Флавоноиды и изофлавоноиды трех видов растений родов Trifolium L. и Vicia L. тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

На правах рукописи

щ

ДРЕНИН АЛЕКСЕЙ АНАТОЛЬЕВИЧ

ФЛАВОНОИДЫ И ИЗОФЛАВОНОИДЫ ТРЕХ ВИДОВ РАСТЕНИЙ РОДОВ TRIFOLIUM L. И VICIA L.

02.00.10 - Биоорганическая химия, химия природных и физиологически

активных веществ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

□G3458551

СУРГУТ-2008

003458551

Работа выполнена на кафедре химии ГОУ ВПО «Сургутского государственного университета ХМАО-Югры»

Научный руководитель: доктор химических наук,

профессор

Ботиров Эркин Хожиакбарович

Официальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор

Зибарева Лариса Николаевна

кандидат химических наук, доцент

Цырлина Елена Марковна

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Уфимский государственный нефтяной технический университет»

Защита диссертации состоится 23 января 2009 г. в 1400 на заседании диссертационного совета Д 002.001.01 в Институте органической химии УНЦ РАН по адресу: 450054, г. Уфа, проспект Октября, 71, зал заседаний; e-mail: chemorg@anrb.ru. факс: (347) 2356066.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Уфимского научного центра РАН.

Автореферат разослан «23» декабря 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор химических наук, профессор

Ф.А. Валеев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследований. В настоящее время все больший интерес фармакологов привлекают вещества, относящиеся к классу флавоноидов и изофлавоноидов. Эти соединения обладают высокой биологической активностью и, что особенно ценно, низкой токсичностью. Многочисленные исследования показывают, что препараты, созданные на основе этих веществ, являются высокоэффективными противоопухолевыми средствами, обладают антиоксидантными свойствами, снижают риск заболеваний сердечнососудистой системы.

Особый интерес в качестве источников соединений указанных классов представляют растения семейства Fabaceae (бобовые), в частности -представители родов Trifolium L. и Vicia L., богатые флавоноидами и изофлавоноидами.

На основе экстрактов клевера лугового создан ряд биологически активных добавок, обладающих широким спектром фармакологического действия («Атекроклефит», «Кардиин», «Red Clover Plus»). Общий недостаток этих БАДов в том, что они созданы на основе спиртовых экстрактов, химический состав которых изучен поверхностно, а действующие вещества зачастую не выявлены. В то же самое время, лекарственные средства, созданные на основе индивидуальных биологически активных соединений, обладают гораздо более ценными лечебными свойствами.

Поэтому изучение химического состава растений, содержащих флавоноиды и изофлавоноиды, разработка способов их получения с целью создания новых эффективных лекарственных препаратов является актуальной задачей.

Работа выполнена в рамках Федеральной программы «Участник молодежного научно-инновационного движения» (госконтракт №5644р/8090).

Цель и задачи работы. Целью данной работы было изучение фенсшьных соединений растений семейства Fabaceae L. территории Ханты-Мансийского автономного округа - Югры.

В рамках поставленной цели решались следующие задачи:

- выделение и получение в индивидуальном виде флавоноидов из растений Trifolium pratense L. (клевер луговой), Trifolium lupinaster L. (клевер люпиновидный), Vicia subvillosa (Ledeb.) Trautv (горошек волосистый);

- идентификация и установление химического строения выделенных веществ;

- подготовка полученных веществ к фармакологическим испытаниям. Научная новизна. Из указанных выше растений выделено 18 веществ,

относящихся к изофлавонам, птерокарпанам, флавонам, флавонолам, а также один циклический полиол; с помощью современных химических и физико-химических методов установлена структура 5 новых природных соединений; флавоноиды Trifolium lupinaster L. исследованы впервые; из клевера лугового и клевера люпиновидного впервые выделен (+)-пинитол.

Практическая значимость. Впервые были исследованы фенольные соединения растений территории Ханты-Мансийского автономного округа -Югры. Для выделенных изофлавоноидов формононетина, ононина и генистина сотрудниками лаборатории фармакологии Института химии растительных веществ АН РУз установлена гиполипидемическая и гипохолестеринемическая активность, превосходящая таковую официального лекарственного препарата «Гемфеброзил». Также для этих соединений была установлена ингибирующая активность по отношению к Na\K+-ATP-a3e.

В ходе данных исследований обнаружены новые источники (+)-пинитола, обладающего антидиабетическими и гипогликемическими свойствами и запатентованного в США в качестве лекарственного средства.

Апробация работы. Основные результаты исследований были доложены на VH Международном симпозиуме по химии природных соединений (Ташкент, 2007 г.), на Ш Всероссийской научной конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2007 г.), на VI Всероссийском научном семинаре «Химия и медицина» (Уфа, 2007 г.), на Всероссийской конференции «Органическая химия для медицины «ОРХИМЕД-2008» (Черноголовка, 2008 г.), на VII и VIII Открытой окружной конференции «Наука и инновации XXI» века (Сургут, 2006 и 2007 гг.).

Публикации. По результатам работы опубликованы 3 статьи в журнале, рекомендованном ВАК, и тезисы 5 докладов.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 109 страницах машинописного текста и включает введение, литературный обзор, обсуждение результатов, экспериментальную часть и выводы. В тексте содержится 13 таблиц и 30 рисунков. Список цитируемой литературы содержит 140 ссылок.

Автор выражает глубокую благодарность своему научному руководителю djc.fi., профессору Ботирову Эркину Хожиакбаровичу за постоянное внимание, поддержку и ценные консультации, оказанные при выполнении данной работы.

ОБЩЕЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Для выделения индивидуальных природных соединений из растительного сырья мы применяли разнообразные методы: экстракцию этанолом с последующим разделением на близкие по полярности фракции обработкой упаренного и разбавленного водой экстракта гексаном, хлороформом, этилацетатом и н-бутанолом, разделение полученных фракций на хроматографических колонках с силикагелем, перекристаллизацию выделенных соединений. Структуры выделенных веществ устанавливали методами ИК-, УФ-, ЯМР-'Н и ЯМР-13С-спектроскопии, масс-спектрометрии, спектроскопии кругового дихроизма, а также на основании результатов химических превращений.

В результате нам удалось выделить 19 веществ, 5 из которых оказались

новыми соединениями (табл. 1).

Таблица 1.

_Соединения, выделенные из изученных растений у_

Название растения Выделенные вещества

Trifolium pratense L. формононетин. формононетин-Т-О-Р-О-галактопиранозид1.

инермин-З-О-Р-О-галактопиранозид, генистеин. генистеин-7-0-Р-0-галактопиранозид, прунетин, прунетин-4'-0-р-0-глюкопиранозид. прунетин-4'-0-а-0-глюкопиранозид.

Trifolium lupinaster L. ононин*, кемпферол-З-О-дигликозид*, кемпферол-З-О-тригликозид*

Vicia subvillosa (Ledeb.) Trautv. апигенин*, лютеолин*, кверцетин*, цинарозид*, лютеолин-4'-0-р-0-глюкопиранозид*, изокверцитрин*, висциозид

I. УСТАНОВЛЕНИЕ СТРУКТУРЫ ИЗОФЛАВОНОИДОВ И (+)-ПИНИТОЛА, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ TRIFOLIUM PRATENSE L.

Поскольку концентрация флавоноидов в разных органах растения варьирует в зависимости от вегетационного периода, мы проводили сбор надземной части клевера в середине июля, во время бурного роста и

1 Подчеркнуты новые природные соединения; * - вещества, выделенные из данного вида впервые.

4

цветения, а подземной - в конце сентября, когда надземная часть отмирает, и вещества накапливаются в большом количестве в корнях.

Фракции, полученные последовательной обработкой упаренного и разбавленного водой этанольного экстракта клевера гексаном, хлороформом, этил ацетатом и н-бутанолом, разделялись на колонках с силикагелем. В результате было получено 8 веществ: 3 - из подземной части растения (формононетин, формононетин-7-0-1ИЭ-галактопиранозид, инермин-З-О-р-В-галактопиранозид) и 5 - из надземной (прунетин, генистеин, прунетин-4'-О-Р-Б-глюкопиранозид, прунетин-4'-0-а-В-глюкопиранозид, генистеин-7-О-р-О-галактопиранозид).

Четыре вещества - формононетин-7-0-Р-В-галактопиранозид, инермин-З-О-Р-Б-галактопиранозид, прунетин-4'-0-а-0-глюкопиранозид, генистеин-7-0-р-0-галактопиранозид - не описаны в литературе.

Строение формононетин-7-0-р-0-галактопиранозида (II)

Формоионетин-7-0-р-В-галактопиранозид (П) был получен из этилацетатной фракции подземной части клевера в виде бежевых кристаллов (250 мг) с т.пл. 213°С. В УФ-спектре имеются максимумы поглощения при -С"™ 261,263,303 нм, характерные для производных изофлавона.

В ИК-спектре проявляются полосы поглощения, характерные для спиртовых гидроксильных групп (3292 см"1), карбонила у-пирона (1639 см'1), ароматических углерод-углеродных связей (1622 см"1) и С-О колебаний гликозидов (1078 см'1).

При кислотном гидролизе этого соединения был получен агликон, который сравнением с истинным образцом был идентифицирован как формононетин, и Б-галактоза. Галактозу идентифицировали сравнением с подлинным образцом методами тонкослойной хроматографии (ТСХ) и газожидкостной хроматографии (ГЖХ) (в виде триметилсилилового эфира).

Таблица 2. Данные спектров ЯМР-'Н и ЯМР-13С формононетин-7-0-Р-Р-галактопиранозида

Атом С бс (м.д.) 5н (J, Гц)

Агликон

2 153.7 8.42 с

3 124.0

4 174.8

5 127.0 8.05 д (8,4)

6 115.7 7.15 дд (8.4 и 1

7 161.5

8 103.5 7.23 уш. с.

9 157.1

10 118.5

Г 123.4

276' 130.1 7.52 д (8,7)

375' 113.7 6.99 д (8,7)

4' 159.1

ОСНз 55.2 3.78 с

Галактоза

1" 100.1 5.10 д (6,8)

2" 73.2 3.30-3.81

3" 76.5 3.30-3.81

4" 69.7 3.30-3.81

5" 77.2 3.30-3.81

6" 60.3 3.30-3.81

При ацетилировании гликозида П уксусным ангидридом в пиридине получили тетраацетильное производное (ПЬ). В масс-спектре соединения IIb наблюдается пик молекулярного иона М* с m/z 598 (31), пики фрагментных ионов, характерные для тетраацетилгексозы с m/z 331 (72), 169 (100%), 109 (42), а также пик остатка агликона с m/z 268 (80).

Данные спектров ЯМР-'Н и ЯМР-|3С, снятых в гексадейтеродиметилсульфоксиде (ДМСО-с!6), показывают, что вещество II представляет собой моногликозид (табл. 2).

Значение КССВ сигнала аномерного протона (J=6,4 Гц) в спектре ЯМР-'Н и значения химсдвигов сигналов углерода остатка D-галактозы в

спектре ЯМР-13С флавоноида II свидетельствуют о р-Б-галактопиранозной структуре углеводной части.

Таким образом, для вещества П установлена структура формононетин-7-0-р-Б-галактопиранозида (рис.1).

II. R- H IIa. R=COCH3

Рис. 1. Формононетин-7-0-Р-0-галактопиранозид и его тетраацетильное производное

Среди моногликозидов формононетина известны лишь глюкозиды. Моногалактозид этого изофлавона выделен впервые нами и является новым соединением.

Строение инермин-З-О-Р-О-галакгопиранозвда (III)

Инермин-З-О-р-О-галактопиранозид (Ш) (С22Н22О10, т.пл. также

был выделен из этилацетатной фракции подземной части клевера лугового (500 мг). Вещество имеет характерный для птерокарпанов УФ-спектр: -С™ 278,285,310 нм.

В ИК-спектре присутствуют полосы поглощения гидроксильных групп (3400 см'1), ароматических С-С связей (1622 см"1), С-О колебаний гликозидов (1070 см"1) и метилендиоксигруппы (930 см"1).

При кислотном гидролизе исследуемого вещества был получен агликон и D-галактоза (ТСХ, ГЖХ).

Ацетилирование гликозида уксусным ангидридом в пиридине дало тетраацетильное производное (Ша). В масс-спектре последнего наблюдается пик молекулярного иона с m/z 614 (7), пики ионов агликона, а также пики фрагментных ионов остатка тетраацетилгексозы с m/z 331 (30), 271 (23), 169 (89) и 109 (55).

Агликон состава С15Н12О5, т.пл. 180-181°, [а]„ -211,4° (этанол) имеет характерный для птерокарпанов УФ-спектр (Х^ 282,287,311 нм).

Таблица 3.

Данные спектров ЯМР-Н и ЯМР- С

инермин -3-О-р-Б-галактопираноз ида

Атом С 5С (м.д.) бнагц)

Агликон

1 131.9 7.36 д (8,7)

2 110.4 6.71 дд (8,7 и 1,8)

3 158.5

4 104.0 6.55 д (1,8)

5 156.2

6 65.9 4.27 дд (3,6 и 10,2)

6а 39.5 3.59-3.70

6Ь 118.3

7 105.4 6.98 с

8/9 147.5

10 93.3 6.52 с

10а 153.7

11а 77.7 5.57 д (6.9)

11Ь 114.2

ОСН2О 101.2 5.92 д (11,2)

Галактоза

Г 100.3 4.84 д (7.2)

2' 73.2 3.12-3.36

3' 76.5 3.12-3.36

4' 69.7 3.12-3.36

5' 77.1 3.12-3.36

6' 60.7 3.12-3.36

В ПМР-спектре агликона (Ру-ё5) в области 3,12-4,40 м.д. проявляются сигналы протонов птерокарпана при углеродных атомах 6 и 6а, а при 5,50 м.д. (1Н, д, 6 Гц) резонирует сигнал протона Н-11а. Двухпротонный дублет с центром при 5,85 м.д. (1=2.0 Гц) обусловлен наличием метилендиоксигруппы. В области слабого поля присутствуют сигналы пяти ароматических протонов, три> из которых относятся к системе 1,3,4-тризамещения в бензольном кольце, а остальные два образуют синглеты при 6,60 и 6,80 м.д. и могут принадлежать только протонам в «ара-положениях. Присутствие в масс-спектре агликона, наряду с пиком молекулярного иона

М* 284, пиков ионов с m/z 147 и 175 указывает на то, что гидроксильная группа расположена в кольце А, а метилендиоксигруппа - в кольце В. На основании изучения спектральных данных и сравнением с заведомым образцом агликон идентифицирован как 6aR,llaR-3-rHflpoKCH-8,9-метилендиоксиптерокарпан (инермин).

В спектре ЯМР-'Н (ДМСО-ё6) вещества Ш проявляются сигналы протонов 3,8,9-тризамещенного птерокарпана и углеводной части. Сигнал аномерного протона D-галактозы в спектре ЯМР-'Н гликозида III проявляется при 4.84 м д. в ввде дублета с КССВ 7.2 Гц, а сигнал атома углерода С-1 - при 6 100.3 м.д. в спектре ЯМР-13С (табл. 3). Эти данные свидетельствуют о том, что остаток D-галактозы имеет пиранозную форму и связан с агликоном ß-гликозидной связью.

Данные спектра кругового дихроизма [с 0,1; этанол: Де=-12,3 (233 нм), Де=-1,2 (278 нм), Де=+3,6 (310 нм)] подтверждают 6aR, llaR-конфигурацию хиральных центров агликоновой части гликозида.

На основании вышеизложенных данных для этого соединения мы установили строение инермин-З-О-Р-Б-галактопиранозида (III).

ch2OR I I U i

¿R III. R=H

Illa. RCOCHj

Рис. 2. Инермин-З-О-Р-Э-галактопиранозид и его тетраацетильное производное

Это вещество не описано в литературе и является новым соединением.

Структура прунетин-4'-0-а-0-глюкопиранозида (VII)

Соединение VII состава С22Н22О11 с т.пл. 259-260°С в количестве 25 мг было получено из этилацетатной фракции надземной части клевера лугового.

УФ-спекгр рассматриваемого соединения характерен для изофлавонов и имеет максимумы поглощения при С™ 263, 292,335 нм. При снятии УФ-спектра с добавлением ацетата натрия не наблюдалось батохромного сдвига полосы II, что свидетельствует об отсутствии свободной фенольной гидроксильной группы в положении С-7. Батохромный сдвиг полосы II на 10 нм наблюдался при снятии спектра с добавлением хлорида алюминия, что обусловлено наличием фенольного гидроксила при С-5.

В ИК-спектре вещества VII имеется полоса поглощения гидроксильных групп (3317 см"1), карбонила у-пирона (1645 см'1), ароматических углерод-углеродных связей (1600 см'1) и С-0 колебаний гликозидов (1015 см"1).

При кислотном гидролизе был получен прунетин, а также моносахарид, который методом ГЖХ в виде ТМС-эфира был идентифицирован как D-глюкоза.

В результате ацетилирования изофлавона уксусным ангидридом в пиридине было получено пентаацетильное производное Vila.

В масс-спектре вещества Vila наблюдаются следующие пики ионов: М* 368 (2), 284 (100), 255 (10), 166 (50), 138 (40), 118 (30) и другие. Пики ионов с m/z 166 и 118 характерны для производных изофлавона, содержащих гидроксильную группу в кольце В, а также гидроксильную и метоксильную группы в кольце А.

В спектре ЯМР-13С (ДМСО-й6) проявляются сигналы атомов углерода агликона и сахарной части (табл. 4). Сигнал аномерного протона глюкозы в спектре ПМР проявляется в виде дублета при 5.36 м.д. с J=4,5 Гц. Такое значение константы спин-спинового взаимодействия сигнала аномерного протона, а также парамагнитный сдвиг сигналов протонов углеводной части на 1,5 м.д. по сравнению с ß-формой свидетельствуют в пользу а-пиранозной конфигурации глюкозы. Значения химсдвигов сигналов остальных протонов сахарной части лежат в области 4.58-5.18 м.д.

Таблица 4. Данные спектров ЯМР-'Н и ЯМР-,3С прунетин-4'-0-а-Р-глюкопиранозида.

Атом С 5С (м.д.) бнУ.Гц)

Агликон

2 153.6 8.46 с

3 121.4

4 180.3

5 157.7

6 98.6 6.41 ус

1 164.9

8 92.6 6.66 ус

9 157.5

10 105.3

1' 122.5

276' 130.1 7.50 д (8,1)

375' 116.1 7.09 д (8,1)

4' 162.1

ОСНз 56.2 3.86 с

ОН (С-5) 12.92 с

Глюкоза

1" 100.3 5.36 д (4,5)

2" 73.1 4.58-5.18

3" 76.5 4.58-5.18

4" 69.6 4.58-5.18

5" 77.0 4.58-5.18

6" 60.2 4.58-5.18

Таким образом, вещество VII имеет структуру прунетин-4'-0-а-Б-глюкопиранозида.

Vil R-H 5

Vila. R=COCHj

Рис. 3. Прунетин-4'-0-а-0-глкжопиранозид и его пентаацетильное производное

Прунетин-4'-0-а-0-глюкопиранозид в литературе не описан и является новым соединением.

Структура генистеин-7-0-р-Б-галактопиранозида (VIII)

Генистеин-7-0-Р-0-галактопиранозид (т.пл. 258-259°С) был получен из этилацетатной фракции надземной части клевера (35 мг). Из данных УФ-, ЯМР-13С и ЯМР-'Н спектров этого соединения (>С"""264, 290, 332 нм) следует, что оно является гликозидом изофлавона (табл. 5), причем в агликоне гликозилирована гидроксильная группа в положении С-7, т.к. при снятии УФ-спекгра соединения с добавкой ацетата натрия не наблюдался батохромный сдвиг максимумов поглощения. Также в кольце А имеется свободная гидроксильная группа при С-5, о чем свидетельствует батохромный сдвиг полосы П при снятии УФ-спектра с добавлением хлорида алюминия.

При кислотном гидролизе гликозида VIII был получен генистеин и D-галактоза (ТСХ, ГЖХ).

Ацетилированием соединения VIII уксусным ангидридом в пиридине было получено его гексаацетильное производное (Villa). В масс-спектре вещества Villa наблюдаются пики ионов 684 (МГ, 3), 331 (13), 270 (16), 169 (50), 109 (34) и др. Из этих данных следует, что в составе исходного гликозида изофлавона имеется один моносахаридный остаток.

Сигнал аномерного протона D-галактозы в спектре ЯМР-'Н (ДМСО-сУ проявляется в виде дублета с КССВ 6,7 Гц. Этот факт, а также значения химсдвига сигнала углерода С-1 сахарной части 5 100.1 м.д. в спеетре ЯМР-13С (табл. 5) свидетельствуют о p-конфигурации галактозы.

Обобщив и проанализировав вышеизложенные данные, для соединения VIII мы установили структуру генистеин-7-0-Р-0-галактопиранозида.

Таблица 5. Данные спектров ЯМР-'Н и ЯМР-'3С генистеин-7-0-Р-Р-галактопиранозида

Атом С 5С (м.д.) 5н№Гц)

Агликон

2 154.2 8.41с

3 122.1

4 181.3

5 158.2

6 99.3 6.47 д (2.0)

7 162.9

8 94.4 6.73 д (2.0)

9 158.8

10 106.1

Г 122.8

276' 130.4 7.40 д (8,1)

375' 115.4 6.82 д (8,4)

4' 162.4

5-ОН 12.94 с

4'-ОН 9.75 с

Галактоза

1" 100.1 5.17 д (6,4)

2" 73.2 3.28-3.77

3" 76.5 3.28-3.77

4" 69.7 3.28-3.77

5" 77.3 3.28-3.77

6" 60.4 3.28-3.77

Генистеин-7-0-р-0-галактопиранозид в литературе не описан и является новым соединением.

Идентификация (+)-линитола (IX)

Элюированием колонки с бутанольной фракцией спиртового экстракта надземной части клевера лугового системой хлороформ-этанол (82:18) было выделено соединение IX (600 мг).

Это вещество состава С7Н14О6 ([a]D +65,63°) не дает поглощения в УФ-и видимой области, а в его ИК-спектре присутствуют полосы поглощения гидроксильных групп (3600-3250 см"1), колебания алифатических С-С связей (2300-2950 см"1), колебания связей С-0 (1175 см'1)

13

Ацетилированием вещества IX хлористым ацетилом было получено его пентаацетильное производное 1Ха.

В масс-спектре соединения 1Ха наблюдаются пики ионов с m/z 404 (M*, 3), 345 (2), 285 (2), 243 (8), 182 (35), 150 (50), 109 (15), 87 (45), что соответствует структуре метоксиинозитола.

В спектре ЯМР-|3С (ДМСО-de) присутствуют сигналы шести атомов углерода циклогексанового кольца, связанных с кислородной функцией (70.1-83.8 м.д.) и сигнал углерода метоксильной группы со значением химсдвига 59.7 м.д.

Таблица 6. Данные спектров ЯМР-'Н и ЯМР-13С _соединения IX_

Атом С Sc (м.д.) знагц)

1 70.9 4.47 д (6.6)

2 72.4 4.52 д (4.8)

3 70.1 4.72 д (2.1)

4 72.6 4.63 д (2.1)

5 71.9 4.35 д (5.7)

6 83.8 3.0 т (9.3)

ОСНз 59.7 3.62 с

В ЯМР-'Н-спектре проявляются сигналы пяти атомов водорода >СН-(Ж групп циклогексанового кольца в области 4.34-4.73 м.д. и сигналы протонов метоксильной группы. Сигнал протона при С-6 проявляется в виде триплета в сильном поле (табл. 6). Парамагнитный сдвиг сигнала Н-6 по сравнению с таковым циклогексана обусловлен наличием метоксильной группы при ипсо-атоме углерода, а сигналов остальных пяти атомов водорода цикла - наличием пяти спиртовых гидроксильных групп.

Детальный анализ данных ПМР-спектра, сопоставление значений химсдвигов сигналов протонов и значений констант спин-спинового взаимодействия, позволил нам идентифицировать соединение IX как (III, 28, Зэ, 4Б, 5Б, 6г)-6-метоксициклогексан-1,2,3,4,5-пентаол (пинитол).

ОСН3

OR н3

OCHj

'OR

АГ0К не

OR

IX. R-H IXa. R=COCHj

Рис. 5. (+)-пинитол и его ацетилированное производное

У представителей семейства бобовые довольно часто обнаруживают пинитол в больших количествах, однако из клевера лугового это соединение выделено впервые.

Идентификация изофлавонов, выделенных из Trifolium pratense L.

Помимо описанных четырех новых соединений, из надземной и подземной частей клевера лугового были выделены 4 известных изофлавона: формононетин (I) (88,3 мг), прунетин (IV) (70 мг), генистеин (V) (60 мг) и прунетин-4'-0-Р-0-глюкопиранозид (VI) (350 мг).

В ИК-спектрах этих соединений присутствуют полосы поглощения гидроксильных групп, карбонила у-пирона и ароматических ядер. В УФ- ' спектрах наблюдаются максимумы поглощения, характерные для изофлавонов и их производных.

ос

НО

VI

Т

"ОН

он он

Рис. 6. Известные изофлавоны, выделенные из клевера лугового

В спектрах ПМР имеются характерные сигналы протона Н-2 в виде синглета в области слабого поля (8,05-8,10 м.д.).

Для установления месторасположения заместителей в молекулах выделенных изофлавонов использовалась комбинация методов УФ- и ПМР-спектроскопии, также масс-спектрометрия.

Масс-спектры снимались для ацилированных производных исследуемых веществ.

При установлении структуры глюкозида прунетина применяли кислотный гидролиз и идентифицировали отдельно агликон и сахарный остаток. Место присоединения углеводной части к агликону устанавливали методами, перечисленными выше.

Структура, установленная для данных соединений, была подтверждена сравнением с имеющимися образцами.

II. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ИЗОФЛАВОНОВ И ФЛАВОНОЛОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ TRIFOLIUM LUPINASTER L.

Из люпиновидного клевера, собранного на территории Сургутского района, было выделено 4 соединения: гликозид изофлавона - ононин (X) (20 мг), два гликозида кемпферола: З-О-дигликозид (XI) (5 мг) и 3-0-тригликозид (XII) (15 мг), и (+)-пинитол (400 мг).

Ононин (X) был получен из этилацетатной фракции надземой части люпиновидного клевера и идентифицирован сравнением с имеющимся подлинным образцом, а также на основании данных, полученных методами ИК-, УФ-, ПМР-спектроскопии и масс-спектрометрии.

Ха. R=COCH3

Рис. 7. Формононетин-7-0-Р-0-глюкопиранозид (ононин) и его тетраацетат

Кемпферол-З-О-дигликозид и кемпферол-З-О-тригликозид были получены из бутанольной фракции надземной части клевера и идентифицированы теми же методами, что и ононин.

Эти соединения имеют УФ-спектр, характерный для флавонолов, замещенных по третьему положению. В ИК-спектре имеются полосы поглощения гидроксилов, карбонильной группы и ароматических ядер.

При кислотном гидролизе первого соединения был получен агликон кемпферол, D-глюкоза и D-галактоза. При гидролизе второго - кемпферол, D-глюкоза, D-галактоза и L-рамноза. Последовательность связей Сахаров не установлена по причине малого количества вещества. Работа по установлению структуры соединений XI и XII продолжается.

Ононин и (+)-пинитол из люпиновидного клевера выделены впервые.

III. УСТАНОВЛЕНИЕ СТРУКТУРЫ ФЛАВОНОВ И ФЛАВОНОЛОВ,

ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ VICIA SUBVILLOSA (LEDEB.) TRAUTV

Флавоноиды горошка волосистого мы изучали в рамках сотрудничества с Институтом химии растительных веществ (ИХРВ АН республики Узбекистан).

Сбор растительного материала проводился в апреле в период цветения в окрестностях гор Алимтау Чимкентской области Республики Казахстан.

Обработка растительного экстракта и выделение индивидуальных флавоноидов проводилось методами, описанными выше.

Из этилацетатной фракции были получены 7 веществ. Одно из них -висциозид - оказалось новым природным соединением.

Структура висциозида (XVI)

УФ-спектр висциозида, полученного из этилацетатной фракции надземной части в количестве 100 мг, (Х^ 272, 292 пл., 340 нм) характерен для производных флавона.

В ИК-спеетре этого соединения имеются полосы колебания щцроксильных групп, карбонила у-пирона, ароматических С=С связей и С-О колебаний глишзвдс®.

В спектре ПМР, снятом в ДМСО-ёв, проявляются сигналы пяти ароматических протонов, Н-3, аномерного протона (Н-1"), протонов фенольных гидроксильных групп при С-5 и С-7.

Хроматографическая подвижность и данные ИК-, ПМР-спектров свидетельствуют о том, что соединение XIX является гликозидом. Это подтверждено получением в результате кислошого гидролиза гликозвда XIX лютеолина (5,7,3',4'-тетращдроксифлавона) и 1>галакгозы.

Ацеггалированием флавонгликозида уксусным ангидридом в пиридине получилигептадегальноепроизводное составасз5^мО18,т.пл.118-120°С (М4'742).

Батохромный сдвиг полосы I в УФ-спектре флавоноида XVI при добавлении ацетата натрия и наличие сигнала протона при 10,85 мд. (7-ОН группа) в спектре ПМР указывают на наличие свободной фенольной гидрокеипьной группы в положении 7 гликозида.

Место присоединения углеводного остатка к агликону установили сравнительным изучением УФ-спекгров исследуемого гликозида и лютеолина, снятых в присутствии ионизирующих и комплексообразующих добавок.

XVI. Я=Н ХУ1а. Я=СОСН3

Рис. 8. Висциозид и его гептаацетат

Величина батохромного сдвига полосы I в спектре флавонгликозида при добавлении А1СЬ и А1С1з/НС1 (+46 нм) свидетельствует об отсутствии орто-диоксигруппы в кольце В. В присутствии СНзСООИа в УФ-спеетре соединения наблюдается батахромный сдвиг полосы I на 55 нм с уменьшением интенсивности

18

максимумов поглощений, что указывает на гликозилирование 4'-ОН группы лютеолина в молекуле рассматриваемого флавонгликозида.

Сигнал аномерного протона D-галакгозы в спектре ПМР гликозида проявляется при 4.90 мд. в виде дублета с КССВ 7.0 Гц. Это свидетельствует о Р-конфигурации гликозвдцого центра D-галакгозы. Следовательно, гликозид имеет строение лютеолинЧ'-О-Р-О-галакгопиранозиаа

В литературе имеются сообщения об обнаружении 4-О-арабинозида, 4-0-глюкозида и 4'-0-глюкуронида лютеолина, сведения о лютеолин-4'-0-Р-0-галакгопиранозиде отсутствуют.

Структура флавонов и флавонолов, выделенных из горошка волосистого

Структура шесш известных соединений, выделенных из эгалацегагаой фракции горошка волосистого-апигенина (ХШ) (150 мг), лютеолина (XIV) (240 мг), кверцетина (XV) (220 мг), цинарозида (XVII) (190 мг), лютеолин-4'-0-р-D-глкжопиранозида (XVIII) (160 мг), изокверцитрина (XIX) (120 мг) - была установлена методами ПМР-, ИК-, УФ-спекгроскопии и масс-спекгрометрии. В случае гликозвдов применялся кислотный гвдрализ и отдельно идентифицировались агликоны и сахарные остатки.

он о

XV

XIII

XIV

он

<Еу

он* Г

он

он

Рис. 9. Известные флавоноиды, выделенные из Vicia subviilosa

БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ВЫДЕЛЕННЫХ СОЕДИНЕНИЙ

Для выделенных нами изофлавоноидов формононетина, ононина и генистина сотрудниками лаборатории фармакологаи Института химии растительных веществ АН РУз установлена гиполипидемическая и гипохолестеринемическая активность, провосходящая таковую официального лекарственного препарата «Гемфеброзил». Также для этих соединений была установлена ингибирующая активность по отношению к Na+,K+-ATP-a3e.

(+)-Пинитол обладает антидиабетическими и гипогликемическими свойствами и запатентован в качестве лекарственного средства в США.

ВЫВОДЫ

1. Изучен химический состав флавоноидов трех видов растений семейства Fabaceae: Trifolium pratense L., Trifolium Iupinaster L., Vicia subvillosa (Ledeb.) Trautv. Вьщелено 19 соединений, представленных флавонами, флавонолами, изофлавонами, птерокарпанами, их гликозидами и циклополиолом.

2. Из корней клевера лугового выделены новые моногалактозиды изофлавоноидов: формононетин-7-0-Р-0-галакгопиранозид и инермин-З-О-Р-О-галактопиранозид, а также известный изофлавон формононетин (7-гидрокси-4'-метоксиизофлавон). Из надземной части этого растения получены новые соединения прунетин-4'-0-а-1>-глюкопиранозид, генистеин-7-0-р-0-галактопиранозид и известные изофлавоны формононетин, прунетин, генистеин, npyHeraH-4'-0-ß-D-глюкопиранозид. Структура новых соединений установлена на основании данных химических превращений (ацетилирование, гидролиз), а также методами УФ-, ИК-спектроскопии, спектроскопии ЯМР-'Н и ЯМР-13С, масс-спектрометрии и спектроскопии кругового дихроизма.

3. Впервые изучен клевер люпиновидный. Из надземной часта выделены известное соединение ононин, а также З-О-дигликозид и 3-0-тригликозид кемпферола.

4. Обнаружены новые источники циклополиола (+)-пинитола - надземная часть клевера лугового и клевера люпиновидного -, обладающего антидиабетическими и гипогликемическими свойствами

5. Из надземной части горошка волосистого получен новый гликозид флавона висциозид (лютеолин-4'-0-Р-0-галактопиранозид), а также впервые выделены известные соединения: апигенин, лютеолин, кверцетин, цинарозид, лютеолин-4'-0-Р-0-глкжопиранозид, изокверцитрин.

6. Впервые были проведены структурные исследования флавоноидов растений территории Ханты-Мансийского автономного округа.

Основное содержание диссертации опубликовано в следующих работах:

1. Дренин A.A., Ботиров Э.Х., Петруляк Е.В.. Два новых моногалактозида изофлавоноидов из корней Trifolium pratense L. // Химия природ, соед. -2008. -Т.44. - №1. - С.21-23.

2. Дренин A.A., Ботиров Э.Х., Петруляк Е.В. Новый моногалактозид генистеина из надземной части Trifolium pratense L. // Химия природ, соед.-2008.-Т.44,- №2.-С.141-143. .

3. Юлдашев М.П., Муминова Б.А., Дренин A.A., Ботиров Э.Х. Флавоноиды надземной части Vicia subvillosa // Химия природ, соед. -2007. - Т.43 - № 1. - С. 30-31.

4. Drenin A.A., Botirov E.Kh. New Galactosides of isoflavonoids from Trifolum pratense L. / Seventh Intern. Symp. on the Chemistry of Natur. Compounds: Abstracts. - Tashkent, 2007. - P. 76.

5. Дренин A.A., Ботиров Э.Х. Новые моногалактозиды изофлавоноидов из подземной части Trifolium pratense L. / Новые достижения в химии

и химической технологии растительного сырья: Материалы Ш Всероссийской конференции. - Барнаул, 2007 г. - кн.2. - С. 295-298.

6. Дренин A.A., Ботиров Э.Х. Новые моногалактозиды изофлавоноидов из клевера лугового (Trifolum pratense L.) / Химия и медицина: Материалы VI-го Всероссийского научного семинара с молодежной научной школой (с международным участием). - Уфа, 2007. - С.49-51.

7. Дренин A.A., Ботиров Э.Х. Выделение и изучение флавоноидов Trifolium pratense L. / Наука и инновации XXI века: Материалы VII Открытой окружной конференции молодых ученых. - Сургут, 2006 г. -С. 90-92.

8. Дренин A.A., Ботиров Э.Х. Новые гликозиды изофлавонов из клевера лугового (Trifolium pratense L.) / Наука и инновации XXI века: Материалы VIII Открытой окружной конференции молодых ученых. -Сургут, 2007 г. - С. 84-86.

Подписано к печати 19.12.2008 г. Формат 60X841/16. Усл. печ. л. 1,0. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Roman. Тираж 110 экз. Заказ № 74. Типография «Библиографика». 628400, Тюменская обл., ХМАО-Югра, г. Сургут, ул. Мира, 54/1.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Литературный обзор.

1.1 Особенности строения, классификация и методы установления структуры природных флавоноидов.

1.2 Структурное разнообразие и биологическая активность флавоноидов растений рода Trifolium L.

1.3 Флавоноиды растений рода Vicia L.

Актуальность исследований. В настоящее время все больший интерес фармакологов привлекают вещества группы флавоноидов и изофлавоноидов. Эти соединения обладают высокой биологической активностью и, что особенно ценно, низкой токсичностью. Многочисленные исследования показывают, что препараты, созданные на основе этих веществ, являются высокоэффективными противоопухолевыми средствами, обладают антиоксидантными свойствами, снижают риск заболеваний сердечно-сосудистой системы [1,2].

Особый интерес в качестве источников соединений указанных классов представляют растения семейства Fabaceae (бобовые), объединяющего 17-18 тысяч видов и приблизительно 650 родов [3]. В частности - представители родов Trifolium L. и Vicia L., богатые флавоноидами и изофлавоноидами различных групп. Эти растения распространены почти на всей территории России, широко применяются в народной и официальной медицине и известны большим содержанием флавоноидов и изофлавоноидов [3-7].

На основе экстрактов клевера лугового (Trifolium pratense L.) создан ряд биологически активных добавок, обладающих широким спектром фармакологического действия [5]. В частности, отечественные БАД «Атекроклефит» компании «Эвалар» и «Кардиин» (Нутрифарм), а также их американский аналог «Red Clover Plus» (Nutri-Caer), применяют для профилактики и вспомогательного лечения заболеваний сердечно-сосудистой системы. БАД «Клевер» используют как иммуномодулирующее, антиоксидантное, антианемическое, ранозаживляющее, отхаркивающее, антиаллергическое, бактерицидное, сосудорасширяющее, спазмолитическое, диуретическое, потогонное, успокаивающее средство.

Общий недостаток перечисленных лекарственных средств и их существующих аналогов в том, что они созданы на основе спиртовых экстрактов, химический состав которых изучен поверхностно, а действующие вещества зачастую не выявлены.

В то же самое время, лекарственные средства, созданные на основе индивидуальных биологически активных соединений, обладают гораздо более ценными лечебными свойствами.

Поэтому изучение химического состава растений, содержащих ' флавоноиды и изофлавоноиды, разработка способов их получения с целью создания новых эффективных лекарственных препаратов является актуальной задачей современной биоорганической химии.

Работа выполнена в рамках Федеральной программы «Участник молодежного научно-инновационного движения» (госконтракт №5644р/8090).

Цель и задачи работы. Целью данной работы было изучение фенольных соединений растений семейтсва Fabaceae L. территории Ханты-Мансийского автономного округа - Югры.

В качестве объектов настоящих исследований были выбраны три вида растений семейства Fabaceae, относящиеся к двум родам: Trifolium pratense L. (клевер луговой), Trifolium lupinaster L. (клевер люпиновидный) и Vicia subvillosa (Ledeb.) Trautv (горошек волосистый).

В рамках поставленной цели решались следующие задачи:

- выделение и получение в индивидуальном виде флавоноидов из растений Trifolium pratense L. (клевер луговой), Trifolium lupinaster L. (клевер люпиновидный), Vicia subvillosa (Ledeb.) Trautv (горошек волосистый);

- идентификация и установление химического строения выделенных веществ;

- подготовка полученных веществ к фармакологическим испытаниям. Научная новизна. Из указанных выше растений выделено 18 веществ, относящихся к изофлавонам, птерокарпанам, флавонам, флавонолам, а также циклический полиол; с помощью современных химических и физико-химических методов установлена структура 5 новых природных соединений; флавоноиды Trifolium lupinaster L. исследованы впервые; из клевера лугового и клевера люпиновидного впервые выделен (+)-пинитол.

Практическая значимость. Впервые были исследованы фенольные соединения растений территории Ханты-Мансийского автономного округа -Югры. Для выделенных изофлавоноидов формононетина, ононина и генистина сотрудниками лаборатории фармакологии Института химии растительных веществ АН РУз установлена гиполипидемическая и гипохолестеринемическая активность, провосходящая таковую официального лекарственного препарата «Гемфеброзил». Также для этих соединений была установлена ингибирующая активность по отношению к №+,К+-АТР-азе.

В ходе данных исследований обнаружены новые источники (+)-пинитола, обладающего антидиабетическими и гипогликемическими свойствами и запатентованного в США в качестве лекарственного средства.

ВЫВОДЫ

1. Изучен химический состав флавоноидов трех видов растений семейства Fabaceae: Trifolium pratense L., Trifolium lupinaster L., Vicia subvillosa (Ledeb.) Trautv. Выделено 19 соединений, представленных флавонами, флавонолами, изофлавонами, птерокарпанами, их гликозидами и циклополиолом.

2. Из корней клевера лугового выделены новые моногалактозиды изофлавоноидов: формононетин-7-0-Р-Б-галактопиранозид и инермин-3-O-ß-D-галактопиранозид, а также известный изофлавон формононетин (7-гидрокси-4'-метоксиизофлавон). Из надземной части этого растения получены новые соединения пру нетин-4' -O-a-D-глюкопиранозид, генистеин-7-0-р-0-галактопиранозид и ' известные изофлавоны формононетин, прунетин, генистеин, прунетин-4'-0-р-0-глюкопиранозид. Структура новых соединений установлена на основании данных химических превращений (ацетилирование, гидролиз), а также

1 Ч методами УФ-, ИК-, ПМР-, С-ЯМР -спектроскопии, масс-спектрометрии и спектроскопии кругового дихроизма.

3. Впервые изучен клевер люпиновидный. Из надземной части этого растения выделено известное соединение ононин, а также 3-0-дигликозид и З-О-тригликозид кемпферола.

4. Обнаружены новые источники циклополиола (+)-пинитола - надземная часть клевера лугового и клевера люпиновидного —, обладающего антидиабетическими и гипогликемическими свойствами.

5. Из надземной части горошка волосистого получен новый гликозид флавона висциозид (лютеолин-4'-0-Р-0-галактопиранозид), а также впервые выделены известные соединения: апигенин, лютеолин, кверцетин, цинарозид, лютеолин-4'-0-р-0-глюкопиранозид, изокверцитрин.

6. Впервые были проведены структурные исследования флавоноидов растений территории Ханты-Мансийского автономного округа.

96

1. Middleton Е., Kandaswami С., Theoharis С.Т. The Effects of Plant Flavonoidson Mammalian Cells: Implications for Inflammation, Heart Disease, and Cancer // Pharmacol. Rev. 2000. - Vol. 52. - P. 673-751.

2. Кугач B.B., Никулынина Н.И., Ищенко В.И. Лекарственные формыфлавоноидов // Хим.-фарм. журнал. 1988. - Т.22. - С. 1018-1025.

3. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав,использование. Семейства Hydrangeaceae Haloragaceae / Отв. ред. В. П. Соколов.-Л.: 1987. - С.137-142.

4. Кьосев П.А. Полный справочник лекарственных растений. М: Эксмо,2005. С. 887.

5. Лекарственное растительное сырье. Фармакогнозия / Под ред.

6. Т.П. Яковлева, К.Ф. Блиновой. СПб.: СпецЛит, 2004. - С. 728.

7. Bouea S. М., Wiese Th. Е., Nehls S., Burow M. E., Elliott S., Carter-Wientjes

8. С. H., Shih B. Y., Mclachlan Jh. A., Cleveland Th. E. Evaluation of the Estrogenic Effects of Legume Extracts Containing Phytoestrogens // J. Agric. Food Chem. 2003. - Vol. 51. - P. 2193-2199.

9. Heinonen S.-M., Wahala K., Adlercreutz H. Identification of Urinary

10. Matbolites of The Red Clover Isoflavones Formononetin and Biochanin A In Human Subjects // J. Agric. Food Chem.- 2004.- Vol. 52. P. 6802-6809.

11. Гудвин Т., Мерсер Э. Введение в биохимию растений. В 2-х томах. М.:1. Мир, 1986. — Т.2. С.189.

12. Барабой В. А. Растительные фенолы и здоровье человека. М.: Наука,1984. С. 29-31.

13. The Science of Flavonoids // Ed. by Grotewold E. New-York: Springer Science, 2006.-P. 71-97.

14. Flavonoids. Chemistry, Biochemistry and Application. // Ed. by Andersen Q.M., Markham K.R. New-York: Taylor and Francis Group, 2006. -1199 pp.

15. The Handbook of Natural Flavonoids. Vol. 2 / Ed. by J. B. Harborne and H. Baxter. UK: Jhon Wiley and Sons, Chchester, 1999. - 879 pp.

16. Maurya R., Yadav P. P. Furanoflavonoids: an overview // Nat. Prod. Rep. — 2005. Vol. 22. - P. 400-424

17. Mossa J. S., El-Domiaty M. M., Al-Meshal I. A., El-Feraly F. S., Hufford C. D., McPhail D. R., McPhail A.T. A Flavone and Diterpene from Psiadia arabica // Phytochem. 1992. - Vol. 31. - P. 2863.

18. Wollenweber E., Wehde R., Dorr M., Lang G., Stevens J. F. C-Methyl-flavonoids from the leaf waxes of some Myrtaceae // Phytochem. — 2000. — Vol. 55. Iss. 8. - P. 965.

19. Wu T.-S. Chan Y.-Y., Leu Y.-L., Huang S.-C. A flavonoid and indole alkaloid from flowers of Murraya paniculata // Phytochem. 1994. -Vol. 37.-Iss. l.-P. 287.

20. Wu J.H. Chemical constituents from the root of Desmos chinensis // Chin. Tradit. Herb. Drugs. 2000. - Vol. 31. -P. 567.

21. Barron D., Ibrahim R.K. Isoprenylated flavonoids a survey // Phytochem. -1996. - Vol. 43. - Iss. 5.- P. 921.

22. Merghem R., Jay M., Viricel M.-R., Bayet C., Voirin B. // Phytochem. -1995. Vol. 38. - Iss. 3. - P. 637.

23. Kraut L., Mues R., Speicher A., Wagmann M., Eicher T. Carboxylated a-pyrone derivatives and flavonoids from the liverwort Dumortiera hirsuta // Phytochem. 1996. - Vol. 42. - Iss. 6.- P. 1693.

24. Hirobe C., Qiao Z.-H., Takeya K., Itokawa H. Cytotoxic flavonoids from Vitex agnus-castus // Phytochem. 1997. - Vol. 46. - Iss. 3 - P. 521.

25. Merfort I., Wendisch D. New flavonoid glycosides from Arnicae Flos DAB 9 // Planta Med. 1992. - Vol. 58.- P. 355.

26. Okamura N., Haraguchi H., Hashimoto K., Yagi A. Flavonoids in Rosmarinus officinalis leaves // Phytochem. 1994. - Vol. 37. - Iss. 5. - P. 1463.

27. Kraut, L., Mues, R., and Sim-Sim, M., Acylated flavone and glycerolglucosides from two Frullania species // Phytochem. — 1993. — Vol. 41.-P. 34

28. Li T.M., Li W.K., Yu J.G. Flavonoids from Artabotrys hexapetalus // Phytochem. 1997. - Vol. 45. -P. 831.

29. El-Gamal A.A., Alex. J., Halim A. F., Amer M.M., Takeya H.-E. A. saad K., Itokawa H. Flavonol glycosides from Galium sinaicum // Pharm. Sei. -1999.-Vol. 13.-P.41.

30. Rao K.V., Damu A. G., Jayaprakasam B., Gunasekar D. Flavonol glycosides from Cassia hirsuta // J. Nat. Prod. 1999. - Vol. 62. - P. 305.

31. Markham K.R., Geiger H., Jaggy H. Kaempferol 3-0-glucosyl(l—>2)rhamnoside from Ginkgo biloba and a reappraisal of other gluco(l—>2, 1—>3 and 1 —>4)rhamnoside structures // Phytochem. 1992. -Vol. 31.-P. 1009.

32. Hasler A., Gross G.-A., Meier B., Sticher O. Complex flavonol glycosides from the leaves of Ginkgo biloba // Phytochem. 1992. - Vol. 31. - Iss. 4 -P. 1391.

33. Muzitano M. F., Tinoco L. W., Guette C., Kaiser C. R., Rossi-Bergmann B., Costa S. S. The antileishmanial activity assessment of unusual flavonoids from Kalanchoe pinnata // Phytochem. — 2006. — Vol. 67. Iss. 18. — P. 2071-2077.

34. Semmar N., Fenet B., Glochoff-Fiasson K., Hasan A., Jay M. Four new flavonol glycosides from the leaves of Astragalus caprinus // J. Nat. Prod. -2002.-Vol. 65.-P. 576.

35. Wu T., Kong D.Y., Li H.T. Chemical components of Helicia nilagirica Beed. L. Structure of three new flavonol glycosides // Chin. Chem. Lett. 2002. -Vol. 13.-P. 1071.

36. Lakenbrink C., Lam T. M. L., Engelhardt XJ. H., Wray V. New flavonol glycosides from tea (Camellia sinensis) // Nat. Prod. Lett. 2000. - Vol. 14. -P. 233.

37. Chauhan D., Rai R., Chauhan J.S. Two flavonoid triglycosides from Cassia marginata // Indian J. Chem. 2002. - Vol. 4IB. - P. 446.

38. El-Monsallamy A. M. D. Leaf flavonoids of Albizia lebbeck // Phytochem. -1998.-Vol. 48.-P. 759.

39. Fukumoto H., Ishiguro K., Murashima T., Yamaki M., Isoi K. Structure determination of a kaempferol 3-rhamnosyldiglucoside from Impatiens balsamina // Phytochem. 1994. - Vol. 37. - Iss. 5. - P. 1486.

40. Carotenuto A., Fattorusso E., Lanzotti V., Magno V., De Feo V., Cicala C.The flavonoids of Allium neapolitanum // Phytochem. 1997. - Vol. 44. -Iss. 5.-P. 949.

41. Furusawa M., Tanaka T., Ito T., Nakaya K.-I., Iliya I., Ohyama M., Iinuma M., Murata H., Inatomi Y., Inada A., Nakanishi T., Matsushita S., Kubota Y., Sawa R., Takahashi Y. // Chem. Pharm. Bull. 2005. - Vol. 53. - P. 591593.

42. Merfort I., Wray V., Barakat H. H., Hussein S. A. M., Nawwar M. A. M., Willuhn G. Flavonol triglycosides from seeds of Nigella sativa // Phytochem. 1997. - Vol. 46. - Iss. 2. - P. 359.

43. Norbaek R., Kondo T. Flavonol glycosides from flowers of Crocus speciosus and C. antalyensis // Phytochem. 1999. - Vol. 51. - P. 1113.

44. Fattorusso E., Lanzotti V., Taglialatela-Scafati O., Cicala C. The flavonoids of leek, Allium porrum // Phytochem. 2001. - Vol. 57. - Iss. 4. - P. 565.

45. Olea R.S.G., Roque N.F., Das Bolzani V. Acylated flavonol glycosides and terpenoids from the leaves of Alibertia sessilis // J. Braz. Chem. Soc. -1997.-Vol. 8.-P. 257.

46. Lin Y.L., Kuo Y.H. Roripanoside, a new kaempferol rhamnoside from Rorippa indica (L.) Hiern. // J. Chin. Chem. Soc. (Taipei). — 1995. -Vol. 42.-P. 973.

47. Lu C.-M., Yang J. J., Wang P. Y., Lin C. C. A new acylated flavonol glycoside and antioxidant effects of Hedyotis diffusa // Planta Med. 2000. -Vol. 66.-P. 374.

48. Abe F., Iwase Y., Yamauchi T., Yahara S., Nohara T. Flavonol sinapoyl glycosides from leaves of Thevetia peruviana // Phytochem. — 1995. -Vol. 40.-Iss.2.-P. 577.

49. Guangyao G., Sibao C., Junshan Y., Peigen X. A new flavonoid from the aerial part of Thalictrum atriplex // Fitoterapia. 2000. - Vol. 71. - P. 627.

50. Aquil M., Khan I.Z. Three flavonol glycosides from Ricinus communis // Bull. Chem. Soc. Ethiop. 1997. - Vol. 11. - P. 51.

51. Seetharaman T. R., Petrus A. J. A. Novel acylkaempferol glycoside from the endemic species, Vernonia travancorica Hook. f. // J. Asian Nat. Prod. Res. -2004. Vol. 6. - P. 295-299.

52. Li N., Li X., Meng D.-L., Guo Y.-Q., Wang J.-H. Flavonoids from Camptosorus sibiricus Rupr // J. Asian Nat. Prod. Res. 2006. - Vol. 8. -P. 167-171.

53. Itoh A., Tanahashi T., Nagakura N., Takenaka Y., Chen C.-C., Pelletier J. Flavonoid glycosides from Adina racemosa and their inhibitory activities on eukaryotic protein synthesis // J. Nat. Prod. 2004. - Vol. 67. - P. 427-431.

54. Xu L.-R., Wu J., Zhang S. A new acylated flavonol glycoside from Denis triofoliata // J. Asian Nat. Prod. Res. 2006. - Vol. 8. - P. 9-13.

55. Bloor S.J., Bradley J.M., Lewis D.H., Davies K.M. Identification of flavonol and anthocyanin metabolites in leaves of Petunia "Mitchell" and its LC transgenic // Phytochem. 1998. - Vol. 49. - Iss. 5. - P. 1427.

56. Simon J.K., Chulia A. J., Kaouadji M., Allais D. P., Delage C. Two flavonol 3-triacetylarabinosyl(l—>6)glucosides. from Calluna vulgaris // Phytochem. 1993. - Vol. 33. - Iss. 5. - P. 1237.

57. Brunner G., Burger U., Castioni P., Kapetanidis I., Christen P. A novel acylated flavonol glycoside isolated from Brunfelsia grandiflora ssp. grandiflora // Phytochem. Anal. 2000. - Vol. 11. - P. 29.

58. Satake T., Hori K., Kamiya K., Siki Y., Fujimoto Y., Kimura Y., Maksut C., Mekin T. Studies on the constituents of Turkish plants. 1. Flavonol triglycosides from the fruit of Rhamnus thymifolius // Chem. Pharm. Bull. -1993.-Vol. 41.-P. 1743.

59. Champavier Y., Aallais D. P., Chulia A. G., Kaouadji M. Acetylated and non-acetylated flavonol triglycosides from Galega officinalis // Chem. Pharm. Bull. 2000. - Vol. 48. - P. 281.

60. Singab A.N.B. Acetylated flavonol triglycosides from Ammi majus L. // Phytochem. 1998. - Vol. 49. - P. 2177.

61. Xie C., Xu L. Z., Luo X. Z., Zhonz Z., Yang S. L. Flavonol glycosides from Lysimachia capillipes // J. Asian Nat. Prod. Res. 2002. - Vol. 4. - P. 17.

62. Semmar N., Fenet B., Gluchoff-Fiasson K., Hasan A., Jay M. Four new flavonol glycosides from the leaves of Astragalus caprinus // Chem. Pharm. Bull. 2002. - Vol. 50. - P. 981.

63. Jensen P.R., Jenkins K. M., Porter D., Fenical W. Evidence that a new antibiotic flavone glycoside chemically defends the sea grass Thalassia testudinum against zoosporic fungi // Appl. Environ. Microbiol. 1999. -Vol. 64.-P. 1490.

64. Chen S.-G, Chen J.-J., Gao K. Prenylisoflavone Derivatives from the Roots of Hedysarum scoparium // Chem. Pharm. Bull. 2007. - Vol. 55. - P. 11 Sill 84.

65. Salem M. M., Werbovetz K. A. Isoflavonoids and Other Compounds from Psorothamnus arborescens with Antiprotozoal Activities // J. Nat. Prod. — 2006.-Vol. 69.-P. 43-49.

66. Rahman M. M., Sarker S. D., Byres M., Gray A. I. New Salicylic Acid and Isoflavone Derivatives from Flemingia paniculata // J. Nat. Prod. 2004. -Vol. 67.-P. 402-406.

67. Deng F., Chang J., Zhang J.-S. New flavonoids and other constituents from Lespedeza cuneata // J. Asian Nat. Prod. Res. 2007. - Vol. 9. - P. 655-658.

68. Juck D. B. F., De Rezende L. C., David J. P., De Queiroz L. P., David J. M. Two new isoflavonoids from Bowdichia virgilioides // Nat. Prod. Res. -2006. Vol. 20. - P. 27-30.

69. Darboury N., Bayety C., Rodin-Bercionz S., Elkhomsiy Z., Lurelz F., Chaboudy A., Guilet D. Isoflavones from Ficus nymphaefolia // Nat. Prod. Res. 2007. - Vol. 21. - P. 461-464.

70. Ferrari F., Monache F. D., Suarez A. I., Arvelo F., Compagnone R. S. New cytotoxic isoflavone from the root bark of Brosimum utile // Nat. Prod. Res. -2005.-Vol. 19.-P. 331-335.

71. Waffo A. F. K., Coombes P. H., Mulholland D. A., Nkengfack A. I., Fomum Z. T. Flavones and isoflavones from the west African Fabaceae Erythrina vogelii // Phytochem. 2006. - Vol. 67. -1 ss. 5. - P. 459-463.

72. Drewes S. E., Horn M. M., Khan F., Munro O. Q., Dhlamini J. T. B., Rakuambo C., Meyer J. J. M. Minor pyrano-isoflavones from Eriosema kraussianum: activity-, structure-, and chemical reaction studies // Phytochem.-2004.-Vol. 65.-Iss. 13.-P. 1955-1961.

73. Reynaud J., Guilet D., Terreux R., Lussignol M., Walchshofer N. Isoflavonoids in non-leguminous families: an update // Nat. Prod. Rep. -2005.-Vol. 22.-P. 504-515.

74. Hosny M., Rosazza J.P.N. New isoflavone and triterpene glycosides from soybeans // J. Nat. Prod. 2002. - Vol. 65. - P. 805.

75. Hwang M.-H., Kwon Y.-S., Kim C.-M. A new isoflavone glycoside from heartwood of Maackia fauriei // Nat. Med. 1998. - Vol. 52. - P. 527.

76. Singh R.K., Choubey A. Acylated formononetin monoglucoside from Pterocarpus marsupium // Journal of the Institution of Chemists. 1999. -Vol. 71.-P. 103.

77. Hu J.-F., Wunderlich D., Sattler I., Thiericke R., Grabley S., Fenq X. Z. New 2-O-methylrhamno-isoflavones from Streptomyces sp. // Nat. Prod. Res. — 2003.-Vol. 17.-P. 451.

78. Kwon I.-B., Park H.-H. Isoflavonoids of kudzu (Pueraria lobata) and bioconversion of exogenous compounds into their malonylglucosides by its cell cultures // Foods & Food Ingredients Journal of Japan. 1995. -Vol. 163.-P. 86.

79. Shibuya Y. New isoflavone glucosides from white lupine (Lupinus albus L.) // Zeitschrift fuer Naturforschung C. Vol. 46. - 1991. - P. 513.

80. Xu D. Isolation of a new isoflavone from soybean germ // Zhongcaoyao. — 2003.-Vol. 34.-P. 1065.

81. Saxena V.K., Singal M., Genistein 4'-0-a-L-rhamnopyranoside from Pithecellobium dulce // Fitoterapia. 1998. - Vol. 69. - P. 305.

82. Tang Y., Lou F., Wang J., Zhuang S. Four new isoflavone triglycosides from Sophora japonica // J. Nat. Prod. 2001. - Vol. 64. - P. 1107.

83. Watanabe K., Kinjo J., Nohara T. Leguminous plants. XXXIX. Three new isoflavonoid glycosides from Lupinus luteus and L. polyphyllus arboreus // Chem. Pharm. Bull. 1993. - Vol. 41. - P. 394.

84. Bolanda G. M., Donnelly D. M. X. Isoflavonoids and related compounds // Nat. Prod. Rep. 1998. - Vol. 15. - P. 241-260.

85. Jain N. С., Tuli D. К. Pterocarpanoids recent developments in their chemistry // J. Scient. Ind. Res. - 1978. - Vol. 37. - P.287-304.

86. Jimenez-Gonzalez L., Alvarez-Corral M., Munoz-Dorado M., Rodriguez-Garcia I. Pterocarpans: interesting natural products with antifungal activity and other biological properties // Phytochem. Rev. 2008. - Vol. 7. -P. 125-154.

87. Markham K.R. Techniques of Flavonoid Identification. — London: Academic Press, 1982.- 113 pp.

88. Литвиненко В. И., Максютина Н. П. Спектральное исследование флавоноидов. Обнаружение свободных фенольных оксигрупп в различных положениях // Хим. прир. соед. 1965. — Т.4. - №3 — С. 420425.

89. Степаненко Б. Н. Химия и биохимия углеводов (моносахариды). Учеб. пособие для ун-ов. М.: «Высш. школа», 1977. - С. 87-93.

90. Agrawal Р. К., Rastogi R. P. I3C-NMR spectroscopy of flavonoids // Heterocyc. 1981. - Vol. 16. -№12. - P. 2181-2236.

91. Шашков А. С., Чижов О. С. Спектроскопия 13С-ЯМР в химии углеводов и родственных соединений // Биоорг. химия. 1976. - Т.2. — №4. -С. 437-497.

92. Goudard М., Faver-Bonvin J., Lebreton P., Chopin J. Differentiation des dihydroxy-5, 7 methoxy-6 ou 8 flavones flavonols et methyl-3 flavonols par spectrometrie de masse // Phytochem. 1978. - Vol. 17. — Iss. 1. — P. 145.

93. Goudard M., Faver-Bonvin J., Strelsky J., Nogradi M., Chopin J. Differentiation des hydroxy-5 dimethoxy-6,7 ou 7,8 et des trimethoxy-5,6,7 ou 5,7,8 flavones par spectrometrie de masse // Phytochem. — 1979. — Vol.-18.-Iss. l.-P. 186.

94. Батиров Э.Х., Юлдашев М.П., Нежинская Г.А., Маликов В.М. Флавоноиды Ferula schair и Ferula samarcandica // Хим. прир. соед. —1979.—Т. 15 — С. 727.

95. Юлдашев М.П., Батиров Э.Х., Маликов В.М. Флавоноиды надземной части Kickxia elatine // Хим. прир. соед. -1996. Т. 32 - С.38.

96. Юлдашев М.П., Батиров Э.Х., Вдовин А.Д., Маликов В.М., Ягудаев М.Р. Флавоноиды Thermopsis alterniflora. Кротонилтермопсозид и кротоноижосмосиин новые ацилированные флавоновые гликозиды // Хим. прир. соед. - 1989. - Т. 25.- С.352.

97. Поправко С. А., Соколова С. А., Фрайштат П. Д. // Биоорг. Химия. —1979.- Т.5.-С. 1654-1661.

98. Фрайштат П. Д., Поправко С. А., Вульфсон Н. С. // Биоорг. Химия.1980.- Т.6.-С. 1722-1732.

99. Казаков А. JL, Шинкаренко А. Л., Оганесян Е. Т. Лютеолин и его 7-0-гликозид из Trifolium pratense // Хим. Прир. Соед. 1972. — №5. — С. 673.

100. Шалашвили К. Г., Кемертелидзе Е. П. Фдавоноиды из Trifolium trichocephalum // Хим. Прир. Соед. 1975. - №5. - С. 653.

101. Wong Е. С., Francis М. Flavonoids in genotypes of Trifolium subterraneum — I: The normal flavonoid pattern of the Geraldton variety // Phytochem. -1968. Vol. 7. - Iss. 12. -P. 2123-2129.

102. ЮО.Казаков А. JI., Литвиненко В. И., Амосов А. С. Флавоноиды рода

103. Прир. Соед. 1983. - №1. - С. 105-106. 104.Шалашвили К. Г. Флавоноиды Trifolium echinatum и Т. diffusum // Хим.

104. Прир. Соед. 1993. - №3. - С. 468-469. 105 .Шалашвили К. Г. Флавоноиды Trifolium hybridum и Т. ambiguum// Хим. Прир. Соед. - 1974. - №5. с. 666.

105. Saxena V. К., Jain. А. К. Genistein 7-(2"-p-coumaroylglucoside) from

106. Казаков A. JI., Шинкаренко A. JL, Оганесян E. Т. // Хим. Прир. Соед.1972.-№6. -С. 804-805.

107. Ю.Катаев H. Ш., Харламов И. А., Ахмедходжаева H. М., Никонов Г. К., Халматов X. X. Трифозид изофлавон из Trifolium pratense // Хим. Прир. Соед. - 1972. - №6. - С. 806-807.

108. Wang Sh., Ghisalberti E. L., Ridsdill-Smith J. // J. Nat. Prod. 1998. -Vol. 61.-P. 508-510.

109. Bilton J. N., Debnam J. R., Smith I. M. 6a-hydroxypterocarpans from red clover//Phytochem.- 1976.-Vol. 15.-Iss. 9.-P. 1411-1412.

110. Delserone L. M., Matthews D. E., VanEtten H. D. Differential toxicity of enantiomers of maackiain and pisatin to phytopathogenic fungi // Phytochem. 1992. - Vol. 31. - Iss. 11. - P. 3813-3819.

111. Raynal N. J.-M, Momparler L., Charbonneau M., Momparler R. L. Antileukemic Activity of Genistein, a Major Isoflavone Present in Soy Products // J. Nat. Prod. 2008. - Vol. 71. - P. 3-7.

112. Georgetti S. R., Casagrande R., Di Mambro V. M., Azzolini A. ECS., Fonseca M. JV. Evaluation of the Antioxidant Activity of Different Flavonoids by the Chemiluminescense Method // AAPS FarmSci. 2003. - Vol. 5. - Iss. 2. -Article 20.

113. Kovaleva A. M., Kovalev V. N. Кумарины Vicia Sativa // Хим. природн. соед. 1986. - №. 6. - P. 778.

114. Andreeva О. А. Фенольные соединениянадземной части Vicia truncatula // Хим. природн. соед. 1984. - №2 - Р. 245-246.

115. Yuldashev М. P. Flavonoids from the Aerial Part of Vicia subvillosa // Chem. Nat. Сотр. 2005. - Vol. 41. - P. 99-100.

116. Tkachenko P. F., Samokish I. I., Dzhumyrko S. F., Kompantsev V. A. Флавоноиды Vicia Variabilis // Хим. природн. соед. 1984. - №5. -P. 661-662.

117. Andreeva О. A., Bandyukova V. А. Гликозид флавона из Vicia balanse // Хим. природн. соед. 1983. -№3. - Р. 388.

118. Tomas-Lorente F., Garcia-Grau М. М., Tomas-Barberan F. A., Nieto J. L. Acetylated flavonol glycosides from Vicia faba leaves // Phytochem. -1989. Vol. 28. - Iss. 7. - P. 1993-1995.

119. Waage S. K., Hedin P. A. Quercetin 3-0-galactosyl-(l—>6)-glucoside, a compound from narrowleaf vetch with antibacterial activity // Phytochem. -1985. Vol. 24. - Iss. 2. - P. 243-245.

120. Takemura M., Nishida R.3 Mori N., Kuwahara Y. Acylated flavonol glycosides as probing stimulants of a bean aphid, Megoura crassicauda, from Vicia angustifolia // Phytochem. 2002. - Vol. 61. - Issue 2. - P. 135-140.

121. Mabry Т. J., Markham К. R., Thomas М. В. The Systematic Identification of Flavonoids. — New-York: Springer-Verlag, 1970. — 354 p.

122. Reynaud J., Guilet D., Terreux R., Lussignol M., Walchshofer N. Isoflavonoids in non-leguminous families: an update // Nat. Prod. Rep. — 2005. Vol. 22. - P. 504 - 515.

123. Veitch N. C. Isoflavonoids of the Leguminosae // Nat. Prod. Rep. 2007. — Vol. 24.-P. 417-464.

124. Drenin A. A., Botirov E. Kh., Petrulyak E. V. Two new isoflavonoid monogalactosides from Trifolium pratense roots // Chem. Nat. Сотр. — 2008.-Vol. 44.-P. 24-27.

125. Misra L. N., Siddiqi S. A. Dhaincha (Sesbania bispinosa) leaves: A good source for antidiabetic (+)-pinitol // Current Science. 2008. - Vol. 87. — №11.-P. 1507.

126. Преч Э. Определение строения органических соединений. Таблицы спектральных данных / Э. Преч, Ф. Бюльманн, К. Аффольтер.- Пер. с англ. -М.: Мир; Бином. Лаборатория знаний, 2006. С. 182.

127. Плиев Т. Н. Молекулярная спектроскопия: В 5-ти томах Владикавказ: «Иристон», 2004. - Т. 3. - С. 573-600.

128. Юсупова С. С., Батиров Э. X., Киямитдинова Ф., Маликов В. М. Изофлавоноиды Cicer mogoltavicum // Хим. природн. соед. 1986. - №5 — С. 639-640.

129. Drenin A. A., Botirov E. Kh., Petrulyak E. V. A novel monogalactoside of genistein from the aerial part of Trifolium pratense // Chem. Nat. Comp. -2008. Vol. 44. - №2. - P. 178-181.

130. Veitch N. C., Grayer R. J. Flavonoids and their glycosides, including anthocyanins // Nat. Prod. Rep. 2008. - Vol. 25. - P. 555 - 611.13 8.Флора СССР. M.-JI.: Изд. АН СССР, 1948.-Т.13.-С. 426.

131. Yuldashev М.Р., Muminova В.А., Drenin A.A., Botirov E.Kh. Flavonoids from the aerial part of Vicia subvillosa // Chem. Nat Comp. 2007. - Vol. 43. - №1. -P. 34-36.

132. MaksumovaN. S., Yuldashev M. P., Batirov Ё. Kh. Luteolin glucosides from Ferula varia // Chem. Nat. Comp. 1994. - Vol. 30. - P. 679-680.i