 evaluable patients with disseminated malignant melanoma including patients with cerebral metastases //

99. Cancer. 1990. - V. 66 (9). - P. 1873-1878.

100. De Rossi A., Rossi L., Laudisi A., Sini V., Toppo L., Marchesi F., Tortorelli G., Leti M., Turriziani M., Aquino A., Bonmassar E., De Vecchis L., Torino F. Focus on fotemustine // J. Exp. Clin. Cancer Res. 2006. - V.25 (4).-P. 461-468.

101. Руководство по химиотерапии опухолевых заболеваний / Под ред. Н.И. Переводчиковой. М.: Практическая медицина, 2005. - 704 с.

102. Перетолчина Н.М., Платонова Г.Н. Сравнительное исследование противоопухолевой активности производных нитрозоуреидо-а-амино-кислот // Химиотерапия опухолей в СССР. 1980. - В. 32. - С. 43-49.

103. Перетолчина Н.М. Противоопухолевая активность нового препарата нитруллина (сравнение с другими нитрозоалкилмочевинами) // Химиотерапия опухолей в СССР. 1982. - В. 36. - С. 228-231.

104. Shen T.Y., Windholtz Т.В., Witzel D.E. et al. Nonsteroidal anti-inflammatory agents // J. Am. Chem. Soc. 1963. - V. 85. - P. 488-489.

105. Adams S.S., Cobb R. Nonsteroidal anti-inflammatory drugs // Prog. Med. Chem. 1967.-V. 5.-P. 59-138.

106. Harrison I.T., Lewis В., Nelson P. Nonsteroidal anti-inflammatory agents. I. 6-Substituted 2-naphthylacetic acid // J. Med. Chem. 1970 - V. 13. - P. 203-205.

107. Islam M.R., Mahdi J.G., Bowen I.D. Pharmacological importance of stereochemical resolution of enantiomeric drugs //Drug Safety. -1997.-V. 17.-P. 149.

108. Харкевич Д.А. Фармакология. M.: Медицина, 1993. - С. 384-388.

109. Сюбаев Р.Д., Машковский М.Д., Шварц HI.5L, Покрышкин В.И. Сравнительная фармакологическая активность современных нестероидных противовоспалительных препаратов // Хим.-фарм. Ж. 1986. - № 1. - С. 33-39.

110. Marnett L.J., Kalgutkar A.S. Cyclooxygenase 2 inhibitors: discoveiy, selectivity and the future // Trends in Pharmacological Sciences. -1999.-V.20.-P. 465-469.

111. Hart C. Will Super Aspirin Supersede Aspirin? // Modem Drug Discovery. -1999. May/June - P. 54-59.

112. Wu K.K.-Yu. Biochemical pharmacology of nonsteroidal anti-inflammatorydrugs // Biochemical Pharmacology. 1998. - V. 55. - P. 543-547.

113. Davies I.W., Marcoux J.-F., Corley E.G., Journet M. A practical synthesis of a СОХ-2-specific inhibitor // J. Org. Chem. 2000. - V. 65, № 25. - P. 8415-8420.

114. Машковский М.Д. Лекарственные средства. 15-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: РИА «Новая волна»: Издатель Умеренков, 2007. - 1206 с.

115. Ли П., Старрок Р.Д., Греннан Д.М. К оценке эффективности противоревматических препаратов //Терапевтический архив, 1975.—№11.-С.89-102.

116. Akgim H., Tozkoparan В., Ertan M., Aksu F., Inan S.Y. Synthesis of some 2-arylpropionic acids amides as prodrugs // Arzneim. Forsch. Drug Res. 1996. -V. 46.-P. 891-894.

117. Weber H., Steimer U., Mannhold R., Cruciani G. Synthesis, in vitro skin permeation studies, and PLS-analysis of new naproxen derivatives // Pharm. Res. 2001. - V. 18. - P. 600-607.

118. Kalgutkar A.S., Marnett A.B., Crews B.C., Remmel R.P., Marnett L.J. Ester and amide derivatives of the nonsteroidal antiinflammatory drug, indomethacin, as selective cyclooxigenase-2 inhibitors //J.Med Chem-2000.-V.43.-P.2860-2870.

119. Kourounakis P.N., Tsiakitzis K., Kourounakis A.P., Galanakis D. Reduction of gastrointestinal toxicity of NSAIDs via molecular modifications leading to antioxidant anti-inflammatory drugs I I Toxicology. 2000. -V. 144. - P. 205-210.

120. Патент Японии JP 19720044221 (С 07d A 61 k). N-(l-Acyl-2-methyl-5-methoxy-indole-3-acetyl)methionines / Okamoto Т., Kobayshi Т., Sato H., Yamamoto H. / 08 Nov. 1972. Appl. 69 90,956, 12 Nov. 1969. 2 pp. (Chem. Abstr. - 1973. - V.78, № 84254).

121. Kwapiszewski W., Koziej P. Preparation of N-l-(/?-chlorobenzoyl)-5-methoxy-2-methylindolyl-3.acetylamino acids // Acta Pol. Pharm -1982. -V. 39. -P. 327-336.

122. Kolwas J., Kwapiszewski W. Preparation of dipeptide derivatives of indomethacin as potential antagonists of chemotactic agents // Acta Pol. Pharm. 1984.-V. 41.-P. 541-546.

123. Krupinska J., Mazur J., Piotrowicz J., Cebo В., Stephanus R. Comparative studies on the amino acid derivatives of indomethacin // Pol. J. Pharmacol. Pharm. 1986. - V. 38 (2). - P. 149-156.

124. Singh P., Hingorani L.L., Trivedi G.K. Succinimide esters and glycine amides ofnon-steroidal antiinflammatory drugs // Indian J. Chem. B. 1990. - V. 29B. -P. 551-555.

125. Otis M.F., Levesque L., Marceau F., Lacroix J., Gaudreault.R.C. Synthesis and pharmacological evaluation of amide derivatives of non-steroidal antiinflammatory drugs // Immunopharmacology. 1992. - V. 1. - P. 201-212.

126. Европейский патент ЕР 0035641. Cysteine derivatives and medicines containing them // Mascellani G., Tamagnone G., Guerra G., Benelli A. (Italy). Appl. 30.01.81; Priority 31.01.80. 48 pp. (Chem. Abstr. - 1982. - V. 96, № 69429).

127. Shanbhag V.R., Crider A.M., Gokhale R., Harpalani A., Dick R.M. Ester and amide prodrugs of ibuprofen and naproxen: synthesis, anti-inflammatory activity, and gastrointestinal toxicity // J. Pharm. Sci. -1992.-V. 81.-P. 149-154.

128. Weber H., Steimer U., Mannhold R., Cruciani G. Synthesis, in vitro skin permeation studies, and PLS-analysis of new naproxen derivatives // Pharm. Sci. -2001.-V. 18.-P. 600-607.

129. Belagali S.L., Himaja M. Synthesis and evaluation of the anti-inflammatory activity of 2-(4-isobutylphenyl)propionyl derivatives of amino acids and peptides // Indian J. Chem., Sect. B: Org. Chem. Incl. Med. Chem. 1999. - V. 38B.-P. 505-507.

130. Kwapiszewski W., Krupinska J., Koziej P., Stephanus R. Synthesis and preliminary pharmacological testing of novel 2-(4-isobutylphenyl)propionic acid derivatives // Acta Pol. Pharm. 1985. - V. 42. - P. 545-549.

131. Патент Бельгии BE 889699. Amide derivatives of />-isobutyl-phenylpropionic acid and the corresponding pharmaceutical composition // Laboratory Prophin S.p.A. (Italy). Заявл. 22.07.81; Приоритет 22.07.80. - 14 pp. (Chem. Abstr. -1982.-V. 96, № 162350).

132. Mazur J., Krupinska J., Piotrowicz J., Cebo В., Stephanus R. Comparative studies on the toxicity of indomethacin and N-indomethacilglycin // Przegl. Lek. 1983.-V. 40.-P. 635-637 (Chem. Abstr. - 1984. - V. 101, №48329).

133. Vane J.R., Botting R.M. Anti-inflammatory drugs and their mechanism of action // Inflamm. Res. 1998. - V. 47, Supplement 2. - P. S78-S87.

134. Kashfi K., Rigas B. Non-COX-2 targets and cancer: Expanding the molecular target repertoire of chemoprevention // Biochem. Pharmacol. 2005. - V. 70. -P. 969-986.

135. Dai Y., Wang W.H. Non-steroidal anti-inflammatory drugs in prevention of gastric cancer // World J. Gastroenterology. 2006. - V. 12. - P. 2884-2889.

136. Wanga D., DuBois R.N. Pro-inflammatory prostaglandins and progression of colorectal cancer // Cancer Lett. 2008. - V. 267. - P. 197-203.

137. Townsend K.P., Pratico D. Novel therapeutic opportunities for Alzheimer's disease: focus on nonsteroidal anti-inflammatory drugs // FASEB J. 2005. - V. 19.-P. 1592-1601.

138. McGeer P.L., McGeer E.G. NSAIDs and Alzheimer disease: Epidemiological, animal model and clinical studies // Neurobiol. Aging. 2007.-V.28.-P. 639-647.

139. Soloway A.H., Tjarks W., Barnum B.A., Rong F.-G., Barth R.F., Codogni I.M., Wilson G. The chemistry of neutron capture therapy // Chem. Rev. 1998. - V. 98.-P. 1515-1562.

140. Valliant J.F., Guenther K.J., King A.S., Morel P., Schaffer P., Sogbein O.O., Stephenson K.A. The medicinal chemistry of carboranes // Coord. Chem. Rev. -2002.-V. 232.-P. 173-230.

141. Корякин C.H. Соединения для нейтрон-захватной терапии и их распределение в опухолях и окружающих тканях лабораторных животных (Обзор) // Хим.-фарм. Ж. 2006. - Т. 40. - С. 3-7.

142. Coderre J.A., Turcotte J.C., Riley К.J., et al. Boron neutron capture therapy: cellular targeting of high linear energy transfer radiation // Technol. Cancer Res. Treat. 2003. - V. 2. - P. 355-375.

143. Wu G., Barth R.F., Yang W., et al. Boron containing macromolecules and nanovehicles as delivery agents for neutron capture therapy // Anti-Cancer Agents Med. Chem. 2006. - V. 6. - P. 167-184.

144. Брегадзе В.И., Сиваев И.Б. Лекарство-снайпер, или химический прицел для нейтрона // Природа. 2004. - № 4. - С. 3-17.

145. Lesnikowski ZJ. Boron units as pharmacophores new applications and opportunities of boron cluster chemistry // Collect. Czech. Chem. Commun. -2007.-V. 72.-P. 1646-1658.

146. Armstrong A.F., Valliant J.F. The bioinorganic and medicinal chemistry of carboranes: from new drug discovery to molecular imaging and therapy // Dalton Trans. 2007. - P. 4240-4251.

147. Tjarks W. The use of boron clusters in the rational design of boronated nucleosides for neutron capture therapy of cancer // J. Organomet. Chem. -2000. V. 614-615. - P. 37-47.

148. Hawthorne M.F., Maderna A. Applications of radiolabeled boron clusters to the diagnosis and treatment of cancer // Chem. Rev. 1999. -V. 99. - P. 3421-3434.

149. Barth R.F., Soloway A.H., Brugger R.M. Boron Neutron Capture Therapy of

150. Brain Tumors: Past History, Current Status and Future Potential // Cancer Invest. 1996. - V. 14(6). - P. 534-550.

151. Yamamoto Т., Nakai K., Matsumura A. Boron neutron capture therapy for glioblastoma // Cancer Lett. 2008. - V. 262. - P. 143-152.

152. Wyzlic I.M., Soloway A.H. A general, convenient way to carborane-containing amino acids for boron neutron capture therapy // Tetrahedron Lett. 1992. - V. 33.-P. 7489-7490.

153. Leukart O., Caviezel M., Eberle A., et al. L-o-Carboranylalanine, a boron analog of phenylalanine // Helv. Chim. Acta. 1976. - V. 59. - P. 2184-2187.

154. Karnbrock W., Musiol H.-J., Moroder L. Enantioselective synthesis of S-o-carboranylalanine via methylated bislactim ethers of 2,5-diketopiperazines // Tetrahedron. 1995. - V. 51. - P. 1187-1196.

155. Radel P.A., Kahl S.B. Enantioselective synthesis of L- and D-carboranylalanine //J. Org. Chem. 1996.-V. 61. - P. 4582-4588.

156. Lindstrom P., Naeslund C., Sjoberg S. Enantioselective synthesis and absolute configurations of the enantiomers of o-carboranylalanine // Tetrahedron Lett. -2000.-V. 41.-P. 751-754.

157. Prashar J.K, Lama D., Moore D.E Synthesis of dihydroxycarboranyl phenylalanine for potential use in boron neutron capture therapy or melanoma // Tetrahedron Lett. 1993. - V. 34. - P. 6799-6800.

158. Wu Y., Quintana W. Coupling of amino carboranes to carboxylic acid containing substrates // Inorg. Chem. 1999. - V. 38. - P. 2025-2029.

159. Dozzo P., Kasar R.A., Kahl S.B. Simple, high-yield methods for the synthesis of aldehydes directly from o-, m-, and /7-carborane and their further conversions // Inorg. Chem. 2005. - V. 44. - P. 8053-8057.

160. Srivastava R.R., Singhaus R.R., Kabalka G.W. Synthesis of l-amino-3-2-(l,7-dicarba-c/o5,o-dodecaboran(12)-yl)ethyl.cyclobutanecarboxylic acid: a potential BNCT agent // J. Org. Chem. 1997. - V. 62. - P. 4476-4478.

161. Srivastava R.R., Singhaus R.R., Kabalka G.W. 4-Dihydroxyborylphenyl

162. Analogues of 1-Aminocyclobutane-carboxylic Acids: Potential Boron Neutron Capture Therapy Agents 11 J. Org. Chem. 1999. - V. 64. - P. 8495-8500.

163. Kabalka G.W., Yao M.-L. Synthesis of l-amino-3(dihydroxyboryl)methyl.-cyclobutane-carboxylic acid as a potential therapy agent // J. Org. Chem. 2004. -V. 69.-P. 8280-8286.

164. Kabalka G.W., Yao M.-L. Synthesis of a boronated amino acid as a potential neutron therapy agent: l-amino-3(dihydroxyboryl)ethyl.cyclobutanecarboxylic acid // Tetrahedron Lett. 2005. - V. 46. - P. 4915-4917.

165. Srivastava R.R., Kabalka G.W. Syntheses of l-Amino-3-2~(7-(2-hydroxyethyl)-1,7-dicarba-c/as,0-dodecaboran( 12)-1 -yl)ethyl.cyclobutanecarboxylic Acid and Its nido-Analogue: Potential BNCT Agents // J. Org. Chem. 1997. - V. 62. -P. 8730-8734.

166. Varadarajan A., Hawthorne M.F. Novel carboranyl amino acids and peptides: reagents for antibody modification and subsequent neutron-capture therapy // Bioconjugate Chem. 1991. - V. 2. - P. 242-253.

167. Kahl S.B., Kasar R.A. Simple, high-yield synthesis of polyhedral carborane amino acids // J. Am. Chem. Soc. 1996. - V. 118. - P. 1223-1224.

168. Kasar R.A., Knudsen G.M., Kahl S.B. Synthesis of 3-amino-l-carboxy-o-carborane and an improved, general method for the synthesis of all three C-amino-C-carboxycarboranes // Inorg. Chem. 1999. - V. 38. - P. 2936-2940.

169. Беляев А.А., Левит Г.Л., Перетолчина Н.М., Краснов В.П. Синтез и противоопухолевая активность ближайших аналогов нитруллина с равным содержанием активного изомера // Химиотерапия опухолей. 1997. - Вып. 61.-С. 10-15.

170. Adamson D.W. New Syntheses of Basic Aminoacids and Glycine // J. Chem. Soc. 1939.-V. 10.-P. 1564-1568.

171. Cavaillini D., de Marco C., Mondovi В., Azzone G.F. A New Synthetic Sulfur-Containing Amino Acid: S-Aminoethylcysteine // Experientia. 1955. - V. XI/2. -P. 61-62.

172. Hermann P., Stalla K., Schwimmer J. et al. Synthese einiger schwefelhaltiger Aminosaure-Analoga // J. Prakt. Chem. 1969. - Bd. 311. - S. 1018-1028.

173. Авторское свидетельство СССР № 1785342. Способ определения содержания изомеров 9-(2-хлорэтил)-7-нитрозо-Ъ-гомоцитруллина и 9-(2хлорэтил)-9-нитрозо-Ь-гомоцитруллина в нитруллине / Радина Л.Б., Левит Г.Л.-заявл. 03.10.89.

174. Клочкова Т.Н., Игнатьева Е.В., Ярцева И.В., Кикоть Б.С., Романенко В,И., Куненкова Н.Ф., Краснов В.П., Матвеева Т.В., Левит Г.Л., Чупахин О.Н. Определение посторонних примесей в препарате лизомустин // Хим.-фарм. Ж. 2004. - Т. 38 (5). - С. 45-47.

175. Гудцова К.В., Кукушкина Г.В., Горбачева Л.Б. и др. Противоопухолевая активность и механизм действия, нового препарата из класса алкилнитрозомочевин // Хим.-фарм. Ж. 1991. - Т. 25 (9). - С. 10-15.

176. Гордон А., Форд Р. Спутник химика. М.: Мир, 1976. - С. 86.

177. Левит Г.Л., Королева М.А., Краснов В.П. Синтез амидов 2-арилпропионовых кислот // Ж. Орган. Хим. 1998. - Т. 34. - С. 378-382.

178. Левит Г.Л., Аникина Л.В,, Вихарев Ю.Б., Дёмин A.M., Сафин В.А., Матвеева Т.В., Краснов В.П. Синтез, противовоспалительная и анальгетическая активность амидов напроксена с производными аминокислот//Хим.-фарм. Ж. 2002.- Т. 36 (5). - С. 12-15.

179. Shieh W.-C., Carlson J.A., Shore М.Е. A novel kinetically-controlled peptide synthesis dramatic increase of chemical yield with retention of chiral integrity // Tetrahedron Lett. - 1999. - V. 40. - P. 7167-7170.

180. Аникина Л.В., Левит Г.Л., Дёмин A.M., Вихарев Ю.Б., Сафин В.А., Матвеева Т.В., Краснов В.П. Синтез, противовоспалительная и анальгетическая активность аминокислот, ацилированных ибупрофеном // Хим.-фарм. Ж. 2002.- Т. 36 (5). - С. 16-17.

181. Kivinen A. Mechanisms of substitution at the COX group / in The chemistry of acyl halides, Ed. Patai S. // Interscience Publishers, 1972. P. 177-230.

182. Литвиненко Л.М., Олейник H.M. Органические катализаторы и гомогенный катализ // Киев: Наук, думка, 1981. 259 с.

183. Литвиненко Л.М., Олейник Н.М. Механизмы действия органических катализаторов // Киев: Наук, думка, 1984. 264 с.

184. Hubbard P., Brittain W.J. Mechanism of amine-catalyzed ester formation from an acid chloride and alcohol // J. Org. Chem. 1998. - V. 63. - P. 677-683.

185. Аникина Л.В. Биологическая активность амидов индометацина,напроксена, ибупрофена и природных аминокислот // Дисс. канд. биол. наук. Томск, 2003. 118 с.

186. Winter С.А., Risley Е.А., Nuss G.W. Carrageenin-induced edema in hind paw of the rat as an assay for antiinflammatory drugs // Proc. Soc. Exp. Biol. (N.Y.). 1962,-V. Ill (3).-P. 544-547.

187. Салямон JI.C. Лекарственная регуляция воспалительного процесса. -Ленинград: Медгиз, 1958. С. 11-13.

188. Koster R., Anderson М., de Beer E.J. Acetic acid for analgetic screening // Fed. Proc. 1959.-V. 18 (1). -P. 412.

189. Прозоровский В.Б., Прозоровская М.П., Демченко B.M. Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки // Фармакология и токсикология. 1978. - № 4. - С. 497-502.

190. Krasnov V.P., Levit G.L., Bukrina I.M., Demin A.M., Chupakhin O.N., Ji Uk Yoo. Efficient large (ca. 40 g) laboratory scale preparation of (S)- and (7?)-valine /er/-butyl esters I I Tetrahedron: Asymmetry. 2002. - V.13 (17). - P. 1911-1914.

191. Eliel E.L., Wilen S.H. Stereochemistry of Organic Compounds // New York: J. Wiley & Sons, 1994. P. 395-415.

192. Ditrich K. Optically active amines by enzyme-catalyzed kinetic resolution // Synthesis. 2008. - No. 14. - P. 2283-2287.

193. Kawabata Т., Nagato M., Takasu K., Fuji K. Nonenzymatic kinetic resolution ofracemic alcohols through an "induced fit" process// J. Am. Chem. Soc. 1997. -V. 119.-P. 3169-3170.

194. Somfai P. Nonenzymatic Kinetic Resolution of Secondary Alcohols // Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1997. - V. 36. - P. 2731-2733.

195. Miller S.J., Copeland G.T., Papaioannou N., Horstmann Т.Е., Ruel E.M. Kinetic resolution of alcohols catalyzed by tripeptides containing the N-alkylimidazole substructure//J. Am. Chem. Soc. 1998.-V. 120.-P. 1629-1630.

196. Vedejs E., Daugulis O., Diver S.T. 2-Aiyl-4,4,8-trimethyl-2-phosphabicyclo-3.3.0.octanes: reactive chiral phosphine catalysts for enantioselective acylation // J. Am. Chem. Soc. 1999. - V. 121. - P. 5813-5814.

197. Spivey A.C.,' Maddaford A., Redgrave A.J. Asymmetric catalysis of acyl transfer by Lewis acids and nucleophiles. A review // Org. Prep. Proced. Int. -2000.-V. 32.-P. 331-365.

198. Fu G. Enantioselective nucleophilic catalysis with "planar-chiral" heterocycles // Acc. Chem. Res. 2000. - V. 33. - P. 412-420.

199. Robinson D.E.J.E., Bull S.D. Kinetic resolution strategies using non-enzymatic catalysts // Tetrahedron: Asymmetry. 2003. - V. 14. - P. 1407-1446.

200. Yamada S. Noguchi E. Dynamic kinetic resolution of hemiaminals with axially chiral twisted amides // Tetrahedron Lett. 2001. - V. 42. - P. 3621-3624.

201. Zhao M., Wang C., Peng S., Winterfeldt E. Easy generation of an enantiopure general indolalkaloid building block by kinetic resolution // Tetrahedron

202. Asymmetry. 1999. - V. 10. - P. 3899-3905.

203. Al-Sehemi A.G., Atkinson R.S., Fawcett J., Russell D.R. Kinetic resolution of amines by acylation using 3-diacylaminoquinazolin-4(3//)-ones // Chem. Commun. 2000. - P. 43-44.

204. Al-Sehemi A.G., Atkinson R.S., Fawcett J., Russell D.R. 3-(N,N-Diacylamino)-quinazolin-4(3//)-ones as enantioselective acylating agents for amines // Tetrahedron Lett. 2000. - V. 41. - P. 2239-2242.

205. Al-Sehemi A.G., Atkinson R.S., Fawcett J., Russell D.R. 3-Di-0S>2-acetoxy-propanoyl.aminoquinazolin-4(3#)-ones: stereostructure and application in kinetic resolution of amines // Tetrahedron Lett. 2000. - V. 41. - P. 2243-2246.

206. Al-Sehemi A.G., Atkinson R.S., Fawcett J., Russell D.R. Stereoisomerism in 3-N-(2-acetoxypropanoyl)-N-acylamino.-quinazolin-4(3//)-ones, enantioselective acylating agents // J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1. 2000. - P. 4413-4421.

207. Al-Sehemi A.G., Atkinson R.S., Meades C.K. Parallel kinetic resolution of racemic amines using 3-N,N-diacylaminoqumazolm-4(3//)-ones .// Chem. Commun. 2001. - P. 2684-2785.

208. Al-Sehemi A.G., Atkinson R.S., Fawcett J. Kinetic resolution of amines with enantiopure 3-N,N-diacylaminoquinazolin-4(3//)-ones // J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1. 2002. - P. 257-274.

209. Arseniyadis S., Subhash P.V., Valleix A., Mathew S.P., Blackmond D.G., Wagner A., Mioskowski C. Tuning the enantioselective N-acetylation of racemic amines: a spectacular salt effect // J. Am. Chem. Soc. 2005. - V. 127. -P. 6138-6139.

210. Krasnov V.P., Levit G.L., Andreeva I.N., Grishakov A.I., Charushin V.N., Chupakhin O.N. Kinetic resolution of (±)-2-methyl-l,2,3,4-tetrahydroquinolineand (±)-2-methylindoline // Mendeleev Commun. 2002. - V. 12. - P. 27-28.

211. Krasnov V.P., Levit G.L., Kodess M.I., Charushin V.N., Chupakhin O.N. N-Phthaloyl-(5)-alanyl chloride as a chiral resolving agent for the kinetic resolution of heterocyclic amines // Tetrahedron: Asymmetry. 2004. - V. 15. -P. 859-862.

212. Патент Южной Кореи KR 2000 047396. МПК7 С 07 D 265/14. Method for preparing (.S)-benzoxazine derivative and a racemization method of (R)-benzoxazine derivative / Chupakhin O.N., Krasnov V.P., Levit G.L., Charushin

213. V.N., Korolyova M.A., Tzoi E.V., Lee H.S., Park Y.J., Kim M.N., Kim K.-Ch. -№ KR19990016338; заявл. 07.05.1999; опубл. 25.07.2000.

214. Ralf В., Hermann L., Ernst M., Hildegard S.-L. Chloroformates and isothiocyanates derived from 2-arylpropyonic acids as chiral reagents: synthetic routes and chromatographic behavior of the derivatives // J. Chromatogr. A. -1996-V. 725.-P. 323-324.

215. Aida S., Hector L., Herminia I.P., Norberto M., Remedios S. (S)-Naproxen as a derivatizing agent to determine enantiomeric excess of cyanohydrins by HPLC // Tetrahedron Lett. 1998. - V. 39. - P. 8759-8762.

216. Buyuktimkin N., Buschauer A. Separation and determination of same amine acids ester enantiomers by thin-layer chromatography after derivatization with (^-naproxen // J. Chromatogr. 1988. - V. 450, № 2. - P. 281-283.

217. Laetitia F., Caroline N.-Ch., Nikolas N., Henri P. Enantiomeric excess determination of some chiral sulfoxides by NMR: use of («S)-ibuprofen and (S)-naproxen as shift reagents // Tetrahedron Lett. 1997. - V. 38. - P. 7875-7878.

218. Кодесс М.И., Левит Г.Л., Краснов В.П. Определение оптической чистоты и абсолютной конфигурации хиральных гетероциклических аминов методом ЯМР спектроскопии // Тезисы докладов XV Уральской конференции по спектроскопии. — Заречный, 2001. С. 200.

219. Гришина М.А., Барташевич Е.В., Потемкин В.А., Велик А.В. Генетический алгоритм для прогноза строения и свойств молекулярных агломератов в органических веществах // Ж. Структ. X. 2002. - Т. 43. - С. 1128-1133.

220. Потемкин В.А., Барташевич Е.В., Белик А.В. Модель расчета атомных объемных характеристик в молекулярных системах // Ж. Физ. X. — 1998. — Т. 72.-С. 650-656.

221. Потемкин В.А., Барташевич Е.В., Белик А.В. Новые подходы к прогнозу термодинамических параметров веществ по молекулярным данным // Ж. Физ. X. 1996. - Т. 70. - С. 448-452.

222. Reed A.D., Curtiss L.A., Weinhold F. Intermolecular interactions from natural bond orbital, donor-acceptor viewpoint // Chem. Rev. 1988. - V. 88. - P. 899-926.

223. Гринштейн Дж., Винитц M. Химия аминокислот и пептидов // М.: Мир, 1965.-С. 441-775.

224. Шредер Э., Любке К. Пептиды. Т. 1 // М.: Мир, 1967. С. 116-190.

225. Jones J. The chemical synthesis of peptides (International series of monographs on chemistry; 23) // Oxford University Press, 1994. P. 51-54.

226. Патент ЕР 0 206 283. МКИ С 07 D 498/06. Optically active pyridobenzoxazine derivatives and intermediates thereof / Hayakawa I., Atarashi S., Yokohama S. et al. 20.06.86.

227. Zaitsev V.G., Sachava D.G., Yankovskaya G.S., Garbuz N.I. Synthesis of rac-6-hydroxy-3-methoxycyclohex-2-enone and resolution through recrystallization of its diastereomeric N-tosyl-(S)-proline esters I I Chirality. 2000. - V. 12. - P. 287-290.

228. Nizova I.A., Krasnov V.P., Kodess M.I. Synthesis of (2S,4S)-4-phenylamino-5-oxoproline derivatives // Amino Acids. 2002. - V. 22. - P. 179-186.

229. Krasnov V.P., Nizova I.A., Vigorov A.Yu., Matveeva T.V., Levit G.L., Slepukhin P.A., Ezhikova M.A., Kodess M.I. Structure and Properties of 4-Amino Derivatives of 5-Oxoproline // Eur. J. Org. Chem. 2008. - No. 10 - P. 1802-1810.

230. Илиел Э., Вайлен С., Дойл М. Основы органической стереохимии // М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2007. с. 77-85.

231. Граймс Р. Карбораны. М.: Мир, 1974, 264 с.

232. Bregadze V.I. Dicarba-c/aro-dodecaboranes C2Bi0Hi2 and their derivatives // Chem. Rev. 1992. - V. 92. - P. 209-223.

233. Kalinin V.N., Ol'shevskaya V.A. Professor Leonid I. Zakharkin (1923-2001) ' and his contribution to carborane chemistry // in "Boron Chemistry at the

234. Beginning of the 21st Century", Ed. Bubnov Yu. N. Moscow: Editorial URSS,2003. pp. xiii-xxiv.

235. Hawthorne M.F. The role of chemistry in the development of boron neutron capture therapy of cancer //Angew. Chem. Int. Ed. Eng. 1993. -V. 32. - P. 950-984.

236. Сиваев И.Б., Брегадзе В.И. Бор-нейтронозахватная терапия рака. Химический аспект // Российский химический журнал. 2004. - Т. 48. - С. 109-125.

237. Brunner Н., Apfelbacher A., Zabel М. Palladium and rhodium complexes with planar-chiral carborane ligands // Eur. J. Inorg. Chem. 2001. - №4. - P. 917-924.

238. Krasnov V.P., Levit G.L., Charushin V.N., Grishakov A.N., Kodess M.I., Kalinin V.N., Ol'shevskaya V.A., Chupakhin O.N. Enantiomers of 3-amino-l-methyl-1,2-dicarba-c/as'o-dodecaboranes // Tetrahedron: Asymmetry. 2002. -V. 13. - P. 1833-1835.

239. Sheehan J.C., Chapman D.W., Roth R.W. The synthesis of stereochemically pure peptide derivatives by the phthaloyl method // J. Am. Chem. Soc. 1952. -V. 74.-P. 3822-3825.

240. Kodess M.I., Ezhikova M.A., Levit G.L., Krasnov V.P., Charushin V.N. NMR determination of enantiomeric composition of 1-substituted 3-amino-l,2-dicarba-c/aso-dodecaboranes using Eu(hfc)3 // J. Organometal. Chem. 2005.1. V. 690.-P. 2766-2768.

241. Axt M., Alifantes J., Costa V.E.U. Use of chiral lanthanide shift reagents in the elucidation of NMR signals from enantiomeric mixtures of polycyclic compounds //J. Chem. Soc., Perkin Trans. 2. 1999. - P. 2783-2788.

242. Hawkes G.E., Leibfritz D., Roberts D.W., Foberts J.D. Nuclear magnetic resonance shift reagents. Question of the orientation of the magnetic axis in lanthanide-substrate complexes // J. Am. Chem. Soc.- 1973.-V. 95.-P. 1659-1661.

243. Levit G.L., Demin A.M., Kodess M.I., Ezhikova M.A., Sadretdinova L.Sh.,

244. Ol'shevskaya V.A., Kalinin V.N., Krasnov V.P., Charushin V.N. Acidichydrolysis of N-acyl-1-substituted 3-amino-1,2-dicarba-c/o^o-dodecaboranes 11 J. Organometal. Chem. 2005. - V. 690. - P. 2783-2786.

245. Hermanek S. Boron-11 NMR spectra of boranes, main-group heteroboranes, and substituted derivatives. Factors influencing chemical shifts of skeletal atoms // Chem. Rev. 1992. - V. 92. - P. 325-362.

246. Fox M.A., Goeta A.E., Hughes A.K., Johnson A.L. Crystal and molecular structures of the nido-carborane anions, 7,9- and 2,9-C2B9Hi2- // J. Chem. Soc., Dalton Trans. 2002. - №. 10. - P. 2132-2141.

247. Wiesboeck R.A., Hawthorne M.F. Dicarbaundecaborane(13) and derivatives // J. Am. Chem. Soc. 1964. - V. 86. - P. 1642-1643.

248. Fox М.А., Gill P.L., Herbertson P.L., MacBride J.A.H., Wade К., Colquhoun H.M. Deboronation of C-substituted ortho- and meta-closo-carboranes using "wet" fluoride ion solutions // Polyhedron. 1996. - V. 15. - P. 565-571.

249. Fox M.A., Wade K. Deboronation of 9-substituted-ort/zo- and -me/a-carboranes // J. Organometal. Chem. 1999. - V. 573. - P. 279-291.

250. Svantesson E., Pettersson J., Olin A., Markides K., Sjoberg S. A kinetic study ofthe self-degradation of o-carboranylalanine to ш'с/o-carboranylalanine in solution // Acta Chem. Scand. 1999. - V. 53. - P. 731-736.

251. Патент Японии JP 58-72689. МКИ С 07 D 498/06. Pyridol,2,3-fife.-benzoxazine derivatives / Hayakawa I. et al. 30.04.83.

252. Oldham W., Johns I.B. Alpha-substituted tetrahydroquinolines // J. Am. Chem. Soc. 1939. - V. 61. - P. 3289-3291.

253. Сергиевская С.И., Волынский Н.П. ас-Тетрагидронафтойные кислоты и ас-тетрагидротионафтойные кислоты и их производные // Ж. Орг. X. 1952. -Т. 22.-С. 321-328.

254. Pravda Z., Rudinger J. Amino-acids and peptides. XIII. A synthesis of L-proline from L-glutamic acid // Coll. Czech. Chem. Commun. 1955. - V. 20. - P. 1-8.

255. Rudinger J., Podushka K., Zaoral M., Jost K. Amino-acids and peptides. XVI. An improved synthesis of L-glutamine // Coll. Czech. Chem. Commun. 1959. -V. 24.-P. 2013-2017.

256. Rudinger J. Amino-acids and peptides. X. Some derivatives and reactions of 1-/>-toluenesulphonyl-l-pyrrolid-5-one-2-carboxylic acid // Coll. Czech. Chem. Commun. 1954. - V. 19. - P. 365-374.

257. Nefkens G.H.L., Tesser G.I., Nivard R.J.F. A simple preparation of phthaloyl amino acids via a mild phthaloylation //Rec. Trav. Chim.-1960. -V. 79.-P. 688-698.

258. Atarashi S., Yokohama S., Yamazaki K., Sakano K., Imamura M., Hayakawa J. Synthesis and antibacterial activities of optically-active ofloxacin and its fluoromethyl derivative //Chem. Pharm. Bull. Jpn.- 1987.-V. 35.- P. 1896-1902.

259. Westman L. Resolution and configuration of 1,2,3,4-tetrahydro-l-naphtoic acid //ArkivKemi. 1958. - Bd. 12. - S. 161-166.1. БЛАГОДАРНОСТЬ ( L.

260. Данные элементного анализа получены сотрудниками группы элементногоанализа ИОС им. И.Я. Постовского УрО РАН под руководством к.х.н.1. Баженовой Л.Н.