Исследование комплементарно-адресованного алкилирования в комплексах синтетических олигонуклеотидов и их производных тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

Принятые сокращения

Введение.

Глава первая. Реакции в комплементарных комплексах

Обзор литературы) .••••••••••••••••••••«•.••••«.•

1.1. Образование мекнуклеотидной связи между олигонуклеотидами химическими методами на комплементарный матрицах

1.1.1. Реакции с непосредственной активацией олигонуклеотидов в комплементарном комплексе

1.1.2. Реакции конденсации предварительно активированных моно- и олигонуклеотидов

1.2. Некоторые другие реакции, протекающие в комплементарных комплексах «••••••,•••.*«••.••• £

1.3. Комплементарно-адресованное алкилирование нуклеиновых кислот.

Глава вторая. Материалы и методы исследования

2.1. Исходные материалы.

2.2. Общие методы исследования

Глава третья. Комплементарно-адресованное алкилирование в комплексах олигонуклеотид-олигонуклеотид

Глава четвертая. Кинетические характеристики алкили-рования производными олигонуклеотидов в прочных комплементарных комплексах

Глава пятая. Некоторые исследования протекания реакций алкилирования бензилиденовыми производными неионных аналогов олигонуклеотидов в комплементарных комплексах.

Выводы Литература

Список принятых сокращений

Для обозначения нуклеиновых кислот, олигонуклеотидов, нук-леотидов, оснований и их производных в диссертации приняты сокращения, рекомендуемые комиссией по номенклатуре 1иРАС-эив , а также следующие сокращения: НК - нуклеиновая кислота

ЦМЭ-карбодиимид- ъ-толуолсульфонат-Ы -циклогексил-N '-р -(4-метилморфолиний)этил-карбодиимид (Np)nN>CHRC£ - 2^3-0--2-хлорэтил-N -метиламино) бензилиден] олигонуклеотиды

N7-0CHRGua -7-[р -(N -метил-N -4-формилфениламино)этил]гуанин Ns-0CHRAde -N6-[j* -(N -метил-N -4-формилфениламино)этил] аденин N3- OCHRAde -3- [ f> -(N -метил- N -4-формилфениламино) этил") аденин N7- OCHRAde - N5-формил- N - [£ -(N -4-формилфенил- N -метиламино)этил]

4,5,б-триаминопиримидин N3- OCHRCyt -3-[> -(N -метил-N -4-формилфениламино)этил] цитозин OCHROH -4(N -2-OKCH3Tmi-N -метиламино)-бензальдегид Jmp^pN)^ -5-имидазолиды моно-(п. =0) и олигонуклеотидов (п*1) (Np)nNpJm -3-имидазолиды олигонуклеотидов ОЕ - оптические единицы Трис - трис(оксиэтил)аминометан

Для химического воздействия на одноцепочечные нуклеиновые кислоты в определенных точках Н.И.Гриневой с сотрудниками был предложен и разработан метод комплементарно-адресованной модификации, основанный на внутрикомплексной реакции полинуклеотида и реакционноспособного производного адресующего олигонуклеотида, комплементарного определенному участку модифицируемого полинуклеотида [I]. Метод был широко исследован на примере комплементар' но-адресованного алкилирования нуклеиновых кислот. Для этой цели были получены специальные "адресующие" реагенты - производные олиго- и полинуклеотидов, несущие алкилирующую группу либо на 3'-, либо на 5-конце олигонуклеотидного фрагмента: 2',3-0-[4-(N--2-хлорзтил-N-метиламино)бензилиден]олиго- и полинуклеотиды [2-4] и 4-(N -2-хлорэтил-N -метиламино)бензил-5-фосфамиды олиго-нуклеотидов [5,6].

Процесс алкилирования в комплементарных комплексах реагентами такого типа был исследован на примере модификации высокополимерных РНК и ДНК производными гомоолигорибонуклеотидов или стати' стических смесей изоплит рибоолигонуклеотидов [7-10], а также дрожжевой TPHK-J- производным pd(CG)rA [IItI2].

С помощью данного метода была осуществлена комплементарно-адресованная фрагментация одноцепочечных и денатурированных ДНК [13]. Модифицированный вариант метода комплементарно-адресованного алкилирования был применен Салгаником и др. [14] для проведения направленного мутагенеза определенных генов фага Т7 in vitro.

В последние годы метод нашел применение для осуществления комплементарно-адресованной модификации нуклеиновых кислот в клетке [15-17]. Для этого было предложено использовать бензили-деновые производные неионных аналогов олигонуклеотидов - олигонуклеотидов, этерифицированных по межнуклеотидным фосфатам [15], поскольку было известно, что замена межнуклеотидных фосфодиэфир-ных групп на триэфирные не приводит к потере способности олиго-нуклеотидов к комплементарным взаимодействиям [18,19]. В то же время такие производные становятся достаточно гидрофобными для прохождения через клеточную мембрану и приобретают устойчивость к нуклеазам [20].

Одним из основных вопросов, стоящих при разработке метода, было выяснение локализации точек, по которым происходит алкили-рование в комплементарном комплексе реагент-нуклеиновая кислота. Это могло быть сделано только на объекте с известной первичной структурой. Однако в силу того, что до последнего времени синтетические олигонуклеотиды были малодоступны, первое исследование этого вопроса было проведено на достаточно сложном объекте, дрожжевой валиновой тРНК, обладающей, к тому же, уникальной третичной структурой. Было установлено, что алкилирование дрожжевой валиновой tPHKj 2^343-[4-(N -2-хлорэтил-N-метиламино)] -бензилиденовым производным pd(CG)rA протекает по четвертому в сторону 5-^конца нуклеотиду, считая от (CG) -фрагмента тРНК [п]. В силу специфичной третичной структуры тРНК, малого размера олигонуклеотидной части реагента и, тем самым, малой прочности комплекса, представлялось необходимым исследовать вопрос о локализации точек модификации на более простой модели с прочным комплексообразованием, лишенной специфической пространственной структуры. С этой целью в настоящей работе было проведено исследование внутрикомплексно-го алкилирования синтетических додекадезоксирибонуклеотидов общей структуры pd(xxccTGTTTGCC) (гдеX = G (1),х =а(П),х = с(Ш), X = Т (Д|) 2,ЗЧЗ-[ 4-( N -2-хлорэтил-№ -метиламино)] -бензилидено-вым производным нонануклеотида d(TGCCAAAC)rA.

Для выяснения некоторых закономерностей алкилирования нуклеиновых кислот бензилиденовыми производными неионных аналогов оли-гонуклеотидов было исследовано алкилирование полиадениловой кислоты 2^3—0—[СN-2-хпорэтил-N-метиламино)] -бензилиденовым производный нонатимидилилуридина, этилированного по мекнуклеотидным фосфатам - [Tp(6t)]grU.

Впервые на модельных дезоксирибоолигонуклеотидах с известной первичной структурой - pd(xxcCTGTTTGGC) показано, что внутри-комплексное алкилирование происходит по фрагменту рхрх независимо от природы модифицируемого основания, а на примере алкилирования олигонуклеотида I показано, что алкилированию подвергается остаток гуанина G-2 . Обнаружено, что реакции алкилирования данных олигонуклеотидов в прочном комплементарном комплексе протекают со скоростью, на Ь порядка превосходящей скорость образования этилениммоний катиона, через который, как правило, протекают реакции алкилирования ароматическими 2-хлорзтиламинами.

Найдено, что при алкилировании поли(А) реагентами, полученными из разных фракций диастереоизомеров нонатимидилилуридина, этилированного по межнуклеотидным фосфатам, степень модификации и направленность алкилирования зависят от набора диастереоизомеров данных реагентов.

ВЫВОДЫ

I. Изучено комплементарно-адресованное алкилирование в комплексах общей структуры pd(X-X-C-C-T-G-T-T-T-G-G-C) (X-G(l), X=A(h),X=COh),X=T(Iv)) CeRCH<rAd(C-A-A-A-C-C-G-T) (XVI) где CtRCH<- 2,3-0-(4-N-2-хлорэтил-N-метиламино бензилиден)-) Показано, что: а) в случае олигонуклеотида I происходит внутрикомплексное алкилирование, причем модификации подвергается остаток гуанина, вто/ рой от 5-конца олигонуклеотида I, т.е. являющийся третьим нуклеоти дом по направлению к 5-концу олигонуклеотида I, считая от участка связывания адреса; б) при алкилировании олигонуклеотида П реагентом ХУ1 продуктами модификации являлась смесь алкиладенинов; в) при алкилировании олигонуклеотида III единственным продуктом модификации являлсяМЗ-алкилцитозин; г) при алкилировании олигонуклеотида 1У были обнаружены продукты, идентичные продуктам, образующимся при алкилировании (Тр)^Т с помощью альдегида ["^С]- OCHRCe.

Таким образом, алкилирование происходит по фрагменту Х-Х независимо от природы оснований;

2. Изучена кинетика внутрикомплексного алкилирования олигонуклеотидов 1-1У реагентом ХУ1. Показано, что во всех случаях реакция алкилирования протекает быстро, а.константы скорости при 0°.составляют (9,9+0,1)' 10" 3 с"1 для I, (6,2±I,7)-I0~3 с"1 для П, (7,5±0,2). Ю"3 с"1 для Ш и (2,7±0,2)-Ю~5 с"1 для 1У. Полученные константы на 4- порядка превосходят константу скорости ионизации С-СЕ -связи в бензилиденовых производных олигонуклеотидов. При алкилировании. / / поли(А) 2,3-0-(4-N-2-хлорэтил-N-метиламино) бензилиденовым производным (Tp)grU реакция заканчивается уже за 2 минуты при 0°С. Таким образом, при образовании прочных комплементарных комплексов наблюдается быстрое внутрикомплексное алкилирование с изменением механизма алкилирования. /

3. Исследовано алкилирование поли(А) 2,3-0~(4-М-2-хлорэтил-М -метиламино) бензилиденовым производным нонатимидилиуридина, этилированного по межнуклеотидным фосфатам (ХУШ). Показано, что: а) реакция внутрикомплексного алкилирования в данном случае прос т исходит с константой скорости, равной (3,5±0,5)-10 с и близка константе скорости ионизации хлора в бензилиденовых производных олигонуклеотидов, что означает протекание реакции по двустадийному механизму; б) при использовании реагентов, синтезированных из фракций диастереоизомеров олигонуклеотида Х1У, полученных ступенчатой элюцией его с поли(А)-сефарозы при 10°, 20° и 30°С, наблюдаемая степенъ~мо-дификации поли(А) возрастает с увеличением прочности комплексов; с увеличением прочности комплексов растет доля реакции по Nl-положению аденина.

1.Belikova A.M., Zarytova V.P., Grineva N.1. Synthesis of ribo-nucleosides and dirihonucleoside phosphates containing 2-chlo-roethylamine and nitrogen mustard residues. - Tetrahedron Lett,,1967, N°37,. p.3557-3562.

2. Гринева Н.И., Зарытова В.Ф., Кнорре Д.Г. Алкилирующие производные компонентов нуклеиновых кислот. П. Синтез уридилил- (З'-Й2,3-0-4-(N-2-хлорэтил- N-метиламино)-бензилиден-уридина. Изв. Сиб.Отд. АН СССР, 1968, №12, сер.хим.н., вып.5, с.118-124.

3. Гринева Н.И., Карпова Г.Г. 2,3-0-р-(хлорэтилметиламино)бензили-ден.тРНК адресующий реагент с алкилирующей группировкой на акцепторном конце тРНК. - Изв. АН СССР, 1972, №5, сер.хим. ,, с.1219 -1220.

4. Гринева Н.И., Ломакина Т.С. Алкилирующие производные компонентов нуклеиновых кислот. Х1У. Синтез 5-^фосфамидов олигонуклеотидов, производных 4- (N-2-хлорэтил-N -метиламино )бензиламина. Ж. общ. химии, 1972, т.ХШС1У), с. 1630-1634.

5. Гимаутдинова О.И., Гринева Н.И., Карпова Г.Г., Ломакина Т.С., Шелпакова Е.Л. Получение 4-( N -2-хлорэтил-N -метиламино)бензил-5-фосфамидов рибоолигоаденилатов и их взаимодействие с рРНК и ДНКcofci. Биоорган.Ьшия, 1978, т.4, №7, с.917-927.

6. Гринева Н.И., Карпова Г.Г. Комплементарно-адресованное алкилирование рибосомальной РНК 2',3-0-4-(хлорэтилметиламино)бензилиден. гексааденилатом. Изв. АН СССР, 1972, №10, сер.хим., с.2377-2378.- 97 -.

7. Гринева Н.И., Карпова Г.Г., Мызина С.Д., Чемасова А.Н. Комплементарно -адресованное алкилирование ДНК производным гексааде-нилата. Биоорган.химия, 1975, т.1, №12, с.1707-1714.

8. Гимаутдинова О.И., Карпова Г.Г., Ломакина Т.О., Шелпакова Е.Л. Чемасова А.Н., Гринева Н.И. Алкилирование ДОК в комплементарных комплексах с 4-(N -2-хлорэтил-N -метиламино)-бензил-5-фосфами-дами олигонуклеотидов. Биоорган.химия, 1980, т.6, №1, с.70-80.

9. Гринева Н.И. Комплементарно-адресованная фрагментация ДНК и аспекты ее применения в генетической инженерии. Вестн. АМН СССР, 1981, №2, с.83-94.

10. Зарытова В.Ф., Карпова Г.Г., Кнорре Д.Г., Попова B.C., Стефанович Л.Е., Шешесова Е.А. Алкилирующие производные этиловых эфиров олигонуклеотидов проникающие в клетки комплементарно-адресованные реагенты. - Докл. АН СССР, 1980, т.225, №1, с. II0-II3.

11. Karpova G.G., Knorre D.G., Ryte A.S., Stephanovich L.E. Selective alkylation of poly(A) tracts of RNA inside the cell with derivative of ethyl ester of oligothymidilate bearing 2-chlo-roethylamino group. FEBS Lett., 1980, v.122, N°1, p.21-24.

12. Miller P.S., Barrett J.G., Tso P.O.P. Synthesis of oligodeoxy-ribonucleotide ethyl phosphotriesters and their specific complex formation with transfer ribonucleic acids. Biochemistry, 1974, v.13, U°24, p.4887-4896.

13. Miller P.S., Braitermann L.T., Tsfo P.O.P. Effect of a trinucleotide ethyl phosphotriester, Gmp(Et)Gmp(Et)U on mammalian cells in culture. Biochemistry, 1977, v.,16, №9, p.1988-1966.

14. Haylor R., Gilham P.T. Studies of some interaction and oligonucleotides in aqueous solution. Biochemistry, 1966, v.5, 1T°8, p.2722-2728.

15. Sulston J., Lohrmann R., Orgel L.E,, Miles'T. Honenzymatic synthesis of oligoadenylates on a polyuridilic acid template. Proc.Nat.Acad.Sci. USA, 1968, v.59, №3, p.726-733.

16. Бадашкеева А.Г. , Кабашева Г.Н., Кнорре Д.Г., Шамовский Г.Г., Шубина Т.Н. Конденсация тридезоксиаденилата с помощью водорастворимого карбодиимида в присутствии полиуридиловой кислоты. Докл. АН СССР, 1972, т.206, №4, с.870-873.

17. Кнорре Д.Г., Меламед Н.В., Попов С.Г., Шамовский Г.Г., Шубина Т.Н. О нерегулярной взаимной ориентации олигомеров в трехтя-жевом комплексе тридезоксиаденилата с полиуридиловой кислотой. Докл. АН СССР, 1974, т.218, №1, с.ИЗ-Пб.

18. Беккер Ж.М., Молин Ю.Н., Гиршович А.С., Грачев М.А., Кнорре Д.Г. Изучение межмолекулярного взаимодействия N -циклогексил, N'-ji-(4-метилморфолиний) этилкарбодиимида с тРНК методом ЯМР. Молекул.биол., 1969, т.З, вып.З, с.366-374.

19. Бадашкеева А.Г., Горбунов Н.П., Шамовский Г.Г., Шубина Т.Н. Конденсация дидезоксигуанилата с помощью водорастворимого карбодиимида в присутствии полирибоцитидиловой кислоты. -Изв.Сиб.Отд. АН СССР, 1974, №2, сер.хим.н., вып.1, с.96-102.

20. Попов С.Г., Шамовский Г.Г. Комплексообразование диолигодезок-сиаденилил-5^ 5-пирофосфатов с полирибоуридиловой кислотой. -Молекул.биол., 1976, т.10, вып.З, с.576-583.

21. Попов С.Г., Шамовский Г.Г. Индуцируемая водорастворимым карбодиимидом конденсация гексатимидилата в двуспиральном комплексе с полирибоадениловой кислотой. Изв.Сиб.Отд. АН СССР, 1976, №7, сер.хим.н., вып.З, с.14-19.

22. Долинная Н.Г., Шабарова З.А. Матричная химическая конденсация гетерогенных олигонуклеотидов. Биоорган.химия, 1980, т. 6,№2, с.209-216.

23. Shabarova Z.A., Dolinnaya 2T.G. , Turkin S.I., Gromova E.S. DlIA-like duplexes with repetitions*.!.Properties of concate-mer duplexes fdrraed by d(T-G-C-A-C-A-T-G). Nucl.Acids Res., 1980, v.8, N°11, p.2413-2429.

24. Shabarova Z.A., Dolinnaya H.G., Drutsa V.L., Melnikova N.P. , Purmal A.A. DFA-like duplexes with repetitions.III. Efficient template-guided chemical polymerization of d(TGGCCAAGCTp). -Nucl.Acids Res., 1981, v.9, N°21, p.5747-5761. .

25. Kyogoku Y., Lord R.C., Rich A. An infrared stttdy of hydrogen bonding between adenine and uracil derivatives in chloroform solution. J.Amer.Chem.Soc., 1967, v.89, N°3,P»496-504.

26. Lohrmann R., Orgel L.E. Template-directed synthesis of high molecular weight polynucleotide analogues. Nature, 1976, v.261, Ж°5556, p.342-344.

27. Lohrmann R., Orgel L.E. Template-directed reactions of aminonucleosides. J.Mol.Evol., 1977, v.9, N°4, p.323-328.t

28. Mnio J., Orgel L.E. Heteropolynucleotides as templates for non-enzymatic polymerizations. J.Mol.Evol., 1978, v.12, Я°2, p.91-99.

29. Lohrmann R., Orgel L.E. Self-condensation of activated dinuc-leotides on polynucleotide templates with alternating sequences. J.Mol.Evol., 1979, v.14, N°4, p.243-250.

30. Lohrmann R., Orgel L.E. Studies of oligoadenylate formation on a poly(U) template. J.Mol.Evol., 1979, v.12, U°3, p.237-257. .

31. Ивановскеш М.Г., Готтих М.Б.,. Шабарова. З.А. ДНК-подобные дуплексы, содержащие, повторы. 1У. Матрично-направленная полимеризация имидазолида декадезоксирибонуклеотида. Биоорган, химия, 1982, т.8, №7, с.940-944.

32. Zn ion. J.Amer.Chem.Soc., 1975, v.97, N 12, p.3532-3533.57»Sawai H. Catalysis of internucleotide bond ftirmation by divalent metal ions. J.Amer.Chem.Soc., 1976, v.98, N°22, p. 7037-7039.

33. Sleeper H.L., Orgel L.E. The catalysis of nucleotide polymerization by compounds of divalent lead. J.Mol.Evol., 1979, v. 12, №4, p.357-364.

34. Sleeper H.L., Lohrmann R., Orgel L.E. Template-directed syn2+thesis of oligoadenylates catalyzed by Pb ions. J.Mol. Evol., 1979, v.13, U°3, p.203-214.

35. Lohrmann R., Bridson P.K., Orgel L.E. Efficient metal-ion catalyzed template-directed oligonucleotide synthesis. Science, 1980, v.208, N°4451, p.1464-1465.

36. Lohrmann R., Orgel L.E. Efficient catalysis of polyc£tidylic2+acid-directed oligoguanylate formation by Pb . J.Mol.Biol., 1980, v.142, U°4, p.555-567.

37. Bridson P.K., Orgel L.E. Catalysis of accurate poly(C)-direct 1 2+ted synthesis of 3 -5 -linked oligoguanylates by Zn . J.

38. Sawai H. Template-directed synthesis of oligoadenylate. Temp- 104 late effect of oligouridylates and catalytic activity of Pb^+ ion. Nucl.Acids Res., 1980, Symp.Ser., U°8, p.577-579.

39. Sawai H. Oligoadenylates formation on an oligouridylate template in the presence of a lead catalyst. J.Mol.Evol., 1981, v.17, p.48-51.

40. Davidson D.K. Replication and the biosynthesis of DHA. In: The biochemistry of nucleic acids, New York: Acad.Press, 1972, p.233-290.70# Амбарцумян H.C., Киселев Л.Л. Энзимология обратной транскрипции. Молекул.биол., 1980, т.14, вып.5, с.965-985.

41. Lohrmann R., Orgel L.E., Preferential formation of (2-5 )-linked internucleotide bonds in non-enzymatic reactions. -Tetrahedron, 1978, v.34, N°7, p.853-855.

42. Inoue Т., Orgel L.E. Substituent control of the poly(C)-di-rected oligomerization of guanosine-5*-phosphorimidazolide. J.Amer.Chem.Soc., 1981, v.103, H°25, p.7666-7667.

43. Inoue Т., Orgel L.E. Oligomerization of (guanosine-5*-phosphor) -2-methylimidazolide on poly(C>. J.Mol.Biol., 1982, v.162, U°1, p.201-217.

44. Uesugi S., Ikehara M. Synthesis and template-directed polymerization of adenylyl(3*-5*)adenosine cyclic 2~-3'-phosphate. Biochemistry, 1977, v.16, №3, p.493-498.

45. Renz M., Lohrmann R., Orgel L.E. Catalyst for the polymerization of adenosine cyclic 2*3*-phosphate on a poly(U-)template. Biochem. et Biophys.Acta, 1971, v.240, N°4, p.463-471.

46. Shabarova Z.A., Prokofiev M.A. A model of enzymatic synthesis of the internucleotide bond between oligodeoxynucleotides. FEBS Lett., 1970, v.11, N°4, p.237-240,

47. Недбай В.К., Соколова Н.И., Шабарова З.А., Прокофьев М.А. Химический матричный синтез олигонуклеотидов в водных раствора*. Докл. АН ССС$Г^205, №5, с.1114-1116.

48. Гатинская Л.Г., Соколова Н.И., Шабарова 3.А.^Прокофьев М.А. Конденсация амидов олигодезоксиаденилатов в присутствии по-полиуридиловой кислоты. Изв. АН СССР, 1974, №1, сер.хим., с.221-223.

49. Chung U.M., Lohrmann R., Orgel L.E. Template catalysis of acetyl transfer reactions. Biochem. et Biophys.Acta, 1971, v.228, H°2, p.536-543.

50. Fresco J.R., Massoulie J. Polynucleotides. V. Helix-coil transition of polyriboguanylic acid. J.Amer.ChemsSoc., 1963, v.85, H°9, p.1352-1353.

51. V/alder J.A., Walder R.Y., Heller M.J., Preier S.M. , Letsinger RiL., Klotz I.M. Complementary carrier peptide synthesis: general strategy and implications for prebiotic origin of peptide synthesis. Proc.Hat.Acad.Sci. USA., 1979, v.76, N°1, p.51-55.

52. Chang S.K., Copsey D.B., Scott A.I. Template-directed organic synthesis. A model for the peptidil transfer reaction of. protein biosynthesis. Bioorg.Chem., 1978, v.7, N°2, p. 303-312. .

53. Weber A.L., Orgel L.E. Poly(U)-directed peptide-bond formation from the 21(3')-glycyl esters of adenosine derivatives. J.Mol.Evol., 1980 V.16, N°1, p.1-10.

54. Weber A.L., Orgel L.E. The formation of peptides from the1 / 1 ч

55. C3 ) glycyl ester of a nucleotide. J.Mol.Evol., 1979, v. 13, И°3, p.185-192»

56. Weber A.L., Orgel L.E. The efftict of poly(C) on the formati- 107 on of peptide bonds from 2'(3')-glycyl ester of a guanosi-ne nucleoside. J.Mql.Evol., 1981, v.17, K°3, p.190-191.

57. Гринева Н.И. Химическое алкилирование в специфичных комплексах как метод исследования структуры и функции нуклеиновых кислот и нуклеопротеидов. Биохимия, 1977, т.42, вып.2, с. 370-374.

58. Кнорре Д.Г. Афинная модификация белков, нуклеиновых кислот и их комплексов. Молекул.биол., 1977, т.II, вып.б, с. I304-I3I0.

59. Власов В.В., Грачев М.А., Лаврик О.И. и др. Афинная модификация биополимеров. Новосибирск: Наука, 1983, с.187-212.

60. Гринева Н.И., Сайкович Е.Г. Метоксисульфонилфенилэтиловые эфиры олигонуклеотидов новые реагенты для метилирования нуклеиновых кислот в комплементарном комплексе. - Биоорган, химия, 1979, т.5, №4, с.563-567.

61. Барам Г.И., Будкер В.Г., Гринева Н.И., Кнорре Д.Г., Козоро-вицкий А.Я., Шамовский Г.Г. Комплементарные взаимодействия бвнзилиденовых производных олигоаденилатов. Докл. АН СССР, 1971, т.201, №1, с.95-98.

62. Гринева Н.И., Карпова Г.Г., Шамовский Г.Г. Комплементация пентааденилиладенозина и алкилирующих производных олигоаде-нилиладенозинов с рибосомальной РНК, Молекул.биол., 1974, т.8, вып.З, с.358-371.

63. Карпова Г.Г., Шелпакова Е.Д., Гринева Н.И. Исследование ком-плексообразования 4-(N -2-хлорэтил-N-метиламино)-бензил 5-фосфамидов олигоаденилатов с ДНК методом равновесного диализа. Молекул.биол., 1979, $.13, вып.4, с.955-959.

64. Беликова A.M., Вахрушева Т.Е., Власов В.В., Гринева Н.И., Кнорре Д.Г., Курбатов В.А. Взаимодействие 4-(N -2-хлорэтил-N -метиламино)бензальдегида с транспортной РНК. Молекул.биол., 1969, т.вып.2, с.210-219. .

65. Власов В.В., Гринева Н.И., Кнорре Д.Г. Алкилируняцие производные компонент нуклеиновых кислот. У1. Ионизация 4-(N -2-хлорэтил- N-метиламино)-бензальдегида и его ацеталей. -Изв.Сиб.Отд. АН СССР, 1969, #2, сер.хим.н., вып.1, с.104-109.

66. Власов В.В., Гринева Н.И., Зарытова В.Ф., Кнорре Д.Г. Эффективность ацеталей 4-(N -хлорэтил-N-метиламино)-бензальде-гида, производных олигонуклеотидов, при алкилирования транспортной РНК. Молекул.биол., 1970, т.4, вып.2, с.201-204.

67. Ю2.Веньяминова А.Г., Гринева Н.И. Алкилирующие цроизводные компонентов нуклеиновых кислот. X. Синтез и превращения 2-хлорэтиламинобензилиденовых производных 5-нуклеотидов. -Изв.Сиб.Отд. АН СССР, 1971, №9, сер.хим.н., вып.4, с.III-118.

68. Гринева Н.И., Ломакина Т.С., Тигеева Н.Г., Чимитова Т.А. Кинетика ионизации C-CI-связи в 4-(N-2-хлорэтил-N-метил-амино)бензил-5-фосфамидах нуклеозидов и олигонуклеотидов. -Биоорган.химия, 1977, т.З, №2,с.210-214.

69. Юб.Карпова Г.Г., Пичко Н.П., Чимитова Т.А., Гринева Н.И. Комплементарно адресованное алкилирование рибосомных РНК .scherjcfua coll в.комплексах особой конформации. Молекул, биол., 1979, т.13, вып.5, с.1012-1020.

70. Юб.Гринева Н.И., Карпова Г.Г. Комплементарно.адресованное алки-лирование рибосомной РНК алкилирующими производными олигонуклеотидов. Молекул.биол., 1974, т.8, вып.б, с.832-840.

71. Ю7.Кнорре Д.Г., Чимитова Т.А. Изотермы химической модификации биополимеров для аффинных реагентов, образующих активные промежуточные частицы. Молекул.биол., 1978, т.12, вып.1, с.814-821.

72. Горшкова И.И., Кнорре Д.Г. Начальная скорость аффинной модификации реагентами, образующими активные промежуточные частицы. Биоорган.химия, 1980, т.6, №2, с.230-241.

73. Knorre d.g., Chimitova Т.А. Equation of the kinetic curves of affinity labelling of biopolymers with the reagents consumed in parallel reactions in solution. PEBS Lett., 1981, v.131, N°2, p.249-252.

74. НО.Власов B.B., КнорреД.Г. Реакционная способность некоторых1. Vatостатков гуанозина дрожжевой tPHKj , ее половин и их комплекса. Молекул.биол., 1974, т.8, вып.2, с.234-243.

75. Бенимецкая Л.2., Карпова Г.Г., Гринева Н.И. Алкилированные основания, образующиеся при 5-комплементарно^дресованной модификации ДНК, и кинетика их элиминирования в условиях алкилилирования. Биоорган.химия, 1978, т.4, №10, с.1372-1381.

76. Беликова A.M., Гринева Н.И. Получение, свойства и продукты кислотного гидролиза тРНК, алкилированной 4-( N-2-хлорэтил-N -метиламино)-бензальдегидом. Молекул.биол., 1970, т.4, вып.5, с.697-706.

77. Гринева Е^й., Кнорре Д.Г., Курбатов В.А. О специфичности алкилирования транспортной РНК 4-( N -2-хлорэтил-N -метил-амино)-бензальдегидом. Молекул.биол., 1970, т.4, вып.6, с.814-820.

78. Гринева Н.И., Ломакина Т.С., Мызина С.Д., Ноговицына Г.К. Алкилирование нуклеиновых кислот и их компонентов. Х1У. Алкилирование ДНК хлорэтилариламинами. Изв.Сиб.Отд. АН СССР, 1974, №14, сер.хим.н., вып.6, с.125-134.

79. Беликова A.M., Гринева Н.И. Алкилирование нуклеиновых кислот и их компонентов. УШ. Реакция 2,3-0-4-( N-2-хлорэтил- N-метиламино )бензилиден.уридина и -аденозина с тРНК. Изв.Сиб. Отд. АН СССР, 1971, №12, сер.хим.н., вып.5, с.119-127.

80. Богачев B.C., Гринева Н.И., Ломакина Т.С. Алкилирование нуклеиновых кислот и их компонентов. ХШ. Алкилирование гуанози-на и тРНК 4-( Ы-2-хлорэтил-М г метиламино )бензиламином и 54.(N-2-хлорэтил-N-метиламино)бензил. фосфамидом уридина. - Ill -.

81. Изв.Сиб.Отд.АН СССР, 1973, №9,сер.хим.н., вып.4, с.97-104.

82. Дианов Г.Л., Бондарь Т.С., Салганик Р.И. Исследование комплементарного взаимодействия множественно алкилированных по-лирибонуклеотидов. Молекул.биол., 1979, т.13, вып.2, с. 383-387.

83. Дианов Г.Л., Мазин A.B., Зайцев Б.И., Вавилин В.И., Салганик Р.И. Направленная модификация ранней области ДНК бактериофага Т7 путем алкилирования в R -петле, образованной модифицированным транскриптом. Молекул.биол., 1980, т.14, вып.2, с.216-264.

84. Summerton J., Bartlett P.A. Sequence-specific crosslinking agents for nucleic acids. J.Mol.Biol., 1978, v.122, N°1, p.145-162.

85. Власов В.В., Казаков С.А. Комплементарно адресованная модификация робу (I) цис-гидроксодиамминоплатиновыми производными олигоцитидилатов. Биоорган.химия, 1982, т.8, №4, с. 499-506.

86. Vlassov V.V., Gorn V.V., Ivanova Б.М., Kazakov S.A., Mama-ev S.V. Complementary addressed modification of oligonucleotide d(pGpGpCpGpGpA) with platinum derivative of oligonucleotide dCpTpfpCpGpCpCpTpTpT). FEBS Lett., 1983, v.162, N°2, p.286-289.

87. Caradonna J.P., Lippard S.J., Gait M.J., Singh M. The Antitumor drug cis- ptCNH^gClg. %orms an intrastrand d(GpG) cross-link upon reaction with jd(ApGpGpCpCpT)] g* ~ J.Amer. Chem.Soc., 1982,v.104, H°21, p,5793-5795.

88. Johnson N.P., Macquet J.P., Wiebers I.L., Monsarrat B. Structures of the adducts formed between pt(dien)Cl.oi and DNA in vitro. Uucl.Acids Res., 1982, v.10, U°17, p. 5255-5271.

89. Зарытова В.Ф., Иванова Е.М., Кутявин И.В. Синтез олигодезоксирибонуклеотидовСбССТСПТСбСи T(pT)j^ триэфирным методом с использованием 5-n-хлорфениловых эфиров соответствующих олигонуклеотидных блоков. Биоорган.химия, 1982, т.из 8, №2, с.224-230. .

90. Потапов В.К., Потемкин Г.А., Горн В.В., Зарытова В.Ш., Средин Ю. Г., Шабарова З.А., Кнорре Д.Г. Полуавтоматический твердофазный синтез олигодезоксирибонуклеотидов. Докл. АН СССР, 1982, т.263, №6, с.1386-1389.

91. Беликова A.M., Гринева Н.И. Алкилирующие производные rv -ами-нобензилиденуридина. Изв.Сиб.Отд. АН СССР, 1966, Ml, сер. хим.н., вып.З, с.79-83.

92. Гринева Н.И., Зарытова В.Ф., Кнорре Д.Г. Алкилирующие производные компонент нуклеиновых кислот. УП. Метиловый эфир 2,3-0-4-(N -2 -хлорэтил- N -метиламино) бензилиден. уридин-5-фосфата. Ж.общ.химии, 1970, т.ХКСП), вып.1, с.215-222.

93. Wagner A.F., Bugianesi R.L., Shen T.Y. Preparation of sepha-rose-bound poly(rI:rC). Biochem. and Biophys.Res.Commun.,1971, v.45, N°1, p.184-189.

94. Ш.Древич В.Ф., Кнорре Д.Г., Малыгин Э.Г., Салганик Р.И. Выделение денатурированных участков ДНК при помощи модификации водорастворимым карбодиимидом и последующего ферментативного гидролиза. Молекул.биол., 1967, т.1, вып.2, с.249.256.

95. Jensen D.E., Reed D. J.,Reaction of D1TA with, alkylation agents. Quantitation of alkylation by ethylnitrosourea of oxygen and nitrogen sites on poly dA-dT including phospho-triester formation. Biochemistry, 1978, v.17, N°24,p.5098,

96. Drevitch V.P., Salganik R.I., Knorre D.G., Malygin E.G. The reaction of ША with water-soluble carbodiimide and enzyme sensitiyyty of modified MA. Biochim. et Biophys. Acta, 1966, v.123, N°1, p.207-209.

97. August i-Toe с о G., Brown G.L. Reaction of lT-cyclohexyl,U'-^-(4-methylmorpholinium)ethyl carbodiimide iodide with nucleic acids and polynucleotides. Hature, 1965, v.206, 1T°4985, p.683-685.

98. Бенимецкая Л.З., Герасимова Л.М., Гринева Н.И., Карпова Г. Г. Комплементарно адресованное алкилирование и фрагментация ДНК фага Т7 вблизи олиготимидиловых последовательностей. Молекул.биол., 1978, т.12, вып.5, с.988-1001.

99. Беликова A.M., Гринева Н.И., Зарытова В.Ф., Кабашева Г.Н., Кнорре Д.Г. Конфигурация и некоторые особенности конформа-ции бензилиденовых производных нуклеозидов и нуклеотидов. -Докл. АН СССР, 1970, т.195, №6, с.1337-1340.

100. Гринева Н.И., Зарытова В.Ф., Кабашева Г.Н., Кнорре Д.Г., Козоровицкий А.Я, 0 конформации 2,3-0-бензилиденовых производных олигонуклеотидов. Докл. АН СССР., 1971, т.198, №3, с.582-584.

101. Parmer Р.В., Poster А.В., Jarman М., Tisdale M.J. The altkylation of 2 -deoxyguanosine and of thymidine with diazo-alkanes. Biochem.J., 1973, v.135, H°1, p.203-213.

102. Price C.G., Gaucher G.M., Koneru P.,Shibakowa R., Sowa J. R., Yamaguehi M. Relative reactivities for monofunctional nitrogen mustard alkylation of nucleic acid components. -Biochim. et Biophys.Acta, 1968, v.166, Ж°2, p.327-359.

103. Bannon P., Verly W.,Alkylation of phosphates and stability of phosphate triesters in DHA. Eur.J.Biochem., 1972, v. 31, N°1, p.103-111.

104. Kusmierek J.Т., Singer B. Reaction of diazoalkanes with2 3 41.substitution of 0 , H , and 0 -alkyl products. Nucl. Acids Res., 1976, v.3, N°4, p.989-1000.

105. Phaese H.-J., Preese E. Chemical analysis of ША alterac-tions. IV. Reactions of oligodeoxynucleotides wi*fch monofunctional alkylating agents leading to backbone breakage.

106. Biochim. et Biophys.Acta, 1969, v.190, U°2, p.418-433.

107. Crathorn A.R., Shooter K,V. The alkaline hydrolysis ofphosphotriesters in alkylated mammalian DHA. Biochim. et Biophys.Acta, 1982, v.697, N°2, p.259-261.

108. Гринева Н.И., Кнорре Д.Г., Курбатов В.А. Алкилирование ти- 116 мидилата ароматическими 2-хлорэтиламинами. Изв.Сиб.Отд. АН СССР, 1971, М, сер.хим.н., вып.2, с.107-111.

109. Brosius J, Dull T.J., Sleeter D.D, Holler H.P. Gene organization and primary structure of a ribosomal ШТА operon from Escherichia coli. J.Mol.Biol., 1981, v.148, N°2, p.107-127.

110. Miller P.S., Dreon IT., Pulford S.M., McParland K.B. Olygo-thymidylate analogues having stereoregular, alternating me-thylphosphonate/phosphodiester backbones. J.Biol.Chem., 1980, v.255, N°20, p.9659-9665.

111. Беликова A.M., Гринева Г.Г., Карпова Г.Г. Алкилирование нуклеиновых кислот и их компонентов. ХП. Реакционная способность нуклеозидов при алкилировании ароматическими 2-хлорэтилами-налм. Изв.Сиб.Отд. АН СССР, 1972, №9, сер.хим.н., вып.4, C.II0-II6.