Малополярные фитоэкдистероиды Serratula coronata L. и новые трансформации 20-гидроксиэкдизона и его производных тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.03 ВАК РФ

Направах рукописи

Веськина Наталья Анатольевна

МАЛОПОЛЯРНЫЕ ФИТОЭКДИСТЕРОИДЫ 5ЕЯЯЛТиЫ СОЮШТЛ К И НОВЫЕ ТРАНСФОРМАЦИИ 20-ГИДРОКСИЭКДИЗОНА И ЕГО ПРОИЗВОДНЫХ

02.00.03 - Органическая химия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Уфа -2004

Работа выполнена в Институте нефтехимии и катализа Академии наук Республики Башкортостан и Уфимского научного центра Российской Академии наук.

Научные руководители: доктор химических наук,

профессор Одиноков В.Н.

Официальные оппоненты: доктор химических наук,

профессор Балтина Л.А.

кандидат химических наук, доцент Кондратенко P.M.

Ведущая организация: Башкирский государственный

университет

Защита диссертации состоится 23 декабря 2004 года в 1422 на заседании диссертационного совета Д 002.062.01 в Институте нефтехимии и катализа АН РБ и УНЦ РАН по адресу: 450075, Уфа, проспект Октября, 141.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Института нефтехимии и катализа АН РБ и УНЦ РАН.

Автореферат разослан « » ноября 2004 года.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор химических наук, профессор

Общая характеристика работы

'Актуальность темы. Экдистероиды представляют собой обширную группу полигидроксилированных стеринов, выполняющих роль гормонов линьки, метаморфоза и диапаузы насекомых и ракообразных. Впервые обнаруженные у насекомых, экдистероиды затем были выявлены во многих видах растений в значительно более высоких концентрациях (2-2.5% против 10~б % от общей массы объектов).

Исследования выделенных из растительных источников фитоэкдисте-роидов показали, что эти нетоксичные для млекопитающих вещества обладают комплексом ценных для медицины свойств и, следовательно, перспективны для создания на их основе высокоактивных препаратов. Определенный интерес фитоэкдистероиды представляют для пчеловодства и шелководства, а также в качестве средств защиты растений от фитофагов, неадаптированных к определенным типам экдистероидов.

Одним из наиболее богатых экдистероидами (суммарное содержание ~2.2% от воздушно-сухого сырья) источников является растение 8вггаШ1а еоюпМа Ь., произрастающее на территории Южного Урала. Хотя об исследовании экдистероидного состава с. сообщалось ранее, оставались неизученными малополярные компоненты экстрактов из этого растения.

Недостаточно исследованы возможности синтетических трансформаций главного компонента экдистероидной композиции 8вггаЫ1а еогопа1а К - 20-гидроксиэкдизона и его производных в новые или малодоступные экдистероиды либо их аналоги, представляющие интерес в качестве биологически активных соединений с новым комплексом свойств.

В этой связи исследования по выделению и идентификации фитоэкди-стероидов из природных источников, а также изучение трансформаций природных фитоэкдистероидов представляются весьма актуальными.

Работа выполнялась как плановая в Институте нефтехимии и катализа АН РБ и У1Щ РАН по теме: «Химия экдистероидов и хроманолов: синтез и трансформации» (номер государственной регистрации 01.200.204384), частично финансировалась Российским фондом фундаментальных исследований (грант № 04-03-33103).

Цель работы состояла в исследовании малополярных фракций экстракта из сока растений 8егтаШ1а еогопМа Ь., в изучении трансформаций 20-гидроксиэкдизона и синтезе новых и редко встречающихся в природных продуцентах экдистероидов.

Научная новизна. Из неисследованных ранее малополярных фракций сока 8егтаШ1а еогопа(а Ь. путем комбинации колоночной хроматографии и ВЭЖХ выделено и идентифицировано (с применением ГО и 2Б экспериментов ЯМР *Н и 13С и масс-спектров с химической ионизацией) 11 фито-экдистероидов, из них - 4 новых: 22-О-ацетилэкдизон, 26-0-ацетил-255'-инокостерон, 20,22-0-(1Я-этилиден)-20-гадроксиэкдизон и 20,22-0-(1Я-этилиден)аюгастерон С, а 2- и 3- ацетаты 20-гидроксиэкдизона, 22-ацетат полиподина В и 20,22-ацетонид аюгастерона С впервые выделены из данного вида растений.

Взаимодействием 20-гидроксиэкдизона с ацетальдегидом, бутан-2-оном, пентан-2,4-дионом и фурфуролом синтезированы новые 20,22-моно-и 2,3:20,22-диацетали. Показано, что из полученных диацеталей наиболее приемлемым для синтеза витикостерона Е является 2,3:20,22-бис-0-(этш1иден)-20-гидроксиэкдизон, последующие 3-х стадийные трансформации которого привели к целевому фитоэкдистероиду с суммарным выходом 84%, а его селективным гидролизом получен 20,22-0-(-этилиден)-20-гидроксиэкдизон, идентичный выделенному из 5. с. новому фитоэкдистероиду.

з

Изучена стереохимия оксимирования 20-гидроксиэкдизона и его ди-ацетонида, найдены условия синтеза соответствующих 6-оксимов (Е)-конфшурации и (6/)-ОКСИМОВ отвечающих им 14Д5-ангадропроизводных.

Впервые исследованы трансформации экдистероидов, протекающие в жидком аммиаке под действием щелочных металлов. На примере 20-гидроксиэкдизона и его ацетонидов обнаружено, что вместо характерного для а,р-енонов восстановления двойной связи с образованием соответствующих насыщенных кетонов в случае экдистероидов происходит НС(9)-НОС( 14)-дегидрирование, приводящее к образованию кислородного мос -тика между атомами С(9) и С(14) с формированием 9а,14а-оксетанового цикла. При этом имеет место С(5)-эпимеризация. Наряду с оксетанами выделены также неизвестные ранее 14{3-эпимеры исходных экдистероидов. Установлено, что в водном метаноле 9а, 14а-оксетаны претерпевают про-тотропную изомеризацию с образованием неописанных ранее 9 а-гидрокси-5а-стахистерона В и его 20,22-ацетонида, а в случае 9а, 14а-оксетана из 20-гидроксиэкдизона в реакционной среде обнаружен и выделен продукт более глубокой структурной перестройки, вызванной миграцией кислорода мостика от С(14) к С(13) атому с 1,2-сдвигом метильной группы от С(13) в С(14) положение с сохранением Р-конфигурации.

Практическая значимость. Из ранее неисследованных малополярных фракций 8еггаШ1а еогопМа Ь. выделены 11 фитоэкдистероидов, определена их экдизонная активность (биотест на БюзорНИа melanogaster выполнен на кафедре биологии Эксетерского университета (Великобритания) профессором Л. Дайненом):

Макистерон С (1)

20,22-0-{Изопропилиден)-20-гидроксиэкдизон(2) 20,22-0-(Изопропилиден) аюгастерон С (3) 2-О-Ацетил-20-гядроксиэкдизон (4) Витикостерон Е (6) 22-О-Ацетилэкдизон (7) 22-О-Ацетилполиподин В (8)

Фитоэкдистероид

Экдизонная (линочная) активность (Ю5а, моль/мл) 1.7 х Ю-7

1-7

1.1 х 1СГ

6.0 X 10"7

1.2 х 10"7 4.2 х Ю"8

1.1 х 10б 9.0 х 108

I-«

26-0-Ацетил-255-инокостерон (9) 20,22-0-(1^-Этилвден)-20-гвдроксиэвдюон(10) 20,22-0-(1Л-Этилиден)аюгастерон С (11) 20-Гидроксиэкдизон (13)

6.0 х 10"8 4.3 х 10"7 6.2 х 10"7 7.5 х Ю'9

Из сока свежесобранной на стадии бутонизации надземной части с. выделена смесь 20-гидроксиэкдизона и экдизона в соотношении 9:1, и разработан метод выделения из этой смеси редкого экдистероида - экдизона. Метод базируется на ацетонировании с последующим разделением смеси и получением индивидуальных 2,3:20,22-диацетонида 20-гидроксиэкдизона и 2,3-ацетонида экдизона с помощью колоночной хроматографии. Гидролизом последнего получен индивидуальный экдизон.

Разработаны методы синтеза редко встречающихся в природных продуцентах фитоэкдистероидов. Синтезированы потенциально обладающие противоопухолевой активностью оксимы, новые производные 20-гидроксиэкдизона и его аналоги со структурой нового типа - ранее неизвестные 14|3-эпимеры, 9а-гидрокси-14Д5-ангидро-, 9сс,14а- и 9а,13а-окса-производные 5а-эпимерного ряда. Выявлены соединения с выраженной противовоспалительной активностью.

Апробация работы. Основные результаты исследований представлены на XVII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Казань, 2003), Молодёжной научной школе-конференции «Актуальные проблемы органической химии» (Новосибирск, 2003), Второй международной конференции «Химия и биологическая активность кислород- и серусодержа-щих гетероциклов» (Москва, 2003), Международной научной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений» (Ал-маты, 2003), V Всероссийском научном семинаре и Молодёжной научной школе «Химия и медицина» (Уфа, 2003), II конкурсе научных работ молодых ученых и аспирантов УНЦ РАН и АН РБ (Уфа, 2004), Международной научно-технической конференции "Перспективы развития и практического применения алициклических соединений" (Самара, 2004).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 2 статьи и тезисы 9 докладов на конференциях, получено положительное решение по заявке на патент.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 114 страницах компьютерного набора (формат А4) и включает введение, литературный обзор на тему «Восстановительные трансформации еноновой группировки стероидов», обсуждение результатов, экспериментальную часть, выводы, список литературы (128 наименований).

Основное содержание работы.

1. Выделение и идентификация малополярных фитоэкдистероидов

из сока Serratula coronata L.

Произрастающее на территории Южного Урала многолетнее растение Serratida coronata L (серпуха венценосная) является одним из наиболее богатых источников фитоэкдистероидов (суммарное содержание экдисте-роидов достигает 2.2% в расчете на воздушно-сухую массу надземной части) Наряду с главным компонентом экдистероидного букета S. с. — 20-гидроксиэкдизоном (~2.0%), ранее было выделено и идентифицировано 13 минорных фитоэкдистероидов

Однако ранее не были исследованы экстракты малополярных фракций сока S.c. Комбинацией колоночной хроматографии (SiO2, элюент СНС13-МеОН, 25.1) и ВЭЖХ* были выделены, и с помощью Ш и 2D экспериментов ЯМР* (COSY, TOCSY, PFG-HSQC и PFG-HMBC), масс-спектрометрии с химической ионизацией* (ХИ-МС) идентифицированы

* ВЭЖХ выполнялась проф R. Lafont в лаборатории молекулярной эндокринологии Университета Пьера и Марии Кюри (Париж) на приборе Waters с двумя насосами высокого давления (6000 ат), программа М720, автоматический инжектор WEP, детектор М440 UV (К 254 нм) Спектры ЯМР получены в лаборатории химической и биохимической фармакологии и токсикологии Университета им Рене Декарта (Париж) проф J -P. Giraultна приборе BrokerAMX500 (!Н 500 13 МГц и 1ЭС 125 76 МГц), пробы были ли-пофилизированы и растворены в D2O Масс-спектры с химической ионизацией получены на приборе Riber 10-10В, газ-реагент-аммиак

фитоэкдистероиды 1-11 (схема 1). Из них соединения 7, 9, 10 и 11 оказались новыми фитоэкдистероидами.

Схема 1

2,3,10,11 «,6,6 7,8

2 Я1=Н, 1У=Ме, К>-ОН 4 И^Ас, Кг=1У=Н 71У=Кг=Н

3 1У=ОН, К*"Ме, В?-Н 5 Я1"]!3®!!, 112=Ас 8 К^-ОН ю имр-Н, у-он б дор-н, к>=Ас

11 !У-[(?-Н

26-С-Ацетил-255-инокостерон 9 - основной компонент малополярной фракции сока растений 8вггаШ1а еогопМа Ь. Спектры ЯМР *Н и 13С показали, что остов молекулы идентичен таковому для 20-гидроксиэкдизона. Изменения в структуре боковой цепи соответствующим образом отражаются следующими особенностями ПМР-спектра: появление синглета ацетильной группы при 2.11 м.д.; обнаружение вместо синглета Ме-26 дублет-дублетных сигналов новой группы -СН2-О- при 3.95 м.д (I 11.0 и 6.5 Гц) и 4.05 м.д. (7 11.0 и 6.0 Гц). Наличие последней подтверждается слабополь-ным сдвигом сигнала атома С-26 в спектре ЯМР 13С -на 40 м.д. по сравнению со спектром 20-гидроксиэкдизона. Более того, отсутствие гидро-ксильной группы при С-25 проявляется в сдвиге сигнала Ме-27 в более сильное поле и его трансформацией из синглета в дублет (5 0.96 м.д., I 6.9 Гц). В ХИ-МС присутствуют два характерных пика: молекулярного иона с

m/z, 522 (100%) и иона [М+Н2О]+ с m/z, 540 {83%). 255-Конфигурация выделенного экдистероида установлена, исходя из следующих фактов. Ранее неацетилированный инокостерон был выделен в виде смеси 255- и 25R-эпимеров (2:1) из Achyranthesfauriei. В виде индивидуального 255-эпимера его извлекли из Serratula coronata L., что было подтверждено данными ВЭЖХ и ЯМР 13С, где наблюдались одиночные сигналы С-22, С-24, С-25, С-26 и С-27 атомов, как и в нашем случае. Из этого можно заключить, что атом С-25 выделенного нами 26-0-ацетилинокостерона также обладает S-конфигурацией

Соединению 7 была приписана структура 22-0-ацетилэкдизона. Его спектры ЯМР *Н и 13С показали, что основной структурный фрагмент молекулы - это скелет экдизона. В области расположения ацетильных групп (ПМР-спектр) наблюдается синглет с 8 2.13 м.д. Сигнал Н-22 в ПМР-спектре смещен в более слабое поле вследствие наличия ацетильной группы при С-22, сигнал которого в спектре ЯМР 13С также смещается в слабое поле (А5~2 м.д.) по сравнению со спектром экдизона. Характерные пики в ХИ-МС: m/z 506 (70%) [М]+, 507 (56%) [М+Н]+, 508 (80%) [М+2Н]+, 524 (100%) [М+Н2О]+.

Спектры ЯМР *Н и 13С экдистероида 10 незначительно изменяются по сравнению со спектрами 20-гидроксиэкдизона, и различия связаны с видоизменениями боковой цепи. Так, сигнал Н-22 в ПМР-спектре сдвигается в слабопольную область (А5-0.4 м.д.). Кроме того, наблюдается появление новых сигналов: квартета при 5.16 (7 5.0 Гц) и дублета при 1.40 м.д. (/ 5.0 Гц). В спектре ЯМР 13С сигналы С-20 и С-22 смещены в более слабое поле (Д8~8-9 м.д.), в области 8 102.5 м.д. присутствует новый сигнал, который следует отнести к появлению ацетального атома углерода. Однозначное отнесение сигналов атомов водорода и углерода группы МеСНОг было сделано с помощью комбинированного анализа Н COSY и Н-13С PFG-HSQC спектров, которые подтвердили наличие этилиденовой группировки

между С-20 и С-22 атомами анализируемого соединения. Более того, сравнение спектров Я М Р С данного экдистероида с таковыми для заведомо синтезированного показало их идентичность. Характерные пики в ХИ-МС: т/г 507 (24%) [М+Н]+ и 524 (52%) [М+Н2О]+. Ацетальный атом углерода является асимметричным, и природный экдистероид 10 выделен в виде смеси Я- и 5- эпимеров с с одержанием минорного компонента около 15%, о чем свидетельствуют наличие и отно сительная интенсивность двух минорных Н сигналов при 5.36 (к, / 5.0 Гц) и 1.35 м.д. (д, / 5.0 Гц), которые были "приписаны соответственно СН и СНз группам ацетального фрагмента минорного эпимера согласно данным КОЕ8У экспериментов. На основании результатов последних былаустановлена конфигурация аце-талыгого атома углерода в минорном изомере: в спектре наблюдался сильный КОЕ эффект от сигнала СН диоксоланового цикла (8 5.36 м.д.) на соседней СН3-группе (8 1.35 м.д.) и среднее КОЕ взаимодействие с Ме-21, что отвечает 5-конфигурации ацетального атома в минорном эпимере. Следовательно, основной эпимер 10 является 20,22-(9-(1Я-этилиден)-20-гидроксвэкдизоном.

При сравнении спектров ЯМР *Н и 13С экдистероида 11с таковыми для 20-гидроксиэкдизона были отмечены следующие особенности. В спектре ЯМР Н появляется новый сигнал при 4.20 м.д., коррелирующий (2Б СО8У-эксперимент) с сигналом Н-9, который проявляется широким дублетом (8 3.11, / 9.0 Гц). Таким образом, сигнал с 8 4.20 следует отнести к аксиальному Н-11 при экваториальной 11-гидроксигруппе. Структурные изменения в боковой цепи (по сравнению с 20-гидроксиэкдизоном) отражаются в спектрах ЯМР !Н и 13С. Смещение сигналов Ме-26 и Ме-27 в область сильного поля (А8-0.3 м.д.) и их трансформация из синглета в дублет свидетельствуют об отсутствии (ОН)-группы при С-25. Наличие этилиде-новой группы приводит к изменениям, описанным выше для соединения 10. Наличие одного квартета при 5.15 м.д. (7 5.0 Гц) (МеСНО2) и одного

дублета при 1.35 м.д. (I 5.0 Гц) (МеСНО.) позволяет сделать вывод о гомогенности конфигурации ацетального атома углерода выделенного соединения 11, являющегося, аналогично соединению 10, Л-эпимером, а именно 20,22-0-(-этидиден)аюгастероном С.

Выделенные нами макистерон С (1), 20,22-ацетониды 20-гидроксиэкдизона (2) и аюгастерона С (3), 2- (4) и 3-ацетаты 20-гидроксиэкдизона (5), витикостерон Е (6) и 22-ацетат полиподина В (8) были идентифицированы сравнением их МС спектров и спектров ЯМР *Н и 13С с приведенными в литературе для этих соединений (некоторые небольшие отличия обусловлены тем, что наши образцы были липофилизи-рованы и их спектры сняты в D2O, тогда как приведенные в литературе спектры были получены в растворе C5D5N или CD3OD).

Таким образом, идентифицированные минорные малополярные компоненты 8егтаШ1а еогопМа L. представляют собой преимущественно конью-гаты (ацетаты или ацетали) фитоэкдистероидов (экдизона, 20-гидроксиэкдизона, полиподина В, аюгастерона С и инокостерояа).

2. Получение экдизона из Serratula сотопМа Ь.

Экдизон (12) является первым гормоном линьки, выделенным из коконов БошЫх шоп. Концентрация этого зооэкдистероида в организме насекомых ничтожно мала (нанограммовые количества). Весьма мало его содержание и в растениях.

Нами было замечено, что выделенный из сока растений 8егтаШ1а еогопа(а Ь на стадии вегетации 20-гидроксиэкдизон (20Е) практически не содержал экдизона (Е). С другой стороны, полученный из сока растений, собранных в фазе бутонизации, 20Е содержал до 10% Е. Однако разделить эти два близких по структуре экдистероида с помощью колоночной хроматографии не удалось. Задача была решена путем превращения смеси (1:9) Е и 20Е в соответствующую смесь 2,3-ацетонида Е (14) и 2,3:20,22-диацетонида 20Е (15), легко поделенную на индивидуальные компоненты

с помощью колоночной хроматогафии. Последующий гидролиз ацетонида 14 привел к целевому экдизону 12 (схема 2).

Схема 2

14 15

Реагенты и условия: а. (Ме)2СО,ФМК; 6.8Ю2; с. 70% АсОН.

3. Новые производные 2 0 - гид роксиэкд изона. Синтез витикостерона £ и 20,22-О-(1Л-этилиден)-20-гидроксиэкдизоиа.

Среди идентифицированньк нами минорных малополярных компонентов БвггаШа евгвпШа L. были коньюгаты 20-гидроксиэкдизона -25-ацетат (витикостерон Е) 6 и 2О,22-0-(1этилиден) производное 10 (новый фито-экдистероид). Нами были предложены схемы синтеза этих соединений.

Витикостерон Е известен как минорный компонент экдистероидного состава ряда видов растений. Известно несколько методов его синтеза, ос -нованных на ацетилировании третичной 25 -гидроксигруппы 20Е после связывания более реакционноспособных 2-, 3- 20- и 22-гидроксильных групп в 2,3:20,22-диацетонид или 2,3-ацетонид-20,22-фенилборонат. Однако, суммарный выход целевого фитоэкдистероида в известных методах был невысок, а сам витикостерон Е недостаточно охарактеризован. Основная проблема его синтеза заключается в проведении селективного гидролиза ацетонидных групп с сохранением 2 5-ацетатной группы. В этой связи,

для выбора наиболее приемлемой схемы синтеза целевого соединения был получен ряд новых производных 20-гидроксиэкдизона 13 (схема 3).

Нами найдены условия взаимодействия соединения 13 с ацетальдеги-дом в присутствии фосфорномолибденовой кислоты (РМА), когда образуется конфигурационно однородный 2,3:20,22-бисацеталь 16, что подтверждается двумя одиночными сигналами 20,22- и 2,3-ацетальных групп в спектре ЯМР13С (8 101.0 и 101.4 м.д. для С -Г и С-1" соответственно) и наличием только двух квартетов ^ 5 Гц) протонов при С-ГиС-1"в спектре ЯМР2Н (растворитель — СБСЬ) (8 5.04 и 5.09 м.д. соответственно) (исче-зающе малые квартетные сигналы, обнаруживаемые при 8~5.25 и 5.36 м.д., свидетельствуют, что возможные примеси диастереоизомеров по С-Г и С-1" хиралъным центрам не превышают 10%). Гидролизом бисацеталя 16 получен конфигурационно однородный 20,22-ацеталь 10 (в спектре ЯМР13С присутствует одиночный сигнал атома С- при 8 101.1, а в спектре ЯМР1!! - квартет с 8 5.04 (/ 5 Гц) (едва заметный квартет с 8 5.25 свидетельствует о присутствии примеси другого эпимера, не превышающей 10%)). Из 2Б КОЕ8У-эксперимента, показавшем слабый КОЕ-эффект от НС-Гна протонах Н3С-18 и полное отсутствие КОЕ-корреляции с НзС-21, можно заключить, что атом С-1' в полученном 20,22-ацетале имеет конфигурацию, которой отвечает расположение более объемной группы СНз (в сравнении с атомом водорода) с пространственно менее затрудненной стороны 20,22-диоксоланового цикла. Таким образом, синтезированный 20,22-ацеталь идентичен выделенному из Serratula coronata Ь. 20,22-0-(1Л-этилиден)-20-гидроксиэкдизону 10.

Взаимодействием соединения 13 с метилэтилкетоном, ацетилацетоном и фурфуролом получены смеси соответствующих моно- (17-19) и диацета-лей (20-22), которые были разделены с помощью колоночной хроматографии. Образование циклических ацеталей по 2,3- и 20,22-гидроксильным группам отражается в их спектрах ЯМР 13С слабопольным смещением сиг-

налов атомов С-2, С-3, С-20 и С-22, а также появлением сигналов ацеталь-ных атомов углерода в области 8 105-110 м.д. (для соединений 19 и 22 -95-97 м.д.)- В спектрах ЯМР 13С соединений 17,18 и 20,21, полученных при взаимодействии соединения 13 с метилэтилкетоном и ацетилацетоном, сигналы 20,22--ацетальных атомов - одиночные, следовательно они конфигурационно однородны, тогда как сигналы 2,3-ацетальных атомов соединений 20 и 21 удвоены, что свидетельствует об их диастереомерном характере. Частичный гидролиз бисацеталей 20, 21 приводит к соответствующим хирально однородным 20,22-моноацеталям 17, 18, имеющих, по-видимому, конфигурацию, которой отвечает расположение более объемистых групп Я2 с пространственно менее затрудненной стороны диоксо-ланового цикла.

Более сложная ситуация наблюдается в спектрах ЯМР 13С ацеталей 19 и 22, полученных взаимодействием 13 с фурфуролом, что обусловлено, по-видимому, не только образованием хиральных атомов С-Г и С-1" 1,3-диоксолановых циклов, но и возможностью различной ориентации фура-нового цикла по отношению к циклу 1,3-диоксолана. Вследствие этого после превращения бисацеталя 22 в 20,22-ацеталь 19 в области ацетальных атомов углерода в спектре моноацеталя присутствуют 2 сигнала. Удвоение сигналов в спектре ацеталя 19 наблюдается также для атомов С-17, С-20 и С-22.

Поскольку из синтезированных бисацеталей кислотный гидролиз до экдистероида 13 наиболее гладко протекал в случае бисацеталей 16 и 20, дальнейшие трансформации в целевой витикостерон Е 6 выполнялись с этими соединениями. Продолжительное выдерживание каждого из них с уксусным ангидридом и пиридином в присутствии БМЛР привело к 25-ацетатам 23 и 24 соответственно. Действием 70%-ной АсОН соединения 23 и 24 легко превращены в соответствующие моноацетали 25 и 26, дальнейший гидролиз (АсОН - /иСЬ) каждого из которых привел к целевому фи-

тоэкдистероиду 6. Суммарный выход витикостерона Е в расчете на диаце-тали 16 и 20 составил 84 и 35% соответственно.

Для сравнения был выполнен синтез витикостерона Е традиционным путем через диацетонид 15, при этом выход целевого соединения составил 32%. Следовательно, наиболее рациональным представляется синтез витикостерона Е 6 по маршруту 16—>23—>25—>6 (схема 3).

Схема 3

23,» 25,21 в И„»»®.»>

Я!=Н (10,16,19,22,23,25), Ме (17,18,20,21,24,26);

112=Ме (10,16, 23, 25), Е1 (17,20,24, 26), МеСОСН2 (18,21), 2-фурил (19,

22); Я3=Н (16,22,23), Ме (20,21,24);

Я4=Ме (16,23), Е1 (20,24), МеСОСН2 (21), 2-фурил (22).

Реагенты и условия: а. СН3СНО/ФМК, 2°С, 72 ч (для соединений 10, 16); Ь. СН3СОСН2СН3/ФМК, 25°С, 0.25 ч (для соединений 17,20); с. СН3СОСН2СОСН3/ФМК, 25°С, 1 ч (для соединений 18, 21); Л. фурфурол/ФМК, 25°С, 24 ч (для соединений 19, 22); е. Ас20 /Ру - ОМАР;/ 70%-ная АсОН; 70%-ная АсОН/гпСЬ.

Таким образом, на основе трансформаций производных 20-гидроксиэкдизона предложены эффективные синтезы минорных компонентов ЗеггаЫа согопШа Ь. - витикостерона Е и нового фитоэкдистероида -20,22-0-(1Л-этипиден)-20-гидроксиэкдизона.

4. Оксимирование 20-гидроксиэкдизона и его диацетонида: конфигурация б-оксимов и их 14,15-ангидропроизводных.

В последнее время проявляется повышенный интерес к стероидным ок-симам, обусловленный тем, что оксимы, выделенные из морских губок Cynachyrella аНоеШа и C.apion, проявили ингибирующую активность по отношению к ароматазе и, следовательно, являются потенциальными противоопухолевыми средствами. Оксимы 20-гидроксиэкдизона и его производных в литературе не описаны. Есть лишь упоминание, что производные по карбонильной группе 20-гидроксиэкдизона обладают большей по сравнению с ним противоопухолевой активностью.

Взаимодействием диацетонида 20-гидроксиэкдизона 15 с солянокислым гидроксиламином в пиридине и последующей нейтрализацией реакционной смеси спиртовым раствором едкого кали получена эквимольная смесь изомерных оксимов - (1/Е-2Т) (схема 4), что следует из соотношения интенсивностей дублетов (У 2 Гц) Н-7 с 8 5.95 (2-изомер) и 6.61 м.д. (Е-изомер) в спектре ЯМР 1Н. Сигнал Н-7 Е-изомера находится в более слабом поле по отношению к соответствующему сигналу 2-изомера 27 вследствие влияния находящегося в близком соседстве фрагмента N0 гидро-ксиминной группы.

Обработкой смеси оксимов (2УЕ)-27 (трифторметил)триметилсиланом и тетрабутиламмонийфторидом получена смесь (1:1) 14,25-бис(триметилсилиловых) эфиров 2- и изомерных оксимов 28 ^-28 и Е-28). Колоночной хроматографией выделены оксимы Z-28 (примесь Е-изомера <10%) и £-28 (примесь 2-изомера < 5%) [из соотношения интенсивностей сигналов Н-7 с 8 5.88 (2-изомер) и 6.56 (Е- изомер)].

Если реакционную смесь после оксимирования диацетонида 15 в пиридине не подвергать обработке щелочью, то получают эквимольную смесь (разделена с помощью колоночной хроматографии) соответствующего ок-

сима (конфигурации £-27 (содержание Z-изомера < 5%, из соотношения интенсивностей сигналов с 8 6.61 и 5.95 м.д.) и 7,14-диенового 6-оксима ^-конфигурации Z-29 [содержание £-изомера < 5%, из соотношения интенсивностей сигналов с 8 6.21 (Н(7) в Z-изомере) и 6.83 м.д. (Н(7) в £-изомере)]. Структура диенового оксима Z-29 подтверждается обнаружением в спектре ЯМР 13С сигналов 8р2-гибридизованных атомов углерода с 8 139.5 (С-14) и 116.7 м.д. (С-15). Как видно, при такой обработке реакционной смеси протекает дегидратация, которой подвергается только Z-изомерный оксим Z-27, тогда как изомер £-27 сохраняется.

С другой стороны, смесь изомерных оксимов (7/Е)-21 нацело превращается в диеновый оксим конфигурации при выдерживании в растворе метанола, содержащего РМА. При этом происходит деблокирование 2,3-гидроксигрупп и единственным продуктом реакции оказывается оксим Z-30. По-видимому, в приведенных условиях имеет место изомеризация оксима £"-27 в Z-изомер, который далее дегидратируется. Уместно отметить, что в ацетоне в присутствии РМА смесь (Z/E)-21 не изменяется.

При взаимодействии 20-гидроксиэкдизона 13 с NFbOH- HC1 в пиридине и последующей нейтрализацией KOH-EtOH образуется смесь оксимов £31 и Z-32 в соотношении —1:2.5 (из соотношения интенсивностей сигналов Н-7 с 8 6.56 (£-31) и 6.17 (Z-32)). По-видимому, в случае оксимирования 13, в отличие от диацетонида 15, при этих условиях обработки реакционной смеси часть изомера £-31 первоначальной, вероятно эквимольной, смеси Z/E-31 превращается в Z-31. В итоге получается смесь оксимов £-31 и Z-32 с существенным преобладанием последнего. Полученная смесь (1:2.5) оксимов £-31 и Z-32 нацело переходит в единственный продукт -диеновый оксим Z-32 при обработке метанольным раствором в присутствии РМА.

Если продукт оксимирования соединения 13 в пиридине не нейтрализовать, то при выделении получают смесь диеновых оксимов Z-32 и £-32 в

соотношении -2.5:1 (из соотношения интенсивностей сигналов Н-7 с 8 6.17 и 6.78 м.д), то есть, в отличие от оксимов 27, в случае оксимов 31 дегидратироваться может, вероятно, не только 2-, но и п-изомер, хотя и менее легко. В итоге получается смесь диеновых оксимов 1/Е-32 с существенным преобладанием 2-изомера. Интересно, что при оксимировании 13 в этаноле в присутствии КяОЫ единственным продуктом оказывается оксим Е-31. К сожалению, из-за плохой растворимости диацетонида 15 в этаноле провести его оксимирование в тех же условиях не удалось.

В условиях ацетонирования экдистероидов смесь диеновых оксимов ZJE-32 была превращена в смесь соответствующих диацетонидов ZIE-29 того же изомерного состава. С другой стороны, ацетонирование индивидуального оксима 31 дало смесь изомерных диацетонидов диеновых оксимов Z-29 и £-29 (1.5:1, из соотношения интенсивностей сигналов с 8 6 21 и 6.83 м.д.).

5. Необычные трансформации 20-гидроксиэкдизона и его ацетони-дов в растворах щелочных металлов в жидком аммиаке.

Восстановление ненасыщенных кетонов под действием щелочных металлов в жидком аммиаке находит применение в химии стероидов для селективного восстановления двойной связи А7-6-кетогруппировки. Однако, в ряду экдистероидов эта реакция не исследовалась.

Нами обнаружено, что при взаимодействии 20-гидроксиэкдизона 13, его ди- 15 и 20,22-моно-2 ацетонидов со щелочными металлами в жидком аммиаке вместо ожидаемых продуктов восстановления А7-связи образуются соединения с кислородным мостиком между атомами С-9 и С-14, или оксетаны 33-35 соответственно. В случае соединений 13 и 15 выделены также 14(3-эпимеры исходных экдистероидов - соединения 36 и 37 соответственно. При этом, диацетонид 15 под действием Ы-ж.МНз превращается главным образом (>90%) в оксетан 34, тогда как его взаимодействие с Ка-ж.гШз приводит почти исключительно к 14|3-эпимеру 37. С другой стороны, при взаимодействии 13 с Ы-ж.гШз образуется смесь (-1:1) оксетана 33 и 14(3-эпимера 36, тогда как действие на 13 Ка-ас.КНЬ приводит к сложной смеси продуктов. В то же время, взаимодействие моноацетонида 2 с Ка-ж.гШз даёт исключительно оксетан 35 (схема 5).

Схема 5

13,33,36. R'.H'.Ff.RVI 1544,37. №.№.1№.МегС î,И Я'»П».Н, Н'.^-МцС

Реагенты и условия: a. Me (Li или Na), ТГФ, NH3, - 33°С; Ь. CF3SiMe3-TBAF.

О превращении 13,15,2 в соответствующие оксетаны 33-35 свидетельствует наблюдаемый в спектрах ЯМР 13С значительный слабопольный сдвиг сигнала С-9 (А5-58 м.д.) и его трансформация из дублета в синглет (режим JMOD). В результате образования оксетанового цикла наблюдаются существенные сдвиги сигналов С-14 и других углеродных атомов, близко расположенных к кислородному мостику. Спектры ЯМР *Н оксетанов 33-35 также заметно изменяются в сравнении с соответствующими спектрами исходных экдистероидов. В частности, в спектрах каждого из соединений 33-35 отсутствует сигнал Н-9, и вследствие этого сигнал Н-7 из дублета (4/~2.0 Гц) становится синглетом, смещаясь в сильное поле (Д8 0.1-0.2 м.д.). Кислород оксетанового цикла оказывает дезэкранирующее влияние на Me-18, сигнал которого смещается в слабое поле по отношению к соответствующему сигналу в спектре 2 (Д8 0.5 м.д.). Посредством ID и 2D ЯМР экспериментов* установлено, что соединение 34 является 2,3:20,22-диацетонидом 9аД4а-окса-14-дезокси-5а-20-гидроксиэкдизона.

Поскольку спектры ЯМР 13С экдистероидов 33 и 35 подобны спектру ЯМР 13С 34, то им также следует приписать структуру 9ос,14а-окса-5ос-экдистероидов.

* Эксперименты ID и 2D ЯМР выполнены в лаборатории проф. J.-P. Granit на приборе Bruker AMX 500, растворитель- CDC13.

Для 14|3-Э1шмеров 20-гадроксиэкдизона 36 и его диацетонида 37 характерен слабопольный сдвиг сигнала С-14 по отношению к таковому в спектрах ЯМР °С исходных 14а-экдистероидов (Л8-11 м.д.). В меньшей степени смещаются сигналы близко расположенных к С-14 атомов С-7, С-8, С-13, С-15, тогда как другие почти не меняют своего положения в спектрах. Такого же рода изменения наблюдаются в спектре ЯМР 13С бис(триметилсилильного) производного 38, полученного обработкой 14(3-диацетонида 37 СР381Ме3-Би4К+Р, в сравнении со спектром синтезированного ранее диацетонида 14,25-бис-0-(триметилсилил)-20-гидроксиэкдизона. Эпимеризация Н-5 не наблюдалась в случае образования 14р-эпимеров 36 и 37, о чем можно судить по почти полному совпадению химических сдвигов С-1, С-2, С-3, С-4, С-5, С-10 и С-19 атомов соединений 13 и 36,15 и 37 в спектрах ЯМР 13С. В спектрах ЯМР И сигналы Н-2, Н-3, Н-19 этих экдистероидов также попарно идентичны, тогда как известно, что в случае 5 и 5ос-эпимеров сигналы соответствующих протонов значительно различаются своим относительным положением в спектрах.

Структуры соединений 33-37 подтверждены масс-спектрами высокого разрешения.

Продолжительное выдерживание оксетанов 33 и 35 в водном метаноле приводит к 9а-гидрокси-5а-стахистерону В 39 и его 20,22-ацетониду 40 соответственно (схема 6), что однозначно следует из сравнения их спектров ЯМР 13С со спектрами заведомых стахистерона В и его 20,22-ацетонида. Наиболее существенное различие сравниваемых спектров, обусловленное 9а-гидроксигруппой в 39 и 40, состоит в смещении сигнала С-9 в слабое поле (Д5~ 35 м.д.) и трансформации его из дублета в синглет. Заметно смещены в слабое поле также сигналы С-11 и С-12 в спектрах соединений 39 и 40 (Д8~ 5-9 м.д.). В спектрах ЯМР *Н этих соединений отсутствует сигнал Н(9), а сигнал Н(7) становится синглетным. Атом Н-5 эк-

дистероидов 39 и 40 занимает (Х-положение, об этом свидетельствует изменение порядка выхода сигналов Н-2 и Н-3, относительно их взаимного местоположения в спектрах ЯМР *Н 5|3-эпимеров. Структуры 39 и 40 подтверждены масс-спектрами высокого разрешения.

Схема б

В качестве продукта изомеризации оксетана 33 в водном метаноле наряду с 9а-гидрокси-5а-стахистероном В 39 выделен 9аДЗос-окса-13-деметил-14|3-метил-14-дезокси-5а-20-гидроксиэкдизон 41. В это же соединение оксетан 33 превращается в условиях проведения ВЭЖХ (элю-ент-МеОНУН2О). Отнесение сигналов в спектрах ЯМР *Н и 13С (500 МГц, СБС13) и установление структуры соединения 41 выполнено с помощью Ш и 2Б экспериментов ЯМР. Масс-спектры высокого разрешения окса-производных 33 и 41 почти идентичны, различия - в соотношении интен-сивностей пиков.

Наблюдаемая изомеризация оксетанов 33 и 35 в соединения 39-41 протекает, вероятно, через оксониевый ион А , который переходит в кар-бкатион В (схема 6). Дальнейшие трансформации возможны по двум направлениям. Отщепление протона от С-15 приводит к соединениям 39 и 40. Альтернативный путь превращения карбкатиона В вызван 1,2-сдвигом метильной группы от С-13 кС-14в карбкатионе В с образованием кисло-

родного мостика между С-9 и С-13 атомами. Оксоний-катион С в результате депротонирования превращается в 9ДЗ-оксопроизводное 41.

Выводы

1. Впервые исследованы мало полярные компоненты экдистероидного состава Serratula coronata Ь, выделено и идентифицировано 11 фито-экдистероидов, из них 2- и 3- ацетаты 20-гадроксиэкдизона, 22-ацетат полиподина В, 20,22-ацетонид аюгастерона С впервые получены из данного вида растений, а 22-<9-ацетилэкдизон, 26-О-ацетил-255-инокостерон, 20,22-(9-(1/?-этилиден)-20-гидроксиэкдизон и 20,22-0-(1#-этилиден)аюгастерон С являются новыми экдистероидами.

2. Синтезированы новые производные 20-гидроксиэкдизона - цикличе-

ские ацетали по 2,3:20,22-гидроксильным группам. На основе направленных трансформаций 20-гидроксиэкдизона синтезированы ви-тикостерон Е и 20,22-О-(1/?-этилиден)-20-гидроксиэкдизон-минор-ные малополярные компоненты фитоэкдистероидов Serratula coronata Ь.

3. В результате исследования реакции оксимирования разработаны вы-сокостереоселективные методы синтеза (б)-ОКСНМОБ 20-гидроксиэкдизона и его диацетонида, а также 14,15-ангидропроизводных оксимов конфигурации.

4. Обнаружено, что в реакции 20-гидроксиэкдизона и его ацетонидов с растворами щелочных металлов в жидком аммиаке образуются 9ос,14ос-оксапроизводные 5а-экдистероидов. Наряду с оксетанами получены 14р-эпимерные экдистероиды. В водном метаноле оксетаны изомеризуются с образованием 9а-гидрокси-14Д5-ангидро-5а-20-гидроксиэкдизонов. Более глубокая структурная перестройка оксета-

на из 20-гидроксиэкдизона, вызванная смещением связи С-0 от С-14 к С-13 атому и сопровождающаяся 1,2-сдвигом метильной группы от

С-13к С-14 атому,приводит к 9а, 13а-окса-13-деметил-14Р-метил-14-дезокси-5а-20-гадроксиэкдизону. 5. Разработан метод получения редкого природного зоо- и фитоэкдисте-роида - экдизона, включающий стадии выделения из сока свежесобранных на стадии бутонизации растений Serratula coronata L. смеси (—1:9) экдизона и 20-гидроксиэкдизона, превращения ее в соответствующую смесь ацетонида экдизона и диацетонида 20-гидроксиэкдизона, разделения её с помощью колоночной хроматографии и последующего гидролиза 2,3-ацетонида экдизона.

Основное содержание работы изложено в следующих публикациях:

1. Галяутдинов И.В., Веськина НА, Одиноков В.Н. Неожиданные трансформации 20-гидроксиэкдизона и его ацетонидов с образованием оксе-танового цикла. // В кн. Химия и биологическая активность синтетиче-скихи природныхсоединений; кислород- и серусодержащие гетероцик-лы. Москва, IBS Press. - 2003. - T.I. -С. 222-224.

2. Галяутдинов И.В., Назмеева СР., Савченко Р.Г., Веськина Н.А., Недо-пекин Д.В., Фатыхов А.А., Халилов Л.М., Одиноков В.Н. Новые производные 20-гидроксиэкдизона. Синтез витикостерона Е. // ЖОрХ. - 2004. - Т.40. - Вып. 5. - С. 709-717.

3. Одиноков В.Н., Галяутдинов КВ., Веськина Н.А., Яшина Е.А Способ получения ос-экдизона // Заявка № 2003132280. Решение о выдаче патента на изобретение от 18.11.03.

4. Галяутдинов И.В., Веськина НА, Одиноков В.Н. 2,3:20,22-Диацетонид (9-0-14-дегидро)-9,14-окса-20-гидроксюкдизон. // Труды второй международной конференции "Химия и биологическая активность кислород- и серусодержащие гетероциклов". Москва, 2003. Т.2. С. 272.

5. S.R. Nazmeeva, N.A. Veskina, D.V. Nedopekin, I.V. Galyautdinov, R.G. Savchenko, V.N. Odinokov. New acetales of 20-hydroxyecdysone in the viticosterone E synthesis. // International Conference on Natural Products: Chemistry, Technology & Medicinal Perspectives. Almaty-Kazakhstan. Abstracts, 2003. P. 137.

6. I.V. Galyautdinov, N.A. Veskina, D.V. Nedopekin, L.M. Khalilov, V.N. Odinokov , S.Kumpun, N. Evrard-Tedeschi, J.-P. Girault, L. Dinan, R. Lafont. Phytoecdysteroids from Serratula coronata L. juice. // International Conference on Natural Products: Chemistry, Technology & Medicinal Perspectives. Almaty-Kazakhstan. Abstracts, 2003. P. 138.

7. Галяутдинов И.В., Веськина Н.А., Халилов Л.М., Одиноков В.Н. Трансформации экдистероидов под действием щелочных металлов в жидком аммиаке. // Тезисы докладов XVII Менделеевского съезда по общей и прикладной химии. Казань, 2003. T.I. C.218.

8. Одиноков В.Н., Галяутдинов И.В., Веськина Н.А. Оксимы 20-гидроксиэкдизона и его ацетонидов и их 14,15-ангидропроизводдые -потенциальные противоопухолевые средства. // Тезисы докладов IV Всероссийского научного семинара и Молодежной научной школы "Химия и медицина. Проблемы создания новых лекарственных средств". Уфа, 2003. С. 91.

9. Веськина Н.А., Галяутдинов И.В., Халилов Л.М., Одиноков В.Н., Dinan L., Lafont R. Новые экдистероиды из Serratula coronata L. // Тезисы докладов Молодёжной научной школы-конференции "Актуальные проблемы органической химии ". Новосибирск, 2003. Д195.

10.Веськина Н.А. Неожиданные трансформации 20-гидроксиэкдизона и его ацетонидов в растворе щелочных металлов в жидком аммиаке. Синтез новых экдистероидов. // Материалы II конкурса научных работ молодых ученых и аспирантов УНЦ РАН и АН РБ. Уфа, 2003. С Л 4.

П.Веськина НА., Галяутдинов И.В., Халилов Л.М., Одиноков В.Н. (62)-и (6£)- Оксимы 20-гидроксюкдизона и его диацетонида и их 14,15-ангидропроизводных // Тезисы докладов Международной научно-технической конференции "Перспективы развития и практического применения алициклическихсоединений". Самара, 2004. С. 97.

12.Галяутдинов И.В., Веськина НА., Халилов Л.М., Одиноков В.Н. Оксе-таны и 14р-эпимеры из реакции 20-гидроксюкдизона и сто ацетонидов с растворами щелочных металлов в жидком аммиаке // Тезисы докладов Международной научно-технической конференции "Перспективыраз-вития и практического применения алициклических соединений ". Самара, 2004. С. 106.

Автор выражает благодарность д.х.н., проф. Халилову ИМ. за активное участие в обсуждении спектральных данных при установлении структуры новых соединений, член-корр. РАН Джемилеву У.М. за проявленный интерес к работе.

Соискатель: —

Издательская лицензия Б848184от 21.04.99 г. Подписано в печать 12,11.2004. Бумага офсетная. Формат60х84'Д. Гарнитура «Тайме». Усл.печ.л. 1,34. Печать методом ризографии. Тираж 115 экз. Заказ 04-12.

Отпечатано в типографии ГУЛ НИИБЖД РБ 450005, Республика Башкортостан, г. Уфа, ул.8 Марта, 12/1.

"¡12414«

396

Список сокращений 3 Введение.ф

Глава 1. Литературный обзор «Восстановительные трансформации еноновой группировки стероидов».

111. Каталитическое гидрирование.

1.2.Восстановление растворами щелочных металлов в жидком аммиаке.19'

1.3.Использование иных восстановительных систем.30>

Глава 2. Обсуждение результатов.

2.1. Выделение и идентификация малополярных фитоэкдистероидов из сока Serratula coronata L.

2.2. Получение экдизона из Serratula coronata L.

2.3. Новые производные 20-гидроксиэкдизона. Синтез витикостерона Е и 20,22-<9-(1/?-этилиден)-20-гидроксиэкдизона.

2.4L Оксимирование 20-гидроксиэкдизона и его диацетонида: конфигурация 6-оксимов и их 14, 15-ангидронроизводных.

2.5. Необычные трансформации 20-гидроксиэкдизона и его ацетонидов в растворах щелочных металлов в жидком аммиаке

Глава 3. Экспериментальная часть.

3.1. Выделение и идентификация малополярных фитоэкдистероидов из сока Serratula coronata L.

3.2. Получение экдизона из Serratula coronata L.

3.3. Новые производные 20-гидроксиэкдизона. Синтез витикостерона Е и 2О,22-0-(1/?-этилиден)-2О-гидроксиэкдизона.

3.4. Оксимирование 20-гидроксиэкдизона и его диацетонида.

3.5. Необычные трансформации 20-гидроксиэкдизона и его ацетонидов в растворах щелочных металлов в жидком аммиаке.

Выводы.

Экдистероиды представляют собой обширную группу полигидрокси-лированных стеринов, выполняющих роль гормонов линьки, метаморфоза и диапаузы насекомых и ракообразных. Впервые обнаруженные у насекомых, экдистероиды затем были выявлены во многих видах растений в значительно более высоких концентрациях (2-2.5% против 10"6 % от общей массы объектов).

Исследования выделенных из растительных источников фитоэкдисте-роидов показали, что эти нетоксичные для млекопитающих вещества обладают комплексом ценных для медицины свойств и, следовательно, перспективны для создания на их основе высокоактивных препаратов. Определенный интерес фитоэкдистероиды представляют для пчеловодства и шелководства, а также в качестве средств защиты растений от фитофагов, неадаптированных к определенным типам экдистероидов.

Одним из наиболее богатых экдистероидами (суммарное содержание ~2.2% от воздушно-сухого сырья) источников является растение Serratula coronata L., произрастающее на территории Южного Урала. Хотя об исследовании экдистероидного состава S. с. сообщалось ранее, оставались неизученными малополярные компоненты экстрактов из этого растения.

Все еще недостаточно исследованы возможности синтетических трансформаций главного компонента экдистероидной композиции Serratula coronata L. - 20-гидроксиэкдизона и его производных в новые или малодоступные экдистероиды либо их аналоги, представляющие интерес в качестве биологически активных соединений с новым комплексом свойств. В этой связи исследования по выделению и идентификации фи-тоэкдистероидов из природных источников, а также изучение трансформаций природных фитоэкдистероидов представляются весьма актуальными.

Цель работы состояла в исследовании малополярных фракций эксщ

4 тракта из сока растений Serratula coronata L., в изучении трансформаций

20-гидроксиэкдизона и синтезе новых и редко встречающихся в природных продуцентах экдистероидов.

В результате исследования малополярных фракций сока Serratula coronata L. путем комбинации колоночной хроматографии и ВЭЖХ выделено и идентифицировано (с применением 1D и 2D экспериментов ЯМР

1 13

Ни Си масс-спектров с химической ионизацией) 11 фитоэкдистероидов, из них - 4 новых: 22-0-ацетилэкдизон, 26-0-ацетил-255'-инокостерон, 20,22-0(1/?-этилиден)-20-гидроксиэкдизон и 2О,22-0-(1Яэтилиден)аюгастерон С, а 2- и 3- ацетаты 20-гидроксиэкдизона, 22-ацетат полиподина В и 20,22-ацетонид аюгастерона С впервые выделены из данного вида растений.

Взаимодействием 20-гидроксиэкдизона с ацетальдегидом, бутан-2-оном, пентан-2,4-дионом синтезированы новые 20,22-моно- и 2,3:20,22-диацетали. Показано, что из полученных диацеталей наиболее приемлемым для синтеза витикостерона Е является 2,3:20,22-бис-0(этилиден)-20-гидроксиэкдизон, последующие 3-х стадийные трансформации которого привели к целевому фитоэкдистероиду с суммарным выходом 84%, а его

9? селективным гидролизом получен 20,22-0-(1/?-этилиден)-20-гидроксиэкдизон, идентичный выделенному из Serratula coronata новому фитоэкдистероиду.

Изучена стереохимия оксимирования 20-гидроксиэкдизона и его диацетонида, найдены условия синтеза соответствующих 6-оксимов (£)-конфигурации и (62)-оксимов отвечающих им 14,15-ангидропроизводных.

Впервые исследованы трансформации экдистероидов, протекающие в жидком аммиаке под действием щелочных металлов. На примере 20-гидроксиэкдизона и его ацетонидов обнаружено, что вместо характерного

2 для а,р~енонов восстановления двойной связи с образованием соответствующих насыщенных кетонов в случае экдистероидов происходит НС(9)-НОС(14)-дегидрирование, приводящее к образованию кислородного мостика между атомами С(9) и С(14) с формированием 9а,14а-оксетанового цикла. При этом имеет место С(5)-эпимеризация. Наряду с оксетанами выделены также неизвестные ранее 14р-эпимеры исходных экдистероидов. Установлено, что в водном метаноле 9а, 14а-оксетаны претерпевают прототропную изомеризацию с образованием неописанных ранее 9а-гидрокси-5а-стахистерона В и его 20,22-ацетонида, а в случае 9а, 14а-оксетана из 20-гидроксиэкдизона в реакционной среде обнаружен и выделен продукт более глубокой структурной перестройки, вызванной миграцией кислорода мостика от С(14) к С(13) атому с 1,2-сдвигом метильной группы от С(13) в С(14) положение с сохранением Р-конфигурации.

Работа выполнялась как плановая в Институте нефтехимии и катализа АН РБ и УНЦ РАН по теме: «Химия экдистероидов и хроманолов: синтез и трансформации» (номер государственной регистрации 01.200.204384), частично финансировалась Российским фондом фундаментальных исследований (грант № 04-03-33103).

Автор выражает благодарность к.х.н., с.н.с. Галяутдинову И.В. за научно-методологическое руководство и постоянную помощь при выполнении работы, д.х.н., проф. Халилову JI.M. за активное участие в обсуждении спектральных данных при установлении структуры новых соединений, член-корр. РАН Джемилеву У.М. за проявленный интерес к работе.

ВЫВОДЫ

1. Впервые исследованы малополярные компоненты экдистероидного состава Serratula coronata L., выделено и идентифицировано 11 фитоэкдистероидов, из них 2- и 3- ацетаты 20-гидроксиэкдизона, 22-ацетат полиподина В, 20,22-ацетонид аюгастерона С впервые получены из данного вида растений,, а 22-0-ацетилэкдизон, 26-0-ацетил-255' инокостерон, 2О,22-0-(1Я-этилиден)-2О-гидроксиэкдизон и 20,22-0-(1/?-этилиден)аюгастерон С являются новыми экдистероидами.

2. Синтезированы новые производные 20-гидроксиэкдизона - циклические ацетали по 2,3:20,22-гидроксильным группам. На основе направленных трансформаций 20-гидроксиэкдизона синтезированы витико-стерон Е и 20,22-0-(1/?-этилиден)-20-гидроксиэкдизон-минорные малополярные фитоэкдистероиды Serratula coronata L.

3. В результате исследования реакции оксимирования разработаны вы-сокостереоселективные методы синтеза (6£)-оксимов 20-гидроксиэкдизона и его диацетонида, а также 14,15-ангидропроизводных оксимов (^-конфигурации.

4. Обнаружено, что в реакции 20-гидроксиэкдизона и его ацетонидов с растворами щелочных металлов в жидком аммиаке образуются 9а,14а-оксапроизводные 5а-экдистероидов. Наряду с оксетанами получены 14(3-эпимерные экдистероиды. В водном метаноле оксетаны изомеризуются с образованием 9а-гидрокси-14,15-ангидро-5а-20-гидроксиэкдизонов. Более глубокая структурная перестройка оксетана из 20-гидроксиэкдизона, вызванная смещением связи С-О от С-14 к С-13 атому и сопровождающаяся 1,2-сдвигом метальной группы от С-13 к С-14 атому, приводит к 9а,13а-окса-13-деметил-14р~метил-14-дезокси-5а-20-гидроксиэкдизону.

5. Разработан метод получения редкого природного зоо- и фитоэкдисте-роида - экдизона, включающий стадии выделения из сока свежесобранных на стадии бутонизации растений Serratula coronata L. смеси (~1:9) экдизона и 20-гидроксиэкдизона, превращения ее в соответствующую смесь ацетонида экдизона и диацетонида 20-гидроксиэкдизона, разделения её с помощью колоночной хроматографии и последующего гидролиза 2,3-ацетонида экдизона. ф

1. Ковганко Н.В., Ананич С.К. Прогресс в химическом синтезе брассино-стероидов. II Хим. прир. соедин- 2002. №2.-С. 99-117.

2. Caine D. Organic Reactions. Reduction and Related Reactions of

3. Unsaturated Carbonyl Compounds with Metals in Liquid ammonia.— Dauben, W.G., Ed.; Wiley: New York, 1976. -Vol.23.

4. Dryden Jr. H.L. Organic Reactions in Steroid Chemistry. Reduction of Steroids By Metal-Ammonia Solutions. Fried J., Edwards J.A.: Eds.; Van

5. Nostrand Reinhold: New York, 1972. -Vol. 1.

6. Tsuju N., Suzuki J., Shiota M., Takahashi U., Nishimura S. Highly stereoselective hydrogenation of З-охо-4-ene and 1,4-diene steroids to 5p -compounds with palladium catalist. // J. Org. Chem. -1980. Vol.45. -№13- P. 2729-2731.

7. Brindaban R., Arunkanti S. Regio- and stereoselective hydrogenation of conjugated carbonyl compounds via palladium assisted hydrogen transfer by ammonium formiate. // Tetrahedron Lett. 1994. -Vol.35. -№46. - P.8649-8650.

8. Nilsson K.R., Zorumski, C.F., Covey D.F. Neurosteroid analogues. 6. The synthesis and GAB Ад receptor pharmacology of enantiomers of degydroepi-androsterone sulfate, pregnolone sulfate, and (3a, 5P)-3-hydroxypregnan-20

9. Suksamrarn A., Yingyongnarongkul В., Charoensuk S. Regioselective synthesis of 24-e/?/-pterosterone. // Tetrahedron- 1999. Vol.55. - №1. -P. 255-260. :

10. Harrison Т., Siddall J.B., Fried J.H. Steroids. CCXCVII. Synthetic studies on insect hormones. Part III. An alternative synthesis of ecdysone and 22-isoecdysone. // Tetrahedron Lett. 1966. -Vol.7. -№29. - P.3457-3460.

11. Johnson W.S., Vredenburgh W.A., Pike J.E. Steroid total synthesis-hydrochrysene approach. XII. An alternative route to testosterone. The synthesis of /-testosterone and a?/-13-isotestosterone. // J. Am. Chem. Soc. — 1960. Vol.82. -№ 13. - P.3409-3415.

12. Lee E., Liu Y.-T., Solomon P.H., Nakanishi K. Stereospecific conversion of diosgenin to a-ecdysone. // J. Am. Chem. Soc. 1976. - Vol.98. -№6. -P.1634-1635.

13. Combe M.G., Henbest H.B., Jackson W.R. Aspects of stereochemistry. Part

14. XXI/ Hydrogenation of 3-oxo-A4-steroids over a palladium-calcium carbonate catalyst. II J. Chem. Soc. C. 1967. - №22. - P.2467-2469.

15. Spyrionis D.M., Ikonomidis G., Demopoulos V.J. A convenient "hydrogen transfer" hydrogenation. // Org. Prep. Proced. Int. 1989. - Vol.21. -№4.1. Г -P.515-517.

16. I. Takashi Т., Tamaaki С., Frederic J., Goto N. Toshio Potential bile acid metabolites. XVII. Synthesis of stereoisomeric 3,6,12cc-trihydroxy-5P-cholanoic acids. II J. Lipid. Res. 1991. - Vol.32. - №4. - P.649-658.

17. Bauduin G., Pietrasanta Y. Cetalisation selective de dicetones octalinique et tetrahydroindanique et stereochimie de leurs analogues satures. // Tetrahedron 1973. -Vol.29. - № 24 - P. 4225-4231.

18. Morrison G.C., Waite R.O., Shavel J. Jr. 1,4,4a,5,6,8,9,14,14a,14b-Decahydrobenza.indolo[2,3-g]quinolizinones. A systeme isomeric with yo-himbane. II J. Heterocycl. Chem. 1971. - Vol.8. - № 6. - P. 1025-1026.

19. Djerassi C., Frick W., Rosenkranz G., Sondheimer F. The stereochemistry of the catalytic hydrogenation of A8-ll-keto steroids. Synthesis of 8-iso- and 14-iso-l 1-keto sapogenins. // J. Am.Chem.Soc. 1953. - Vol.75. - №14.-P.3496-3500.

20. Djerassi C., Thomas G.H. The synthesis of some 14-iso-l 1-ketosteroids.о

21. Stereochemical course of chemical and catalytic reduction of a 14Р-ДМ1-ketosteroid. И J. Am. Chem. Soc. 1957. -Vol.79. - №14. - P.3835-3838.

22. Ахрем А.А., Ковганко H.B. Экдистероиды: химия и биологическая активность. Наука и техника: Минск, 1989, 327 с.

23. Karlson P., Hoffmeister Н.Н., Hummel Н., Hocks P., Spiteller G. Reaktionen des ecdysonmolekul. // Chem. Ber. 1965. - Vol.98. - №7. -P.2394-2402.

24. Одиноков B.H., Галяутдинов И.В., Недопёкин Д.В., Веськина Н.А., Ха-лилов Л.М. Трансформации ацетонидов 20-гидроксиэкдизона в подэк-дизон В. // ЖОрХ. 2003. - Т.39. - №7. - С. 1013-1017.

25. Haag Т., Luu В. Synthesis of putative precursors of ecdysone. Part 3. Synthesis of 3p,14a,25-trihydroxy-5p-cholest-7-en-6-one. И J. Chem Soc. Perkin Trans. 1. 1998. -№8. - P.2353-2363.

26. Banerji A., Chintalwar G.J., Joshi N.K. Isolation of ecdysterone from Indian plants // Phytochemistry 1971. - Vol.22. - №10. - P.2225-2226.

27. Promrangsan N., Suksamrarn A., Yingyongnarongkul B.-e. Naturally occurring 20,26-dihydroxyecdysone exists as two C-25 epimers which exhibit different degrees of moulting hormone activity. // Tetrahedron 1998. -Vol.54. - №48. - P.14565-14572.

28. Haag Т., Hetru C., Luu B. Tordanone, un steroide replie avec une jonction de cycle A/B p-cis (5p) et В /С oc-cis (8a). // Helv.Chim.Acta. 1989. - Vol.72. - №8. - P. 1809-1816.

29. Suksamrarn A., Tanachatchairatana Т., Sirigarn, C. Stereoselective catalytic hydrogenation of A7-6-ketosteroids in the presence of sodium nitrite. // Tetrahedron. 2002. - Vol.58. - №30. - P.6033-6037.

30. Szendrei K., Varga E., Hajdu Zs., Herke I., Lafont R., E. Girault J.P. Aju-gasterone С and 5-deoxykaladasterone, an ecdysteroid artifact, from Leuzea carthamoides. И J.Nat. Prod. 1988. - Vol.51. - №5. - P.993-995.

31. Luche J.-L., Rodrigues-Hahn L., Crabbe P. Reduction of natural enones in the presence of cerium trichloride. // J. Chem. Soc. Chem. Comm. 1978. — P.601-602.

32. Ravasio N., Rossi M. Selective hydrogenations promoted by copper catalysts. 1. Chemoselectivity, regioselectivity, and stereoselectivity in the hydrogenation of 3-substituted steroids. // J. Org. Chem. 1991. - Vol.56. - №13. -P.4329-4333.

33. Amendolla C., Rozenkranz G., Sondheimer F. Steroids. LXI. Synthesis of steroidal gormone analogues hydroxylated at C(6). II J. Chem. Soc. 1954. -№4. -P. 1226-1233.

34. Barton D.H.R., Laws G.F. Some oxidation products of ergosta-7,14,22-trien-Зр-yl acetate (ergosterol B3 acetate). И J. Chem. Soc. 1954. -№ 1.- 52.

35. Johnson W.S., Bannister В., Pappo R., Pike J.E. Steroid total synthesis hy-drochrysene approach. X. Total synthesis of testosterone. // J. Am. Chem. Soc. - 1956. - Vol. 78. - № 24. - P. 6354-6361.

36. Johnson W.S., Bannister В., Pappo R. Steroid total synthesis hydrochry-sene approach. VII. Metal-in-ammonia reduction of aromatic nucleus, dl-Epiandrosterone and the lumi epimer. II J. Am. Chem. Soc. - 1956. - Vol. 78. -№24.-P. 6331-6339.

37. Iqbal, Mohammed N., Elliot, William H. Bile acids. LXXIX. Synthesis and reduction of l,4-dien-3-ones of various bile acids. // Steroids. 1989. - Vol 53.-№3.-P. 413-425.

38. Holt, Dennis A., Levy, Mark A., Metcalf, Brian W. Preparation and formulation of 3-nitroandrostenes as 5a-reductase ingibitors. // US 4, 970, 204 (CI. 514-169, A 61 К 31 /56). Appl. 397, 615. 23 Aug 1989.

39. Tatuo Y., Takao F. Preparation of la,3p,24-trihydroxy-A5-steroids. // Eur. Pat. Appl. EP 349, 869 (CI. С 07 J 91/00). 10 Jan 1990.

40. D'Angelo J. Ketones enolates: regiospecific preparation and synthetic uses. // Tetrahedron. 1976. - Vol.32. - №24. - P.2979-2990.

41. Barton D.H.R., Robinson C.H. The stereospecifity of carbanion reduction processes. II J.Chem.Soc. 1954. - №8. - P.3045-3051.

42. Stork G., Tsuji J. Lithium-ammonia reduction of a,p-unsaturated ketones. II. Formation and alkylation of a p-carbanion intermediate. II J. Am. Chem. Soc. 1961. - Vol.83. -№12. - P.2783-2784.

43. Stork G., Rosen P., Goldman N., Coombs R.V., Tsuji J. Alkylation and car-bonation of ketones by trapping the enolates from the reduction of a,P-unsaturated ketones. И J .Am. Chem. Soc. 1965. - Vol.87. - №2. - P.275-286.

44. Bowers K.W., Giese R.W., GrimShaw J., House H.O., Kolodny N.M., Kron-berger K., Roe D.K. Reactions involving electron transfer. I. Reduction of 2,2,6,6-tetramethyl-4-hepten-3-one. IIJ .Am. Chem. Soc. 1970. - Vol.92. -№9. - P.2783-2799.

45. Bowers A., Ringold H.J., Denot E. Steroids. CI. 19-Nordihydrotestosteronederivatives. И J. Am. Chem. Soc. 1958. - Vol.80. - №22. - P.6115-6118.

46. House H.O., Giese R.W., Kronberger K., Kaplan J.P., Simeone J.F. Reactions involving electron transfer II. Reductions of enones with alkaly metal solutions. H J.Am. Chem. Soc. 1970. - Vol.92. - №9. - P.2800-2810.

47. Coates R.M., Shaw J.E. Total synthesis of (±) calarene. // J. Am. Chem. Soc. 1970. - Vol.92. - №19. - P.5657-5664.

48. Piers E., Phillips-Johnson W.M., Berger C. Novel stereochemical results in the Birch reduction of 4-alkyl-A1(9)-2-octalones. // Tetrahedron Lett. 1972.-Vol.13.-№29.-P.2915-2918.

49. Baudui G, Bondon D., Pietrasanta Y. Pucci B. Reactions de transetalisation. III. Approche quantitative de la selectivite et du rendement pour les то1ё-cules difonctionnelles. // Tetrahedron. 1980. - Vol.36. - №2. - P. 245-253.

50. Schweiger E.J., Joullie M.M., Weisz P.B. Synthesis of a C, D ring analog of 17a-hydroxyprogesterone. // Tetrahedron Lett. 1997. - Vol.38. - №35. -P. 6127-6130.

51. Rychnovsky S.D., Mickus D.E. Synthesis of ^/-cholesterol, the unnatural enantiomer. II J. Org. Chem. 1991. - Vol.57 - №9. - P.2732-2736.

52. Jiang X., Covey D.F. Total synthesis of ел/-cholesterol via a steroid C, D-ring side-chain synthon. /I J. Org. Chem. 2002. - Vol.67 - №14. - P.4893-4900.

53. Lin W., Majgier-Baranovska H., Marat K., Templeton J. F., Ling Y. 19-Hydroxy-5p,19-cyclosteroids: synthesis, isomerization and ring opening. // J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1. 1997. - Vol.1997. - №12. - P. 1895-1904.

54. Hutchinson J.H., Money T. An enantiospecific synthesis of estrone. // Tetrahedron Lett. 1985. - Vol.26. - № 15. - P. 1819-1822.

55. Hutchinson J.H., Money T. Enantiospecific synthesis of estrone. // Can. J.

56. Chem. 1987. - Vol.65. -№1. - P. 1-6.

57. Mayor P.A., Meakins G.D. Steroids of unnatural configuration. Part. V. Preparation of lumistanol A froman oxidation product of lumisteryl acetate. // J.Chem. Soc. 1960. - P.2800-2801.

58. Ohloff G., Maurer В., Winter В., Giersch W. Structural and configuration dependence of the sensory process in steroids. // Helv. Chim. Acta. 1983. -Vol.66. - №20. - P. 192-217.

59. Anthonsen Т., McCabe P.H., McCrindle R., Murray R.D.H. The constitution and stereochemistry of diterpenoids from Solidago canadensis L. // Tetrahedron. 1969. - Vol.25. - №10. - P.2233-2239.

60. Bleasdale D.A., Jones D.W. 2-Benzopyran-3-ones as synthetic building blocks; regioselective Diels-AIder additions with simple olefins leading to aromatic steroids. // J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1. 1991. - Vol. 1991. -№7.-P. 1683-1692.

61. Ахрем A.A., Лахвич Ф.А., Хрипач B.A., Ковганко Н.В. Новый путь введения функциональных групп брассиностероидов в циклы А и В А5-стеринов U Докл. АН СССР 1983. - Т.269. - №2. - С.366-368.

62. Voight В., Schmidt J., Adam G. Synthesis of 24-epiteasterone, 24-epityphasterol and their B-homo-6a-oxalactones from ergosterol. // Tetrahedron. 1996. - Vol.52. - №6. - P. 1997-2004.

63. Anastasia M., Cuiffreda P., Fiecchi A. A new synthesis of brassinosteroids: plant growth promoting steroids. II J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1. 1983. -Vol. 1983. -№2. - P.379-382.

64. Thompson M.J., Mandava N., Flippen-Anderson J.L., Worley J.F., Dutky S.R., Robbins W.E., Lusby W. Synthesis of brassinosteroids: new plantgrowth-promoting steroids. // J.Org.Chem. 1979. - Vol.44. - №26. - 50025004.

65. Hazra B. G., Kumar T.P., Joshi P. L. New synthesis of 28-homobrassinolide from stigmasterol. // Liebigs Ann. Recueil. 1997. - №5. - P. 1029-1034.

66. Back T.G., Baron D.L., Luo W., Nakajima S.K. Concise, improved procedure for the synthesis of brassinolide and some novel side-chain analogues. // J. Org. Chem. 1997. - Vol.62. - №4. - P. 1179-1182.

67. Ferrer J. C., Lalueza R., Saavedra O., Brosa C. Short step synthesis of (22£,22/?)-5oc-ergosta-2,22-dien-6-one, a key intermediate for the preparation of 24-epibrassinolide. // Tetrahedron Lett. 1990. - Vol.31. - №27. -P.3941-3942.

68. Ахрем A.A., Ольховик В.К., Жабинский В.Н., Хрипач В.А. Синтез (24R)-6paccHH0CTep0Hfl0B из эргостерола. // Вести АН БССР. Сер. хим. — 1989. №2. - Р.69-73.

69. Травень В.Ф., Кузнецова Н.А., Левинсон Е.Е., Подхалюзина Н.А. Наикратчайший путь от эргостерола к 24-эпибрассинолиду и его 22S, 23S-изомеру. II Доклады АН СССР. 1991. - Т.317. - №4. - С.901 -904.

70. McMorris Т.С., Patil Р.А. Improved synthesis of 24-epibrassinolide from er-gosterol. II J. Org. Chem. 1993. - Vol.58. - №8. - P.2338-2339.

71. Хрипач B.A., Жабинский B.H., Ольховик B.K., Иванова Г.И, Жерносек Е.В., Котяткина А.И. Усовершенствованный синтез брассинолида. // ЖОрХ. 1994. - Т.30. - №11. - С.1650-1655.

72. Magnus P., Waring M.J., Scott D.A. Conjugate reduction of a,p-unsaturated ketones using an Mn1" catalyst, phenylsilane and isopropyl alcohol. // Tetrahedron Lett. 2000. - Vol.41. - №50. - P.9731-9733.

73. Zhu Wei-Ming, Zhu Hua-Jie, Tian Wwi-Sheng, Hao Xiao Jiang, Pittman Charles U. The selective dehydroxylation of 20-hydroxyecdysone by Zn powder and anhydrous acetic acid. // Synth. Commun. 2002. - Vol.32.9. P.1385-1391.

74. Yasushi K., Atsuyoshi O. High effective asymmetric reduction with new ferment. //J. Synth. Org. Chem. 1999. - Vol.57 - №9. - P.798-804.

75. Biellmann J.-F. Enantiomeric steroids: synthesis, physical and biological properties. // Chem. Rev. 2003. - Vol.103. - №5. - P.2019-2033.

76. D'Arrigo P., Fuganti C., Fantoni G.P., Servi S. Extractive biocatalysis: a powerful tool in selectivity control in yeast biotransformations. // Tetrahedron. 1998. - Vol.54 - №49. - P. 15017-15026.

77. Key S., Toshifumi H., Yoshiaki N. Stereochemistry in the reduction ofЯenones by the reductase from Euglena Gracilis Z. // Phytochemistry 1998. - Vol.49.-№l.-P.49-54.

78. Holland H. L., Xu Weily, Hughes D. W. Stereochemistry of reduction by the 5a-reductase enzyme of Penicillium decumbens and the proton NMR assignment of 5a-dihydrotestosterone. // J. Chem. Soc. Chem. Commun. -1989.-№22.-P. 1760-1761.

79. Mahoney W.S., Brestensky D.M., Stryker J.M. Selective hydride-mediated conjugate reduction of a,P~unsaturated carbonyl compounds using (Ph3P)CuH.6 И J. Am. Chem. Soc. 1988. - Vol.110. - №1. - P.291-293.

80. Mahoney W.S., Stryker J.M. Hydride-mediated homogeneous catalysis. Catalytic reduction of a,p-unsaturated ketones using (Ph3P)CuH.6 and H2. // J. Am. Chem. Soc. 1989. - Vol.111. - №24. - P.8818-8823.

81. Lipshutz В. H., Keith J., Papa P., Vivian R. A convenient, efficient method for conjugate reductions using catalytic quantities of Cu(I). // Tetrahedron Lett. 1998. - Vol.39. - №26. - P.4627-4630.

82. Atsunori M., Akinori F., Hiroshi K., Yasushi N., Tamejiro H. Conjugate reduction of a,P~unsaturated ketones with hydrosilane mediated by copper (I) salt. // Tetrahedron. 1999. - Vol.55. -№15. - P.4573-4582.

83. Elmorsy, Saad S., El-Ahi, Abdel-Aziz, S., Soliman HananAmer Fathy A. Use of reductive properties of iodotrichlorosilane. Chemoselective reduction of a,P-unsaturated ketones and nitrils. И Tetrahedron Lett. 1996. - Vol.37.1. Ь №13. P.2297-2298.

84. Montiel-Smith S., Quintero Cortes L., Sandoval Ramirez J. Regioselective reductions of steroidal conjugated dienes by DIBAH. II Tetrahedron Lett. -2003. Vol.43. - №4. - P.8359-8362.

85. Moisan L., Hardouin C., Rousseau В., Doris E. Cp2TiCl-Mediated selective reduction of a,P-unsaturated ketones. // Tetrahedron Lett. 1995. - Vol.36. -№.11 -P.2013-2015.

86. Jagannatha Swamy S., Kishore Kumar B. Lanthanide complexes in organic synthesis: selective reduction of a,P-unsaturated compounds. // Indian J. Chem. B. 1996. - Vol.35. - №5. - P.484-486.

87. Ануфриева Э.Н., Володин В.В., Носов A.M., Гарсиа М., Лафон Р. Состав и содержание экдистероидов в растениях и культуре ткани Serratula coronata. II Физиология растений. 1998. - Т.45. - №3. - С. 382-389.

88. Холодова Ю.Д., Балтаев У., Воловенко В.О., Горовиц М.Б., Абубакиров Н.К Фитоэкдизоны Serratula xeranthemoides И Хим. природ, соедин. — 1978.-№2.-С. 171-174.

89. Зацны И.Л., Горовиц М.Б., Абубакиров Н.К. Экдистероиды из Serratula sogdiana. II Химия природ, соедин. 1971. - №6. - С.840-841.

90. Зацны И.Л., Горовиц М.Б., Абубакиров Н.К. Фитоэкдизоны Serratula. Витикостерон Е из Serratula sogdiana и его частичный синтез. // Химия природ, соедин. 1973. - №2. - С. 175-178.

91. Новосельская И.Л., Горовиц М.Б., Абубакиров Н.К. Фитоэкдизоны Serratula. Согдистерон. II Химия природ, соедин. 1975. - №4. -С. 429-430.

92. Гродзинский A.M., Холодова Ю.Д., Мишунин И.Ф., Богуславский В.А., Зилберс Ю.А., Кляшторная Г.В. Способ получения (3-экдизона из растения рода Serratula. //Авторское свидетельство СССР № 1146050, А 61 К 35/78, 1985.

93. Новосельская И.Л., Горовиц М.Б., Абубакиров Н.К. Фитоэкдистероиды Serratula coronata. //Химия природ, соедин. 1981. - №5. - С. 668-669.

94. Kholodova Yu., Mishunin I. Phytoecdysteroids- insect moulting hormones of different structure in Serrarula coronata L. species. // Kolloquen Pflanzen-physiol. Der Humboldt Universitat zu Berlin. 1985. - Vol. 9. - P. 56-57.

95. Володин B.B., Лукша В.Г., Дайнен Л.,Пунегов В.В., Алексеева Л.И., Колегова Н.А., Тюкавин Ю.А., Ребров А.И. Инокостерон и макистерон А из Serratula coronata II Физиология растений. —1998. — 45. — № 3. — С.378-381.

96. Фитоэкдистероиды. под ред. Володина В.В. Наука: Санкт-Петербург, 2003, 293 с.

97. Галяутдинов И.В., Одиноков В.Н., Балтаев У.А., Халилова А.З., Дже-милев У.М. Способ получения экдистерона из растительного сырья // Патент РФ № 2151598 (2000); Бюл. изобр. № 18 (2000).

98. Hikino, H., Mohri, K., Hikino, Y., Arihara, S., Takemoto, Т., Mori, H., Shi-bata, K. Inokosterone, an insect metamorphosing substance from Achyranthes fauriei: absolute configuration and synthesis. И Tetrahedron. 1976. - V.32. -№ 24.-P.3015-3021.

99. Suksamrarn, A., Jankam, A., Taruchompoo, В., Putchakarn, S. Ecdysteroids from a Zoanthus sp. // J. Nat. Prod. 2002. - V.65 - № 6.- P. 1194-1197.

100. Галяутдинов И.В., Назмеева С.P., Савченко Р.Г., Веськина Н.А., Недо-пекин Д.В., Фатыхов А.А., Халилов JI.M., Одиноков В.Н. Новые производные 20-гидроксиэкдизона. Синтез витикостерона Е. // ЖОрХ. 2004. - Т.40. - Вып. 5. - С. 709-717.

101. Зацны И.Л., Горовиц М.Б., Абубакиров Н.К. Экдистероиды из Serratula coronata. И Химия природ, соедин. 1970. - №6. - С.804-841.

102. Suksamrarn A., Yingyongnarongkul В. Selective acetalation of 20-hydroxyecdysone. Partial synthesis of some minor ecdysteroids and analogues. // Tetrahedron. 1995. - V.51. - № 38. - P. 10633-10650.

103. Политова H.K., Пунегов B.B., Володин B.B., Игнатов А.В. Синтез 25-ацетата 20-гидроксиэкдизона. И Химия природ, соедин. 1997. — №1. — С.70-76.

104. Одиноков В.Н., Савченко Р.Г., Назмеева С.Р., Галяутдинов И.В. Метод мягкого триметилсилилирования 14а-гидроксильной группы в экдисте-роидах. // Изв. АН. Сер. хим. 2002. - № 10. - С. 1810-1811.

105. Suksamrarn A., Ganpinyo P., Sommechai C. Base-catalyzed autooxidation of 20-hydroxyecdysone. Synthesis of calonysterone and 9,20-dihydroecdysone. // Tetrahedron Lett. 1994. - Vol.35. - №25. - P.4445-4448.

106. Саатов 3., Горовиц М.Б., Абубакиров Н.К. Фитоэкдистероиды растений рода Silene. XV. 2-Дезокси-а-экдизон-22-0-бензоат из Silene Wal-lichiana. II Xwu. прир. соедин. — 1987. — №6. С.852-855.

107. Greenwood D.R., Dinan L.N., Rees H.H. Mechanism of hydroxylation at C-2 during the biosynthesis of ecdysone in ovaries of the locust Schistocerca gregaria. II Biochem. J. 1984. - Vol.217. - №3. - P.783-789.

108. Ouellet L., Langlois P., Deslongchamps P. Synthesis of a 14|3-hydroxysteroid using the transannular Diels-Alder strategy. // Synlett. 1997. - №6. - P.689-690.

109. Djerassi, C., Thurman T. Grossnickle, LeRoy High B. Constitution and Stereochemistry of digitonin. // J. Am. Chem. Soc. 1956. — V.78. - №13.-P. 3166-3173.

110. Eliel, E.L., Pillar, C. The conformation of six-membered ring cis-1,2-fused to a five-membered ring. // J. Am. Chem. Soc. 1955. - V.77. - №13.- P.- 3600-3606.

111. Lorenc L., Dabovic M., Makaric V. Partial synthesis of 17a-acetoxy-6a-methylprogesterone. II J. Serb. Chem. Soc. 1989. - V.34. - № 11. - P. 623628.

112. Kirsch G., Gold R., Neef G. A cycloaddition route to 14-hydroxysteroids. // Tetrahedron Lett. 1989. - Vol.30. - №34. - P.4497-4500.

113. Harmatha J., Dinan L., Lafont R. Biological activities of a specific ecdys-teroid dimer and of selected monomeric structural analogues in the Bn bioas-say. // Insect Biochem. and Mo I. Biol. 2002. - Vol.32. - №2. - P. 181-185.

114. Harmatha J., Budesinsky M., Vokac K. Photochemical transformation of 20-hydroxyecdysone: production of monomeric and dimeric ecdysteroid analogues. // Steriods. 2002. - Vol.67. - №2. - P.127-135.

115. Canonica L., Danieli В., Lesma G., Palmisano G., Mugnoli A. Fe (II)-Induced fragmentation reaction of y-hydroperoxy-a,3-enones. Synthesis of 13(14->8)-a6eo-steroids. // Helv. Chim. Acta. 1987. - Vol.70. - №3. -P.701-716.

116. Lee S.-S., Nakanishi K., Cherbas P. Synthesis of 26-iodoponasterone, a new and very active ecdysteroids. // J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1991. -№1. - P.51-52.

117. Homvisasevongsa S., Chuaynugul A., Chimnoi N., Suksamrarn A. Stereoselective synthesis and moulting activity of 2,3-afo?/?*'-20-hydroxyecdysone and of 2,3-t//ep/-5a-20-hydroxyecdysone. // Tetrahedron. 2004. - Vol.60. -№15. - P.3433-3438.

118. Tomas J., Camps F., Coll J., Mele E., Pascual N. Synthesis of 25-fluoroponasterone A, a fluorinated analogue of 20-hydroxyecdysone. // Tetra-hedrone. 1992. - Vol.48. - №44. - P.9809-9818.

119. Yingyongnarongkul, В., Suksamrarn, A. Assymmetric dehydroxylation of stachysterone C: stereoselective synthesis of 24-epi-abutasterone. // Tetrahedron. 1998. - Vol.54. - №.12. - P.2795-2800.

120. Roussel, P.G., Sik, V., Turner, N.J., Dinan, L.N. Synthesis and biological activity of side-chain analogues of ecdysone and 20-hydroxyecdysone. // J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1. 1997. - №15. - P. 2237-2246.

121. Dinan L., Bourne P.C., Whiting P., Tsitsekli A., Saatov Z., Dhadialla T.S., Hoffmann R.E., Lafont R., Coll J. Synthesis and biological activities of turke-sterone 1 la-acyl derivatives. // J. Insect Sci. 2003. -3:6. pp.35.

122. Lafont, R.; Harmatha, J.; Marion-Poll, F.; Dinan, L.; Wilson, I.D. Ecdybase, a free ecdysteroid database. 2002, http://www.ecdybase.org.