Люминесцентные характеристики и определение производных нафталина и азотсодержащих гетероциклических соединений в фармацевтических препаратах и биологических жидкостях тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ

На правах рукописи

РЕХАРСКАЯ ЕКАТЕРИНА МИХАЙЛОВНА

ЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОИЗВОДНЫХ НАФТАЛИНА И АЗОТСОДЕРЖАЩИХ ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ В ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТАХ И БИОЛОГИЧЕСКИХ

ЖИДКОСТЯХ

(02.00.02. - аналитическая химия)

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

МОСКВА 2005

Работа выполнена на кафедре аналитической химии химического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова

Научный руководитель: кандидат химических наук, доцент

Борзенко Андрей Геннадьевич

Официальные оппоненты■ доктор химических наук, профессор

Зоров Никита Борисович

кандидат фармацевтических наук, ведущий научный сотрудник Эпштейн Наталья Борисовна (Медицинский Радиологический научный центр РАМН)

Ведущая организация:

Химический факультет Санкт-Петербургского государственного университета

Защита состоится 13 октября в 16 час. 15 мин. в ауд. 344 на заседании диссертационного совета Д 501.001.88. по химическим наукам при Московском государственном университете им М.В. Ломоносова по адресу: 119992, ГСП, Москва, Ленинские горы, МГУ, химический факультет

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке химического факультета МГУ им. М В. Ломоносова.

Автореферат разослан 12 сентября 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат химических наук

Мое^

ш м

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Выявление фальсифицированных

фармацевтических препаратов является актуальной задачей, поскольку современные фармацевтические рынки заполнены продукцией, качество которой часто не отвечает гребуемым стандартам. Подобные препараты представляют угрозу тем, что активные компоненты находятся в них в меньших, а, следовательно, терапевтически неэффективных количествах. Кроме того, в составе таких препаратов могут полностью отсутствовать компоненты, указанные на упаковке. В связи с ростом количества фальсификатов особую важность приобретает разработка экспрессных методов их анализа. Тест-методы не решают полностью проблему контроля лекарственных препаратов, поскольку они не ориентированы на проведение арбитражного количественного анализа. В настоящее время для идентификации и определения основных компонентов лекарственных форм чаще всего используют хроматографические методы, которые могут быть довольно сложны в плане предварительной пробоподготовки

Помимо контроля качества фармацевтических препаратов можно отметить интерес исследователей к определению лекарственных соединений в различных медико-биологических объектах, в частности, в биологических жидкостях и тканях. Это объясняется усилением контроля за употреблением наркотических, психотропных и допинговых препаратов у определенных категорий людей. Основными аналитическими методами в этой области являются газовая и высокоэффективная жидкостная хроматография с масс-спектральным детектированием. Эти методы, несмотря на их очевидные достоинства, требуют использования сложной и дорогой аппаратуры, высококвалифицированного персонала и, в связи с этим, не всегда доступны для рядовых аналитических лабораторий и мониторингового контроля.

Автор выражает искреннюю Ргшрщрттр"тт| гсппгнту '■""¡"ур1-1 ап«т"тичтг"й химии химического факультета МГУ, кх н ТВ ПоленэнРЙШНАШММкЬвМ^йа^ис, поддержку, помощь в работе и обсуждении результатов БИБЛИОТЕКА

Требуемую чувствительность и селективность определений могут обеспечить люминесцентные методы, которые при наличии простых и экспрессных методик вполне могут составить альтернативу хроматографическим методам.

Цель работы заключалась в изучении влияния различных факторов на спектрально-люминесцентные характеристики ряда лекарственных соединений на основе производных нафталина и азотсодержащих гетероциклических соединений, и разработке люминесцентных методик их определения в фармацевтических препаратах, а также в оценке возможности их люминесцентного определения в биологических жидкостях. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи-

1. Изучить спектрально-люминесцентные свойства двух групп лекарственных соединений: производных нафталина и азотсодержащих гетероциклических соединений.

2. Изучить протолитические свойства ряда лекарственных соединений в водной, мицеллярной и циклодекстриновой средах, оценить константы связывания соединений с мицеллами додецилсульфата натрия (ДСН) и р-циклодекстрином (/?-ЦД).

3. Выбрать оптимальные условия люминесцентного определения изученных соединений в водной, мицеллярной и циклодексгриновой средах при комнатной температуре.

4. Сравнить возможности флуориметрического и фосфориметрическою методов для определения лекарственных соединений в фармацевтических препаратах и биологических жидкостях.

5. Разработать методики определения изученных лекарственных соединений в фармацевтических препаратах.

Научная новизна. Проведено сравнительное изучение протолитических свойств модельных лекарственных соединений в водной, мицеллярной и циклодекстриновой средах Получены количественные характеристики связывания изученных соединений с мицеллами ДСН и /?-ЦД при различных

значениях рН. Изучено влияние различных факторов на сигнал фосфоресценции модельных соединений при комнатной температуре в различных средах и определены времена жизни их триплетных состояний. Для празозина, пиндолола, фолиевой кислоты и тербинафина спектры фосфоресценции в растворах измерены впервые. Изучено влияние биологической матрицы на сигнал люминесценции модельных соединений в водном и мицеллярном растворах и показана принципиальная возможность их люминесцентного определения в моче и плазме крови человека без предварительного концентрирования и удаления матрицы.

Практическая значи.ность работы. Предложены методики люминесцентного определения ряда лекарственных соединений на основе производных нафталина и азотсодержащих гетероциклических соединений в лекарственных препаратах, в том числе и комбинированных. Предложен подход к определению модельных лекарственных соединений в плазме крови и моче человека на основе временной селекции сигналов фосфоресценции при комнатной температуре.

Положения, выносимые на защиту:

1. Результаты изучения спектрально-люминесцентных свойств двух групп лекарственных соединений- производных нафталина и азотсодержащих гетероциклических соединений в водной, мицеллярной и циклодекстриновой средах.

2. Результаты изучения протолитических свойств модельных лекарственных соединений в водной, мицеллярной и циклодекстриновой средах.

3. Количественные характеристики связывания изученных люминофоров с мицеллами ДСН и Р-ЦД и времена жизни триплетного состояния в этих средах.

4. Результаты исследования влияния различных факторов на величину сигнала фосфоресценции модельных соединений при комнатной температуре в различных средах.

5. Методики люминесцентного определения некоторых производных нафталина и азотсодержащих гетероциклических соединений в фармацевтических препаратах.

6. Подход к определению модельных лекарственных соединений в плазме крови и моче человека, основанный на временной селекции сигналов фосфоресценции при комнатной температуре

Апробация работы. Основные результаты диссертации доложены на Международных конференциях студентов и аспирантов «Ломоносов 2002», «Ломоносов 2004» (Россия, Москва, 2002 и 2004 гг.) и международных симпозиумах «225th ACS National Meeting» (США, Новый Орлеан, 2003 г.), «Spectroscopy in special applications» (Украина, Киев, 2003 г.), «2nd Black Sea conference on analytical chemistry» (Турция, Стамбул, 2003 г.), «Приборостроение-2003» (Украина, Винница, 2003 г.) «Аналитика России» (Россия, Клязьма, 2004 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 работ: 3 статьи в открытой печати, 1 статья в сборнике и 6 тезисов докладов.

Структура и объем работы Диссертация состоит из введения, двух глав обзора литературы, пяти глав экспериментальной части, выводов и списка литературы. Во введении обосновывается актуальность темы и цель работы, ее новизна и практическая значимость Первая глава обзора литературы посвящена основным направлениям развития фосфоресценции при комнатной температуре (ФКТ), вторая глава - современным методам определения лекарственных соединений в фармацевтических препаратах и биологических жидкостях, последующие главы содержат экспериментальные результаты. Диссертация изложена на 146 страницах машинописного текст, включает 49 рисунков и 17 таблиц. Список литературы содержит 177 работ.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Экспериментальная часть

Исходные растворы модельных соединений с концентрацией 3-Ю"4 М готовили растворением точных навесок. Нафазолина гидрохлорид, тербинафина гидрохлорид, (Sigma, США), пропранолола гидрохлорид, празозина гидрохлорид и фолиевую кислоту (Wako, Япония) растворяли в воде, дипиридамол, пиндолол (Wako, Япония) - в водном солянокислом растворе, напроксен (Sigma, США) - в водном растворе i идроксида натрия.

При измерении сигнала ФКТ в мицеллярной среде порядок добавления веществ был следующий. В мерную колбу емк. 10,0 мл помещали 0,1 мл исходного раствора люминофора, 2,0 - 2,5 мл 0,1 М раствора ДСН в зависимости от соединения, 0,6 мл 0,25 М раствора T1N03, 0,5 - 1,0 мл в зависимости от соединения 0,1 М раствора сульфита натрия и доводили до метки водой. Колбу с полученным раствором помещали на 5 мин в ультразвуковую ванну (УЗВ) при t = 30 - 35 °С. После ультразвуковой обработки растворы выдерживали при комнатной температуре 5 мин, затем производили измерения.

Для измерения сигнала ФКТ в водной среде порядок добавления веществ был следующий. В колбу емк. 10,0 мл помещали 0,1 мл исходного раствора, навеску сухого иодида калия (0,1- 1,0 г) в зависимости от соединения, 1,0 - 2,0 мл 2,0 М нитрата таллия в зависимости от соединения, 1,0 мл 0,1 М раствора сульфита натрия и доводили до метки водой. В том же порядке готовили анализируемый раствор для измерения сигнала в циклодекстриновой среде. После добавления всех веществ раствор доводили до метки раствором с концентрацией Д-ЦД равной 1.5-10"2 М.

Спектры возбуждения и флуоресценции растворов измеряли на спектрофлуориметре «Shimadzu RF-5301» (Япония) при следующих параметрах сканирования: спектральная ширина щелей 3 нм, скорость сканирования 1 нм/с. Спектры фосфоресценции растворов измеряли на спектрофлуориметре

«Панорама» (фирма «Люмэкс». Россия). Для измерения использовали кварцевые кюветы (/ = 1 см).

Значения рН растворов контролировали на универсальном иономере ЭВ-74 со стеклянным электродом ЭСЛ 43-07.

Хроматографические исследования проводили на жидкостном хроматарафе «Shimadzu LC-10AT» (Япония) с УФ детектором. В работе использовали колонку Mightysil RP-18 размером 150 х 4.6 мм (5ц).

Спектрально-лншинесцентные характеристики

В качестве модельных лекарственных препаратов в работе изучены представители двух классов органических соединений - азотсодержащих гетероциклических соединений и нафталиновых производных (табл 1.). Фармацевтические препараты Fia основе этих соединений широко применяются в медицинской практике.

Жесткая структура выбранных соединений позволяет получать хорошо разрешенные спектры флуоресценции и фосфоресценции при комнатной температуре.

Спектры флуоресценции и фосфоресценции исследованных соединений представляли в 3-х мерном виде. В качестве примера на рис. 1 приведены спектры флуоресценции и фосфоресценции пропранолола.

Спектры флуоресценции хорошо согласуются с литературными данными. Спектры фосфоресценции исследуемых соединений менее изучены. По-видимому, изучение спектров фосфоресценции празозина, пиндолола, фолиевой кислоты и тербинафина проводилось впервые.

Выбор оптимальных длин волн возбуждения и регистрации индивидуальных соединений с использованием трехмерных спектров в значительной степени упрощается. В табл. 2 представлены оптимальные значения длин волн возбуждения, флуоресценции и фосфоресценции Подчеркнуты наиболее интенсивные линии, которые в дальнейшей работе использовали для возбуждения.

Таблица 1. Названия и структурные формулы изученных соединений и

препаратов

Название Структурная формула Препараты

Нафазолина гидрохлорид N Л ^ „ а У с т N11 | jtj Нафтизин Санорин-аналергин

Напроксен СН3 ^ А о f г -г- НзСО^—' - °Н Напроксен- Лкри Пснталгин-Н

Пропранолола гидрохлорид и./ ч Г N - ^Л он С. JL ^ Обэидан Анаприлин

'I ербинафина гидрохлорид СИ, ^-N ^ - ^ ^С (ГHjh i О О Ламизил Фунготербин

Празозина гидрохлорид NH2 ^J- О ( н, 1 li Г -HCl а -о N N' ОС Нз N - ^ II - О 11разозин

Пиндолол он 9 " н Г 1 С II j Вискен Вискальдикс

Дипиридамол ""s r.J N N J-Г Г N ÜH N. J OH "-Г N N " Г J OH Курантил Дипиридамол

Фолиевая кислота OH OH /-—x N 1 / ч/--С у/ N Г r N H [ J j / H N N NH2 HO- ^ ' О Фолиевая кислота

Таблица 2. Длины волн возбуждения и регистрации флуоресценции и фосфоресценции изученных соединений

Название ^-вдзб> НМ А,ф,„ нм Я^фос, нм

Нафазолин 282, 290 325,337 485, 518

Тербинафин 286,297 341,355 487, 521

Напроксен 235,275,319,331 354 513,548

Пропранолол 242, 297 337,351 490, 524

Дипиридамол 309, 420 494 615

Празозин 270. 341 390 505

Пиндолол 292 308,318 450

Фолиевая кислота 270, 333 365, 444 530

На интенсивность люминесценции большое влияние оказывает форма нахождения люминофора в растворе и его ближайшее окружение. Эти факторы относительно слабо влияют на интенсивность флуоресценции и достаточно сильно на интенсивность фосфоресценции, что важно при разработке фосфориметрических методик. Для увеличения интенсивное ги фосфоресценции в качестве модификаторов свойств среды часто используют мицеллы ПАВ и циклодекстрины.

Изучение распределения люминофоров в водно-мицеллярной и водно-циклодекстриновой средах Распределение веществ между водной средой и мицеллами ПАВ или р-циклодекстрином характеризуется константой связывания, величина которой содержит информацию о степени солюбилизации или комгтлексообразования. На основе значений этих консгант можно прогнозировано выбирать оптимальные условия при разработке люминесцентных методик. К сожалению, литературных данных о константах связывания в мицеллярных и циклодекстриновых средах для большинства изученных в работе соединений найти не удалось.

Рис. 1. Спектры флуоресценции (1) и фосфоресценции (2) пропранолола

Значения констанг связывания в среде ДСН определяли экспериментально по тушению флуоресценции молекулами, имеющими заряд одноименный с зарядом мицеллы. В качестве тушителя использовали иодид-ион. Рассчитанные значения констант связывания люминофоров с мицеллами ДСН при различных рН приведены в табл. 3. Как видно из представленных в таблице данных для люминофоров нафталинового ряда константы связывания с мицеллами оказываются больше, чем для азотсодержащих гетероциклических соединений. По-видимому, это может быть объяснено большей гидрофобностью нафталинового кольца

Таблица 3. Значения констант связывания люминофоров с мицеллами

ДСН

Соединение рН = 2.4 рН = 8.4 рН= 11.2

Напроксен 5,3 ± 0,2 3,9 ±0,1 3,9 ±0,1

Нафазолин 4,0 ± 0,1 4,5 ±0,1 5.2 ±0,1

Пропранолол 4,3± 0,1 4.6 ±0,1 5,1 ±0,1

Тербинафин 4,2 ± 0,2 5,0 ± 0,2 5,3 ± 0,2

Дипиридамол 3,2± 0,1 3,8 ±0,1 3,9 ±0,1

Фолиевая кислота 4,0 ± 0,2 3,3 ±0,1 3,4 ±0,1

Пиндолол 3.4 ±0,1 3,9 ±0,1 3,9 ±0,1

Празозин 3,9 ±0,1 4,1 ±0,1 4,3 ±0,1

Для определения констант связывания изученных соединений с ¡3-циклодекстрином применяли метод Бенеси-Гилдебранда Рассчитанные значения констант связывания люминофоров с р-циклодекстрином при различных рН приведены в табл. 4.

Таблица. 4. Значения констант связывания {\gtCj изученных соединений с

Соединение рН = 2.4 рН = 8.4 рН -11.2

Напроксен 3,4 ±0,1 2,4 ±0,1 2,8 ±0,1

Нафазолин 2,5 ±0,1 1,6 ±0,1 0,65 ±0,1

Пропранолол 2,4 ±0,1 2,2 ± 0,2 2,4 ±0,1

Тербинафин 0,3 ±0,1 0,2 ±0,1 0,5 ±0,1

Дипиридамол 3,2 ±0,1 2,6± 0,1 2,8 ±0,1

Фолиевая кислота 3,4 ±0,1 2,2 ±0,1 2,9± 0,1

Пиндолол 2,3 ± 0,1 1,9 ±0,1 1,90 ±0,04

Празозин 2,9 ±0,1 1,7 ±0,1 1,81 ±0,05

Как следует из таблицы, кислотность среды оказывает влияние на величины констант связывания наряду с такими факторами, как гидрофобность молекулы люминофора, соответствие геометрии циклодекстриновой полости размерам и пространственному расположению заместителей люминофора.

Многие гетероциклические соединения (дипиридамол, фолиевая кислота и празозин) и напроксен образуют достаточно прочные комплексы с /?-циклодекстринами. Однако полного вхождения молекулы люминофоров в циклодекстриновую полость, по-видимому, не происходит. Этот факт подтверждается не слишком высокими значениями' констант связывания, а также малым влиянием циклодекстрина на кислотно-основные свойства этих соединений.

В целом, использование только термодинамического подхода для изучения свойств окружения люминофора оказывается недостаточным для получения полной информации о системе. Как показали наши эксперименты, образование прочных комплексов и ассоциатов с молекулами модификатора среды не всегда приводит к увеличению сигнала ФКТ. По-видимому, более корректно при изучении свойств окружения люминесцирующей молекулы совместное использование термодинамического и кинетического подходов. В связи с этим,

представляло интерес определить времена жизни молекул люминофора в триплетном состоянии в присутствии изученных модификаторов.

Определение времени жизни люминофоров в триплетном состоянии в различных средах

Оценку времени жизни люминофоров в различных средах проводили, изучая кинетические зависимости интенсивности сигнала ФКТ. Рассчитанные времена жизни изученных соединений в водной, мицеллярной и циклодекстриновой средах, указаны в табл. 5. Отметим, что в мицеллярной среде времена жизни исследованных соединений почти на порядок выше, чем водной. Этот факт можно объяснить их высокой степенью солюбилизации в мицеллах ДСП. В циклодекстриновой среде лишь для напроксена время жизни триплетного состояния такое же, как в мицеллярной среде.

Таблица 5. Время жизни люминофоров в различных средах (мс)

Соединение тДсн Тр-цд ^водн

Напроксен 1.1 ±. 0.2 1.1 ±0.1 0.6 ±0.1

Нафазолин 3.7 ±0.1 0.15 ±0.04 0.47 ± 0.09

Пропранолол 4.0 ±. 0.2 0.37 ±0.07 0.23 ± 0.04

Тербинафин 1.1 ±.0.1 - -

Дипиридамол 0.6 ±.0.1 0.35 ± 0.05 0.28 ± 0.06

Пиндолол 0.4 ±0.1 0.17± 0.06 0.08± 0.02

Празозин 0.9 ±0.1 - -

Фолиевая кислота 0.6 ±0.1 - -

Полученные результаты хорошо согласуются с результатами исследования кислотно-основных свойств люминофоров и их связывания с мицеллами ДСН и /?-циклодекстрином. Данные по кинетике фосфоресценции подтверждают предположение о том, что использование циклодекстрина в качестве организованной среды целесообразно лишь для фосфориметрического определения напроксена.

Изучение протолитических свойств модельных препаратов в водной, водно-мицеллярной и водно-циклодекстриновой средах

Форма нахождения люминофора в растворе является важным фактором, влияющим на интенсивность люминесценции. Очевидно, что интенсивность люминесценции изученных соединений в значительной мере будет определяться протолитическими равновесиями в растворе. Представляло интерес оценить значения констант кислотности модельных соединений в водной и организованных средах для последующего выбора оптимальных условий измерения аналитического сигнала. В работе были измерены спектры возбуждения и флуоресценции в водной, мицеллярной и циклодекстриновой средах при различных значениях рН. На основе полученных данных были рассчитаны константы кислотности, значения которых приведены в табл. 6. В мицеллярном растворе при концентрации ДСН выше критической концентрации мицеллообразования (ККМ) для большинства соединений значение рКа увеличивается по сравнению с водной средой, что хорошо согласуется с данными по константам связывания.

Таблица 6. Значения рКаф" модельных соединений в водной, ДСН и Р-ЦД средах

Соединения К'V,- волн Р^С^'дси РКа *®(1.цд

Нафазолин 10,2±0,2 12,4±0,1 10,0±0,2

Напроксен 4,4±0,2 4,9±0,2 4,8±0,1

Тербинафин 6,8±0,2 10,2±0,1 6,8±0,1

Пропранолол 10,8±0,1 11,9±0,2 10,6±0,1

Празозин 6,9±0,1 9,3±0,1 6,5±0,2

Пиндолол 8,2±0,1 10,7+0,1 8,0±0,2

Дипиридамол 6,4±0,1 8,3 ±0,1 6,0±0Д

12,4±0,1 - 12,2±0,1

Фолиевая 2,5±0,1 3,3±0,2 2,1 ±0,2

кислота 8,1 ±0,1 8,6±0,1 8,2+0,1

В циклодекстриновых средах наблюдаются незначительные изменения констант кислотности по сравнению с водой. Так, например, для нафазолина, пропранолола, дипиридамола, пиндолола и празозина наблюдается небольшое уменьшение значений рКа. Этот факт, по-видимому, также может служить подтверждением предположения о неполном вхождении изученных соединений в циклодекстриновую полость.

Влияние различных факторов на фосфоресценцию люминофоров при комнатной температуре Общепринято, что для генерации аналитического сигнала фосфоресценции при комнатной температуре требуется наличие организованной среды, "тяжелого атома" и отсутствие молекулярного кислорода. С целью выбора оптимальных условий регистрации сигнала ФКТ представляло интерес изучить влияние каждого фактора.

ФКТ в мииеллярной среде. В среде додецилсульфата натрия в качестве источника "тяжелого атома", использовали нитрат таллия®. Для удаления кислорода в исследуемый раствор добавляли сульфит натрия. В ходе исследования были выбраны оптимальные концентрации требуемых реагентов и диапазон значений рН, которые легли в основу разработанных в работе методик определения модельных лекарственных соединений в фармацевтических препаратах (табл. 7)

ФКТ в водной среде С целью разработки более экономичной методики представляло интерес выбрать условия измерения сигнала ФКТ в отсутствии организованной среды. Для возникновения ФКТ в этом случае по-прежнему необходимым условием является присутствие в растворе источника "тяжелого атома" и сульфита натрия.

Наилучшие результаты для нафазолина, пропранолола и пиндолола были достигнуты с использованием иодида калия. Для напроксена и дипиридамола наилучшие результаты были получены по-прежнему с использованием нитрата таллия Для этих соединений определены оптимальные условия и конценфации

требуемых реагентов, которые положены в основу методик определения в фармацевтических препаратах, плазме крови и моче (табл. 8).

Таблица 7. Оптимальные значения рН и концентрации реагентов для получения сигнала ФКТ в водно-мицеллярной среде

Соединение рН 8-9 сшоу М 1.5-102 С,г • М па 2^0 у сдаг М 2.0-10'2

Нафазолин, Пропранолол 5.0-10"3

Напроксен 8-9 2.0-10'2 1.0-10"2 2.5-10"2

Тербинафин 8-9 2.0-10'2 7.0-10"3 2.5-102

Дипиридамол 8-9 2.25-102 7.0-10"3 3.0-10"2

Фолиевая кислота 7.5 -8.5 1.25-10"2 7.0-10"3 2.5-10-2

Празозина 7.5 -8.5 ^1.25-10'2 7.0-10"3 2.5-10"2

Пиндолол 7-8.5 1.75-10'2 7.0-10"3 2.5-10"2

Таблица 8. Оптимальные значения рН и концентрации реагентов для получения сигнала ФКТ в водной среде

Соединение РН СТШО1 М М

Нафазолин, Пропранолол 8-9 - 0,4 1.0-10"2

Напроксен 8-9 0,15 - 1.0-ю-2

Дипиридамол 8.5 - 10 0,20 - 1.0-10"2

Пиндолол 7-8 - 0,6 1.0-10"2

Люминесцентное определение изученных соединений в фармацевтических препаратах и биологических жидкостях

Определение активных компонентов в фармацевтических препаратах

Выбранные ранее оптимальные условия использовали для измерения аналитического сигнала и построения градуировочных зависимостей при фосфориметрическом определении исследуемых соединений в водной и мицеллярной средах. Рассчитанные метрологические характеристики приведены в табл 9 Для сравнения в табл. 10 приведены метрологические характеристики флуориметрического определения напроксена, нафазолина и пиндолола.

Непосредственное определение исследуемого компонента в лекарственных препаратах проводили, следуя разработанным методикам. Результаты определений активных компонентов в препаратах представлены в табл. 11. Проверку правильности проводили с использованием независимого метода ВЭЖХ по стандартным методикам.

Для препаратов, где определяемый компонент является единственным активным веществом, наблюдается полное согласие результатов, полученных при использовании люминесцентных и ВЭЖХ методик.

В комбинированных препаратах флуоримегрическое определение в ряде случаев приводит к завышенным результатам по сравнению со значением, заявленным производителем. Например, для препарата Пешалгин Н повышенное содержание напроксена обусловлено свечением сопутствующих компонентов - кофеина, анальгина и фенобарбитала. При фосфориметрическом определении для комбинированных препаратов наблюдается хорошее согласие результатов с заявленными значениями, а также с результатами, полученными методом ВЭЖХ.

Таблица 9. Метрологические характеристики фосфориметрического

ч

Таблица 10. Метрологические характеристики флуориметрического

определения напроксена, пиндолола и нафазолина в воде (п=3, Р—0,95)

Соединение Диапазон линейности, М Коэффициент корелляции Предел обнаружения, М

Напроксен 1.210"*- 1.0 10"6 0.999 9.010"9

Пиндолол 1.0 10"7-3.010"6 0.999 5.ОН)"8

Нафазолин 1 5 10"8-3.0 10"* 0.999 9.8 10"9

определения люминофоров в водной и водно-мицеллярной средах (п=3, Р=0.95)

Соединение Среда Диапазон линейности, М Коэффициент корреляции Предел обнаружения, М

Нафазолин водная 1.010'7-8.010"5 0.999 1.3 10"7

мицеллярная 5.0 10*-8.0 10^ 0.996 3 2 10*

Тербинафин мицеллярная 5.0 10"7-1.010"5 0.989 1.2 10"7

Пропранолол водная 1.0 10 '-3.0 10"5 0.999 9.0 108

мицеллярная 6.0 10"5-3.0 10"5 0.996 1.2 10"8

Напроксен водная 2.0 107 - 9.0 10"4 0.998 1.310"7

мицеллярная 8.0 10"" -6.010"5 0.994 4.5 10"8

Дипиридамол водная 8.0 10"Г~6.0 10~3 0 993 6.0 10"7

мицеллярная 1.0 10"7- 2.010"5 0.999 9370^

Пиндолол водная 9.0107 - 1.010"5 0.994 7.5 10"7

мицеллярная 7.010"7 - 1.0 10"5 0.984 5.010"7

Празозин мицеллярная 5.710"7-2.0 10"5 0.998 3.0 Ю-7

Фолиевая кислота мицеллярная 6.0 10"7- 2.0 10"5 0.987 4.2 10"7

Таблица 11. Определение активного компонента в лекарственных препаратах методами Фл, ФКТ и ВЭЖХ (п = 5, Р = 0.95)

Препарат Содержание активных компонентов в одной таблетке Найдено определяемого компонента, %

ФЛводи ФКТМИ„ ФКТш;ш ВЭЖХ

Пенталг ин Н напроксен, 100 мг анальгин, 300 мг кофеин, 50 мг кодеин 8 мг фенобарбитал, 10 мг 108±3 98+3 97+3 *

Напроксен-Акри напроксен, 250 мг 98±2 98±2 97±3 98±6

Нафтизин нафазолин, 10 мг в 10 мл капель 100±2 98±4 97+4 95±3

Санорин-аналергин нафазолин, 2,5 мг в 10 мл капель антазолин, 50 мг в 10 мл капель 95±2 96±3 97±3 92±5

Анаприлин пропранолол, 10 мг 96±2 97±2 98±3 102±3

Обзидан пропранолол, 40 мг 98±2 99±2 99±3 101 ±4

Ламизил тербинафин, 10 мг на 1 г крема 102±2 96+3 - *

Фунготербин тербинафин,250 мг 98±3 98±4 - *

Празозин празозин, 0,5 мг 97±4 98±2 - 98±3

Вискен пиндолол, 5 мг 98±2 98+3 96±3 9413

Вискальдикс пиндолол, 10 мг клопамид, 5 мг 107+3 98±2 99+4 95±6

Кислота фолиевая фолиевая кислота, 1 мг 97±2 97+4 - *

- определение активного компонента методом ВЭЖХ не проводили

Сравнение двух вариантов фосфориметрического определения, использующих водную и водно-мицеллярную среды свитедельствует о том, что они дают сопоставимые результаты. Однако при выборе методики определения следует учитывать не только метрологические характеристики, но и стоимость анализа. Применение водных сред дает следующие очевидные преимущества. Во-первых, снижается количество используемых реагентов, во-вторых, в качестве источника "тяжелого атома" используется иодид калия, который значительно менее токсичен и более дешев по сравнению с нитратом галлия Относительное стандартное отклонение обеих методик составляет не более 0,05.

Полученные в работе результаты дают основание полагать, что разработанные методики, основанные на измерении интенсивности люминесцентного сигнала могут быть использованы для определения активных компонентов различных лекарственных препаратов. Причем, для комбинированных препаратов целесообразнее использовать

фосфориметрические методики, поскольку они оказываются более избирател ьными.

Определение изученных лекарственных соединений в биологических жидкостях. Представляло интерес оценить возможности люминесцентных методов применительно к определению лекарственных препаратов в биологических жидкостях - плазме крови и моче. Одной из важных стадий при этом является пробоподготовка. Использование люминесцентных методов позволяет, на наш взгляд, в ряде случаев обойтись без предварительного выделения определяемых компоненте матрицы.

На примере пропранолола, была изучена возможность определения р-адреноблокаторов в моче и плазме крови люминесцентными методами.

Поскольку сигнал флуоресценции пигмента уробилина, входящего в состав мочи, достаточно интенсивен, использование традиционной флуориметрии представляется малоэффективным В этом случае фосфориметрическое определение представляется более целесообразным, поскольку фоновый сигнал

матрицы отсутствует. Отметим, что при проведении определения требуется разбавление исходного образца в 50 раз.

При определении пропранолола в плазме крови было установлено, что матрица имеет собственные спектры флуоресценции и фосфоресценции, причем спектры флуоресценции пропранолола и магрицы перекрываются практически полностью, а спектры фосфоресценции лишь частично. Изучение кинетических характеристик сигнала ФКТ показало, что время жизни триплетного состояния пропранолола в несколько раз больше, чем время жизни фосфоресцирующих компонентов плазмы крови В работе было показано, что временная селекция сигнала ФКТ позволяет избирательно регистрировать спектр фосфоресценции только пропранолола (рис. 2). Одним из отличий определения пропранолола в плазме крови от определения в моче заключается в том, что для наблюдения фосфоресцентного сигнала достаточно 10 кратного разбавления образца плазмы.

Проверку правильности методики определения пропранолола в плазме крови проводили методом "введено-найдено". Результаты представлены в табл. 12-13.

Зц им К им

Рис. 2. Спектр фосфоресценции пропранолола в плазме крови без использования временной селекции (1), с временной селекцией (2).

Таблица 12. Результаты определения пропранолола в моче (п ~ 3, Р ~ 0,95)

Введено, мкг/мл Найдено, мкг/мл

0,04 0,03±0,01

0,08 0,08+0,01

0,10 0,11+0,01

0,20 0,18±0,01

0,40 0,37±0,02

Таблица 13. Результаты определения пропранолола в плазме крови (п = 3, Р = 0,95)

Введено, мкг/мл Найдено, мкг/мл

0,05 0,05±0,01

0,07 0,07+0,01

0,09 0,08±0,01

0,10 0,09±0,01

Полученные результаты подтверждают принципиальную возможность использования люминесцентных методов для определения лекарственных соединений в биологических жидкостях.

Результаты работы могут быть использованы в различных организациях, занимающихся фундаментальными исследованиями в области аналитической химии, биохимии, фармацевтики, а также в практических целях лабораториями по контролю за качеством фармацевтической продукции.

выводы

1. Изучены спектрально-люминесцентные характеристики представителей двух классов лекарственных органических соединений и на основе анализа трехмерных спектров люминесценции выбраны оптимальные длины волн возбуждения. Показано, что форма и положение полос в спектрах фосфоресценции большинства соединений, измеренных в мицеллярной, водной и циклодекстриновой средах, практически не отличаются

2. Рассчитаны значения констант связывания изученных люминофоров с мицеллами ДСН и /?-ЦД. Оценены времена жизни изученных люминофоров в триплетном состоянии в этих средах. Наибольшее время жизни люминофоров в триплетном состоянии отмечено в мицеллах ДСН, наименьшее - в /?-ЦЦ, за исключением напроксена. Установлено, что использование ДСН в качестве модификатора среды возможно для всех соединений, а /МЩ - целесообразно лишь для фосфориметрического определения напроксена.

3 Проведено сравнительное изучение кислотно-основных свойств модельных лекарственных соединений в водной, ДСН и /?-ЦД средах. Установлено, что значения рКа в водной и /?-ПД средах различаются незначительно, а в мицеллярной среде наблюдается увеличение рКа по сравнению с водной средой. На основании этих данных и данных по кинетике фосфоресценции высказано предположение о неполном вхождении молекул изученных соединений в циклодекстриновую полость

4 Изучено влияние различных факторов на сигнал фосфоресценции изученных соединений при комнатной температуре в водной, мицеллярной и циклодекстриновой средах и выбраны оптимальные условия их фосфориметрического определения.

5. Разработаны методики люминесцентного определения изученных соединений в фармацевтических препаратах, в том числе и комбинированных. Правильность предложенных методик подтверждена методом ВЭЖХ.

6. Дана сравнительная оценка метрологических характеристик определения исследованных соединений в фармацевтических препаратах методами флуориметрии и фосфориметрии. Показано, что для комбинированных препаратов целесообразнее использовать фосфориметрические методики, поскольку они оказываются более избирательными.

7. Предложен подход к определению модельных лекарственных соединений в плазме крови и моче человека, основанный на временной селекции сигналов фосфоресценции при комнатной температуре. На примере пропранолола показано, что временная селекция сигнала ФКТ позволяет устранить мешаюшее влияние собственной фосфоресценции матрицы.

Основные результаты диссертации изложены в следующих работах:

1. Rekharsky Е.М , Polenova Т V , Borzenko A.G Determination of drugs with closely overlapping spectra by room temperature phosphorimetry. / Abstract. 225th ACS National Meeting. New Orleans. Louisiana USA. 2003. P. 169.

2. Rekharsky E.M., Polenova T.V., Borzenko A.G Determination of polycyclic aromatic hydrocarbons by spectrofluorimetry. / Тез. докл. межд конф. студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов-2002». М.: МГУ, 2002. С. 149.

3. Rekharsky Е.М., Polenova T.V , Borzenko A.G. Determination of some drugs by room temperature phosphorimetry in organized media / Abstract. International scientific and practical conference "Spectroscopy in special applications". Kiev. Ukraine. 2003. P 72.

4. Rekharsky E.M, Polenova T.V., Borzenko A.G. Room-temperature phosphorimetric determination of some drugs in pharmaceutical preparation / Abstract 2nd Black Sea conference on analytical chemistry. Istambul. Turkey. 2003. P. 049.

5. Rekharsky E M , Polenova T V., Borzenko A G Organized media - the base for the phosphorimetric determination of some drugs / Мат XII межд науч-

тех конф. «Приборостроение - 2003». Винница-Кореиз. Украина. 2003. С. 205208.

6. Рехарская Е. М., Поленова Т.В. Борзенко А.Г. Фосфоресценция некоторых лекарственных препаратов нафталинового ряда в водных средах. // Вестн Моск. ун-та. Сер. 2. Химия. 2004 Т 45. № 2. С. II2-116.

7. Рехарская Е. М, Чухаркина А П., Поленова Т.В. Борзенко А.Г. Фосфориметрическое определение нафталиновых производных в лекарственных препаратах / Тез. докл Межд. конф. студентов и аспиранюв по фундаментальным наукам «Ломоносов-2004». М.: МГУ, 2004. С. 40.

8. Рехарская Е М., Чухаркина А.П., Поленова Т.В. Борзенко А.Г. Фосфориметрическое определение активного компонента в лекарственных препаратах. / Тез. докл межд. симпозиума «Аналитика России-2004». Клязьма. Россия 2004. С. 182.

9. Рехарская Е М , Чухаркина А.П , Поленова Т.В. Борзенко А Г. Фосфориметрическое определение азотных ютероциклов в лекарственных препаратах. // Вестн. Моск. ун-та Сер 2. Химия. 2005. Т. 46. № 1. С. 49-54

10. Рехарская Е. М., Поленова Т.В. Борзенко А.Г. Фосфориметрическое определение активного компонента в лекарственных препаратах. // Журн. аналит. хим. 2005. Т 60 № 5 С. 279-285.

Подписано Ft печать 09 09 05 Тираж 100 эк.4 Заказ № 108. Отпечатано в ООП МГУ

»16241

РНБ Русский фонд

2006-4 12511

ВВЕДЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Люминесцентные методы в аналитической химии

1.1 .Фосфоресценция при комнатной температуре

1.1.1 .Фосфоресценция на поверхности

1.1.2.Фосфоресценция в растворах

1.1.2.1 .Фосфоресценция в мицеллярных растворах

1.1.2.2.Фосфоресценция в циклодекстриновых средах

1.1.2.3 .Сенсибилизированная фосфоресценция

1.1.2.4.Фосфоресценция в водных растворах

1.2.0сновные факторы, влияющие на ФКТ

1.2.1 .Эффекты внешнего и внутреннего тяжелого атома

1.2.2. Влияние среды

1.2.3. Тушение ФКТ кислородом

1.2.4. Температурно-индуцированный эффект

1.3. ФКТ с временной и спектральной селекцией

1.4. Сочетание ФКТ с другими методами

Глава 2. Методы определения лекарственных соединений в фармацевтических препаратах и биологических жидкостях

2.1.Методы идентификации и определения активных компонентов в фармацевтических препаратах

2.2.0сновные методы определения лекарственных соединений в биологических матрицах

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 3. Исходные вещества, аппаратура и техника эксперимента

3.1. Выбор модельных соединений

3.2. Исходные вещества, приготовление растворов и аппаратура

3.3. Выбор оптимальных условий сканирования спектров фосфоресценции на спектрофлуориметре «Панорама»

Глава 4. Спектрально-люминесцентные характеристики изученных соединений

Глава 5. Изучение кислотно-основных свойств и распределения люминофоров в различных средах

5.1. Изучение кислотно-основных свойств в водной среде

5.2.Изучение кислотно-основных свойств в мицеллярной и циклодекстриновой средах

5.3. Определение констант связывания люминофоров с Р-циклодекстрином

5.4.0пределение констант связывания люминофоров с мицеллами додецилсульфата натрия

Глава 6. Влияние различных факторов на ФКТ в мицеллярной, водной и циклодекстриновой средах

6.1. Фосфоресценция при комнатной температуре в мицеллярной среде

6.2. Фосфоресценция при комнатной температуре в водной среде

6.3.Фосфоресценция при комнатной температуре в циклодекстриновой среде 103 6.4,Определение времени жизни люминофоров в триплетном состоянии в различных средах

Глава 7.Люминесцентное определение лекарственных соединений в фармацевтических препаратах и биологических жидкостях

7.1. Люминесцентное определение активных компонентов в фармацевтических препаратах

7.2.Фосфориметрическое определение пропранолола в биологических жидкостях

7.2.1 .Определение пропранолола в моче

7.2.2,Определение пропранолола в плазме крови

ВЫВОДЫ

Актуальность работы. Выявление фальсифицированных фармацевтических препаратов является актуальной задачей, поскольку современные фармацевтические рынки заполнены продукцией, качество которой часто не отвечает требуемым стандартам. Подобные препараты представляют угрозу тем, что активные компоненты находятся в них в меньших, а, следовательно, терапевтически неэффективных количествах. Кроме того, в составе таких препаратов могут полностью отсутствовать компоненты, указанные на упаковке. В связи с ростом количества фальсификатов особую важность приобретает разработка экспрессных методов их анализа. Тест-методы не решают полностью проблему контроля лекарственных препаратов, поскольку они не ориентированы на проведение арбитражного количественного анализа. В настоящее время для идентификации и определения основных компонентов лекарственных форм чаще всего используют хроматографические методы, которые могут быть довольно сложны в плане предварительной пробоподготовки.

Помимо контроля лекарственных препаратов можно отметить интерес исследователей к определению лекарственных соединений в различных медико-биологических объектах, в частности, в биологических жидкостях и тканях. Это объясняется усилением контроля за употреблением наркотических, психотропных и допинговых препаратов у определенных категорий людей. Основными аналитическими методами в этой области являются газовая и высокоэффективная жидкостная хроматография с масс-спектральным детектированием. Эти методы, несмотря на их очевидные достоинства, требуют использования сложной и дорогой аппаратуры, высококвалифицированного персонала и, в связи с этим, не всегда доступны для рядовых аналитических лабораторий и мониторингового контроля.

Требуемую чувствительность и селективность определений могут обеспечить люминесцентные методы, которые при наличии простых и экспрессных методик вполне могут составить альтернативу хроматографическим методам.

Автор выражает искреннюю благодарность доценту кафедры аналитической химии химического факультета МГУ, к.х.и. Т.В. Поленовой за помощь в работе, обсуждении результатов, постоянное внимание и поддержку.

Цель работы заключалась в изучении влияния различных факторов на спектрально-люминесцентные характеристики ряда лекарственных соединений на основе производных нафталина и азотсодержащих гетероциклических соединений, и разработке люминесцентных методик их определения в фармацевтических препаратах, а также в оценке возможности их люминесцентного определения в биологических жидкостях. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить спектрально-люминесцентные свойства двух групп лекарственных соединений: производных нафталина и азотсодержащих гетероциклических соединений.

2. Изучить протолитические свойства ряда лекарственных соединений в водной, мицеллярной и циклодекстриновой средах, оценить константы связывания соединений с мицеллами додецилсульфата натрия (ДСН) и /?-циклодекстрином (/?-ЦД).

3. Выбрать оптимальные условия фосфориметрического определения изученных соединений в водной, мицеллярной и циклодекстриновой средах при комнатной температуре.

4. Сравнить возможности флуориметрического и фосфориметрического методов для определения лекарственных соединений в фармацевтических препаратах и биологических жидкостях.

5. Разработать методики определения изученных лекарственных соединений в фармацевтических препаратах.

Научная новизна. Проведено сравнительное изучение протолитических свойств модельных лекарственных соединений в водной, мицеллярной и циклодекстриновой средах. Получены количественные характеристики связывания изученных соединений с мицеллами ДСН и /?-ЦЦ при различных значениях рН. Изучено влияние различных факторов на сигнал фосфоресценции модельных соединений при комнатной температуре в различных средах и определены времена жизни их триплетных состояний. Для празозина, пиндолола, фолиевой кислоты и тербинафина спектры фосфоресценции в растворах измерены впервые. Изучено влияние биологической матрицы на сигнал люминесценции модельных соединений в водном и мицеллярном растворах и показана принципиальная возможность их люминесцентного определения в моче и плазме крови человека без предварительного концентрирования и удаления матрицы.

Практическая значимость работы. Предложены методики люминесцентного определения ряда лекарственных соединений на основе производных нафталина и азотсодержащих гетероциклических соединений в лекарственных препаратах, в том числе и комбинированных. Предложен подход к определению модельных лекарственных соединений в плазме крови и моче человека на основе временной селекции сигналов фосфоресценции при комнатной температуре.

Положения, выносимые на защиту:

1. Результаты изучения спектрально-люминесцентных свойств двух групп лекарственных соединений: производных нафталина и азотсодержащих гетероциклических соединений в водной, мицеллярной и циклодекстриновой средах.

2. Результаты изучения протолитических свойств модельных лекарственных соединений в водной, мицеллярной и циклодекстриновой средах.

3. Количественные характеристики связывания изученных люминофоров с мицеллами ДСН и Р-ЦД и времена жизни триплетного состояния в этих средах.

4. Результаты исследования влияния различных факторов на величину сигнала фосфоресценции модельных соединений при комнатной температуре в различных средах.

5. Методики люминесцентного определения некоторых производных нафталина и азотсодержащих гетероциклических соединений в фармацевтических препаратах.

6. Подход к определению модельных лекарственных соединений в плазме крови и моче человека, основанный на временной селекции сигналов фосфоресценции при комнатной температуре.

Апробация работы. Основные результаты диссертации доложены на Международных конференциях студентов и аспирантов «Ломоносов 2002», «Ломоносов 2004» (Россия, Москва, 2002 и 2004 гг.) и международных симпозиумах «225th ACS National Meeting» (США, Новый Орлеан, 2003 г.), «Spectroscopy in special applications» (Украина, Киев, 2003 г.), «2nd Black Sea conference on analytical chemistry» (Турция, Стамбул, 2003 г.), «Приборостроение-2003» (Украина, Винница, 2003 г.) «Аналитика России» (Россия, Клязьма, 2004 г.). Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 работ: 3 статьи в открытой печати, 1 статья в сборнике и 6 тезисов докладов.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ФКТ - фосфоресценция при комнатной температуре

Фл - флуоресценция

ГХ - газовая хроматография

ВЭЖХ - высокоэффективная хроматография

ТСХ - тонкослойная хроматография

МС - масс-спектрометрия

Спектры ВЭ - спектры возбуждения-эмиссии

УЗ - ультразвуковая обработка

ПАВ - поверхностно-активные вещества

АПАВ - анионные поверхностно-активные вещества

ККМ - критическая концентрация мицеллообразования

ПАУ - полиароматические углеводороды

ДСН - додецилсульфат натрия

2-ЦД - циклодекстрин tj - время задержки строба измерения ta - время длительности строба измерения т - время жизни люминофора в триплетном состоянии

S — синглетное состояние

Si - синглетное основное состояние

S/- нижнее возбужденное состояние

Ti*— триплетное возбужденное состояние рКа- константа кислотности

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

выводы

1. Изучены спектрально-люминесцентные характеристики представителей двух классов лекарственных органических соединений и на основе анализа трехмерных спектров люминесценции выбраны оптимальные длины волн возбуждения. Показано, что форма и положение полос в спектрах фосфоресценции большинства соединений, измеренных в мицеллярной, водной и циклодекстриновой средах, практически не отличаются.

2. Рассчитаны значения констант связывания изученных люминофоров с мицеллами ДСН и /ЩД. Оценены времена жизни изученных люминофоров в триплетном состоянии в этих средах. Наибольшее время жизни люминофоров в триплетном состоянии отмечено в мицеллах ДСН, наименьшее - в /?-ЦД, за исключением напроксена. Установлено, что использование ДСН в качестве модификатора среды возможно для всех соединений, а /?-ЦД - целесообразно лишь для фосфориметрического определения напроксена.

3. Проведено сравнительное изучение кислотно-основных свойств модельных лекарственных соединений в водной, ДСН и /?-ЦД средах. Установлено, что значения рКа в водной и /?-ЦД средах различаются незначительно, а в мицеллярной среде наблюдается увеличение рКа по сравнению с водной средой. На основании этих данных и данных по кинетике фосфоресценции высказано предположение о неполном вхождении молекул изученных соединений в циклодекстриновую полость.

4. Изучено влияние различных факторов на сигнал фосфоресценции изученных соединений при комнатной температуре в водной, мицеллярной и циклодекстриновой средах и выбраны оптимальные условия их фосфориметрического определения.

5. Разработаны методики люминесцентного определения изученных соединений в фармацевтических препаратах, в том числе и комбинированных. Правильность предложенных методик подтверждена методом ВЭЖХ.

6. Дана сравнительная оценка метрологических характеристик определения исследованных соединений в фармацевтических препаратах методами флуориметрии и фосфориметрии. Показано, что для комбинированных препаратов целесообразнее использовать фосфориметрические методики, поскольку они оказываются более избирательными.

7. Предложен подход к определению модельных лекарственных соединений в плазме крови и моче человека, основанный на временной селекции сигналов фосфоресценции при комнатной температуре. На примере пропранолола показано, что временная селекция сигнала ФКТ позволяет устранить мешающее влияние собственной фосфоресценции матрицы.

1. Поляков Я.С., Шифферс Л.А. Некоторые новые методы флуоресцентного анализа многокомпонентных смесей. //Журн. прикл. спектроск. 1984. Т. 41. №2. С.181 -190.

2. Романовская Г.И. Новые методы и подходы в люминесцентном анализе. // Журн. аналит. химии. 1993. Т. 48. №2. С. 198-216.

3. Patra D., Mishra А.К. Recent developments in multi-component synchronous fluorescence scan analysis. // Trends in analytical chemistry. 2002. V.21. № 12. P. 787-798.

4. Giamarchi P., Stephan L. Sakamon S., Le Bihan A. Multicomponent determination of a polyaromatic hydrocarbon mixture by direct fluorescence measurements. // J. Fluorescence. 2000. V.10. P. 393-402.

5. Vo-Dinh T. Room temperature phosphorimetry for chemical analysis. New York. Wiley. 1984.

6. Winefordner J.D., St. John P.A. Solvent for phosphorimetry. // Anal. Chem. 1963. V.35. P.2211-2212.

7. Baldwin B.A., Offen H.W. Environmental effects of phosphorescence. "Activation volumes" for triplet decay of aromatic hydrocarbons. // J. Chem. Phys. 1968. V.48. P.5358-5360.

8. Jones P.F., Siegel S. Temperature effects on the phosphorescence of aromatic hydrocarbons in poly(methyl methacrylate).// J. Chem. Phys. 1969. V.50. P. 11341140.

9. Lewis G.N., Kasha M. Phosphorescence and the triplet state. // J. Am. Chem. Soc. 1944. V.66. P.2100-2116.

10. Leaver I.H. On the room temperature phosphorescence of wool keratin. // Photochem. Photobiol. 1978. V.27. P.439-443.

11. Roth M. Ambiant temperature phosphorescence. A selective and nondestructive method for detection of some aromatic compounds on paper chromatograms and on cellulose layers. //J. Chromatogr. 1967. V.30. P.276-278

12. Schulman E.M., Walling Ch. Phosphorescence of adsorbed ionic organic molecules at room temperature. // Science. 1972. V.178. P.53-54.

13. Schulman E.M., Walling Ch. Triplet-state phosphorescence of adsorbed ionic organic molecules at room temperature. // J. Phys. Chem. 1973. V.77. P.902-905

14. McAleese D. L., Freedlander R.S., Dunlap R.B. Elimination of moisture and oxygen quenching in room-temperature phosphorescence. // Anal. Chem. 1980. V. 52. № 14. P. 2443-2453.

15. Parker R.T., Freedlander R.S., Dunlap R.B. The development of room temperature phosphorescence into a new technique for chemical determinations. Part.l. Physical aspects of room temperature phosphorescence. // Anal. Chim. Acta. 1980. V.119. P. 189-205.

16. Schulman E.M., Parker R.T. Room temperature phosphorescence of organic compounds. The effects of moisture, oxygen and the nature of the support-phosphor interaction. // J. Phys. Chem. 1977. V.81. P. 1932-1939.

17. Elkington P.A., Curthoys G.J. Hydrogen bonding and adsorption on silica gel. // J. Colloid Interface Sci. 1968. V.28. P.335-337.

18. Vo Dinh Т., Lue Yen E., Winefordner J.D. Room temperature phosphorescence of several polyaromatic hydrocarbons. // Talanta 1977. V.24. P.146-148.

19. Ramis Ramos G., Garcia Alvares-Coque M.C., O'Reilly A.M, Khasawneh I.M., Winefordner J.D. Paper substrate room temperature phosphorimetry of poly cyclic hydrocarbons enhanced by surface-active agents. // Anal. Chem. 1988. V. 60. № 5. P. 416-420.

20. Ford Ch. D., Hurtubise R. J. Room-temperature phosphorescence of the phthalic acid isomers, p-aminobenzoic acid, and terephthalamide adsorbed on silica gel. // Anal. Chem. 1978. V.50. P.610-612.

21. Ford Ch. D., Hurtubise R. J. Room temperature phosphorescence of nitrogen heterocycles adsorbed on silica gel. // Anal. Chem. 1980. V.52. P.656-662.

22. Hurtubise R.J., Smith G.A. Room temperature phosphorescence of selected aromatic carboxylic acids adsorbed on silica gel and polyacrylic acid-sodium chloride mixtures. //Anal. Chim. Acta. 1982. V.139. P.315-321.

23. Syang Y. Su, Winefordner J.D. New substrate for room-temperature phosphorescence inorganic compound plate. // Microchem. J. 1982. V.27. P. 151154.

24. Von Wandruszka R.M.A.,. Hurtubise R.J. Room temperature phosphorescence of compounds adsorbed on sodium acetate. // Anal. Chem. 1977. V.49. P.2164-2169.

25. Parker R.T., Freedlander R.S., Dunlap R.B., Bruce R. Room temperature phosphorescence of selected pteridines. // Anal. Chem. 1979. V.51. P. 1921-1926.

26. Bower E. Lue Yen, Winefordner J.D. Room temperature phosphorescence characteristics and limits of detection of several pharmaceutical compounds. // Anal. Chim. Acta. 1978. V.101. P.319-332.

27. Dalterio R.A., Hurtubise RJ. Room-temperature phosphorescence of hydroxyl-substituted aromatics adsorbed on solid surfaces. // Anal. Chem. 1982. V.54. P.224-228.

28. Hurtubise R.J. Solid-matrix luminescence analyses: photophysics physicochemical interactions and applications. //Anal. Chim. Acta. 1997. V. 351. P. 1-22.

29. Мельников Г.В. Преобразование энергии электронного возбуждения полициклических ароматических углеводородов и красителей в микрогетерогенных средах. // Автореф. дисс. докт. хим. наук. Саратовский государственный университет. Саратов. 2002.

30. Von Wandruszka R.M.A., Hurtubise R.J. // Determination of p-aminobenzoic acid by room temperature solid surface phosphorescence // Anal. Chem. 1976. V. 48. № 12. P. 1784-1795.

31. Bateh R.P., Winefordner J.D. Room temperature phosphorescence determination of propranolol in pharmaceutical formulations. // J. of Pharm. Sci. 1983. V. 72. № 5. P. 559-560.

32. Arruda A. F., Campiglia A.D. Phosphorimetric determination of indomethacine in pharmaceutical formulations. //Analyst. 1997. V. 122. P. 559-562.

33. Vo-Dinh Т., Winefordner J.D. Room temperature phosphorimetry as a new spectrochemical method of analyses // Appl. Spectrsc. Rev. 1977. V. 13. P. 261169.

34. Winefordner J.D., McCarthy WJ. Phosphorimetric background in the ether extracts of blood and urine at various pH values. // Anal. Chim. Acta. 1966. V. 35. P. 120-125.

35. Vo-Dinh Т., Gammage, Martinez. Analyses of workplace air sample by synchronous luminescence and room-temperature phosphorescence. // Anal. Chem. 1981. V. 53. P. 253-258.

36. Hagestuen E.D., Arruda A.F., Campiglia A.D. On the improvement of solid-phase extraction room-temperature phosphorimetry for the analyses of polycyclic aromatic hydrocarbons in water samples. // Talanta. 2000. V. 52. P. 727-737.

37. Pamasamy S.M., Hurtubise R.J. Oxygen sensor via the quenching of room-temperature phosphorescence of perdeuterated phenanthrene adsorbed on Whatman IPS filter paper // Talanta. 1998. V. 47. P. 971-979.

38. Papkovsky D.B. Methods in optical oxygen sensing: protocols and critical analyses. // Methods Enzymol. 2004. V. 381. P. 715-735

39. Саввин С.Б., Чернова P.K., Штыков C.H. Поверхностно-активные вещества. М.: Наука, 1991. С. 12-17, 40-45.

40. Kalyanasundaram К., Thomas J.K. Environmental effects on vibronic band intensities in pyrene monomer fluorescence and their applications in studies of micellar systems. // J. Am. Chem. Soc. 1977. V.99. P.2039-2044.

41. Humphry-Baker R., Moroi Y., Graetzel M. Perturbation studies of the photophysics of arenes in functionalized micellar assemblies. Drastic phosphorescence enhancement. // Chem. Phys. Lett. 1978. V.58. P.207-210.

42. Clin Love L.J., Scrilec M, Habarta J.G. Analysis by micelle-stabilized room temperature phosphorescence in solution. //Anal. Chem. 1980. V.52. P.754-758.

43. Lin W.Y., Huang J.H., Hsu J.F. Room temperature phosphorescence of 2-bromnaphthalene in SDS rodlike micellar. // J. of Photochemistry and Photobiology A. 1997. V. 109. P. 25-28.

44. Donkenbroek J.I., Van E. Hommes N.J.R., Gooijer C., Velthorst N.H., Frei R.W. Sensitized room-temperature phosphorescence for detection in continuous flow and chromatographic systems. // Chromatographia. 1982. V.15. P.218-222.

45. Carretero A.S., Blanco C.C., Diaz B.C., Gutierrez A.F. Room temperature phosphorimetric method for the determination of the drug naphazoline in pharmaceutical preparations.//Analyst. 1998. V. 123. P. 1069-1071.

46. Arancibia J.A., Escandar G.M. Determination of naproxen in pharmaceutical preparations by room-temperature phosphorescence. A comparative study of several organized media. //Analyst. 2001. V. 126. P. 917-922.

47. Murillo Pulgarin J.A., Garcia-Bermejo L.F. Determination of the pesticide napropamide in soil, pepper and tomato by micelle-stabilized room temperature phosphorescence. // J. Agric. Food Chem. 2002. V. 50. P. 1002-1008.

48. Carretero A.S., Blanco C.C., Gutierrez A.F. Determination of the plant growth regulator р-naphthoxyacetic acid by micellar-stabilized room-temperature phosphorescence. // Talanta. 1996. V. 43. P. 1001-1007.

49. Hoshino H., Suzuki M., Kan'no M., Onmachi Т., Yotsuyanagi T. Room temperature phosphorescence characteristics of platinum (II) chelates with 8-quinolinol derivatives in aqueous micellar solutions. //Anal. Chim. Acta. 2000. V. 407. P. 71.

50. Kuijt J., Ariese F., Brinkman U.A.T., Gooijer C. Room temperature phosphorimetry as a tool in analytical chemistry// Anal. Chim. Acta. 2003. V. 135. №2. P. 135.

51. Ahwood D., Mosquera V., Rodriguez J., Garcia M., Suarez M.J. Effects of alcohols on the micellar properties in aqueous solutions ofalkyltrimethylammonium bromides. // Colloid and Polym. Sci. 1994. V. 272. № 5. P. 584-591.

52. Carretero A.S., Blanco C.C., Gutierrez A.F. Experimental studies of the factors that influence 1-naphthaleneacetamide determination by micelle-stabilized room temperature phosphorescence. //Analyst. 1997. V. 122. P. 563-566.

53. Jin W.J., Wei Y.S., Duan W.S., Liu C.S. Study of naphthalene and phenanthrene by microemulsions room remperature phosphorimetry. //Anal. Chim. Acta. 1994. V. 287. P. 95

54. Turro N.J., Bolt J.D., Kuroda Y., Tabushi I. Study of the kinetics of inclusion of halonaphthalenes with p-cyclodextrin via time correlated phosphorescence. // Photochem. Photobiol. 1982. V. 35. P. 69.

55. Turro N. J., Okubo Т., Chung C.J. Analyses of static and dynamic host-guest associations of detergent with cyclodextrin via photoluminescence methods. // J. Am. Chem. Soc. 1982. V. 104. P. 1789.

56. Munoz de la Pena A., Rodriguez M.P, Escandar G.M. Optimization of the room-temperature phosphorescence of the 6-bromo-2-naphthol-a-cyclodextin system in aqueous solution. // Talanta. 2000. V. 51. P. 949-955.

57. Brewster R.E., Kidd M.J., Schuh M.D. Optical thermometer based on the stability of the phosphorescent 6-bromo-l-napthol/a-cyclodextrin/2 ternary complex. // Chem. Commun. 2001. P. 1134-1135.

58. Santos M., Escander G.M. Cyclodextrin-induced room-temperature phosphorescence of l-bromo-2-naphthol upon formation of ternary complexes. // Appl. Spectrosc. 2001. V. 55. P. 1483.

59. Ponce A., Wong P.A., Way J.J., Nocera D.G. Intense phosphorescence triggered by alcohols upon formation of a cyclodextrin ternary complexes. // J. Phys. Chem. 1993. V. 97. P. 11137-11147.

60. Du X.Z., Zhang Y., Jiang Y.B., Lin L.R., Huang X.Z., Chen G.Z. Phosphorescence study of 1-bromonaphthalene in aerated solution of the surfactant and p-cyclodextrin. // Photochem. Photobiol. A. 1998. V. 112. P. 53-57.

61. Zhang H.R., Wei Y.S., Jin W. J., Liu C.S. Investigation of six-membered carbocyclic compounds as a molecular switch block of the room temperaturephosphorescence in nondeoxygenated P-cyclodextrin solutions. // Anal. Chim. Acta. 2003. V. 484. P. 111-120.

62. Hamai S., Kudou T. External heavy atom effects of 6-deoxy-6-iodo-a-cyclodextrin on the room-temperature phosphorescence of 6-bromo-2-naphthol and 3-bromoquinoline in aqueous solutions. // J. Photochem. Photobiol. A. 1998. V. 113. P. 135-140.

63. Munoz de la Pena A., Mahedero M.C., Espinosa-Mansilla A., Bautista Sanchez A., Reta M. Room temperature phosphorescence of 1-naphthalenacetamid included in P-cyclodextrin in presence of 1,3-dibromopropane. // Talanta. 1999. V. 48. P. 15-21.

64. Lopez M. H., Gonzalez M.A., Molina M.I.L. Synchronous-derivative phosphorimetric determination of 1- and 2-naphthols in irrigation water by employing p-cyclodextrins. // Talanta. 1999. V. 49. P. 679-689.

65. Escandar G.M., de la Pena A.M. Rom-temperature phosphorescence (RTP) in aqueous solutions. An advanced undergraduate laboratory experiment. // The chemical educator. 2003. V. 8. № 4.

66. Zhang H.R., Zhang J., Wei S., Jin W.J., Liu C.S. Study of the new facile deoxygenation methods in cyclodextrin induced room-temperature phosphorescence. // Anal. Chim. Acta. 1997. V. 357. P. 119-125.

67. Gonzalez M.A., Lopez M.H. Determination of fluorine in sea-water by room-temperature phosphorescence in organized media. // Analyst. 1998. V. 123. P. 2211-2217.

68. Deluccia F.J., Cline Love L.J. Sensitized room temperature phosphorescence via molecular organization // Anal. Chem. 1984. V. 56. № 14. P. 2811-2815.

69. Donkerbroek J.J., Elzas J.J., Gooijer C., Frei R.W., Velthorst N.H. Some aspects of room-temperature phosphorescence in liquid solutions. // Talanta. 1981. V. 28. P. 717-723.

70. Xie J.W., Xu J.G., Chen C.Z. Studies on solubilization site of the triplet energy acceptor biacetyl in normal micelles by using quenched RTP method. // Chem. J. of Chin. Univ. 1997. V. 18. № 10. P. 1602-1606.

71. Xie J. W., Xu J.G., Chen G.Z. Sensitized room temperature phosphorescence of biacetyl in reversed micelles. // Spectrochim. Acta. A. 1995. V. 51. P. 1909-1918.

72. Donkerbroek J.J., Gooijer C., Velthorst N.H., Frei R.W. Sensitized room temperature phosphorescence in liquid solutions with 1,4-dibromnaphthaIene and biacetyl as acceptor. // Anal. Chem. 1982. V. 54. № 6. P. 891-895.

73. Melnikov G., Shtykov S., Goryacheva I. Sensitized room temperature phosphorescence of pyrene in sodium dodecylsulfate micelles with triphaflavine as energy donor. //Anal. Chim. Acta. 2001. V. 439. P. 81-86.

74. Li L., Zhao Y., Wu Y., Tong A. Non-protected fluid room-temperature phosphorescence of several naphthalene derivatives. // Talanta. 1998. V. 46. P. 1147-1154.

75. Carretero A.S., Blanco C.C., Diaz B.C., Gutierrez A.F. An innovative way of obtaining room-temperature phosphorescence signals in solution. // Anal. Chim. Acta. 1998. V. 361. P. 217-222.

76. Diaz B.C., Terrones S.C., Carretero A.S., Guiterraz A.F. Comparison of three different phosphorescent methodologies in solution for the analyses of naphazoline in pharmaceutical preparations. // Anal. Bioanal. Chem. 2004. V. 379. № 1. P.30-34.

77. Carretero A.S., Blanco C.C., Diaz B.C., Gutierrez A.F., Ramirez Garcia M. I. Simple and rapid determination of drug naproxen in pharmaceutical preparationsheavy atom-induced room temperature phosphorescence. // Talanta. 1999. V. 50. P. 401-407.

78. Murillo Pulgarin J.A., Molina A.A. Direct determination of 1-naphthoxylactic acid in biological fluids by non-protected fluid room temperature phosphorimetry. // Frensenius J. Anal. Chem. 2000. V. 368. P. 505-510.

79. Li L-.D., Chen X-.K., Мои L., Tong A. H. Comparison of non-protected fluid room-temperature phosphorescence properties of a-naphthyloxyacetic acid and p-naphthyloxyacetic acid. //Anal. Chim. Acta. 2000. V. 424. P. 177-183.

80. Kasha M. Collisional perturbation of spin-orbital coupling and the mechanism of fluorescence quenching. A visual demonstration of the perturbation. // J. Chem. Phys. 1952. V.20. P.71-74.

81. White W., Seybold P.G. External heavy-atom effect on the room-temperature luminescence of adsorbed dyes. // J. Phys. Chem. 1977. V.81. P.203 5-2040.

82. Vo Dinh Т., Lue Yen E., Winefordner J.D. Heavy-atom effect on room-temperature phosphorimetry. // Anal. Chem. 1976. V.48. P. 1186-1188.

83. Jakovljevic I.M. Lead or thallium salts as external heavy atoms for room temperature quantitative phosphorescence. // Anal. Chem. 1977. V.49. P.2048-2050.

84. Meyers M.L., Seybold P.G. Effect of external heavy atoms and other factors on the room-temperature phosphorescence and fluorescence of tryptophan and tyrosine. // Anal. Chem. 1979. V.51. P.1609-1612.

85. Niday G.J., Seybold P.G. Matrix effect on the lifetime of room-temperature phosphorescence. //Anal. Chem. 1978. V.50. P.1577-1578.

86. Birks J.B. Quenching of excited singlet and triplet states of aromatic hydrocarbons by oxygen and nitric oxide. // Proc. Inst. Conf. Lumin. 1969. (Pub. 1970) P. 154165.

87. Lee S.K., Okura I. Optical sensor for oxygen using a porphyrin-doped sol-gel С/ glass. // Analyst. 1997. V. 122. P. 81-84.

88. Wilson D.F., Vinogradov S.A. Recent advances in oxygen measurements using phosphorescence quenching. // Adv. Exp. Med. Biol. 1994. V. 361. P. 61-66.

89. Murrell J.N. Molecular complexes and their spectra. The relation between the stability of a complex and the intensity of its charge-transfer bands. // J. Am. Chem. Soc. 1959. V.81. P.5037-5043.

90. Tsubomura H., Milliken R.S. Molecular complexes and their spectra. Ultraviolet absorption spectra caused by the interaction of oxygen with organic molecules. // J. Am. Chem. Soc. 1960. V.82. P.5966-5974.

91. Kawaoka K., Khan A.U., Kearns D.R. Erratum: role of singlet excited states of molecular oxygen in the quenching of organic triplet states. // J. Chem. Phys. 1967. V.47. P.1883-1884.

92. Widman R.P., Huber I.R. Temperature effects in the intersystem crossing process of anthracene. // J. Phys. Chem. 1972. V.76. P.1524-1527.

93. De Lima C.G., De M. Nicola E.M. Analytical application of the room and low temperature (77 K) phosphorescent properties of some 1,8-naphthyridine derivatives. // Anal. Chem. 1978. V.50. P.1658-1165.

94. Романовская Г.И., Королева M.B., Блинов A.H. Временная селекция в методе фосфоресценции при комнатной температуре для анализа смесей полициклических ароматических соединений в мицеллярных средах. // Журн. аналит. хим. 1999. Т. 54. №7. С. 706-709.

95. Vo-Dinh Т., Uziel М. // Lazer-induced room-temperature phosphorescence detection of benza.pyrene-DNA adducts. // Anal. Chem. 1987. V. 59. № 8. P. 1093-1095.

96. Carretero A.S., Blanco C.C., Guiterrez A. F. Application of variable-angle synchronous phosphorimetry in microemulsion medium for the simultaneous determination of three polyaromatic hydrocarbons. // Anal. Chim. Acta. 1996. V. 329. P. 165-172.

97. Carretero A.S., Blanco C.C., Guiterrez A. F. Simultaneous microemulsion room-temperature phosphorimetric determination of five polycyclic aromatic hydrocarbons by variable-angle sybchronous scanning. // Anal. Chim. Acta. 1997. V. 353. P. 337-344.

98. Armstrong D.W., Nome F. Partitioning behavior of solutes eluted with micellar mobile phases in liquid chromatography. // Anal. Chem. 1981. V. 53. P. 1662-1666

99. Winefordner J.D., Tin M. Phosphorimetric determination of procain, phenobarbital, cocaine and chloropromazine in blood serum. // Anal. Chim. Acta. 1965. V. 32. P. 64-75.

100. Winefordner J.D., Moye H.A. The application of thin-layer chromatography and phosphorimetry for the rapid determination of nicotine, nornicotine and anabasine in tobacco. // Anal. Chim. Acta. 1965. V. 32. P. 278-284.

101. Kuijt J., Arraez-Roman D., Ariese F., Brinkman U.A.T., Gooijer C. Quenched phosphorescence detection in cyclodextrin-based electrokinetic chromatography. // Anal. Chem. 2002. V. 79. №19. P. 5139-5145.

102. Kuijt J., Brinkman U.A.T., Gooijer C. Quenched phosphorescence, a new detection method in capillary electrophoresis. // Electrophoresis. 2000. V. 21. № 7. P. 1305-1311.

103. Kuijt J., Ariese F., Brinkman U.A.T., Gooijer C. Lazer-induced quenched phosphorescence detection in capillary electrophoresis. // Electrophoresis. 2003. V. 24. №78. P. 1193-1199.

104. United States Pharmacopeia. 26th ed. United States Pharmakopeia Convention. Rockville. MD. 2002.

105. Moeller M.R., Steinmeyer S., Kraemer T. Deremination of drugs of abuse in blood. // J. of Chromatography B. 1998. V. 713. P. 91-109.

106. Wang W.L., Darwin W.D., Cone E.J. Simultaneous assay of cocaine, heroin and metabolites in hair, plasma, saliva and urine by gas chromatography mass spectrometry. // J/ Chromatogr. B. 1994. V. 660. P. 279-290.

107. Polettini A., Montagna M., Segura J., de la Torre X. Determination of J32-agonists in hair by GC/MS. // J. Mass Spectrometry. 1996. V. 31. P. 47-54.

108. Chen, B.H., Taylor E.H., Pappas A.A. Comparison of derivatives for determination of codeine and morphine by GC/MS. // J.Anal. Toxicol. 1990. V. 14. P. 12-17.

109. Tagliaro F., Traldi P., Poiesi В., Lafiska S., Neri C. Detemination of morphine in the hair of heroin addicts by HPLC with fluorimetric detection. // J. Anal. Toxicol. 1986. V. 10. P. 158-161.

110. Tagliaro F., Carli G., Cristofori F., Campagnari G., Marigo M. HPLC determination of morphine with amperometric detection at low potential under basic pH conditions. // Chromatographic 1988. V. 26. P. 163-167.

111. Mizuno A., Uematsu Т., Nakashima M. Simultaneous determination of ofloxacin, norfloxacin and ciprofloxacin by high-performance liquid chromatography and fluorescence detection. // J. Chromatogr. B. 1994. V. 653. P. 187-193.

112. Tracqui A., Kintz P., Mangin P. HPLC/MS determination of buprenorphine and norbuprenoiphine in biological fluids and hair samples. // J. Forensic Sci. 1997. V. 42. P. 111-114.

113. Nagai Т., Kamiyama S. Forensic toxicologic analysis of methampethamine and amphetamine optical isomers by HPLC. // Z. Rechtsmed. 1988. V. 101. P. 151 — 159.

114. Balabanova S., Wolf H.U. Determination of methadone in human hair by radioimmunoassay. // Z. Rechtsmed. 1989. V. 102. P.l-4.

115. Еремин C.K., Изотов Б.Н., Веселовская H.B. Анализ наркотических средств. М.: Мысль, 1993.

116. Hauck Н.Е. Thin-Lauer chromatography up-to-date. // Fresenius'Z anal. chem. 1987. V. 327. № l.P. 24-25.

117. Beesley Т.Е. Current instrumentation for thin-layer chromatography. J. Chromatogr. Sci. 1985. V. 23. № 12. P. 525-531.

118. Stead A.H., Gill R., Write T. Standartisied thin-layer chromatographic systems for the identification on drugs and poisons. // Analyst. 1982. V. 107. № 10. P. 1106-1168.

119. Law В., Gill R., Moffat A.C. High-performance liquid chromatography retention data for 84 basic drugs of forensic interest on a silica column using an aqueous methanol eluent. // J. Chromatogr. 1984. V. 301. № 1. P. 165-172.

120. Decker W.J. Laboratory support of drug abuse control programs: an overview. // Clinical toxicology 1977. V. 10. № 1. P. 23-35.

121. Симонов E.A., Изотов Б.Н., Фесенко A.B. Наркотики. Методы анализа на коже, в ее придатках и выделениях. М.: Анахарсис. 2000.

122. Bosomworth М.Р. Drugs of abuse in urine. Some pitfalls in testing. // Brit. J. Biomed. Sci. 1993. V. 50. № 2. P. 150-155.

123. Пожарский А.Ф. Гетероциклические соединения в биологии и медицине. // Соросовский образовательный журнал. Биология. 1996. Т.6. С.25-32.

124. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Т.1, 2. Харьков. 1997.

125. World anti-doping Agency. The world anti-doping code. The 2005 prohibited list. 2004. P. 1-10.

126. Sadlej-Sosnowska N., Siemiarczuk A. A time resolved and steady-state fluorescence quenching study on naproxen and its cyclodextrin complexes in water. // J. of Photochem. and photobiol. A. Chemistry. 2001. V. 138. P.35-40.

127. Gazpio C., Sanchez M., Zornoza A., Martin C., Martinez-Oharriz C., Velaz A. fluorimetric study of pindolol and its complexes with cyclodextrins. // Talanta. 2003. V. 60. P. 477-482.

128. Borges C.P.F., Borissevitch I.E., Tabak M. Charge- and pH-dependent binding sites of dipyridamole in ionic micelles: A fluorescence study. // J. of Luminescence. 1995. V. 65. P. 105-112.

129. Thomas A.H., Lorente C., Capparelli A.L., Pokhrel M.R., Braun A.M., Oliveros E. Fluorescence of pterin; 6-formylpterin, 6-carboxypterin and folic acid in aqueous solutions. pH effects. // Photochem. Photobiol. Sci. 2002. V.l. P. 421426.

130. Sortino S., Cosa G., Scaiano J.C. pH effect on the efficiency of the photodeactivation pathways of naphazoline: a combined steady state and time-resolved study. //New J. Chem. 2000. V. 24. P. 159-163.

131. Sreedhar K., Sastry C.S.P., Reddy M. N., Sankar D.G. Spectrophotometry methods for the determination of prazosin hydrochloride in tablets. // Talanta. 1996. V. 43. P. 1847-1855.

132. Паркер С. Фотолюминесценция растворов. М.: Мир, 1972.420 с.

133. Meloun М., Syrovy Т., Vrana A. The thermodynamic dissociation constants of ambroxol, antazoline, naphazoline, oxymethazoline and ranitidine by the regression analysis of spectrophotometric data. // Talanta. 2004. V. 62. P. 511522.

134. Rafols C., Roses M., Bosch E. Dissociation constants of several non-steroidal anti-inflammatory drugs in isopropyl alcohol/water mixtures. // Anal. Chim. Acta. 1997. V. 350. P. 249-255.

135. Avdeef A., Berger C.M., Brownell C. pH metric solubility. Correlation between the acid-base titration and the saturation shake flask solubility. pH methods. // Pharm. Research. 2000. V. 17. № 1. P. 85-89.

136. Bontchev P.R., Pantcheva I.N. Copper (II) complexes of blood pressure active drugs. // Trans. Metal Chem. 2002. V.27. P. 1-21.

137. Zielinski W., Kudelko A. Concerning the basicity of 4-dimethylaminoquinazoline derivatives. // Monatsheffe fur Chemie. 2000. V. 131. P.733-738.

138. Thomas A.H., Suarez G., Cabrerizo F.M., Martino R., Capparelly A.L. Study of the photolysis of folic acid and 6-formylpterins in acid aqueous solutions. // J. of Photochem. and Photobiol. A. Chemistry. 2000. V. 135. P. 147-154.

139. Гордон А., Форд P. Спутник химика. M.: Мир, 1976.

140. Амис Э. Влияние растворителя на скорость и механизм химических реакций. М.: Мир. 1968. 328 с.

141. Пешкова В. М., Громова М.И. Методы абсорбционной спектроскопии в аналитической химии. М.: Мир. 1983.253с.

142. Россотти Ф., Россотги X. Определение констант устойчивости и других констант равновесия в растворах. М.:Мир. 1965.564с.

143. Rekharsky М. V., Inoue Y. Complexation thermodynamics of cyclodextrins. // Chem.Rev. 1998. V. 98. P. 1875-1917.

144. Benesi, H. A.; Hildebrand, J. H. A Spectrophotometry Investigation of the Interaction of Iodine with Aromatic Hydrocarbons. // J.Am.Chem.Soc. 1949. V. 71. P. 2703-2707.

145. Scatchard G. The attractions of proteins for small molecules and ions. // Ann.N.Y.Acad.Sci. 1948. V. 51. P. 660-672.

146. Yang, Mu T-W., Guo Q-X. The performance of the Benesi-Hildebrand method in measuring the binding constants of the cyclodextrin complexation. // Anal. Sci. 2000. V. 16. P. 537-539.

147. Moroi Y, Morisue Т., Matsuo H., Yonemura H., Humphry R., Gratzel M. Dynamics of solubilization of naphthalene and pyrene into dodecylammonium trifluoroacetate micelles. J. Chem. Soc. Faraday. Trans. 1997. V. 93. № 19. P. 3545-3549.

148. Quina F.H. Phenomena in surfactant media quenching of a water-soluble fluorescence probe by iodide ion in micelle solutions of sodium dodecylsulfate. // J. Phys. Chem. 1977. V. 81. № 81. P. 1750 1754.

149. Diaz Garcia M.E., Sanz-Medel A. Facile chemical deoxygenation of micellar solutions for room temperature phosphorescence. // Anal Chem. 1986.V.58. № 7. P.1436-1440.

150. Рабинович B.A., Хавин ЗЛ. Краткий химический справочник. М.: Химия, 1978. 372с.

151. Gratzel М., Kalyanasandaram К. Kinetics and catalysis in microgeterogeneous systems. Marcel Dekker, Inc. 1992. P. 476.

152. Мак-Глин С., Адзуми Т., Киносита М. Молекулярная спектроскория триплетного состояния. М.: Наука. 1972. С. 544.

153. Cline Love L.J., Skrilec М., Hobarta J.G. Analysis by micelle stabilized room temperature in solution. //Anal. Chem. 1980. V. 52. P. 754-759.

154. Nugara N.E. King Jr. A.D. Light absorbtion and mixed micelle composition as factors in determining intensities of room temperature phosphorescence. // Anal. Chem. 1989. V. 61. P. 1431-1435

155. Воюцкий C.C. Курс коллоидной химии. M.: Химия, 1976. С. 400-408.

156. Федоренко Е. В. Люминесцентные свойства и определение полициклических ароматических углеводородов в мицеллярных растворах ПАВ. Автореф. дисс. канд. наук. Саратовский государственный университет им. Н.Г. Чернышевского. Саратов. 2004.

157. Рехарская Е.М., Поленова Т.В., Борзенко А.Г. Фосфоресценция некоторых лекарственных препаратов нафталинового ряда в водных средах. // Вестн. Моск. Ун-та. Сер. 2. Химия. 2004. Т. 45. № 2. Р. 112-116.

158. Fu Y., Liu L., Guo Q-X. A theoretical study on the inclusion complexation of cyclodextrins with inorganic cations and anions. // J. of Inclusion Phenomena and Macrocyclyc Chem. 2002. V. 43. P. 223-229.

159. Munof E., Takeuchi Т., Miwa T. Visualization of cyclodextrins via complexation with iodine in microcolumn liquid chromatography. // Anal. Chem. Acta. 2000. V. 418. P. 175-179.

160. Рехарская E.M., Чухаркина А.П., Поленова T.B., Борзенко А.Г. Фосфориметрическое определение азотных гетероциклов в лекарственных препаратах. // Вестн. Моск. Ун-та. Сер. 2. Химия. 2005. Т. 46. № 1. Р. 49-54.

161. Рехарская Е.М., Поленова Т.В., Борзенко А.Г. Фосфориметрическое определение активного компонента в фармацевтических препаратах. // Журн. аналит. хим. 2005. Т. 45. № 5. Р. 112-116.

162. Kaisha К.К., Jaffe J.H. Extraction techniques for narcotics, barbiturates and central nervous system stimulants in a drug abuse urine screening program. // J. of cromatogr. crom. 5436. Aipril. 1971. P. 83-94.

163. Clarke E.G.C. Clarkes isolation and identification of drugs. Pharmaceutical Press. London. 1985.

164. Ruiz-Angel M.R., Fernandez-Lopez E., Murillo-Pulgarin J.A., Garcia-Alvarez-Coque M.C. Control of propranolol intake by direct chromatographic detection of a-naphtoxylactic acid in urine. // J. of Chrom. B. 2002. V. 767. P. 277.

165. Кольман Я., Рем К.Г. Наглядная биохимия. М.: Мир, 2000. С. 268-269.

166. R. Reganthal, M. Krueger, C. Koeppel, R. Preiss. Drug Levels: Therapeutic and toxic serum/ plasma concentrations of common drugs. // J. of Clin. Monit. and Сотр. 1999. V. 15. № 7-8. P. 529-544.