Хроматография азотсодержащих синтетических и природных соединений тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.20 ВАК РФ

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК ИНСТИТУТ ФИЗИЧЕСКОЙ ХИМИИ

На правах рукописи КАБУЛОВ Боходир Джаббарович

ХРОМАТОГРАФИЯ АЗОТСОДЕРЖАЩИХ СИНТЕТИЧЕСКИХ И ПРИРОДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ

02.00.20 — хроматография

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук

Москва—1992 г.

Работа выполнена в Научном центре по хроматографии АН Республики Узбекистан при Институте химии и физики полимеров АН Республики Узбекистан.

Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор

Сакодынский К. И. доктор химических наук, профессор Беленький Б. Г.

академик РАН — Кунцевич А. Д.

Ведущее учреждение: 2-ой Московский государственный медицинский институт им. Н. И. Пирогова.

Зо

Защита состоится , Г. .1992 года в ^^ ч,

на заседании специализированного совета Д 002.95.02 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора химических наук при Институте физической химии РАН по адресу: 117915, г. Москва, ГСП-1, Ленинский пр.,31.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института физической химии РАН.

Автореферат разослан „.

6 ш сре^/^омг. 1992 г.

Ученый, секретарь специализированного Совета, кандидат химических наук КОЛОМИЕЦ Л, Н.

ОЩЛЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Акту альность "проблемы. Азотсодерглщне соодонекпл прздстсз-"ляюг Енгорес как вещества, входящие в влди свободпкх оснований, так а различных производных в сосгав смэсей проектов, солучае-Ш1Х в хштэской, нефтехимической 'а фармацввгиче ской проюаленно-

СТЛ, Лрлродных СОбДЛ.ЧОНЛЙ. Одной ЯЗ ОСНОВНЫХ ИрОбЛСМ ХШ.'ЛЦ И 1'ЗХ-

пологии к-гзгароцшслячасклх соединений является сложность состава трудаоразделяешх скосей пзокоров пж гомологов. Задача усложняется ген, что для одинаково замощённых олкилпрокзсодных в -ряда п-гогороциклячоских соединений число изомеров значительно больше, чом в аяалогячнцх ему рядах аро;.:аглчоск;о: углеводородов, а СБоЭсгр.а изомеров близки. С дазшпапдем гемпзрагурч дя-П31ШЯ- сложных скзоой оаповакяй ряда хяяолляа, гоохонолэда, азрл-днка, крупногонпшшнм источником г.оторях является ксхсохпгля, состав фракций услоглшется, а фазако-хлулчоскив свойства сблллз-ются. Эго приводя? л огказу исследователе'! о г пошгки рззрабэуц-вагь шгоди выделения высших индивидуальных азошсгих' гогороцлк-лов из подобных слошшх смзсей, хотя и потребность в них велика. В связи с этим разработка методов раздоленля слсшплх смесей азотсодерчжз.га: гетероциклических соединений весьма актуальна, так как позволяят рзяагь вопросы определения и получзнкя индивидуальных соединений.

Одним из основных методов разделошя сдозннх смесей азогяс-ПГХ. СССДШШШ1Ё является хроматогрсфяя, возможности ^ которой значительно возросли в связи с усовершенствование! ПШ'«.ЭЮ1?1.'-0Э..ЙПГ-нгхргтуЕ;г л ссрйонтоп. Особнй вклад в решение задач по -раадело-..-шз азогсодерзидах ге гороцякличоских соедалонаЗ вносят асследо-заиия механизма меямолекуляряых взаимодействий адсорбаг-адсор-бент в хрома тографглеском процессе, виявленио зависимостей мз7.-ду хронографическими и фазико-хикцче сками хорзкгераотякемя

сорбатов, а также факторов, определяющих порядок элюировашш компонентов разделяемой пробы.

Работа посвящена развитию теории и практики мдкосгной и газовой хроматографии азотсодержащих гетероциклических и природных соединений. В ней решаются актуальные вопросы мотодологии хроматографическях процессов, связанных с выбором и получением сорбентов, предназначенных для разделения азотсодержащих оснований, а гакяо с установлением физико-химических закономерностей удерживания и механизма межмолекулярных взаимодействий в исследуемых хроматографических системах. На основе полученных результатов разработаны методы группового разделения азотсодержащих соединений и решай ряд задач по разделению сложных смесей азот-содерснащих соединений как синтетического, так и природного про-исхоздения.

Работа выполнялась в соответствии с координационным планом научно-исследовательских работ АН СССР по проблеме "Хроматография" на 1981-1985 гг. ( раздел 2.15.6.2 Изучение механизма мэж-молекулярных взаимодействий и закономерностей удерживания; раздел 2.15.11.3 Применение хроматографии для получошш эталонных ц чистых соединений ), "Хроматография. Электрофорез" на 13861930 гг. ( раздел 2.15.7.2 Синтез и исследование свойств минеральных и полимерных сорбентов, носителей для молекулярной, ситовой и аффинной хроматографии; раздел 2.15.9.1 Аналитическое применение хроматографии и электрофореза для анализа слоящих смесей, полимеров ).

Цпдьв р/н1отн явилась раэрабош мот ода надкостной хроматографии природных соединений, выполнения которой были постав-лещ следующие задачи:

- изученио взаимодействия азотистых оснований ряда пиридина с сорбентами на основе силикаголя и гамма-оксида алзошнпя;

- определение факторов, определяющих порядок элюирования N-гетероцяклических соединений для всех изученных сорбентов,

исследование межмолекулярного взаимодействия адсорбат-адсорбент;

- разработка метода группового разделения сложных смесей изомерных и гомологичных алкилзамещенных азотсодержащих гетеро-циклов;

- разработка методов ВЭЕХ и ЕХ для разделения азотсодержащих, синтетических и природных соединений;

- установление количественной связи времени удерживания 2-алкилплридинов при 2ТХ ( жидкостно-твёрдофазная хроматография ) со стерическими константами, применяемыми в анализе Тафта;

- изучение межмолекулярного взаимодействия адсорбат-адсор-бенг при эффекте системных пиков з жидкостной хроматографии пиридиновых оснований;

- разработка способов получения химически чистых микросферических силикагелей различной пористости, изучение способов получения гидролитически стабильных силикагелей для ВЭЖХ азотистых оснований.

Научная новизна. Проведены систематические исследования и установлены особенности межмолакулярного взаимодействия азотсодержащих гетероциклических соединений на силикагелевых сорбентах и гамма-оксиде алюминия, в том числе гамма-оксиде алюминия, модифицированного хлористым кобальтом. Впервые выявлено, что при глд-костной хроматографии азотсодержащих гетероциклических соединений главным фактором, определяющим порядок элюирования компонентов разделяемой пробы на указанных сорбентах, является степень пространственной затрудненности, яо не основность изученных ге-тероцикяов.

Метод SIX на гамма-оксиде алюминия и силикагеле развит в групповое разделение особо сложных смесей изомерных и гомологич-

ных алкилзамещённых азотсодержащих гетероциклов. Показало, что групповые разделения указанных соединений происходят в зависимости от степени пространственных препятствий, создаваемых неподе-лонной пара электронов гетероатома азота гетероцикла алкильными группами, расположенными в положениях ближайших к гогороаюцу. Предложено несколько вариантов использования метода аналитичес-. кой и препаративной ЯТХ для групповых разделений сложных смесей коксохимического происхождения.

Разработан метод разделения азотсодержащих гетероциклических соединений с использованием ВЭЖХ. Исследованы отдельные азотсодержащие субстанции, производимые химфармкомбинатом, хиназолино-вые алкалоиды, выделенные из растительных источников и синтетическим путем. Методами газовой и жидкостной хроматографии исследованы образцы мумие и мумиеподобных веществ. По данным газовой хроматографии и газовой хромато-масс-спектрометрии показано, что в исследуемых образцах содержатся до 120 химических соединений, значительная часть которых идентифицирована. Результаты жидкостной хроматографии позволили получить информацию об аминокислотном и ионном состава мумие и мумиеподобных веществ. Предложено по содержанию отдельных аминокислот и органических кислот определять подлинность вдмко.

Установленная количественная связь времени удерживания 2-ал-килпиридинов при 2ТХ со сгерическими константами, применяемыми в анализе Тафта, позволила развить новый метод количественного определения этих констант методом STX. Метод экспериментально не сложен, имеет преимуществом быстроту выполнения по сравнению с классическими кинетическими методами определения этих констант.

Предложен возможный механизм актов адсорбции-десорбции в процеооо хромагогра$ачбского разделения замещённых азотистых го-гороцдклов с учётом образования водородной связи на гидроксялл-

рованнсй поверхности силякагеля и аналогичные механизмы для гамма-оксида алюминия. Показано, что при ВЭЖХ азотистых оснований на аминопропялированном силикагеле процесс разделения можно объяснить с точки прения донорно-акцепторного комплексообразования, включающего образование водородных связей можду' остаточными си-ланольными группами с атомами гегероциклов и взаимодействие ами-нопропильной группы с электрофильными частями молекул гегероциклов.

Проведено исследование эффекта системных пиков в жидкостной хроматографии при использовании многокомпонентных элюентов,впервые показана возможность использования эффекта для исследований межмолекулярного взаимодействия адсорбат-адсорбент при SIX пиридиновых оснований.

Проведены систематические исследования способов получения химически чистых шшросферических силикагелей различной пористости из геграэгоксисилана через олигомерные полиэтоксисилсксаны. Разработаны условия получения сплякагелей в зависимости от вязкости исходного олигомера, добавления отдельных органических добавок, влияющих на порообразование. Изучены физико-химические характеристики полученных образцов сорбентов, установлены текстурные характеристики силпкагелей. Показана возможность получения гидролитически стабильных снликагелей поверхностным модифицированием хлористым цирконилом, исследована их стабильность путем щелочной обработки сорбентов и установлена стойкость сорбента к высоким значениям рН. Исследованы кремнецирконяевыо сорбенты в условиях ВЭКХ азотсодержащих гетероциклических соединений.

Практическая ценность. Экспериментальные данные г.о разделению азотсодержащих соединений методом ВЭЯХ дают возможность использовать методики в контроле производства азотсодержащих субстанций. Полученные при этом результаты позволили осуществить

оперативный контроль и регулирование технологических параметров по оптимальным показателям качества промежуточных и товарных продуктов.

Результаты исследования состава мумие и мумиоподобных веществ нашли применение при комплексном исследовании этих соединений для создания медицинских препаратов и пищевых добавок на их основе в Научном центре молекулярной диагностики МЗ СССР.

Гидролитически стабильные силикагели предложены к внедрению для хроматических разделений в НПО "Синтэко", Ш "Элсико".

Автор выносит на защиту: результаты по разработке метода жидкостной хроматографии азотсодержащих гетероциклических и природных соединений, в том числе:

- результаты изучения особенностей меямолекулярного взаимодействия азотсодержащих гетероциклических соединений на использованных сорбентах;

- групповое разделение особо сложных смесей изомерных и гомологичных алкилзамещённых азотсодержащих гетероциклов;

- результаты хроматографического разделения методами газовой и жидкостной хроматографии азотсодержащих субстанций, хиназолино-вых алкалоидов, муше и мумиеподобных веществ;

- мотод количественного определения стерических констант,применяемых в анализе Тафга по результатам ЕТХ 2-алкилпиридинов;

- результаты исследования эффекта системных пиков при изучении межмолекулярного взаимодействия адсорбат-адсорбент при 2ТХ пиридиновых оснований;

- результаты изучения способов получения микросферических силикагелей для ВЭЖХ азотсодержащих соединений, в том числе гид-ролягичаокя огаСильных кремнециркокисшшс сорбентов.

Личное участие автора. Личный вклад диссертанта состоял в постановке задач, определении направлений исследования и обобще-

нли полученных результатов. Автор непосредственно участвовал в проведении экспериментов л обсуждении полученных результатов.

Апробация работы. Результаты работы докладывались и обсуждались на:

- П симпозиуме по химии и технологии гетероциклических соединений и горючих ископаемых ( Донецк, 1973 );

- П Всесоюзном симпозиуме по можмолекулярному взаимодействию и конформащш молекул ( Волгоград, 1974 );

- Всесоюзной конференции "Современная элионгная детекторная хроматография органических и неорганических соединений (Киев,1974);

- Всесоюзной конференции "Физико-химическое и препаративное применение хроматографии ( Рига, 1976 );

- Ill Всесоюзной конференции по аналитической химии органических соединений (Москва,1976);

- Международном симпозиуме "Применение молекулярной хроматографии для анализа окружающей среда и исследования биохимических процессов ( Самарканд, 1976 );

- Всесоюзной конференции по применению хроматографии в нефтепереработке и нефтехимии С Уфа, 1977 );

- Республиканской конференции "Актуальные проблемы в области общественных и естественных наук ( Ташкент, 1978 );

- П Всесоюзном симпозиуме по жидкостной хроматография ( Звенигород, 1982 );

- I Всесоюзной конференции "Хроматография в биологии и медицине" ( Москва, 1983 );

- Поволжской межотраслевой конференции по теории и практике хроматографии ( Куйбышев, 1984 );

- Ш Всесоюзном симпозиуме по молекулярной жидкостной хроматографии ( Рига, 1984 );

- Международном симпозиуме по применению жидкостной хромато-

графия в биологии и медицина ( Москва, 1986 );

- Всесоюзном симпозиуме "Биотехнологические и химические метода охрани окружающей среды ( Самартщ, 1988 );

- конференции "Андлитика-8|3" ( Алма-Ата, 1989 );

- конференции "Адсорбенты и способы их модификации" ( Дзержинск, 1989 );

- 7 Дунайском сшлозиума ( 1ДРД909 );

- У Всесоюзном симпозиуме по молекулярной жидкостной хроматографии ( Рига, 1990 );

- III Всепольской конференции по хроматографии в науке и производстве ( Люблин, 1990 );

- конференции "Прикладные аспекты микроколоночной хроматографии" ( Минск, 1990 );

- конференции "Аналитика-90" - "Аналигическая химия я охрана окружающей среды" ( Ташкент, 1990 );

- II Международном симдозиумз "Биомедицинское применение хроматографии и электрофореза " ( Таллинн, 1990 );

- региональной конференции "Хроматография в анализе объектов окружающей среды" ( Ташкент, 1991 );

- Всесоюзном симпозиуме-семинаре "Препаративная масштабируемая хроматография биологически активных веществ и альтернативные метода" ( Санкт-Петербург, 1991 ).

Публикации. Содержание диссертации отражено в 55 научных пуб-лшвдга: в отествониых и зарубежных журналах я сборниках, одам учебном пособии.

Структура работы. Работа изложена на 381 страницах (текстовая часть - 270 страниц), содержит 47 таблиц, 184 рисунка и состоит из введения, шести глав, выводов, приложения, списка литературы 409 наименований.

ОСНОВНОЕ С0ДЕЕ2АНИЕ РАБОТЫ

Особенности хроматографического удерживания азотсодержащих гетероциклических соодиноний

Хромагографическое удерживание азотсодержащих гетероциклических соединений в значительной степени определяется вкладом взаимодействия атома азота с полярным адсорбентом и сильно зависит от степени экранирования гетероатома алкильными группами, расположенными близко к нему, т.е. от пространственных эффектов. Это явление было изучено при хроматографировании пиридина и его 2-ал-килзамещённых производных в условиях ЖТХ с использованием в качестве адсорбентов гамма-оксида алюминия, силикагеля п оксида алю-мяния, ямпрегкированного хлористым кобальтом, а в качестве подвижной фазы смеси растворителей дкоксан-изооктан.

Результаты хромагографичеокого разделения свидетельствуют о том, что на изученных сорбентах порядок выхода замещённых пиридиновых оснований однозначно определяется степенью пространственных затруднений у неподелённой пары электронов йтома азота,взаимодействующего с активными центрам поверхности сорбентов, но не основностью пиридина и ого гомологов ( таблица I ).

Таблица I

Порядок выхода 2-алкилпиридикоз в условиях ИХ

! -Н ! ^Нз ; -ед \ -СН(СН3)2 ! -С(СН3)3

5'7 5,97 5,97 5,83 5,76

Порядок выхода 5 4 3 2 I

Основность изученных соединений по мере увеличения объёма за-

местителей в положении 2, г.е. от пиридина к 2-трег-бутилпяридя-ну скачала возрастает, затем падает, тогда как пространственные затруднения убывают в обратном порядка.

Теоретически теплота адсорбции должна определяться основностью изученных азотистых гетероциклов, которая оцонивается степенью сродства к протону. Очевидно, взаимодойствие с большими по объёму акцепторами электронной плотности (типа А13+ на поверхности гамма-оксида алюминия ) или с протоном, но в условиях, когда соседние группы могут препятствовать образованию водородной связи (типа ОН-групп на поверхности силикагеля или на частично гидратированной поверхности окепда алюминия), будет протекать иначе, чем при нейтрализации сильными кислотами в водных или водно-спиртовых растворах и больше зависеть от объёма заместителей в положении, ближайшем к гетероатому гегероцикла, что и подтверждают полученные результаты.

Предложена схельа адсорбции пиридина, 2-этиллиридина и 2-трет-бутилпиридина на силикаголо. Предполагая вертикальную (якорную) ориентацию пиридинового цикла недоделанной парой электронов вследствие образования водородной связи полученный порядок выхода азотистых гетероциклов удовлетворительно объясняется исключительно адсорбцией за счёт образования водородной связи. Заместители во 2-ом положении пиридина экранируют неподелёняую пару электронов, создавая пространственные препятствия образованию водородной связи.

Характерно, что 2-трег-бугиляиридия не задерживается колонкой, причем время ого удерживания совпадает с временем удерживания трот-бутилбензола. Таким образом, имеет место практически полное экранирование грег-бугильной группой неподелонной пары электронов атома азота. Ориентация пиридиновых оснований на поверхности силикагеля зависит ог объёма аякильной группы и прост-

ранственных затруднений, создаваемых ею в положениях, ближайших к атому азота, и, вероятно, для 2-эгилпиридина - наклонная, а для 2-грет-бутилплридина - плоскостная.

В пользу этих продположений говорят также результаты разделения той же смеси пиридина и его 2-алкилгомологов на гамма-оксиде алюминия, модифицированном хлористым кобальтом. Пиридин, который но имеет пространственных затруднений у ¡«поделённой пары электронов атома азота, образуя прочную координационную связь ион-металла - атом азота, полностью задерживается колонкой. 2-Алкилпириди-ны в этом случае элюируюгся в том же, что и на но импрагнирован-ном гамма-оксиде алюминия, порядке уменьшения объёма алкильной группы во 2 положении, т.е. в последовательности уменьшения пространственных затруднений по неподелённой паре электронов атома азота.

В нашем случае»по-видимому, молекулы хлористого кобальта располагаются не на всех активша центрах, а занимают их лишь частично. В то же время молекулы хлористого кобальта участвуют в качестве комплексообразователя, легко образуя прочное комплексное соединение состава СоС12*хН2о»уРу только с пиридином. Аналогичный комплекс, как установлено другими авторами, не образуется уже при пероходе к 2~метиллиридину из-за возникающих пространственных затруднений неподелённой паре электронов атома азота, от-ветствешого за образование координационной связи моталл-азот.

Таким образом, установлено, что имеет место совершенно одинаковый характер монотонного уменьшения временя удерживания 2-ал-килдиридинов по мере постепенного возрастания объёма заместителя в положении 2, практически независимо от характера акцептора неподелённой пары электронов гегероагома азота.

На основании полученных экспериментальных данных по STX пиридина я его 2-замещённых производных на различных сорбентах, рассмотрена зависимость объёмов удерживания 2-алкилпиридинов от сте-

рических констант по Тафту ( Ев ), Хэнкоку ( ) и Пальму ( е° ) С рис. 1-4 ).

На рис. 4 представлена зависимость от е° •, построен-

ная по результатам 1ТХ на гамма-оксиде алюминия. В этом случае наблюдается хорошее совпадение экспериментальных данных с прямой линией. Из того же рисунка видно, что отсутствует какая-либо связь между основностью пиридиновых оснований и стерическимя константами.

Как видно из рис. 1-4, зависимость логарифмов удерживаемых объёмов 2-алкилдириданов от стерических констант Е . Е° , е° в

8 ¿3 3

исследованных случаях носит линейный характер, что, очевидно, позволяет легко определять их методом 2ТХ на гамма-оксиде алюминия или силикагеле. Близка всего к линейной зависимости от ств-

ряческах коноганг до Пальму Е° С учитывающих гипзрконьюгацни

о

С-С и С-Н ) или от сгеричесшис констант по Хэнкоку ( учитывающих гиперконьюгацию только С-Н). Во всех изученных случаях корреляция несколько хуже для Еа ( без учёта эффектов гиперкоккогацяи).

Из тех же графиков видно, что между и Е0 , , е°

существует простая линейная зависимость, подчиняющаяся уравнению

1вУн = ^Е(Снз) +«ЕВ Е°) где - удерживаемый объём 2-алкилпиридинов; ун(сн ) " УД8Рхй2ае'!ЫЙ объём 2-метилдирвди1ш;

5 - коэффициент, характеризующий зависимость удерживания от стерической коногактк,

Для рассмотренных случаев коэффициент 5 равен соответственно для гамма-оксида алюминия 0,17 + 0,03; для силикагаля 0,47 + 0,09; для гамма-оксида алюминия, импрзгнированного хлористым кобальтом, 0,37 + 0,10. Рассмотренное уравнение по существу представляет собой известное уравнение Тафта и позволяет количественно вшояйуь велгакн огорачоош; шшанг из шторямташю

4,0-о.в-

0,2-О

вд н

общая точка для Ед, Е^, Е°

-г, А -/,6 -0,8 о о,в

Рис. I. Зависимости от стерических констант по Тафту /Е^/, Хэнкоку /Епо Пальму /Е°/. Построены по результатам ЖТХ на гамма-оксиде алюминия.

Рис. 2. Зависимость от стерических констант по Тафту /Е5/, по Хэнкоку по Пальму /Е?/. Построены

по результатам ЖТХ на силикагеле по Бельму.

м

<4- гН

<0■ Оке**)!

о/ 0,2. Е5С Е° %

О

общая точка для Ец, Е£,

~08

—Г"

О

Рис. 3. Зависимости З^Уд от стерических констант по Тафту /Еа/, по Хэнкоку /Е$/, по Пальму /Е°/. Построены по результатам ЕТХ на гамма-оксиде алюминия, импрегнирован-ном хлористым кобальтом.

<6 '

за

ьо

г 60

-¿7<3 ¿7

Рис. 4. Основность 2-алкилпиридинов и стеричрские

константы по Пальму /А/,

Зависимость 1гУп от стерических констант по Пальму /В/, построено по ЖТХ на силикагеле по Вельму.

установленной зависимости их от логарифмов времени удерживания.

Зависимость от молекулярной массы пиридина и 2-алкил-

пиридинов прямолинейна. Однако наш установлено, что эта зависимость носит случайный характер. Действительно, при ЖТХ пиридиновых оснований 2-матилпиридин и 4-метилпиридин, а также 2-этилли-рядин и 4-этшшридан, шлея одинаковые молекулярные массы, элюи-руются с резко отличающимися временами удерживания.

Молекулярные взаимодействия адсорбат-адсорбент при эффекте системных пиков в жидкостной хроматографии пиридиновых оснований

Практически во всех вариантах жидкостной хроматографии широко используются многокомпонентные элюенгы для получения подвижной фазы, имеющей полярность, оптимально соответствующую ЖХ-разделе-нию. При вводе пробы в такую подвижную фазу довольно часто полученная хроматограмма показывает больше пиков, чем количество веществ в анализируемой пробе. Эти посторонние пики наблюдаются, когда подвижная фаза содержат больше одного компонента. В литературе подобные пики получили название вытеснительных, пиков-призраков, ложных, странных, вакантных, системных, аппаратных, искусственных. Из-за недостаточной изученности явления возникновения таких пиков, их часто неправильно понимают и поэтому неправильно употребляют термины. Наиболее удачным, видимо, можно считать название "системные" пики, а такие названия как "ложные"»"странные" и "призраки" имеют ошибочное значение, так как дополнительные пики имеют вполне определённое происхождение и ничего ложного или призрачного в них нет.

Системные пики содержат богатую информацию о межмолехсуляр-ных взаимодействиях разделяемых соединений и молекул элюента с адсорбентом и между собой. Возникновение дополнительных пиков на

хроматограымах, получаемых различными методами ВЗЖХ, чаото затрудняет правильную интерпретацию результатов анализа и требует всестороннего изучения причин его вызывающих, поскольку, как установлено, ошибка при дополнительных пиках при количественном анализа мсдаг доогигагь 30%.

Нами постоянно регистрировались системные пики при ЖТХ в токе бинарных элюентов с использованием детектора по диэлектрической проницаемости. Явление возникновения системных пиков было подтверждено для различных представителей ряда бензола, нафталина, пиридина, хинолина, изохинолина и других классов полярных соединений.

Методом аидкостной твердофазной хроматографии исследован эффект системных пиков и рассмотрена возможность использования эффекта для оценки природы межмолекулярных взаимодействий адсор-бат-адсорбент в хроматографической система, содержащей пиридиновые основания. В эксперименте использован жидкостный хроматограф с детектором по диэлектрической проницаемости, колонка 40 см х 3 им, заполненная гамма-оксидом алюминия с размерами частиц 40 -60 мкм, элаент: смесь гексашдиэтшювий офир ( 1:1 ).

Введение в состав элюента более полярного компонента имеет цолыз оптимизировать хроматографическое разделение, в частности, обеспечив иогишю эляеитный вариант, когда колоша по завершению предыдущего хронографического разделения сразу же пригодна к выполнению следующего анализа. В состоянии равновесия хроматографической системы: адсорбент-неподвижная фаза, активные центры адсорбента заняты молекулами полярного компонента подвижной фазы. Введённая проба взаимодействует с адсорбированным компонентом, вызывая его десорбцию, в результате чего зона введённого вещества .несколько уширяясь, содержит не только введенное вещество,ко тагхз а полярный компонент подвижной фазы с концентрацией, отли-

чающейся ог основной массы подвижной фазы. Конечным итогом является хроматограмма, содержащая как пики вводимых веществ, гак и пик компонента подвижной фазы.

С целью установления количественной зависимости площади системного пика от вводимого вещества била проведена предварительная калибровка хромагографической колонки по диэтиловому зфиру. В тех же условиях вводились по I х Ю-5 г-молей пиридина, 2-метил- и 2,6-диметилпиридина. С помощью калибровочного графика были вычислены количества вытесненного диэгилозого Рфира (регистрируемого на хроматографе в виде системного пика, предшествовавшего пику ге-гороцикла ). Удерживание пиридиновых оснований уменьшается в ряду: пиридин > 2-м9тилпиридин > 2,6-димзтилпиридин Вытеснение диэтилового эфира происходит в обратном порядке, т.е. чем больше пространственное затруднение, тем больше площадь системного пика. Последнее, по-видимому, свидетельствует в пользу якорной ориентации незамещенного пиридина, который,ориентируясь при адсорбции вертикально, вытесняет меньше всего эфира, т.е. занимает меньше активных центров на поверхности адсорбента. В го же время 2,6-димегиллирвдин вытесняет почти в два раза большее количество эфира с активных центров, что позволяет предположить в этом случае наклонную или даже плоскостную ориентацию на поверхности адсорбента.

РАЗРАБОТКА ХРОШТОГРАФИЧБСКИХ МЕТОДОВ АНАЛИЗА АЗОТСОДЕРЖАЩИХ ГЕТЕРЩИКЖЧБСШ СОЕДИНЕНИИ

Аналитическая жидкоетно-твердофазная хроматография азотсодержащих гетероциклических соединений. Разработка методов разделе-Ш1я азотсодержащих гетероциклических соединений является весьма сложной задачей. Соединения этого класса являются веществами крайне адсорбционяоспособными, что обусловлено наличием свободной пары электронов у атома азота. В связи с этим чёткое разделение

смесей н-г е г е роци кллч е с ких соединений методом жидкоегно-твердофазной хроматографии в значительной степени затруднено. Для успешного анализа сложных смесей необходим тщательный подбор условия разделения - гонкая регулировка как адсорбционной силы неподвижной фазы, так и элюирующей способности подвижной фазы. Хроматографические разделения проводили в условиях жидкостной хроматографии с использованием недорогих доступных адсорбентов и средних давлений элюенга, что позволяет отказаться от дорогостоящих колонок и насосов, используемых в ВЭЗХ.

Наш установлено, что наиболее эффективное разделение исследуемых образцов происходит на оксиде алюминия, модифицированном различным содержанием воды, кромо этого имеот место хроматогра-фическоэ разделение и на различных марках силикагелей. Выявлено, что несмотря на невысокую эффективность хроматографических колонок имеет место достаточно чёткое разделение компонентов проб, обусловленное высокими значениями коэффициента селективности пиридиновых оснований на оксиде алюминия и силикагеле. Во всех хроматографических разделениях в качестве детектора примонек детектор по диэлектрической проницаемости, обладающий достаточной чувствительностью к анализируемым соединениям, кроме этого указанный детектор в определённой мора и универсален для различных классов органических соединений, что дозволило применить его и для количественных исследований.

Методом добавок индивидуальных пиридиновых оснований определён порядок элюирования компонентов проб и проведена их идентификация. Выполнено разделение искусственных смесей пиридиновых оснований.составленных с учётом молекулярной массы,основности,а также наличием алкильных групп их объёма,в различных положениях пиридинового кольца по отношению к гетероатому азота. Уста-

нозлено, что порядок элшровашя пиридиновых оснований лдонгачон как для оксида алюминия, гак и силпкагелей.

Препаративная жи,шсосгно-гв0рдофазяая хрскагогре^яя азотсодержащих соединений. В связи с ограниченной доступностью образцов пиридиновых оснований, трудностей их получения в чистом виде возникла необходимость разработки методики препаративного разделения смесей азотсодержащих гегероциклов. При препаративном разделении на жидкостном хроматографе необходимо достаточно точно установить "мёртвый" объем ячейки детектора, который позволял бы возможно точнее производить отбор фракций элнеита, содержащих индивидуальные компоненты смеси.

Методика определения "мертвого" послоколсночного объёма в жидкостном хроматографе разработана с использованием газового хроматографа. Осуществлено препаративное разделение на колонках, заполненных оксидом алюминия в потоке э.таента смеси язоокгап:д=:ок-саи Сз различных соотношениях)."широкой" и "тяжелой" фракции пиридиновых оснований; продуктов термической перегруппировки яодмз-гилата пирадкн^.я ( -ханоляная, -изохинолпния ) по Ладенбургу-Чи-чибабплу, продуктов раз летания кадукоусной кислоты в хиноллне, изохияодине; наработка графовых количеств 2-этшшшолкна и 2-кзоарошлаярвдака из синтетических смесей, выделение 1-жтилпзо-хйяолкна из продуктов разложения надуксусной кислоты з азохяноли-ко. Разработанная методика препаративного разделения позволила осуг-.-ствагь наработки граммовых количеств пярядшовых оснований с проб для разделения до 0,5 мл. Выявлено, что в подобран-

ных .-'-.ловиях хроматографического разделения на аналитических ко-вполне можно нрзларатзшо разделить пробы, увеличенные ь 10-15 раз по сбьзцу к нарабатквпть грашовне количества шдашя-дузльных вощиств.

Групповое разделение сложных смесей изомерных и гомологичных алкилзамещённых пиридинов, хинолинов и изохинолинов. Установление того факта, чго фактором, преимущественно определяющим порядок элюирования азотистых оснований при ЖТХ, являются пространственные препятствия, создаваемые заместителями в положениях, ближайших к гегероатому азота,.позволило разработать групповые метода разделения азотистых гетероциклов. Метод был применен как в аналитическом, так и препаративном вариантах.

В работе использованы дезактивированные водой адсорбенты и обезвоженная подвижная фаза, которая предварительно проходила через форколонку, заполненную тем же сорбентом, что и разделительная колонка. Это позволило предотвратить удаление воды с поверхности дезактивированного адсорбента растворителем. Кроме того, экспериментально подбирались оптимальные соотношения полярного и неполярного компонентов подвижной фазы. Внимание обращалось прежде всего на концентрацию полярного компонента смеси, который наиболее активно удаляет воду с поверхности адсорбента.

В отличие от методов газовой хроматографии, метод КТХ позволяет выполнить восьма ценные групповые разделения. Нами найдено, чго наилучшее групповое разделение смесей различных замещённых алкилшридинов происходит на гамма-оксиде алюминия, дезактивированного 2% воды, в токе злюента смеси диоксана и изооктана (9:1). Компоненты смеси продуктов термического разложения подметилага пи-радаяя злшровалаоь двумя грушшмл; пространстводно затрудненных алкялшфвдшов, включающих 2-метилш1ридкн, 2,6-димотилмридин, 2-этилпиридин, 2,4-димегилпиридин, 2,4,5-триметилпиридин и пространственно не затрудненных алкилпиридинов: пиридин, 3-мзгилпири-дин, 4-могилпиридин.

Групповое раздолениэ методом ЕТХ и ИХ продуктов термической перегруппировки иодметилата хинолшшя по Ладенбургу-Чичибабину я

изучение их состава в работе были выполнены впервые.

Первые разделения методом ШГХ выполнены на искусственных смесях алкилхинолинов с использованием активного гамма'-оксида алюминия и смеси диоксан-изоокган. Известно, что основность 2-метил-хинолина выше, чем 4-могилхинолина, а последнего выше, чем у хи-нолина ( рКа равны соответственно 5,41; 5,20; 4,80 ); гКд 8-ме-тилхинолина равна 4,60. Исходя из того, что сила взаимодействия оснований с гидроксильными группами или другими акцепторами электронов на поверхности гамма-оксида алюминия с неподелённой парой электронов гегороагома азота определяется основностью бензопири-динов, можно было ожидать следующего порядка элюирования компонентов исследуемой смеси: 8-мегилхинолин, хинолин, 4-метилхинолин, 2-мотилхинолиа. Однако результаты разделения искусственных смеоой показали другой порядок выхода. Так, из хроматограмм, приведённых на рис. 5 и 6, видно, что более основный 2-мотилхинолин выходит раньше менее основного хинолина и 4-метилхинолина, а менее основный 8-мотилхинолин слабее задерживается, сорбентом, чем 2-метилхи-нолин и выходит до него.

Полученные результаты, гак же как и в случае 2-алкилпириди-нов могут быть объяснены пространственными затруднениями, возникающими при взаимодействии азотистых оснований неподелённой парой электронов у атома азота с активными центрами на поверхности оксида алюминия.

Из формул рассматриваемых оснований следует, что все компоненты смеси в большей или меньшей степени пространственно затруднены группами, соседствующими с гетероагоком азота. Так, у хино-лина л 4-метилхинолина пространственные затруднения могут иметь место за счёт метинной группы у 8-го атома углерода гвтероцикла, у 2-мегид- и 8-мегллхиноляна, кроме того, за счёт мзгильных групп у 2-го и 8-го атома углерода. Очевидно, что могильная группа у

т | I

Ми.ч ¿о

[А

О

Рис. 5. КТХ продуктов термической перегруппировки иодметилата хино -линия по Ладенбургу-Чичибебину. Проба- 5 мкл, колонка: 90 см х Змм, гамма-оксид алюминия, активный; элюенг:диоксан-изооктан (9:1), 1,0 мл/мин; детектор по £ , 50 х 2 1 - диоксан, П - 8-мотилхинолин, Ш - 2-метилхинолин, 1У - 2,4-диме-тилхинолкн, У - хинолин, 3-, 4-, 5-, 6- и 7-мотмхинолик.

И

У |

/1 I I

И

i 1"у

Аб

л4'// 4ч? О

Рис. 6. ЖГХ продуктов радикального метилирования хинолина надуксусной кислотой.

Проба: б мкл, условия те те. I - диоксан, П - 8-метилхинолин, Ш - 2-метилхинолин, 1У - 2,4-диме-тилхинолкн, У - хинолин, 3-, 5-, б- и 7-метилхинолкн, У1 - 4-метил-хинолин.

8-го агоич углерода наиболее сильно экранирует aro« аэога. Эгя результаты полное«» яодггзрдилйоь при перенесении катода на сноси хинооша а всех юз ножных его кзо;<ерт«х мэгильных производных.

При ЖТХ смеси алкилхичолинон, полученных перегруппировкой по Ладекбургу-Чнчибабину, было получено хорошее групповое рээделс.г'.о гзтероцикйоЕ (рис. 5), Хидаосгно-гвогдофззная хроматография продуктов уазйонвшш перзкпея ацетила в хиноляне позволила осуществить групповоз разделзкле элкидхинолянов (рас.6 ) и была гшюлне-на как в аналаудчеоком, гак и дрэпарагаздом сариангсх. Полученные результаты позволяют заключить, что реакция Ладенбурга-Чячибабяна идёт по радикальному гзхакизму.

Разработанные групповые методы разделения сложных синтетических смесей азотистых гетерецнкяоз били перенесены на "тялёлно" фракция пиридиновых оснований коксохимического происхождения, выпускаемых в промышленных масштабах. Промышленная хинолин-изохино-липовая фракция была разделена на различных адсорбентах в токе даокеана и дзооктана (1:9). Использованы силикаголь по Бельму ( 20.« воды ) и галма-оксид алюминия ( 3% воды ). В обоих случаях порядок выхода один и тот же: первым элаируюгея 2-метилхинолин, далее хинодин к изохлнолин.

2ТХ "широкой" фракции на гамма-оксиде алюминия, дезактивированном 2% пода,дала разделение на дзе группы. В первой группе присутствовали адкллпиридины с штильными группами как во втором, так и в шестом положениях пиридинового ядра - 2,6-диме1!илпиридда, 2.4,6-грякегилпиридин; вторая группа состояла из алкидпириденов лишь с одной мегялвясй группой во втором положении - 2,5-, 2,3-и 2,4-дкметилпиридина ( рис. 7 ). Идентификация состава отдельных групп проводилась как путем сравнения с временем удерживания индивидуальных алкилпиридянов в условиях ЕТХ, так и методом ШХ.

Результаты группового разделения, коксохимической фракции

"тяжёлых" пиридиновых оснований (т.кип. 250-270°), освобождённой от примесей углеводородного характера методом ЙТХ,приведены па рис. 8. Хроматограмма состоит из 4 пиков. Состав отдельных групп определяли методом ПК (рис.0-И). Было установлено, что первый пик представляят диоксан; 11 пик - групповой, включающий 2- и 8~ мотияхянолин, 3-ме гилизоздиалин, 2-эгилхинолин, Х-могилизохииолин; Ш пик также групповой, содержал хинолин, 3-, 4-, 5-, 6- и 7-метил-хинолин; 1У пик представлял собой незамещённый изохинолии.

Выполненные разделения показывают перспективность селективного группового разделения и других особо сложных смесей оснований ряда хинолина, изохинолгша, акридина,.крупнотоннажным источником которого является коксохимия. Известно, что с повышением температуры кипения состав этих фракций на много усложняется, а физико-химические свойства сближаются. Это приводит к отказу исследователей от попытки разрабатывать методы выделения высших индивидуальных азотистых гатероциклов из подобных свархсложшх смесей "нехромаго-графическима" методами.

Изложенные выше результаты показывают определённую возможность выделения методом КТХ достаточно простых групп, сильно пространственно эагрудшншых по азогу, и наоборот, но содаржащшс иа-местителей в положениях 2 и 6 пиридинового ядра. Дальнейшее разделение этих простых смесей до индивидуальных соединений может быть осуществлено обычными методами, например, кристаллизацией производных. Разработанные методы ИХ разделения, очевидно, также перспективны для разработки методов разделения алкалоидов ряда пиридина, хинолина и изохииолина, которые имеют сходные физико-химичесшш свойства.

ВЭЩ( СИНТЕТИЧЕСКИХ И ПШРОДНЫХ АЗОТСОДЕРЖАЩИХ СОВДИНЁЮЙ

Многие задачи, связанные с разделением азотистых соединений, успешно могут быть реиены с помощью метода ВЭ2Х. Наш исследовано

17 ÜS !

J

Г«ч

WS W 0

Рис. 7. ЛГГХ "широкой" фракции пиридиновых оснований с т.кип. 157-177°.

Проба: 4 мкл, колонки: 90см х Змм, гамма-оксид алюминия, 1% води, 0,04-0,07 мм, диоксан и изооктан, 0,9:9,1 по объему, 1,0 мл/мин, 7 атм., детектор по £ , 50 х 4, I - диоксан, П - 2,6-диметилпири-дин, 2,4,6-триметилпиридин, Ш -2,5- диметилпиридин, 2,3-диметил-пиридин, 1У - 2,4-диметилпиридин.

II

«л

17

JL

v^IcTo

Рис. 8. Препаративная ЖТХ "тяжелой" фракции пиридиновых оснований с т.кип. 250-270°.

Проба: 100 мкл, колонки: 100 см х 6 км, гамма-оксид алюминия, 1,6% вода, 0,07-0,14 мм, диоксан и изооктан, 1:9 по объему, 1,0 мл/мин, 5 атм, детектор по £ , 10 х 4, I -диоксан, П - 2- и 8-мстилхинолин,

2-зтилхинолин, 2,4-диметилхинолин, 1-й 3-метилиэохинолнн, Ш - хинолин,

3-, 4-, 5-, G- и 7-метилхинолин, 1У -изохинолин.

_1к

А

Рис. 9. ГИХ пиридиновая осноганг.Я, ссставляз>-П(5£х пик П, выдел енких методом препаративной ЕТХ из "тяжелой" фракции пиридкношх оснований.

Проба: б нкл, колонка: 7,7м х 4,4ьм, ЗЕ-30 кд хромссорбе '.V (86-100 ыеи), 230°С; скорость газе носителя:ьэота 60 кя/мкн, воздуха 30 мл/мин; детектор пламенно-ионизационный. 20мин * _ изооктьн, 2 - диоксан, 3 - 2- к 8-метил-хкнолин, 4 - З-метилхннолгд, 2-этилхинолип, 5 - 1-ыетилизохкколкн, б - 2,4-диметилхиколин.

,6

Рис. 10. Г2Х пиридиновых оснований, составляющих пик 2, выделенных методом препаративной 7лТХ из "тяжелой" фракции пиридиновых основа -ний.

Проба: 5 мкл, I - изооктан, 2 - диоксаи, 3 -хинолин, 4-3-, б- и 7-ыетилхинолин, 5 -5-мстилхинолин, 6 - 4-метилхинолин. Условия те же.

Рис. II. ГЖХ пиридиновых оснований, составля-3 ющих пик 1У, выделенных методом препаративной Й ЕТХ из "тяжелой" фракции пиридиновых основе -

А_

, Проба: 4 мкл, I - изооктан, 2 - диоксаи, 3 -

15 мин .,

изохинолин. Условия те же.

аналитическое разделение некоторых сисей гетероциклических соединений в условиях ВЭНХ с применением У-5 и рефрпктомотрического детектора. В качестве объектов били выбраны продукты коксохямлчс-ско-го производства, Еклкчаквде хиноядновуа я изояпколшевую фракции, "тяжелую" фракцию пиридиновых оснований, "шярокуа" фракции лкриди-Еовах оснований, а та:с:о некоторые азотсодержащие сингоглчсокло емзеи. Все ах разделения проводили на колонках из кер.-;авсщей стали с размером 20 х 6 мм, заполненные Алюсорбом ДС75 (ЧСИО с разбором частиц 10 мкм.

Проведено ЖХ разделение хинолик-изохинолииопой фракции, идон-тлфлкгциа компонентов разделяемой пробы проведали путем сравнения с временем удерживания индивидуальных оснований ( хакялъдона, хи-ноляна, азохинолина ), а также методом добавок. Порядок элыирова-ния комлоненгов разделяемой пробы был следующим: I пик - даоксан. П - хкнальдин, Ш - хинолин, 1У - изохинолин. Выявление порядка элэярования азотистых готероциклов позволило провести акаяатичес-коа разделение "тяжёлой" фра:щаи пиридиновых оснований. Детектирование осуществлялось УФ дефектором при 254 я 204 ни, а также рефрактометром. Порядок элюирования фракции определяется пространственными затруднениями гетероатому.азота в сое,тушениях, входящих в состав фракции. Имеет место групповое разделение азотистых гэте-роциклов.

ВЭНХ разделение доказало, что дазыаендо эффективности колонка позволяло осуществить ке только групповое разделение в зависимости от пространственных затруднений гетероатому, но и полное разде-доние гегзроциклев, входящие в групповой пак. Проведенная частичная идентификация пиридиновых оснований подтвердила указанный по-рвдек элвкрозаяпя.

Ооущеотялевй анялагячесхед ИХ ''аярокой" фракция шфищшотех оснований, дотсктяровакяо проводилось УФ кетзктором со сяздукгзмз

длинами волк: 212 ни, 234 нм, а также рефрактометром. На хромаго-грамме имеется ряд пиков, свидетельствующих о том, что в условиях ВЭ2Х осуществляется также групповое разделение.

Разработаны методики ВЭ2Х разделения некоторых азотсодержащих субстанций с использованием колонок, заполненных сорбентами "Сепа-рон С18", ДЕАЕ ТбК 545 Р\У, использованы для оптимизации процессов топкой химической очиспш перекристаллизацией и для оценки сгепони чистоты продуктов.

Особый интерес для разделений азотсодержащих гетероциклических соединений представляет аминопропилированный силикагель. Нами установлено, что на нем успешно разделяются изомерные мегилпириди-новыо и хинолиновыо основания. Ироцесо разделения азотсодержащих гегероциклов на ашнопропилированном силикагеле можно объяснить с точки зрения донорно-акцепторного комплексообразовашя, включающего образование водородных связей между остаточными силанольными группаш и атомами азота гегероциклов и взаимодействие аминопропи-льной группы с элокгрофилышми частями молекул гегероциклов. Существенный вклад при этом вносят пространственные затруднения ал-кильных заместителей ъ положениях, ближайших к готероагому азота. Хорошее соответствие между временем удерживания и дипольными моментами метилдиридинов служит подтверждением этому. Чем выше ди-польный момент молекулы пиридинового основания, тем лучше идёт коыплексообразование на поверхности сорбента и тем выше время удерживания. Так, в ряду мзтиллариданов наибольшее удерживание наблюдается для 4-метилдиридана. В случае 2,6-димотилпиридина увеличение пространственных препятствий приводит к значительному уменьшению времени удерживания. Аналогичная закономерность наблюдается для хинолиновых оснований.

Имеющиеся в лигоратуре сведения по ВЭ5Х анализу хиназолино-ьых алкалоидов нсьшсгчнисдекни и посвящены, главным образом, раз-

делению пегашиш и вазкцинона, дезоксидеганяна и дезоксивазицлчо-на, а также их аналогов с метоксильными группами в бензольном кольце. Учитывая эти данные, нами выбран для анализа обращенно-фа-зшй вариант ВЭЯХ.

Первоначально проведён поиск оптимальных условий разделения дозокоипеганила и продуктов ого превращения ( псганола и дезокси-вазицинона ). В качестве стандартов использовались алкалоиды дезо-ксипегании, пеганол и дезоксивазицинон, выделенные из надземной части Редопил ЬапааХа ; дезоксивазицинон, полученный реакцией конденсации антраниловой кислоты с бугиролакгамом; дезоксяпеганич, полученный восстановлением дозоксивазицинона; пеганол, синтезированный из дезоксипеганина. Для повышения эффективности хроматогра-фкчоского разделения и осуществления варианта ион-парной хроматографии в элюенг были добавлены соединения кислотного характера ( хлорная, уксусная кислота, фосфатный буфер ).

В результате проведённых исследований установлено, что наиболее эффективное разделение анализируемых алкалоидов имеет место п варианта ион-парной хроматографии, основным фактором, влияющим на разрешение пиков при хромагографзрованля,является рН среда; показана возможность использования микрокололочной ВЭЖ в качественном и количественном анализе природных объектов.

Хромагографичсский анализ соединений, входящих в состав му-мке и мумиелодобных веществ. Эффективность метода хроматографии покозано нами при разделении азотоодоржлщих соединений, лходтеих ч состав продуктов коксохимии, а гакже некоторых лекарственна гс— ^зсгв и алкалоидов. Представляло интерес выявить возможности применения хроыатографических методов в разделении сверхсложных при-родкых соединений как мумие а мумисподобних веществ, имевших в свсом составе азотсодержащие соединения.

Анализ мумие и мумиолодобшх веществ продегаеляат собой ело ¡г-

кую задачу, гак как эта природные вещества представляюг собой ыногокоылокя.чгнис смоси самого разнообразного состава и на существует эталонных образцов. Рассмотрение полученного экспериментального матернила, насчитывающего боло о 500 спектров, показало, что метод "фингарпрлта" с использованием виролитичсской газовой ::ро~ матографли и г.зсс-спектрометрпи отличается достаточной селективность» п чуЕСТвиге лшзсгъю, чтобы зафиксировать самые незначительные изменения z пробе-,,"рздставлйнлой на анализ. Какдчй образец мумие кмзбт свой "паролкгаческай спектр" (Следовательно прикононке этого метода газовой хроматографии являохся надёжным инсгрумзнгом для распознания ненсеестнкх образцов от известных. Идентификацию органических кислот в фордю ТМС-произаодных проводили сопоставлением изсс-спзкгроз xpoivjтографачески разделённых соединений с масс-спектрами библиотеки масс-спектров (ЕРА-1Ш1 spectral Date Ваее, Hutional Bareau oJT Standards, Vasiiington DC 1978-1983).

Анализ содержания свободных и коныпгированных амянокислог,проведённый на аминокислотном анализаторе, показал наличие 16 свободных и 22 коньюгироваиных аминокислот. Результаты анализа позволяют выделить набор свободных аминокислот, по которым можно идентифицировать мумие и цумивподобные вещества. Кроме того, отдельные даш-ше химического состава: количественные значения некоторых органических кислот (молочной, бензойной, гиапуровой ), а также аминокислот (глицина, аланина, оксипролина ) могут служить критерием для установления подлинности природных мумие и мумаоподобных веществ, а также качества добываемых партий этих веществ в зависимости от йзага и характера добычи.

Ионхроматографический anaбыл проведён нами с целью определения содержания конов в исследуемых образцах мумие и цумаепо-добкых веществ. Установлено, что практически во всех анализированных образцах содержались с1~, бо42~ . По но^" и Вг" ионам данные могут быть несколько зпзшены, г.к. з случае б.таз ости

времена удерживания этих и органических ионов они выходят одним пиком. Ионхроматографнческий анализ показал, что практически все образцы содержат, в основном, органические соединения, слабо удерживаемые, которые имеют близкое bjcíih удерживания с р~ ионом и сильно удерживаемые. Для более точной идентификации ионов методом конной хроматографии необходимо проводить тщательную пробоподго-говку по удалений органических соединений.

Получение микросферпческдх силикагалей для B3IS азотистых оснований. На процесс разделения в ВЭКХ органических основании, я том числе азотсодержащих гетероциклических соединений, существенное влияние оказывает химический состав кремнеземной матрицы хро-матографических сорбентов. Известно, что наличие следов металлов приводит к повышению кислотности поверхностных силанольных групп, которко вызывают сильную адсорбщиз органических оснований и как следствие уширение хроматографичэских пиков, хвостообразование, и возможно, нежелательные химические рэакции. Кислотная промывка си-лпкагелей, получаемых в промышленности из жидкого стекла, но всегда приводит к идентичным сорбентам, результатом чего даллегся на-воспроизводимосгь хромагограмм, наблюдаемая на сорбентах, производимых не только от различных фирм, но и различных партий одной фзрМЫ.

Остаточные кислые силанольные группы на поверхностп эддифл-цировашпсс сидикагсдой свособсгзуюг гядролкгаческоцу разрушений • тгряци при использовании водных эляентсз с рИ 3, а слодовагелмо, л короткой жизни колонок, заполненных этими сорбентами. 3 связи о этим актуальной является проблема получения огаблльных в щелочных средах сорбентов, которые в стране на производится для ВЭ2Х органических оснований, особешю дм анализа азотсодергаодос соединений. Химическую чистоту силлкагеля обеспечивает метод получа-НИЛ ого ГЙДрОЛЙГПЧСОКОЯ ПОЛШЮПДОНСЛЦИОЙ ОЛПГОКУрО?) ПОЛИЭТОКОИСИ-

локсана ( ПЭС ). Этот метод позволяет получать сорбенты с воспроизводимыми характеристиками, но не гарантирует химической устойчивости, поскольку, несмотря на то, что чистый сияикагель менее кислый, чом с примесями, тенденция удерчшвагь основные соединения и растворяться в щелочных средах сохраняется. Для уменьшения удерживания основных соединений и растворимости матрицы необходимо понизить кислотность на поверхности силикагеля.

В связи с этим нами проведены исследования по разработке методов получения особо чистых микросферических силикагелей ( К'СС ) без примесей металлов из гетраэтоксисилана через олигомерные полиэток-сисилоксаны.

Изучены условия получения силикагелей в зависимости от вязкости исходного олигомора, добавления отдельных органических и неорганических веществ. В качестве дисперсионной среды использовали водно-спиртовую смесь и разбавленный раствор крахмала. Компонентами, добавляемыми в дисперсионную среду, служили глицерин, мочевина, параформ. Наиболее важной стадией, связанной с формированием структуры силикагеля, является стадия гелеобразования в микрокаплях эмульсии, т.е. стадия эмульсионной полимеризации, в которой под действием основного катализатора происходит затвердевание эмульсионных капель. Добавление гексана или циклогексана способствует уменьшению плотности геля за счёт разбавления эмульсионных капель, что приводит к повышенна пористости. Очевидно, что распределение пор по размер.,«:: в данном случае будет широким, от микро-до какропор.

При использовании водно-спиртовой дисперсионной среды с добавлением различного количества глицерина нами обнаружено, что удельная поверхность понижается с увеличением содержания глицерина в дисперсионно!! сроде.

Близкое значоние удельной поверхности 1>СС, полученного при

мольном соотношении ПЭС-глидерин 1:3, имеет МЗС, полученный в присутствии мочевины при мольном соотношении 1:0,7 ( таблица 2 ).

Таблица 2

Влияние добавляемого вещества на текстуру микросфориче-ского силикагеля

Добавляемое вещество ! Мольное соотно-! ! шенио ПЭС -ДО- ! ! бавл. вещ-во ! 1 Зр.^/г : ! Уч,см3/Г ! Ч , А !

Глицерин I : 3 295 0,78 105

Мочевина I : 0,7 316 0,86 109

Параформ I : 0,6 303 0,65 85

Крахмал I : 0,5 206 0,56 109

В присутствии параформа и крахмала удельный объём несколько ниже, но удельная поверхность ШС, полученного в среде крахмала, в полтора раза меньше. Текстурные характеристики ряда образцов м&кросфарического силикагеля, получешшх из ПЭС различной вязкости в присутствии мочевины, показали, что действительно пористость образцов МСС из олигомера с вязкостью 101 сот выше, чем образцов, полученных из алигомера с вязкостью 326 сст. Уволичонио содохкя-ш'.я мочевины в дисперсионной среде не способствует образованию более широких пор, скорее наоборот, поры становятся меньше.

Пористая структура силикагеля очень чувствительна к обработ-г.'.! подныая растворами, особенно о внеокимп значениями рН, лри

р!1 > 7 силикагель растворяется. Поскольку, з качестве подвижней фазы в Б3;:к часто используются буферные раствору с довольно высокими. значения,'л рН, гидролитическая устойчивость силикагелзвых сорбентов является проблемой. В связи с этим каш была предпринята попытка получения гидролитически стабильного мядросферическо-го силикагеля двумя способами. Первый способ заключался з полепх-

постном покрытии ШС пленкой диоксиде циркония под действием Ь%-ного раствора хлористого цирконнла. В результате такой модификации пористость нескалько снижается. Полученный тагам путем сорбент покрыт лишь оболочкой из диоксида циркония, а для получения стабилизированного во всем объеме сорбента с добавлением хлористого цир-конила в процессе формирования гидрогеля препятствует плохая растворимость хлористого циркошла в водно-спиртовой смеси. В связи с этим душ получения микросферического силикагеля использован другой способ с применением в качестве дисперсионной среды разбавленного раствора крахмала. Выбор обоснован тем, что крахмал способствует образованию микросферического силикагеля с приемлемыми для ВЭЖ текстурными характеристиками. Кроме того, в такую дисперсионную сред,' можно добавлять различные модификаторы как для формирования пористой структуры, гак и для придания гидролитической стабильности сорбенту. В дисперсионной среда из разбавленного крахмала были получены образцы кикросферичоского силикагеля без добавок и с добавками мочевины и хлористого цирконила ( Ъ% от веса олигомера полпэгокспсклоксана ).

При сравнения текстурных характеристик полученных образцов выявлено, что присутствие признанного количества мочевины изменяет характеристики незначительно в сторону повышения пористости (таблица 3 ). Хлористый цирконил способствует формирования микросферического силикагеля с мошропораг.ш.

В случае использования в качестве дисперсионной сроды крахмального раствора распределение пор по размерам с добавкой мочевины и без кое находится примерно в одинаковых пределах, но адсорбция на ШС, полученном в присутствии мочевины, несколько ни-г.е. Синтез цкрконировашюго I.CJ осуществляется в кислой среде, что а деслугало причиной образования кикропористого сорбента. По-вьтюнгс pii добаелгьиои вкмшша приводит г. ослядешиз гидроокиси

циркония, а зю усложняет процесс.

Влияние добавляемого вещества ского силикдгоял, получаемого персионной среде

Таблица 3 на текстуру микросфериче-в подно-кряхмальной дис-

яплап„ст„,,р,п |Мольное соотно-Добавляемос !Ш0Ш10 пэс_ д0_

вещество !бавляемоа ве-_! щесгво_

о ! о !

з .м'Уг ! V ,см /г! <1 ,А

I I

Мочевина

Хлористый цирконил

I : 0,2 I : 0,03

206 211

338

0,56 0,59

0,26

109 III

31

Рассмотрение главных особенностей формы изотермы адсорбции-десорбции, графиков Т и БЭТ позволяет прийти к заключению, что полученные сорбенты имеют мезопористую структуру, за исключением цдрконированного ЛСС в водно-крахмальной ,дисперсионной среде ( рис. 12,13 ). Пределы значений удельной поверхности и распределения лор по размерам удовлетворяют существующим в настоящее вря-мя требованиям, предъявляемым к сорбентам, применяемым в ВЭЯХ. Методики получения пористых микросферическкх силикагеловых сорбентов просты в выполнении, а в случае использования з качество дисперсионной среды разбавленного крахмального раствора л соответствующих добавок можно достичь существенного экономического эффекта по сравнению с получением их в водно-спиртопсй дисперсионной среде с добавлением глицерина. Гидролитически стабилизированный хлористым цирконилом сорбент почти не изменяет свои характеристик по сравнению их с исходами силикагзлом. Однако попытка получить такой сорбент добавлением хлористого цирконила з процессе эмульгирования не увенчалась успехом. Получается нег.о-

Рис.- 12. Текстурные характеристики МСС, полученных в водно-этанольной дисперсионной среде в присутствии мочевины при соотношении ПЭС:мочевина 1:0,7, из ПЭС различной вязкости: I - изотермы адсорбции-десорбции азота и распределение пор по размерам, П - Т-графики, Ш - графики БЭТ. Вязкость ПЭС: I - 101 сст, 2 - 170 сст, ■ 3 - 220 сст, 4-826 сст.

Т, А

0,33

Рис. 13. Текстурные характеристики МСС, полученных п подно-крахмалыюй дисперсионной среде: I - изотермы лдсорбции-десорбции азота и рзспределрннс пор по размерам, П - Т-графики, Ш - графики БЭТ, I - боз добавок и дисперсионную среду, 2 - в присутствии мочевины, 3 - в присутствии хлористого цирконилп.

рисгый, а поэтому малоэффективный для ВЭЖХ сорбент.

Одной из наиболее важных характеристик сорбентов является гидролитическая стабильность,гарантирующая возможность длительного их использования в самых распространенных средах - водных в широком диапазоне рН.Сорбент считается стабильным,если удерживание остаётся постоянным при непрерывной работе колонки в течение 1-6 месяцев.Данные различных авторов несколько различаются,но обычно в качестве условий стабильной работы колонки приходится интервал рН от I до 9.Для существенного изменения свойств модифицированного сорбента достаточно незначительного гидролиза связей =Б1-о-

-31= ,так как при этом происходит отщепление модификатора, а свойства химически модифицированного силикагеля определяются именно поверхностно привитым слоем.Резкого снижения растворимости носителя можно достичь покрытием его менее чувствительными к гидролизу оксидами металлов: титана.гафния,циркония,алюминия.Наиболее изученными с точки зрения гидролитической стабильности являются кремне-цпркониевые сорбенты.В этом случае стабилизация поверхности силикагеля осуществляется обработкой раствором хлористого цирконила и дальнейшей термообработкой при 200-800°.В результате па поверхности матрицы образуется непрерывная оксидная пленка,труднопрошщае-мая для воды.Такую поверхность можно подвергать силанизации различными органосилапами. Этот подход явно превосходит другие,г.к. получающиеся сорбенты выдерживают более широкий диапазон значений рН, верхний предел которого достигает 9.

Для получения гидролитически стабильного микросферического силикагеля мы выбрали последний подход, т.е. обработку силикагеля хлористым цирконилом и модификацию полученного кремнециркониевого сорбента Ъ% водным раствором гамма-аминопропилтриэтоксксиланом. Гидролитическую стабильность полученного сорбента проверяли пропусканием через него буферного раствора с рН 9 в течение 7, 30, 45 и 60 дней с последующим сравниванием хроматографических харак-

теристик нзоораоотанного и обработанного а щелочной среде сорбента ( таблица Л ).

Таблица 4

Удерживание митиладридииов на аминопрошшсремноциркониппом сорбенте до и после щелочной обработки

Соединение

! до обработки ! после обработки

2,6-диме тилпиридин 0,65 0,60

2-ме тилпиридин 0,95 1,12

3-меТИЛПИРИДИН 1,12 1,25

4-ме тилпиридин 1,5 1,5

Последствия щелочной обработка незначительно сказалась на времени удерживания пиридиновых оснований - они немного увеличились. Однако, очевидно, что существенного разрушения сорбента не произошло, т.к. разделение тестовой смзси осуществляется с незначительными изменениями, что свидетельствует о возможности достаточно длительной работы полученного сорбента в среде водного эли-ента при рН 8-9.

Полученный нами сорбент наибольший интерес представляет для использования в аффинной хроматографии, т.к. может быть матрицей для получения аффинных лигандов.

Нагл проведено изучение возможности использования а.минопро-шшфемкециркониевого сорбента, полученного на основе микросфсрн-чуского силикагелл для экспрессного анализа суосей шридшювих а хшюлиновых оснований методом высокоэффективной жщкостной хроматографии. Порядок элвирования компонентов "широкой" пиридиновой и "тяжелой" хинолиновой франций оказался аналогичным ¡шблы-даомому н случае жидкостно-таирдсфпгшой хромлтогг.чфяи 0 «сг.олт.-

зованиом силикагеля я оксида алюминия,насыщенных определенным количеством воды (рис. 14 ).

Однако процесс разделения на аминированном сорбенте имеет свои особенности. Его можно объяснить с точки зрения упомянутого выше донорно-акцепторного комллексообразования, включающего образование ¡водородных овязай моялу оотаточными гидрокоилышми группами сорбента и атомами азота гегероциклов и взаимодействие амя-нопроиияьной группы с злектрофильными частями разделяемых молекул.

Подтверждением этому механизму взаимодействия азотсодержащих гегероциклов с испытуемым сорбентом служит хорошее соответствие между временем удерживания и дипольными моментами пиридиновых и хинолиновых оснований. Чем слабое комплекс между сорбентом и разделяемым веществом, тем ниже дипольный момент, и следовательно, меньше время удерживания в колонке.

Таблица 5

Удерживание метилпиридинов и хинолиновых оснований на амянопропилкремнециркониевом сорбенте

! Соединение , ¡Дипольный ! момент ' к!

Пиридин 5,17 2,20 1,5

4-мсгилш'.рилин 6,02 2,57 1,5

3-мегилпиридин 5,68 2,41 1,25

2-мегилпиридин 5,57 1,68 1,12

2,6-диме тиллдридин 6,75 1,65 0,65

Изохинолин 5,40 2,52 0,95

Хинолин 4,87 2,18 0,8

2н,:е тилхинолин 5,41 1,94 0,42

При этом существенный вклад вносят пространственные препят-

Проба: 2 мкл, колонка: 64 х 2 элюент: н-гексан-изопропанол (49:1, по объему), 200 мкл/мин; детектор: УФ, 250 нм.

(A) I - толуол, 3 - 2,6-диметилпиридин, 5 - 2-метилпиридии, б - 4-метилпиридин, 2,4 и 7 - неиденткфицировани.

(B) I - толуол, 4 - 2-метилхинолин, 7 - хинолин, 0 - изохи-нолин, 2,3,5,6 - неидентифииированы.

сгвия алкильных заместителей. Так, в исследованном ряду метилпи-ридинов наибольшее удерживание наблюдается для 4-метилпиридина. В случае 2,6-диметиллиридина уменьшение суммарного дипольного момента и увеличение пространственных препятствий приводит к значительному уменьшению времени удерживания. Аналогичная закономерность наблюдается и для хинолиновых оснований. Изохинолин, атом азота которого не окружён пространственными группами, удерживается на сорбенте дольше, чем хинолин и 2-метилхинолин (табл. 5 ).

Полученные результаты свидетельствуют о том, что разработанный наш аминопропилышй кромнециркониевый сорбент позволяет осуществлять разделение сложных смесей азотсодержащих гетероциклических соединений в течение короткого промежутка времени и может быть использован для экспрессного разделения сложных смесей пиридиновых и хинолиновых оснований.

ВЫВОДЫ

1. На основании изучения механизма нормально-фазной 2Х азотсодержащих гегероциклов установлена главная особенность их хромато-графического поведения: сильная зависимость удерживания от степени экранирования атома азота у алкилзамещённых гетероциклических соединений по сравнению с незамещёнными гогероциклами, удерживание которых зависит от основности. Эта особешюсть позволила предлол'.ить метод группового разделения азотсодержащих гегероциклов на группы соединений с близкой степенью пространственной затрудненности взаимодействия атома азота кольца с поверхностью адсорбента.

2. Рассмотрение хромагографического поведения алкплзэмещённых

к -гегероциклов с точки зрения ориентации пиридиновых и хинолиновых циклов при адсорбции на силикагеле позволяет констатировать о якорной (вертикальной) ориентации для соединений с неэкранированным и наклонной или плоскостной - с экраниро-

вашим атомом азота.

3. Установлена линейная зависимость логарифмов времени удержипа-ния 2-алкилпиридинов при ЯТХ со стеряческпмл константами, применяемыми в анализа Тафта: константами Тафта Се ), Хэшсока

( или Пальма (Е°). Найдено, что зависимость логарифмов объёмов удерживания й-гствроциклов от стерических констант

нз » Ез л Ео в исследованных случаях прямолинейна, что позволило развить новый метод количественного определения этих констант методом ИХ.

4. Показано, что независимо от того, каким путем осуществляется адсорбция азотсодержащих гетероциклических оснований в процессе хроматографирования, за счёт водородных связей в случае использования сяликагвля и оксида алюминия ялл комплексообрлзо-вания с импрегнированкым хлоридом кобальта оксидом алюминия и аминопропилированным сяликагелем, порядок элвированпя н-гетероциклических соединений аналогячон л зависит от прочности водородной связи, обусловленной наличием сторических препятствий атому азота гетероцикла.

>. Разработан метод хромагографического группового разделения сложных смесей изомерных и гомологичных алкилзамещенных плряда-нов, хянолинов и изохинолияов, образующихся в процессе метилирования незамещенных оснований по реакции Ладенбурга-Чичибаби-на или дойствия надуксусной кислоты. На основании результатов разделения получанных таким путем смесей методами ГЗХ и ИТХ сделан вывод о радикальном механизме замещения. Показано, что групповое разделение и -гетероциклов происходит по степени пространственных препятствий, создаваемых неподслённой пара электронов атома азота гегороцикла алкялышми группами, расположенными в положениях, ближайших к готероатому.

5. При исследовании эффекта системных пиков в 5Х с применением

многокомпонентных подвижных фаз установлена количественная зависимость площади системного пика от природы пиридиновых основании, которая дополнительно подтверждает схему якорной ориентации молекул пространственно незатрудненных н-гегсро-циклов к поверхности сорбентов и наклонной или плоскостной ориентации пространственно затрудненных.

7. Разработаны оптимизированные могоды ВЭНХ полупродуктов и готовых продуктов урацила, аденозина, фосфадена и азинокса, алкалоидов - колхицина и его производных, а также некоторых хина-золиновых алкалоидов.

8. Методами ГХ к ВЭ2Х исследованы 35 образцов мумие и мумиеподоб-ных веществ. Установлено, что количественный состав органических кислот, а также аминокислот может служить критерием подлинности природных мумие и мумиелодобных веществ, оценкой качества партий этих веществ в зависимости от месторождения и характера добычи.

9. Разработан метод получения химически чистого мпкросферичсско-го силикагеля с определёнными текстурными и химическими характеристика™, обеспечивающими хромагографическое разделение азотсодержащих оснований в условиях ВЭЖХ.

10. Получек гидролитически стабилизированный микросферический кремнэциркониевый сорбент, модифицированный гамма-аминопро-пилтриэтоксксиланом для ВЭЛК. Установлена устойчивость сорбента ь водном элюенге при рН 9 в течение 60 дней.

Основное содержание диссертации опубликовано в работах:

1. Киоуяов Е.Д. Пространственные эффекты при элюентной жидкосг-но-адсорбционной хроматографии на гамма-оксиде алюминия // Поверхностные явления в дисперсных системах, Вып. 3.- Киев: Наукова думка, 1974.- С. 196-198.

2. Кабулов Б.Д. Применение гамма-оксида алюминия в детекторной

жидкостной хроматографии.// Там же,- С. 198-202.

3. Кабулов Б.Д., Чумаков Ю.И. Количественная оценка пространственных эффектов алкильных групп методом ÏÏAX. // Современная элюентная детекторная хроматография органических и неорганически:-; соединений.-Сборник.- Киев: РДЭНТП.- 1974.- С.6-7.

4.Лопатенко С.К., Чумаков Ю.И., Янко Н.П., Кабулов Б.Д. Эффект втеснимльних пиков в жидкоогной хроматографии, // Там жс.-С. 7-8.

5.Чумаков Ю.И., Алябьева U.C., Кабулов Б.Д. Групповое разделение изомерных бензопиридинов методом жидкоегно-лдсорбционной хроматография. // Там же.-С. 19-20.

6. Chumakov Ya.I., Alab'eva U.S., Kabulov B.D. Steric fiffecta in liquid solid chromatographic analysis of pyridine and it3 2-alkylsubatituted derivativen.// Chromatographic!. -1375. -V. 8, No. 5. - P. 242-243.

7.Чумаков Ю.И., Кабулов Б.Д. Препаративная элюентная жидкостно-адсорбционная хроматография сложных смесей алкилхинолинов.// Украинский химический журнал.- IS75.- Т.41, № I,- С.99-101.

0. Кабулов Б.Д. Перспективы метода жидкостной хроматографии з разделении соединений, применяемых при защите растений. // Научные груда СзкЕУ. Новая серия.- Самарканд: СлмГ/.-1974.-2ып. 207.- С. 192-193.

9. Кябулов Б.Д. Препаративная элюентная колоночная .т-идкосгно-пд-сорбциошюя хроматография (HAK) омооой пиридиновых основаш'Я.//

¿кзако-химнчоскпе исследования природных соединений.- Самарканд : СомЕУ.-I976.-С.21-25.

10. Кабулов Б.Д. Исследование реакции метилирования п ряде хиноли-на. // Физико-химические иссладова1шя синтетических и природных соединений.- Самарканд: СамГУ.- 1973,- С. 39-43.

11. Кабулов Б.Д. Еидкосгная хроматография - новый метод анализа

химических средств защиты растений. // Вопросы защиты растений. -Самарканд: СамГУ.- 1980.- С. 98-104.

12. Бзрсзкин В.Г., Закиров Н.С., Кабулов Б.Д. Анализшшг хроматографии методлари, Хромагографические методы анализа,часть I, газовая хроматография. Учебное пособие,- Самарканд: СамГУ.-1980.- НО с.

13. Березкин В.Г., Закиров U.C., Кабулов Б.Д. Анализнинг хроматографии методлари, Хроматографические методы анализа (часть П). Учебное пособие.- Самарканд: СамГУ.-1982.- 95 с.

14. Чумаков Ю.И., Кабулов Б.Д. Количественная оценка просгрансг-ве!шых эффектов алкяльных групп методом жидкостной хроматографии. // SX.- 1982.- T. lvi , й 6.- С. 1463-1466.

15. Кабулов Б.Д., Залялиева C.B., Грабовская Т.Д. Получение гидролитически стабильного сорбента для высокоэффективной жидкостной хроматографии. // Узб. хим. журнал.- 1989.- № 5.- С.42-44.

16. Кабулов Б.Д., Залялиева C.B., Куценко В.В., Насыров Р.Х. Высокоэффективная жидкостная хроматография пиридиновых и хино-линовых оснований. // Труды САНИ1Ш.- М.: Гидрометеоиздат,-1939.-Вып. 135 (216).- С. 33-36.

17. Кабулов Б.Д., Залялиева C.B. Разделение бензопиридинов методом жидкостной адсорбционной хроматографии.// Узб.хим.журнал.-

1990.-й I.- С. 13-15.

18. Кабулов Б.Д., Шарипов А.Х., Мумянов Я.В., Ишанкулова М.К. Определение чистоты отдельных азотсодержащих субстанций методом микроколоночной высокоэффективной жидкостной хроматографии.// Узб.хим.журнал.- 1991.- И 2. - С. 23-26.

19. Дьяконов А.Л., Кабулов Б.Д. Разделенно алкалоидов дезокси-поганина, пеганола к дезоксивазицинона методом ВЭ1Х. // ХПС.-

1991.- й 2. - С. 297-298.

20. Кабулов Б.Д., Дьяконов А.Л., Залялиева C.B. Высокоэффективная

жидкостная хроматография алкалоидов. // ХПС.- 1991,- & 5,-G. 594-612.

21. Кабулов БД., Залялиова C.B., Грабовская Т.Д. Использование гидролитически стабилизированного силикагзлевого сорбента в ВЭЖХ азотсодержащих гетероциклических соединений. // "Практика хроматографического анализа".-М.:ИРЕА.-1991.- С.50-53.

22. Кабулов Б.Д., Залялиева C.B. Системные пики в ВЭЖХ.// Там же.-С. 20-27.

23. Кабулов Б.Д., Помазанов В.В. Определение состава мумие и му-миеподобных веществ методами хроматографии.// Узб.хим.журнал.-1991.- Ii 3.- С. 40-43.

24. Кабулов Б.Д., Залялиева C.B. Эффект вытеснигельных пиков при использовании бинарных элюентов в жидкостной твердофазной хроматографии. // Узб.хим.журнал.-I99I.-№ 4.-С.25-27.

25. Кабулов Б.Д., Залялиева C.B., Грабовская Т.А., Абдулина И.Р., Муминов Я.В. Особенности подбора сорбентов для ВЭЖХ азотсодержащих биологически активных веществ. // Препаративная масштабируемая хроматография биологически активных веществ и альтернативные методы.- С-Петербург: ЛДНТП.- 1991,- С. 62-66.

26. Умерова Х.Ф., Кабулов Б.Д., Грачёв С.А., Чумаков Ю.И. Исследование возможности применения сорбента ПМСС CI8 в ВЭЖХ белков и пептидов.// Международный симпозиум по применению жидкостной хроматографии в биологии и медицине. Материалы.-Москва.- 1986,- С. 47.

27. Kabulov B.D., Zaljalieva S.V. HPLC of N-heterocyclic compo-und3 on bonded o.ninopropyl microspheric ailica sirconia sor-bent.// 7th Danube Simposium on Chrcmatogr. and Analytictre-

ffen. - 1909. - Abotra. - V. II, V/K 003,

28. Kabulov B.D., Zaljalicva S.V., Grabovskajn 'i.A., Muminov Ja.V., Abdulina I.R. The analysis of nitrogen heterocyclic com -

pounds Ъу liquid chromatography.// III Organopolckie Seminari-шп Chromatogruficzne Nauka - PRZLMYST. Lublin. - 1990-- P. 30.

29. Kabulov B.D., Pomazanov V.V. Chromatographie analyoia of corao mommy and inummylike aubotancea.// III Organopolckie Sominarium Chromatograficane liauka - PIÎZLMYST. Lublin, - 1990- - P. 29.

30. Кабулов Б.Д., Чумаков Ю.И., Новикова В.Ф., Алябьева M.С. Групповое разделение метилхинолинов методом жидкостно-адсорбцион-ной хроматографии. // П симпозиум по химии и технологии гетероциклических соединений и горючих ископаемых. Тез. докл.-Донещс: ДГУ,- 1973.- С. 18.

31. Кабулов Б.Д., Чумаков !0.И., Новикова В.Ф. Исследование состава продуктов и механизма реакции Ладенбурга-Чичибабина. // Там же.- С. 171.

32. Кабулов Б.Д. Жидкостно-адсорбциокная хроматография ( ЕАХ ) бензопиридинов. '// Всесоюзная конференция "Физико-химическое и препаративное применение хроматографии".-Тез.докл.- Рига: Зинягне.- 1976,- С. 63.

33. Кабулов Б.Д. Препаративное разделение пиридиновых оснований методом детекторной жидкостной хроматографии (ЕАХ).// Ш Всесоюзная конференция по аналитической химии органических соединений.- Тез.докл.- М.: Наука.- 1976.- С. 73-74.

34. Чумаков Ю.П., Кабулов Б.Д., Новикова Э.А., Шошонин В.А. Групповая селективность в жидкостной хроматографии биохимических объектов. // Симпозиум "Применение молекулярной хроматографии для анализа окружающей среды и исследования биохимических процессов". -Тез. докл.- Самарканд: СамГУ.- 1976,- С. 10.

35. Кабулов Б.Д., Залялиева C.B., Ермольев'А.П. Использование жидкостных хроматографов для разделения органических соединений// Всесоюзная конференция по применению хроматографии в нефгепе-

реработке и нефтехимии.- Тез.докл.- Уфа.-1377.-С. 142.

36. Кабулов Б.Д., Залялиева C.B. Возможности и перспективы жидкостной хроматографии.// Жидкостная хроматография. [/Материалы П Всесоюзного симпозиума.- Черноголовка: ИХФ АН СССР.- 1982.-С.16.

37. Кабулов Б.Д., Умерова Х.Ф., Камалова Т.А., Сгыскин ЕЛ., Чумаков Ю.И. Стерические эфф)екты в высокоэффективной ЖХ.// I Всесоюзная конференция "Хроматография в биологии и медицине".-Тез.докл.- Москва.- 1983.- С. 17-18.

38. Кабулов Б.Д., Залялиева C.B., Ермольев А.П., Семиглазова Л.Ю. Использование аналитических колонок для препаратив1шх разделений методом жидкостной адсорбционной хроматографии при средних давлениях. // Ш Всесоюзный симпозиум по молекулярной жидкостной хроматографии.- Тез.докл.- Рига.- 1984.- С.16-17.

39. Кабулов Б.Д., Залялиева C.B. Экспрессный анализ смесей пиридиновых и хинолиновых оснований методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. // Конференция "Аналитика-89".-Тез. докл.- Алма-Ата.- 1989.- С. 115.

40. Кабулов Б.Д., Афанасьева Н.Э., Залялиева C.B., Боймирзаев A.C., Уринов Э.У. Микросферические крупнопористые силикаголи для высокоскоростной эксклюзионной хроматографии полимеров. // Конференция "Адсорбенты и способы их модификации".- Тез.докл.-Дзержинск.- 1989.- С.12.

41. Кабулов Б.Д., Залялиева C.B., Насыров Р.Х. Высокоэффективная жидкостная хроматография азотсодержащих готероароматических соединений. // Всесоюзный симпозиум "Биогахяологпческие и химические методы охраны окружающей среди. Часть П.-Тез.докл.-Самарканд: СамГУ.- 1988.- С. 8.

42. Кабулов Б.Д., Залялиева C.B., Грабовская Т.А., Абдулина И.?. Гядролитичоски сгабилышо сорбенты па ооково микросфорическо-го силикагаля для ВЭН. // У Всесоюзны!! симпозиум по молоку-

ллрной жидкостной хроматографии,- Тез.докл,- Рига.-1990.-С.215.

43. Кабулов Б.Д., Шарипов А.Х., Муминов Я.В., Ишанкулова М.К. ВЭ2Х некоторых азотсодержащих субстанций - продуктов и полупродуктов химико-фармацевтических производств. // Там же.-G.121.

44. Дьяконов А.Л., Кабулов Б.Д„ Высокоэффективная жидкостная хроматография хиназолиновых алкалоидов дезоксипеганина, пеганола и дезоксивазицинона. // Там же.- С. 120.

45. Кабулов Б.Д., Залялиева C.B., Грабовская Т.А., Муминов Я.В. Разделенно гетероциклических азотсодержащих соединений методом микроколоночной B3ÏÏX. // Конференция "Прикладные аспекты микроколоночной жидкостной хроматографии".- Тез.докл.- Минск.-1990,- С. 20.

46. Кабулов Б.Д., Залялиева C.B. Муминов Я.В., Чоммадов Б.И., Юсупов М.К. Микроколоночная ВЭЖХ алкалоидов колхицина и его производных. // Там же,- С. 21.

47. Кабулов Б.Д,, Помазанов В.В. Применение физико-химических методов анализа в комплексном исследовании состава мумие и мумиепо-добных веществ. // Конференция "Аналитика-90",- Тез.докл.-Ташкент.- 1990.- С. 17.

48. Кабулов Б.Д., Залялиева C.B., Грабовская Т.А., Абдулина И.Р. Синтез микросферических силикагелей из полиэтоксисилоксана и их применение в ВЭЖХ. // Там же.- С. 10.

49. Кабулов Б.Д., Залялиева C.B., Грабовская Г.А. Высоэффекгивная жидкостная хроматография некоторых синтетических и природных азотсодержащих соединений.// Там же.- С. 8.

50. Кабулов Б.Д., Чумаков Ю.И. Пространственные эффекты в жидкостной адсорбционной хроматографии (ЖАХ).//П Всесоюзный симпозиум по межмолекулярному взаимодействию к конформации молекул.-Тез.докл,- Волгоград: ВПИ.- 1974.- С.44-45.

51. Кабулов Б.Д., Чумаков Ю.И., Ермольев А.П. Исследование эффек-