Хромато-масс-спектрометрический анализ полихлорированных дибензо-п-диоксинов и дибензофуранов в липофильных природных матрицах с использованием нового унифицированного способа пробоподготовки тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.20 ВАК РФ

р0 Р^СИЙСКЛЯ АКАДЕМИЯ НАУК ИНСТИТУТ ФИЗИЧЕСКОЙ ХИМИИ

" 8 ОПТ 199В__

На правах рукописи

СОБОЛЕВА Евгения Игоревна

УДК 543.544.51:502.4.62

ХРОМАТО-МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПОЛИХЛОРИРОВАННЫХ ДИБЕНЗО-П-ДИОКСИНОВ И ДИБЕНЗОФУРАНОВ В ЛИПОФИЛЬНЫХ ПРИРОДНЫХ МАТРИЦАХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ НОВОГО УНИФИЦИРОВАННОГО СПОСОБА ПРОБОПОДГОТОВКИ.

Специальность 02.00.20 - хроматография

гореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

МОСКВА-1996

Работа выполнена в лаборатории аналитической зкотоксикологии Института проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова РАН.

Научный руководитель: кандидат химических наук Клюев H.A.

Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор Ревельский И.А., доктор химических наук Волощук A.M.

Ведущая организация: Московский Государственный Университет

им.М.В.Ломоносова, кафедра органической химии.

Защита состоится "17" октября 1996 г. в 13 часов 30 минут на заседанш специализированного совета Д 002.95.02 по защите диссертаций на соисканш ученой степени доктора химических наук при Институте физической химии РАЬ по адресу: 117915, г. Москва, Ленинский пр.,31.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института физической химии

РАН

Автореферат разослан "16" сентября 1996 г.

Ученый секретарь специализированного совета

кандидат химических наук

Коломиец Л.Н.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

: Актуальность работы. Проблема загрязнения окружающей среды полихлорированными дибензо-п-диоксинами (ПХДД) и полихлорированными дибензофуранами (ПХДФ) носит глобальный характер и по своей важности стоит в одном ряду с радиоактивным заражением территорий. Ввиду чрезвычайно высокой токсичности диоксинов и разнообразному поражающему действию эти соединения относят к группе приоритетных экотокеикантов, получивших название "суперэкотоксикантов" из-за явной опасности диоксинов для человека, обусловленной их способностью влиять на репродуктивные и иммунные системы организма, промотировать канцерогенные заболевания на чрезвычайно низких уровнях концентраций.

Низкие пределы обнаружения диоксинов (в России ПДК установлены 20 пг/л в воде, 0,5 пг/м3 в атмосферном воздухе и т.д., в эквивалентах токсичности) обусловливают и использование гибридных методов анализа: капиллярной газовой хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией (ГХ-МС), комбинации ГХ-МС-МС, как практически единственного метода, обладающего достаточной селективностью, чувствительностью и надёжностью для идентификации ПХДД и ПХДФ и количественого их определения. Однако, даже при использовании приборов с чувствительностью ниже 5-Ю пг, сохраняется необходимость предварительного концентрирования. Кроме того, повышаются требования к качеству очистки проб, т.к. при столь низком пределе обнаружения количество примесей достигает десятков тысяч единиц. В настоящее время в мире хорошо разработан приборный парк для определения ПХДД/ПХДФ на уровне 10"|2-10 |5г, и тщательно изучены вопросы анализа диоксинов с использованием метода изотопного разбавления. Поэтому, лимитирующей стадией определения диоксинов, с точки зрения временных затрат, трудоемкости и стоимости анализа, становится пробоподготовка.

Биологические липофильные матрицы - молоко, пищевые масла, сало, яйца, мясо, рыба и др. - составлют последнюю часть трофической цепи и, концентрируя в себе диоксины, могут служить индикаторами загрязнения территории. С точки зрения пораженное™ населения диоксинами важным объектом исследования является материнское молоко.

В настоящее время существует ряд зарубежных методик (EPA US 613, 1613, 8280 и др.) определения ПХДД и ПХДФ в различных матрицах, подробное

описание которых приведено в "Литературном обзоре". Все они, как отмечают исследователи, дорогостоящи, трудоёмки и требуют больших затрат времени, особенно при обработке жиросодержащих матриц. Однако, именно эти матрицы считаются наиболее сложными при подготовке проб к анализу ГХ-МС.

Цель диссертационной работы состояла в создании нового способа пробоподготовки липофильных матриц к хромато-масс-спектрометрическому определению содержания ПХДД и ПХДФ (на уровне 2 пг), отвечающего следующим требованиям:

- быстрота и увеличение производительности;

- адаптация западных методик к условиям России - использование более дешевых и доступных сорбентов и растворителей, минимизация их затрат, исключение из использования сложного оборудования;

- высокая селективность и эффективность экстракции и очистки с целью упрощения измерений, снижения уровня "шума" фона, продления "жизни" хроматографической колонки;

- унификация пробоподготовки - возможность обработки экстрактов всех природных жиросодержащих матриц по единой схеме;

- простота и возможность автоматизации процедуры очистки.

Работа выполнена в соответствии с федеральными программами "Экологическая безопасность России" (1993-1995гг) и "Зашита окружающей среды и населения от диоксиноподобных токсикантов на 1996-1997 гг (5 ноября 1995 г, постановление № 1102).

Научная новизна. Предложен принципиально новый способ подготовки липофильных матриц к аналитическому определению ПХДД и ПХДФ на уровне 2 пг методом ГХ-МС низкого и высокого разрешения.

Для диоксинов впервые применён метод экстракции смешивающимися с водой растворителями с последующим высаливанием органических веществ из водного слоя путем насыщения его сульфатом аммония. Дибензофуран (ДБФ) предложен в качестве модельного соединения для изучения распределения диоксинов в системах вода-ацетон-гексан, насыщенный водный раствор сульфата аммония-ацетон-гексан, молоко-ацетон-гексан.

Исследована зависимость сорбции диоксинов на активированном угле от степени измельчения и количества сорбента; подобраны условия термической десорбции диоксинов с угольной колонки.

Разработана новая модель угольной микроколонки с минимальным количеством активированного угля, необходимого для извлечения диоксинов из органического экстракта.

Изучена способность ряда активированных углей и графитированных саж к избирательной сорбции ПХДД и ПХДФ из экстракта жировой матрицы.

Подобран оптимальный сорбент - активированный уголь ФАС-МД для избирательной сорбции ПХДД и ПХДФ непосредственно из жирового экстракта и концентрирования диоксинов на первом этапе очистки в тысячи раз.

Исследована система толуол-гексан для проведения дальнейшей очистки экстрактов жировых матриц на колонках с кислотным и основным сорбентами и нейтральным силикагелем, а также на колонке с оксидом алюминия.

Практическая ценность работы. Новая методика пробоподготовки жировых матриц к аналитическому определению диоксинов методом ГХ-МС позволяет значительно сократить время анализа, затраты растворителей и сорбентов, а также использовать доступные для российских лабораторий химикаты. В новой методике отсутствуют многократные стадии упаривания растворителей перед каждым последующим этапом очистки, что позволяет проводить выделение "online" и автоматизировать методику.

Методика представляет ценность с экологической точки зрения, т.к. до минимума сокращено использование больших объемов толуола, эфира, хлористого метилена.

На защиту выносятся:

1. Новый способ анализа липофильных матриц па содержание ПХДД/ПХДФ (на уровне 2 пг) методом ГХ-МС, основанный на высокосслективном, экспрессном и унифицированном способе пробоподготовки.

2. Новая модель микроколонки, заполненной активированным углем ФАС-МД, позволяющей концентрировать ПХДД/ПХДФ из экстракта природных матриц в тысячи раз.

3. Результаты исследования продуктов питания и женского молока из различных регионов России и Южного Вьетнама, обработанных новым способом, на содержание в них ПХДД/ПХДФ.

Апробация и публикация работы. Отдельные положения работы были опубликованы в "Журнале аналитической химии" и журнале "Экологическая химия". Материалы диссертации были представлены на Международном

симпозиуме "Хроматография и масс-спектрометрия в экологическом анализе" (С.Петербург, 1994, 1996), на международных конференциях DIOXIN'94, DIOXIN'95 (Киото,Япония,1994, Эдмонтон,Канада, 1995), на Всеросийской конференции по анализу объектов окружающей среды "Экоаналитика" (Краснодар, 1994), на конференции "Диоксины: экологические проблемы и методы анализа" (Уфа, 1994), на финско-русском семинаре по химии и экологии элементоорганических соединений (Москва, 1995), на третьем международном симпозиуме "TOCOEN'96" (Чехия, 1996).

По новой методике проводилась подготовка проб к изомерноспецифическому анализу на ПХДД и ПХДФ, отобранных в Архангельской области. Социалистической республике Вьетнам, гг. Уфа, Салават, Стерлитамак, Новомосковск.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на ¡28 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: введение, литературный обзор, обсуждение результатов, экспериментальная часть, выводы, содержит 20 таблиц и 22 рисунка. Библиография включает 119 наименований.

II. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Экстракция ПХДД и ПХДФ из липофильных природных матриц -молока, яиц, мяса, масла и др. Впервые примененная к диоксинам экстракция из липофильных матриц основана на способности некоторых гидрофильных органических растворителей (ацетон, изопропанол и т.д.) образовывать самостоятельную фазу только в присутствии высаливателей - неорганических солей. Эффективность и быстрота экстракции достигается за счет образования на первом этапе однородной системы вода-органический растворитель и на втором -высаливанием растворителя и органических веществ из водной фазы путем её насыщения неорганической солью.

Для исследования процесса экстракции диоксинов из липофильных матриц в качестве модели был выбран ДБФ, обладающий близкими к диоксинам структурой и свойствами, а также сильной флуоресценцией, что позволяло использовать более простой метод ВЭЖХ для контрольных функций.

В качестве высаливателя применяли (NH^jSCU из-за его способности к глубокому денатурированию белков. При использовании NaCl и СаСЬ не удавалось добиться хорошего расслоения фаз и легко отделяемого осадка.

Эффективность экстракции оценивали по величине коэффициентов распределения в следующих системах:

1.вода - ацетон - гексан (1:1:1);

2. водный раствор (NH^SCb (с=500 г/л) - ацетон - гексан (1:1:1);

3. молоко - (NH^SCh - ацетон - гексан.

Коэффициенты распределения рассчитывали по формуле:

Сорг.

D=-,

Своди.

где Сорг. и Своди. - концентрация ДБФ в органической и водной фазах, соответственно.

Измерение концентраций ДБФ проводили на жидкостном хроматографе Hewlet Packard 1090 (США) с флюориметрическим детектором 1046. Использовали колонку из нержавеющей стали (L=200 мм, D=2,l мм), заполненную обращенным сорбентом С18 с размером частиц 5 мкм. Подвижная фаза - ацетонитрил-вода (v/v 90:10).

Пробные эксперименты, проведенные с системой вода-ацетон-гексан (1:1:1), показали, что большая часть ДБФ переходит в гексановый слой (96%), и что эффективность экстракции не зависит от концентрации ДБФ; уменьшение концентрации в десять раз не влияет на величину коэффициента распределения в пределах ошибки эксперимента (около 10%). Повторная экстракция малоэффективна и неудобна в проведении.

Использование для экстракции ненасыщенных водных растворов сульфата аммония с концентрациями ниже 500 г/л приводит к образованию трех слоев -насыщенного раствора соли, водно-ацетонового и гексанового и переводит ДБФ в гексан на 95%.

Использование насыщенного раствора сульфата аммония (концентрация 500 г/л) привело к увеличению экстракции до 99% и устранению промежуточного слоя.

Для получения аналогичных результатов на реальном объекте использовали коровье молоко. Экстракция молока ацетоном и гексаном приводит к образованию устойчивой эмульсии, которая разрушается после добавления сульфата аммония. После полного растворения соли и насыщения водной фазы образуются две фазы и белый, легко отделяемый хлопьевидный осадок. Величина полученного коэффициента распределения (D=2911) свидетельствует о том, что

одной экстракции вполне достаточно, чтобы ДБФ практически полностью бьи извлечен из водной фазы. Такое увеличение эффективности экстракции пс сравнению с водой может быть объяснено тем, что содержащиеся в молоке липиды, переходя в органический слой, способствуют дополнительному перенос) ДБФ из водно-солевой фазы в органическую. При подсчете баланса, т.е. количестЕ ДБФ в водной и органической фазах, было установлено, что в водно-солевой фазе содержится около 0,01 %, а в органической - 89,00 % вещества. Потери могут быть вызваны захватом ДБФ свернувшимся осадком.

Для проведения экстракции описанным способом требуется не более 30-4С мин, в то время как по стандартным методикам (ЕРА US 613, 1613, 8280 и др.)-около 2 дней.

Метод экстракции, разработанный для молока, применялся также дл* обработки образцов яиц. мяса, рыбы, колбасы. При экстракции мясных кисломолочных продуктов, рыбы образуется хлопьевидный осадок, легке отделяемый на стеклянном фильтре; при экстракции яиц - гелеобразный осадок хорошо отделяемый центрифугированием. Следовательно, предложенный метода экстракции универсален для большинства природных жиросодержащих матриц.

2. Очистка экстрактов липофильных матриц.

До разработки новой методики подготовки биологических проб к анализу на ПХДД и ПХДФ в нашей лаборатории использовали метод N 8280 ЕРА US (американское Агентство по охране окружающей среды), который был нам1: унифицирован для большого спектра матриц. Схема выделения диоксинов и; различных объектов по этому методу приведена на рис. 1.

Растворитель в экстракте любой матрицы заменяли на смесь хлористьп' метилен/гексан (1:1) и пропускали через "многослойную" колонку, заполненнук последовательно снизу вверх слоями нейтрального силикагеля, щелочного силикагеля, тремя чередующимися слоями сульфата натрия и силикагеля модифицированного серной кислотой, и нейтрального силикагеля.

Для биологических образцов, особенно для высоколипофильных (масла молока, мяса), требовалась "многослойная" колонка объемом около 150-300 мл соответственно суммарный объем пропускаемого через колонку экстракта i промывки, необходимой для полного вытеснения веществ, составлял примернс 1,5-2 литра. Неудобство этой стадии очистки, помимо длительности i необходимости упаривать столь большие количества растворителей, состояло еще

в частом образовании "пробок" в верхних кислотных слоях "многослойных" колонок за счет продуктов дегидратации и окисления при пропускании богатых жирами экстрактов.

I

Вода

Почва, | | Животные и донные | 1 растительны^ осадки ! ! ткани

1

Животные и | | растительны^ ) Молоко жиры !

Плазма | крови |

л.

I

Измельчение (

Смешивание с Маг304 : |

____________

ВНЕСЕНИЕ СТАНДАРТА

Экстракция системой хлористый метиленхексан (1:1)

Экстракция системой ! гексан:эфир:этанол |

II

Экстракция] системой | >слороформ| :метанол ;

г ■

I

.К ...

Замена растворителя на > | I _ ^хлористый метилентексан \

"МНОГОСЛОЙНАЯ" КОЛОНКА Замена растворителя на гексан

КОЛОНКА С ОКИСЬЮ АЛЮМИНИЯ

А.

УГОЛЬНАЯ КОЛОНКА С АХ-21

гх-мс '

Рис.1. Стандартная унифицированая схема подготовки проб к анализу на диоксины

Все эти сложности ограничивали скорость проведения анализов и массу эбразца, взятого для анализа (особенно липофильного), что, в свою очередь, шмитировало чувствительность метода. Поэтому задача отделения большей части матрицы, главным образом жиров и липидов, перед очисткой на "многослойной" юлонке являлась весьма актуальной.

После кислотно-щелочного разложения матрицы на "многослойной" :олонке следовала очистка; экстракт очищали на колонке с окисью алюминия, с предварительным полным упариванием растворителя и заменой его на гексан. Госледовательная промывка колонки, содержащей 4 г оксида алюминия, астворителями с увеличивающейся полярностью, а именно, гексаном, смесью

хлористого метилена с гексаном (5:95) и (50:50), приводит к эффективной очистке ПХДД и ПХДФ от хлорированных бензолов, нафталинов, большей части ПАУ, ПХБ, и т.д.

Последняя стадия пробоподготовки (рис.1) состояла в очистке полученного экстракта на угольной колонке, содержащей 500 мг активированного угля АХ-21 , нанесенного на целит. Экстракт пропускали под давлением через колонку и элюировали в обратном направлени 100 мл толуола.

Мы предположили, что для сорбции диоксинов на активированном угле АХ-21, обладающем удельной поверхностью 2800-3500 м2/г, большим объемом микропор и чрезвычайно большой емкостью по отношению к ПХДД и ПХДФ, достаточно меньшего количества сорбента, чем используется в настоящее время. Уменьшение размеров угольной колонки позволило бы сократить расхол растворителей и, следовательно, время анализа, значительная часть которого затрачивается на упаривание больших объемов растворителей после каждой стадии очистки. Кроме того, во всех описанных ранее методиках угольная очистка является завершающей стадией обработки экстракта, которая следует за предварительным разложением матрицы, очисткой от жиров и большинства других примесей. Однако, на наш взгляд, целесообразно применять угольную колонку на первом этапе обработки пробы для отделения фракции планарных ароматических и гетероциклических углеводородов от большинства липидов линейных, ациклических и непланарных соединений.

В связи с этим, разрабатывая новую модель угольной микроколонки, мь решали следующие задачи:

- определение минимального количества сорбента, необходимого дл> сорбции ПХДД и ПХДФ из органических растворителей;

- подбор оптимальных условий сорбции и десорбции диоксинов с колони (массы сорбента, размера частиц, наличие матрицы-носителя и температурь элюента);

- исследование различных типов активированных углей и графитированньр саж с разными физико-химическими характеристиками с целью выбора наиболе( подходящего сорбента и возможности замены импортного угля АХ-21 н; отечественный;

- изучение возможности непосредственного концентрирования ПХДД 1 ПХДФ из экстрактов жировых матриц на угольной колонке, т.к. глубоко!

первоначальное разложение матрицы сильными кислотами и щелочами может приводить к потерям анализируемых веществ, искажению результатов анализа и к дополнительным затратам средств и времени.

Исследование сорбции на угольных сорбентах проводили на установке, схема которой показана на рис.2.

В качестве модельных растворов использовали 2,3,7,8-ТХДД и ОХДД с концентрациями 5 нг/мкл. Считалось, что промежуточные по степени

хлорирования диоксины проявляют промежуточные сорбционные характеристики.

Раствор поступал из резервуара (1) под давлением, создаваемым компрессором (6), в угольную колонку (2), изготовленную из стеклянной трубки с внутренним диаметром 3 мм и длиной 10-15 см. Активированный уголь наносили на целит в соотношении 1/10 и помещали в колонку (3), закрепляя с двух концов тампонами из стеклобумаги (5). Элюировали диоксины толуолом при нагревании, отбирая фракции по 1-5 мл. Нагрев элюента осуществляли, помещая колонку в микропечь, изготовленную из резистора ПЭВ-15,8200 Ом (4).

Для количественного измерения использовали газовый хроматограф фирмы Hewlett Packard 5890 А с детектором электронного захвата и кварцевой капиллярной колонкой 25 м х 0,25 мм с неподвижной фазой SE-54. Расчет концентрации проводили по методу внешнего стандарта. Активированный уголь АХ-21 без носителя. По аналогии с вышеописанным методом первоначально диоксины наносили на колонку из смеси хлористый метилен/гексан, в дальнейшем, после отработки нового метода экстракции, сорбцию осуществляли из системы растворителей ацетон/гексан, для исключения лишней стадии упаривания растворителей. Учитывая, что уголь является обращенно-фазовым сорбентом, замена менее полярного хлористого метилена на более полярный ацетон не должна приводить к потерям анализируемых веществ за счет неполной сорбции (проскока при нанесении на колонку).

Рис.2. Схема установки для выделения диоксинов.

Учитывая предшествующий опыт выделения, для элюирования диоксинов с

колонки использовали толуол, как растворитель, эффективный для элюирования

ароматических веществ и менее токсичный, чем бензол.

Оптимальные размеры колонки и условия сорбции-десорбции диоксинов

подбирали, варьируя следующие параметры: температуру и направление потока

элюента, количество и степень

измельчения сорбента, объем и

состав наносимого раствора.

При нанесении на колонку,

содержащую 10 мг

активированного угля АХ-21 с

размером частиц (ё) 200 мкм, 50,0

нг 2,3,7,8-ТХДД из малого

объема растворителя хлористый

метилен/гексан (25,0 мкл),

происходит практически полная

сорбция диоксина, проскока не

наблюдается. Элюирование 26 мл

толуола при комнатной

температуре приводит к полной

десорбции диоксина. Следует

отметить, что пик диоксина

растянут - примерно 50(М

выходит в первых 10 мл и еще Рис. 3. Десорбция 2,3,7,8-ТХДД с угольной колонки, ,.0/ . .

заполненой 5 мг АХ-21 при разной температуре элюента. 50 /о - в следующих 10 мл (рис.За).

а) т=20 °с. б) т=70 "С. в) Т=80 °С. Объем, требуемый для полного

элюирования 2,3,7,8-ТХДД с колонки, уменьшается до 10 мл при повышении температуры элюента до 80 °С. Гистограммы элюирования, построенные при разных температурах, показаны на рис. 3.

Для изучения зависимости десорбции диоксинов от массы сорбента уголь АХ-21 брали в количествах 5, 10, 20 мг. Десорбция с колонок, содержащих 5 и 1С мг сорбента, при элюировании прямым током толуола составляла 100%, снижаясь до 32% при использовании 20 мг угля (рис. Зв, 4а, б).

5 7 9 12 16 20 24 Уэлюента(мл)

Ч Л С С 7 О О 1П

V 4 М V I О IV I I

Уэлюента(мл)

30 т

25 -

В) 20 -15 -•

% выхода 10 -5 -0 --

4 5 6 7 8 9 10 12 Уэлюента(ил)

3 4 6 8 10 12 Уэлюенга(мл)

Элюирование толуолом в обратном токе с колонки, содержащей 20 мг угля,

приводило к полной десорбции

нанесенного вещества.

С целью выяснения возможности

использования угольной колонки для

выделения диоксинов с различной

степенью хлорирования, на колонку

наносили растворы 2,3,7,8-ТХДД и

ОХДД, учитывая, что остальные ПХДД

имеют промежуточные времена

удерживания, а ПХДФ - аналогичные

им. 100% ОХДД десорбируется 100 мл

нагретого до 80 °С толуола, причем

фракция сильно растянута. ТХДД в

этих условиях выходит компактным

пиком (рис. 5а).

Используя в качестве сорбента

измельченный в порошок (с!=10 мкм)

уголь АХ-21, нанесенный на целит в

весовом соотношении 1/10, удалось

уменьшить необходимый для Рис.4. Десорбция 2,3,7,8-ТХДД с угольной колонки _ „ _

с разной массой сорбента при элкшровании элюирования ТХДД объем толуола ДО

в прямом токе, а) т=10 мг. б) т=20мг. 2-4 МЛ И до 50 мл ДЛЯ ОХДД (рис.5б).

Исследовалась возможность концентрирования диоксиуюв на данной колонке из большого объема растворителя. При нанесении диоксинов из 200 мл смеси хлористый метилен/гексан на угольную колонку, содержащую 5, 10, 20 мг угля АХ-21, в первых двух случаях наблюдался проскок 2,3,7,8-ТХДД, который составлял 11 и 7 %, соответственно. Колонка с 20 мг угля полностью сорбирует диоксины. Элюирование в противотоке 100 мл толуола приводит к 100% десорбции ТХДД и ОХДД. Таким образом было определено оптимальное количество угля для данной колонки - 20 мг.

Замена хлористого метилена на ацетон во фракции нанесения диоксинов не принесла существенных изменений. ПХДД и ОХДД удалось полностью сконцентрировать на колонке с АХ-21 из 200 мл смеси ацетон/гексан.

3 4 5 10 15 20 25 30 - у'элюента(мл)

5

Узлюснта(мл)

45 40 35 30

% выхода 20 15 10 5 О

1 3 5 7 9 15 25 35 45 55 Уэлюента(мл)

Рис. 5. Десорбция 2,3,7,8-ТХДД и ОХДД с угольных колонок, заполненых АХ-21 с разным диаметром частиц: а) с!=20 мкм, б) <1= 10 мкм.

Такой результат говорит о возможности исключить стадию упаривания растворителей перед нанесением диоксинов на угольную колонку и видоизменить пробоподготовку, концентрируя диоксины непосредственно из ацетон-гексанового экстракта матрицы без предварительного его разложения на "многослойной" колонке или каким-либо другим способом.

В качестве модели жирового экстракта использовали раствор топленого масла в смеси хлористый метилен-гексан. После пропускания через колонку раствора 5 г масла в 50 мл системы хлористый метилен/гексан с внесенными в него 50 нг ТХДД и элюирования в обратном токе 25 мл горячего толуола было выделено 88,8% внесенного ТХДД. Таким образом, показано, что ТХДД может

м%тхдд

В % ОХДД

I I I II I I I

Щ||!

быть выделен из масла и сконцентрирован в тысячи раз с использованием угольной микроколонки.

Чтобы убедиться в отсутствии проскока анализируемого вещества с раствором масла при нанесении на колонку, растворитель, прошедший через колонку после нанесения ТХДД, собрали и повторно пропустили через другую угольную колонку, с которой при аналогичном элюировании было выделено 5,1% от исходного количества. Аналогичный опыт с внесением 10 нгТХДД на колонку показал эффективность десорбции около 90% при полном отсутствии проскока.

Для подбора наиболее подходящего для выделения диоксинов сорбента был подобран ряд активированных углей и графитированных саж, в которых варьировались значения объемов микро- и мезопор и их распределение по размерам.

Поскольку опыты, проведенные с углем АХ-21, показали, что оптимальными условиями для сорбции-десорбции диоксинов являются: масса угля в колонке 20 мг; диаметр частиц угля 10 мкм; соотношение уголь/целит 1:10; элюирование в обратном токе нагретым до 80 °С толуолом, то при исследовании свойств новых сорбентов проводили эксперименты с учетом установленных нами условий.

Активированный уголь ФАС. Опыты по сорбции/десорбции диоксинов, проведенные с углем ФАС (НПО "Неорганика", г. Электросталь), нанесенным на целит, показали, что его хроматографические свойства аналогичны АХ-21, хотя пик ОХДД более узок (рис.6).

V элюента(мл)

Рис. 6. Десорбция диоксинов с угольных колонок, заполненых ФАС, из 200 мл органического растворителя.

Сравнение сорбционно-хроматографических свойств этих углей проводили на образцах сливочного масла, растворенных в системе хлористый метилен/гексан. Для каждой пробы выполняли параллельные опыты на колонках с АХ-21 и ФАС, последующую очистку осуществляли по стандартной схеме. Эффективность работы микроколонок оценивали по проценту извлечения меченых 13С|2ТХДД-"СиОХДД, вводимых перед началом обработки.

Было показано, что сорбционно-хроматографические свойства угля ФАС не хуже, а в некоторых случаях даже лучше, чем у АХ-21. Более того, при использовании угля ФАС наблюдалось лучшее качество очистки, которое оценивали по отношению сигнала к шуму. Таким образом, доступный и относительно дешевый отечественный сорбент ФАС можно использовать вместо импортного дорогого угля АХ-21.

Выход ПХДД при выделении их с помощью колонки с углем ФАС из сливочных масел с последующей очисткой экстрактов на "многослойной" колонке и колонке с оксидом алюминия в среднем для всех конгенеров составляет 56%, т.е. сравним с выходом, достигаемым при обработке жиросодержащих образцов по стандартным зарубежным методикам.

Активированный уголь ФАС-МД. Этот сорбент подвергали специальной очистке в Институте физической химии (лаборатория синтеза и исследования сорбентов, Поляков Н.С.), поэтому при его использовании для выделенш диоксинов не наблюдалось посторонних пиков, как в случае с другим! сорбентами.

При нанесении диоксинов на колонку с ФАС-МД из раствора хлористьн

метилен/гексан, также ка1 и из раствор; ацетон/гексан, наблюдалась полна сорбция. Элюирование мл толуола в противоток приводило к практическ стопроцентной десорбци ОХДД и ТХДД. Толь* 1-2 % ОХДД выходило следующих 5 мл толуо.1

% выхода

проскок

5 10 30 Уэлюента(мл)

50

Рис. 7. Десорбция диоксинов с угольной колонки,

заполненной 20 мг ФАС-МД, толуолом в противотоке

при Т=80 °С. У 14

(рис.7). Таким образом, данный уголь весьма эффективен для выделения диоксинов и, как показали дальнейшие исследования, является оптимальным.

Активированные угли У1. У2. УЗ (ИФХ РАН). Использование аналогичной колонки, заполненной 20 мг микропористого угля У1, нанесенного на целит, приводит к небольшому проскоку 2,3,7.8-ТХДД во фракции ацетон-гексан (3%). Практически полностью ТХДД и ОХДД элюируюгся при нагревании в противотоке первыми 5 мл толуола. Остаточное количество - около 5 % ТХДД и 10% ОХДД - элюируется размытым пиком в следующих 50 мл. Поэтому данный уголь может быть использован для выделения ПХДД и ПХДФ, хотя и с меньшим успехом.

Использование в качестве сорбента мезопорнстого угля У2 привело к практически полной сорбции ТХДД и ОХДД из 200 мл растворителя ацетон/гексан. Проскок в этой фракции составил 3 % для ТХДД, который элюировали полностью первыми 5 мл горячего толуола. ОХДД выходил размытым пиком.

Для активированного уголя УЗ проскок ТХДД и ОХДД во фракции ацетон/гексан составил 5 и 1.2%, соответственно. При сорбции ТХДД и ОХДД из 200 мл раствора ацетон/гексан проскока не наблюдалось. Элюирование горячим толуолом с колонки в противотоке привело к стопроцентной десорбции диоксинов, причем 98% ТХДД и 90% ОХДД элюировалось в первых 10 мл толуола. Остальные 9% выходили размытым пиком в следующих 40 мл. Исходя из этого заключили, что угли У1 и УЗ могут быть использованы для выделения диоксинов из экстрактов жиросодержащих матриц без предварительного упаривания с последующим элюированием небольшим (от 5 до 10 мл) количеством толуола, хотя небольшие проскоки во фракции нанесения и размытие пика ОХДД при элюирование свидетельствуют об их недостатках по сравнению с ФАС-МД.

Графитированная сажа Carbopak С (Supelko USA). Из литературного обзора следует, что графитированную сажу Carbopak С (удельная поверхность 912 м2/г) часто используют для выделения диоксинов. Проведенный эксперимент показал, что в случае нанесения диоксинов из малого объема - 50 мкл смеси ацетон/гексан, 2,3,7,8-ТХДД и ОХДД элюируюгся 4 мл горячего толуола в количествах 42,8% и 50%, соответственно. Проскок для ТХДД составляет 5,2%. При нанесении диоксинов из 50 мл смеси хлористый метилен/гексан наблюдается проскок 77% и 25,6% для ТХДД и ОХДД, соответственно (рис.8а). При десорбции

горячим толуолом элюировали 22% ТХДД и 25% ОХДЦ (рис.8б). Таким образом графитироваиная сажа СагЬорак С не пригодна для использования в качеств! сорбента для угольной микроколонки.

Графитированные сажи Карбохром В и Карбохром С. Результаты полученные с Карбохромом В (удельная поверхность 7 м2/г), аналогичнь результатам с сажей СагЬорак С. При использовании сажи Карбохром С с боле развитой, чем у двух предыдущих, удельной поверхностью (70 м2/г) проскок В! фракции хлористый метилен/гексан составил 7% для ТХДД и 2,6% для ОХД/1 Элюирование 2 мл горячего толуола привело к десорбции 80% ТХДД, а в 3 м. толуола сошло 87% ОХДД.

Таким образом, показано, что угольная микроколонка, содержащая 20 мг активированого угля, нанесенного на целит в соотношении 1/10, способна концентрировать диоксины из больших объемов (50-300 мл) органических смесей хлористого метилена/гексана, ацетона/гексана. Предпочтительнее использовать мелкую фракцию сорбента (10 мкм).

Рис.8. Десорбция диоксинов с угольной колонки, заполненой графитированнс сажей СагЬораск С при нанесении а) из 50 мкл органического растворителя, б) I 50 мл органического растворителя.

Эффективность элюирования диоксинов повышается при нагревани Наиболее подходящий режим - десорбция обратным током толуола пр нагревании его до 80 °С. Графитированные сажи Карбохром В и С и СагЬорак (

характеризующиеся малой удельной поверхностью и отсутствием микропор, не пригодны в качестве сорбентов для угольных микроколонок, т.к. при нанесении из больших объемов органических растворителей наблюдается проскок во фракции нанесения. Активированные угли АХ-21 и ФАС обладают хорошей сорбционной способностью по отношению к диоксинам и могут использоваться для их извлечения из растворов жиров, однако сильное адсорбционное взаимодействие с этими углями требует больших объемов толуола (до 80 мл) для полного элюирования высокохлорированных диоксинов. Исследование активированных углей с различными физико-химическими характеристиками показало, что угли У1, У2, УЗ, ФАС-МД могут успешно использоваться для выделения и концентрирования диоксинов из больших объемов растворителей. Однако, при использовании первых трех наблюдаются небольшие проскоки во фракции нанесения. Наиболее подходящим для угольной микроколонки оказался сорбент ФАС-МД, позволяющий сконцентрировать диоксины в тысячи раз и отделить их от непланарных примесей. При использовании ФАС-МД не наблюдается проскока при нанесении ТХДД и ОХДД из 300 мл смеси ацетон/гексан и элюирование проходит первыми 5 мл горячего толуола.

На примере активированных углей АХ-21 и ФАС показано, что описанная микроколонка способна извлекать диоксины из растворов жиров.

Таким образом, для всех дальнейших исследований по определению содержания диоксинов в липофильных матрицах мы применяли установку, изображенную на рис.2, в качестве сорбента использовали активированный уголь ФАС-МД, элюирование диоксинов проводили в обратном направленнии потока 5 мл толуола при нагревании его до 80 "С.

"Многослойная" колонка. Нами была рассмотрена возможность полного исключения стадий упаривания в процессе всей подготовки проб к анализу на диоксины с целью проведения ее "on-line" и автоматизации процесса. Для этого изучали подвижности 2,3,7,8-ТХДД и ОХДД на "многослойной" колонке и колонке с оксидом алюминия в системах толуол/гексан.

Модельные опыты проводили на уменьшенной "многослойной" колонке объемом 5-7 мл, заполненной снизу вверх последовательно слоями нейтрального силикагеля, щелочного силикагеля, сульфата натрия, кислотного силикагеля. Оптимальное содержание толуола в гексане подбиралось с учетом того, что количество толуола должно быть достаточным для полного элюирования

диоксинов и минимальным для уменьшения количества полярных соэлюентов 2,3,7,8-ТХДД и ОХДД наносили на колонку в гексане, затем пропускали 5, 10, Ъ % растворы толуола в гексане. Чтобы убедиться в полной десорбции диоксинов колонку промывали смесью хлористого метилена с гексаном. Для каждого случа: (% толуола) было проведено 4 опыта. Результаты, приведенные в таблице 3 свидетельствуют, что процентное содержание толуола не значительно влияет н; количество ТХДД и ОХДД, удерживаемых "многослойной" колонкой. 1 гексановой фракции содержится в среднем 50% ТХДД и ОХДД. Во фракцш толуол/гексан - около 50% 2,3,7,8-ТХДД и 35% ОХДД. Промывание колоно; системой хлористый метилен/гексан показывает, что около 1-2% ТХДД и 3-9'/ ОХДД остается на колонке. Следовательно, для очистки диоксинов н "многослойной" колонке можно использовать систему растворителе] толуол/гексан при содержании толуола до 20%.

Таблица

Процентный выход 2,3,7,8-ТХДД и ОХДД с "многослойной" колонки при

%толуола в гексакс 5 10 20

фракция 1 2 3 1 2 3 1 2 3

ТХДД 55±3,9 47±9.3 2.7±2 51±4.1 50+3,3 1 + 1.2 57±3.7 39±10 1±1.5

ОХДД 55+3.2 31+3.8 6.1+3 52+5,7 34±9.9 8±3.2 53±3.9 35+7.7 9±6.6

±п - среднеквадратичное отклонение при п=4; 1 - гексановая фракция; 2 - фракция толуол/гексан; 3 - фракция хлористый метилен/гексан

Колонка с оксидом алюминия. Было исследовано поведение 2,3,7,5 ТХДД и ОХДД на колонке со свежепрокаленным оксидом алюминия в систем растворителей толуол/гексан с разным содержанием толуола. Диоксины наносил на колонку в гексане, содержащем 5, 10 и 20 % толуола, после чего колонк промывал» гексаном, который объединяли с фракцией толуол/гексан. ТХДД ОХДД элюировали смесью растворителей хлористый метилен/гексан (50:50 Каждый опыт с определенным содержанием толуола проводили трижды. Выход среднеквадратичные отклонения представлены в таблице 2, из которой видно, чт не прослеживается ярко выраженной зависимости между процентны] содержанием толуола в гексане и содержанием ТХДД и ОХДД в этой фракцш Максимальный "проскок" диоксинов во фракции нанесения (11% ТХДД наблюдается при использовании 10% раствора толуола, поэтому использовани более разбавленных растворов предпочтительнее. Промывание колонки системо

хлористый метилен/гексан приводит в среднем к элюированию 90 % ТХДД и ОХДД.

Таблица 2

Процентный выход 2,3,7,8-ТХДД и ОХДД с колонки, заполненной 4 г окиси алюминия, при нанесении из смеси растворителей толуол/гексан с разным

% толуола в гексане 5 10 20

фракция 1 2 1 2 1 2

ТХДД 1.5+1.0 93+9.1 11±2.6 91+4.4 8+3.5 90+8.0

ОХДД 6±4.1 91+6.5 8±3.4 85+7.8 3+1.5 83+11.3

±п - среднеквадратичное отклонение при n=3; 1 - объединенная фракция гексан и толуол/гексан; 2 - фракция хлористый метилен/гексан.

3. Обшая схема пробоподготовки

Таким образом, мы установили, что использование смеси толуол/гексан для очистки на "многослойной" колонке и колонке с оксидом алюминия возможно при содержании толуола от 5 до 20%. Исходя из этого факта и учитывая предыдущие выводы о возможности выделения фракции диоксинов из жирового экстракта на угольной колонке, предложен унифицированный способ пробоподготовки липофильных матриц к анализу на ПХДД и ПХДФ (рис.9).

По этой схеме были обработаны различные липофильные матрицы; сливочное масло, молоко коровье и женское, яйца, мясо говяжье, свиное и куриное, орехи, рыба.

После добавления меченых l3Ci2 стандартов экстракция всех образцов проводилась по единой методике системой растворителей ацетон/гексан с последующим насыщением водного слоя сульфатом аммония.

Экстракт образца в системе ацетон/гексан пропускали через угольную микроколонку, содержащую 20 мг сорбента ФАС-МД, на которой, как было показано выше, ПХДД и ПХДФ концентрируются из 200-300 мл смеси ацетон-гексан. Десорбцию проводили 5 мл толуола, нагретого до 80 °С, к которому затем прибавляли 45 мл гексана, и пропускали смесь через "многослойную" колонку с последующей промывкой 50 мл гексана. Фракции объединяли и далее очищали на колонке с оксидом алюминия по стандартной схеме, описанной выше. Диоксины элюировали смесью хлористый метилен/гексан, упаривали и анализировали методом ГЖХ-МСВР на хромато-масс-спектрометрической системе, включающей газовый хроматограф Varían 3400, масс-спектрометр высокого разрешения с двойной фокусировкой (модель Finnigan МАТ HSQ-30) и систему обработки

данных SS 300. Разделение проводили на кварцевой капиллярной колонке (50 м х 0,25 мм) со сшитой привитой неподвижной фазой DB-5 ( толщина пленки 0,25 мкм). Масс-спектры получали при ионизации электронным ударом пучком электронов с энергией 70 эВ при токе эмиссиии 1 мА. Ускоряющее напряжение равнялось 3 кВ,

разрешающая способность масс-спектрометра - около 8000. Анализ проводили в

режиме MIS (Multy-Ion Selection), ,----------------,

осуществляя регистрацию ! ЭКСТРАКЦИЯ j

. (ацетон-.гексан) ; селективных масс-хроматограмм в 1 (NH4)2SOi

режиме высокого разрешения по дв.ум ________ _____

ионам: М+ и (М+2)+ для ТХДЦ, j УГОЛЬНАЯ МИКРОКОЛОНКА !

ТХДФ и ионам (М+2)+ и (М+4)+ для ;--------20мгФАС;МД-------j

остальных ПХДД и ПХДФ. Элюирование ПХДД и ПХДФ 5

толуола в противотоке при 80

Эффективность новой схемы -------------------------------- —>

(•МНОГОСЛОЙНАЯ" КОЛОНКА оценивали по извлечению внутренних ^ толу0л:гексан (1:9) _ _ !

меченых стандартов, вводимых в ~

пробы перед началом экстракции. | А120з

Среднее извлечение меченых

толуол:гексан (1:19)

| 5% CH2CI2 в гексане

конгенеров по всем матрицам лежит в 50% сн2С12 в гексане

пределах 60-80%.

Временные и экономические

[I

АНАЛИЗ ГХ-МС

преимущества использования Рис.9. Новая схема пробоподготовки.

разработанной системы очистки

экстракта демонстрирует таблица 3, из которой следует, что за счет использования новой модели угольной микроколонки, позволяющей избавиться от основной части матрицы на первой стадии без ее предварительного разложения, значительно сокращен расход сорбентов и растворителей для последующей очистки экстракта на "многослойной" колонке и колонке с оксидом алюминия. Такая минимизация системы очистки и возможность исключения промежуточных стадий упаривания растворителей позволили сократить время пробоподготовки до 6 часов, что в несколько раз быстрее, чем по стандартной методике.

Кроме того, предложенная процедура не требует специального оборудования, кроме компрессора или баллона со сжатым газом с регулятором давления и может быть полность автоматизирована. Значительным

преимуществом такого способа пробоподготовки является исключение концентрированных кислот и щелочей для очистки экстрактов, а также больших объемов этилового эфира для экстракции молока.

Таблица 3.

Сравнение затрат реактивов и времени при пробоподготовке 10 г жиросодержащей матрицы к анализу на ПХДД и ПХДФ.

Параметры Стандартный метод Новый метод

Объем угольной колонки (мл) 4-5 0.3-0.4

Объем толуола для угольной колонки (мл) 200 5

Время для обработки образца на угольной колонке (часы) 5-6 2-3

Объем "многослойной" колонки(мл) 300 5-7

Объем растворителя для "многослойной" колонки (мл) 1500-2000 50-70

Время для обработки на "многослойной" колонке (часы) >24 1

Общее время анализа (часы) >24 5-6

4. Экологические исследования районов на загрязнение их ПХДД и ПХДФ с гспользованиен новой схемы пробоподготовки.

Оценка загрязненности Архангельской области ПХДД/ПХДФ по содержанию IX в сливочном масле.

Во время экологической экспедиции по Архангельской области был фоведен отбор проб сливочного масла. Выбор региона определялся тем, что йличие в нем большого числа целлюлозно-бумажных комбинатов, относящихся к >дним из основных источников ПХДД и ПХДФ, является реальной предпосылкой :ильного загрязнения этими соединениями территории. Пробы масла отбирали в >азличных районах области на молокозаводах, работающих преимущественно на 1естном сырье, чтобы можно было соотнести уровень загрязненности продукции с [иоксиновым загрязнением данного района. Масло обрабатывали по описанной ювой схеме с использованием угольной микроколонки.

Предельно допустимая концентрация ПХДД/ПХДФ в масле в эквивалентах оксичности составляет 5,2 пг/г. В пробах масла с молочного комбината в г.

Каргополе и комбината "Виноградовский" обнаружили значительное ( в 2-2,5 раза) превышение ПДК. Поскольку для корма скота здесь использовали преимущественно местные корма, такое содержание ПХДД и ПХДФ говорит о высокой общей загрязненности окружающей среды этими экотоксикантами, поступающими, по всей видимости, от близлежащих целлюлозно-бумажных комбинатов путем воздушного переноса.

Исследование экологической ситуации с диоксинами в республике Башкортостан.

В рамках выполнения республиканской программы "Диоксин" в Башкортостане были проведены исследования проб продуктов питания и женского молока, отобранных в гг. Уфа, Стерлитамак, Салават.

Наибольшее превышение нормативных показателей наблюдается для мяса и мясопродуктов, где допустимый уровень превышен в 4,6 раза. По уровню загрязненности пробы располагаются следующим образом: мясо свиное и продукты из него (1,9), мясо говяжье и продукты из него (3,6), мясо куриное и продукты из него (5,75).

Биологический мониторинг населения городов Башкортостана осуществляли путем анализа грудного молока кормящих матерей. Содержание диоксинов в молоке женщин отчетливо зависит от района их проживания.

Полученные данные хорошо согласуются с материалами по загрязнению окружающей среды в промышленных центрах республики Башкортостан. Картина загрязнения продуктов питания и женского молока подтверждает возможность использования липофильных матриц как индикаторов загрязнения территории диоксинами.

ПХДД и ПХДФ в почвах и пищевых продуктах провинций Тай Нинь и Донг Май Южного Вьетнама.

Отбор проб проводился в основном в провинциях Донг Най и Тай Нинь, подвергавшихся интенсивной обработке дефолиантами во время войны 1962-1971 гг. Исследование проб почвы и воды в этих районах обнаружило видимые следы воздействия обработки дефолиантами. Относительно большое содержание ПХДД и ПХДФ наблюдается в объединенной пробе грудного молока из деревни Бинь Ми (8,7 пг/л), пробе рыбы из водоема в окрестности деревни Тань Бинь (14,8 пг/г) и в курином яйце из деревни Тань Бинь (8,8 пг/г). В остальных пробах (яйца, мясо) общее содержание ПХДД/ПХДФ не столь велико. Прослеживается аналогия в

>аспределешш конгенеров ПХДД и ПХДФ в пробах грудного и коровьего молока, 1ыбы, соевого масла, что может служить показателем наличия определенного [сточника загрязнения.

ВЫВОДЫ

1. Разработан эффективный, экономичный способ экстракции ПХДД и 1ХДФ из жиросодержащих природных матриц.

2. Создана новая модель одноразовой угольной микроколонки с спользованнем отечественного активированного угля ФАС-МД, обладающего ысокой селективностью по отношению к ПХДД и ПХДФ, что позволяет онцентрировать диоксины в десятки тысяч раз непосредственно из растворов иров.

3. Разработан новый эффективный унифицированный способ робоподготовки липофильных матриц к анализу на ПХДД и ПХДФ, 1рактеризующийся быстротой, экономичностью, малым использованием жеичных растворителей и поддающийся автоматизации.

4. На примере анализа пищевых продуктов и материнского молока, гобранных в Архангельской области и Башкирии, показана возможность ¡пользования новой схемы пробоподготовки в качестве скриннингового метода кнки загрязненности территории и пораженности населения диоксинами; >дтверждена способность диоксинов к биоаккумуляции и накоплению в юдуктах питания; указано на существование постоянного источника грязнения ПХДД и ПХДФ в исследованных районах Вьетнама.

5. Предложенный способ пробоподготовки липофильных матриц включен в ггодические разработки по определению содержания ПХДД и ПХДФ, которые юходят аттестацию в ГОССТАНДАРТе РФ в рамках федеральной программы ащита окружающей среды и населения от диоксинов и диоксиноподобных ксикантов на 1996-1997 гг".

ПЕРЕЧЕНЬ ПУБЛИКАЦИЙ АВТОРА ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Сойфер B.C., Соболева Е.И., Бродский Е.С., Клюев Н.А. Подготовка проб д] определения полихлорированных дибензо-п-диоксинов и дибензофуранов объектах окружающей среды с использованием модифицированной угольнс колонки.//Журнал аналитической химии. 1995.50.№3.с.262-266.

2. Соболева Е.И., Сойфер B.C., Бродский Е.С., Жильников В.Г., Юфит С.( Клюев Н.А. Модифицированная методика определения содержания дибензо-диоксинов/дибензофуранов в липофильных природных матрицах( анализ образщ сливочного масла Архангельского региона).//Экологическ; химия. 1995.4.№2.с.107-Ш.

3. Соболева Е.И., Сойфер B.C., Шестак Н.М., Клюев Н.А. Использован! одноразовой угольной микроколонки в унифицированной схеме пробоподготов! при определении полихлорированных дибензо-п-диоксинов (ПХДД) дибензофуранов (ПХДФ).//Тезисы докладов. Всеросийская конференция i анализу объектов окружающей среды "Экоаналитика-94".1994.Краснодар.с.16 166.

4. Soboleva E.I., Soyfer V.S., Mir-Kadirova E.J., Jilnikov V.G., Klyuev N.A. A unifi clean-up procedure for PCDD/PCDF determination in various natural matrices.//l Ii Symp. "Chromatography and mass-spectrometry in environmental analysis". 1994.! Peterburg,

5. Soboleva Е.1., Soyfer V.S., Mir-Kadirova E.J., Jilnikov V.G., Klyuev N.A. A unifi clean-up procedure for PCDD/PCDF determination in high-fat natural matrices.//Ii Symp. "DIOXIN'94.1994. vol.l9.Japan.p.l07-108.

6. Soboleva E.I., Soyfer V.S., Brodsky E.S., Klyuev N.A. New rapid clean-up methi for PCDDs and PCDFs determination in milk and eggs samples.//Int. Syrr "DIOXIN'95". 1995. Canada.

7. Соболева Е.И.,Сойфер B.C., Бродский E.C., Жильников В.Г., Клюев Н./ Каримова Л.К., Максимов Г.Г. Модификация схемы пробоподготов: липофильных природных матриц для определения содержания ПХДД/ПХДФ ( примере анализа пищевых продуктов из Архангельской области, г. Уфы, Стерлитамака). //Тезисы докладов. "Диоксины: экологические проблемы и мсто/ анализа ".1995.Уфа.

oboleva E.I., Soyfer V.S., Mir-Kadirova E.J., Brodsky E.S., Klyuev N.A. New clean-procedure for PCDD and PCDF determination in lipophylic matrices.//Third rush-Russian Seminar: Chemistry and Ecology of Organo-Element Compounds. 5. Finland.

Soboleva E.I., Soyfer V.S., Korotkov M.G., Klyuev N.A. Rapid method for ultaneous extraction and enrichment of PCDDs/PCDFs and PAH in lipophylic ural matrices. //Third Int. Symp."TOCOEN'96.1996,May. Czech Republic.p.275-

Soboleva E.I., Soyfer V.S., Klyuev N.A. New clean-up procedure of lipophylic :rices for fast determination polichlorinated dibenzodioxins and dibenzofuranes in the ironment by GH-MS high and low resolution.// 2 Int. Symp. "Chromatography and ss-spectrometry in environmental analysis and toxicology" June, 1996.St. srburg.p. 104-105.