Каталитическое детектирование некоторых неорганических анионов и производных тиомочевины после их хроматографического разделения тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ

На правах рукописи

Дикунец Марина Александровна

КАТАЛИТИЧЕСКОЕ ДЕТЕКТИРОВАНИЕ НЕКОТОРЫХ НЕОРГАНИЧЕСКИХ АНИОНОВ И ПРОИЗВОДНЫХ ТИОМОЧЕВИНЫ ПОСЛЕ ИХ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЯ

02.00.02 - Аналитическая химия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Москва - 2004

Работа выполнена на кафедре аналитической химии химического факультета Московского государственного университета имени М В Ломоносова

Научный руководитель •

доктор химических наук, профессор Шпигун Олег Алексеевич Официальные оппоненты:

доктор химических наук Дружинин Андрей Александрович кандидат химических наук Яшин Александр Яковлевич

Ведущая организация •

Кубанский государственный университет

Защита состоится « А» февраля 2005 г в 16 часов 10 минут в ауд 344 на заседании диссертационного Совета Д 501 001 88 по химическим наукам при Московском государственном университете имени МВ Ломоносова по адресу 119992, Москва, Ленинские горы, МГУ, химический факультет

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке химического факультета МГУ имени М.В. Ломоносова

Автореферат разослан « » января 2005 г.

кандидат химических наук

Ученый секретарь диссертационного Совета,

Торочешникова И.И

ъчъъ

теш

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Определение малых количеств серосодержащих органических соединений, являющихся лекарственными препаратами или веществами токсичного действия - одна из проблем современной аналитической химии В последнее время все большее применение находят производные тиомочевины Они имеют важное значение для идентификации органических соединений (например, аминов, изоцианатов, аминокислот), кроме того, способны к комплексообразованию с некоторыми металлами Большинство М-замещенных тиомочевин обладает фармакологическими свойствами, и их широко используют как антитуберкулёзные, противоопухолевые, противосудорожные, антивирусные и другие терапевтически активные вещества Их применяют также при производстве лекарственных препаратов, синтетических смол, красителей. В то же время эти вещества могут оказывать вредное воздействие на организм человека, снижать активность ряда ферментов тканевого дыхания, угнетать функции щитовидной железы и органов кроветворения Из всего вышесказанного очевидно, насколько важна разработка методов определения малых количеств соединений данного класса

В условиях возрастающего внимания к проблемам охраны окружающей среды всё более актуальной становится задача разработки чувствительных методов определения токсичных неорганических анионов Определение микроколичеств нитрита в водах, почвах, пищевых продуктах и кормах относится к числу важных экологических задач В воде культурно-бытового пользования его ПДК равна 3 3 мг/л, а для рыбохозяйственных водоемов - 0.08 мг/л

Разрабатываемые методы определения анионов и биологически активных веществ, как упомянутые выше производные тиомочевины, должны не только отличаться высокой чувствительностью, но и быть селективными, экспрессными Всеми этими свойствами обладают кинетические методы анализа в их каталитическом варианте Существенным недостатком метода при анализе сложных объектов является мешающее влияние компонентов матрицы Кроме того, каталитические методы часто неселективны, так как каталитическим действием могут обладать несколько близких по свойствам химических соединений

* Научный консультант работы - профессор, доктор .химических наук Шеховцова Татьяна

Николаевна.

Для многих систем изменения реакционных условий недостаточно для повышения селективности каталитических реакций и тогда каталитические методы анализа необходимо объединять с подходящими методами разделения, такими как отгонка, осаждение на коллекторе, экстракция или хроматография Несомненно, что преимущество в этом случае может иметь объединение каталитических методов с хроматографией, как наиболее эффективной для разделения анионов и органических соединений Выгодное сочетание низких пределов обнаружения каталитических методов и высокой селективности хроматографического разделения делает такой гибридный метод особенно перспективным для анализа сложных многокомпонентных смесей

Цель работы: разработка способа каталитического детектирования серосодержащих органических веществ (тиомочевины и её производных) и неорганических анионов (нитрита, сульфита, сульфида, тиоцианата) после их хроматографического разделения.

Для достижения этой цели были решены следующие задачи:

- выбраны и оптимизированы новые индикаторные системы для каталитического определения неорганических анионов и серосодержащих соединений в статических и динамических условиях;

- выяснены особенности хроматографического удерживания и разделения тиомочевины и её производных;

- разработана система, сочетающая хроматографическое разделение неорганических анионов (нитрита, сульфида и сульфита) с их послеколоночным каталитическим детектированием;

- разработана система, сочетающая хроматографическое разделение серосодержащих

органических соединений на примере тиомочевины и ее производных с их послеколоночным каталитическим детектированием. Научная новизна.

Обнаружено ускоряющее действие сульфит-, сульфид- и тиоцианат-ионов в реакции окисления бромпирогаллолового красного броматом калия

Обнаружено каталитическое действие микроколичеств тиомочевины и её производных в реакциях окисления бромпирогаллолового красного броматом калия и пероксидом водорода, которые предложено использовать в качестве индикаторных в кинетических методах определения серосодержащих органических соединений

Высказаны предположения о причинах ускоряющего действия серосодержащих органических соединений в исследованных окислительно-восстановительных реакциях

Сочетание каталитического детектирования с хроматографическим разделением анионов и серосодержащих органических соединений использовано для создания чувствительного и селективного способа их определения

Практическая значимость работы. Разработаны чувствительные каталитические методики определения нитрит-, сульфид-, сульфит-, тиоцианат-ионов, а также тиомочевины и её производных, которые могут быть использованы в химическом анализе как в статических, так и динамических условиях В результате проведенных исследований предложен способ селективного и чувствительного каталитического детектирования тимочевины и её производных и неорганических анионов в сложных смесях после их хроматографического разделения, позволивший расширить круг определяемых соединений, а также снизить пределы их обнаружения Этот подход может быть использован при решении различных задач, связанных с определением компонентов, присутствующих в низких концентрациях в сложных смесях, например, при контроле качества фармацевтической и пищевой продукции На защиту выносятся следующие положения:

- данные изучения действия нитрит-, сульфид-, тиоцианат- и сульфит-ионов в реакции

окисления бромпирогаллолового красного броматом калия в статических и динамических условиях,

- результаты исследования влияния тиомочевины и её производных на скорость реакций окисления бромпирогаллолового красного броматом калия или пероксидом водорода в статическом и динамическом режимах;

- данные изучения хроматографического поведения тиомочевины и её производных на

гидрофобизированном силикагеле в обращённо-фазовом варианте высокоэффективной жидкостной хроматографии;

- способ каталитического детектирования ряда анионов (нитрит-, сульфит-, сульфид-) и

серосодержащих органических веществ (тиомочевины и её производных) после их разделения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии;

- ионохроматографическое определение нитрит-иона в природных водах и овощных

соках с использованием каталитического детектирования,

- хроматографическое определение тиомочевины в фармацевтических препаратах

«Фаматидин» и «Квамател» с использованием каталитического детектирования

5

Апробация работы. Основное содержание работы изложено в 12 публикациях Результаты исследований доложены на 10ft Russian-Japan Joint Symposium on Analytical Chemistry (Moscow - St Petersburg, 2000), Всероссийском симпозиуме «Современные проблемы хроматографии» (Москва, 2002), Международном симпозиуме «Разделение и концентрирование в аналитической химии» (Россия, Туапсе, 2002), Международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов - 2002» (Москва, 2002), Европейской конференции по аналитической химии «Euroanalysis-12» (Germany, Dortmund, 2002), 3rd Int. Symposium on Separations in BioSciencies «100 Years of Chromatography» (Moscow, 2003), lO4 international conference «Separation of ionic solutes» (Slovakia, Podbanske, High Tatras, 2003), на V Всероссийской конференции по анализу объектов окружающей среды «Экоаналитика-2003» с международным участием (Санкт-Петербург, 2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 3 статьи и 9 тезисов докладов на Международных и Российских конференциях и симпозиумах

Структура и объём работы. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, 5 глав экспериментальной части, общих выводов, списка цитируемой литературы и приложения. Материал диссертации изложен на 190 странице текста, содержит 58 рисунков и 23 таблицы, список цитируемой литературы содержит 175 наименования.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Обзор литературы

Рассмотрены каталитические методы определения неорганических анионов и

серосодержащих органических соединений в статических и проточно-инжекционных условиях, основанные на собственных каталитических свойствах указанных соединений и способности органических соединений ингибировать каталитическую активность ионов металлов. Обсуждены возможности повышения селективности каталитических методов определения неорганических анионов, а также тиомочевины и её производных. На основе литературных данных обоснованы и конкретизированы задачи диссертационной работы

Экспериментальная часть

Работу выполняли на жидкостном хроматографе, состоящем из следующих блоков' - насос высокого давления модели «ВТ8100» фирмы «Biotronik» (Германия),

6

- инжектор фирмы «Кпаиег» (Германия) с дозирующей петлей объёмом 50 мкл;

- спектрофотометрический детектор с изменяемой длиной волны модели «LCD 2084» фирмы «ЕСОМ» (Чехия);

- кондуктометрический детектор модели «CD-510 Стайер» фирмы «Аквилон» (Россия);

- устройство для сбора и обработки хроматографических данных «Мультихром» с программным обеспечением версии 1.52, ЗАО «Амперсенд» (Россия).

На рис.1 представлена блок-схема установки для послеколоночного каталитического детектирования. Поток элюента из резервуара (I) при помощи насоса высокого давления (2) подавали со скоростью 0 5 мл/мин Пробу (3) в поток вводили при помощи устройства ввода проб (4) После хроматографического разделения смеси на разделяющей колонке (5) и детектирования в проточном УФ-детекторе (6) элюат смешивали с потоком раствора окислителя (7) и раствором восстановителя (8) в смесителе (10) Растворы реагентов подавали в систему под давлением сжатого воздуха из блока (9) После реактора (11) поток поступал в ячейку проточного спектрофотометрического детектора (12), где измеряли поглощение раствора. Скорость после протекания каталитической реакции измеряли по уменьшению спектрофотометрического сигнала

Рис. 1 Блок-схема установки для каталитического детектирования 1 -элюент; 2 - жидкостный насос высокого давления, 3 - проба, 4 - устройство ввода пробы; 5 - хроматографическая разделяющая колонка; 7, 8 - ёмкости с растворами реагентов; 9 - модуль контроля давления; 10 - смеситель, 11 -реактор; 6 и 12 -спектрофотометрические детекторы; 13, 14 - регистрирующее устройство для сбора и обработки хроматографических данных; 15-слив.

- в случае определения неорганических анионов это - кондуктометрический детектор

Жидкостные коммуникации хроматографа были изготовлены из инертных материалов, в качестве соединительных трубок послеколоночной системы применяли полиэтиленовые капилляры с внутренним диаметром 0 3-0 7 мм

1

.f

Изменение оптической плотности растворов во времени и спектры поглощения регистрировали на спектрофотометре модели «UV-2201» фирмы «Shimadzu» (Япония)

Использовали кварцевые кюветы с длиной оптического пути 10 мм Скорость индикаторных реакций в статических условиях контролировали спектрофотометрически и характеризовали тангенсом угла наклона (tga) начальных линейных участков кинетических кривых в координатах оптическая плотность (А) - время (t, сек) Измеряли рН растворов с помощью универсального иономера рН-340 со стеклянным индикаторным электродом ЭСЛ-63-07 и хлоридсеребрянным электродом сравнения

Использовали амперометрический детектор фирмы «Яуза» с ячейкой типа «стенка-сопло» со стеклоуглеродным рабочим электродом с варьируемым значением потенциала Обработку результатов, полученных с помощью этого детектора, проводили с использованием программы «Экохром».

Для хроматографического разделения тиомочевин использовали колонки- «Luna 5ц Cis(2)» (150x4.6 мм; размер частиц - 5 мкм) фирмы «Phenomenex» (США); «Диасфер-110-С4» (150x4 мм; размер частиц - 5 мкм) фирмы «БиоХимМак» (Россия), «Kromasil Сig» (250x4 6 мм; размер частиц - 5 мкм) фирмы «Люмэкс» (Россия) Для разделения неорганических анионов использовали колонки' «IonPac Fast Anion» (4x200 мм) фирмы «Dionex Corp.» (США); «Star-Ion А300» (4 6x100 мм) фирмы «Phenomenex» (США); «Separen НЕМА S 1000 QL» (4x100 мм) фирмы «Tessek» (Чехия). Для подавления фоновой электропроводности использовали подавляющую колонку, заполненную сульфокатионообменником высокой ёмкости в Н^-форме, произведённую фирмой «Biotronik» (Германия)

В качестве подвижных фаз использовали смеси ацетонитрила, метанола, изопропанола с буферными растворами или водой; буферный раствор карбоната и гидрокарбоната натрия.

Выбор индикаторной реакции

Осуществление каталитического детектирования - сложная задача, для успешного решения которой решающее значение имеет выбор системы разделения и детектирования В обзоре литературы было показано, что для каталитического спектрофотометрического определения нитрита чаще всего используют его ускоряющий эффект на реакции окисления броматом калия органических красителей, так как они

наиболее чувствительны, селективны и контрастны Для определения сульфид-, тиосульфат-, сульфит-, и тиоцианат-ионов реакции окисления красителей применяют реже Анионы сильных кислот не оказывают ускоряющего действия на скорость индикаторных реакций Таким образом, для каталитического детектирования анионов слабых неорганических кислот перспективно использование в качестве индикаторной реакции окисления органического красителя.

В качестве индикаторной реакции для определения нитрит, сульфит-, сульфид-, тиоцианат- и тиосульфат-ионов была выбрана реакция окисления бромпирогаллолового красного. Бромпирогаллоловый красный (БПК) - органический краситель, типичный представитель трифенилметанового ряда, обладающий высоким молярным коэффициентом поглощения, этанольные растворы которого устойчивы на воздухе БПК окисляется с относительно высокой скоростью с образованием слабоокрашенного продукта, что позволяет фиксировать изменение поглощения раствора практически сразу после начала реакции Таким образом, реакция окисления БПК удовлетворяет всем требованиям, предъявляемым к индикаторным реакциям в кинетических методах анализа За скоростью процесса окисления БПК наблюдали по уменьшению во времени оптической плотности раствора при X 470 и 570 нм, соответствующих полосам максимального поглощения БПК при разных pH раствора Показано, что в интервале от 30 до 150 с оптическая плотностью раствора уменьшается прямо пропорционально скорости реакции окисления БПК

Из литературных данных известно, что в индикаторных реакциях окисления красителей в качестве окислителя чаще всего используют бромат-ион Помимо бромата калия был применён еще один неорганический окислитель - пероксид водорода, обладающий большей окислительной способностью При изучении влияния природы окислителя было показано, что изучаемые анионы (NO;, S2", SCN", SO,2", S2Of) проявляют большую каталитическую активность в реакции окисления БПК броматом калия по сравнению с пероксидом водорода, вследствие чего эту реакцию использовали в дальнейшем в качестве индикаторной

Оптимальными условиями проведения индикаторной реакции в статических условиях для определения неорганических анионов являются БПК - 0 04/0 04 мМ, бромат калия - 5/23 мМ, серная кислота - 0 1/0 2 М (нитрит/серосодержащие

неорганические анионы), при которых пределы обнаружения нитрит-, сульфид-, сульфит- и тиоцианат-ионов составляют 0 0001, 0 03, 0 4 и 0 4 мкг/мл, соответственно

Одной из задач настоящего исследования была разработка способа каталитического детектирования серосодержащих органических соединений после их хроматографического разделения, поэтому в первую очередь было необходимо разработать каталитический метод одновременного определения тиомочевины и её производных При этом стояла задача найти такую индикаторную реакцию, в которой изучаемые соединения оказывали бы собственное ускоряющее действие Целесообразно было выяснить, обладают ли каталитическим действием тиомочевина и её производные в реакции окисления БПК, которая была выбрана для определения неорганических анионов. В качестве окислителей использовали бромат-ион и пероксид водорода Установили, что изученные тиомочевины обладают различным ускоряющим действием в выбранных индикаторных реакциях.

Каталитическая активность замещённых тиомочевин в реакции окисления бромпирогаллолового красного броматом понижается в ряду, ацетилтиомочевина (ATM) » фенилтиомочевина (ФТМ) ~ аллилтиомочевина (АлТМ) > диэтилтиомочевина (ДЭТМ) ~ диметилтиомочевина (ДМТМ) ~ этилтиомочевина (ЭТМ) ~ метилтиомочевина (МТМ) » тиомочевина (ТМ).

Изменение каталитической активности в ряду алкилтиомочевин хорошо согласуется с изменением размеров и гидрофобности заместителя - уменьшение положительного индуктивного эффекта органического заместителя и, как следствие, уменьшение электронной плотности на атоме азота Ацетилтиомочевина обладает наибольшей каталитической активностью в данной индикаторной реакции по сравнению с другими изученными замещёнными производными Возможно, это объясняется иным перераспределением электронной плотности в молекуле ацетилтиомочевины Следует отметить, что незамещённая тиомочевина практически не катализирует реакцию, это предположительно связано с её окислением или гидролизом в условиях эксперимента

Были установлены оптимальные условия проведения индикаторной реакции окисления БПК броматом в присутствии тиомочевин концентрации в реакционной смеси БПК - 0 04 мМ, бромат-ионов - 8 мМ, серной кислоты - 0.14 М.

Реакцию предполагалось проводить в потоке после хроматографического разделения Хроматографическое разделение замещенных тиомочевин предусматривает использование в качестве подвижной фазы водно-органических растворов, в частности

10

ацетонитрила с добавками буферных растворов, например фосфатного Вследствие этого, было изучено влияние 100 мМ фосфатного буферного раствора (рН 5 0) с добавкой ацетонитрила (15 об %) на скорость индикаторной реакции в статических условиях Показано, что добавление в реакционную смесь элюента практически не влияет на скорость реакции окисления БПК-Вг03' в присутствии тиомочевин

Показано, что оптимальным диапазоном рН для проведения реакции окисления БПК пероксидом водорода в присутствии тиомочевины и её производных является рН 5 0-7 0, где наблюдается максимальное различие скоростей индикаторной реакции в присутствии и в отсутствие серосодержащих органических соединений

Оптимальными для проведения индикаторной реакции окисления БПК пероксидом водорода в присутствии тиомочевин являются следующие условия' 20 мМ фосфатный буферный раствор, рН 5 0, концентрации в реакционной смеси' БПК - 0 016 мМ, пероксид водорода - 0 78 М

Каталитическая активность тиомочевины и её замещённых аналогов в данной индикаторной реакции уменьшается в ряду-

ATM > ТМ > МТМ > ЭТМ > АлТМ > ФТМ > ДМТМ и ДЭТМ. Анализ литературных данных и характера кинетических зависимостей скорости индикаторной реакции от концентрации БПК и окислителей позволили сделать предположение относительно её механизма Отсутствие окрашенных продуктов свидетельствует о полном разрушении трифенилметановой структуры красителя и окислении пирогаллоловых остатков Единственным стабильным продуктом, выделенным после проведения реакции, является о-сульфобензойная кислота Мы предполагаем, что ускоряющее действие тиомочевины и её производных может осуществляться либо через промежуточное взаимодействие этих соединений с окислителем, либо через образование промежуточного тройного комплекса БПК -тиомочевина или её производная - окислитель с последующим внутримолекулярным окислением БПК В литературе описан метод определения тиомочевины, основанный на её каталитическом действии в реакциях окисления пероксидом водорода индигокармина и о-фенилендиамина Это даёт основание предполагать, что природа восстановителя, по-видимому, не влияет на скорость лимитирующей стадии процесса В то же время, природа окислителя играет определённую роль, следовательно, можно предположить, что процесс окисления БПК в присутствии тиомочевины и её производных идёт по общей схеме:

1) Л5 + окислитель -» Рх

2) Р, + БПК -> Рг

При этом скорость-лимитирующей стадией является стадия 1, то есть реакция окисления серосодержащего органического соединения с образованием промежуточного продукта окисления - Рь

Из литературных данных известно, что метилметакрилат способен связывать находящиеся в растворе свободные радикалы, полимеризуясь при этом в полиметилакрилат и снижая скорость реакции Оказалось, что в присутствии метилметакрилата скорость процесса уменьшалась как в случае использования в качестве окислителя бромата калия, так и в случае пероксида водорода Следовательно, реакция окисления БПК протекает по радикальному механизму.

Необходимо особо отметить, что влияние ацетил-, фенил-, аллил-, этил-, диэтил-, метил- и диметилтиомочевин и тиомочевины на скорость реакции окисления БПК изучено впервые.

Таким образом, индикаторную реакцию окисления БПК можно использовать для каталитического определения как неорганических анионов (нитрита, сульфита, сульфида, тиоцианата), так и для каталитического определения тиомочевин и её производных (табл.1).

Изучение индикаторных реакций в динамических условиях

Целью этой части работы была разработка методики определения неорганических анионов и серосодержащих органических соединений с использованием выбранных индикаторных реакций в проточно-инжекционном режиме. Для проведения индикаторных реакций в динамических условиях необходимо было установить оптимальные условия и оценить изменение чувствительности определения изучаемых соединений при использовании проточного каталитического детектирования Скорость реакции в проточном режиме контролировали способом фиксированного времени В качестве реактора использовали полиэтиленовый капилляр

Показано, что стабильность скорости и равномерность потока существенно влияют на форму пика и величину аналитического сигнала Было изучено влияние скоростей элюента и реагентов на величину аналитического сигнала (площадь пика), так как необходимо учитывать давление, создаваемое потоками элюента и растворами реагентов

Таблица 1 Метрологические характеристики каталитического определения неорганических анионов и тиомочевин с использованием реакции окисления БПК в статических условиях (п=5, Р=0.95)____

Индикаторная Определяемое Диапазоны Уравнение Sr г *»* иМИН г

система соединение определяемых содержаний, мкг/мл градуировочного графика У*=В0+В]Х** (при с„) мкг/мл

Нитрит 0001-046 у=0 04+38 49х 0 06 0 0001

БПК - ВгОз Сульфид 0 16-32 у=0 06+0.55х 0 07 0 03

Сульфит 0 8-24 у=0 04+0 26х 0 07 04

Тиоцианат 1 0-58 у=0 04+0 63х 0.08 04

ATM 0 1-11 у=0 04+0 73х 0 05 0 01

ФТМ 7-150 у=0 01+0 05х 0 07 3

АлТМ 10-230 у=0 01+0.05х 0.06 5

БПК-ВгОз" ДЭТМ 13-200 у=0.01+0.05х 0 08 6

ДМТМ 20-175 у=0 02+0 ОЗх 0 06 7

МТМ 40-270 у=0 01+0 01х 0.08 10

ЭТМ 50-310 у=0.01+0.01х 0.06 5

ATM 0 1-10 у=0.01+2.65х 0 04 0 01

ТМ 04-40 у=0 04+0 78х 0.06 0 07

БПК-Н202 МТМ 0 8-45 у=0 01+0 75х 0 05 02

ЭТМ 1 0-60 у=0 02+0 46х 0 06 03

АлТМ 1.7-90 у=0.02+0.44х 0 05 1 0

ФТМ 3.0-140 у=0 02+0 44х 0 07 1 5

где *y=tga. **х - концентрация соединения (мМ), ***сМ1Ш - предел обнаружения, рассчитанный по Зв-критерию.

в смесителе (рис 2) Максимальный аналитический сигнал наблюдается при скорости потока элюента (вода) 0 5 мл/мин и суммарной скорости потока реагентов (растворы БПК, бромат-иона с серной кислотой либо пероксида водорода с фосфатным буферным раствором) - 0 6 мл/мин Показано, что длина реактора, находящегося между смесителем (10) и детектором (12) (рис 1) существенно влияет на размывание зон, к тому же, изменяя длину реактора, можно регулировать время взаимодействия реагентов (рис 3)

При переносе системы из статических условий в динамические изменяются оптимальные концентрации реагентов, это связано с разбавлением исходных растворов элюентом, кроме того, по мере продвижения по реактору размывается реакционная зона Выяснены оптимальные концентрации реагентов для проведения определения неорганических анионов, а также тиомочевины и её производных в проточных условиях На рис 4-5 представлены ПИА-граммы в присутствии нитрит-иона и ATM

S, мВ*<; 15000

0 0,2 0,4 0,6

0,8 1 F, мл/мин

Рис 2 Влияние на аналитический сигнал (площадь пика) скорости потока элюента (1) и суммарного потока реагентов (2). (Концентрации БПК - 0 36 мМ; серная кислота - 0 1 М; бромат калия - 4 5 мМ; нитрит-ион - 0.1 мМ. Носитель (элюент) - вода, длина реактора - 330 см;Х=470 нм).

h, мм

60

40

20

0 50 100 150 200 250 300 350 400 Длина реактора, см

Рис. 3. Влияние длины реактора на величину аналитического сигнала (высоту пика) в присутствии 0.1 мМ тиоцианаха (1); 0.1 мМ сульфита (2); 0 1 мМ нитрита (3). (Концентрации' БПК - 0 24 мМ, бромат калия - 4 5 мМ, серная кислота - 0.1 М. Суммарная скорость потока - 1 1 мл/мин; 1=470 нм; носитель - вода)

Аналитический сигнал, мВ 400

u и

U VJ L_

1ZS4S«7«»1<. ^МИН

Рис 4 ПИА-грамма в присутствии различных концентраций нитрита (1) - 0 005; (2) - 0 01, (3) - 0 02 мМ (Концентрации- БПК - 0 16 мМ, бромат калия - 40 мМ, серная кислота -0.75 М Носитель (элюент) - вода Суммарная скорость потока - 1 1 мл/мин, X - 470 нм, длина реактора - 330 см; носитель - вода)

Аналитический сигнал, мВ .1000

ÜL

U

Laaajv.

!4«*loi:ui<;i**ot, МИН

Рис 5 ПИА-грамма в присутствии различных концентраций ацетилтиомочевины (1) - 0 5, (2) - 0 05 мМ (Концентрации БПК - 0 16 мМ, бромат калия - 50 мМ, серная кислота -

0 14 М Носитель - вода, длина реактора - 305 см, X. - 470 нм, суммарная скорость потока -

1 1 мл/мин)

Сравнение метрологических характеристик определения изучаемых соединений разработанными нами методик в статических (табл.1) и динамических (табл.2) режимах показывает, что пределы обнаружения соединений в статических условиях ниже Однако определение вышеуказанных соединений в проточных условиях отличаются большой экспрессностью и точностью, что подтверждается меньшим временем предварительной пробоподготовки, значительно большими коэффициентами чувствительности разработанных методик Следует подчеркнуть, что разработанный метод определения неорганических анионов, а также тиомочевины и ее производных в динамических условиях характеризуется высокой производительностью (до 30 образцов / 1ч).

Таблица 2. Метрологические характеристики каталитического определения неорганических анионов и тиомочевин с использованием реакции окисления БПК в динамических условиях (п=5, Р=0.95)____

Индикаторная Определяемое Диапазоны Уравнение St Сцюм

система соединение определяемых содержаний, мкг/мл градуировочного графика у*=В0+В,х»» (при с„) мкг/мл

Нитрит 0.05 - 5 у=8+19386х 0.05 0.005

БПК-ВЮз" Сульфид 0.3-16 у=1+898х 0.06 0.2

Сульфит 0.8-80 у=23+358х 0.06 0.6

Тиоцианат 4.0 - 60 у=2+164х 0.07 1.5

ATM 0.6-12 у=3+2104х 0.04 0.1

ФТМ 1.5-150 у=4+436х 0.05 0.5

БПК-Вг03" АлТМ 6-145 у=4+284х 0.04 3

ДЭТМ 8-180 у=1+201х 0.06 5

ДМТМ 8-180 у=1+225х 0.07 6

МТМ 7-180 у=5+162х 005 6

ЭТМ 9-210 у=4+162х 0.06 8

ATM 0.2-30 у=2+7872х 0.05 0.1

ТМ 0.4-75 у=6+397х 0.04 0.1

БПК-Н202 МТМ 2-90 у=1+272х 0.05 0.9

ЭТМ 3-115 у=1+241х 0.04 1.5

АлТМ 5-200 у=7+211х 0.05 3.0

ФТМ 10-300 у=1+149х 0.06 8.0

где у* -высота пика (мВ), х** - концентрация определяемого соединения (мМ).

Хроматографическое разделение неорганических анионов и производных тиомочевины

Анионы (фторид, хлорид, нитрат, сульфат и фосфат), обычно детектируемые

кондукгометрически в двухколоночном варианте ионной хроматографии, не влияют на

скорость индикаторной реакции окисления БПК броматом Таким образом, использование последовательно соединенных детекторов (кондуктометрического и каталитического) открывает возможность одновременного определения анионов слабых и сильных кислот

Стояла задача подобрать оптимальные условия разделения смеси анионов (F", СГ, N0^, SO*', РО«', NOj, S2 , SCN', SO*), те состав подвижной и неподвижной фаз Выбор разделяющих колонок «Separon НЕМА S 1000 QL», «IonPac Fast Anion» и «StarIon АЗОО» был обусловлен их коммерческой доступностью, различием состава ионообменников, позволяющих оптимизировать условия разделения изучаемых анионов Оптимизация условий ионохроматографического определения чаще всего достигается за счет изменения свойств и состава подвижной фазы

Для всех изученных анионообменников сохраняется обычный порядок выхода анионов- F" < СГ < NO¡ < NO, < HP042 <SO^.

Селективность разделяющих колонок по отношению к однозарядным анионам зависит от строения функциональных групп анионообменника и свойств подвижной фазы Однако для всех сорбентов сохраняется одинаковый порядок выхода однозарядных анионов Исследуемые разделяющие анионообменники проявляют высокую селективность по отношению к данным неорганическим анионам

Шкалы относительного удерживания неорганических анионов на анионообменниках низкой ёмкости представлены на рис 6 Видно, что при использовании оптимальных концентраций карбоната и гидрокарбоната колонка «Star-Ion АЗООО» (рис 6(VII)) обладает меньшей селективностью по сравнению с колонками «Separon НЕМА S 1000 QL» (рис 6(1)) и «IonPac Fast Anion» (рис 6(V)), поскольку нитрит- и нитрат-ионы имеют близкие времена удерживания Колонка «IonPac Fast Anion» более селективна к изучаемым анионам, но достоинством «Separon НЕМА S 1000 QL» приемлемое Rj при удовлетворительном а при относительно малом времени анализа Кроме того, ёмкость колонки «IonPac Fast Anion» ниже, чем у «Separon НЕМА S 1000 QL», поэтому, если вводить к данную колонку пробу с достаточно высоким солевым фоном, происходит перегрузка колонки, вследствие чего изменяются все времена удерживания

Механизм разделения на сорбентах с анионообменными центрами, содержащими ОН-группы, до сих пор остается неизученным Известно, что сорбенты такого состава демонстрируют более высокую эффективность и селективность разделения большинства

анионов, однако по отношению к некоторым компонентам проявляют аномальное сродство

F "CI" NO; NO; hpoJ' f T

f-c.No, NO; HPoJ jO< n

FC'jNOj NO; hpoS 1 m

f "ci" no; no; l II 1 SOÍ rv

F"CI'NO'i NO; 1 1 1 1 hpoJ soj v

ыо2 no; Vc'IY HjoS so' 1 VT

M \ f 1 SOÍ VII

F'CI'NO'j NO; HPOÍ SOÍ vm

ГсТГ HPOÍ TX

Рис 6 Шкалы селективности разделяющих колонок «Separan НЕМА S 1000 QL» (I - III), «IonPac Fast Anion» (IV - VI) и «Star-Ion А300» (VII - IX). Элюент: (I) - 6 мМ Na2C03, б мМ NaHC03; (И) - 6 мМ Na2C03, (III) - 6 мМ NaHC03, (IV) - 6 мМ Na2C03, 2 мМ NaHC03, (V) - 6 мМ Na2C03, (VI) - 10 мМ NaHC03; (VII) - 6 мМ Na2C03, 6 мМ Na2C03, (VIII) - 6 мМ NazCCb; (IX) - 14 мМ NaHC03.

Ia"

1 С1

О 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13

Выявлено сильное удерживание тиоцианат-иона, обусловленное, по-видимому, специфическими взаимодействиями с гидроксильными группами сорбента Для подтверждения этого предположения были проведены дополнительные исследования хроматографического поведения ряда компонентов, которые могут вступать в специфические взаимодействия с ОН-группами Установлено, что на всех сорбентах сильно удерживаются также роданид-, пирофосфат- и пиросульфат-ионы Возможно также, что такое удерживание вышеперечисленных анионов связано с их высокой поляризуемостью, которая приводит к тому, что они способны адсорбироваться на поверхности матрицы либо взаимодействовать с несколькими функциональными группами сорбента.

Использование классической двухколоночной ионной хроматографии для разделения сульфит- и сульфид-иона нецелесообразно, поскольку образующиеся соответствующие кислоты являются слабыми В связи с этим для изучения ионохроматографического поведения этих ионов был выбран одноколоночный вариант ионной хроматографии с прямым фотометрическим детектированием при Х=210 нм, в котором в качестве элюента используют водные растворы карбоната и гидрокарбоната натрия

Таким образом, оказалось, что наиболее успешно неорганические анионы (фторид, хлорид, нитрат, фосфат, сульфат) разделяются на колонке «Separon НЕМА S 1000 QL», заполненной анионообменником с полиметилметакрилатной матрицей На этой колонке максимальное разрешение пиков анионов за минимальный промежуток времени достигается при использовании элюента с одинаковыми концентрациями карбоната и гидрокарбоната натрия 6 мМ Необходимо отметить, что удовлетворительное разделение хлорида и нитрита на всех изученных коммерчески доступных колонках не достигается за приемлемое время анализа.

Для хроматографического разделения тиомочевины и её производных был выбран обращенно-фазовый вариант высокоэффективной жидкостной хроматографии (ОФ ВЭЖХ), так как эти соединения относятся к слабополярным В качестве подвижной фазы использовали водно-органические смеси Состав подвижных фаз в ОФ ВЭЖХ является важнейшим параметром оптимизации разделения, так как удерживание и селективность разделения веществ в значительной степени зависит от содержания органического компонента, а также природы и рН буферного раствора

В работе изучено удерживание и разделение тиомочевины и её производных на колонках с неподвижными фазами силикагеля с привитыми группами С4 и С]8 при использовании подвижных фаз с метанолом, ацетонитрилом или изопропанолом с добавкой фосфатного буферного раствора.

Разделение тиомочевин на колонке «Диасфер-110-С4», по сравнению с колонками «Luna 5ц CiS(2)» и «Kromasil С18», хуже, что связано со строением неподвижной фазы С4-группы недостаточно хорошо экранируют силанольные группы, наличие которых влияет на механизм удерживания и, в итоге, приводит к уменьшению эффективности разделения

Сравнение экспериментальных хроматографических данных, полученных на «Kromasil С18» и «Luna 5ц Ci8(2)», показывает, что ухудшение разделения тиомочевин на первой колонке по сравнению со второй связано, по-видимому, с меньшей однородностью частиц сорбента

Установлено, что из трёх исследованных органических растворителей (изопропанол, ацетонитрил, метанол) максимальные селективность и эффективность разделения сорбатов были достигнуты при использовании ацетонитрила в качестве компонента подвижной фазы

Полученные хроматографические данные показывают, что удерживание на октадецилсиликагеле коррелирует с гидрофобностъю сорбата Удерживание изученных соединений растет в ряду ТМ < МТМ < ДМТМ ~ ATM - ЭТМ < АлТМ < ДЭТМ < ФТМ

В работе было исследовано влияние содержания ацетонитрила в подвижной фазе на коэффициент удерживания тиомочевин (рис 7) Подвижная фаза, содержащая 15% ацетонитрила, оказалась оптимальной для разделения тиомочевин на колонке «Luna 5ц Ci8(2)», при этом разделяются 7 из 8 тиомочевин

Рис.7. Зависимость удерживания тиомочевин от объемной доли ацетонитрила в подвижной фазе. (1)

- ФТМ; (2) - ДЭТМ; (3) - АлТМ; (4)

- ЭТМ, (5) - ATM, (6) - ДМТМ, (7)

- МТМ, (8) - ТМ. Колонка: «Luna 5ц С|8(2)» (150x4.6 мм, 5мкм). Элюент 01 М фосфатный буферный раствор (рН 6.0). Скорость потока элюента - 0.5 мл/мин 1=240 нм

0,4

ф(ацетонитрил)

Современные неподвижные фазы, применяемые в ОФ ВЭЖХ, стабильны только в ограниченном диапазоне рН от 2 до 7 В работе изучено влияние рН (2.0-7 0) подвижной фазы на удерживание тиомочевины и её производных Оказалось, что увеличение рН, в целом, не влияет на удерживание тиомочевин. Для дальнейших экспериментов выбран буферный раствор с рН 6 0, использование которого позволяет работать с октадецилсиликагелем.

Основным вопросом спектрофотометрического и амперометрического детектирования является выбор длины волны и потенциала, при которых соотношение сигнал/шум максимально Найдено, что для прямого спектрофотометрического детектирования этих соединений оптимальной длиной волны является 240 нм, в этом случае с высокой чувствительностью детектируются 7 из 8 изучаемых веществ Поглощение же элюента при таких длинах волн практически отсутствует, это приводит к малым шумам базовой линии Показано, что наибольший аналитический сигнал при амперометрическом детектировании наблюдается при 1 5 В На рис.8 представлена хроматограмма разделения модельной смеси тиомочевин с использованием спектрофотометрического детектирования.

Рис 8 Хроматограмма модельной смеси тиомочевин (0.1 мМ) Колонка «Luna 5 ц C|g(2)» (150x4 6 мм) Элюенг ацетонитрил 15 об%; 0.1 М фосфатный буферный раствор (рН 6 0) Скорость потока элюента -0 5 мл/мин. Х=240 нм

1 2 i Л « 6 7 Л 9 10 11 lí li 14 1* 16 »

Чувствительность спектрофотометрического определения тиомочевины, ее алкил- и ацилзамещённых аналогов сравнительно высока, так как светопоглощение элюента в этой области УФ-спектра существенно ниже, чем поглощение изучаемого класса соединений Более низкие пределы обнаружения при использовании амперометрического детектирования можно объяснить высокой электроактивностью тиомочевин

В результате изучения хроматографического поведения тиомочевины и её производных на силикагелях, модифицированных С4 и Cjg, было показано, что селективность разделения на октадецилсиликагеле зависит, в основном, от гидрофобности сорбата Селективность и эффективность разделения тиомочевин максимальна на колонке «Luna 5ц Clg(2)». Показано, что на удерживание сорбатов и величину аналитического сигнала влияет содержание органического растворителя Использование подвижных фаз на основе метанола и изопропанола неперспективно при применении октадецилсиликагеля для разделения тиомочевины и её производных, тогда как при элюировании сорбатов ацетонитрильным раствором были получены удовлетворительные результаты

Сочетание каталитического детектирования неорганических анионов и производных тиомочевины с хроматографическим разделением

Как отмечалось выше, нитрит-ион является микрокомпонентом в объектах

окружающей среды, вследствие этого, его количественное определение при хроматографическом разделении с использованием кондуктометрического детектирования часто оказывается практически невозможным из-за перекрывания его пика с пиками макрокомпонентов, например хлорида Предложенный метод хроматографического разделения в сочетании с послеколоночным каталитическим детектированием может решить эту проблему

20

ыты

Сульфит- и сульфид-ионы относятся к среднеудерживаемым анионам, а нитрит - к слабоудерживаемым, поэтому их ионохроматографическому определению могут мешать анионы, удерживающиеся сильнее хлорида и слабее сульфата (бромид, нитрат, реже фосфат) Все перечисленные анионы не обладают каталитической активностью в индикаторной реакции окисления БПК броматом, а значит, не могут мешать каталитическому послеколоночному детектированию нитрита, сульфита и сульфида, даже в случае элюирования вместе с ними.

Оптимальны следующие условия проведения каталитического детектирования анионов БПК - 0 16 мМ, серная кислота - 0 75 М, бромат калия - 50 мМ, разделяющая колонка - «верагоп НЕМА в 1000 (}Ь>, элюент 6 мМ Ыа2С03, 6 мМ ЫаНС03, >.=470 нм, суммарная скорость потока -1.1 мл/мин, длина реактора - 330 см

На рис.9 представлена хроматограмма модельной смеси неорганических анионов, полученная с использованием послеколоночного каталитического детектирования

Рис.9. Хроматограмма модельной смеси неорганических анионов (1 - 0 01 мМ нитрит, 2 - 0.1 мМ сульфид, 3 - 0.25 мМ сульфит), полученная с использованием каталитического детектирования. (Концентрации: БПК - 0 16 мМ; серная кислота - 0 75 М; бромат калия - 50 мМ. Разделяющая колонка: «верагоп НЕМА 8 1000 С>Ь> Элюент: 6 мМ Ыа2СОэ, 6 мМ ЫаНСОз. Х=470 нм. Суммарная скорость потоков - 1.1 мл/мин. Длина реактора - 330 см.).

Пределы обнаружения нитрита, сульфита и сульфида каталитическим методом после хроматографического разделения составили' 0.04,1 5 и 0.3 мкг/мл, соответственно Разработанный метод определения нитрит-иона с использованием каталитического детектирования был применён для определения нитрита в водах На хроматограмме озёрной воды, полученной с использованием кондуктометрического детектирования, пик нитрит-иона отсутствовал (рис 10); в водопроводной воде пик нитрит-иона частично перекрывался с пиком хлорид-иона (рис 10а), вследствие чего его определение было невозможно Каталитическое детектирование с использованием реакции окисления БПК

позволило определить введённую концентрацию нитрит-иона (рис 10(в,г) Правильность результатов определения нитрит-иона в водах была проверена спектрофотометрическим методом (табл 3) Как видно из таблицы, данные, полученные разработанным методом,

Г

хорошо согласуются с результатами, полученными СФ-методом

Таблица 3. Результаты определения нитрит-иона в образцах воды различными %

методами (п=5, Р=0.95)

Образец Введено, мкг/мл Найдено, мкг/мл

Каталитическое детектирование Спектрофотометрическое детектирование

Водопроводная вода 0.35 0.33+0.2 0.34±0.5

Озерная вода 0.35 0.36+0.4 0.33±0.3

Была изучена возможность определения нитрит-иона в соках огурца и арбуза Показано, что спектрофотометрическое и кондуктометрическое определение нитрита в таких сложных матрицах невозможно, поскольку он является микрокомпонентом, а содержание ароматических кислот мешает его определению В то же время разработанный способ - каталитическое детектирование с использованием реакции окисления БПК броматом в сильнокислой среде позволяет определять нитрит-ион (рис.11). Правильность результатов определения нитрит-иона в соках огурца и арбуза была проверена спектрофотометрическим методом Как видно из табл 4, данные, полученные разработанным методом, хорошо согласуются с результатами, полученными СФ-методом.

Таблица 4 Результаты определения нитрит-иона в соках огурца и арбуза различными методами (д=3, Р=0.95)_

Образец Найдено, мкг/л

Каталитическое детектирование вг СФ

Огуречный сок 110+ 17 0 08 124±8 0.04

Арбузный сок 175 ± 8 0 06 179+32 0 09

Тиомочевина и её производные - микрокомпоненты различных объектов,

вследствие этого их определение при хроматографическом разделении с использованием

СФ-детектирования часто оказывается невозможным Использование разработанного

каталитического способа детектирования тиомочевин и её производных после

хроматографического разделения позволяет решить эту задачу.

22

Аналитический сигнал, мВ а *

35

30

25

20

15

10 * 1|

5 **

II

Аналитический сигнал, мВ С1 * 35

1 2 3 4 5 6 г, мин

6 и мин

Рис. 10. Хроматограммы водопроводной (А) и озерной (Б) вод с добавками нитрит-иона. Разделяющая колонка. «Зерагоп НЕМА Б 1000 <ЗЬ» Элюент. 6 мМ №2СОз, 6 мМ NaHCOз а) и б) кондукгометрическое детектирование, в) и г) каталитическое спектрофотометрическое детектирование.

Аналитический сигнал, мВ 109

Аналитический сигнал, мВ 175

12349678»^ МИН 123456789 Ю ^ МИН

Рис 11. Хроматограмма огуречного (а) и арбузного (б) соков, полученная с использованием каталитического детектирования (Концентрации- ВПК - 0 16 мМ; серная кислота - 0 75 М; бромат калия - 50 мМ Разделяющая колонка: «Зерагоп НЕМА Б 1000 (21,». Элюент: 6 мМ N32003, 6 мМ ЫаНСОз 1=470 нм Суммарная скорость потоков - 1 1 мл/мин. Длина реактора -330 см.).

Были исследованы коммерчески доступные препараты «Фамотидин» производства «Хемофарм концерн АД» (Вршац, Югославия) и «Квамател» производства «Гедеон Рихтер А О.» (Будапешт, Венгрия), являющиеся блокаторами гистаминовых Н2-рецепторов, подавляющих продуцирование соляной кислоты, в то же время снижающие активность пепсина и применяющиеся для лечения гастрита или язвы Тиомочевина используется на одной из первых стадий производства этих препаратов Для контроля

23

качества лекарственных препаратов «Фамотидин» и «Квамател» необходимо определять в них микропримеси, которые снижают их эффективность и фармакологические свойства Хроматограммы препаратов представлены на рис.12(а,в) Видно, что в присутствии макрокомпонента - фамотидина определение тиомочевины невозможно Разработанный способ - послеколоночное каталитическое детектирование с использованием реакции окисления БГЖ пероксидом водорода позволил определить тиомочевину в вышеуказанных лекарственных препаратах без предварительного концентрирования (рис 12(6,г)) Степень извлечения тиомочевины из лекарственных препаратов оценивали методом «введено-найдено» Степень извлечения тиомочевины из «Фамотидина» и «Кваматела» составила 97 3% и 95 4%, соответственно Содержание тиомочевины в образцах лекарственных препаратов «Фамотидин» и «Квамател» составило 23±3 мкг/г и 33±5 мкг/г, соответственно

Аналитический сигнал, мВ 2670

Аналитический сигнал, мВ 2670

1,мин

' I, мин

Рис 12 Хроматограмма препаратов «Фамотидин» (А) и «Квамател» (Б), полученные с использованием спектрофотометрического (а,в) и каталитического детектирования (б,г) (Концентрации- БПК - 0 05 мМ; Н2О2 - 4 7 М; фосфатный буферный раствор - 20 мМ (рН 5 0) Колонка «Ьипа5ц С]«(2)» (150*4 6 мм) Элюент. ацетонитрип 15 об %, 01 М фосфатный буферный раствор (рН 6 0) Длина реактора - 275 см Х=560 нм Суммарная скорость потоков - 1 1 мл/мин.).

Проведённый анализ лекарственных препаратов на содержание тиомочевины различными методами показал преимущества предложенного способа каталитического детектирования по чувствительности и селективности определения микрокомпонентов по сравнению с прямым спектрофотометрическим детектированием

24

выводы

Обнаружено каталитическое действие ряда неорганических анионов (нитрита, сульфида, сульфита, тиоцианата) в реакции окисления БПК броматом калия

Обнаружено ускоряющее действие тиомочевины и её производных (ацетил-, метил, диметил-, этил-, диэтил-, фенил-, аллилтиомочевины) в реакциях окисления БПК броматом калия и пероксидом водорода.

Разработан каталитический метод определения нитрит-, сульфид-, сульфит- и тиоцианат-ионов с использованием индикаторной реакции окисления БПК броматом калия в статических условиях с пределами обнаружения 0 0001, 0.03, 0.4 и 0.4 мкг/мл, соответственно.

Разработан каталитический метод определения ряда серосодержащих органических соединений' тиомочевины, ацетил-, метил-, диметил-, этил-, диэтил-, аллил- и фенилтиомочевин от 0 01 до 25 мкг/мл с использованием реакции окисления БПК броматом калия и пероксидом водорода в статических условиях

Разработан каталитический метод определения нитрит-, сульфид-, сульфит- и тиоцианат-ионов с использованием указанной реакции в проточно-инжекционном режиме с пределами обнаружения 0.005, 0.2, 0.6 и 15 мкг/мл, соответственно, характеризующийся высокой производительностью.

Разработан каталитический метод определения в проточно-инжекционном варианте ацетилтиомочевины, тиомочевины, метилтиомочевины, этилтиомочевины, аллилтиомочевины и фенилтиомочевины с пределами обнаружения 01,01, 0.9, 1 5, 3.0; 8 0 мкг/мл Высказаны предположения о причинах ускоряющего действия тиомочевины и её производных в реакциях окисления БПК броматом калия и пероксидом водорода.

Впервые разработан каталитический способ детектирования органических соединений (на примере замещённых тиомочевин) после их хроматографического разделения Разработан способ селективного определения ацетилтиомочевины в присутствии других производных тиомочевины с пределом обнаружения 0 1 мкг/мл Разработан способ каталитического детектирования нитрит-, сульфид- и сульфит-ионов после их ионохроматографического разделения с пределами обнаружения 0.04, 0.3 и 1.5 мкг/мл, соответственно

9 Показана возможность чувствительного и селективного определения нитрит-иона в сложных матрицах (арбузном и огуречном соках) с применением каталитического детектирования после хроматографического разделения компонентов

10 Показана возможность чувствительного и селективного определения тиомочевины в лекарственных препаратах «Фамотидин» и «Квамател» разработанным способом каталитического детектирования с использованием реакции окисления БПК пероксидом водорода после хроматографического разделения компонентов

Основные результаты работы изложены в следующих публикациях:

1 Dikunets М А, Elefterov АI, Medvedeva О М , Shpigun О A Catalytic detection of some anions and cations in ion chromatography / 10th th Russian-Japan Joint Symposium on Analytical Chemistiy. Moscow - St Petersburg 2000 August 20-28. P. 127

2 Дикунец M A, Шпигун О A , Элефтеров А И Каталитическое детектирование нитрит-иона в ионной хроматографии // Вестник МГУ Сер 2. Химия 2001 Т 42 N.6 С.414-417.

3 Дикунец М А , Шпигун О А , Элефтеров А И Хроматографическое определение тиомочевины и её производных с использованием спектрофотометрического и амперометрического детектирования / Всероссийский симпозиум «Современные проблемы хроматографии» Москва. 2002 Март 18-22 С 129

4 Осипова Е С, Дикунец М А Каталитическое детектирование серосодержащих органических соединений в ВЭЖХ / Международная конференция студентов и аспирантов по фундаментальным наукам "Ломоносов - 2002" Москва 2002. Секция Химия Т.1. Апрель 9-12 С 34.

5 Dikunets М А, Osipova Е S , Elefterov АI, Shpigun О A Catalytic detection of sulphur containing compounds in HPLC / European Conference on Analytical Chemistry of the Division of Analytical Chemistry of the Federation of European Chemical Societies Dortmund Germany 2002. September 8-13 P437

6 Дикунец M A , Элефтеров А И , Шпигун О А. Определение нитрит-иона методом ионной хроматографии с каталитическим детектированием / Международный симпозиум "Разделение и концентрирование в аналитической химии" Туапсе 2002 Октябрь 6-11. С.52-53.

7. Dikunets M A, Elefterov A I, Shpigun О A Catalytic detection of thiourea and its derivatives in HPLC / 3rd International Symposium on Separation in BioSciencies "100 years of chromatography". Moscow. Russia. 2003. May 13-18. P.383

8 Elefterov A I., Dikunets M A, Shpigun O.A Catalytic detection as a powerful tool for improving sensitivity in ion chromatography / 10th International conference Separation of ionic solution Podbanske. High Tatras Slovakia 2003. September 6-11. P. 122.

9 Dikunets M.A, Elefterov A.I., Shpigun O.A Using catalytic detection in ion chromatography. / 10th International conference Separation of ionic solution. Podbanske. High Tatras Slovakia 2003. September 6-11. P. 136.

10 Дикунец M A, Элефтеров А И., Шпигун О А Определение неорганических анионов методом ионной хроматографии с каталитическим детектированием / V Всероссийская конференция по анализу объектов окружающей среды «Экоаналитика-2003» с международным участием Санкт-Петербург. 2003 Октябрь 6-10. С. 199.

11. Дикунец М А, Осипова Е С., Элефтеров А И, Шпигун О А Каталитическое детектирование ацетилпюмочевины в высокоэффективной жидкостной хроматографии //Журн аналит химии 2004 Т59 №5 С 516-523

12. Dikunets М А , Elefterov А I, Shpigun О A Catalytic detection of thiourea and its derivatives in HPLC postcolumn derivatization / Anal Lett 2004 V37 №11 P2411-2426

РНБ Русский фонд

2006-4 3225

Подписано в печать 10 декабря 2004 г Заказ 458. Формат 60 х 90/16 Тираж 100 экз. Отпечатано в салоне оперативной печати «Г1 К Ф.» Москва, Садовая-Черногрязская, ЗБ Тел 778-97-47

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Методы детектирования в высокоэффективной жидкостной хроматографии.

1.2. Кинетические методы определения неорганических и органических соединений.

1.2.1. Методы определения неорганических анионов.

1.2.1.1. Методы определения нитрит-иона.

1.2.1.2. Методы определения серосодержащих неорганических анионов.

1.2.2. Методы определения серосодержащих органических соединений.

1.3. Использование проточных систем для проведения кинетических реакций

1.4. Каталитическое детектирование в ВЭЖХ.

ГЛАВА 2. ИСХОДНЫЕ ВЕЩЕСТВА, АППАРАТУРА, МЕТОДИКА ЭКСПЕРИМЕНТА И ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ.

2.1. Исходные вещества и реагенты.

2.2. Аппаратура и техника эксперимента.

2.3. Методика эксперимента в статических условиях.

2.4. Методика хроматографического эксперимента.

2.5. Обработка результатов измерения.

ГЛАВА 3. ВЫБОР ИНДИКАТОРНОЙ РЕАКЦИИ.

3.1. Выбор индикаторной реакции для определения неорганических анионов

3.2. Оптимизация условий проведения реакции бромпирогаллоловый красный

- бромат калия в присутствии анионов.

3.3. Выбор индикаторной реакции и выяснение оптимальных условий её проведения для определения тиомочевины и её производных.

3.3.1. Изучение оптимальных условий проведения реакции окисления бромпирогаллолового красного броматом калия в присутствии тиомочевин.

3.3.2. Выяснение оптимальных условий проведения реакции окисления бромпирогаллолового красного пероксидом водорода в присутствии тиомочевин.

ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ ИНДИКАТОРНЫХ РЕАКЦИЙ В ДИНАМИЧЕСКИХ УСЛОВИЯХ.

4.1. Оптимизация условий проведения индикаторных реакций в динамическом режиме.

4.1.1. Оптимизация условий проведения в динамических условиях реакции окисления бромпирогаллолового красного броматом калия в присутствии анионов.

4.1.2. Оптимизация условий проведения в динамических условиях реакции окисления бромпирогаллолового красного броматом калия в присутствии тиомочевины и её производных.

4.1.3. Оптимизация условий проведения в динамических условиях реакции окисления бромпирогаллолового красного пероксидом водорода в присутствии тиомочевины и её производных.

ГЛАВА 5. ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ.

5.1. Хроматографическое разделение неорганических анионов.

5.2. Хроматографическое разделение замещённых тиомочевин.

ГЛАВА 6. СОЧЕТАНИЕ КАТАЛИТИЧЕСКОГО ДЕТЕКТИРОВАНИЯ С

ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМ РАЗДЕЛЕНИЕМ.

6.1. Каталитическое детектирование неорганических анионов после их хроматографического разделения.

6.1.1. Влияние элюента на каталитическое детектирование неорганических анионов.

6.1.2. Определение нитрит-иона в водах.

6.1.3. Определение нитрит-иона в огуречном и арбузном соках.

6.2. Каталитическое детектирование серосодержащих соединений после их хроматографического разделения.

6.2.1. Определение тиомочевины в лекарственных препаратах

Фамотидин» и «Квамател».

ВЫВОДЫ.

Актуальность работы. Определение малых количеств серосодержащих органических соединений, являющихся лекарственными препаратами или веществами токсичного действия - одна из проблем современной аналитической химии. В последнее время все большее применение находят производные тиомочевины. Они имеют важное значение для идентификации органических соединений (например, аминов, изоцианатов, аминокислот), кроме того, способны к комплексообразованию с некоторыми металлами. Большинство N-замещенных тиомочевин обладает фармакологическими свойствами, и их широко используют как антитуберкулёзные, противоопухолевые, противосудорожные, антивирусные и другие терапевтически активные вещества. Их применяют также при производстве лекарственных препаратов, синтетических смол, красителей. В то же время эти вещества могут оказывать вредное воздействие на организм человека, снижать активность ряда ферментов тканевого дыхания, угнетать функции щитовидной железы и органов кроветворения. Из всего вышесказанного очевидно, насколько важна разработка методов определения малых количеств соединений данного класса.

В условиях возрастающего внимания к проблемам охраны окружающей среды всё более актуальной становится задача разработки чувствительных методов определения токсичных неорганических анионов. Определение микроколичеств нитрита в водах, почвах, пищевых продуктах и кормах относится к числу важных экологических задач. В воде культурно-бытового пользования его ПДК равна 3.3 мг/л, а для рыбохозяйственных водоёмов - 0.08 мг/л.

Разрабатываемые методы определения анионов и биологически активных веществ, как упомянутые выше производные тиомочевины, должны не только отличаться высокой чувствительностью, но и быть селективными, экспрессными. Всеми этими свойствами обладают кинетические методы анализа в их каталитическом варианте. Существенным недостатком метода при анализе сложных объектов является мешающее влияние компонентов матрицы. Кроме того, каталитические методы часто неселективны, так как каталитическим действием могут обладать несколько близких по свойствам химических соединений.

Для многих систем изменения реакционных условий недостаточно для повышения селективности каталитических реакций и тогда каталитические методы анализа необходимо объединять с подходящими методами разделения, такими как отгонка, осаждение на коллекторе, экстракция или хроматография. Несомненно, что преимущество в этом случае может иметь объединение каталитических методов с хроматографией, как наиболее эффективной для разделения анионов и органических соединений. Выгодное сочетание низких пределов обнаружения каталитических методов и высокой селективности хроматографического разделения делает такой гибридный метод особенно перспективным для анализа сложных многокомпонентных смесей.

Цель работы: разработка способа каталитического детектирования серосодержащих органических веществ (тиомочевины и её производных) и неорганических анионов (нитрита, сульфита, сульфида, тиоцианата) после их хроматографического разделения.

Для достижения этой цели были решены следующие задачи:

- выбраны и оптимизированы новые индикаторные системы для каталитического определения неорганических анионов и серосодержащих соединений в статических и динамических условиях;

- выяснены особенности хроматографического удерживания и разделения тиомочевины и её производных;

- разработана система, сочетающая хроматографическое разделение неорганических анионов (нитрита, сульфида и сульфита) с их послеколоночным каталитическим детектированием;

- разработана система, сочетающая хроматографическое разделение серосодержащих органических соединений на примере тиомочевины и её производных с их послеколоночным каталитическим детектированием.

Научная новизна.

Обнаружено ускоряющее действие сульфит-, сульфид- и тиоцианат-ионов в реакции окисления бромпирогаллолового красного броматом калия.

Обнаружено каталитическое действие микроколичеств тиомочевины и её производных в реакциях окисления бромпирогаллолового красного броматом калия и пероксидом водорода, которые предложено использовать в качестве индикаторных в кинетических методах определения серосодержащих органических соединений.

Высказаны предположения о причинах ускоряющего действия серосодержащих органических соединений в исследованных окислительно-восстановительных реакциях.

Сочетание каталитического детектирования с хроматографическим разделением анионов и серосодержащих органических соединений использовано для создания чувствительного и селективного способа их определения.

Практическая значимость работы. Разработаны чувствительные каталитические методики определения нитрит-, сульфид-, сульфит-, тиоцианат-ионов, а также тиомочевины и её производных, которые могут быть использованы в химическом анализе как в статических, так и динамических условиях. В результате проведенных исследований предложен способ селективного и чувствительного каталитического детектирования тимочевины и её производных и неорганических анионов в сложных смесях после их хроматографического разделения, позволивший расширить круг определяемых соединений, а также снизить пределы их обнаружения. Этот подход может быть использован при решении различных задач, связанных с определением компонентов, присутствующих в низких концентрациях в сложных смесях, например, при контроле качества фармацевтической и пищевой продукции.

На защиту выносятся следующие положения:

- данные Изучения действия нитрит-, сульфид-, тиоцианат- и сульфит-ионов в реакции окисления бромпирогаллолового красного броматом калия в статических и динамических условиях;

- результаты исследования влияния тиомочевины и её производных на скорость реакций окисления бромпирогаллолового красного броматом калия или пероксидом водорода в статическом и динамическом режимах;

- данные изучения хроматографического поведения тиомочевины и её производных на гидрофобизированном силикагеле в обращённо-фазовом варианте высокоэффективной жидкостной хроматографии;

- способ каталитического детектирования ряда анионов (нитрит-, сульфит-, сульфид-) и серосодержащих органических веществ (тиомочевины и её производных) после их разделения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии;

- ионохроматографическое определение нитрит-иона в природных водах и овощных соках с использованием каталитического детектирования;

- хроматографическое определение тиомочевины в фармацевтических препаратах «Фамотидин» и «Квамател» с использованием каталитического детектирования.

Апробация работы. Основное содержание работы изложено в 12 публикациях. Результаты исследований доложены на 10th Russian-Japan Joint Symposium on Analytical Chemistry (Moscow - St. Petersburg, 2000), Всероссийском симпозиуме «Современные проблемы хроматографии» (Москва, 2002), Международном симпозиуме «Разделение и концентрирование в аналитической химии» (Россия, Туапсе, 2002), Международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов - 2002» (Москва, 2002), Европейской конференции по аналитической химии «Euroanalysis-12» (Germany, Dortmund, 2002), 3rd Int. Symposium on Separations in BioSciencies «100 Years of Chromatography» (Moscow, 2003), 10th international conference «Separation of ionic solutes» (Slovakia, Podbanske, High Tatras, 2003), на V Всероссийской конференции по анализу объектов окружающей среды «Экоаналитика-2003» с международным участием (Санкт-Петербург, 2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 3 статьи и 9 тезисов докладов на Международных и Российских конференциях и симпозиумах.

Структура и объём работы.

Диссертация состоит из введения, литературного обзора, 5 глав экспериментальной части, общих выводов, списка цитируемой литературы и приложения. Материал диссертации изложен на 190 странице текста, содержит

ВЫВОДЫ

Обнаружено каталитическое действие ряда неорганических анионов (нитрита, сульфида, сульфита, тиоцианата) в реакции окисления БПК броматом калия.

Обнаружено ускоряющее действие тиомочевины и её производных (ацетил-, метил, диметил-, этил-, диэтил-, фенил-, аллилтиомочевины) в реакциях окисления БПК броматом калия и пероксидом водорода. Разработан каталитический метод определения нитрит-, сульфид-, сульфит-и тиоцианат-ионов с использованием индикаторной реакции окисления БПК броматом калия в статических условиях с пределами обнаружения 0.0001, 0.03,0.4 и 0.4 мкг/мл, соответственно.

Разработан каталитический метод определения ряда серосодержащих органических соединений: тиомочевины, ацетил-, метил-, диметил-, этил-, диэтил-, аллил- и фенилтиомочевин от 0.01 до 25 мкг/мл с использованием реакции окисления БПК броматом калия и пероксидом водорода в статических условиях.

Разработан каталитический метод определения нитрит-, сульфид-, сульфит-и тиоцианат-ионов с использованием указанной реакции в проточно-инжекционном режиме с пределами обнаружения 0.005, 0.2, 0.6 и 1.5 мкг/мл, соответственно, характеризующийся высокой производительностью.

Разработан каталитический метод определения в проточно-инжекционном варианте ацетилтиомочевины, тиомочевины, метилтиомочевины, этилтиомочевины, аллилтиомочевины и фенилтиомочевины с пределами обнаружения 0.1; 0.1; 0.9; 1.5; 3.0; 8.0 мкг/мл. Высказаны предположения о причинах ускоряющего действия тиомочевины и её производных в реакциях окисления БПК броматом калия и пероксидом водорода. Впервые разработан каталитический способ детектирования органических соединений (на примере замещённых тиомочевин) после их хроматографического разделения. Разработан способ селективного определения ацетилтиомочевины в присутствии других производных тиомочевины с пределом обнаружения 0.1 мкг/мл.

8. Разработан способ каталитического детектирования нитрит-, сульфид- и сульфит-ионов после их ионохроматографического разделения с пределами обнаружения 0.04, 0.3 и 1.5 мкг/мл, соответственно.

9. Показана возможность чувствительного и селективного определения нитрит-иона в сложных матрицах (арбузном и огуречном соках) с применением каталитического детектирования после хроматографического разделения компонентов.

10. Показана возможность чувствительного и селективного определения тиомочевины в лекарственных препаратах «Фамотидин» и «Квамател» разработанным способом каталитического детектирования с использованием реакции окисления БПК пероксидом водорода после хроматографического разделения компонентов. А н

1. Fielden P. R. Recent development in LС detector technology. // J. Chromatogr. Sci.1992. V.30. №2. P.45-52.

2. Бражников В. В. Детекторы для хроматографии. М.: Машиностроение. 1992.320 с.

3. Стыскин Е. Л, Ициксон Л. Б., Брауде Е. В. Практическая высокоэффективнаяжидкостная хроматография. М.: Химия. 1986. 288 с.

4. Fujinari Е. М., Courthaudon L. О. Nitrogen-specific liquid chromatography detectorbased on chemiluminescence. // J. Chromatogr. 1992. V.592. №1. P.209-214.

5. Ryerson Т. В., Dunham A. J., Barkley R. M., Sievers R. E. Sulfur-selective detectorfor liquid chromatography based on sulfur monoxide-ozone chemiluminescence. // Anal. Chem. 1994. V.66. №18. P.2841-2851.

6. Howard A. L., Thomas C. L., Taylor L. T. Optimization of flame-based sulfurchemiluminescence detection with micro-column high-performance reversed-phase liquid chromatography. //Anal. Chem. 1994. V.66. №9. P.1432-1437.

7. Ewing A. G., Mesaros J. M., Gavin P. F. Electrochemical detection in micro-columnseparations. //Anal. Chem. 1994. V.66. №9. P.527A-537A.

8. Baldwin R. P., Thomsen K. N. Chemically modified electrodes in liquid chromatography and flow-injection analysis. detection. // Talanta. 1991. V.38. №1. P.l-16.

9. Johnson D. C., LaCourse W. R. Liquid chromatography with pulsed electrochemicaldetection at gold and platinum electrodes. // Anal. Chem. 1990. V.62. №10. P.589A-597A.

10. Kaudewitz H. Mass spectrometer as HPLC detector. // Labor. Praxis. 1992. V.16. №7. P.730-733.

11. Kebarle P., Tang L. From ions in solution to ions in the gas phase. The mechanism of electrospray mass spectrometry. // Anal. Chem. 1993. V.65. №22. P.972A-986A.

12. Burlingame A. L., Boyd R. K., Gaskell S. J. Mass spectrometry. // Anal. Chem. 1996. V.68. №12. P.599R-651R.

13. Schmid E. R. Chromatography and mass spectrometry an overview. // Chromatogr. 1990. V.30. №9-10. P.573-576.

14. Каменцева О. В., Золотова Г. А., Долманова И. Ф. Каталитические методы определения органических соединений. // Журн. аналит. химии. 1986. Т.38. №10. С. 1749-1765.

15. Перес-Бендито Д., Сильва М. Кинетические методы в аналитической химии. М.: Мир, 1984. 395 с.

16. Мюллер Г., Отто М., Вернер Г. Каталитические методы в анализе следов элементов. М.: Мир, 1983. с.30-31, 87-95.

17. Greinke R. A., Mark Н. В. Kinetic aspects of analytical chemistry. // Anal. Chem. 1976. V.48. №5. P.87R-93R.

18. Greinke R. A., Mark H. B. Kinetic aspects of analytical chemistry. // Anal. Chem. 1978. V.50. №5. P.70R-76R.

19. Mottola H. A., Mark H. B. Kinetic determinations and some kinetic aspects of analytical chemistry. // Anal. Chem. 1980. V.52. №5. P.31R-40R.

20. Mottola H. A., Mark H. B. Kinetic determinations and some kinetic aspects of analytical chemistry. // Anal. Chem. 1982. V.54. №5. P.62R-83R.

21. Mottola H. A., Mark H. B. Kinetic determinations and some kinetic aspects of analytical chemistry. // Anal. Chem. 1984. V.56. №5. P.96R-112R.

22. Mottola H. A., Mark H. B. Kinetic determinations and some kinetic aspects of analytical chemistry. // Anal. Chem. 1986. V.58. №5. P.264R-279R.

23. Mottola H. A., Perez-Bendito D., Mark H. B. Kinetic determinations and some kinetic aspects of analytical chemistry. // Anal. Chem. 1988. V.60. №12. P.181R-200R.

24. Mottola H. A., Perez-Bendito D., Mark H. B. Kinetic determinations and some kinetic aspects of analytical chemistry. // Anal. Chem. 1990. V.62. №12. P.441R-461R.

25. Mottola H. A., Perez-Bendito D. Kinetic determinations and some kinetic aspects of analytical chemistry. // Anal. Chem. 1992. V.64. №12. P.407R-428R.

26. Mottola H. A., Perez-Bendito D. Kinetic determinations and some kinetic aspects of analytical chemistry. //Anal. Chem. 1994. V.66. №12. P.131R-162R.

27. Mottola H. A., Perez-Bendito D. Kinetic determinations and some kinetic aspects of analytical chemistry. //Anal. Chem. 1996. V.68. №12. P.257R-289R.

28. Crouch S. R., Cullen T. F., Scheeline A., Kirkor E. S. Kinetic determinations and some kinetic aspects of analytical chemistry. // Anal. Chem. 1998. V.70. №12. P.53R-106R.

29. Crouch S. R., Scheeline A., Kirkor E. S. Kinetic determinations and some kinetic aspects of analytical chemistry. //Anal. Chem. 2000. V.72. №12. P.53R-70R.

30. Hawk J. P., McDaniel E. L., Parish T. D., Simmons К. E. Kinetic method for quantitative determination of individual organic peroxides in peroxide mixtures. // Anal. Chem. 1972. V.44. №7. P.1315-1317.

31. Ушакова H. M., Долманова И. Ф. Кинетические методы определения неметаллов. // Журн. аналит. химии. 1983. Т.38. №8. С.1515-1531.

32. Марк Г., Рехниц Г. Кинетика в аналитической химии. М.: Мир, 1972. 368 с.

33. Крейнгольд С. У. Каталиметрия в анализе реактивов и веществ особой чистоты. М.: Химия, 1983. 189 с.

34. Антоновский В. JI. Кинетические методы в органическом анализе. // Журн. Всесоюзн. хим. об-ва. им. Д.И. Менделеева. 1980. Т.25. №6. С.663-668.

35. Дружинин А. А. Кинетические методы анализа органических соединений. // Журн. Всес. хим. об-ва им. Д.И. Менделеева. 1970. Т. 15. №5. С.529-536.

36. Koupparis М. A., Walzak К. М., Malmstadt Н. V. Kinetic determination of nitrite in wares by using a stopped-flow analyzer. // Analyst. 1982. V.107. №6. P. 13091315.

37. Karayannis M. I., Piperaki E.A., Maniadaki M. M. Kinetic determination of nitrite based on the Griess reaction and the stopped-flow technique. // Anal. Lett. 1986. V.19. №1-2. P. 13-23.

38. Ensafi A. A., Keyvanfard M. Selective kinetic spectrophotometric determination of nitrite in food and water. // Anal. Lett. 1994. V.27. №1. P.169-182.

39. Afkhami A., Mogharnesband A. A. Kinetic spectrophotometric determination of trace amounts of nitrite ion using its reaction with neutral red. // Anal. Lett. 1994. V.27. №5. P.991-1000.

40. Huang Z., Korenaga Т., Helaleh M. I. H. Kinetic spectrofluorimetric determination of nitrite in water samples and nitrogen dioxide in the atmosphere sampled by the liquid droplet method. // Mikrochim. Acta. 2000. V.134. №3-4. P.179-183.

41. Utsumi S., Okutani Т., Sakuragawa A., Kensotsu A. Photometric determination of a trace amount of nitrite by its kinetic effect. // Bui. of the Chem. Soc. of Japan. 1978. V.51. №12. P.3496-3499.

42. Zhu Z., Gu Z. Simultaneous determination of iodide and nitrite by catalytic kinetics. // Analyst. 1993. V.l 18. №1. P.105-108.

43. Manzoori J., Sorouraddin M., Haji-Shabani A. Spectrophotometric determination of nitrite based on its catalytic effect on the oxidation of carminic acid by bromate. // Talanta. 1998. V.46. №9. P.1370-1386.

44. Jiang M., Jiang F., Duan J., Tang X., Zhao Z. Spectrophotometric determination of trace nitrite based on catalytic oxidation of thionine by potassium bromate. // Anal. Chim. Acta. 1990. V.234. №2. P.403^07.

45. Afkhami A., Jalali F. Spectrophotometric determination of trace amounts of nitrite ion based on its catalytic effect in the reaction between thymol blue and bromate. // Microchem. J. 1997. V.51. №2. P.224-230.

46. Pettas I. A., Lafis S. I., Karaynnis M. I. Reaction rate method for determination of nitrite by applying a stopped-flow technique. // Anal. Chim. Acta. 1998. V.376. №2. P.331-337.

47. Ensafi A. A., Rezaii B. Kinetic-spectrophotometric determination of nitrite by its catalytic effect on the oxidation of brilliant cresyl blue by bromate. // Microchem. J. 1994. V.50. №2. P. 169-177.

48. Mohamed A. A., Shahat E. I., Fukasawa Т., Iwatsuki M. Sensitive determination of nitrite using its catalytic effect on the bromate oxidation of prochlorperazine. // Analyst. 1996. V.121. №1. P.89-92.

49. Ensafi A. A., Samimifar M. Kinetic spectrophotometric determination of low levels of nitrite by catalytic reaction between pyrogallol red and bromate. // Talanta. 1993. V.40. №9. P.1375-1378.

50. Montes R., Laserna J. J. Spectrophotometric reaction-rate method for the determination of nitrite in waters with pyridine-2-carboxaldehyde 2-pyridylhydrazone. // Talanta. 1987. V.34. №12. P.1021-1026.

51. Montes R., Laserna J. J. Kinetic determination of nitrite in drinking water by fluorometry. //Anal. Scien. 1991. V.7. №3. P.467-471.

52. Liang В., Iwatsuki M., Fukasawa T. Catalytic-spectrophotometric determination of nitrite using the chlorpromazine hydrogen peroxide redox reaction in acetic acid medium. // Analyst. 1994. V.l 19. №9. P.2113-2117.

53. Liang В., Iwatsuki M., Fukasawa T. Mechanism of nitrite-catalysed oxidation of chlorpromazine with hydrogen peroxide and/or dissolved oxygen used for the determination of nitrite. //Analyst. 1995. V.120. №2. P.543-548.

54. Jiang Z. L., Qin H. C., Wu D. Q. Catalytic kinetic determination of ultratrace amounts of nitrite with detection by linear-scan voltammetry at a DME dropping-mercury electrode. // Talanta. 1992. V.39. №10. P. 1239-1244.

55. Ensafi A. A., Kolagar M. S. Catalytic kinetic determination of ultratrace amounts of nitrite with detection by differential pulse polarographic method. // Anal. Lett. 1995. V.28. №7. P. 1245-1260.

56. Kiba N., Furusawa M. Improved method for titrimetric determination of sulphide by the iodine-azide reaction. // Talanta. 1981. V.28. №8. P.601-602.

57. Бабко А. К., Сегеда А. С. Использование индуцированной йод-азидной реакции для титрования сульфида. // Журн. аналит. химии. 1968. Т.23. № 5. С.727-731.

58. Puacz W., Szahun W., Link К. Catalytic determination of sulfide in blood. // Analyst. 1995. V.120. №3. P.939-941.

59. Kiba N., Nishijima M., Furusawa M. Enthalpimetry with catalytic reactions. I. Determination of sulphide solution by the iodine-azide reaction. // Talanta. 1980. V.27. №12. P.1090-1092.

60. Ramis-Ramos G., Villanueva-Camanas R. M., Gozalvez-Rodriguez J. C., Garcia-Alvarez-Coque M. C. Enthalpimetric determination of sulphide and thiosulphate by the catalysis of the iodine-azide reaction. // Thermochim. Acta. 1987. V.112. №2. P.171-177.

61. V 63. Weisz H., Meiners W., Fritz G. Double indication in catalytic-kinetic analysis:simultaneous photometric and thermometric indication of the iodine-azide reaction in closed and flowing systems. // Anal. Chim. Acta. 1979. V.107. №2. P.301-307.

62. Бабко А. К., Максименко Т. С. Определение микроколичеств сульфидной серы по её каталитическому действию на восстановление ионов серебра двухвалентным железом. // Журн. аналит. химии. 1967. Т.22. №4. С.570-575.

63. Weisz Н., Pantel S., Marquadt G. Catalytic-kinetic absorptiostat technique with the "TV indigo carmine hydrogen peroxide reaction as the indicator reaction. // Anal.

64. Chim. Acta. 1982. V.143. №2. P.177-184.

65. Тамарченко JI. M. Определение микроколичеств некоторых серосодержащих ионов кинетическим методом. // Журн. аналит. химии. 1978. Т.ЗЗ. №4. С.824-827.

66. Ludwig Н., Weiz Н., Lenz Т. Kontinuierliche katalytisch-kinetische bestimmung silber und sulfid im p.p.m.-bereich unter verwendung einer durchflusszelle. // Anal. Chim. Acta. 1974. V.70. P.359-364.

67. Луковская H. M., Маркова Л. В. Определение микроколичеств сульфидной серы по тушению хемилюминесценции люминола с йодом. // Журн. аналит. химии. 1969. Т.24. №12. С.1862-1867.

68. Sanchez-Pedreno С., Garcia М. S., Albero М. I., Tobal L. Kinetic determination of sulfide in water and air samples. // Int. J. Environ. Anal. Chem. 1996. V.62. №4. P.273-279.

69. Haghighi В., Safavi A. Kinetic spectrophotometric determination of sulfide, using in-cuvette mixing and titration techniques with computerized data acquisition. //

70. Ц Fresenius'. J. Anal. Chem. 1999. V.365. №8. P.654-657.

71. Safavi A., Rahmani A., Hosseini-Naeemie V. Kinetic-spectrophotometric determination of sulfide by its reaction with resazurin. // Fresenius'. J. Anal. Chem. 1996. V.354. №4. P.502-504.

72. Safavi A., Ramezani Z. Kinetic spectrophotometry determination of traces of sulfide. // Talanta. 1997. V.44. №7. P.1225-1230.

73. Safavi A., Mirzaee M. Kinetic spectrophotometric determination of trases of sulfide in nonionic micellar medium. // Fresenius'. J. Anal. Chem. 2000. V.367. №7. P.645-648.

74. Safavi A., Ensafi A. A. Kinetic spectrophotometric determination of traces of sulphite. //Anal. Chim. Acta. 1991. V.252. №1-2. P.121-126.

75. Kurzawa J., Janowicz K., Kurzawa Z. Determination of microgram amounts of cyanide by the induced iodine-azide reaction with the use of sodium tetrathionate. //Anal. Chim. Acta. 1992. V.263. №1-2. P.155-158.

76. Zhang G., Li В., Fan J., Feng S. L. Determination of trace thiocyanate in body fluids by a kinetic fluorimetric method. // Talanta. 1997. V.44. №7. P. 1141-1147.

77. Sanchez-Pedreno C., Hernandez-Cordoba M., Vinas P. Catalytic titration of iodide, bromide and thiocyanate by use of the silver-catalysed phloxine persulphate reaction. // Talanta. 1985. V.32. №3. P.218-220.

78. Raschig F. Neue Reaktionen der Stickstoffwasserstoffsaure. // Chem. Ztg. 1908. V.99. P. 1203.

79. Kurzawa J. Oznacznie micko- i nanogramowich ilosci zwiazkow siarki(II) za pomoca ciaglej analizy przeplywowej z zastosowaniem indukowanej reakcji iodo-azydkowej. // Chem. Anal. 1988. V.33. №5. P.771-777.

80. Kurzawa Z., Krazymien M. The iodine-azide reaction induced by thioures and application in chemical analysis. // Chem. Anal. 1968. V.13. №5. P.1047-1057.

81. Kurzawa J., Kurzawa Z. A new determination technique of divalent sulphur compounds by induced iodine-azide reaction. // Chem. Anal. 1986. V.31. №1. P.45-52.

82. Kurzawa Z., Zietkiewicz M. Determination of microgramme amounts of thioammeline by means of induced reaction of sodium azide with iodine. // Chem. Anal. 1975. V.20. №4. P.707-714.

83. Kurzawa Z., Kurzawa J., Swit Z. Determination of small amounts of bismuthiol(I) and bismuth(III) by means of the induced sodium azide-iodine reaction. // Chem. Anal. 1978. V.23. №3. P.409-415.

84. Kurzawa Z., Matusiewicz H., Matusiewicz K. Determination of microamounts of mercaptopurines (MP) by means of induced sodium azide-iodine reaction. // Chem. Anal. 1974. V.19. №6. P. 1175-1182.

85. Kurzawa Z., Kubaszewski E. Determination of microgram amounts of sodium diethyldithiocarbamate by means of iodine-azide reaction. // Chem. Anal. 1974. V.19. №2. P.263-269.

86. Kurzawa Z., Puacz J. Determination of the stability of sodium tetramethylene dithiocarbamate in dilute aqueous solutions by means of the sodium azide-iodine reaction. // Chem. Anal. 1978. V.23. №3. P.417-420.

87. Kurzawa Z., Krzyminska A. Determination of microgramme amounts of N-mono-alkyldithiocarbamates by inducing sodium azide-iodine reaction. // Chem. Anal. 1977. V.22. №4. P.671-681.

88. Kurzawa Z., Suszka A. Ergothioneine induced sodium azide and iodide reaction and its application for chemical analysis. // Chem. Anal. 1968. V.13. №4. P.743-753.

89. Kurzawa Z., Kurzawa J. Simultaneous determination of microamounts of cysteine, glutathione and ergothioneine by means of induced iodine-azide reaction. // Chem. Anal. 1974. V.19. №4. P.755-763.

90. Kurzawa Z., Kurzawa J., Swit Z. Determination of lipoic acid by means of the induced sodium azide-iodine reaction. // Chem. Anal. 1977. V.22. №5. P.961-964.

91. Kurzawa Z., Szukalska A. Determination of microgramme amounts of rubeanic acid and its derivatives by means of the induced sodium azide-iodine reaction. // Chem. Anal. 1976. V.21. №2. P.297-302.

92. Kurzawa Z., Krzyminska A. Determination of sulphathiazole by induced reaction of sodium azide with iodine. // Chem. Anal. 1973. V.18. №6. P.l 103-1108.

93. Kurzawa Z., Lemieszek Z. Oznaczanie etioniny za pomoca reakcji azydku sodowego zjodem. // Chem. Anal. 1975. V.20. №2. P.147-151.

94. Маркова JI. В., Гасивцева Н. 3. Каталитическое фотометрическое определение микроколичеств веществ, содержащих сульфгидрильную серу по йод-азидной реакции. В кн.: Аналитическая химия и экстракционные процессы. Киев: Наук, думка. 1970. с.96-99.

95. Richmond J., Rainey G., Meloan С. E. Spectrophotometric kinetic determination of thioketones. // Anal. Lett. 1976. V.9. №1. P. 105-111.

96. Dahl W. E., Pardue H. L. Kinetics of cystine catalysis of the iodine-azide reaction. //Anal. Chem. 1965. V.37. №11. P.1382-1386.

97. Whitman D. W., Whitney R. Mc. Catalytic activity of cysteine and related compounds in the iodine-azide reaction. // Anal. Chem. 1953. V.25. №10. P. 1523-1527.

98. Габдуллин M. Г., Гарифзянов A. P., Торопова В. Ф. Каталитическое действие дитиокислот фосфора в йод-азидной реакции. // Изв. вузов. Химия и технология. 1984.1.21. №2. С. 181-183.

99. Бырько В. М., Тихонова Т.И., Павлова Г. И. Определение дитиокарбаматов диаминов и некоторых тяжёлых металлов с использованием йод-азидной реакции. //Журн. аналит. химии. 1976. Т.31. №6. С.1086-1089.

100. Kurzawa Z., Dobrzanska-Jajszczyk A. Oznaczanie mikroilosci kwasow thiobarbiturowych za pomoca indukowanej reakcji azydku sodu z jodem. // Chem. Anal. 1974. V.19. №5. P.1071-1077.

101. Kurzawa Z., Karska B. Determination of microgramme amounts of disubstituted dithiocarbamates by means of the sodium azide-iodine reaction. // Chem. Anal. 1980. V.25. №3. P.465-468.

102. Pantel S. Catalytic-kinetic determination of thioureas by a biamperostatic method with iodine-azide as indicator reaction. // Anal. Chim. Acta. 1983. V.152. P.215-222.

103. Ciesielski W. Kinetyczne oznaczanie witaminy Bj i cystyny w ukldzie otwartym. // Chem. Anal. 1988. V.33. №6. P.987-992.

104. Ciesielski W., Jedrzejewski W. Kulometryczne oznaczanie nanogramowych ilosci zwiazkow siarki z wykorzystaniem indukowanej reakcji jodo-azydkowej. // Chem. Anal. 1987. V.32. №5. P.853-856.

105. Ciesielski W. Zastosowanie elektrodowego wytwarzania substratu do kinetycznych oznaczen katalizatiriw w ukladzie otwartym. Oznaczanie cystyy i jiniw jodkowych. // Chem. Anal. 1987. V.32. №6. P.913-918.

106. Medina-HernandezM. J., Garcia-Alvarez-Coque M. C., Ramis-Ramos G., Mongay-Fernandez C. Catalytic-enthalpimetric determination of diethyldithiocarbamate (DDTC) and nickel(II) using the iodine-azide reaction. // Thermochim. Acta. 1985. V.90. P.277-285.

107. Wronski M., Goworek W. Identification of divalent sulphur compounds by an enthalpimetric approach to the iodine-azide reaction. // Analyst. 1987. V.l 12. №3. P.333-334.

108. Weisz H., Meiners W. Kinetisch-katalytische Bestimmungen in einem Zweiphasensystem unter Verwendung eines Fallrohres. // Talanta. 1979. V.26. №8. P.769-772.

109. Puacz W. New technique for micro-determination of sulphur compounds by the iodine-azide reaction in aqueous and non-aqueous media with a modified Coleman nitrogen analyser. // Mikrochim. Acta. 1981. V.2. №1-2. P.155-162.

110. Ciesielski W. Kinetyczne oznaczanie cystyny z wykorzystaniem reakcji jodo-azydkowej. // Chem. Anal. 1987. V.32. №1-2. P.169-174.

111. Ciesielski W. Spektrofotometryczne oznaczanie witaminy Bj z wykorzystaniem indukowanej reakcji jodo-azydkowej. // Chem. Anal. 1986. V.32. №3. P.469-473.

112. Puacz W. Gas-chromatographic determination of divalent sulphur compounds using the catalysed iodine-azide reaction in non-aqueous media. // Fresenius. Z. Anal. Chem. 1987. V.329. №1. P.43-46.

113. Харитонова И. Ю., Золотова Г. А., Долманова И. Ф. Определение серосодержащих органических соединений каталитическим методом. // Журн. аналиг. химии. 1992. Т.47. №2. С.366-371.

114. Золотова Г. А., Жукова JL Н., Талуть И. Е., Кравцова М. И., Трофимчук А. К. Изучение свойств химически модифицированных сорбентов каталитическим методом. // Журн. аналит. химии. 1992. Т.47. №5. С.783-785.

115. Бабко А. К., Максименко Т. С. Определение микроколичеств сульфидной серы по её каталитическому действию на восстановление ионов серебра двухвалентным железом. //Журн. аналит. химии. 1967. Т.22. №4. С.570-575.

116. Долманова И. Ф.} Золотова Г. А., Мазко Т. Н., Дымшакова Г. М., Трунов П. П. Кинетические методы определения микроколичеств сероорганических соединений. //Журн. аналит. химии. 1977. Т.32. №4. С.807-811.

117. Aleksiev A. A., Angelova М. G. Novel catalytic colorimetric method for determination of nanomolar cysteine concentrations in amino-acid mixtures. // Mikrochim. Acta. 1983. V.2. №5-6. P.369-379.

118. Hernandez-Cordoba M., Vinas P., Sanchez-Pedreno C. Kinetic determination of traces of cysteine by its inhibitory effect on the silver-catalysed phloxine -persulphate reaction. // Talanta. 1985. V.32. №3. P.221-223.

119. Phull M., Nigam P. C. Kinetic determination of micro amounts of some sulphurcontaining ligands. // Talanta. 1983. V.30. №6. P.401^06.

120. Mottola H. A. Continuous-flow analyses revisited. // Anal. Chem. 1981. V.53. №12. P.1312A-1314A.

121. Betteridje D. Flow injection analysis. // Anal. Chem. 1978. V.50. №9. P.832A-846A.

122. Ruziska J. Flow injection analysis from test tube to integrated microconduits. // Anal. Chem. 1983. V.55. №11. P.1040A-1053A.

123. Silva M. Recent strategies in automated reaction rate based determinations. // Analyst. 1993. V.l 18. №6. P.681-688.

124. Фицев И. M., Будников Г. К. Проточно-инжекционый анализ с использованием каталитических реакций в экоаналитическом мониторинге. // Завод, лаб. 1999. Т.65. №12. С.3-15.

125. Hooley D. J., Dessy R. E. Continuous flow techniques in flow injection analysis. //Anal. Chem. 1983. V.55. №2. P.313-320.

126. Steward К. K. Flow injection analysis. New tool for old assays. New approach to analytical measurements. //Anal. Chem. 1983. V.55. №9. P.931A-940A.

127. Шпигун JI. К. Проточно-инжекционный анализ. // Журн. аналит. химии. 1990. Т.45. №6. С.1045-1091.

128. Ensafi A. A., Dehaghei G. B. Ultra-trace analysis of nitrite in food samples by flow injection with spectrophotometric detection. // Presenilis'. J. Anal. Chem. 1999. V.363.№1.P.131-133.

129. Ensafi A. A., Kazemzadeh A. Simultaneous determination of nitrite and nitrate in various samples using flow injection with spectrophotometric detection. // Anal. Chim. Acta. 1999. V.382. №1-2. P.15-21.

130. Perez-Ruiz Т., Martinez-Lozano C., Tomas V. Kinetic-spectrofluorimetric determination of nitrite and nitrate at the nanograms per millilitre level by manual and flow-injection methods. //Anal. Chim. Acta. 1992. V.265. №1. P. 103-110.

131. Zhang Z. Q., Gao L. J., Zhan H. Y. Flow-injection catalytic spectrophotometric determination of nitrite using the redox reaction between Naphthol Green В and potassium bromate. // Talanta. 1998. V.47. №2. P.497-501.

132. Zhang Z. Q., Gao L. J., Zhan H. Y., Liu Q. G. Catalytic simultaneous spectrophotometric determination of nitrite and nitrate with a flow injection system. // Anal. Chim. Acta. 1998. V.370. №1. P.59-63.

133. Chen H., Fang Y. J., An Т. C., Jin X. L. Flow-injection catalytic spectrophotometric determination of trace amounts of nitrite. // Anal. Lett. 1999. V.32. №14. P.2887-2897.

134. Chen X. G., Wang К. Т., Hu Z. D., Zhao Z. Kinetic flow-injection-spectrophotometric determination of nitrite by its catalytic effect on the oxidation of chlorophosphonazo-pN by bromate. // Anal. Lett. 1996. V.29. №11. P.2015-2023.

135. Icardo С. M., Mateo J. V., Calatayud M. J. Determination of nitrite by inhibition of the chemiluminescence of acriflavine in a flow-injection assembly. // Analyst. 2001. V.126. №8. P. 1423-1427.

136. Kamson О. F. Flow-injection determination of some sulphur anions via the catalysed iodine azide reaction. // Anal. Chim. Acta. 1988. V.211. №1-2. P.299-303.

137. Kawakubo S., Iwatsuki M., Fukasawa T. Flow system based on sequential delivery of air-sandwiched solutions into a micro cell for spectrophotometric catalytic analysis. // Anal. Chim. Acta. 1993. V.282. №2. P.389-395.

138. Tanaka A., Miyazaki M, Deguchi T. New simultaneous catalytic determination of thiocyanate and iodide by flow injection analysis. // Anal. Let. 1985. V.18. №6. P.695-705.

139. Kurzawa J. Determination of sulphur(II) compounds by flow-injection analysis with application of the induced iodine-azide reaction. // Anal. Chim. Acta. 1985. V.173. P.343-348.

140. Obrezkov O. N., Shpigun O. A., Zolotov Yu. A., Shlyamin V. I. Ion-chromatographic determination of anions, especially sulphur-containing anions, with conductometric and kinetic detection. // J. Chromatogr. 1991. V.558. №1. P.209-213.

141. Miura Y., Fukasawa K., Koh T. Determination of sulfur anions at the ppb level by ion chromatography utilizing their catalytic effects on the postcolumn reaction of iodine with azide. // J. Chromatogr. A. 1998. V.804. №1-2. P.143-150.

142. Miura Y., Watanabe M. Ion-pair chromatography of polythionates and thiosulfate with detection based on their catalytic effects on the postcolumn azide-iodine reaction. // J. Chromatogr. A. 2001. V.920. №1. P. 163-171.

143. Kurzawa Z., Dobrzanska-Jajszczyk A. Oznaczanie mikroilosci kwasow thiobarbiturowych za pomoca indukowanej reakcji azydku sodu z jodem. // Chem. Anal. 1974. V.19. №5. P.1071-1077.

144. Kibo N., Suto T. Furusawa M. Enthalpimetry with catalytic reactions-II. Determination of thioureas by the iodine-azide reaction after thin-layer chromatographic separation. // Talanta. 1981. V.28. №2. P. 115-118.

145. Dionex Product Selection Guide. 1994 95. // Dionex Corporation. Sunnyvale. USA. 1995. P.54.

146. For separation sciences. 01/02 international catalog. // Phenomenex. Torrance. U.S.A. 2002. P.153-155.

147. Vins I., Saari-Nordhaus R. Anion chromatography on hydroxyethyl methacrylate based sorbents. // J. Chromatogr. 1993. V.640. №1-2. P.49-56.

148. Яцимирский К. Б. Кинетические методы анализа. М.: Химия, 1967. с.190.

149. Энгельгард X. Жидкостная хроматография при высоких давлениях. М.: Мир, 1980. 245 с.

150. Дёрффель К. Статистика в аналитической химии. М.: Мир, 1994. 267 с.

151. Бланк А. Б. О нижней границе определяемых содержаний и пределе обнаружения. // Журн. аналит. химии. 1979. Т.34. №1. С.5-9.

152. Khaskheli A. A., Mastoi G. М., Ansari I. A., Khuhawar М. Y. Kinetic measurements of nitrite by bromopyrogallol red. // J. Chem. Soc. Pak. 1997. V. 19. №2. P.l 18-121. Цит. По Anal Abst. 6003D00101.

153. Sun A. L., Liu D. J., Liu R. M. Kinetic spectrophotometric determination of nitrite by catalytic reaction between bromopyrogallol red and dissolved oxygen. // Fenxi. Shiyanshi. 1996. V.15. №2. P.56-58. Цит. По Anal. Abst. 5808D00094J.

154. IUPAC Stability Constants Database. 1993. Version 1.38 Academic Software -Royal Society of Chemistry - IUPAC.

155. Яцимирский К. Б., Калинина В. Е. О влиянии щавелевой кислоты на каталитические свойства соединений ванадия (V) в некоторых окислительно-восстановительных реакциях. // Журн. неорганич. химии. 1964. Т.9. №6. С.1328-1332.

156. Шпигун О. А., Золотов Ю. А. Ионная хроматография. М.: МГУ, 1990. 198 с.

157. Лурье Ю. Ю. Справочник по аналитической химии. М.: Химия. 1989.448 с.

158. Williams R. J. Determination of inorganic anions by ion chromatography with ultra-violet absorbance detection. // Anal. Chem. 1983. V.55. №6. P.851-854.

159. Смоленков А. Д. Ионохроматографическое определение слабых неорганических кислот с кондуктометрическим и спектрофотометрическим детектированием. / Дисс. на соиск. уч. ст. канд. хим. наук. Москва, 1998. 138

160. Rethmeier J., Neumann G., Stumpf C., Rabenstein A., Vogt C. Determination of thiourea concentrations in industrial water and natural samples using reversed-phase high-perfomance liquid chromatography. // J. Chromatogr. 2001. V.934. №1. P. 129-134.

161. Grigorova В., Wright S.A. Simultaneous determination of thiourea and formamidine disulphide using reversed-phase high-performance liquid chromatography and a UV detector. // J. Chromatogr. 1986. V.368. №2. P.444-449.

162. Модифицированные кремнезёмы в сорбции, катализе и хроматографии. Под. ред. Лисичкина Г.В. М.: Химия. 1986. 286 с.

163. Yang X. R., Qiao Z. С., Wei W. Z., Yao S. Z. Bulk acoustic wave sensor for non-suppressed ion-chromatographic determination of nitrate and other inorganic anions in vegetables. // Anal. Lett. 1998. V.31. №2. P.207-219.

164. Santillana M. I., Ruiz E., Nieto M. Т., De-Alba M. High-performance ion chromatography determination of nitrite and nitrate in foodstuffs. // J. Liq. Chromatogr. 1993. V.16. №7. P. 1561-1571.

165. Bosch-Bosch N., Garcia-Mata M., Penuela M. J., Ruiz-Galan Т., Lopez-Ruiz B. Determination of nitrite levels in refrigerated and frozen spinach by ion chromatography. // J. Chromatogr. A. 1995. V.706. №1-2. P.221-228.

166. Chen X. H., Ruan С. M., Kong J. L., Deng J. Q. Amperometric determination of nitrite based on reaction with 3-mercaptopropionic acid. // Anal. Chim. Acta. 1999. V.382. №1-2. P. 189-197.

167. Гурьев И. А., Лизунова Г. M., Кузенкова Г. В. Потенциометрическое определение нитратов и нитритов. // Журн. аналит. химии. 1993. V.48. №1. Р.121-124.

168. Lyons D. J., McCallum L. E., Osborne W. J., Nobbs P. E. Assessment of procedures for the determination of nitrate and nitrite in vegetable extracts. // Analyst. 1991. V.l 16. №2. P. 153-157.

169. Koch S., Peisker S. Spectrophotometric determination of iodide and nitrite with iron(III) -1,10-phenanthroline. // Z. Chem. 1990. V.30. №6. P.225-226.

170. Husain S., Khalid S., Nagaraju V., Rao R. N. High-performance liquid-chromatographic separation and determination of small amounts of process impurities of famotidine in bulk drugs and formulations. // J. Chromatogr. A. 1996. V.743. №2. P.328-334.

171. Ahmad A. K. S., Kawy M. A., Nebsen M. Spectrophotometric and spectrofluorimetric determination of famotidine and ranitidine using 1,4-benzoquinone reagent. // Anal. Lett. 1999. V.32. №7. P. 1403-419.

172. Novakovic J. High-performance thin-layer chromatography for the determination of ranitidine hydrochloride and famotidine in pharmaceuticals. // J. Chromatogr. A. 1999. V.846. №1-2. P. 193-198.

173. Kamath В. V., Shivram K., Vangani S. Flow-injection analysis of famotidine with spectrophotometric detection. // Anal. Lett. 1993. V.26. №10. P.2183-2191.