Физико-химические особенности сорбции гетероциклических соединений природного и синтетического происхождения в условиях ОФ ВЭЖХ

Шафигулин, Роман Владимирович

Физико-химические особенности сорбции гетероциклических соединений природного и синтетического происхождения в условиях ОФ ВЭЖХ тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.04 ВАК РФ

Шафигулин, Роман Владимирович АВТОР

кандидата химических наук УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ

Самара МЕСТО ЗАЩИТЫ

2007 ГОД ЗАЩИТЫ

02.00.04 КОД ВАК РФ

Диссертация по химии на тему «Физико-химические особенности сорбции гетероциклических соединений природного и синтетического происхождения в условиях ОФ ВЭЖХ»

Автореферат диссертации на тему "Физико-химические особенности сорбции гетероциклических соединений природного и синтетического происхождения в условиях ОФ ВЭЖХ"

На правах рукописи

Шафигулин Роман Владимирович

ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ СОРБЦИИ ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ ПРИРОДНОГО И СИНТЕТИЧЕСКОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ В УСЛОВИЯХ ОФ ВЭЖХ

02.00.04 - физическая химия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата

химических наук

ООЗ 174375

Самара - 2007

003174375

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Самарский государственный университет»

Научный руководитель: доктор химических наук, профессор Буланова Анджела Владимировна

Официальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор Леванова Светлана Васильевна, зав кафедрой общего органического синтеза Самарского государственного технического университета

доктор химических наук Буряк Алексей Константинович, заведующий лабораторией физико-химических основ хроматографии и хромато-масс-спектроскопии Института физической химии и электрохимии им А Н Фрумкина РАН

Ведущая организация:

Московский государственный университет им. М. В. Ломоносова

Защита состоится «31 октября» 2007 г в 16^ на заседании диссертационного совета ДМ 212 218.04 при ГОУ ВПО «Самарский государственный университет» по адресу 443011, г Самара, ул Ак Павлова, д 1, зал заседаний

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУ ВПО «Самарский государственный университет»

Автореферат разослан «Л?»

Ученый секретарь

диссертационного совета, ^^¿м) ¿Щс-ъ — Бахметьева Л М

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Современные физико-химические исследования носят как фундаментальный, так и прикладной характер Изучение сорбции веществ различной природы развивает теорию адсорбции, позволяет глубже проникать в механизмы взаимодействия сорбатов с сорбентом Исследование сорбции веществ, обладающих биологической активностью имеет и очевидный прикладной характер, поскольку позволяет решить ряд важных практических задач выделения этих соединений из многокомпонентных растворов, в том числе и из биологических жидкостей

Современная химическая наука большое внимание уделяет методам получения высокоэффективных препаратов из природного сырья, применяющихся в медицине, фармакологии, пищевой промышленности К таким, в первую очередь, относятся флавоноиды, в частности, катехины -вещества, обладающие рядом полезных биологически активных свойств, таких как антиоксидантными, противомикробными, Р-витаминной активностью и др Исследования сорбции этих соединений из жидких растворов позволит разработать оптимальные методы концентрирования и выделения этих веществ из природных объектов, в частности, из чайного листа Кроме того, определенный практический интерес имеет разработка эффективных методов извлечения флавоноидов из чайной флеши и их препаративное разделение

В последние годы большой интерес химиков вызывает исследование физико-химических свойств гетероциклических азотсодержащих соединений, а также нахождение взаимосвязи между физико-химическими и структурными параметрами этих соединений Это обусловлено тем, что гетероциклические азотсодержащие соединения (азолы) обладают различными видами биологической активности, они являются активными компонентами многих лекарственных препаратов, химиками-синтетиками ведется поиск новых соединений, которые обладали бы специфической активностью, поэтому актуальность подобного рода исследований очевидна - их результаты позволят прогнозировать свойства соединений и осуществлять их направленный синтез

Цели и задачи исследования Целью настоящей работы явилось исследование физико-химических особенностей сорбции природных и синтетических гетероциклических соединений - флавоноидов, содержащихся в чае и впервые синтезированных имидазольных и триазольных производных бензойной кислоты на неполярном сорбенте в условиях обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ОФ ВЭЖХ)

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи

- разработать наиболее оптимальные способы извлечения флавоноидов (катехинов) из чайной флеши и подготовки пробы для ВЭЖХ - исследования,

- определить оптимальные условия хроматографического исследования катехинов и впервые синтезированных азольных производных бензойной кислоты,

получить корреляционные зависимости, в том числе и многопараметрические, между хроматографическим удерживанием, структурными и физико-химическими свойствами сорбатов,

-провести анализ существующих подходов к описанию сорбции в ОФ ВЭЖХ и определить наиболее адекватную модель, описывающую удерживание исследуемых соединений,

- оценить возможность препаративного выделения катехинов из жидких растворов

Научная новизна определяется тем, что изучена сорбция гетероциклических соединений природного и синтетического происхождения на неполярном сорбенте Установлены оптимальные условия их выделения из жидких многокомпонентных растворов Получены новые данные о хроматографическом поведении катехинов, содержащихся в чае, и впервые синтезированных азотсодержащих гетероциклических производных бензойной кислоты в режиме ОФ ВЭЖХ Оценено влияние природы и положение заместителей на закономерности хроматографического поведения исследуемых соединений Методом регрессионного анализа (<38Ш1) получены многопараметрические уравнения, связывающие фактор удерживания с физико-химическими и структурными параметрами исследуемых соединений, наиболее точно описывающие их хроматографическое поведение Определены оптимальные условия извлечения катехинов из чайной флеши и их препаративного разделения

- синтетиков, работающих в лаборатории фармакологических производств, для направленного синтеза гетероциклических азотсодержащих соединений с заданным биологическим действием

На защиту выносятся следующие положения:

- результаты исследования особенностей хроматографического поведения впервые синтезированных азотсодержащих гетероциклических производных бензойной кислоты и природных кислородсодержащих гетероциклических соединений (катехинов) в условиях ОФ ВЭЖХ,

- корреляционные зависимости между хроматографическим удерживанием исследуемых соединений, их физико-химическими и структурными параметрами,

- результаты расчетов по уравнениям, описывающим различные модели удерживания в зависимости от природы и состава подвижной фазы в ОФ ВЭЖХ,

- многопараметрические уравнения для расчета факторов удерживания веществ исследуемых классов соединений,

- результаты качественного и количественного хроматографического анализа 12 сортов чая, на содержание в них катехинов,

- результаты хромато - масс - спектрометрического исследования чайных экстрактов

Апробация работы и публикации. Основные результаты диссертационной работы доложены на Conference of Korean Chemical Society (Incheon, S Korea, 2005 г), Всероссийской конференции «Теория и практика хроматографии Применение в нефтехимии» (Самара, 2005 г), International Congress on Anahtical Sciences (ICAS-2006) (Москва, 2006 г), Всероссийской конференции «Техническая химия Достижения и перспективы» (Пермь, 2006 г), Международной конференции «Теоретические аспекты использования сорбционных и хроматографических процессов в металлургии и химической технологии» (Екатеринбург, 2006 г), X Международной конфренции «Теоретические проблемы химии поверхности, адсорбции и хроматографии» (Москва, 2006 г), 2-м Международном форуме (7 Международной конференции) «Актуальные проблемы современной науки» (Самара, 2006 г), Всероссийском симпозиуме «Хроматография в химическом анализе и физико -химических исследованиях» (Москва, 2007), XVI International Chemical Thermodynamics in Russia (RCCT 2007, Suzdal)

Часть работы была сделана лично соискателем в Инха университете г Инчон (Южная Корея) В 2007 году соискатель победил в областном конкурсе на предоставление грантов студентам, аспирантам и молодым ученым Материалы диссертации опубликованы в 14 научных публикациях Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, пяти глав, в которых представлены результаты теоретических и экспериментальных исследований, выводов, списка использованных литературных источников и Приложения

Материал диссертации изложен на 133 страницах, содержит 41 таблицу, 41 рисунок, список использованных источников из 147 наименований ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснованы актуальность и практическая значимость исследований, сформулированы цель и задачи, представлены основные научные результаты и положения, выносимые на защиту

Первая глава представляет собой обзор литературы и состоит из пяти частей В nil рассмотрена связь физико-химических параметров соединений с их хроматографическим удерживанием, приведены основные

термодинамические характеристики сорбции, которые вычисляются с использованием хроматографических методов В п 1 2 рассмотрены модели удерживания в жидкостной хроматографии, существующие на данный момент в научной литературе (Снайдера-Сочевинского, Скотта-Кучеры, Эльтекова и Ланина-Никитина), показаны области применимости этих моделей для различных соединений В п 1 3 обсуждается проблема установления взаимосвязи «структура-свойство» и «структура - активность» Показаны различные подходы к решению данной проблемы, ученых, занимающихся этой областью исследований, рассмотрены различные подходы количественного

описания структуры соединений В п 1 4 показана роль высокоэффективной жидкостной хроматографии в изучении взаимосвязи «структура - свойство» и «структура - активность», рассмотрены С^КЯ модели для прогнозирования факторов удерживания отдельных групп соединений В п 1 5 показана роль ВЭЖХ в анализе природных объектов, содержащих фенольные соединения На основе обзора литературы выявлены вопросы, требующие решения в рамках проблемы изучения физико-химии сорбции гетероциклических соединений природного и синтетического происхождения, исследования взаимосвязи «удерживание-физико-химическое свойство», а также развития теоретических моделей удерживания в ВЭЖХ и сформулирована цель настоящего исследования

Вторая глава включает описание объектов и методов исследования, а также методики проведенных экспериментов

В настоящей работе объектами исследования были природные кислородсодержащие гетероциклические соединения (катехины) и впервые синтезированные азотсодержащие гетероциклические производные бензойной кислоты В табл 1 и 2 представлены их структурные формулы

Таблица 1

Кислородсодержащие гетероциклические соединения (катехины)

№ название структура

1 (-)эпигаллокатехин (ЕОС) Л- он он Е<ЗС

2 (+)катехин ((+)С) он гУн он (+)С

3 (-)эпикатехин (ЕС) он гУн ЕС

4 (-)эпигаллокатехингаллат (БОСО) ЕОСО

5 (-)эпикатехингаллат (ЕСй) ОН сУ" он ЕСО

Таблица 2

Азотсодержащие гетероциклические производные бензойной кислоты

№ Название Формула

1 3 - [(2-метил-1 Н-имидазо л-1 -ил)метил] бензойная кислота ¿с» н2

2 4-[2-метил-1 Н-имидазол-1 -ил)метил]бензойная кислота он н2

3 4-( 1 Н-имидазол-1 -илметил)бензойная кислота н2

4 4-[2-метил-1 Н-бензимидазол-1 -ил)метил]бензойная кислота он

5 2-( 1 Н-имидазол-1 -илметил)бензойная кислота о^он Т н2 и О

6 3-(1Н-имидазол-1-илметил)бензойная кислота он н

7 метил 4-[2-метил-1Н-имидазол-1-ил)метил]бензоат н3с.0 н2

8 2-(1 Н-1,2,4-триазол-1 -илметил)бензойная кислота 8, ^

Основным методом исследования являлась ОФ ВЭЖХ Хроматографические эксперименты проводили с использованием следующих жидкостных хроматографов

- Милихром-1 (г Орел, Россия) со шприцевым насосом, с УФ -спектрофотометрическим детектором с диапазоном длин волн 190 - 360 нм Использовали хроматографическую колонку Ultrasep ES 100RP18 (120x4мм), с размером частиц 4 мкм

- Waters (США) с градиентным плунжерным насосом, с петлей — дозатором объемом 20 мкл, с УФ — спектрофотометрическим детектором с диапазоном длин волн 190 - 360 нм и программным обеспечением для обработки хроматографических данных Millenium (Waters) Применяли колонку Optimapak ОР С18 (250x4 6 мм, диаметр частиц 5 мкм)

- 1100 LCMSD фирмы Agilent Technologies (США), укомплектованного УФ-спектрофотометрическим (DAD), масс-спектрометрическим (MSD) детекторами и детектором по светорассеянию (PL-ELS-100 ELSD) Использовали колонку фирмы Phenomenex с силикагелем, модифицированным октадецильной фазой (С 18), размер частиц сорбента - 5 мкм, размер пор -100Á, длина колонки - 100мм, внутренний диаметр - 4,6 мм Скорость сканирования масс-детектора 0,6 сек/цикл по полному ионному току, при диапазоне масс 100-1000 аем В качестве источника ионизации использовали химическую ионизацию при атмосферном давлении (APCI)

Для изучения хроматографического поведения катехинов использовали стандартные соединения, произведенные фирмой Sigma (США), исследования проводили в изократическом и градиентном режимах В качестве органических модификаторов (растворитель - вода) использовали ацетонитрил, метанол и их смеси в различных соотношениях

Для изучения азотсодержащих гетероциклических производных бензойной кислоты применяли изократический режим хроматографирования Органическим модификатором являлся ацетонитрил

На основании данных хроматографического эксперимента определяли фактор удерживания и термодинамические характеристики адсорбции исследуемых соединений

Фактор удерживания ¿рассчитывали по формуле

'м

где tR и tu - время удерживания исследуемого соединения и несорбирующегося компонента (нитрита натрия), соответственно

Константу гиббсовской избыточной адсорбции K¡-c рассчитывали по уравнению

тг i Я и Ум 1 Ум

К wa s„

(2)

где Ум — объем подвижной фазы в колонке, ¡¥а - масса адсорбента в

колонке, г, sy¿ - удельная поверхность адсорбента, м2/г

Константу распределения адсорбата между подвижной объемной и

адсорбционной поверхностной фазами Кх рассчитывали по формуле

+ (3)

где VM и Va - объемы подвижной фазы и адсорбционной фазы, соответственно

Величину изменения стандартной дифференциальной мольной энергии Гиббса рассчитывали по формуле

&aU" =-RT ЫКХ (4)

Квантово-химические расчеты осуществляли с использованием программы HyperChem Professional 7 в рамках метода РМЗ с полной оптимизацией геометрии молекул В работе были рассчитаны значения молекулярного объема с учетом ван-дер-ваальсовых расстояний (Р), поляризуемости (а), площади поверхности молекул (S), значения дипольных моментов (ц), молекулярной рефракции (MR), логарифма коэффициента распределения в системе н-октанол-вода (lg Р)

В третьей главе исследовали закономерности удерживания азотсодержащих гетероциклических производных бензойной кислоты в условиях обращено-фазового варианта ВЭЖХ Экспериментально показано, что с увеличением содержания воды в подвижной фазе увеличивается удерживание этих соединений Высокой селективностью к изучаемым сорбатам обладает система с содержанием ацетонитрила в элюенте равным 15% Показано, что на хроматографическое удерживание влияет природа заместителей (табл 3) Установлено, что имидазольные производные бензойной кислоты вымываются из колонки быстрее триазольных производных По-видимому, с увеличением числа атомов азота в молекуле, приводящему к повышению электронной плотности в азольном кольце, усиливаются дисперсионные взаимодействия с неполярным сорбентом Производные бензимидазола выходят из колонки медленнее производных имидазолов Это, очевидно, связано с тем, что в молекулу азола вводится дополнительная 6л - электронная система, что увеличивает дисперсионные взаимодействия с октадецильными группами неподвижной фазы

Таблица 3

Изменение факторов удерживания производных бензойной кислоты (п ф

ACN/H20 (15/85) об %)

Структура к

он о1^НзС 0,409

он 3,427

сфъ. 5,108

На хроматографическое удерживание влияет положение функциональных групп в молекуле Замечено, что сорбаты несимметричного строения вымываются медленнее, чем симметричного (табл 4 )

Таблица 4

Факторы удерживания о-, м- и п-изомеров имидазольных производных

бензойной кислоты (п < |> АСЫ/НгО (15/85) об %)

Структура к

оХасх> нг 0,261

он н2 0,500

V"* 0,468

На основании значений факторов удерживания рассчитаны величины изменения стандартной дифференциальной мольной энергии Гиббса адсорбции &аО° гетероциклических азотсодержащих бензойной кислоты (табл 5)

Таблица 5

Изменение стандартной дифференциальной мольной энергии Гиббса адсорбции

№ - Д „о" ,Дж/моль

Подвижные фазы (вода/ацетонитрил)

60/40 70/30 75/25 80/20 85/15

3 498 766 999 1199 1550

2 730 897 1179 1514 2129

5 668 959 1214 1546 2327

6 902 1101 1451 1875 2429

1 1153 1309 1519 1926 3073

7 1505 2059 2737 3037 4023

4 1817 2211 3206 4001 6239

8 2222 2785 3706 4756 7161

Примечание нумерация соединений соответствует нумерации табл 2

Изменение стандартной дифференциальной мольной энергии Гиббса для всех азотсодержащих гетероциклических производных бензойной кислоты отрицательные, что говорит о смещении равновесия в сторону процесса сорбции исследуемых соединений на неполярной поверхности из полярного растворителя

Модель Снайдера — Сочевинского представлена в виде линейного уравнения \%к = а-п'\%Хм, где п' - отношение площадей молекулы сорбата и наиболее сильно сорбирующегося компонента подвижной фазы в сорбционном слое

Для имидазольных производных п'~ 1, а для производных бензимидазола и триазола п' ~ 2. Это в первом приближении означает, что одна молекула производных имидазола вытесняет одну молекулу ацетонитрила, а производные бензимидазола и триазола — по две. Исходя из значений п\ предполагаем, что молекулы сорбатов ориентированы азольными кольцами к поверхности неполярного сорбента. На рис.1 представлены зависимости в координатах уравнения Скотта-Кучеры (1/к-Хт).

Рис. 1. Зависимость обратной величины фактора удерживания (J/k) от мольной доли ацетонитрила в подвижной фазе (Хт) (0.05<Хт <0.19)

Из рис.1 видно, что для всех соединений наблюдаются сильные отклонения от линейной зависимости при концентрациях ацетонитрила Хт>0.08. Видно, что зависимости выпуклые и это свидетельствует о сильных специфических взаимодействиях между молекулами компонентов подвижной фазы в этой области концентраций органического модификатора. Рассмотрены данные по удерживанию азотсодержащих гетероциклических производных бензойной кислоты в системе С18 - ацетонитрил - вода в рамках модели Эльтекова где в качестве характеристики удерживания используется константа распределения Кх. В табл. 6 представлены значения

Кх.

Таблица 6

Константа распределения Кх азотсодержащих гетероциклических производных бензойной кислоты между поверхностным и объемным

растворами в системе С18-ацетонитрил-вода

№ Кх

Подвижные фазы (вода/ацетонитрил)

60/40 70/30 75/25 80/20 85/15

3 1,223 1,363 1,497 1,623 1,870

2 1,343 1,437 1,610 1,843 2,363

5 1,310 1,473 1,633 1,867 2,560

6 1,440 1,560 1,797 2,133 2,667

1 1,593 1,697 1,847 2,177 3,460

7 1,837 2,297 3,020 3,410 5,077

4 2,083 2,443 3,650 5,033 12,423

8 2,453 3,080 4,467 6,827 18,027

Закономерности изменения констант распределения Кх аналогично изменению факторов удерживания к исследуемых соединений Подход, предлагаемый Эльтековым, дает более подробную информацию о механизме сорбции соединений в ОФ ВЭЖХ При условии образования монослоя постоянного состава на поверхности сорбента получено уравнение

1пКх=г-т \пХт-п 1п(1-Хт) где Хт - мольная доля органического модификатора в подвижной фазе, т и и - число молекул модификатора и основного компонента в подвижной фазе, вытесняемое одной молекулой сорбата

В системе С18-ацетонитрил-вода для исследуемых гетероциклических азотсодержащих производных бензойной кислоты п>т, что свидетельствует о большом содержании молекул воды в сорбционном слое и процесс сорбции носит конкурентный характер

Для оценки применимости модели Эльтекова построены зависимости ^¿Кх от величины -[т^Хт + п^(1-Х„)] Эти зависимости линейные, что подтверждает адекватность данной модели для описания процессов сорбции азотсодержащих гетероциклических производных бензойной на неполярной поверхности из полярного растворителя

В работе построены и проанализированы корреляции типа у = а + Ьх (где х

- структурные или физико - химические параметры сорбатов, а, Ь -коэффициенты) фактора удерживания для хроматографической системы с 15%

- ым содержанием ацетонитрила в подвижной фазе с физико-химическими и структурными параметрами азотсодержащих гетероциклических производных бензойной кислоты Замечено, что индексы Рандича низших порядков коррелируют с фактором удерживания лучше, чем индексы Рандича высших порядков (рис 2)

|дк °х |д К 'X

Рис 2 Зависимость между фактором удерживания азотсодержащих гетероциклов (п ф ACN/H20 (15/85) % об) и а) индексом связанности Рандича нулевого порядка (°х), б) индексом связанности Рандича первого порядка (Jx)

Наблюдается корреляционная зависимость между фактором удерживания и поляризуемостью гетероциклических азотсодержащих производных бензойной кислоты, что свидетельствует о превалирующем вкладе в процесс сорбции дисперсионных взаимодействий исследуемых соединений с неполярной неподвижной фазой (рис 3)

Рис.3. Зависимость логарифма фактора удерживания от поляризуемости.

Для увеличения предсказательной способности факторов удерживания использовали многопараметрические корреляционные зависимости. Рассматривали все возможные многопараметрические уравнения вида:

где у- параметр удерживания, а0,а/ - коэффициенты, определяемые методом наименьших квадратов, х, - молекулярные дескрипторы.

В таблице 7 приведены некоторые многопараметрические уравнения для азотсодержащих гетероциклических соединений.

Таблица 7

Многопараметрические уравнения для азольных производных бензойной кислоты, коэффициент корреляции (г) и стандартное

отклонение^)

Корреляционное уравнение г э

lgk = -9.182+0.834Vl•046lx+O.B14¿x+0■002VO•0014x-0•02W 0.983 0.085

^к = 0.073+0.563(1-1.29а 0.987 0.074

1§к=-2.892+0.142(д.+0.1891§Р+0.03 2МЯ 1 0

1§к=-5.106+0.244ц+0.0731§Р+0.563МЕ1-1.289а 1 0

^к = 0.356 +1.287Ух-0.04,х+0.003^0-0013х-0.014%+0.152а 1 0

Можно сделать вывод о том, что с увеличением числа параметров в многопараметрическом уравнении коэффициенты корреляции повышаются. Использование в многопараметрическом уравнении в качестве параметров только топологические индексы не может быть достигнута хорошая корреляция. Включение в уравнение вместо одного топологического индекса какое - либо физико - химическое свойство молекулы повышает коэффициент корреляции до 1. Для азотсодержащих гетероциклических производных

бензойной кислоты важными параметрами являются дипольный момент, поляризуемость, фактор гидрофобности и молекулярная рефракция. Введение этих параметров в многопараметрические уравнения достигается коэффициент корреляции 1. На основании полученных многопараметрических уравнений рассчитали факторы удерживания азольных производных бензойной кислоты и сравнили их с экспериментальными значениями (рис.4.).

02-

О.

X 0.0 -0.2-0.4 -

1дк=-5.106+0.244ц+0.0731дР+0.563МЯ-1,289а г=0.99

-0.6 -0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4

№са!

1дк=-2.892+0.142м+0.1891дР+0.032МК г=0.97

-0.6 -0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4

'Э^са!

Рис. 4. Зависимость между экспериментальными кехр) и расчетными (^кса,) значениями факторов удерживания: а) четырехпараметрическое уравнение; б) трехпараметрическое уравнение.

В четвертой главе обсуждаются результаты исследований хроматографического поведения катехинов в условиях ОФ ВЭЖХ и проанализировано влияние природы заместителей и элюента на характер сорбции.

Показано, что если в качестве модификатора применяли метанол, время выхода катехинов увеличивалось и становилось значительно больше, чем при разделении этой же смеси с использованием модификатора ацетонитрила. Это объясняется более сильными специфическими взаимодействиями с образованием водородной связи между молекулами воды и метанола, нежели, чем между молекулами воды и ацетонитрила.

На рис. 5 представлены хроматограммы разделения смеси стандартных катехинов с одинаковой концентрацией воды и различными органическими модификаторами в подвижной фазе в изократическом режиме. Из рисунка видно, что порядок элюирования веществ остается постоянным при использовании различных органических модификаторов, однако время выхода соединений из колонки заметно различается.

I H2Q/ACN (80/20) |

EC EG CG ECG

H2Q/MeOH (80/20) |

lJu

Time (min)

Time (min) 6)

80/10/10(H2O/MeOH/ACN)

30 40

В)

Рис.5. Хроматограммы разделения стандартных катехинов с различными органическими модификаторами: а) вода/ацетонитрил(80/20); б) вода/метанол(80/20); в) вода/метанол/ацетонитрил(80/10/10).

В табл. 8 представлены термодинамические характеристики сорбции катехинов в хроматографических системах с использованием различных органических модификаторов.

Таблица 8

Хроматографическое удерживание и термодинамические характеристики адсорбции катехинов в системах С18-ацетонитрил-вода и С18-метанол-вода

Соединения ацетонитрил/вода(20/80) метанол/вода (20/80)

к Кг.сЮ3 см3/м2 кх AaG° кДж/моль к Кг.с'Ю3 см3/м2 Кх А Л° кДж/моль

EGC 0,10 0,53 1,43 -0,88 1.17 7.02 6.78 -4.74

(+)С 0,21 1,06 1,85 -1,52 1.43 8.56 8.04 -5.16

ЕС 0,42 2,25 2,80 -2,55 3.24 19.4 17.01 -7.02

EGCG 0,46 2,46 2,97 -2,69 4.77 28.6 24.58 -7.93

ECG 1,52 8,00 7,45 -4,97 12.16 72.9 61.07 -10.2

Нетрудно видеть, что сорбция катехинов из бинарного растворителя ацетонитрил-вода гораздо меньше, чем из растворителя метанол-вода. Это связано с тем, что молекула ацетонитрила более гидрофобна по сравнению с молекулой метанола. Менее гидрофобные молекулы метанола легче

вытесняются из сорбционного слоя молекулами катехинов, чем молекулы ацетонитрила, что приводит к увеличению сорбции и, следовательно, величин хромато графического удерживания. Эпикатехингаллат (ЕСв) имеет наибольшие характеристики сорбции. Это, очевидно, связано с большими значениями параметра гидрофобности и поляризуемости (1§Р=6.11, а=42.14) эпикатехингаллата (ЕСв) по сравнению с другими исследуемыми катехинами, а именно эти два физико — химических параметра отвечают за вклад дисперсионных взаимодействий сорбатов с неполярным сорбентом.

Рассмотрено применение моделей удерживания в ЖХ для катехинов. Модель Снайдера — Сочевинского описывается линейным уравнением \%к = а-п'\%Хт, где п' - отношение площадей молекулы сорбата и наиболее сильно сорбирующегося компонента подвижной фазы в сорбционном слое (органического модификатора); Хт - мольная доля органического модификатора. Расчеты показали, что для всех исследуемых катехинов п' ~ 3. Это означает, что молекулы всех исследованных катехинов вытесняют с поверхности сорбента 3 молекулы органического модификатора, что свидетельствует об одинаковом механизме сорбции этих соединений из водных растворов, модифицированными метанолом и ацетонитрилом. Полагаем, что молекулы сорбатов ориентированы к неполярному сорбенту конденсированными ядрами (хромановым остовом).

Модель Скотта-Кучеры описывается уравнением 1^ = А + В ■ Хт, где А, В -константы; Хт- концентрация органического модификатора). На рис.6 представлены зависимости в координатах уравнения Скотта-Кучеры (1/к-Хт) (рис. 6).

а б

Рис.6. Зависимость обратной величины фактора удерживания (1/к) катехинов от мольной доли органического модификатора в подвижной фазе Хт\ а) ацетонитрил; б) метанол.

Из рисунка 6 видно, что для исследуемой области концентраций органических модификаторов в подвижной фазе линейная зависимость выполняется только для эпикатехингаллата (ЕСв), что свидетельствует о слабых специфических взаимодействиях данного сорбата с органическим модификатором. Это связано, по-видимому, с тем, что эпикатехингаллат (ЕСв) обладает большой поляризуемостью (а = 42.14) и соответственно более склонен

вступать в дисперсионные взаимодействия с неполярной неподвижной фазой, чем другие исследованные катехины Для остальных катехинов зависимости 1/к-Хт являются вогнутыми Это свидетельствует о том, что они взаимодействуют с подвижной фазой, образуя ассоциаты

Рассматривая модель Эльтекова получили, что при использовании в качестве модификатора метанол т>п для всех изучаемых катехинов, т е конкурентная сорбция осуществляется за счет вытеснения из сорбционного слоя молекул метанола Можно предположить, что поверхностный слой сорбента содержит больше молекул метанола, по сравнению с молекулами воды В системе С18 - ацетонитрил-вода п>т для всех катехинов, что свидетельствует о том, что поверхностный слой сорбента содержит в основном молекулы воды и катехины вытесняют из сорбционного слоя в большей степени воду Этот процесс является определяющим в сорбции катехинов из этого элюента на неполярном сорбенте

В работе найдены зависимости фактора удерживания от различных структурных и физико-химических параметров молекул исследуемых катехинов Получены уравнения для какого-либо одного параметра (однопараметрические уравнения) и для нескольких параметров (многопараметрические уравнения). Расчетные значения факторов удерживания сравнивали с экспериментальными и находили корреляции между ними Проанализированы однопараметрические корреляции типа y = a + b х (где х - структурные и физико - химические параметры, а,Ъ-коэффициенты), у - факторы удерживания катехинов Коэффициенты корреляции для таких зависимостей не превышает 0 9 На рис 7 представлены зависимости lgk стандартных катехинов от индекса Рандича первого порядка и фактора гидрофобности

1 31« | 1=0 770 | 1319 ..........................................tté" | r=0 833 j *

0.713 0.614 Q 290 ЕС EGCG § 0 713 0.614 0290 EGCG EC

0 08' EGC 00« EGC

6.36904 8 33027 1 83 5 82

a b

Рис 7 Зависимость между фактором удерживания катехинов (ACN/H20, 10/90) и а) индексом Рандича первого порядка ('%), Ь) фактором гидрофобности (lgP)

Наличие корреляционной зависимости фактора удерживания с величиной фактора гидрофобности свидетельствует о превалирующем вкладе

дисперсионных взаимодействий в процесс сорбции катехинов на неподвижной неполярной фазе из полярных растворителей

Многопараметрические уравнения имеют вид линейного уравнения

типа

1=1

где у- параметр удерживания, а0,а, - коэффициенты, х, молекулярные дескрипторы

Замечено, что с увеличением количества независимых параметров в полипараметрических уравнениях корреляция в целом повышается Однако если в качестве независимых параметров многопараметрических уравнений использовать только топологические индексы исследуемых сорбатов, то коэффициент корреляции не достигает значения равного 1 Это, по-видимому, связано с тем, что соединения, определяющие эту корреляционную зависимость, содержат 2 диастереоизомера (эпикатехин и (+))катехин) у которых одинаковые значения топологических индексов Объем молекул связан более тесно с пространственным строением катехинов (в частности, диастереоизомеров) и является важным физико -химическим свойством исследуемых молекул Использование объема в качестве одного из независимых параметров в полипараметрических уравнениях совместно с топологическими индексами позволяет повысить предсказательную способность этих уравнений для расчета факторов удерживания данного класса соединений Наряду с объемом важными физико - химическими свойствами катехинов являются дипольный момент, поляризуемость, молекулярная рефракция и фактор гидрофобности Использование их в многопараметрических уравнениях совместно с топологическими индексами также позволяет улучшить корреляцию

В табл 9 приведены некоторые многопараметрические уравнения, а также некоторые статистические данные

Таблица 9

Многопараметрические уравнения для катехинов, коэффициент _корреляции (г) и стандартное отклонение (э) _

Корреляционное уравнение г Б

1§к=0 003+0 05'х+0 0022%+0 001V 0 002\¥+0 782^Р 0 941 0 227

^к = 0 001+0 002 'х+0 05 2%-0 005 3Х+1 499^^+0 597ц 0 999 0 014

1ёк=13 643+1 7^+0 649ц-0 бЗЗМЯ+О 27а+0 032V - 0 018ег 1 0

1йк = 9 771+1 4831йР+0 274ц-0 179МЫ 0 999 0 014

На рис 8 представлены корреляции между расчетными и экспериментальными значениями факторов удерживания

1дк=13 643*! 71дР+О.643ц-0.ЙЗзМК*О 27а*0 0327-0 015дг

(дк=9.771 +1 483|дР+0,274ц - 0.179МР<

ес,-'' Ьсо

а) б)

Рис.8. Зависимость между экспериментальными (1§ксхр) и расчетными (1§кса1) значениями факторов удерживания: а) шестипараметрическое уравнение; б)трехпараметрическое уравнение.

Проведен качественный и количественный анализ катехинов в различных сортах чая. Всего в работе исследовалось 12 сортов чая, различного происхождения. На рис.9 представлены хроматограммы разделения некоторых сортов чая исследованных в настоящей работе. На рис.10 представлена сравнительная диаграмма содержания катехинов в различных сортах чая. Зеленый чай содержит большое количество катехинов, в отличие от других видов чая. Это связано с тем, что зеленый чай производится без ферментации, тогда, как другие исследуемые сорта чая подвергаются частичной или полной ферментации.

ли

Рис. 9. Хроматограммы некоторых чайных экстрактов: а) китайский зеленый чай; Ь) корейский зеленый чай; с) черный чай (Пуэр).

Teas

Рис. 10. Сравнительная диаграмма общего содержания катехинов в некоторых сортах чая: 1- китайский зеленый; 2- корейский зеленый; 3- лунзцин; 4-улун(оолонг); 5- тегуанинь; 6- цветочный;7- бамбуковый; 8- жасминовый; 9-красный; 10- черный цейлонский; 11- пуэр (черный тибетский).

В пятой главе обсуждены результаты масс-спектрометрического анализа чайной флеши для выявления фракций, которые можно выделить препаративно. На рисунке 11 представлена хроматограмма чайного экстракта с масс-спекрометрическим детектором.

Рис. 11. Хроматограмма чайного экстракта.

В масс-спектрах химической ионизации основными пиками являются пики ионов, которые больше чем масса исходных молекул на 1 единицу. Для исследуемых катехинов молекулярные ионы должны иметь следующие значения m/z : 443, 307, 459, 291, 291. На основании эксперимента можно предположить наличие всех исследуемых нами катехинов в чайном экстракте. Интенсивность пиков для эпигаллокатехина, эпикатехингаллата и эпигаллокатехингаллата высокая, но препаративному выделению мешают неидентифицированные компоненты, присутствующие в данной области хроматограммы.

На рисунке 12 представлена хроматограмма с масс - спектром наиболее чистой фракции чайной флеши, которая пригодна для дальнейшего препаративного выделения. Из рисунка видно, что это соединение имеет m/z 291 (эпикатехин (ЕС)) которому соответствует осколочный ион с m/z 195.

MSD1 TIC, MS File (O:\COMMONIHPLaREPORT~2iTB1BA-0201.D) APCI, Pos, Scan, Frag: 80

1000000060000006000000 4000000 2000000-

'M3D1 SPC, öme=3.18b:3.7SS of O:\COMMON\HPLC\REPORT Мак: 197431

MSD1 195, EIC-194.7:195.7 (OiCOMMCWHPLQREPORT-Z. MSD1 196, Е1С=195.7:196.7 (O:\COMMON\HPLC\REPORT~2v

8Е6-

6Е6-4Е6- \

2Е6- ____

3.4 3.6

Рис. 12. Масс-спектр вещества со значением m/z 291.

ВЫВОДЫ

1. Исследование сорбции азотсодержащих гетероциклических производных бензойной кислоты методом ВЭЖХ на неполярном сорбенте показало, что наиболее избирательно этот процесс протекает при соотношении компонентов бинарной подвижной фазы ацетонитрил/вода (15/85 % об.) в изократическом режиме. Сорбция смеси катехинов на неполярном сорбенте характеризуется наибольшей разницей в константах Генри этих соединений, включая диастереоизомеры - (+) катехин и ЭПЧ Катехин, также на бинарной подвижной фазе ацетонитрил/вода в изократическом режиме (10/90 % об.).

2. Оценено влияние природы заместителей, а также их положения на закономерности изменения хроматографического удерживания и физико-химических характеристик сорбции исследуемых гетероциклических соединений. Установлено, что эти параметры определяются основностью атома азота гетероцикла, изменением электронной плотности на карбонильных и гидроксильных группах, степенью их экранирования, а также вкладом других заместителей, влияющих на межмолекулярные взаимодействия с сорбентом и бинарной подвижной фазой.

3. Получены зависимости, связывающие фактор удерживания веществ с параметрами, характеризующими строение молекул. Показано, что корреляционные модели на основе многопараметрических уравнений более корректно описывают процессы, чем однопараметрические уравнения и могут использоваться при прогнозировании хроматографического разделения, физико-химических свойств исследуемых кислород- и азотсодержащих гетероциклических соединений.

в качестве параметров только топологических индексов не позволяет достичь высокого коэффициента корреляции Коэффициенты корреляции этих уравнений существенно увеличиваются с использованием в качестве переменных физико-химических параметров, таких как, дипольный момент, молекулярная рефракция, поляризуемость и объем молекул исследуемых соединений

5 Существующие модели удерживания веществ в ОФ ВЭЖХ удовлетворительно описывают сорбцию исследуемых соединений из многокомпонентных жидких растворов и физико-химические особенности этого процесса С использованием подхода Ю А Эльтекова показано, что процесс сорбции исследуемых соединений носит конкурентный характер

6 Разработан метод подготовки пробы для хроматографического анализа катехинов, содержащихся в чае и определены условия их разделения, заключающиеся в следующем. подвижная фаза -ацетонитрил/вода с линейным градиентом ацетонитрила от 10 до 30 % об ,в течение 30 минут

7 ВЭЖХ — МС анализ экстрактов чайной флеши показал, что в условиях линейного градиента концентрации ацетонитрила в воде от 2 5 до 100 об % можно препаративно выделить все исследуемые компоненты, но наиболее полно выделяется фракция с молекулярной массой 290, что соответствует эпикатехину (ЕС)

Публикации по теме диссертации

Работы, опубликованные в ведущих рецензированных журналах, определенных ВАК

1 Шафигулин Р В , Буланова А В, Ларионов О Г, Ро К X ВЭЖХ анализ экстрактов зеленого и черного чая различного происхождения// Сорбционные и хроматографические процессы, Т 6, Вып 6, 2006, С 1365-1369

2 Шафигулин Р В, Буланова А В , Ро К X. Хроматографический анализ флавоноидов, содержащихся в чае // Сорбционные и хроматографические процессы, Т 6, Вып 5,2006, С 844-850

3 Шафигулин Р В , Буланова А В Ро К X Качественное и количественное содержание катехинов в различных сортах чая // Сорбционные и хроматографические процессы, Т 7, Вып 2, 2007, С 349-352

4 Шафигулин Р В , Буланова А В ВЭЖХ частично ферментативных сортов чая // Вестник СамГУ, №2 (52), 2007, С 134-139

Работы, опубликованные в других журналах и зданиях

5 Шафигулин Р В , Егорова К В , Буланова А В Структурно-сорбционные характеристики полифенольных соединений // Всероссийская конференция «Техническая химия Достижения и перспективы» Пермь, 5-9 июня, 2006, С 418-421

6 Guanghua Li, Roman Shafiguhn, Youn-Woo Lee, and Kyung Ho Row, Separation of catechm compounds from teas using RP-HPLC / Conference of Korean Chemical Society,Incheon, October 20, 2005, P 80

7 R V Shafiguhn, N V Komissarova, A V Bulanova, К H Row, Chromatographic analysis of tea / International Congress on Analytical Sciences (ICAS-2006), Russia, Moscow, June 25-30, P 221-222

8 P В Шафигулин, А В Буланова, Ю JI Полякова Качественный анализ некоторых флавоноидов в экстрактах зеленого чая методом ВЭЖХ // Всероссийская конференция, "Теория и практика хроматографии Применение в нефтехимии" Самара, 3-8 июля 2005 г С 178

9 Шафигулин Р В , Буланова А В Анализ различных сортов чая методом ВЭЖХ // Тезисы докладов международной конференции "Теоретические аспекты использования сорбционных и хроматографических процессов в металлургии и химической технологии" Екатеринбург, 31 октября-2 ноября, 2006, С 54

10 Шафигулин РВ, Буланова АВ, Ро КХ ВЭЖХ флавоноидов, содержащихся в чае // X Международная конференция "Теоретические проблемы химии поверхности, адсорбции и хроматографии" Москва, 24-28 апреля, 2006, С 238

11 Шафигулин Р В , Наследов В В Хроматографическое препаративное выделение компонентов чая // Труды 2 — го Международного форума молодых ученых (7-й Международной конференции) "Актуальные проблемы современной науки" Часть 10, Самара, 20-23 ноября, 2006, С 46-47

12 Шафигулин РВ, Буланова А В Физико -химические особенности удерживания катехинов в ОФ ВЭЖХ // Всероссийский симпозиум "Хроматография в химическом анализе и физико-химических исследованиях" Москва, 23-27 апреля, 2007, С 9

13 Polykova U.L, Bulanova А V, Ro К С , Shafiguhn R V Research peptydes by HPLC method // Russian international conference on chemical thermodynamics Moscow, June 27-July 2, 2005 P 165

14 Шафигулин P В, Буланова А В Термодинамические характеристики сорбции некоторых флавоноидов, определенные методом ВЭЖХ // XVI International Chemical Thermodynamics m Russia (RCCT 2007), Suzdal, July 16, 2007, P 402

Подписано в печать «11» сентября 2007 г. Формат 60x84/16 Бумага офсетная Печать оперативная Объем 1,5 п л Тираж 100 экз Заказ №_/42/_ 443011 г Самара, ул Академика Павлова, 1 Отпечатано УОП СамГУ

Содержание диссертации автор исследовательской работы: кандидата химических наук, Шафигулин, Роман Владимирович

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Связь физико-химических параметров веществ с хроматографическим удерживанием.

1.2. Механизмы удерживания в условиях высокоэффективной жидкостной хроматографии.

1.3. Проблема установления взаимосвязи «структура - свойство».

1.3.1. Дескрипторы молекулярной структуры.

1.3.2. Дескрипторы структурной формулы.

1.3.3. Дескрипторы электронной структуры молекул.

1.3.4. Дескрипторы межмолекулярных взаимодействий.

1.4. ВЭЖХ в анализе корреляционных зависимостей «хроматографическое удерживание - физико-химическое свойство -структура».

1.5. ВЭЖХ в анализе соединений фенольной природы.

ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

2.1. Объекты исследования.

2.1.1. Структурные особенности флавоноидов.

2.1.2. Структурные особенности азолов.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Метод хроматографии.

2.2.1.1. Методика эксперимента.

2.2.2. Квантово - химические методы.

2.2.3. Методики расчета топологических индексов.

2.3. Методика экстракции катехинов из чайной флеши.

2.4. Математическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ЗАКОНОМЕРНОСТИ СОРБЦИИ АЗОТСОДЕРЖАЩИХ ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ В УСЛОВИЯХ ОФ ВЭЖХ.

3.1. Влияние условий хроматографирования и структуры сорбатов на удерживание азотсодержащих гетероциклических соединений.

3.2. Применимость различных моделей удерживания в ОФ ВЭЖХ к описанию хроматографического поведения азотсодержащих гетероциклических производных бензойной кислоты.

3.3. Корреляционные зависимости «хроматографическое удерживание - структура - физико-химическое свойство» для исследуемых азотсодержащих гетероциклических производных бензойной кислоты.

ГЛАВА 4. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ЗАКОНОМЕРНОСТИ СОРБЦИИ

КИСЛОРОДСОДЕРЖАЩИХ ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИХ

СОЕДИНЕНИЙ (КАТЕХИНОВ) В УСЛОВИЯХ ОФ ВЭЖХ.

4.1. Влияние условий хроматографирования и структуры сорбатов на удерживание кислородсодержащих гетероциклических соединений (катехинов).

4.2. Применимость различных моделей удерживания в ОФ ВЭЖХ к описанию хроматографического поведения катехинов.

4.3. Корреляционные зависимости «хроматографическое удерживание - структура - физико-химическое свойство» для исследуемых кислородсодержащих гетероциклических соединений.

4.4. Высокоэффективная жидкостная хроматография в анализе чайных экстрактов, содержащих катехины.

ГЛАВА 5. ХРОМАТО - МАСС - СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКОЕ

ИССЛЕДОВАНИЕ ЧАЙНЫХ ЭКСТРАКТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертация по химии, на тему "Физико-химические особенности сорбции гетероциклических соединений природного и синтетического происхождения в условиях ОФ ВЭЖХ"

Актуальность работы. Современные физико-химические исследования носят как фундаментальный, так и прикладной характер. Изучение сорбции веществ различной природы развивает теорию адсорбции, позволяет глубже проникать в механизмы взаимодействия сорбатов с сорбентом. Исследование сорбции веществ, обладающих биологической активностью имеет очевидный прикладной характер, поскольку позволяет решить ряд важных практических задач выделения этих соединений из многокомпонентных растворов, в том числе и из биологических жидкостей.

Современная химическая наука большое внимание уделяет методам получения высокоэффективных препаратов из природного сырья, применяющихся в медицине, фармакологии, пищевой промышленности. К таким, в первую очередь, относятся флавоноиды, в частности, катехины -вещества, обладающие рядом полезных биологически активных свойств, такими как антиоксидантные, противомикробные, Р-витаминной активностью и др. Исследования сорбции этих соединений из жидких растворов позволит разработать оптимальные методы концентрирования и выделения этих веществ из природных объектов, в частности, из чайного листа. Кроме того, определенный практический интерес имеет разработка эффективных методов извлечения флавоноидов из чайной флеши и их препаративное разделение.

В последние годы большой интерес химиков вызывает исследование физико-химических свойств гетероциклических азотсодержащих соединений, а также нахождение взаимосвязи между физико-химическими и структурными параметрами этих веществ. Такой интерес обусловлен тем, что гетероциклические азотсодержащие соединения (азолы) обладают различными видами биологической активности и являются активными компонентами многих лекарственных препаратов. Химиками-синтетиками ведется поиск новых соединений, которые обладали бы специфической активностью, поэтому актуальность подобного рода исследований очевидна -их результаты позволят прогнозировать свойства соединений и осуществлять направленный синтез веществ с заданным биологическим действием.

Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось исследование физико-химических особенностей сорбции природных и синтетических гетероциклических соединений - флавоноидов, содержащихся в чае и впервые синтезированных имидазольных и триазольных производных бензойной кислоты на неполярном сорбенте в условиях обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ОФ ВЭЖХ)

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- разработать наиболее оптимальные способы извлечения флавоноидов (катехинов) из чайной флеши и подготовки пробы для ВЭЖХ - исследования;

- определить оптимальные условия хроматографического исследования катехинов и впервые синтезированных азольных производных бензойной кислоты;

- определить физико-химические параметры сорбции исследуемых соединений на неполярном сорбенте и провести квантово-химические расчеты свойств молекул изучаемых веществ; получить корреляционные зависимости, в том числе и многопараметрические, между хроматографическим удерживанием, структурными и физико-химическими свойствами сорбатов;

-провести анализ существующих подходов к описанию сорбции исследуемого класса веществ в ОФ ВЭЖХ и определить наиболее адекватную модель, описывающую удерживание исследуемых соединений;

- оценить возможность препаративного выделения катехинов из жидких растворов.

Научная новизна определяется тем, что изучена сорбция гетероциклических соединений природного и синтетического происхождения на неполярном сорбенте. Установлены оптимальные условия их выделения из жидких многокомпонентных растворов. Получены новые данные о хроматографическом поведении катехинов, содержащихся в чае, и впервые синтезированных азотсодержащих гетероциклических производных бензойной кислоты в режиме ОФ ВЭЖХ. Оценено влияние природы и положение заместителей на закономерности хроматографического поведения исследуемых соединений. Методом регрессионного анализа (QSRR) получены многопараметрические уравнения, связывающие фактор удерживания с физико-химическими и структурными параметрами исследуемых соединений, наиболее точно описывающие их хроматографическое поведение. Определены оптимальные условия извлечения катехинов из чайной флеши и их препаративного разделения.

Практическая значимость работы. Полученные данные позволят выделять катехины из жидких многокомпонентных смесей, прогнозировать и оптимизировать хроматографическое разделение и идентификацию веществ изученных классов соединений. Результаты исследования полезны для химиков - синтетиков, работающих в лаборатории фармакологических производств, для направленного синтеза гетероциклических азотсодержащих соединений с заданным биологическим действием.

На защиту выносятся следующие положения:

- корреляционные зависимости между хроматографическим удерживанием исследуемых соединений, их физико-химическими и структурными параметрами;

- результаты расчетов по уравнениям, описывающим различные модели удерживания в зависимости от природы и состава подвижной фазы в ОФ ВЭЖХ;

- многопараметрические уравнения для расчета факторов удерживания веществ исследуемых классов соединений;

- результаты качественного и количественного хроматографического анализа 12 сортов чая, на содержание в них катехинов;

- результаты хромато - масс - спектрометрического исследования чайных экстрактов.

Заключение диссертации по теме "Физическая химия"

ВЫВОДЫ

1. Исследование сорбции азотсодержащих гетероциклических производных бензойной кислоты методом ВЭЖХ на неполярном сорбенте показало, что наиболее избирательно этот процесс протекает при соотношении компонентов бинарной подвижной фазы ацетонитрил/вода (15/85 % об.) в изократическом режиме. Сорбция смеси катехинов на неполярном сорбенте характеризуется наибольшей разницей в константах Генри этих соединений, включая диастереоизомеры - (+) катехин и эпикатехин, также на бинарной подвижной фазе ацетонитрил/вода в изократическом режиме (10/90 % об.).

4. QSRR - подход позволяет корректно описать взаимосвязь физико-химических и структурных характеристик с фактором удерживания и обеспечивает построение адекватной модели сорбции исследуемых соединений в условиях ОФ ВЭЖХ, а также дает удовлетворительный прогноз значений факторов удерживания. Использование в многопараметрических зависимостях в качестве параметров только топологических индексов не позволяет достичь высокого коэффициента корреляции. Коэффициенты корреляции этих уравнений существенно увеличиваются с использованием в качестве переменных физико-химических параметров, таких как, дипольный момент, молекулярная рефракция, поляризуемости и объем молекул исследуемых соединений.

5. Существующие модели удерживания веществ в ОФ ВЭЖХ удовлетворительно описывают сорбцию исследуемых соединений из многокомпонентных жидких растворов и физико-химические особенности этого процесса. С использованием подхода Ю.А. Эльтекова показано, что процесс сорбции исследуемых соединений носит конкурентный характер.

6. Разработан метод подготовки пробы для хроматографического анализа катехинов, содержащихся в чае и определены условия их разделения, заключающиеся в следующем: подвижная фаза -ацетонитрил/вода с линейным градиентом ацетонитрила от 10 до 30 % об., в течение 30 минут.

7. ВЭЖХ - МС анализ экстрактов чайной флеши показал, что в условиях линейного градиента концентрации ацетонитрила в воде от 2.5 до 100 % об. можно препаративно выделить все исследуемые компоненты, но наиболее полно выделяется фракция с молекулярной массой 290, что соответствует эпикатехину (ЕС).

Список источников диссертации и автореферата по химии, кандидата химических наук, Шафигулин, Роман Владимирович, Самара

1. Киселев А. В. Межмолекулярные взаимодействия в адсорбции и хроматографии. М.: Высшая школа, 1986. 360 с.

2. Киселев А. В. Пошкус Д. П., Яшин Я. И. Молекулярные основы адсорбционной хроматографии. М.: Химия. 1986. 272 с.

3. Экспериментальные методы в адсорбции и молекулярной хроматографии / Под. ред. А.В. Киселева и В. П. Древинга, М.: Московский университет, 1973,449 с.

4. Kiselev А. V., Tarasova L.V., Yashin Ya. I. Influence of intermolecular interaction with the liquid chromatography // Chromatographia. 1980. V. 13. P. 599 602.

5. Эльтекова H. А., Эльтеков Ю. А. Коэффициенты распределения бензола, дифенила и 4, 4 дипиридила между подвижной водно -ацетонитрильной фазой и неподвижными нитрильной и углеродной фазами // Журн. физ. химии. 2002. Т. 76. № 5. С. 915 - 920.

6. Киселев А. В., Яшин Я. И. Адсорбционная газовая и жидкостная хроматография. М.: Химия, 1979. 288 с.

7. Буланова А. В., Полякова Ю. JI. Хроматография в медицине и биологии. Самара: Самарский университет, 2003. 115 с.

8. Онучак JI.A., Минахметов Р. А., Куркин В. А. Физико химические закономерности удерживания фенольных соединений в обращенно - фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии // Журн. физ. химии. 2002. Т. 76. №9. С. 1691-1696.

9. Murakami F. Retention behavior of benzene derivatives in bonded reversed phase columns // J. Chromatogr. 1979. V. 178. № 2. P. 393 - 399.

10. Snyder L. R. Principles of adsorption chromatography. New York: Marcel Dekker, 1968. 413 p.

11. Snyder L. R., Glajch J. L., Kirkland J. J. Theoretical basis for systimatic optimization of mobile phase selectivity in liquid - solid chromatography. Solvent - solute localization effects // J. Chromatogr. 1981. V. 218. № 1. P. 299 -326.

12. Snyder L. R., Glajch J. L. Solvent strength of multicomponent mobile -phase in liquid solid chromatography. Further study of different mobile phases and silica as adsorbent // J. Chromatogr. 1982. V. 248. № 2. P. 165 - 182.

13. Snyder L. R. Mobile phase effect in liquid solid chromatography. Importance of adsorption - site geometry, adsorbate derealization and hydrogen bonding // J. Chromatogr. 1983. V. 255. № 1. P. 3 - 26.

14. Soczewinski E. Solvent composition effects in thin layer chromatography systems of the type silica gel - electron donor solvent // Anal. Chem. 1969. V. 41. № l.P. 179-182.

15. Soczewinski E., Golkiewicz W. Simple molecular model for adsorption chromatography. VII. Relationship between the type (cyclohexan + polar solvent)/ silica // Chromatographia. 1973. V. 6. № 6. P. 269 272.

16. Snyder L. R., Poppe H. Mechanism of solute retention in liquid solid chromatography and the role of the mobile phase in affecting separation. Competition versus "sorption" // J. Chromatog. 1980. V. 184. № 4. P. 363 - 413.

17. Scott R. P. W. The role of molecular interactions in chromatography // J. Chromatog. 1976. V. 122. № 1. P. 35 53.

18. Scott R. P. W. The silica gel surface and its interactions with solvent and solute in liquid chromatography // J. Chromatog. Sci. 1980. V. 18. № 7. P. 297 -306.

19. Scott R. P. W., Kucera P. Solute interactions with the mobile and stationary phases in liquid solid chromatography // J. Chromatog. 1975. V. 112. № l.P. 425-442.

20. Scott R. P. W., Kucera P. Solute solvent interaction on the surface of silica gel // J. Chromatog. 1978. V. 149. № 1. P. 93 - 110.

21. Scott R. P. W., Kucera P. Solute solvent interaction on the surface of silica gel // J. Chromatog. 1978. V. 149. № 1. P. 93 - 110.

22. Эльтеков Ю. А. Зависимость коэффициента емкости от состава бинарного элюента // Журн. физ. химии. 1991. Т. 65. № 9. С. 2573 2575.

23. Эльтекова Н. А., Эльтеков Ю. А. Коэффициенты распределения бензола, дифенила и 4, 4' дипиридила между подвижной водно -ацетонитрильной и неподвижными нитрильной и углеродной фазами // Журн. физ. химии. 2002. Т. 76. № 5. С. 915 - 920.

24. Эльтекова Н. А., Эльтеков Ю. А. Зависимость удерживания пуриновых оснований модифицированными кремнеземами от состава бинарного элюента // Журн. физ. химии. 2000. Т. 74. № 8. С. 1468 1473.

25. Ланин С. Н., Никитин Ю. С. Прогнозирование удерживания в ВЭЖХ. Вытеснительная модель. // Журн. аналит. химии. 1991. Т. 46. № 8. С. 1493 -1502.

26. Ланин С. Н., Никитин Ю. С. Прогнозирование удерживания в высокоэффективной жидкостной хроматографии. Межмолекулярные взаимодействия в подвижной фазе. // Журн. аналит. химии. 1991. Т. 46. № 10. С.1971 -1980.

27. Ланин С. Н., Лялюлина Э. М., Никитин Ю. С., Шония Н. К. Влияние ассоциации молекул модификатора в подвижной фазе на удерживание в высокоэффективной жидкостной хроматографии // Журн. физ. химии. 1993. Т. 67. № 1.С. 146-150.

28. Ланин С.Н., Ланина Н.А., Никитин Ю.С. Влияние ассоциации молекул сорбата и модификатора в подвижной фазе на удерживание в высокоэффективной жидкостной хроматографии // Журн.физ.химии. 1995. Т.69. №11. С.2045-2051.

29. Ланин С.Н., Никитин Ю.С., Пятыгин А.А. Влияние строения ароматических углеводородов и химических свойств поверхности адсорбентов на селективность удерживания в ВЭЖХ // Журн.физ.химии. 2000. Т.74. № 3. С.514-520.

30. Ponec R., Amat L., Carbo Dorca R. Molecular basis of quantitative structure - properties relationships (QSPR): A quantum similarity approach // J. Computer - Aided Molecular Design. 1999. № 13. P. 259 - 270.

31. Lucic В., Nicolic S., Trinajstic N., Mihalic Z. A structure property study of the solubility of aliphatic alcohols in water // Croat. Chem. Acta. 1995. V. 68. P. 417-434.

32. Lucic В., Nicolic S., Trinajstic N., Juretic D., Juric A. A novel QSPR approach to physical chemical property of the alpha - amino acids // Croat. Chem. Acta. 1995. V. 68. P. 435 - 450.

33. Hansch C., Kunip A., Gard R., Gao H. Chem bioinformatics and QSAR: A review of QSAR lasking positive hydrophobic terms // Chem. Rev. 2001. № 3. P. 619-672.

34. Duchowicz R., Vitale G., Castro A., Fernandez M., Caballero J. QSAR analysis for heterocyclic antifungals // Bioorganic&Medicinal Chemistry. 2007. № 15. P. 2680-2689.

35. Станкевич И. В. Применение теории графов в химии. Новосибирск. Наука, 1988. С. 7-69.

36. Станкевич М. И., Станкевич И. В., Зефиров Н. С. Топологические индексы в органической химии // Успехи химии. 1988. Т. 57. С. 337 366.

37. Молекулярные графы в химических исследованиях / Под ред. Ю. Г. Папулова. Калинин: Изд во КГУ, 1990.116 с.

38. Применение теории графов в химии / Под ред. Н. С. Зефирова, Новосибирск: Наука, 1988.305 с.

39. Папулов Ю. Г., Чернова Т. И., Смоляков В. М., Поляков М. Н. Использование топологических индексов при построении корреляций структура свойство // Журн. физич. химии. 1993. Т. 67. № 2. С. 203 - 209.

40. Виноградова М. Г., Папулов Ю.Г., Смоляков В. М., Салтыкова М. Н. Корреляции структура свойство с использованием теории графов // Журн. физич. химии. 1996. Т. 70. № 4. С. 675 - 680.

41. Раевский О. А. Дескрипторы молекулярной структуры в компьютерном дизайне биологически активных веществ // Успехи химии. 1999. Т. 68. №6. С. 555-575.

42. Charton М. Newsl. Int. QSAR Soc. 1991. V. 1. №3.

43. Jurs P. C., Dixon S. L., Egolf L. In Chemometric Methods in Molecular Design. Vol. 2. VCH. Dusseldorf. 1995. P. 15.

44. Testa B, Kier L. B. Med. Res. Rev. 1991. V. 35. № 11.

45. Рувре Д. В кн. Химические приложения топологии и теории графов / Под ред. Р. Кинга. Москва: Мир. 1987. С. 181.

46. Randic М., Dobrowolski J. Optimal molecular connectivity descriptors for nitrogen containing molecules // International journal of quantum chemistry. 1998. V. 70. P. 1209-1215.

47. Gutman I., Yeh Y N., Lee S - L., Luo Y - L. Some resent results in the theory of the Wiener number // Indian journal of chemistry. 1993. V. 32 A. № 8. P. 651 -661.

48. Balaban A., Motok I., Bonchev D., Mekenyan O. Topics in current chemistry. Berlin.: Springer. 1983. 302 p.

49. Папулов Ю. Г., Розенфельд В. Р., Кеменова Т. Г. Молекулярные графы.ТГУ, Тверь. 1990.

50. Hatch F. Т., Colvin М. Е. Quantitative structure-activity (QSAR) relationships of mutagenic aromatic and heterocyclic amines // Mutation Research /Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis. 1997. Volume 376. P. 87-96.

51. Young R. C., Graham C., Roantree M. L. In QSAR in Drug Design and Toxicology//Elsevier. Amsterdam. 1987. P. 91.

52. Oprea Т. I., Rurunczi L., Moret E. E. In Trends in QSAR and Molecular Modelling 92// ESCOM. Leiden. 1993. P. 398.

53. Samuel Gibson, Ross McGuire, David C. Rees. Principal Components Describing Biological Activities and Molecular Diversity of Heterocyclic Aromatic Ring Fragments II J. Med. Chem. 1996. V. 39. P. 4065-4072.

54. Huibers P. D. Т., Lobanov V. S., Katritzky A. R., Shah D. O., Karelson M. Prediction of Critical Micelle Concentration Using a Quantitative Structure-Property Relationship Approach // Journal of Colloid and Interface Science, 1997. V.187. P.l 13-120.

55. Miller K. J. Additivity methods in molecular polarizability // J. Am. Chem. Soc. 1990. V. 112. P. 8533-8542.

56. Smith R. M., Perlman P. S. In QSAR and Molecular Modelling. Concepts, Computational Tools and Biological Applications // J. R. Prous Science Publishers. Barcelona. 1995. P. 222.

57. Jaerv J., Sak K., Eller M., Ek P., Engstroem A., Engstroem L. Quantitative Structure-Activity Relationships in the Protein Kinase С Reaction with Synthetic Peptides Derived from Myelin Basic Protein // Bioorganic Chemistry. 1996. V. 24. P. 159-168.

58. Hirst J. D. Nonlinear Quantitative Structure-Activity Relationship for the Inhibition of Dihydrofolate Reductase by Pyrimidines // J. Med. Chem. 1996. V. 39. P. 3526-3532.

59. Sjoberg P. In Computer Assisted Lead Finding and Optimization. Current Tools for Medicinal Chemistry // VCH. Weinheim. 1997. P. 83.

60. So S.-S., Karplus M. Genetic Neural Networks for Quantitative Structure-Activity Relationships: Improvements and Application of Benzodiazepine Affinity for Benzodiazepine/GABAA Receptors // J. Med. Chem. 1996. V. 39. P. 52465256.

61. Tayar N. E., Testa B. In Trends in QSAR and Molecular Modeling 92 // ESCOM. Leiden. 1993. P. 101.

62. Raevsky O. A., Schaper K.-J., Seydel J. K. H-Bond Contribution to Octanol-Water Partition Coefficients of Polar Compounds // Quantitative Structure-Activity Relationships. 1995. V. 14. P. 433-436.

63. Raevsky О. A. In Computer Assisted Lead Finding and Optimization. Current Tools for Medicinal Chemistry // VCH. Weinheim. 1997. P. 367.

64. Kaliszan R. Quantitative Structure Chromatographic Retention Relationships // Wiley. New York. 1987. P. 437.

65. Kaliszan R. Structure and Retention in Chromatography A Chemometric Approach // Harwood. Amsterdam. 1997. P. 211.

66. Polyakova Y. L., Row К. H. Quantitative structure retention relationships applied to reversed - phase high - performance liquid chromatography // Medicinal Chemistry Res. V

67. Дмитриков В. П., Набивач В. М. Сорбционно структурные корреляции гетероциклических азотистых соединений в жидкостной хроматографии // Кокс и химия. 2002. № 1. С. 22 - 25.

68. Герасименко В. А., Набивач В. М. Сорбционно структурные корреляции в ряду алкил производных нафталина // Журн. аналит. химии. 1997. Т. 52. № 1.С. 28-35.

69. Набивач В. М., Бурьян П., Мацак И. Корреляционная зависимость газохроматографического удерживания от молекулярной структуры алкилфенолов // Журн. аналит. химии. 1988. Т. 43. № 7. С. 1288 1293.

70. Муляшов С. А., Сировский Ф. С., Гречишкина О. С. Связь хроматографических характеристик ароматических карбоновых кислот и некоторых их производных со строением молекул // Журн. физич. химии. 1991. Т. 65. № 10. С. 2635 2637.

71. Герасименко В. А., Набивач В. М. Сорбционно структурные корреляции ароматических соединений в условиях газовой и жидкостной хроматографии // Кокс и химии. 1995. № 7. С. 12-19.

72. Sleight R. В. Reversed phase chromatography of some aromatic hydrocarbons. Structure - retention relationships // J. Chromatogr. 1974. V. 83. № 1. P. 31 -38.

73. Braumann T. Determination of hydrophobic parameters by reversed phase liquid chromatography: theory, experimental techniques, and application in studies on quantitative structure activity relationship // J. Chromatogr. 1986. V. 373. P. 191 -225.

74. Wise S. A., Bonnett W. J., Guenther F. R., May W. E. A relationship between reversed phase CI8 liquid chromatographic retention and the shape of polycyclic aromatic hydrocarbons // J. Chromatogr. Sci. 1981. V. 19. № 9. P. 457 -465.

75. Григорьева О. Б., Курбатова С. В., Ларионов О. Г., Земцова М. Н. Связь строения замещенных цинхониновых кислот с их удерживанием в условиях обращено фазового варианта ВЭЖХ // Журн. физ. химии. 2002. Т. 76. №5. С. 927- 931.

76. Харитонова А. Г., Буланова А. В., Ларионов О. Г., Осянин В. А. Исследование удерживания азотсодержащих гетероциклических соединений в условиях ВЭЖХ // Сорбционные и хроматографические процессы. 2005. Т. 5. №3. С. 289-295.

77. Dai J., Yao S., Ding Y., Wang L. Retention of substituted indol compounds on RP HPLC: correlation with molecular connectivity indices and quantum chemical descriptors // J. Liquid Chromatogr. & Related Technologies. 1999. V. 22. № 15. P. 2271-2282.

78. Макаренко H. П., Глухова Т. А., Федюшкин И. JI., Ланин С. Н., Муслин Д. В., Хвойнова Н. М. Закономерности удерживания изо -бутиларилкарбонатов в высокоэффективной жидкостной хроматографии // Журн. физич. химии. 2005. Т. 79. № 8. С. 1499 1504.

79. Polyakova Y. L., Row К. Н. // Retention of some five membered heterocyclic compounds on a porous graphitized carbon Hypercarb™ // Chromatographia. 2007. V. 65. P. 59 - 63.

80. Дейнека В. И. Метод относительного анализа удерживания в обращенно фазовой ВЭЖХ. Определение, применение и роль параметра lgP системы н - октанол - вода // Журн. физич. химии. 2006. Т.80. № 6. С. 1083 -1088.

81. Moon Т., Chi М. W., Pare S. J., Yoon С. N. Prediction of HPLC retention time using multiple linear regression: using one and two descriptors // J. Liquid Chromatogf.& Related Tech. 2003. V. 26. № 18. P. 2987 3002.

82. A1 -Haj M. A., Kaliszan R, Nasal A. Test analytes for studies of the molecular mechanism of chromatographic separations by quantitative structure -retention relationships // Anal. Chem. 1999. V. 71. № 15. P. 2976 2985.

83. Zheng J., Polyakova Y. L., Row К. H. Prediction of retention of nucleic compounds based on a QSPR model // Chromatographia. 2006. V. 64. P. 129 — 137.

84. Запрометов M.H. Биохимия катехинов. М.:Наука, 1964. 294 с.

85. Блажей А., Шутый Л. Фенольные соединения растительного происхождения. М.: Мир, 1977. 240 с.

86. Барабой В. А., Биологическое действие растительных фенольных соединений. Киев: Наукова Думка, 1976. 260 с.

87. Биохимия фенольных соединений / Под ред. Дж. Харборна. М.: Мир, 1968. 452 с.

88. Запрометов М. Н. Основы биохимии фенольных соединений. М.: Высшая школа, 1974. 214 с.

89. Федосеева Л. М., Тимохин Е. В. Изучение флавоноидов красных листьев бадана толстолистного (Bergenia Crassifolia (L.) fitsch), произрастающего на Алтае // Химия растительного сырья. 1999. № 4. С. 81 -84.

90. Иванова С. 3., Федорова Т. Е., Иванова Н. В., Федоров С. В., Остроухова Л. А., Малков Ю. А., Бабкин В. А. Флавоноидные соединения коры лиственницы сибирской и лиственницы гмелина // Химия растительного сырья. 2002. №4. С. 5-13.

91. Сальникова Е. Н., Калинкина Г. И., Дмитрук С. Е. Химическое исследование флавоноидов полыни горькой (Artemisia Absinthium L.) П. Сиверса (A. sieversiana) и полыни якутской (A. jacutica drob.) // Химия растительного сырья. 2001. № 3. С. 71 78.

92. Yinzhe Jin, Soon Коо Han, Row К. H. Extraction and purification of Eupatilin from Artemisia Princeps Pampan // J. Koren Chem. Soc. 2005. V. 49. №2. P. 196-200.

93. Минахметов Р. А., Онучак JL А., Куркин В. А., Авдеева Е. В., Волоцуева А. В. Анализ флавоноидов в плодах Silybum marianum методом высокоэффективной жидкостной хроматографии // Химия природных соед. 2001. Т. 37. №4. С. 318-321.

94. Онучак JI. А., Куркин В. А., Минахметов Р. А., Куркина А. В. Высокоэффективная жидкостная хроматография в анализе экстрактов Artmeisia dracunculus // Химия природн. соед. 2000. Т. 36. № 2. С. 115-117.

95. Yao L., Jiang Y., Datta N., Singanusong R., Liu X., Duan J., Raymont K., Lisle A., Xu Y. HPLC analyses of flavanols and phenolic acids in the fresh young shoots of tea (camellia sinenesis) grown in Australia // Food Chem. 2004. V. 84. P. 253 -263.

96. Shramm D. D., Karim M., Schrader H. R., Holt R. R., Kirkpatrick N. J., Polagruto J. A., Ensunsa J. L., Schmitz H. H., Keen C. L. Food effects on the absorption and pharmacokinetics of cocoa flavanols // Life Science. 2003. V. 73. P. 857 869.

97. Chang M. L., Chang С. - M. Simultaneous HPLC determination of hydrophilic whitening agents in cosmetic products // J. of Pharmac. and Biomed. Anal. 2003. V. 33. P. 617-626.

98. Lee J. W., Row К. H. Determination of retention factors of aromatic compounds by gradient elution reverse - phase high performance liquid chromatography // Korean J. Chem. Eng. 2002. V. 19. P. 978- 985.

99. Row K.H., Lee J.W. Determination of Retention Factors of Phospholipids in Gradient HPLC // Chromatographia. 2000. V. 51. P. 61 70.

100. Kurie M., Narimatsu S., Kataoka H. Determination of daidzein and genistein in soybean foods by automated on line in - tube solid phase microextraction coupled to HPLC // J. Chromatog. A. 2003. V. 986. P. 169 - 175.

101. Row K.H., Lee J.W. Gradient Separation of Soybean Phospholipids with Retention Factors of a New Polynomial Correlation // Korean J. Chem. Eng. 1999 V. 16. P. 170 -176.

102. Carrao Panizzi M. C., Goes Favoni S. P., Kikuchi A. Extraction time for soybean isoflavone determination // Brazilian Archives of Biology and Technology. 2002. V. 45.P. 515-518.

103. Keinaanen M., Julkunen Tiitto R. High - performance liquid chromatographic determination of flavonoids in Betula Pendula and Betula Pubescens leaves // J. Chromatog. A. 1998. V. 793. P. 370 - 377.

104. Kim J. I., Hong S. В., Row К. H. Effects of particle size in preparative reversed phase high - performance liquid chromatography on the isolation of epigallocatechin gallate from Korean green tea // J. Chromatog. A. 2002. V. 949. P. 275-280.

105. Yoshida Y., Kiso M., Goto T. Efficiency of the extraction of catechins from green tea // Food Chemistry. 1999. V. 67. P. 429 433.

106. Pelillo M., Bonoli M., Biguzzi В., Bendini A., Toschi T. G., Lercker G. An investigation in the use of HPLC with UV and MS electrospray detection for the quantification of tea catechins // Food Chemistry. 2004. V. 87. P. 465 - 470.

107. Bonoli M., Pelillo M., Toschi T. G., Lercker G. Analysis of green tea catechins: comparative study between HPLC and HPCE // Food Chemistry. 2003. V.81.P. 631 -638.

108. Pelillo M., Biguzzi В., Bendini A., Toschi T. G., Vanzini M., Lercker G. Preliminary investigation into development of HPLC with UV and MS-electrospray detection for the analysis of tea catechins // Food Chemistry. 2002. V. 78. P. 369-374.

109. Zuo Y., Chen H., Deng Y. Simultaneous determination of catechins, caffeine and gallic acids in green, Oolong, black and pu-erh teas using HPLC with a photodiode array detector // Talanta. 2002. V. 57. P. 307 316.

110. Baptista J. А. В., Tavaresa J. F. P., Carvalhob R. С. B. Comparison of catechins and aromas among different green teas using HPLC/SPME-GC // Food Research International. 1998. V. 31. P. 729 -736.

111. Bronner W.E., Beecher G.R. Method for determining the content of catechins in tea infusions by high-performance liquid chromatography // J. Chromatog. A. 1998. V. 805. P. 137 142.

112. Dalluge J. J., Nelson В. C., Thomas J. В., Sander L. C. Selection of column and gradient elution system for the separation of catechins in green tea using high-performance liquid chromatography // J. Chromatog. A. 1998. V. 793. P. 265 -274.

113. Khokhar S., Venema D., Hollman P. C.H., Dekker M., Jongen W. A RP-HPLC method for the determination of tea catechins // Cancer Letters. 1997. V. 114. P. 171-172.

114. Amarowicz R., Shahidi F. A rapid chromatographic method for separation of individual catechins from green tea // Food Research Intern. 1996. V. 29. P. 71 -76.

115. Sharma V., Gulati A., Ravindranath S. D., Kumar V. A simple and convenient method for analysis of tea biochemicals by reverse phase HPLC // J. Food Сотр. Anal. 2005. V. 18. P. 583 594.

116. Nishitani E., Sagesaka Y. M. Simultaneous determination of catechins, caffeine and other phenolic ompounds in tea using new HPLC method // J. Food Compos. Anal. 2004. V. 17. P. 675 -685.

117. Wang H., Provan G. J., Helliwell K. HPLC determination of catechins in tea leaves and tea extracts using relative response factors // Food Chem. 2003. V. 81. P. 307 -312.

118. Wang H., Helliwell К., You X. Isocratic elution system for the determination of catechins, caffeine and gallic acid in green tea using HPLC // Food Chemistry. 2000. V. 68. P. 115 121.

119. Барабой В.А. Растительные фенолы и здоровье человека. М.: Наука, 1984. 160 с.

120. Запрометов М.Н. Фенольные соединения. Распространение, метаболизм и функции в растениях. М.: Наука, 1993. -272 с.

121. Машковский М. Д. Лекарственные средства. В 2- х томах. М.: Медицина, 1993. Т. 1. 731 е.; Т. 2. 685 с.

122. Джилкрист. Химия органических гетероциклических соединений. М.: Мир, 1996. 463 с.

123. Органическая химия / Под ред. Тюкавкиной Н. А. М.: Медицина, 1998.511 с.

124. Ким А. М. Органическая химия. Новосибирск: Сибирское университетское изд во, 2002. 971 с.

125. Роберте Дж., Касерио М. Основы органической химии. Т. 2. М.: Мир, 1978. 888 с.

126. Грандберг К. И. Органическая химия. М.: Дрофа, 2001. 672 с.

127. Травень В. Ф. Электронная структура и свойства органических молекул. М.: Химия, 1989. 384 с.

128. Шатц В. Д., Сахартова О. В. Высокоэффективная жидкостная хроматография. Рига: Зинатне. 1988. 390 с.

129. Номенклатура в хроматографии. Основные понятия. Терминология. Термодинамические характеристики сорбционного процесса. Самара: Самарский университет, 1999. 36 с.

130. Блатов В. А., Шевченко А. П. Методы компьютерной химии и комплекс программ HYRERCHEM. Самара: Самарский университет, 1999. 54 с.

131. Dewar М. J. S., Helay Е. J., Stewrt J. // J. Comput. Chem. 1988. № 5. P. 358.

132. Харин В. Т. Введение в математическую статистику и математические методы планирования эксперимента. М.: 1990. 114 с.

133. Чарыков А. К. Математическая обработка результатов химического анализа. М.: Химия. 1984.168 с.

134. Доерфель К. Статистика в аналитической химии. М.: Мир, 1969. 248 с.

135. Шафигулин Р.В., Буланова А.В. ВЭЖХ частично ферментативных сортов чая // Вестник СамГУ, №2 (52), 2007, С. 134-139.

136. Шафигулин Р.В., Буланова А.В., Ларионов О.Г., Ро К.Х. ВЭЖХ анализ экстрактов зеленого и черного чая различного происхождения// Сорбционные и хроматографические процессы, Т.6, Вып. 6, 2006, 1365-1369 с.

137. Шафигулин Р.В., Буланова А.В., Ро К.Х. Хроматографический анализ флавоноидов, содержащихся в чае // Сорбционные и хроматографические процессы, Т.6, Вып. 5,2006, 844-850 с.

138. Шафигулин Р.В., Буланова А.В. Ро К.Х. Качественное и количественное содержание катехинов в различных сортах чая // Сорбционные и хроматографические процессы, Т. 7,2007, С. 349-352.

139. Гольберт К. А., Вигдергауз М. С. Введение в газовую хроматографию. М.: Химия, 1990. 352 с.