Клонирование различий между геномами тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

IV. Выводы.

1. Разработан первый в мировой практике универсальный и высокоэффективный метод клонирования различий между геномами высших организмов (метод дифференциального анализа выборок, ДАВ).

2. Показана возможность использования метода для прямой идентификации изменений в последовательности ДНК опухолевых клеток, генетически направленного клонирования полиморфных ДНК маркеров сцепленных с моногенным признаком и поиска новых патогенов.

3. Проведён систематический анализ генетических изменений в клетках опухолей почек и толстой кишки.

4. Обнаружен и охарактеризован ген LRP-DIT, инактивируемый при развитии широкого круга агрессивных опухолей.

IV. Заключение

Разработка метода дифференциального анализа выборок открывает новые возможности для решения целого ряда генетических задач. Полученные результаты, а также опыт использования метода в других лабораториях, убедительно показали эффективность применения ДАВ для обнаружения новых патогенов, генетически направленного клонирования полиморфизмов расположенных в составе мутантного локуса, клонирования соматических изменений в ДНК опухолевых клеток, а также сравнения транскрибируемых последовательностей различных типов клеток и тканей. Различные модификации метода были использованы для построения детальных генетических карт нескольких эукариотических организмов и "ПЦР-иммортализации" геномных ДНК. Разработанный экспериментальный подход в сочетании с методами позиционного клонирования привёл к идентификации ряда генов, играющих важную роль в процессах развития и дифференцировки клеток и тканей, а также злокачественной трансформации клеток при развитии раковых заболеваний. Таким образом, применение метода открывает новые перспективы в работах направленнных на идентификацию новых генов и анализ их функциональной роли, а также в исследованиях молекулярной природы различных заболеваний.

1. Lisitsyn N.A.: Representational difference analysis: finding the differences between genomes. Trends Genet., 11, 303-307, 1995.1. Статьи в научных журналах

2. Арсенян С.Г., Алликметс Р.Л., , Лисицын Н.А., Малышев И.В., Свердлов Е.Д.: Получение банка последовательностей специфичных для генома человека: 1. Структура повтора из Alu-семейства. Биоорганическая химия, 14. 114-115,1988.

3. Лисицын Н.А., Лаунер Г.А., Вагнер Л.Л., Свердлов Е.Д.: Фрагмент ДНК человека не гибридизующийся с ДНК шимпанзе. Докл. Акад. Наук СССР, 312, 983-985,1990.

4. Lisitsyn N., Lisitsyn N. and Wigler M. (1993) Cloning the differences between two complex genomes. Science, 259, 946-951.

5. Лисицын H.A., Розенберг M.B., Лаунер Г.А., Вагнер Л.Л., Потапов В.К., Колесник Т.Е., Свердлов, Е.Д.: Метод выделения последовательностей отсутствующих в одном из двух близкородственных геномов. Мол. Генет. Микробиол. Вирусол., 3,26-29,1993.

6. Lisitsyn N.A., Lisitsina N.M., Dalbagni G., Barker P., Sanchez C.A., Gnarra J., Linehan W.M., Reid B.J., and Wigler M.H.: Comparative genomic analysis of tumors: detection of DNA losses and amplification. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92, 151-155, 1995.

7. Lisitsyn N., and Wigler M.: Applications of representational difference analysis to detection of genetic lesions in cancer. Methods in Enzymology, 254, 291304, 1995.

8. Lisitsyn N.A., Vogelstein В., Leach F.S., and Wigler M.H.: Detection of genetic loss in tumors by Representational Difference Analysis. Cold Spring Harbor Symposium 59, 585-587, 1995.

9. Navin A., Prekeris R., Lisitsyn N.A., Sonti M.M., Grieco D.A., Narayanswami S., Lander E.S., Simpson E.M.: Mouse Y-specific repeats isolated by whole chromosome representational difference analysis. Genomics, 36, 349-353, 1996.

10. Thiagalingam S., Lisitsyn N.A., Hamaguchi M., Wigler M.H., Wilson J.K.W., Markowitz S.D., Kinzler, K.W., Vogelstein В.: Evaluation of the FHIT gene in colorectal cancers. Cancer Res., 56, 2936-2939, 1996.

11. Lisitsyn N.A.: Representational difference analysis. In: Genome Analysis: a laboratory manual, vol. 4, pp. 217-257, 1999. Eds. B. Birren, E. Green, P. Hieter and R. Myers. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York.

12. Wigler M.H., White M., Van Aelst L., Barker P., Lisitsyn N. Genetic analysis of cancer// Abstracts of papers presented at Keystone Symposium: Oncogenes: 20 years later. Keystone, USA. 1995. J. Cell. Biochem. Suppl. 19A, p. 5.

13. Lisitsina N.M., Hamaguchi M., Gnarra J., Linehan W.M., Wigler M.H., Lisitsyn N.A. Detection of homozygous losses in tumors by representational difference analysis// Abstracts of the 5th SPORE Investigators' workshop. Rockville, USA. 1997. p. 35.

14. Wigler, M.H., Lisitsyn N.A. Methods for producing probes capable of distinguishing variant genomic sequences. US patent 5,436,142.

15. Wigler, M.H., Lisitsyn N.A. Methods for producing probes capable of distinguishing DNA from related sources. US patent 5,501,964.

16. Wigler M.H., Lisitsyn N.A. Cancer detection probes. US patent 5,569,753.

17. Wigler M.H., Lisitsyn N.A. Representational approach to DNA analysis. US patent 5,876,929.1. Патенты