Интерполимерные комплексы как депо биологически активных соединений тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.06 ВАК РФ

*' московский' ордена ленина, ордена октябрьской революции

и'ордена трудового красного знамени

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени Ы. Е ЛОМОНОСОВА ХИМИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

На правах рукописи УДК 541. 64:541.182.644:542. 64

КЕМЕЮВА Вера Александровна

ИНТЕРПОАИМЕРНЬЕ КОМПЛЕКСЫ КАК ДЕПО БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ

02.00.06 - Химия высокомолекулярных соединений 15.00.01 - Технология лекарств и организация фармацевтического дела

ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора химических наук в форме научного доклада

Москва 1992

Работа выполнена в НПО "Биотехнология"

Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор К Н. Измайлова доктор химических наук Л. И. Валуев доктор фармацевтических наук, профессор П. К Лопатин

Ведущая организация - НИИ медицинских полимеров (г. Москва)

Защита состоится '* 23 " декабря 1992 г. в " " час. на заседании специализированного совета Д 053.05.43 при Московском государственном университете им. М. В. Ломоносова по адресу: 119899, МэскЕа, Ленинские горы, лабораторный корпус А., ауд. 501.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке химического факультета МГУ им. М. Е Ломоносова.

У

Автореферат разослан " 23 " ноября 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат химических наук

Т. К. Бронич

Проблема создания полимерных систем, обладающих свойствами депо.

весьма актуальна для различных отраслей народного хозяйства при

решении таких задач, как хранение, транспортировка. и регулируемая подача биологически активных веществ. Это сельское хозяйство, где приемы депонирования используются для защиты семян и стимуляции роста растений, создания экологически безопасных удобрений, гербицидов, пестицидов и т.д.; биотехнология, использующая депонированные реагенты и клеточные культуры; фармация, в которой задачи создания систем для защиты и дозирования лекарственных препаратов, а также их направленного транспорта в организме стоят особенно остро, так как непосредственно связаны со здоровьем человека.

Успехи, достигнутые фармацией в этом направлении, привели к качественным изменениям в подходах к созданию лекарственных форм (ЛФ): постепенному переходу от производства традиционных ЛФ (инъекций, таблеток и т.д.) к производству принципиально новых препаратов - ЛФ пролонгированного действия с регулируемой подачей лекарственного вещества (ЛВ) в организм. Преимущества таких систем общеизвестны. Применение пролонгированных средств позволяет получить длительный терапевтический эффект при однократном приеме, избежать колебания концентрации ЛВ в организме, снизить токсичность и побочное действие ЛВ. Это создает также удобство для больного и медицинского персонала, в частности при транспортировке больных, раненых и пострадавших при несчастных случаях. Кроме того, применение пролонгированных средств позволяет, как правило, уменьшить суточную дозу ЛВ, что приводит к уменьшению потребности в лекарственной субстанции, то есть в конечном итоге к сбережению ресурсов и энергии.

Состояние проблемы. Для осуществления регулируемой подачи ЛВ в организм в мировой медицинской практике применяются различные системы, подавлящее большинство которых основано на использовании полимеров.

Однако в отечественном здравоохранении практически отсутствуют лекарственные средства пролонгированного действия. Анализ научно-технической литературы показывает, что наша медицинская промышленность владеет основными технологическими приемами, необходимыми для создания пролонгированных лекарственных средств: это гранулирование, капсулирование, брикетирование, таблетирование и т.п. Тем не менее, все немногочисленные работа останавливаются на стадии выпуска опытных партий препаратов из-за отсутствия полимерных вспомогательных ве-

ществ. Систематических работ в этом направлении в нашей стране не ведется. За рубежом наиболее широка применяются в качестве полимерных носителей редкосшитая полиакриловая кислота (СагЬоро1, США), производные целлюлозы, сополимеры мегакриловой кислоты (Еийга£11;, Германия).

Цель работы. Настоящая работа посвящена разработке научных основ синтеза и применения интерполимерных комплексов (ИПК) в качестве носителей биологически активных соединений (БАС), изучению свойств ИПК, в том числе существенных для создания на их основе дозирующих систем, исследованию механизмов контролируемого высвобождения биологически активных соединений из модельных дозирующих систем и созданию реальных Ш на основе ИПК.

Выбор ИПК в качестве материала для создания дозирующих систем обусловлен, прежде всего, их биосовместимостыо, стабильностью и доступностью сырья для их производства, а также свойствами этого класса соединений, связанными с кооперативным характером взаимодействия химически комлементарных макромолекул и возникающим благодаря этим взаимодействиям уникальным возможностям для регулирования подачи биологически активных соединений.

Научная новизна и практическая ценность работы. Процесс создания лекарственного препарата на основе ИПК включает в себя решение целого ряда проблем:

1.синтез интерполимерных комплексов, разработка оптимальной технологии их производства и промышленный выпуск;

2.физико-химические исследования растворов и композитов ИПК и биологически активных (лекарственных) веществ, исследование / кинетики и механизма высвобождения низко- и высокомолекулярных биологически активных веществ из композиций на основе ИПК;

3.разработку технологии промышленного получения лекарственных препаратов на основе полимерных носителей;

4.доклинические исследования биологической безопасности ИПК и эффективности лекарственных форм на их основе в объеме требований ФК МЗ России;

5.клинические испытания лекарственных препаратов;

6.маркетинг препарата, финансовые и конъюктурше исследования.

В диссертационной работе освещены практически все перечисленные вопросы.При этом наиболее подробно представлены результаты исследований структуры ИПК, полученных разработанным нами способом - матричной

полимеризацией, взаимодействия ИПК с низко- и высокомолекулярными биологически активными веществами в растворах и биологических системах; изучены механизмы высвобождения биологически активных соединений из таких систем; представлены в сжатом виде результаты предклиничес-ких и клинических испытаний ряда ИПК и ЛФ на их основе, изготовленных разработанным нами промышленным способом; приведены сравнительные характеристики этих ЛФ и лучших зарубежных препаратов аналогичного действия.

Реализация результатов работы. На основе предложенных в работе ИПК как носителей лекарственных соединений и проведенных исследований биологической безопасности разработан и внедрен в промышленное производство на опытном заводе НШполимеров (г.Дзержинск) первый отечественный оригинальный полимерный носитель - КПН-1 [коммерческое название ИПК полиметакриловой кислоты (ПМАК) и полиэтиленоксида (ПЭО), регистрационный номер 38/677/11. В настоящее время КПН-1 имеет необходимую техническую документацию (ВФС 42-1840-88, ТУ 6-01-2-792-86, технологический регламент N 31-86). Разработана промышленная технология и комплект документации на МПК ПМАК и полипропиленоксида (ППО) (ТУ 6-02-121-90, технологический регламент N 28-90, проект ВФС).

Развитые в диссертации научные подхода к синтезу и изучению композитов на основе ИПК привели к созданию универсальной технологии получения лекарственных форм пролонгированного действия, реализованной на предприятиях медицинской промышленности. Разработаны и внедрены в промышленное производство первый отечественный противоастмати-ческий препарат Теопэк (Регистрационный номер 88/677/5) и первый отечественный противоаритмический препарат Хинипэк (Регистрационный номер 91/327/9).

В настоящее время на разных стадиях реализации (доклинические или клинические исследования) находятся следующие препараты: КПН-2 -коммерческое название ИПК ПМАК-ППО; КПН-3 - коммерческое название ИПК ПМАК и поливинилпирролидона (ПВП); КПН-4 - коммерческое название ИПК ПМАК и полидиметиламиноэтишетакрилата (ПДОАЭМ); комплексы редкосш-той полиакриловой кислоты (ПАК) и ПЭО, ПВП, а также пролонгированные препараты противоастматического действия: Неотеопэк (совместная разработка с фирмой "Воейг1щег 1п£е11ае1ш"). Комбипэк - комбинированный препарат теофиллина и савентола, детские формы теофиллина ( таблетки, гранулы, гели), противоаритмические препараты этмозина и этацизина, препарат противовоспалительного действия Ортоггэк (на основе ортофе-

на), противоанемический препарат Ферропэк (PeS04), антивирусный препарат Азидопэк (азидотимидин) и другие.

Апробация работы. Результаты проведенных исследований докладывались на III Республиканском симпозиуме"Иммунодепрессия при аллотранс-плантацш" (1975), на 1Y Всесоюзном симпозиуме "Синтетические полимеры медицинского назначения" (Дзержинск, 1979), на I конференции "Водорастворимые полимеры и их применение" (Иркутск, 1979), на II конференции "Водорастворимые полимеры и их применение" (Иркутск, 1983), на YI Всесоюзном симпозиуме "Синтетические полимеры медицинского назначения" (Алма-Ата, 1983), на Всесоюзной научной конференции "Интерполимерные комплексы" (Москва, 1984), на III Всесоюзной научно-технической конференции "Актуальные проблемы производства кровезаменителей, гормональных и органотерапевтических препаратов" (Москва, 1987), на II Всесоюзной конференции "Интерполимерные комплексы" (Рига, 1989), на Всесоюзной конференции "Состояние и перспективы создания новых готовых лекарственных средств и фотохимических препаратов" (Харьков, I99U), на Всесоюзном конгрессе по болезням органов дыхания (Челябинск, 1991), на IY Всесоюзной конференции "Водорастворимые полимеры и их применение" (Иркутск, 1991), на IX Всесоюзном симпозиуме "Ситетические полимеры медицинского назначения" (Звенигород, 1991), на научной конференции "Современные направления развития биотехнологии" (Москва, I9э1), на Российской научной конференции "Создание лекарственных средств" (Купавна, 1992), на I Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1992).

Публикации. По материалам проведенных исследований, обобщенных в докладе, опубликованы 62 работы, получено 5 авторских свидетельств, , 3 положительных решения по заявкам на изобретения.

Тезисы запиты. На защиту выносятся теоретические и экспериментальные исследования, выполненные впервые, по созданию полимерных носителей для БАС - МПК, изучение структуры и свойств ШЖ, в том числе существенных для создания депо Оиологически активных соединений, изучение взаимодействия ГОШ с низко- и высокомолекулярными соединениями в разбавленных водных растворах и биологических системах, изучение факторов, влияющих на процесс высвобождения ЛВ из модельных лекарственных форм на основе синтезированных носителей, а также практическая реализация этих исследований е виде лекарственных форм пролонгированного действия.

I. СИНТЕЗ ШТЕРПОЛИМЕРШХ КОМПЛЕКСОВ

Как известно, интерполимерные комплексы - новый класс полимерных соединений, представляющих собой продукты взаимодействия химически комплементарных полимеров. Схематическое изображение структуры ИПК приведено ниже:

ИПК

В структуре ИПК можно выделить два типа чередующихся участков -более или менее протяженные двутяхнш последовательности из пар звеньев разнородных цепей, образовавших друг с другом связи (участки А), и петли, включающие разобщенные звенья (участок В). В соответствии с современными представлениями ИПК являются индивидуальными макромоле-кулярными соединениями. ИПК, использованные в работе,и методы их синтеза приведены в таблицах I и 2.

Таблица I Таблица 2

Методы синтеза ИПК, стабилизи- Методы синтеза ИПК, стабилизированных водородными связями. рованных ионными связями.

Интерполимер- Состав Метода син-ный комплекс ИПК теза ИПК

ПМАК:ПЭ0 эквим. СРП* , МП**

ПМАК:ПВП _ « _ СРП, МП

ПМАК:ПП0 _ и __ СРП, МП

ПАК:ПЭ0 _ и __ СРП, МП

ПАК:ПВП _ « ^ СРП, МП

ПАК:ПП0 _ и _ СРП, МП

САКАП:ПВП 3:1 - СРП

-1:1,5

САКАП:ПЭ0 _ н __ СРП

Интеполимер- Состав Методы син-ный омплекс ИПК теза ИПК

ПМАК:ГЩМАЭМ эквим. ПАК:ПДМАЗМ - " -ПМАК:ПЭИ - " -ПМАК.-ПЭИ р - " -ПАК:ПЭИ - п -ПССК:ПЭИ р - " -ШАК:ПДМДААХ - " -ПАК :ДДМДААХ - " -ПМАК:ПВПЭБ 3:1 -- 5:1

ПАК-.ПВПЭБ эквим.

СРП, МП СРП,МП,Мод СРП,Мод*** СРП,Мод СРП

СРП,Мод СРП,Мод СРП,Мод СРП

СРП

* СРП - метод синтеза ИПК, заключающийся в смешении растворов полимеров и выделении осадка образующегося ИПК; ** МП - метод синтеза ИПК

матричной полимеризацией метакриловой кислоты (МАК) и акриловой кислоты (АК) в присутствии акцептора протонов в качестве матрицы;

*** Мод - модификация ИПК, полученных методом СРП, обработкой раствором аммиака или соляной кислоты.

Синтез ИПК проводили, используя следующие высокомолекулярные линейные компоненты: ПАК, ПМАК (ТУ 6-01-914-79), полистиролсульфокис-

- б -

лота (ПССК), поли-4-винилпиридинийэтилоромид (ПВПЭБ), полиэтиленимин (ПЭИ), ПДМАЭМ, полидаметилдиаллиламмонийхлорид (ПДМДААХ) (ТУ 38.301884), ПВП (МРТУ 42-3928-71), ИЗО (МРТУ 42 N 3175-63), ППО (ТУ 6-051515-75), ППО (фирмы "loba Felnchemle", Австрия). Для получения ИПК, содержащих гомологический ряд полимерных компонентов, синтезировали ИПК ПМАК-ПЭО, используя ИЗО (фирмы "Loba Felnchemle", Австрия), имеющих молекулярные массы 200, 300, 400, 1000, 1500, 2000, 3000, 4000, 5000, 15000, 20000, 35000. Для синтеза ИПК были использованы также разветвленный ПЭИ и рэдкосшитая ПАК (ТУ 6-02-III8-83).

Нами совместно с НИИлолимеров разработан и освоен промышленный способ получения ИПК методом матричной полимеризации. Необходимо отметить, что матричный синтез полимеров, открытый более 20 лет назад и используемый в качестве модели биосинтеза полимеров, оказался весьма эффективным промышленным способом синтеза полимерных носителей. Этот способ характеризуется высокими выходами ИПК (до 98 %), малым содержанием низкомолекулярных примесей. Он может быть осуществлен в замкнутом экологически чистом технологическом цикле.

Для изучения и применения ИПК в качестве полимерного депо БАВ необходимо детальное исследование структуры получаемых матричным синтезом ИПК.

2. СТРУКТУРА И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ИНГЕРПОЛИМЕРНЮС КОМПЛЕКСОВ

Структура и физико-химические свойства широкого круга ИПК разной химической природы, полученных смешением компонентов, исследованы > достаточно подробно.

Особый интерес представляло исследование структуры ИПК, полученных новым разработанным нами способом -матричной полимеризацией.Однородность продуктов матричного синтеза демонстрируют ДСК - термограммы ' ИПК ПМАК-ПЭО, ПМАК-ППО, ПМАК-ШП, ПМАК-ПДМАЭМ, свидетельствующие об их идентичности ИПК заранее синтезированных полимеров. Так на рис.1 представлены ДСК - термограммы ИПК ПМАК-ПЭО разных молекулярных масс (1-3) и механической смеси (4) эквивалентного состава.

Видно, что в отличие от механической смеси (4), в которой отчетливо проявляется пик плавления ПЭО в области 70°С,продукты матричного синтеза (1-3) представляют собой однородные индивидуальные соединения.

Рис. I .ДСК-термограммы ИПК на основе ПМАК и ИЗО различной молекулярной массы:

1- ПМАК-ПЭО-ЗОО

2- ПМАК-ПЭ0-4000

3- ПМАК-ПЭ0-15000

4- механическая смесь ПМАК и ПЭО 4000 состава 1:1, влажность образцов 3 %, скорость сканирования

10 град/мин

Синтезированные ИПК изучены также методом ЯМР в твердом теле. Для исследования твердых образцов интерполимерных комплексов была использована методика С - СРМАБ (кросс-поляризация и вращение под магическим углом в = 54°44'8"). Спектр ЯМР ИПК ПМАК-ПЗО, полученного матричной полимеризацией, показан на рис.2(а).

Рис.2.с' - ЯМР спектр (75 МГШШШ ПМАК-ПЭО-ЬООО, полученного методом МЩа); фрагмент ЯМР спектра того же ИПК, полученного методом СРП (б).

(в - разложение фрагмента ЯМР спектра"а"на две составляющие для оценки количества водородных связей)

В приведенном спектре форма сигнала углерода карбоксильной группы (200 м.д.) зависит от способа получения ИПК (для сравнения приведен фрагмент ЯМР спектра того хе ИПК, полученного смешением растворов полимеров, рис.2 б). Этот сигнал может быть представлен как сумма сигналов атомов углерода карбоксилов, связанных (I) и несвязанных (2)

- а -

водородной связью с атомами кислорода ПЭО (рис.2 в).

Соотношение площадей I и 2 показывает, что в продуктах матричной полимеризации образцов ШК (в том числе и промышленных образцах) 85 % всех -СООН груш ПМАК связаны с ПЭО. В то же время для ИПК, полученного смешением разбавленных растворов ПМАК и ПЭО - только 60 %. Это различие свидетельствует о большей упорядоченности структуры ИПК, полученных матричным синтезом по сравнению с ИПК, полученных методом смешения. Анализ составов ИПК показал, что в результате матричного синтеза получаются ИПК состава 1:1.

Получены данные о надмолекулярной структуре полимерных носителей КПН-1, КПН-2, КПН-3, КПН-4 . Структуру образцов анализировали с помощью электронного сканирующего микроскопа фирмы "Хитачи" (Япония). На микрофотографии (рис.3) видно, что полимерный носитель КПН-1 имеет глобулярное строение. Средние размеры глобул составляют 0,3 мк. Дисперсия глоОул по размерам - 1,4 * 10 мк. Средние размеры и дисперсии размеров частиц исследованных ИПК рассчитывали из размеров десяти произвольно выбранных глобул.

Из данных электронной микроскопии следует, что глобула является основным структурным элементом и для полимерных носителей КПН-2 и КПН-3. Средний размер глобул составляет 0,3 мк и 0,4 мк соответственно. Глобулы КПН-3 отличаются по сравнению с КПН-1 и КПН-2 большей полидисперсностыо: дисперсия глобул КПН-3 составляет 2,3 * Ю'мк, что примерно в два раза превышает соответствующие величины для КПН-1 и КПН-2. Заметное отличие КПН-3 от КПН-1 и КПН-2 и в форме глобул: глобулы КПН-3 более неправильной формы. Следует отметить, что наряду с отдельными глобулами встречаются их ассоциаты.а также еще более круп-/ ные образования, напоминающие пластины неправильной формы (чешуйки). Из сопоставления данных электронной микроскопии следует, что образование ассоциированных форм в случае КПН-3 выражено более сильно, чем в случае КПН-1 и КПН-2. Образование крупных структурных конгломератов в виде пластин, чешуек и т.д. - отличительная особенность полимерного носителя КПН-4. Структурные элементы в виде глоОул в этом случае встречаются значительно реже.

Проведенные исследования надмолекулярной структуры полимерных носителей свидетельствуют о том, что ИПК, полученные матричной полимеризацией, представляют собой однородные продукта, размер и форма частиц которых зависит от химической природы полимеров, образующих комплекс.

Рис.3. Электронная микрофотография композиционного полимерного носителя КПН-1.

Приведенные экспериментальные данные показывают, что в результате разработанного нами матричного синтеза получаются продукты, представляющие собой индивидуальные ИПК, идентичные полученным ранее смешением разбавленных растворов полимеров, но обладающие более регулярной и упорядоченной структурой.

3. РЕАКЦИИ ИПК С НИЗКОМОЖШЯРНЫШ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫМИ СОЧИНЕНИЯМИ В РАЗБАВЛЕННЫХ ВОДНЫХ РАСТВОРАХ

В основе успешного использования ИПК для депонирования биологически активных соединений лежит знание основных закономерностей взаимодействия ИПК с конкурирующими низко- и высокомолекулярными биологически активными соединениями.

Взаимодействие химически комплементарных макромолекул в ИПК носит кооперативный характер, следствием чего являются высокие значения констант устойчивости комплексов полимер-полимер, несоизмеримо более высокие, чем константа устойчивости продуктов взаимодействия полимеров с низкомолекулярными соединениями (НМС). Это обусловливает высокую стабильность ИПК в присутствии НМС. Добавление НМС.имеющего сродство к одному из компонентов ИПК, не влияет на реакцию интерполимерного взаимодействия. Однако, не исключается возможность взаимодействия НМС со звеньями полимера, не вступившего в реакцию комплексообра-зования (дефектами ИПК) по реакции:

"Конкурентное вытеснение низкомолекулярным соединением полимера из ИПК по реакции 3.2 происходит либо при значительных избытках НМС (случай воздействия на ионные ИПК низкомолекулярных солей), либо, когда константа устойчивости комплекса полимер - НМС резко возрастает за счет ассоциации последнего в мицеллы (случай конкурентного взаимодействия ИПК и поверхностно активных веществ). В обоих случаях имеет

3.1

место прямая конкуренция: низкомолекулярные ионы вытесняют из ШК высокомолекулярные одноименно заряженные ионы и происходит это при [НМС]»[ИПК].

Описанные выше случаи конкурентных реакций хорошо изучены для ШК, стабилизированных ионными связями, существенно менее изучены конкурентные реакции ИШС, стабилизированных водородными связями.

Для изучения особенностей поведения таких ИПК в качестве примера исследовали взаимодействие ИПК ПМАК-ПЭО с аминазином.

Аминазин (Н*Ат) - солянокислая соль 2-хлор-Ю-(3-диметиламинопро-пил) фенотиазина - лекарственное соединение нейролептического ряда -обладает дифильными свойствами: его молекула включает два основных центра, один из которых протокируется в водных средах, и гидрофобный фенотиазиновый цикл:

ИПК ПМАК-ЛЭО получали смешением растворов компонентов в эквимо-льных количествах. Образующийся в результате реакции ИПК эквимольного состава выделяется в отдельную фазу, образуя устойчивую дисперсную систему.

На рис.4 приведены кривые потенциометрического (I) и турбидимет-рического (2) титрования стехмомэтрического ИПК ШАК-ПЭО аминазином. По оси абсцисс отложен состав смеси Ъ, определяемый как соотношение [Н*Аш)/[ИПК]. На кривой титрования можно выделить две области, характеризующиеся существенно различным поведением зависимости рН от Ъ. Область I характеризуется крутым падением рН с увеличением 2, в области II рН смеси практически не зависит от Ъ, однако происходит растворение осадка ИПК.

3.2

С%

* НС1

3.3

рн

И-

й/Отох

-0.5

' I' * • | ' ' » | I " I ( I »I | I I I |

0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2

Рис.4.Кривые потенциомет-рического (I) и турбиди-метрического (2) титрования ИПК ПМАК-ПЭО аминазином.

[ИПК]=0,078 О-М/Л, 1=0, И=20°С

Анализ осадков в области I показывает, что они представляют собой тройной комплекс ПМАК-П30-Н+Ат, в котором аминазин электростатически взаимодействует с карбоксильными грушами, включенными в дефекты ИПК. Содержание НчАш в тройном ЖК, вычисленное из данных потен-циометрического титрования, не превышает 2,5 % ( при рН 2.75), т.е. в области I реакция протекает в соответствии со схемой:

'-лэо

:пэо

3.4

Растворение ипк при включении в его состав возрастающих количеств аминазина в области II (г>0,2) происходит благодаря некулоновс-кому взаимодействию аминазина с частицами ипк. Дифильные свойства молекулы аминазина обусловливают его способность образовывать не только солевые связи (реакция 3.4), но и связываться за счет неполярных взаимодействий с макромолекулами благодаря наличию фенотиазинового ■цикла. Нелолярные контакты могут возникать при взаимодействии свободного Н*аш с фрагментами цепи пмак, содержащимися в дефектных участках ипк: петли, хвосты, а также с ионными парами СОО"Н+Аш, образовавшимися по реакции 3.4. Образование на фрагментах цепи пмак агрегатов молекул аминазина, несущих положительный заряд, способствует гидрофили-зации частиц ипк и, в конечном счете, приводит к растворению частиц ипк.

Детальная информация о продуктах реакций в области II (см.рис.4)

получена при использовании методов вискозиметрии и аналитического центрифугирования. На рис.5 представлены зависимости приведенной вязкости и коэффициента седиментации смесей поликомплекса ИПК с Н+Ат от концентрации Н*Ат. Как видно из рисунка, увеличение концентрации аминазина сопровождается увеличением приведенной вязкости и падением коэффициента седиментации продукта взаимодействия ИПК с Н*Аш.

На рис.5 представлены также зависимости приведенной вязкости и коэффициетов седиментации продуктов взаимодействия ПМАК с Н+Аш.

о.о

Рис.5.Зависимость приведенной вязкости и коэффициента седиментации в системе ШАК-Н*Ат(о,а) и ИПК-Н*Ат(»,я), [ПМАК]=Г1ШК]=0;026 о-М/л, 1=0, Т=20"с, рН 2

[Н'Ат] «102

Обращает на себя внимание тот факт, что значения приведенной вязкости и коэффициентов седиментации этих продуктов совпадают. Обнаруженные особенности поведения зависимостей приведенной вязкости и коэффициента седиментации для систем ШК-Н^Ат и 1МАК-Н+Ат позволяют предположить механизм взаимодействия катионов Н+Аш с частицами ИПК ПМАК-ПЭО, при котором низкомолекулярный органический катион аминазина, образуя комплекс с ПМАК благодаря ионным и неионным взаимодействиям, оказывается эффективным конкурентом макромолекулярному компоненту ИПК-ПЭО. Схематически такую реакции можно представить следующим образом:

ПМАК

+ п

3.5

ПЭО

В результате этой реакции цепи ПЭО выделяются в раствор и образуется новый комплекс ШАК-Н*Аш, стабилизированный как ионными, так и гидрофобными взаимодействиями. Следует заметить, что Н+Ат склонен к образованию ассоциатов, стабилизированных неполярным взаимодействием фенотиазиновых циклов друг с другом. 00 этом свидетельствуют данные флюоресценции растворов ПМАК и ИПК с Н+Аш. Характерное смещение максимума длины волны спектра эмиссии с 442 до 458 нм (Лвозб. 380 нм) свидетельствует о наличии таких ассоциатов.

Предложенная схема реакции между ИПК и аминазином, предполагающая конкурентное вытеснение макромолекул ПЭО ассоциатами катионов аминазина (схема 3.5), находит прямое подтверждение в эксперименте, основанном на ИК-спектроскопическом анализе продуктов реакции 3.5, выделенных из реакционных смесей ШШ-Н^Ат и ИПК-Н+Ага методом препаративного ультрацентрифугирования (время седиментации рассчитывали из данных аналитического центрифугирования). Продукт реакции может быть эффективно отделен от ПЭО, остающегося в растворе и не седиментирую-щего в этих условиях. Результаты анализа показали идентичность осадков и отсутствие характеристической для ПЭО полосы при Л.=ПОО см"1 в системах ПМАК-Н^Ат и ПМАК-ПЭО-Н* Ат, представляющих собой комплекс ПМАК-Н'Ат.

Аналогичные конкурентные реакции замещения, сопровождающиеся вытеснением полимерного компонента ИПК в раствор наблюдаются и при взаимодействии аминазина с ИПК ПАК-ГОО, ПАК-ПВП, ПМАК-ПВП и этапера-зина с теми же ИПК.

Для понимания механизма конкурентных реакций, протекающих с участием ИПК, стабилизированных водородными связями, необходимо отмэ-7 тить, что аминазин не способен образовывать водородные связи с поликислотой, т.е. не является прямым конкурентом ПЭО в реакции образования интерполимерных водородных связей с ПМАК. В то же время Н+Аш способен к неполярным взаимодействиям с дифильными соединениями, к числу которых относятся ИПК. Такое взаимодействие сопровождается нарушением внутримолекулярных неполярных контактов между двутяжными участками (участки А схемы 1.1) ИПК, играющих принципиальную роль в стабилизации таких ИГ1К в водных средах. Легко понять, что разрушение таких контактов за счет солюбилизации аминазина частицами ИПК приводит к разрушению ИПК. Кроме того, нарушению таких внутримолекулярных неполярных взаимодействий должно способствовать электростатическое отталкивание ионов Н*Ат, связанных с ИПК.

Итак, исследование взаимодействия ШК, стабилизированных водородными связями с низкомолекулярными органическими ионогенными соединениями показало, что основные особенности взаимодействия принципиально схожи с описанными выше закономерностями взаимодействия ионных ИПК с ионными же НМС, однако имеют более сложный характер. При низких соотношениях [НМС]:[ИПК] возможно взаимодействие НМС с дефектами ИПК, в том числе по ионному механизму, приводящее к образованию тройного комплекса ИПК-НМС. В случае НМС, склонного к ассоциации, происходит конкурентное вытеснение полимера - акцептора протонов и образование водорастворимых комплексов поликислота - НМС.

Состав и строение рассмотренных выше продуктов реакции 3.4 и 3.5 решающим образом зависят от химической природы НМС (в том числе ЛВ). В частности, такие соединения как хинидин, этмозин, этацизин, туба-зид, нафциллин и др., молекулы которых менее склонны к гидрофобной ассоциации, взаимодействуют с ИПК с образованием тройных комплексов, включающих все три компонента одновременно.

Рассмотренные процессы, как будет показано ниже при обсуждении принципов создания нового поколения лекарственных средств, играют принципиальную роль в разработке подходов к технологии получения лекарственных форм пролонгированного действия.

4. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ИНТЕРПОЛИМЕРНЫХ КОМПЛЕКСОВ С МАКРО-МОЛЕКУЛЯРНЫМИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫМИ СОЕДИНЕНИЯМИ

При взаимодействии ИПК с полимерными соединениями, имеющими большее сродство к одному из компонентов комплекса, реакция протекает по схеме:

4.1

Эта реакция хорошо изучена как для ИПК, стабилизированных водородными связями, так и для ИПК, стабилизированных ионными связями, образованных синтетическими и природными полиэлектролитами, особенно подробно механизм реакции изучен для случаев конкурентного взаимодей-

ствия нестехиометрических водорастворимых, полиэлектролитных комплексов с полимерными конкурентами. Этот класс реакций носит название реакций макромолекулярного замещения и характеризуется высокой специфичностью.

Факторами, определяющими направление реакции, являются заряд цепи, геометрическая комплементарность, молекулярная масса и т.п.

Закономерности реакции интерполимерного замещения послужили основой формулирования нового принципа построения макромолекулярных дозирующих систем для биологически активных полимерных соединений. В качестве модельной реакции была выбрана реакция нейтрализации гепарина его антагонистом.

Гепарин - природный отрицательно заряженный полисахарид, применяемый как антикоагулянт крови при проведении операций на сосудах и сердце, при гемосорбции и гемодиализе. По окончании операции гепарин удаляют из кровотока,используя антагонисты гепарина,которые представляют собой полимерные катионы природного или синтетического происхождения. Их антигепариновая активность является следствием прямого электростатического взаимодействия множественных положительных зарядов молекул антагониста с отрицательно заряженным полисахаридом - гепарином. Продуктом этой'реакции является малоактивный и малотоксичный ИПК стехиометричного состава. В предложенной нами системе действующее начало - синтетический антагонист гепарина - входит в состав водорастворимого нестехиометричного интерполимерного комплекса (НИПК), являющегося продуктом взаимодействия противоположно заряженных полиэлектролитов, взятых в неэквивалентных соотношениях. Известно, что НИПК представляют собой своеобразные блоксополимеры с чередующимися однотяжными блоками, составленными из звеньев полимера, взятого в избытке, и двугяжными блоками, представляющими собой собственно поликомплекс. НИПК удерживаются в растворе благодаря наличию гидрофильных звеньев полимера, взятого в избытке.

ША-Ма

4.2

Использованный наш в качестве дозирующей системы НИПК является продуктом взаимодействия избытка натриевой соли полиметакриловой кислоты (ПМА-Ыа) и ПВПЭБ. Такой НИПК, изображенный на схеме 4.2, представляет собой устойчивое в физиологическом растворе соединение. Для экспериментов использовали НИПК состава ф = [ПВПЭБ 1 / [ПМА-Ыа] =0,33 и 0,2.

Для понимания механизма действия такой дозирующей системы необходимо ответить на следующие вопросы:

1. Устойчив ли НИПК в условиях организма?

2. Какова неспецифическая биологическая активность НИПК, которую можно рассматривать как следствие его взаимодействия с белками, клеточными мембранами и другими системами организма?

3. Какова специфическая (антигепариновая) биологическая активность НИПК?

Ответ на первые два вопроса получен нами в результате сравнительного исследования взаимодействия НИПК и образующих его полиэлектролитов с белками сыворотки крови, форменными элементами крови и целым организмом. Методом турбидиметричэского титрования, скоростной седиментации, электрофореза в полиакриламидном геле исследовали взаимодействие НИПК и его компонентов с сывороточными белками. Реакцию с форменными элементами изучали на примере агглютинации (склеивания) эритроцитов барана (ЭБ), воздействие НИПК и его компонентов на организм оценивали,исследуя их острую токсичность на белых мылах. Результаты таких исследований приведены в таблице 3.

Таблица 3

Взаимодействие НИПК и его компонентов с белками плазмы, клетками и целым организмом.

^^Объект Полимер Бычий сывороточный альоумин 7-глобу-лин Белки плазмы Эритроциты барана мг/кг

ПВПЭБ + + + + >5*ю'о-моль 98

ПМА-Ыа - - - - >700

НИПК ф=0,33 - - - - 566

- происходит образование комплексов при физиологических условиях; - соответствующие поликомплексы не образуются; для реакции агглютинации ЭБ дана концентрация, выше которой наблюдается склеивание ЭБ. Шдд - доза, при которой погибает 50 % животных.

Из приведенных экспериментальных данных следует, что изученный НИПК является устойчивым в биологических средах соединением, актив-

ность которого в присутствии модельных биологических объектов и в целом организме определяется активностью малотоксичного, включенного в НИПК в избыточном количестве полианиона. Физиологически активный, токсичный поликатион, включенный в состав НИШ в недостатке, не проявляет в изученных реакциях собственную биологическую активность.

особый интерес представляет исследование специфической (антигепариновой) активности модельных НИПК. На рис.6 приведены кривые тур-бидиметрического титрования НИПК различного состава гепарином. Видно, что реакция соединения поликатиона с гепарином происходит независимо от того, свободен поликагион или включен в состав НИПК.

Рис.6. Кривые турбидиметри-ческого титрования гепарином растворов:

I-ПВПЭБ, 2-НИПК ф =0,33, 3-НИПК ф =0,2, [ПВПЭБ1св=[ПВПЭБ]в нипк=

= 2 * 10 о-м/л, [гепарин] =6 * 10"* о-м/л, 1=0,15 Н NaCljJDH 7.5,Т=20t Z=[гепарин]/[ПВПЭБ]

о.о -

Схематически реакция гепарина с НИПК представлена ниже:

ИМА-Na

ГЕПАРИН

ГЕПАРИН 4.3

НИПК <£< ф,

и водорастворимому НИПК наблюдается

iIBn3B / ч-У^ 0 " пвп © 0

НИПК <р,

При добавлении гепарина к ПВПЭБ образование осадка - стехиометричного полиэлектролитного комплекса гепарина с ПВПЭБ (данные элементного анализа осадка: найдено N/S 0,61; N/C 0,106; вычислено для стехиометричного НИПК N/S 0,61; N/C 0,096). Независимый анализ сосуществующих осадка и надосадочной жидкости показывает, что реакция 4.3 завершается полным переносом из частиц исходного НИПК ПВПЭБ на полианионы гепарина. Это означает, что специ-

фическая антигепариновая активность свободного и связанного с ПМА-Ыа ПВПЭБ в физиологическом растворе (рН 7.5, ионная сила 1=0,15 М НаС1) практически одинакова.

Существенно, что при любом составе тройной системы, т.е. независимо от количества добавленного к НИПК гепарина, система содержит НИПК (ПМА-Иа - ПВПЭБ) + ИПК (гепарин - ПВПЭБ) + свободный полианион (ПМА-Ыа) и не содержит свободного поликатиона (схема 4.3). Таким образом,ШПК (ПМА-Ыа - ПВПЭБ) высвобождает антагонист гепарина строго в соответствии с количеством добавленного гепарина, при этом остальной антагонист находится в связанном виде. Иными словами, НИШ высвобождает антигепарин в дозе, строго эквивалентной терапевтической дозе данного препарата.

Приведенные выше данные получены при изучении реакции 4.3 между НШТК и гепарином в модельном физиологическом растворе при рН 7.5 и ионной силе 1=0,15 М НаС1_. Прямое экспериментальное исследование механизма такой реакции в условиях организма затруднено, однако изучение антигепариновой активности ПВПЭБ и НИПК в цельной крови методом тромбоэластографии и в физиологическом растворе позволяет косвенно судить о протекании реакции нейтрализации гепарина в организме. В табл.4 приведены значения массовых нейтрализующих соотношений (для НИПК нейтрализирукщее соотноиение рассчитывают по отношению к ПВПЭБ, включенному в НИПК ), полученных в опытах по нейтрализации гепарина в физиологическом растворе и в цельной крови.

Таблица 4

Массовые нейтрализующие соотношения в мг ПВПЭБ на I мг гепарина.

Полимер В физиологическом В крови

растворе

ПВПЭБ 1,0 0,6

НИПК 1,0 1,0

Сопоставление данных свидетельствуют о том, что в пределах ошибки измерений противогепариновая активность в крови свободного и связанного поликатиона одинакова, что хорошо согласуется со схемой 4.3. Реакция нейтрализации гепарина протекает как в водном растворе, так и в цельной крови в соответствии с приведенной выше схемой, то есть на реакцию замещения ПМА-Ыа, включенного в НИПК, гепарином белки и клеточные элементы крови не оказывают заметного влияния, они не являются

конкурентами в реакции связывания поликатиона гепарином.

В медицинской практике при нейтрализации гепарина после окончания оперативного вмешательства возникает проблема передозировки его антагонистов. Например, передозировка протаминсульфата (разрешенного к медицинскому применению в РФ антигепарината) вызывает гепаринопо-добный эффект (рис.7, кривая I). Кроме того, антигепаринаты, будучи поликатионами, обладают высокой токсичностью. Нами исследовано влияние передозировок НИПК на свертывание гепаринизированной крови. На рис.7 (кривая 2) приведена зависимость времени свертывания гепаринизированной крови от концентрации НИПК. Видно, что по мере добавления

Рис.7.Зависимость времени свертывания гепаринизированной крови от весовой концентрации антагонистов гепарина.

1 - протаминсульфат л

2 - НИПК (<р=0,33), Т=20 С

в гепаринизированную кровь возрастающих количеств антагониста гепари- / на время свертывания падает, достигая минимального значения при эквивалентном соотношении антагониста и гепарина. Дальнейшее добавление НИПК вплоть до 10-ти кратной передозировки не влияет на время свертывания крови. Это свидетельствует о том, что из этой дозирующей системы высвобождается только то количество поликатиона, которое необходимо для нейтрализации гепарина. Избыток антагониста гепарина остается в крови в виде НИПК и не оказывает заметного влияния на свертывающую систему крови.

Таким образом, в настоящей главе продемонстрирован новый принцип создания макромолекулярных дозирующих устройств, использующих закономерности реакций интермакромолекулярного • замещения. В определенном смысле можно считать, что такие депо, которые можно синтезировать на

основе широкого круга синтетических и природных полиэлектролитов, представляют собой дозирующие системы, обладающие "обратной связью" с организмом, т.е. высвобовдающийся биологически активный компонент (в нашем случае антигепаринат) только в ответ на сигнал извне: введение в организм мишени (в нашем случае гепарина). При отсутствии такого сигнала депо остается в инертном состоянии, не выделяя в кровь активный, но токсичный компонент.

Кроме описанных выше закономерностей взаимодействия ИПК с низко-и высокомолекулярными компонентами, наблюдаемых в разбавленных водных растворах, дополнительные особенности в характер взаимодействия с биологически активными соединениями могут вносить и концентрационные факторы.

Настоящая глава посвящена исследованию реакции химически комплементарных полиэлектролитов в широком интервале их концентраций.

Исследование проведено на примере реакции мезду солью полиметак-риловой кислоты (м.м. 250 0GQ) и красителя фенотиазинового ряда -метиленового голубого (МГ) с ПДМАЭМ (м.м. 70 ООО). За глубиной реакции комплексообразования следили по изменению в растворе концентрации свободного красителя МГ. Такая реакция может быть описана схемой:

Схема 5.1 представляет собой реакцию соединения противоположно заряженных полиионов с образованием ИПК, которая сопровождается выделением в раствор низкомолекулярных ионов, в том числе и органических противоионов - катионов МГ. Движущей силой этого процесса является выигрыш энтропии' системы за счет высвобождения низкомолекулярных ионов. В этой реакции МГ играет роль маркера и одновременно модельного БАС, ибо закономерности, наблюдаемые в реакции, имеют общий характер и отражают особенности поведения многих БАС, включая лекарственные вещества, в том числе исследованные в нашей работе. В качестве

5. ПРИНЦИПЫ СОЗДАНИЯ МАКРОМОЛЕКУЛЯРНЫХ ДОЗИРУЮЩИХ СИСТЕМ

5.1

маркера МГ служит, потому что при высвобождении в результате реакции 5.1 кластеров МГ в раствор существенным образом меняется УФ-спектр красителя. Это явление известно, как явление метахромазии и широко используется Для количественного определения связанного и свободного красителя."'

ц _ . ; ;

о о—с-/в-е-

45. „

о о

0.5

О >

V

II

III

0.0 - уПГ1ПГТГГП тч i if ни я и i »i тигли п и и п 11i ,>П.%,1п9|.........

D.00 Ü.01 0.02 0.03

[ПМАК] = [ПОМАЭМ] , o-m/l

5.2

©

II

&

На схеме 5.2 представлена диаграмма, отражающая поведение реакционных систем в широком интервале изменения концентраций реагентов. Исследование проведено, как указывалось выше, на примере реакции соли ПМАК (м.м. 250 ООО), в которой 1/30 часть звеньев имеет в качестве противоиона МГ, и ДЦМАЭМ (м.м. 70 ООО). Указанная соль представляет однородный по составу продукт, о чем свидетельствуют данные седимен-тационного анализа. Полиэлектролиты, оттитрованные до pH 7 растворами NaOH и HCL, вводились в реакцию в эквимольных концентрациях. Ордината этой диаграммы (ß) представляет собой долю ионов красителя, выделившуюся в окружающую среду в результате реакции 5.1, а абсцисса - концентрацию любого из полиэлектролитов. Экспериментальные точки на этой диаграмме получены в результате измерения концентрации МГ после отделения нерастворимого ШЗК. Измерения проводили через 10 мин после смешения растворов реагентов. Этого времени достаточно,' чтобы отделить образовавшийся ИПК и проанализировать надосадочную жидкость.

На диаграмме можно выделить три области. При низких концентра-

циях компонентов (область I) весь краситель обнаруживается в надоса-дочной жидкости. Это означает, что в течение указанного времени реакция 5.1 полностью завершается. В результате реакции образуется равновесный ИПК с максимальным числом интерполимерных солевых связей.

При увеличении концентрации реагирующих полимеров доля МГ в над-осадочной жидкости начинает падать, а ИПК, выделившийся в осадок, окрашен в интенсивный синий цвет, причем интенсивность окраски тем выше, чем выше концентрация реагентов. Это означает, что за время наблюдения (10 мин) реакция 5.1 не завершается,а образующийся в результате этой реакции нерастворимый ИПК представляет собой продукт существенно незавершенной реакции, который наряду с полиэлектролитами содержит значительную часть малых, в том числе органических противо-ионов (область II).

Наблюдая за красителем в надосадочной жидкости, можно обнаружить повышение его концентрации в растворе. Через некоторое время (от часов до дней, в зависимости от температуры и концентрации компонентов) концентрация МГ в надосадочной жидкости становится равной исходной. Такое поведение системы свидетельствует о ее неравновесном характере. Т.е.при смешении компонентов в области концентраций 0,01 - 0,03 о-м/л образуется неравновесный, обладающий большим количеством дефектов ИПК. Дефекты этого комплекса удерживают сорбированный краситель. Схему реакции можно представить следующим образом:

Продукт реакции - термодинамически неравновесный ИПК (ИПК-Тн) представляет собой сетчатый полимер, узлами сетки которого являются двутяжные участки ИПК. Проходные цепи полимерного аниона удерживают катион красителя.

Глубина превращения в интерполиэлектролитной реакции при фиксированном времени наблюдения падает по мере повышения концентрации реагентов, что обусловлено в первую очередь увеличением вязкости системы. В возникшей в результате реакции концентрированной фазе, которая включает оба полиэлектролита, медленно протекает реакция дальней-

5.3

него образования интерполиэлектролитных солевых связей, что сопровождается постепенным выделением в окружающий раствор красителя. В конечном счете образуется продукт завершенной интерполиэлектролитной реакции (5.4). Иными словами, в гелеобразном продукте незавершенной

реакции протекают релаксационные процессы, времена релаксации которых увеличиваются по мере роста концентрации исходных компонентов. Так при формировании ИПК при концентрации 1,5*10 о-м/л половина содержащегося в осадке красителя выделяется за 24 часа, а при концентрации 2,9*10 о-м/л примерно за 50 часов.

Очевидно, что положение границы между областями I и II зависит от условий проведения эксперимента: увеличение времени наблюдения перемещает границу вправо. При выбранных нами временах наблюдения (минимально необходимых -для проведения анализа сосуществующих фаз) эта граница, соответствующая 0,01 о-м/л практически совпадает с концентрацией кроссовера ПДМАЭМ (0,01 о-м/л) и лежит правее концентрации кроссовера ПМА-Иа (0,002 о-м/л). Именно в таких условиях и возникают, по-видимому, достаточные затруднения для диффузии полимерных звеньев, замедляющих процесс образования интерполиэлектролитных солевых связей. Формирующиеся на ранних стадиях интерполиэлектролитные контакты распределены хаотично в фазе ИПК.

Образование неравновесных сетчатых структур наблюдается и для других пар полиэлектролитов и других маркеров. В качестве примера в таблице Ь приведены данные о количестве антибиотика нафциллина (НФ), удерживаемого осадком ИПК, являющимся продуктом реакции мезеду солью ПЭИ-НФ и ПМА-Иа.

Видно, что с увеличением концентрации реагентов, также как и в описанном выше примере, количество нафциллина, удерживаемого ИПК, растет. При выдерживании этой системы с течением времени наблюдается увеличение концентрации нафциллина в надосадочной жидкости, свидетельствующее о протекании релаксационных процессов, аналогичных описанным выше (5.3).

ИПК-Тн ИПК

5.4

Таблица 5 .

Относительное количество нафциллина,удерживаемого ИПК, полученного в результате реакции ПЭИ-НФ и ПМА-Ка при разных концентрациях реагентов (рН 7).

Концентрация реагентов, о-м/л * 104 Относительное количество НфГ удерживаемого ИПК

[моль НФ)/1о-моль ИПК) [МГ НФШмг ИПК)

0,70 0 0

1,30 0,17 0,50

2,60 0,42 1,24

3,30 0,50 1,50

* - концентрация НФ в надосадочной жидкости измерена через 10 мин после смешения растворов реагентов.

Рассмотренные выше явления наблюдаются в I и II областях схемы 5.2. В области III, располагающейся правее области II, при тех же режимах смешения реагентов химически комлементарных полимеров наблюдается образование капель, содержащих раствор добавляемого полимера, распределенных в растворе второго полимерного компонента. Содержимое этих капель отделено от раствора второго полимера тонкой пленкой т-герполимерного комплекса, препятствующего дальнейшему смешению и протеканию интерполиэлектролитной реакции 5.1. При добавлении ПМАК-МГ (I) к раствору ПДМАЗМ (2) капли окрашены в синий цвет и хорошо видны в бесцветном растворе поликатиона. При изменении порядка смещения на обратный в синем растворе (I) различимы бесцветные капли (2). Результаты анализа МГ в среде, в которой распределены капли, дает либо 100% его содержания, либо полное его отсутствие в зависимости от порядка его смешения, что отражается двумя ветвями (а и 0) концентрационного профиля МГ в области III (схема 5.2). Этот режим смешения отвечает режиму образования микрокапсул.

Изученные особенности интерполимерных реакций могут быть успешно использованы при разработке оригинальных подходов к созданию нового поколения лекарственных средств пролонгированного действия с контролируемым выделением активной субстанции.

ИПК, являющиеся продуктами завершенных реакций, аналогичных продуктам интерполимврных реакций в области I (схема 5.2), представляют собой хорошо известные функциональные материалы, нашедаие применение как тромборезистентные покрытия, полупроницаемые мембраны и др.

Природа ИПК, стабилизированных кооперативным взаимодействием полимерных компонентов, обусловливает их высокую чувствительность к

изменяющимся факторам окружающей среды, в частности к изменению рН. Это свойство особенно ценно для материалов, используемых для изготовления пероральных лекарственных форм, так как принятый внутрь препарат подвергается по мере движения по желудочно-кишечному тракту воздействию сред с различным рН. Так, ЮЖ, стабилизированные водородными связями, переходят от нерастворимого, слабо набухающего продукта (содержание вода около 40 %) к неограниченно набухающему в интервале рН 4.5-5 (положение рН перехода зависит от химической природы и м.м. компонентов), причем переход происходит резко. Это явление можно использовать для создания селективно растворимых (например, кишечно растворимых) покрытий. Такие покрытия наносятся на таблетки или гранулы препаратов, нестабильных в кислой среде желудка или обладающих раздражающим действием на слизистую оболочку желудка. В таблице '6 приведены данные по высвобождению различных препаратов из таблеток, покрытых пленками КПН-1, через I чао после начала наблюдения в средах, моделирующих желудочно-кишечный тракт.

Таблица 6

Высвобождение ЛВ из таблеток, покрытых оболочкой* на основе КПН-1, через I час после начала наблюдения в условиях, моделирующих желудочно-кишечный тракт.

Препарат Кол-во ЛВ,высвободившегося в среде,моделирующей желудок, %; рН 1.16 (НС1+КС1Г Кол-во ЛВ,высвободившегося в среде,моделирующей кишечник, %', рН 7.5 (фосф.буфер?

Салициловая

кислота 1,0 100

Никотиновая

кислота 1.5 100

Изониазид 6,0 100

Ибупрофен 0,4 100

ортофен 0 100

» -толщина пленки 10 цк; ** - Г=37°С, скорость вращения -<¿=100 об/мин.

Видно, что пленка на основе УШК эффективно тормозит транспорт ЛВ в раствор в условиях, моделирующих желудок, и быстро растворяется, практически не препятствуя высвобождению ЛВ в условиях, моделирующих кишечник. Такое покрытие может быть использовано в качестве некоего-запорного устройства, обеспечивающего направленную доставку ЛВ в кишечник.

Аналогичные эффекты можно наблюдать и на матричных системах. На рис.8 (1-4) представлены кинетические кривые высвобоздения препаратов

разной химической природа: оксащшшна, азидотимидина и теофиллина из матриц на основе КПН-1, полученных в условиях, моделирующих желудочно-кишечный тракт.

Рис.8.Кинетические кривые высвобождения препаратов в условиях, моделирующих желудочно-кишечный тракт,из полимерных матриц.

1- аксацш1ЛИН(50мг)+КПН-1 (150мг)

2- оксациллин(100мг)+КПН-1(100мг)

3- теофиллин(300мг)+КПН-1(100мг)

4- азидотимидин(200мг)+КПН-1(100мг)

5- теофшшш(300мг)+КПН-4(100мг) 2 часа при рН I.16,остальное время при рН 7.5

Г = 37 С, и = 100 об/мин

- доля высвободившегося из матрицы ЛВ

т(ь)

Видно, что в зависимости от химической природы Ж и соотношения ИПК/ЛВ для матриц, стабилизированных водородными связями, торможение высвобождения в условиях желудка проявляется в большей или меньшей степени. Принципиально отличается картина высвобождения для ИПК, стабилизированных солевыми связями (рис.8 кривая 5): высокая скорость высвобождения при рН 1.16, когда ИПК практически нацело диссоциированы, и низкая в условиях максимального количества интерполимерных контактов при рН 7.5.

Сочетание ИПК разной химической природа позволяет регулировать скорость высвобоадения из полимерной матрицы на их основе не только в отдельных участках желудочно-кишечного тракта, но и по всей его длине. На рис.9 представлены кинетические кривые высвобождения теофиллина из матриц на основе смесей ИПК разной химической природа. Видно, что в зависимости от соотношения ИПК можно получать системы, равномерно высвобождающие теофиллин в течение 12 часов (для двукратного приема) или 24 часа (для однократного приема).

На приведенных выше примерах продемонстрирован принцип использования функциональных особенностей ИПК максимальной глубины превращения, чувствительным к изменению параметров окружающей среды, в частности рН, и возможности регулирования скорости высвобождения, основанные на функциональном состоянии ИПК.

Рис.9.Кинетические кривые высвобождения теофиллина в условиях, моделирующих желудочно-кишечный тракт, из матриц на основе смесей ИПК разной химической природы.Доза тео-филлина-300 мг.вес образцов -400 мг.

1-для приема препарата дважды в день;

2-для приема препарата один раз в день.

Г = 37"С, и = 100 об/мин,

Как упоминалось выше, получение ИПК при концентрациях выше точки кроссовера приводит к образованию термодинамически неравновесных ИПК с минимальным числом интермакрамолекулярных связей (ИПК-Тн). Дефекты таких ИПК могут сорбировать низкомолекулярные соединения и выделять их,заменяя связь полимер-низкомолекулярное вещество на связь полимер-полимер, при реакции релаксации ИПК. Такой механизм высвобождения замечателен тем, что дает дополнительные возможности регулирования скорости высвобождения лекарственного вещества, основанные на релаксационных процессах.

Термодинамически нестабильные ИПК можно выделить, используя специальные приемы, изготовить матричные таблетки и исследовать высвобождение лекарственного вещества из них. Характерно, что поведение таблеток на основе неравновесных комплексов резко отличается от поведения аналогичных таблеток, но сформированных из ИПК с максимальным числом связей.

На рис.10 приведены кинетические кривые высвобождения салицилата натрия и аминазина из матриц максимальной глубины превращения (1) и минимальной глубины превращения (2). Из рисунка видно, что ИПК-8ш1п удерживают лекарственное вещество существенно дольше, чем ИПК-0шах. Скорость высвобождения ЛВ на порядок ниже из матриц на основе ИПК-вт1п.

Аналогичная картина наблюдается и для других препаратов. Т.е. использование неравновесных' ИПК позволяет резко понизить скорость высвобождения препарата, при этом увеличивается прочность полимерной матрицы. Высокая прочность "каркаса" полимерной матрицы приводит к

Рис.10. Кинетические кривые высвобождения салицилата Ма из матриц ПМАК-ПДМААХ (а) и аминазина из матриц ПАК-ДЦМАЭМ (б). Доза салицилата Ыа - 100 мг.доза аминазина - 80 мг.вес образцов 200 мг. 1 - ИПХ-бтах, 2 - ШК-вт1п. рН 7.5, Т=37<*3, <0=100 об/мин

значительному увеличению количества ЛВ, которым можно "нагрузить" такую пролонгированную форму, т.е. значительно увеличить емкость матрицы. По этому параметру данные носители на порядок превосходят все известные. В табл.7 приведены кинетические данные по выделению препарата диклофенака натрия из матриц ИНК 1ШК-ЦДМАЭМ. Матрицы сохраняют целостность вплоть до 90 %-пого содержания лекарственного вещества.

Таблица 7

Данные по кинетике высвобождения диклофенака натрия (Б-Ыа/ из матриц разного состава на основе ИПК ШАК-ЩЩЭМ (рН 7).

выделившегося за ИПК: О-Ка ( в молях )

1:1 1:1,5 1:2 1 :3 1 :4 1:7 1 :10

2 час 4 час 6 час 8 час 17.5 23,0 33,8 42.6 12,9 23.0 36.1 45,9 21,7 40.0 58.1 70,1 16,8 34,3 40,8 50,3 17,0 28,4 37,6 50,9 12.7 22.8 32,8 43,6 46,0 92,8

Для понимания описанной выше разницы в поведении матричных систем, полученных из одних и тех же ИПК, но разной глубины превращения, следует обратиться к особенностям строения полимерных сетчатых структур, возникающих при использовании различных способов синтеза одних и тех же ИПК. Для ИПК, синтезированных в разбавленных растворах, характерно крайне неоднородное распределение сшивок, что обусловливает невысокие механические свойства таблеток, в том числе ив набухшем

состоянии. Отсюда - относительно невысокая емкость таблеток по отношению к ЛВ, относительно высокие скорости высвобоздения ЛВ и т.д.

В противоположность этому таблетки, изготовленные на основе неравновесного ИПК-9ш1п, при набухании в водной среде стремятся перейти в термодинамически устойчивое состояние, реагируя с многочисленными своими соседями. Это приводит к образованию полимерной сетки с равномерным распределением узлов, что и обеспечивает высокую прочность и плотность всей конструкции, и, как следствие, высокую емкость в отношении ЛВ, низкую скорость высвобождения. На схеме 5.5 изображены структуры таких полимерных матриц.

22сж

о - ИПК-етах Д - ЛВ

5.5

ИПК-8т1п А - ЛВ

Явление резкого повышения прочности полимерных композитов при использовании ШЖ-6т1п имеет большое значение и для других областей техники, ибо прочность не является основным показателем качества в лекарственных формах. Увеличение прочности за счет образования трехмерной полимерной сетки с равномерным распределением узлов в объеме изделия позволяет считать, что ИПК в перспективе можно рассматривать как конструкционные полимерные материалы.

При дальнейшем повышении концентрации реагирующих полимеров, как упоминалось выше,в соответствии со схемой 5.2, образуются капли раствора одного из полимеров в вязком растворе другого, разделенные тонкой пленкой ИПК. Такие системы могут быть использованы для создания, так называемых, мягких лекарственных форм: желе, мазей, суппозиториев и т.д. Такие формы широко используются в мировой практике в случаях, когда пациенты испытывают затруднения при приеме таблеток (лечение детей, тяжелых больных и т.д.).

Обычно для изготовления таких форм применяют сшитые природные и синтетические полимеры. В нашей стране разрешен к медицинскому применению редкосшитый полимер акриловой кислоты-САКАП. Однако, эти полимеры используются как загустители жидких систем и, обладая очень малой прочностью, легко разрушаются (диспергируются) перистальтикой желудка, не давая пролонгированных эффектов.

Рассмотрим, какие возможности для регулирования скорости высво-

сождения лекарственного вещества возникают при использовании продуктов интермакромолекулярных реакций в концентрированных растворах.

Наличие полупроницаемой мембраны на границе раздела фаз обеспечивает торможение транспорта ЛВ, растворенного или диспергированного внутри капель. На рис.11 приведены результаты, исследования высвобождения теофиллина из такой капсулы, мембрана которой представляет собой ИПК ПМАК-ПВДАЭМ. Видно, что полупроницаемая пленка тормозит высвобождение растворенного внутри капсулы теофиллина. Разрыв оболочки (излом на кривой) приводит к резкому возрастанию скорости высвобождения за счет вытекания раствора через отверстие.

м,. %

40- ИПК ПАК-ЦЩЭМ

зо;

20

ю-

Теофиллин в геле ПАК V

ъ

т (Г,)

Рис.II.Кинетическая кривая высвобождения теофиллина из капсулы ИПК.

Стрелкой отмечен момент разрыва капсулы.

рН 7.5 (фосфатный буфер) Т = 37%, ы = 100 об/мин

Наиболее интересные возможности для создания мягких пероральных лекарственных форм представляются при использовании комплексов, стабилизированных водородными связями.

Концентрированные растворы таких комплексов при рН 7 представляют собой вязкие гелеобразвде системы, в которых можно растворить или диспергировать лекарственное вещество. При попадании в кислую среду желудка на границе геля из-за диффузии протонов внутрь образуется пленка нерастворимого комплекса, затрудняющего диффузию низкомолекулярного лекарственного вещества и увеличивающего прочность системы. Скорость высвобождения Оудэт определяться свойствами этой мембраны, которые задаются химической природой ИПК, молекулярными массами и концентрацией ИПК. На рис.12 приведены кинетические кривые высвобождения теофиллина из галя САКАИа (I) и гелей на основе ИПК ШАК-ШП (2-4). Видно, что применение ИПК позволяет, значительно удлинить время высвобождения.

Не менее существенным, чем эффект пролонгирования, является способность к самовосстановлению таких систем в условиях желудка, изу-

Рис.12.Кинетические кривые высвобождения теофшшша из гелей на основе: 1 - САКАПа,

2 - 3 % ИПК ПМАК-ПВП

3 - 5 % ИПК ПМАК-ПВП

4 - 7 55 ИПК ПМАК-ПВП

ченная на примере ИПК ПМАК-ПЗО и ПМАК-ПВП. При разрушении такой системы под действием перистальтического движения желудка новообразовавшиеся поверхности благодаря диффузии внутрь протонов желудочного сока затягиваются пленкой нерастворимого комплекса, "залечивая" дефекты своей поверхности.

Такое "самозалечивание" дефектов полупроницаемой пленкой, образующейся на поверхности гелей, содержащих лекарственное вещество, позволяет в значительной степени стабилизировать процесс высвобождения ЛВ, предотвращая резкие выбросы его за счет разрыва полупроницаемой оболочки.

■ Таким образом, использование явления комплексообразования на границе раздела фаз полимер-полимер или концентрированный раствор полимерных компонентов КПК-среда, в которых реакция комплексообразования приводит к образованию ИЕК, позволяет получать материалы для создания мягких гелеобразных лекарственных форм с регулируемым высвобождением активной субстанции.

Таковы молекулярные механизмы регулирования скорости высвобождения низкомолекулярных лекарственных веществ, основанные на специфическом двуцепочном строении ИПК.

6. ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ СОЗДАНИЯ ПРОЛОНГИРОВАННЫХ СРЕДСТВ С РЕГУЛИРУЕМЫМ ВЫСВОБОЗДЕНИЕМ ЛЕКАРСТВЕННОГО ВЕЩЕСТВА

Технология изготовления лекарственных форм на основе ИПК включает стандартные приемы, используемые при изготовлении лекарственных форм с применением других полимерных вспомогательных веществ. Так, например, матричные лекарственные формы, представляющие собой шли-

мерные матрицы с равномерно распределенным в них лекарственными веществами и,при необходимости, небольшие количества других вспомогательных веществ (скользящих, разрыхлителей и проч.) получают, используя известные приемы влажного или сухого гранулирования, сушки и таблети-рования. Таким способом были изготовлены матричные лекарственные формы для препаратов: аминазин, этаперазин, нафциллин, оксациллин, ри-фампицин, салициловая и никотиновая кислоты, изониазид, ортофен.этмо-зин, этацизин, хинндин, теофиллин, сальбутамол, сульфат железа, фторид натрия и др. Некоторые особенности, представляющие "know how", связаны со специфическим характером получаемых матричной полимеризацией IfflK.

Оптимизация составов и технологических приемов производится по общепринятым в фармацевтической технологии параметрам, таким как насыпная масса, сыпучесть, прочность таблетки и др. Однако, для лекарственных средств пролонгированного действия существенными параметрами являются кинетические параметры, описывающие характер высвобождения лекарственного вещества из лекарственной формы.

Высвобождение лекарственных веществ из полимерных матриц хорошо изучено и характеризуется двумя процессами: высвобождением лекарственного вещества из поверхностного слоя и диффузией молекул лекарственного вещества из объема матрицы.

Анализ кинетических кривых проведен наш на примере высвобождения теофиллина из матриц на основе ИНК разной химической природа. На рис.13 представлена типичная кинетическая кривая высвобождения тео-

rtt

Рис.13.Экспериментальная кривая высвобождения теофиллина из композиции КПН-1+теофиллин состава 2=0,4 (1), зависимости "быстрой"(2),"медленной"(3) составляющих и их суммы (4) от времени, рН 1,1

филлина из матривд на основе ИПК ПМАК-ПЭО. Эта кривая хорошо описывается в терминах двух экспонент:

-kft ~kst Mt = Mof (1 - e Mos (1-е ),

где Wo - исходное количество ЛВ в полимерной матрице, Mt - кол-во ЛВ, выделившегося из полимерной матрицы к моменту времени t, К - константа скорости высвобовдения, Moi и kf относятся к быстрой составляющей, a Mos и kj к медленной составляющей процесса. При этом должно выполняться соотношение Mo = Moi + Mos.

Такой анализ позволяет выделить две составляющие и проанализировать факторы, контролирующие высвобождение лекарственных веществ из полимерных матриц для обоих процессов. К таким факторам относятся: химическая природа ИПК и лекарственных веществ, молекулярная масса компонентов ИПК, взаимодействие лекарственных веществ с ИПК и их компонентами, соотношение компонентов, размер частиц ИПК и лекарственных веществ и прочие.

Очевидно, что ряд факторов взаимосвязан и имеет ясную физико-химическую природу, другие же - связаны с конкретной технологией получения образцов. Эти факторы по разному влияют на различные стадии высвобождения лекарственного вещества, а в совокупности представляют собой те рычаги, которые позволяют контролировать кинетику высвобождения. В таблицах 8-II в качестве иллюстрации представлены зависимости кинетических констант ряда исследованных образцов от некоторых параметров.

Таблица 8

Влияние состава композиции на кинетику высвобождения теофиллина из композиций на основе КПН-1.

Z Размер частиц, мкм % kf час-1 Mo/Mcr % ks* io2; час-1

КПН-1 ЛВ

7.7 cklOQ d<315 5.2 1.2 94.8 1.0

3.3 d<100 d<315 7.4 1.4 92.6 1.0

1.2 cklOO d<315 9.1 1.3 90.9 1.4

0.9 d<100 d<315 13.5 1.2 86.5 2.1

0.5 d<1Q0 d<315 15.6 1.2 84.4 4.3

Таблица 9

Влияние размера частиц ЛВ на кинетику высвобождения теофиллина из композиций на основе КПН-1.

Z Размер частиц, мкм Mo/Mcf % kí . час"1 M0¿M0 % ks* Ю2, час-1

КПН-1 ЛВ

0.5 К100 d<100 15.4 1 .5 84.6 5.1

0.5 d<100 100<d<200 12.0 1 .7 88.0 5.3

0.5 d<100 500<d<71U 0 - 100 5.0

Таблица 10

Влияние давления прессования ЛВ на кинетику высвобождения теофиллина из композиций на основе КПН-1.

Z Давление прессования, атм м01/и0, % Ч час 1 % ks* 10^, час-1

1 .2 1 .2 1.2 1 .2 1 .2 1 .2 25 50 75 100 125 150 7.1 6.5 6.5 5.3 4.9 4.6 1.9 2.0 1 .9 2.2 2.2 2.5 92.9 93.5 93.5 94.7 95.1 95.4 1.4 1 .4 1 .4 1 .6 1 .6 1 .6

Таблица II Влияние химической природы полимерного носителя на кинетику высвобождения теофиллина.

Z Интерполимерный комплекс м0/м0, % час 1 % kg* 10й, час"1

1.2 1.2 1.2 КПН-1 КПН-2 КПН-3 9.7 12.8 13.1 2.0 1.5 1 .9 90.3 87.2 86.9 1.5 3.3 3.2

Очевидно, что приближение условий эксперимента к условиям организма усложнит характер кривой высвобождения, однако, предложенный метод анализа, основанный на принятом формальном анализе процесса высвобождения, позволяет тем не менее вычленять факторы, оказывающие существенное влияние на кинетику выделения в различных отделах желудочно-кишечного тракта.

7. БИОЛОГИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ИПК И ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ НА ИХ ОСНОВЕ

Из литературы известно, что ИПК нетоксичны, не обладают раздражающим действием при имплантации в органы и ткани. Они используются в качестве повязок на раны и тромборезистентных покрытий искусственных сосудов. Известны также другие сферы применения ИПК, свидетельствующие об их безопасности для человеческого организма.

Биологическая безопасность синтезированных нами ИПК изучалась специалистами ВНЦ БАВ.ВНИИ биотехнологии, Томского медицинского института и др.организаций.

Результаты комплексных медико-биологических испытаний ИПК: ПМАК--ПП0, ПМАК-ПВП, ПМАК-ПЩАЭМ и ПАК-ПЭИ, включающие изучение острой'и хронической токсичности на мышах, крысах, кроликах, собаках, а также оценка их мутагенности, тератогенности, иммуногенности, канцерогенно-сти характеризуют ИШ как вещества малотоксичные. Токсические эффекты могут возникнуть только от наличия низкомолекулярных примесей, количество которых должно быть строго регламентировано.

Изучение безопасности композиционного полимерного носителя КЛН-1 проведено в соответствии с требованиями, предъявляемыми Фармакологическим комитетом Минздрава СССР к новым лекарственным и вспомогательным веществам. Результаты испытаний позволили рекомендовать КПН-I в качестве вспомогательного вещества в лекарственных формах пролонгированного действия. Государственный регистрационный номер 88/677/1.

В эксперименте на животных проведены испытания эффективности покрытий и композиций на основе ИПК.

Кишечно-растворимые покрытия.

В опыте на собаках проведено испытание эффективности полимерных покрытий ИПК ПМАК-ПЗО. Таблетки рентгеноконтрастного препарата сульфата бария с нанесенным покрытием из ИПК вводились собакам per os. Целостность таблеток регистрировали методом рентгеноскопии с интервалом 0,5 часа.Контролем служили непокрытые таблетки сульфата бария. На рентгеновских снимках желудочно-кишечного тракта видно, что таблетки, покрытые ИПК, распадаются в области кишечника,через 2-2,5 часа. Конт-" рольные таблетки распадаются в желудке через 0,5 часа.

Эффективность покрытий на основе ИПК продемонстрирована также в фармакокинетическом эксперименте на примере препарата ибупрофен, обладающего раздражающим действием на слизистую оболочку желудка. Ана-

лиз кривых показывает, что нанесение покрытий резко сникает максимум концентрации ибупрофена в крови в интервале 0-6 часов, что является следствием резкого снижения его всасывания в желудке при приеме таблеток с покрытием.

Композиции и ЛФ на основе ИПН.

Ниже приведены результаты фармакокинетических исследований на кроликах композиций ШК и нафциллина, ампициллина - рис.14(а.б), а также ЛФ теофиллина - рис.15 и хинидина - рис.16.

С,ткп/т1

\

ТГ

6 7 8 9 T(h)

O.mVg/ml

0.4

о.з 0.2 O.I

о.о

fh-

2«

Г(Ь)

Рис.14.Зависимость концентрации препарата в сыЕоротке крови кролика после введения композиции (I) и субстанции (У): а) нафциллин + ШК IMAK-ШИ в/м, доза 20 мг/кг (I)

нафциллин в/м, доза 20 мг/кг (2) 0) ампициллин + ИГО ПССК-ПЭМ per os, доза 135 мг/кг (I) ампициллин per os, доза 135 мг/кг (2)

12 16 20 J4" 43

т

Рис.15.Зависимость концентрации теофиллина в сыворотке крови кролика от времени после введения препарата "Теопэк" Доза теофиллина 10 мг/кг

2 3

С.ткд/т1

Рис.16. Зависимость концентрации хинидина в сыворотке крови кролика от времени после введения препарата "Хинипэк".

Доза хинидина сульфата 55 мг/кг

Из приведенных рисунков видно, что ИПК разной химической природы эффективно удлиняют действие ЛВ.

8. КЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ИПК.

В этом разделе приведены результаты клинической апробации препаратов Хинипэк и Теопэк - матричных таблеток пролонгированного действия на основе ИПК КПН-1. Исследования препаратов проведены в сравнении с лучшими зарубежными аналогами.

Хинипэк.

Препарат Хинипэк изучен у 273 больных в возрасте от 20 до 81 года. Продолжительность курса лечения колебалась от I до 40 дней.Препарат применялся для купирования и профилактики различных видов нарушений сердечного ритма при ИБС, ревматическом пороке сердца, гипертонической болезни и некоторых других заболеваниях. Наиболее эффективен при мерцании предсердий, наджелудочковой экстрасистолии. Купирующие дозы Хшпшэка составляли 0,4 - 2,4 г, а поддерживающие - 0,4 - 0,8 г в сутки. Препарат назначался 2 раза в сутки с интервалом в 12 часов.

Фармакокинетика нового антиаритмического препарата Хинипэк (активная часть - хинидина сульфат) изучена на пациентах с различными нарушениями сердечного ритма в сравнении с зарубежным аналогом Кини-лентином (Финляндия). Средний возраст больных - 50,5 лет (табл.12).

Теопэк,

В клинике Теопэк изучен на 1300 Сольных. Длительность применения препарата в клинике 7 лет. Двухкратный прием Теопэка вызывает кругло-

Таблица 12

Фармакокинетические параметры препаратов Хинипэк и Кинилентин (Финляндия).

Параметры Хинипэк Кинилентин

Однократная доза, г 0,6 0,5

Максимальная

концентрация, жг/мл 1,81+0,11 1,55±0,11

Время достижения

максим.концентрации, ч 6,1+0,5 3,6+0,2

Площадь под фармако-

кинетической кривой.

(МКГ/МЛ)*Ч 40,1±4,0 24,23+1,05

Период полу-

всасывания, ч 1,93+0,20 0,98+0,08

Константа аб-

сорбции, 1/4 1,43+0,07 -

Период полувыве- 10,3+0,9 10,23+0,46

дения, ч

Константа

элиминации, 1/ч 0,073+0,003 -

Кажущийся объем

распределения, л 229,2+10,3 206,7+10,7

Общий клиренс, л/ч 16,76+1,35 17,52+0,85

суточное оронхоепазмолигическое действие, что оказывает положительный эффект, особенно у больных с ночными и утренними приступами удушья. На 7-е сутки ежедневного приема препарата отмечается достоверное сни-снижение показателя бронхиального сопротивления, а также отмечается достоверный прирост показателей бронхиальной проходимости. В результате длительного изучения Теопэка выявлено, что препарат обладает высокой эффективностью в дозе 450-600 мг/сутки, способен поддерживать терапевтическую концентрацию теофиллина в плазме при 2-х кратном приеме, длительно контролировать бронхиальную проходимость и уменьшать потребность в других группах медикаментозных средств, используемых в лечении бронхиальной астмы. Состояние устойчивого равновесия плазменной концентрации теофиллина коррелирует с улучшением клинического состояния пациентов, что проявляется в повышении физической активности, снижении частоты и интенсивности приступов удушья, исчезновении ночных приступов диспноэ, а также снижении потребности пациентов в ингаляционных симлатомиметиках и системных кортшсостероидах.

В табл.13 приведены результаты фарманокинетических исследований препарата Теопэк и зарубежных аналогов -Теодура фирмы "Астра" Швеция и Теотарда фирмы "КРКА" Югославия (лицензия ФРГ).

Таблица 13

Фармакокинегические параметры Теопэка и препаратов аналогов.

Параметры Теопэк Теотард Теодур Теофиллин

однократная доза, мг 300 350 300 300

Площадь под кривой "концентрация-время" , (мкг/мл)*ч 109,0 90,9 98,8

93,5

Среднее время всасывания, ч 12,4 16,2 11,4 8,2 1 ,4

Время всасывания 75 % дозы, ч - 16,0 10,7 2,0

Среднее время удержания в 20,0 16,8 10,0

организме, ч 21 ,0

Время достижения максимальной

концентрации, ч 6,0 5,9 8,3 3,2

Максимальная концентрация, 4,5

мкг/мл 3,6 4,0 8,0

Наблюдаемый период полуэли-

минации, ч 12,0 12,0 6,3 6,0

Общий клиренс, мл/мин Степень биодоступности, % 53,5 53,5 55,0 50,6

94,6 94,5 92,0 100

ооъем распределетая, л 29,2 29,0 30,0 26,2

Время задержки всасывания, ч 0 0,2 0 0,5

Из таблицы видно, что препарат Теопэк по своим фармакокинетичес-ким характеристикам¡длительности действия,биодоступности и др. не уступает лучшим импортным препаратам. Однако, таблетка Теопэка существенно меньше (при одинаковой дозе теофиллина) таблетки Теодура - препарата одинакового строения. Т.е. наблюдаемые эффекты достигаются с помощью существенно меньшего количества полимерных вспомогательных веществ (полимерных носителей), что свидетельствует о высокой эффективности МПК, использованного в лекарственных формах (табл.14).

Таблица 14

Сравнительные характеристики таблеток Теопэк и Теодур.

Характеристики Теопэк Теодур

Содержание теофиллина, мг 300 300

Масса таблетки, мг 400 650

Масса вспомогательных

веществ, мг 100 350

Технология изготовления Основана на Основана на

использовании применении

водных раство- органических

Пожаро- и взрывоопасность ров растворителей

Безопасно Опасно

производства

ВЫВОДЫ

1. Разработаны научные основы и промышленный метод синтеза ново-ч> класса полимерных носителей для биологически активных соединений -штерполимерных комплексов - путем матричной полимеризации. Изучены строение и структура синтезированных 1ШК. Показано, что продукты матричного синтеза представляют собой индивидуальные соединения, стехио-иетрического состава, аналогичные получаемым смешением растворов полимеров, но отличаются более регулярной и упорядоченной структурой.

2. Изучены конкурентные взаимодействия в многокомпонентных системах, включающие химически комплементарные макромолекулы и органические ионы различной химической природы, в первую очередь биологически активные (лекарственные) соединения. Установлено, что в зависимости от химической природа интерполимерных комплексов и конкурирующих органических соединений, а также условий проведения реакций, наблюдается либо образование смешанных тройных комплексов, либо замещение одного из полимерных компонентов поликомплекса низкомолекулярным конкурентом. Предложены подходы, позволяющие контролировать направление таких реакций.

3. Изучены конкурентные взаимодействия в многокомпонентных системах, включающие нестехиометрические интерполимерше комплексы и высокомолекулярные соединения природного происхождения, а также форменные элементы крови. Предложена принципиально новая макромолекуляр-ная дозирующая система, включающая нестехиомэтричный ИНК антагониста гепарина. В основе действия системы лежит интерголммерная реакция замещения полимерной карбоновой кислоты, включенной в указанный комплекс гепарином. Продемонстрирована исключительно высокая избирательность такой системы к гепарину в присутствии природных полиэлектролитов - белков, а также форменных элементов и цельной крови.

4. Изучено влияние концентраций химически комплементарных макромолекул на конкурентные реакции с участием биологически активных веществ и строение образующихся продуктов интерполимерных реакций. .Установлено, что в зависимости от концентраций реагирующих полимеров получаются различные продукты реакции: при низких концентрациях образуются ЙПК с максимальным числом интермакромолекулярных связей. При повышении концентрации макромолекулярных компонентов наблюдается образование термодинамически неравновесных продуктов незавершенных интерполимерных реакций. При высоких концентрациях смешение Компонентов

приводит к образованию системы, состоящей из вязких растворов несме-шивающихся полимеров, разделенных полупроницаемой пленкой ИПК. На основе этих продуктов создано новое поколение полимерных носителей БАВ, отличающихся высокой емкостью и способностью контролируемо выделять БАБ в окружающую среду. Функционирование таких носителей обусловлено протеканием химических превращений их в термодинамически ста-билыше интерполимерные комплексы.

5. Изучена кинетика высвобождения лекарственных веществ из модельных матричных лекарственных форм на основе интерполимерных комплексов максимальной глубины превращения. Показано, что регулирование высвобождения биологически активных (лекарственных) соединений основано, прежде всего, на функциональных свойствах таких систем.

6. На основе термодинамически нестабильных ИПК минимальной глубины превращения изготовлены модельные лекарственные формы. Показано, что использование таких ИПК позволяет на порядок увеличить длительность действия и емкость полимерных матриц за счет реакций интерполимерных взаимодействий, протекающих при набухании в полимерных матрицах.

7. Исследованы возможности использования дисперсных полимерных систем, полученных при высоких концентрациях для создания мягких лекарственных форм. Изготовлены модельные лекарственные формы, представляющие собой гели. Показано,что процесс интерполимерного комплек-сообразования на границе раздела фаз можно использовать для регулирования скорости высвобождения лекарственного вещества из мягких ЛФ. Разработана модель "самозалечивающейся" системы, позволяющей предотвратить неконтролируемое высвобождение лекарственного вещества из мягких лекарственных форм в условиях желудка.

в. Исследовано влияние физико-химических и технологических параметров на кинетику высвобождения препаратов из лекарственных форм. Путем анализа кинетических кривых выявлено влияние этих параметров на кинетические константы процесса, что позволяет оптимизировать как состав, так и технологшо лекарственной формы.

9. Предложена универсальная промышленная технология изготовления матричных форм на основе ИПК для лекарственных препаратов, принадле-' жащих к разным химическим классам, позволяющая осуществлять выпуск препаратов пролонгированного действия практически на любом предприятии медицинской промышленности, обладающем стандартным оборудованием для таблеточного производства..

10. Проведены доклинические исследования безопасности ряда синтезированных интерполимерных комплексов различной химической природы. Показано, что относительно небольшой круг интерполимерных комплексов позволяет выпускать широкий ассортимент лекарственных форм: матричные таблетки, таблетки с покрытием, лекарственные пленки, гранулы, капсулы, желе, мази и проч.

11. Проведены доклинические исследования ряда матричных лекарственных форм и таблеток с покрытием. Показано, что применение ИНК позволяет создавать эффективные лекарственные формы с регулируемым высвобождением лекарственного вещества.

12. Проведены сравнительные клинические исследования противоаст-матического препарата Теопэк и прогивоаритмического препарата Хинипэк с лучшими зарубежными препаратами - аналогами. Показано, что препараты не уступают аналогам по своей терапевтической эффективности, а по технологическим параметрам превосходят их.

13. Проведенные теоретические и экспериментальные исследования интерполимерных реакций послужили основой промышленной технологии производства нового поколения полимерных носителей и нового поколения лекарственных форм на их основе, в число которых входят первые отечественные препараты противоастмзтического (Теопэк) и противоаритми-ческого (Хинипэк) действия, а также целый ряд жизненно важных пролонгированных препаратов различного терапевтического действия юртопэк, Комбилэк, Этмопэк и др.). Эти исследования являются базой для создания отрасли, специализирующейся на выпуске эффективных препаратов пролонгированного действия с регулируемым высвобождением лекарственного начала, а также препаратов подобного типа для других областей народного хозяйства: ветеринарии, биотехнологии и т.д.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИИ

1. В.А.Петровская, В.А.Кабанов, В.А.Каргин. Кинетика и механизм полимеризации 4-винилпиридина на макромолекулах полиакриловой и поли-Ь глутаминовой кислот.-Высокомолек.соед.,1968,т.А X, с.925-934.

2. В.А.Кабанов, В.А.Петровская, а.Н.ГвоздецкиЙ. Стереоспецифическая полимеризация 4-винилпиридина в водных растворах. - Международный симпозиум по макромолекулярной химии, 1969, с.381-387. Будапешт.

3. В.А.Петровская, В.А.Кабанов, В.А.Каргин.механизм цвиттерионной полимеризации 4-винилпиридина в водных растворах.-Высокомолек.соед., 1970, т.А XII, с. 1645-1652.

4. В.А.Каоанов, 0 В.Каргина, В.А.Петровская. Механизм матричного син теза солевых полимер-полимерных комплексов.- Высокомолек. соед., соед., 1971, т.А XIII, с.348-366.

5. В.А.Петровская. Влияние поликатионов различной конформации на иммуногенез у мышей. - Тез. докл. III Респ. симп. "Иммунодепрессия при аллотрансплантации", 1975, с. 64.

6. В.А.Кеменова, А.Б.Зезин, А.М.Скородинская, И.В.Березовская. Спо соб получения полимерных комплексов биологически активных соединений пролонгированного действия. - Авт.свид. Л 546616, 1978.

7. Н.И.Быстрова, В.А.Кеменова, И.М.Паписов. Оральные лекарственны! формы на основе полимерных комплексов. - Тез.докл. IV Всесоюзного симпозиума "Синтетические полимеры медицинского назначения", -1979, с. 20, Дзержинск.

8. А.М.Скородинская, В.А.Кеменова, В.А.Касаикин, В.А.Изумрудов О.В.Чернова, Л.А.Пирузян. Использование растворимых полиэлектролитных комплексов, включающих полимерные кислоты акрилового й метакрилового ряда, для создания макромолекулярных дозирующих устройств. - Тез.докл. IV Всесоюзного симпозиума "Синтетические полимеры медицинского назначения", 1979, с. 16, Дзержинск.

9. А.М.Скородинская, В.А.Кеменова, В.А.Касаикин, В.А.Изумрудов, В.С. Ефимов, А.Б.Зезин. Использование водорастворимых нестехиометрич-ных полиэлектролитных комплексов для создания антигепариновых препаратов. - I конф. "Водорастворимые полимеры и их применение", 1979, с.89, Иркутск.

10. Н.И.Быстрова, В.А.Кеменова, А.П.Чепурная, И.М.Паписов, В.А.Кабанов. Полимерный носитель для биологически активных соединений. - Авт.свидетьл. » 896036, 1981.

11. В.А.Кеменова, А.М.Скородинская, А.Б.Зезин, В.А.Кабанов, В.С.Климов. Способ получения полимерного носителя для биологически активных соединений. - Авт.свидет. Л 999558, 1982.

12. Н.И.Быстрова, В.А.Кеменова. Взаимодействие лекарственных препаратов с синтетическими полимерами и их комплексами. -Тез.докл. II Всесоюзной конф. "Водорастворимые полимеры и их применение", 1982, с. 158, Иркутск.

13. А.М.Скородинская, В.А.Кеменова, А.Б.Зезин, О.В.Чернова, В.С.Ефимов. Биологическая активность нестехиомэтричных.полиэлектролитных комплексов. - Тез.докл. II Всесоюзной конф. "Водорастворимые полимеры и их применение", 1982, с. 145, Иркутск.

14. В.А.Кеменова, В.С.Ефимов, А.Б.Зезин, В.А.Кабанов, К.М.Лакин, А.М.Скородинская, и.В.Чернова, К.Н.Дулевич. Способ определения концентрации гепарина в крови. - Авт.свидет. № 1075164, 1982.

15. Н.И.Быстрова, В.А.Кеменова, Н.А.Нарышкова, А.П.Чепурная. Взаимодействие аминазина с полиметакриловой и полиакриловой кислотами в кислой и нейтральной средах. - VI Всесоюзный симпозиум "Синтетические полимеры медицинского назначения", 1983, с. 135-136, Алма-Ата.

16. В.А.Кеменова, Н.И.Бысгрова, А.П.Чепурная, Н.А.Нэрышкова, В.А.Кабанов, Т.И.Козулидана, Е.И.Лукина. Кшечнорастворимые покрытия для лекарственных форм. - Авт.заявка * 3555443, 1983.

17. А.М.Скородинская, В.А.Кеменова, О.В.Чернова, В.С.Ефимов, К.М.Лакин, А.Б.Зезин, В.А.КаОанов. Модель депо противогепарино-вого препарата. - Хим.-фарм. журнал, 1983, № \г, с.1463-1467".

18. Н.И.Бысгрова, В.А.Кеменова, А.Б.Зезин, В.А.Кабанов. Взаимодействие аминазина с полиметакриловой и полиакриловой кислотами в кислых средах. - Хим.-фарм. журнал, 1984, № 4, с. 464-467.

19. Н.И.Быстрова, В.А.Кеменова. Взаимодействие поликомплекса с органическими катионами. - Тез.докл. Всесоюзн. науч. конф. "Интерполимерные комплексы", 1984, с.59, Москва.

20. А.П.Чепурная, Н.И.Быстрова, В.А.Кеменова.Влияние состава поликомплекса полиметакриловая кислота - полиэтиленгликоль на его механические свойства. - 'Гез.докл. Всесоюзн. науч. конф. "Интерполимерные комплексы", 1984, с.43, Москва.

21. А.М.Скородинская, В.А.Кеменова, В.С.Ефимов, М.И.Мустафаев, В.А.Касаикин, А.Б.Зезин, й.А.Каоанов. Биологическая активность нестехиометричных полиэлектролитных комплексов. - Хим.-фарм. журнал, 1984, Л 3, с. 283-287.

22. А.М.Скородинская, В.А.Кеменова, А.Б.Зезин. Водорастворимый нестехиометричный комплекс - модельная система с контролируемым высвобождением антигепаринового агента. - Тез.докл. I Всесоюзной научн.конф. "Интврполтерние комплексы", 1984, с. 118, Москва.

23. В.А.Кеменова. Использование принципов интерполимерных взаимодействий для создания новых лекарственных средств. - Всесоюзн. науч. конф. "Интерполимерныэ комплексы", 'Гез.докл.. 1У84, с. ЮЗ-4)4, Москва.

24. В.А.Кеменова, В.А.КаОанов, А.П.Чепурная, В.С.Этлис, А.В.Хэренко. Способ получения интерполимерных комплексов. - Авторское свидетельство № 1371012, 1986.

25. А.П.Чепурная, Н.И.Аксенова, В.А.Кеменова. Изучение процессов набухания полимерных пленок, являющихся основой лекарственной пролонгированной форш. - Тезисы докл. Ш Всесоюзной научно-технич. конф. "Актуальные проблемы производства кровезаменителей гормональных органотерапевтических препаратов",

1987, Москва.

26. А.М.Сурин, Л.М.Меликянц, В.Г.Городков, А.П.Чепурная, С.А.Сурков, В.А.Кеменова. Взаимодействие хинидана с полиметакриловой кислотой в водных растворах. - Химико-фармацевт. журнал, 1988, № '(, с. 867.

27. Р.В.Махарадзе, В.А.Кеменова, А.П.Чепурная,. Л.М.Меликянц, Н.И.Аксенова и др. Лекарственная композиция пролонгированного действия на основе хинидана сульфата. - Автор, заяв. Л 44«3591,

1988.

28. А.Г.Чучалин, Б.И.Шмушкович, В.А.Кеменова, А.П.Чепурная, Л.М.Мели-кянц, А.В.Харенко и др. Лекарственная композиция на основе теофиллина и способ ее получения. - Автор, заяв. * 4396525, 1988.

29. А.Г.Чучалин, Е.Н.Калманова, Т.Л.Пашкова, Б.И.Шмушкович, В.А.Кеменова. Применение нового отечественного пролонгированного теофиллина в лечении бронхиальной астмы. СО.статей *Лечение, неотложная помощь, профилактика НЗЛ", 1988, с.3-5, Саратов.

30. А.Г.Чучалин, Е.Н.Калманова, Б.И.Шмушкович, Т.Л.Пашкова, В.А.Кеменова. опыт лечения больных бронхиальной астмой отечественным пролонгированным теофиллином - теопэком.- Сб.труд."Этиология, патогенез, клиника, лечение и профилактика бронхиальной астмы", 1989, с.108-112, Ленинград.

31. А.П.Чепурная, В.А.Кеменова, Н.В.Кузнецова. Механические свойства пленок на основе интерполимерных комплексов. - Тез.докл. II Всесоюз. конференции "Интерполимерные комплексы", 1989, Рига.

32. М.Окородинская, В.А.Кеменова, А.В.Харенко, А.В.Зезин. Особенности взаимодействия между полиэлектролитами в присутствии красителя. -Тез.докл. II Всесоюзной конференции "Интерполимерные комплексы", 1989, Рига.

33. Р.И.Мустафин, К.В.Алексеев В.А.Кеменова, В.С.Домбровский, М.Н.Маркович. Получение таблеток ортофена пролонгированного действия на основе интерполимерных комплексов. - Тез.докл. Всесоюзн.конф. "Состояние и перспективы создания новых готовых лек.средств и Цитохимических препар." , 1990, с. 78-79, Харьков.

34. В.А.Кеменова, Р.И.Мустафин, К.В.Алексеев, А.М.Окородинская, А.Б.Зезин, А.И.Тенцова, В.А.Кабанов. Применение интерполимерных комплексов в фармации. - Фармация, 1991, # I, с. 67-72.

35. А.Г.Чучалин, Е.Н.Калманова, В.А.Кеменова. Опыт лечения больных бронхиальной астмой Теопэком и Теооиолонгом. - Тез.докл. I Всесоюзного конгресса по болезням органов дыхания, 1990, с.721, Киев.

36. В.А.Кеменова, К.В.Алексеев, А.В.Харенко,А.П.Чепурная, А.Г.Чучалин Новые лекарственные формы теофиллина. - Тез.докл.II Всесоюзн. конгресса по болезням органов дыхания,1991, с. 254, Челябинск.

37. А.Г.Чучалин, Е.Н.Калманова, Т.Л.Пашкова, В.А.Кеменова. Влияние Теопэка на функциональное состояние коры надпочечников.-Тез.докл. II Всесоюзн. конгресса по болезням органов дыхания, 1991, с.253, Челябинск.

38. Р.И.Мустафин, К.В.Алексеев, В.А.Кеменова. Интерполимерные комплексы - новый класс носителей лекарственных веществ. - В кн. "Реализация научных достижений в тактической медицине", тез.докл. респ. науч.конф., 1991, с. 100, Харьков.

39. В.В.Родин, А.В.Харенко, В.А.Кеменова, Д.А.Джанумов. Исследование интерполимерных комплексов методом ЯМР-спектроскопии. - Тез.докл. 4-ой Всес. конф. "Водорастворимые полимеры и их применение", 1991, с. 144, Иркутск.

40. В.А.Кеменова, Р.И.Мустафин, К.В.Алексеев, А.М.йсородинская.Интерполимерные комплексы на основе редкосшитой полиакриловой кисло. ты. - тез.докл. 4-ой Всес. конф. "Водорастворимые полимеры и их

применение", 1991, с. 128, Иркутск.

41. А.В.Харенко, И.В.ХлеОопашева, В.А.Кеменова. Свойства водорастворимых интерполимерных комплексов как носителей лекарственных веществ. - Тез.докл. 4-ой Всес. конф. "Водорастворим.полимеры и их применение", 1991, с. 155, Иркутск.

42. К.В.Алексеев, Р.И.Мустафин, В.А.Кеменова, И.И.Арбузова, Е.В.Шату-рова. Изучение транспортных свойств интерполимерных комплексов на основе редкосшитой полиакриловой кислоты. - Тез.докл. IX Всесоюзного симпозиума "Синтетические полимеры медицинского назначения", 1991, Звенигород.

43. А.В.Харенко, И.В.ХлеОопашева, В.А.Кеменова. Физико-химическая модель кинетического процесса высвобождения теофиллина из полимерных композиций на основе интерполимерных комплексов. - Сб. трудов НПО "Биотехнология", 1991, с. 28, Москва.

44. А.В.Харенко, И.В.ХлеОопашева, В.Е.Иванов, В.А.Кеменова. Основные факторы, контролирующие кинетику высвобождения теофиллина из полимерных композиций на основе интерполимерных комплексов. - Сб. трудов НПО "Биотехнология", 1991, с. 37, Москва.

45. Р.И.Мустафин, К.В.Алексеев, В.А.Кеменова, В.С.Домбровский, М.Н.Маркович. Обоснование технологических параметров получения таблеток ортофена пролонгированного действия. - со. трудов НПО "Биотехнология", 1991, с. 45-52, Москва.

46. А.В.Харенко, И.В.Хлебопашева, В.Е.Иванов, Н.И.Аксенова, Е.В.Вакуленко, В.А.Кеменова. Исследование реакций синтетических поликислот с лекарственными веществами - органическими ионогенны-ми соединениями. - Тезисы научн. конференции "Современные направления развития биотехнологии", 1у91, с.84, Москва.

47. Т.И.Лыс, В.А.Кеменова, К.В.Алексеев. Разработка оптимального состава лекарственной формы ферропэка. - Тезисы научн. конференции •Современные направления развития биотехнологии", 1991, с. 64, Москва.

48. Н.И.Аксенова, В.А.Кеменова, А.В.Харенко. Исследование конкурентных взаимодействий в системах "интерполимерный комплекс - низкомолекулярное органическое соединение".-Тез.докл. научн. конференции "Современные направления развития биотехнологии", 1991, с. 43, Москва.

49. В.В.Родин, А.В.Харенко, В.А.Кеменова, Д.А.Джанумов. Полимерные носители препаратов пролонгированного действия по данным методов радиоспектроскопии.- Тезисы научн. конференции "Современные направления развития биотехнологии", 1991, с. 76, Москва.'

50. Т.И.Лыс, В.А.Кеменова, К.В.Алексеев, Л.Л.Еременко, К.В.Седов. Противоанемические железосодержащие лекарственные препараты. -Химикофармацевтическое производство, 1991, Вып.7, с. Г-29, М.

51. А.В.Харенко, И.В.Хлебопашева, В.Е.Иванов, В.А.Кеменова. основные факторы, контролирующие кинетику высвобождения теофиллина из полимерных, композиций на основе ингерполимерных комплексов.-Тезисы научн. конференции "Современные направления развития биотехнологии", 1991, с.85, Москва.

52. А.Г.Чучалин, В.А.Кеменова, К.В.Алексеев, А.П.Чепурная, А.В.Харенко, Л.М.Меликянц, Е.Н.Калманова, Б.И.Шмушкович, В.А.Кабанов. Гео-пэк - новый противоастматический препарат пролонгированного действия. Экспресс-информация "Новые лекарственные препараты", 1991, вып.7-9, с.1-й.

53. В.А.Кеменова, А.Г.Чучалин, В.А.Кабанов. Новые формы лекарственных препаратов на основе интерполимерных комплексов.- I Российский flan.Конгресс "Человек и лекарство'1, Тезисы, 1992, с. 224, Москва.

64. А.в.Харенко, В.А.Кеменова. Кинетика высвобождения лекарственных веществ из композиций на основе интерполимерных комплексов.- I Российский Нац.Конгресс "Человек и лекарство1', Тезисы, 1992, с. 23y, Москва.

55. Е.Н.Калманова, В.А.Кеменова, О.В.Засеева. Дифференцированная терапия пролонгированными препаратами теофиллина больных бронхиальной астмой.- 1 Российский Нац.Конгресс "Человек и лекарство", Тезисы, 1992, с. 457, Москва.

ьь. в.а.Кеменова,К.В.Алексеев,А.В.Харенко, А.П.Чепурная, А.Г.Чучалин. Перспективные лекарственные формы на основе теофиллина. - I Рос. Нац.Конгресс "Человек и лекарство", Тезисы, 1992, с. 45а, Москва.

dï. А.И.Курапов, В.А.Кеменова, В.Спесивцев, А.Н.Цой. Сравнительное исследование фармакокинетики теопэка и неотеопэка.- Г Российский Нац.Конгресс "Человек л лекарство", Тезисы, 1992, с. 460, Москва.

58. А.в.Харенко, И.В.Хлесюпашева, Н.М.Аксенова, С.В.Громов, е.в.Вакуленко, в.А.Кеменова. Исследование реакций синтетических поликислот с лекарственными веществами - органическими ионогенными соединениями.- Российская научная конфер. "Создание лекарственных средств", 19У2, с. 256, Купавна.

59. Н.И.Аксенова, В.А.Кеменова, А.В.Харенко. Конкурентные реакции в системах интерполимерный комплекс - аминазин.- Российская научная конфер. "Создание лекарственных средств", 1992, с. 209, Купавна.

ьО. В. А. Кеме нова, К. В. Алексее в, А. В. Харе нко, А. II. Чепурная, А. Г. Чучалин. Но вые лекарственные формы пролонгир. действия на основе теофиллина. Рос.научная конфер."Создание лекарственных средств", 1992, с.222.

о1. А.В.Харенко, В.А.Кеменова. Лекарственные формы пролонгированного действия на основе интерполимерных комплексов: математическая и физико-химическая модели высвобождения действующего начала. -Российская научная конфер. "Создание лекарственных средств", 19У2, с. 255, Купавна.

ь2. V.V.Rodln, A.V.Kharenko, V.A.Kemenova. Interpolymer complexes as carriers for drugs: ЮГО data. - In:"XY ICMR", Jerusalem, Israël, 1992, Book Abstract, N 048.