Метаболиты морских бактерий. Химическая структура и биологическая активность тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

На правах рукописи

СОБОЛЕВСКАЯ МАРИЯ ПАВЛОВНА

Метаболиты морских бактерий. Химическая структура и биологическая активность.

02.00.10 - биоорганическая химия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических на-ук

□03064Э34

Владивосток - 2007

003064994

Работа выполнена в Тихоокеанском институте биоорганической химии Дальневосточного отделения РАН

Научный руководитель:

Т. А. Кузнецова

кандидат химических наук старший научный сотрудник

Официальные оппоненты: Т. И. Акимова

доктор химических наук

Н. К. Уткина

кандидат химических наук Ведущая организация: Институт органической химии им. Н. Д. Зелинского РАН

Защита состоится сентября 2007 г. в 12 часов на заседании

диссертационного совета Д. 005.005.01 в Тихоокеанском институте биоорганической химии ДВО РАН по адресу: 690022, г. Владивосток, проспект 100-летия Владивостока 159, ТИБОХ ДВО РАН. Факс: (4232) 314-050, e-mail: science@piboc.dvo.ru

С диссертацией можно ознакомиться в филиале Центральной научной библиотеки ДВО РАН (г. Владивосток, проспект 100-летия Владивостока 159, ТИБОХ ДВО РАН). Текст автореферата размещен на сайте совета http://piboc.dvo.ru

Автореферат разослан августа 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат химических наук, старший научный сотрудник

Прокопенко Г.И.

Актуальность проблемы. Последние двадцать лет были насыщены интересными открытиями в одном из молодых направлений биоорганической химии, а именно, в химии морских природных соединений. Эти открытия связаны с выделением из морских микро- и макроорганизмов необычных соединений новых структурных типов с разнообразными биохимическими и фармакологическими свойствами. Океан является самым большим резервуаром микробиоты, к настоящему времени еще мало изученной. Надежды на обнаружение в морских экосистемах продуцентов новых биологически активных соединений стимулировали биохимические и химические исследования морских микроорганизмов. Результатом этого является открытие в морских микроорганизмах необычных по химической структуре и биологическому действию метаболитов, многие из которых не имеют структурных аналогов среди биологически активных соединений, выделенных из наземных источников.

Некоторые морские организмы представляют собой сложные симбиотические комплексы. Содержание симбионтных микроорганизмов в них может быть так велико, что суммарный вес этих бактерий и микроводорослей может значительно превышать вес самих макроорганизмов. В связи с этим существуют трудности при установлении истинного продуцента биологически активных веществ. Значительно возрос интерес к данному вопросу после того, как было установлено, что широко известные морские токсины тетродотоксин и сакситоксин не являются продуктами биосинтеза токсичных видов рыб и динофлагелят, соответственно, а продуцируются микроорганизмами, ассоциированными с этими макроорганизмами. Это означает, что при необходимости получения подобных соединений можно отказаться от заготовок больших количеств морского биологического сырья, а использовать микроорганизмы.

Химия морских микроорганизмов является основой для развития морской биотехнологии и морской химической экологии, вносящих значительный вклад в понимание экологической роли метаболитов морских микроорганизмов.

Цель и задачи исследования. Целью работы являлось выделение и установление строения биологически активных вторичных метаболитов из морских актинобактерий родов 51гер1отусея и ЫосагсНа и морской бактерии рода Рхеш1оа1(еготопах.

Для достижения этой цели были решены следующие задачи: 1) проведен скрининг и выбраны обьекты исследования; 2) получены суммарные экстракты из

культур бактерий; 3) разработаны схемы выделения активных веществ; 4) осуществлено разделение полученных экстрактов и выделение индивидуальных природных соединений; 5) проведен анализ ЯМР спектроскопических и масс-спектрометрических данных для выделенных соединений и установлены структуры этих соединений; 6) изучена биологическая активность веществ. Положения выносимые на защиту.

1. Новый циклический дикетопиперазин цикло-(глицил-Ь-тирозил) выделен из Streptomyces sp. КММ 7210. Дипептид цитотоксически активен по отношению к спермиям и яйцеклеткам морского ежа Strongylocentrotus intermedins.

2. (2,3)-диметокси-(5)-метил-(6)-нонапренил-1,4-бензохинон (убихинон Q?) является компонентом неполярной фракции морской актинобактерии Nocardia sp. КММ 3749.

3. Актинобактерии Streptomyces sp. В 6167 и Streptomyces sp. Mei 22 являются новыми источниками антибиотиков — фейгризолидов и бафиломицинов.

4. Присутствие в среде культивирования органических веществ влияет на синтез депсипептидов нового структурного типа в бактерии Pseudoalteromonas maricaloris КММ 636.

Научная новизна и практическая ценность работы. Структурно идентифицированы 10 метаболитов морских актинобактерий. Для некоторых соединений были впервые получены данные двумерной ЯМР-спектроскопии и сделаны полные отнесения сигналов протонов и углеродных атомов. Используя данные матрично активированной лазерной десорбции/ ионизации масс-спектрометрии (МАЛДИМС), исследована зависимость синтеза циклических депсипептидов — метаболитов бактерии Pseudoalteromonas maricaloris КММ 636, от состава среды культивирования. Впервые среди морских актинобактерий обнаружены продуценты макролидных антибиотиков - фейгризолидов и бафиломицинов. Получены новые данные по цитотоксической активности выделенных соединений с использованием в качестве биологических моделей мышиных эритроцитов, опухолевых клеток карциномы Эрлиха, спермиев, яйцеклеток и развивающихся эмбрионов морского ежа Strongylocentrotus intermedius. Впервые показано, что макролидный антибиотик фейгризолид В индуцирует апоптоз в опухолевых клетках.

Апробация работы. Материалы работы были представлены на 23rd International Symposium on the Chemistry of Natural Products, 2002 (Florence, Italy);

Первом международном конгрессе по биотехнологии, 2002 год (Москва, Россия); XI International Symposium on Marine Natural Products, 2004 (Sorrento, Italy); ICOB-4 & ISCNP-24 IUPAC International Conference on Biodiversity and Natural Products 2004 (New Delhi, India).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 статьи и 4 тезисов.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, посвященного вторичным метаболитам морских актинобактерий и бактерий рода Pseudoalteromonas, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка литературы, включающего 135 цитируемых работ. Работа изложена на 114 страницах, содержит 16 таблиц, 5 схем, 14 рисунков и 3 диаграммы.

Автор выражает глубокую признательность научному руководителю к.х.н. Кузнецовой Т. А., а также к.х.н. Денисенко В. А. за помощь в интерпретации спектральных данных, к.б.н. Шевченко Л. С. за культивирование микроорганизмов и тестирование биологической активности соединений, к.х.н. Мензоровой Н. И. и к.б.н. Сибирцеву Ю. Т. за проведение биологического тестирования с использованием половых клеток морских ежей Strongylocentrotus intermedius, к.б.н. Аминину Д. Л. и к.б.н. Прокофьевой Н. Г. за исследование цитотоксической активности соединений. Автор также глубоко признателен профессору Лаачу X. за возможность выполнения исследовательской работы на кафедре органической и биомолекулярной химии Геттингенского университета (Германия), д.б.н. Бузолевой Л. С. (Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии СО РАМН, Владивосток) за тестирование антимикробной активности соединений в отношении условно-патогенных микроорганизмов.

Используемые сокращения:

Хроматография: ТСХ — тонкослойная хроматография; ВЭЖХ — высокоэффективная жидкостная хроматография высокого давления; ПТСХ -препаративная тонкослойная хроматография.

Спектроскопия ядерного магнитного резонанса: с - синглет; д - дублет; т — триплет; к — квартет; дц - дублет дублетов; м - мультиплет; ш - широкий.

'Н и "С ЯМР — спектроскопия ядерного магнитного резонанса на протонах и ядрах углерода; COSY (Correlation Spectroscopy) — корреляционная спектроскопия; НМВС (Heteronuclear Multiple-Bond Correlation) - ЯМР-эксперимент гетероядерной

корреляции через несколько связей; DEPT (Distortionless Enchancement by Polarization Transfer) - неискаженное усиление переносом поляризации; HSQC (Heteronuclear Single Quantum Connectivity) - гетероядерная одноквантовая корреляция;

Масс-спектрометрия: МСХИ - масс-спектрометрия с химической ионизацией; ЭУМС - масс-спектрометрия электронного удара; ЭСМС — электрораспылительная масс-спектрометрия; МАЛДИМС — масс-спектрометрия матрично активированной лазерной десорбции/ионизации; Да — Дальтон.

МИК - минимальная ингибирующая концентрация.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Биологически активные соединения из актинобактерии Streptomyces sp. КММ 7210

Установлено, что бактерия Streptomyces sp. КММ 7210 продуцирует соединения, подавляющие рост грамположительных бактерий и проявляющие цитотоксическую активность по отношению к эмбрионам морского ежа Strongylocentrotus intermedins. Суммарный экстракт культуральной жидкости и бактериальной массы экстрагировали последовательно гексаном, этилацетатом и бутанолом. Из этилацетатного экстракта после хроматографии на сефадексе LH-20, используя метанол в качестве элюэнта, были получены фракции 1 и 2, проявляющие цитотоксическую активность по отношению к половым клеткам морского ежа S. intermedius.

Соединение 1А (1.3 мг) было получено из фракции 1 методом обращенно-фазовой ВЭЖХ. Молекулярная масса соединения 1А — 220 Да была установлена из значения пика квазимолекулярного иона с m/z 219 [М-Н]", полученного с помощью МСХИ. В 13С ЯМР спектре соединения 1А кроме сигналов углеродных атомов гидроксибензольного цикла, присутствовали сигналы двух амидных атомов углерода (5С 171.2; 169.9), одного метинового (5с 57.6) и двух метиленовых атомов углерода (5с 40.2; 44.8). 'Н ЯМР спектр содержал два дублетных сигнала четырех протонов, положение и мультиплетность которых указывали на наличие в 1А пара-замещенного бензольного цикла. Сигнал метинового протона при 4.28 м.д. совпадал со значением

сигнала для а-протона в тирозине. При полном кислотном гидролизе 1А были получены аминокислоты, которые по данным ВЭЖХ их производных, полученных по

спектров подтвердили, что соединение 1А является циклическим дипептидом 3-(4'-гидроксибензил)пиперазин-2,5-дионом (Рис. 1). Цикло-(глицил-Ь-тирозил) -соединение дикетопиперазиновой природы, впервые выделенное из морского стрептомицета. Дикетопиперазины - часто встречаемые метаболиты грибов и бактерий. Известно, что дикетопиперазины обладают широким спектром биологического действия.

Установлено, что соединение 1А проявляет среднюю цитотоксическую активность, которая была определена по нарушению целостности мембран спермиев и яйцеклеток морского ежа & тГегтесйг«. Процент нарушения целостности мембран определяли по уровню эстеразной активности с использованием в качестве субстрата диацетилфлуоресцеина (ДАФ). При концентрации 50 мкг/мл разрушалось 25% клеточных мембран спермиев, в то время как -мембраны яйцеклеток оставались целыми. Однако более чувствительными к действию соединения 1А оказались развивающиеся эмбрионы морского ежа. Так, при концентрации 25 мкг/мл соединение 1А останавливало деления эмбрионов на стадии 2-4-х бластомеров.

методу Мерфи, были идентичны глицину и L-тирозину. Данные масс- и 'Н, 13С ЯМР

ОН

1А

2А

Примечание: Стрелками обозначены взаимодействия, наблюдаемые в спектре ^Н^Н COSY соединения 2А.

Рис. 1. Метаболиты актинобактерии Streptomyces sp. КММ 7210.

Фракцию 2 хроматографировали на колонке с силикагелем в системах гексан-этилацетат (100:0 —► 0:100). Вещество 2А (13 мг) было элюировано этилацетатом.

Молекулярная масса соединения 2А - 179 Да установлена из значения пика квазимолекулярного иона с m/z 180 [М+Н]+ при МСХИ. 'Н и 13С ЯМР спектры 2А указывали на присутствие пара-замещенного бензольного цикла. 13С ЯМР спектр имел сигнал амидного (5с 173.8) и сигналы двух метиленовых атомов углерода (8С Зб.З; 43.0). 'Н-'Н COSY спектр позволил определить последовательность присоединения двух метиленовых групп к амидному радикалу и к бензольному циклу (Рис. 1). Молекулярная масса 2А и наличие в 13С ЯМР спектре сигнала четвертичного углеродного атома углерода, связанного с гидроксильной группой, указывало на существование гидроксибензольного цикла в 2А. Полученные для 2А спектральные характеристики, позволили сделать заключение об идентичности 2А и ЛГ-[2-(4'-гидроксифенил)этил]ацетамида (iV-ацетилтирамин) (Рис. 1). Это соединение было получено ранее из морского гриба Fusarium sp. и актиномицета Streptomyces griseus. Нами было установлено, что 2А останавливает деление эмбрионов морского ежа на стадии 2-4-х бластомеров при концентрации 25 мкг/мл., а также при концентрации 50 мкг/мл разрушает 15% мембран спермиев морского ежа и не проявляет цитотоксического эффекта по отношению к мембранам яйцеклеток.

2. Исследование биологически активных метаболитов бактерии Nocardia sp. КММ 3749

При проведении скрининга биологически активных соединений в хлороформ-этанольных экстрактах морских факультативных актинобактерий, выделенных из морских обьектов во время экспедиции на НИС "Академик Опарин" (Курильские острова), были обнаружены штаммы, синтезирующие биологически активные соединения. Один из этих штаммов, определенный по морфолого-биохимическим характеристикам как Nocardia sp., синтезировал цитотоксические соединения, ингибирующие развитие оплодотворенных яиц морского ежа Strongylocentrotus intermedius (МИК = 40 мкг/мл) и вызывающие гемолиз мышиных эритроцитов (МИК = 30-50 мкг/мл).

Методом Flash-хроматографии экстракта актинобактерии на колонке с силикагелем в градиентных системах с увеличением полярности было выделено 10 фракций, проверенных на цитотоксическую активность. Результаты тестирования

показали, что цитотоксической активностью обладает неполярная фракция, элюированная бензолом. Эта фракция была повторно очищена с помощью адсорбционной хроматографии на силикагеле в системе гексан: этилацетат (15:1) и разделена методом прямо-фазовой ВЭЖХ. В результате такого разделения было получено соединение ЗА.

В УФ-спектре соединения ЗА присутствовал максимум поглощения при 276 нм, что характерно для бензохинонов. ИК-спектр соединения ЗА содержал полосы поглощения при 1645 см"1 (С=С), 1725 см"1 (С=0).

Анализ спектров !Н и 13С ЯМР (методики DEPT и HSQC) показал присутствие в ЗА одиннадцати метальных групп при двойных связях [5с 25.7, 17.8, 16.4 и 16.0 (7СН3)], одна из которых находилась в бензохиноновом цикле (5С 11.9). Кроме этого были идентифицированы сигналы семнадцати метиленовых групп, девяти метановых групп, пятнадцати атомов углерода, не связанных с протонами, четыре из которых связаны с кислородными функциями (две кето- и две метокси-группы). Полученные данные, а также сравнение ЯМР спектров соединения ЗА и опубликованных данных для убихинонов Q7 и Qg, подтвердили присутствие в ЗА бензохинонового цикла и наличие полипренильной цепочки. ЭУМС соединения ЗА имел фрагментарные пики с m/z 235 и 197, характерные для распада убихинонов. Величина молекулярной массы ЗА (794 Да), полученная методом МАЛДИМС, указала на присутствие в ЗА девяти изопреновых звеньев. В спектре НМВС были обнаружены корреляции между протонами метоксильных групп и атомами С-2, С-3, протонами метальной группы при атоме С-5 и атомами С-5, С-6 и С-4, а также взаимодействие между протонами при С-1' с атомами С-6, С-5, С-2' и С-1. В спектре 'Н-'Н COSY наблюдались дальние взаимодействия между протонами при С-11 и протонами метальных групп при С-5 и С-3'. Эти эксперименты позволили установить положение заместителей в бензохиноновом цикле. Таким образом была установлена структура убихинона Qg -компонента неполярной фракции актинобактерии Nocardia sp. (Рис. 2). Его содержание составляет 7% от суммарного хлороформ-этанольного экстракта бактериальных клеток.

1,4-Бензохиноны широко распространены в природе и выделены главным образом из грибов и различных высших растений. Они были найдены также в морских бактериях родов Alteromonas, Marinomonas, Deleya, Shewanella,

Pseudomonas. Бактерии родов Pseudomonas и Marinomonas в основном содержат убихинон Q8. В бактериях родов Deleya, Pseudomonas обнаружен убихинон Q9, а бактерии рода Shewanella продуцируют смеси убихинонов, менахинонов и метилменахинонов. Из актинобактерий убихинон с девятью изопренильными остатками выделен впервые. Убихиноны играют в микроорганизмах огромную роль: в качестве компонентов дыхательной цепи, в окислительном фосфорилировании. По своей биологической значимости убихиноны стоят в ряду таких соединений, как цитохромы и никотинамидные ферменты. Благодаря своей высокой биологической активности они нашли широкое применение в медицине как антиоксиданты, а также в качестве лечебных препаратов при анемии, мышечной дистрофии и сердечнососудистой недостаточности. Наши исследования показали, что штамм Nocardia sp. является перспективным продуцентом убихинона Q9

R=H, Н

197

---1

Примечание. Стрелками обозначены взаимодействия, наблюдаемые в спектре НМВС.

Рис. 2. (2,3)-диметокси-(5)-метил-(6)-нонапренил-1,4-бензохинон.

3. Фейгризолиды А, В, С и династии из Streptomyces sp. В 6167

Штамм Streptomyces sp. В 6167 был выбран при скрининге биологически активных соединений в хлороформ-этанольных экстрактах актинобактерий из коллекции микроорганизмов Гетгингенского университета (Германия). Бактерия была выделена из образцов морской воды Северного моря. Было показано, что бактерия Streptomyces sp. В 6167, синтезирует вещества, активные по отношению к грамположительным бактериям. При тонкослойной хроматографии первичного экстракта культуральной жидкости бактерии внимание привлекли широкие зоны, окрашиваемые анисовым альдегидом в интенсивный коричневый цвет, что могло указывать на макролидную природу окрашиваемых соединений.

Суммарный экстракт культуральной жидкости и бактериальной массы был разделен на колонке с силикагелем в системах хлороформ: метанол с увеличением содержания метанола. Тестирование на антибактериальную активность показало, что активные соединения содержатся во фракциях, элюированных с силикагеля системами хлороформ: метанол (95:5) (фракция 1) и (90:10) (фракция 2). По данным ТСХ именно в этих фракциях содержались вещества макролидной природы. Из фракции 1 методом гельфильтрационной хроматографии на сефадексе LH-20 (система - хлороформ: метанол, 60:40) были получены три хроматографически индивидуальных соединения 4А, 6А и 7А, а из фракции 2 с помощью гельфильтрационной хроматографией на сефадексе LH-20 в метаноле было получено индивидуальное соединение 5А.

Соединение 4А (30 мг) имеет молекулярную массу 216 Да, что было установлено из значений пиков квазимолекулярных ионов с m/z 239 [M+Na]+ и 215 [М-Н]", полученных с помощью ЭСМС. Данные 'Н и С ЯМР спектров, а также спектра HSQC соединения 4А указывали на присутствие двух метальных групп, трех метановых протонов, связанных с углеродами, несущими кислородную функцию, и одного карбонильного атома углерода. Наличие в ИК-спектре полос 3402 см"1 и 1712 см'1 подтверждали присутствие в 4А карбонильной функции и гидроксильных групп. В 'Н и 13С ЯМР спектрах присутствовали также сигналы четырех метиленовых и одной метановой групп. Полученные данные, а также 'Н-'Н COSY спектр соединения 4А указывали, что 4А идентично 4-гидрокси-7-(2-гидроксибутил)-3-метилоксепан-2-

ону (фейгризолид В) (Рис. 3), выделенному ранее из почвенного изолята бактерии S. griseus.

Соединение 5А (49 мг) имеет молекулярную массу 202 Да, что было установлено из значений пиков квазимолекулярных ионов с m/z 225 [M+Na]+ и 201 [М-Н]", полученных методом ЭСМС. Данные *Н и 13С ЯМР спектров, а также эксперименты двумерной ЯМР спектроскопии ('Н-'Н COSY, НМВС, HSQC) указали, что соединение 5А является гомологом соединения 4А и идентично фейгризолиду А (Рис. 3), выделенному ранее из почвенного изолята бактерии S. griseus.

Соединение 6А (5 мг) имеет молекулярную массу 400 Да, что было установлено из значений пиков квазимолекулярных ионов с m/z 423 [M+Na]+ и 399 [М-Н]", полученных с помощью ЭСМС. Данные !Н и 13С ЯМР спектров, а также спектра HSQC соединения 6А указывали на присутствие четырех метальных групп и шести протонов, связанных с углеродами, несущими кислородную функцию. В ЯМР спектрах также присутствовали сигналы протонов семи метиленовых и двух метановых групп. ИК-спектр указывал на присутствие гидроксильных групп. Полученные ЯМР-спектроскопичесике данные для 6А и сравнение их с данными для фейгризолида С (8-гидрокси-5-(2-гидроксибутил)-2,9,12-триметил-4,11,17-триоксабицикло[12.2Л]гептадекан-3,10-дион) (Рис. 4), выделенного ранее из почвенного изолята бактерии S. griseus, указывали на идентичность этих соединений.

Фейгризолид В (4А)

Фейгризолид А (5А)

Примечание-. Стрелками обозначены 'Н-'Н COSY взаимодействия в фейгризолидах.

Рис. 3. Метаболиты актинобактерии Streptomyces sp. В 6167.

Соединение 7А (7 мг) давало в ЭУМС пик молекулярного иона 764 Да. Эта молекулярная масса была подтверждена пиками квазимолекулярных ионов с m/z 787 [M+Na]+ и 782 [M+NH4]+, полученных с помощью ЭСМС. Эксперименты двумерной ЯМР спектроскопии ('Н-'Н COSY, HSQC), а также 'Н и 13С ЯМР спектры указывали на идентичность соединения 7А макролидному антибиотику динактину (Рис. 4), выделенному ранее из почвенного стрептомицета Streptomyces aureus. По данным ЭСМС установлено, что стрептомицет синтезирует 7А вместе с его гомологами, имеющими молекулярные массы 778 и 792 Да.

24

Фейгризолид С (6А) Динактин (7А)

Рис. 4. Метаболиты актинобактерии Streptomyces sp. В 6167.

Показано что фейгризолиды проявляют цитотоксическое действие по отношению к опухолевым клеткам карциномы Эрлиха и к яйцеклеткам морского ежа S. intermedins. Фейгризолид В обладает наибольшим эффектом по отношению к опухолевым клеткам (ИК50 = 3 мкг/мл) и оплодотворенным яйцеклеткам морского ежа (ИК5о = 1 мкг/мл). Цитотоксическая активность фейгризолида А по отношению к опухолевым клеткам и эмбрионам морского ежа проявляется при более высоких концентрациях (ИК50 = 20 мкг/мл и ИК50 = 30 мкг/мл, соответственно). Фейгризолид С наименее активен из исследуемых соединений (ИК50 = 50 мкг/мл) по отношению к опухолевым клеткам и эмбрионам ежа. Фейгризолид В ингибировал рост Listeria monocytogenes 4-В и Staphylococcus aureus 3515 при концентрации 1 мг/мл, в то время как фейгризолид С при этой же концентрации стимулировал рост Escherichia coli. Фейгризолиды А, В и С при концентрации 1 мг/мл не оказывали действия на

развитие Proteus vulgaris 4848, Pseudomonas aeruginosa H-1515, Salmonella enteritidis 126-6, Staphylococcus epidermidis 2482, Yersinia pseudotuberculosis H-2781. Отсутствие гемолитической активности у фейгризолидов может свидетельствовать о том, что механизм их действия не связан с разрушением биологических мембран, что обычно является характерным для мембранотролных соединений.

Установлено, что фейгризолиды являются эффекторами 1-»3-р-0-глюканазы из кристаллического стебелька Spisula sachalinensis. Фейгризолиды В и С активировали действие фермента на 50% в концентрации 0.4 мМ и 0.2 мМ соответственно, в то время как фейгризолид А в концентрации 0.4 мМ ингибировал действие фермента на 50%. Показано, что фейгризолид В вызывал индукцию раннего апоптоза в клетках мышиной карциномы Эрлиха (ИК5о = 17.4 мкг/мл). Однако в опытах in vivo фейгризолид В не ингибировал рост опухоли у мышей, т.е. не увеличивал продолжительность жизни зараженных мышей по сравнению с контролем. Также установлено, что соединение 4А полностью обездвиживало сперму морского ежа S. intermedius при концентрации 1 мкг/мл.

4. Макролидные антибиотики из актинобактерии Streptomyces sp. Mei 22

Штамм Streptomyces sp. Mei 22 был выбран при скрининге биологически активных соединений в хлороформ-этанольных экстрактах морских актинобактерии коллекции микроорганизмов Геттингенского университета (Германия). Микроорганизм был выделен из образцов воды Северного моря. Было показано, что бактерия Streptomyces sp. Mei 22 синтезирует вещества, активные по отношению к грамположительным и грамотрицательным бактериям и обладающие высокой фунгицидной активностью. При тонкослойной хроматографии хлороформ-этанольного экстракта культуральной жидкости бактерии наблюдали широкие зоны, окрашиваемые анисовым альдегидом в интенсивный коричневый цвет при нагревании. В соответствии с этими данными предположено, что микроорганизм продуцирует антибиотические вещества макролидной природы. Общеизвестно, что макролидные антибиотики обладают широким спектром биологической активности. Этот факт поддержал наш интерес по исследованию метаболитов данного стрептомицета.

Суммарный экстракт кулыуральной жидкости и бактериальной массы хроматографировали на колонке силикагелем в системе дихлорэтан: метанол с увеличением полярности. Тестирование на антибактериальную активность показало, что активные соединения содержатся во фракции, элюированной системой дихлорэтан: метанол (95/5) (фракция 1). С помощью препаративной ТСХ фракции 1 в системе дихлорэтан: метанол (95/5) получены соединения 8А (6 мг), 9А (4 мг) и 10А (4 мг).

Молекулярная масса соединения 8А 815 Да была определена на основании значений пиков квазимолекулярных ионов при с m/z 838 [M+Na]+ и 814 [М-Н]", полученных с помощью ЭСМС. В 'Н ЯМР спектре наблюдали сигналы протонов семи метальных групп (¿н 0.78, д; 0.82 (9СН3) м; 0.89, дц; 1.05, д; 1.10, д), в том числе сигналы протонов двух метальных групп при двойной связи (<5Н 1-98, с; 1.92, с), сигналы протонов двух метоксильных групп (Зц 3.63, с; 3.20, с), сигналы протонов при двойной связи (<5Н 5.15, да; 5.74, м; 5.76, м; 6.55, дц; 6.71, с; 6.93, д; 7.20, д) и сигнал амидного протона (<5Н 8.63, с). Согласно данным 'Н ЯМР и HSQC спектров в соединении 8А присутствуют шесть метановых групп, связанных с кислородом (Sa 3.24, м; 3.58, м; 3.85, м; 4.12, м; 4.92, д; 5.10, м). В 13С ЯМР и DEPT спектрах присутствуют сигналы третичных углеродов, несущих кислородную функцию (ßc 125.1; 127.1; 132.5; 132.9; 133.6; 142.8), два сигнала карбонильных углеродов в сложноэфирных группах (<5с 167.3; 164.2) и сигнал ацетального углерода (¿с 98.8). Эксперименты двумерной ЯМР спектроскопии позволили сделать отнесение углеродных и протоновых сигналов в 8А. НМВС спектр 8А подтвердил последовательность присоединения атомов углерода в молекуле. Полученные 'Н и 13С ЯМР спектры 8А совпадали с описанными данными для бафиломицина В[ (Рис. 5). Таким образом, было показано, что Streptomyces sp. Mei 22 является новым продуцентом антибиотиков бафиломицинового ряда. Это предположение было подтверждено выделением из стрептомицета еще двух антибиотиков 9А и 10А этого же типа.

Молекулярная масса 9А отличается от молекулярной массы 8А на 14 Да. Она была вычислена из значений пиков квазимолекулярных ионов с m/z 852 [M+Na]+ и 828 [М-Н]", полученных с помощью ЭСМС. 'Н ЯМР спектр 9А отличался от спектра 8А наличием сигнала протонов дополнительной мегоксильной группы при <5Н 3.05

м.д. Такой кеталь с С-19-ОСНз группой, бафиломицин В2 (Рис. 5), был выделен ранее в качестве минорного компонента из

26 27

ОСН3 СН3 СН3

СН#8

25 «-П3-

СН3 СН3 ОСНз

31 30

=R3i R.2=H, R[=H Бафиломицин В! (8А)

.С. J0—=R3 R2=CH3 R,=H Бафиломицин B2 (9А)

С

Rj=H, R2=H, R3=H Бафиломицин Ai (10А)

Рис. 5. Бафиломицины Вь Вги А].

Молекулярная масса соединения 10А 622 Да была определена из значения пика квазимолекулярного иона с m/z 645 [M+Na]+, полученного методом ЭСМС. 'Н ЯМР спектр соединения содержал сигналы протонов метальных групп, расположенных в области <5ц 0.78-1.06 м.д. и двух метальных групп при двойных связях при <5Н 1-92 и 1.98 м.д. Кроме того, были идентифицированы в спектре сигналы пяти метановых протонов при <5Н, 5.15, 6.71, 5.74, 5.76, 6.55 м.д., что говорило о присутствии двойных связей в молекуле 10А. Кроме этого *Н ЯМР спектр имел два сигнала протонов метоксильных групп при Sa 3.20 и 3.63 м.д. и шесть сигналов метановых протонов, связанных с атомами углерода, несущих кислородную функцию (<5Н 3.24, 5.10, 3.58, 3.85, 4.12, 4.92). Разница между молекулярными массами 8А и 10А составляла 193

Да. Эта разница была приписана наличию в 8А остатка моноамида Л^-(3-гидрокси-2-циклопентенон)-фумаровой кислоты, фрагмента боковой цепи бафиломицина В]. Отсутствие такого фрагмента в 10А подтверждалось отсутствием сигналов двух протонов при <5Н 6.93 м.д., 7.20 м.д. и сигнала одного карбамидного протона при ¿н 8.63 м.д, сигналов, которые мы наблюдали в 'Н ЯМР спектрах соединений 8А и 9А. Молекулярная масса 10А, а также данные 'н ЯМР спектра соединения 10А указывали на его идентичность бафилломицину Ai (Рис. 5), выделенному ранее из почвенного изолята бактерии griseus.

Таким образом показано, что актинобактерия Streptomyces sp. Mei 22 продуцирует антибиотики, которые были выделены ранее из наземного стрептомицета S. griseus.

4. Бромальтерохромнды А и А1 из Pseudoalteromonas maricaloris КММ 636

Во время экспедиционного рейса на НИС «Академик Опарин» на Большом Барьерном рифе (Австралия, 1991 г.) сотрудниками лаборатории химии микробных метаболитов и лаборатории микробиологии ТИБОХ ДВО РАН были отобраны штаммы бактерий, выделенные из губок различных семейств. Среди них были губки Aplysina sp. и Fascaplysinopsis reticulata, которые синтезировали желтые пигменты -аплизинопсины, с высокой цитотоксической активностью по отношению к опухолевым клеткам.

Из желтопигментированной бактерии, ассоциированной с губкой F. reticulata, был выделен желтый пигмент, который имел близкое значения Rf при ТСХ с аплизинопсинами. Позднее бактериальный штамм был определен по физиолого-морфологическим и генетическим данным как P. maricaloris КММ 636. Бактерия при ферментации в жидкой среде синтезировала каротиноидные пигменты. Культивирование бактерии на твердых средах приводило к образованию желтых некаротиноидных пигментов, которые по своим физико-химическим характеристикам отличались от пигментов губки и пигментов, выделенных из других бактерий рода Alteromonas. ЭСМС фракции пигментов, имеющий в УФ-спектре максимум поглощения при 395-405 нм, показала наличие в ней компонентов с молекулярными

массами 843 и 857 Да. Мультиплетность пиков квазимолекулярных ионов [М+Н]+ в ЭСМС при т/г 844/846 и 858/860 указывали на присутствие в пигментах одного атома брома. Пигменты не давали положительных реакций, характерных для хиноидных соединений и для актиномицинов. Химическая структура двух неразделимых методом ВЭЖХ пигментов, бромоальтерохромидов А и А1 (соотношение 3:1) (Рис. 6) была установлена совместно с немецкими исследователями в Геттингенском университете, куда был передан штамм бактерии РяеисЗоа^еготопаз тапсЫопя КММ 636.

Рис. 6. Структуры бромальтерохромидов А и А1.

Было показано, что пептиды относятся к циклическим депсипептидам, циклическая часть которых образована пятью аминокислотами — алло-изолейцин, алло-треонин, валин, и два остатка аспарагина, а в бромоальтерохромиде А1 остаток ояло-изолейцина заменен на лейцин. Боковая цепь представляет собой необычную 9-(3'-бромо-4-гидроксифенил)-нона-2,4,6,8-тетраеновую кислоту, связанную пептидной связью с аминогруппой треонина.

Для установления полной структуры пептидов необходимо было определить абсолютную конфигурацию аминокислот, входящих в состав пептидов. Для аминокислот, входящих в состав пептидов были получены Лг-а-(2,4-динитро-5-фторфенил)-Ь-аланиламидные производные, которые анализировали с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ. Времена удерживания полученных производных сравнивали с временами удерживания производных стандартных аминокислот.

Согласно полученным данным, в состав бромоальтерохромидов А и А1 входили два остатка Ь-аспарагиновой кислоты, Б-олло-треонин, Б-валин, Ь-лейцин и И-апло-изолейцин.

Для анализа смеси пептидов и установления зависимости изменения состава пигментной смеси от различных сред культивирования Ряеис^оакеготопая тапссйогЬ КММ 636 мы анализировали фракции, содержащие бромальтерохромиды, методом МАДДИМС (Табл. 1). Показано, что пептиды А и А1, являются основными компонентами пигментной смеси, полученной при культивировании бактерий на среде III. При добавлении в эту среду дрожжевого экстракта (среда IV) идет синтез только бромированных производных пептидов А и А1. Они были также обнаружены при культивировании бактерий на средах II и V. По сравнению со средой I, на которой идет образование как пептидов А и А1, так и их бромированных производных, в средах II и V содержание пептона и дрожжевого экстракта выше. Таким образом из полученных данных очевидно, что содержание в среде дрожжевого экстракта приводит к увеличению содержания бромированных производных пептидов А и А1. Методом МАЛДИМС нами впервые были обнаружены производные пептидов А и А1, содержащие два атома брома в молекуле. Показано, что смеси пигментов, выделенные из биомассы Р. тапсаЪш КММ 636, выращенной на разных средах, не содержат аплизинопсинов

Таблица 1: Данные спектров поглощения и МАЛДИМС для смесей пигментов,

полученных при разных условиях культивирования Р. таг/са/ога КММ 636.

Номер и состав среды ^•тах (нм) ст-т: 385-400 Молекулярные ионы, полученные методом МАЛДИМС Интенсивность пиков

(среда I) (г/л) пептон (1) дрожжевой экстракт (1) (К2НР04) (0.5) ИН^е-цитрат (1) агар(16) морская вода - 50% рН 7.5 382 866/868 (843/845+№)+ 882/884 (843/845+К)+ 944/946/948 (843/845+Вг+Ш)+ 960/962/964 (843/845+ВН-К)+ 100 % 25% 25% 10%

(среда II) (г/л) пептон (5) дрожжевой эстракт (2) глюкоза (1) агар (16) морская вода - 50% рН 7.5 370-380 960/962/964 (843/845+ВН-К)+ 944/946/948 (843/845+Вг+№)+ 100% 41%

(среда П1) (г/л) триптический соевый бульон (01&о) (30) казеиновый гидролизат (2) агар (14) морская вода - 50 % рН 7.5 375-381 882/884 (843/845+К)т 866/868 (843/845+№)+ 960/962/964 (843/845+Вг+-К)+ 100% 70% 20%

(среда IV) (г/л) триптический соевый бульон фИсо) (30) дрожжевой экстракт (2) казеиновый гидролизат (2) агар (14) морская вода - 50% рН 7.5 374 944/946/948 (843/845+Вг+№)+ 960/962/964 (843/845+Вг+К)+ 100% 50%

(среда V) (г/л) пептон (5) глюкоза (1) дрожжевой экстракт (2) агар (14) (К2НР04) (0.2) морская вода - 50% рН 7.5 350, 370 960/962/964 (843/845+Вг+К)+ 944/946/948 (843/845+Вг+Ка)+ 974/976/978 (857/859+Вг+К)+ 100% 20% 15%

ВЫВОДЫ

1 Протестированы на присутствие антибиотических соединений 83 частично очищенных экстрактов морских изолятов актинобактерий, выделенных из морских донных осадков бухты Троица (Японское море). Показано, что 17% актинобактерий синтезируют антибиотические соединения.

2 Впервые из морских актинобактерий рода Б&ер1отусез выделен новый биологически активный циклический дипептид цикло-(глицил-Ь-тирозил) и известное соединение М-ацетилтирамин.

3 Показано, что морские актинобактерии рода ЫосагсНа являются продуцентами 2,3-диметокси-5-метил-6-нонапренил-1,4-бензохинона (убихинон <39). Содержание убихинона <2, в сухом остатке хлороформ-этанолышго экстракта бактериальных клеток составляет 7%.

4 Впервые среди морских актинобактерий обнаружены продуценты макролидных антибиотиков - фейгризолидов и бафиломицинов, ранее полученных из наземных бактерий. Из БягерЮтусез Бр. В 6169 были получены и структурно идентифицированы 4 антибиотика - фейгризолиды А, В, С и динактин. Из Агер/отиуса? ер. Ме1 22 были выделены 3 соединения, структурно идентифицированные как бафиломицины Аь В[ и В2.

5 Из морской бактерии Рзеискзакеготопая тапса1огЬ КММ 636 выделены циклические депсипептиды нового структурного типа - бромальтерохромиды А и А1. Установлена стереохимия аминокислот, входящих в состав депсипептидов. Изучена зависимость синтеза бромальтерохромидов А и А1 бактерии Р. тапса1ош КММ 636 от присутствия в среде культивирования органических веществ.

Основные публикации по теме диссертации:

1. Кузнецова Т.А., Дмитренок А.С., Соболевская М.П., Шевченко JI.C., Михайлов В.В. Убихинон Q9 из морского изолята актинобактерии Nocardia sp. // Известия АН, серия химическая. 2002. № 10. С. 1798-1800.

2. Соболевская М.П., Фотсо С., Хаваш У., Денисенко В.А., Хелмке Э., Прокофьева Н.Г., Кузнецова Т.А., Лаач X., Еляков Г.Б. Метаболиты морского изолята бактерии Streptomyces sp. 6167 // Химия природных соединений. 2004. № 3. С. 237239.

3. Sobolevskaya М., Smetanina О., Speitling М., Shevchenko L., Dmitrenok P., Laatsch H., Kuznetsova Т., Ivanova E., Elyakov G. Production of brominated cyclic depsipeptides by Pseudoalteromonas maricaloris KMM 636 // Letters in Applied Microbiology. 2005. Vol. 40. P. 243-248.

4. Соболевская M. П., Денисенко В. А., Моисеенко А. С., Шевченко JI. С., Мензорова Н.И., Сибирцев Ю.Т., Ким Н. Ю., Кузнецова Т. А. Биологически активные метаболиты морской актинобактерии Streptomyces sp. KMM 7210 // Известия АН, серия химическая. 2007. № 4. С. 807-808.

5. Kuznetsova Т.А., Mikhailov V.V., Afiyatullov Sh.Sh., Kalinovskaya N.I., Oleinikova G.K., Smetanina O.F., Sobolevskaya M.P. Marine heterotrophic microorganisms as the basis for the development of marine biotechnology //1th International Congress on Biotechnology: book of abstract.- Moscow, Russian Federation. 2002. P. 181

6. Sobolevskaya M., Kuznetsova Т., Dmitrenok P., Shevchenko L., Speitling M., Laatsch H. The use of MALDI-MS for the detection of the yellow pigments from Pseudomonas maricaloris II 23rd International Symposium on the Chemistry of Natural Products: book of abstract.- Florence, Italy. 2002. P. 344.

7. Sobolevskaya M., Fotso S., Kuznetsova Т., Prokof eva N., Chaikina E., Shastina V., Sibirtzev Ju. , Menzorova N., Rasskazov V., Hawas U., Helmke E., Laatsch H. Bioactivity of metabolites from the marine actinobacterium Streptomyces sp. 6167 // ICOB-4 & ISCNP-24 IUPAC International Conference on Biodiversity and Natural Products: Chemistry and Medical Application: book of abstract.- New Delhi, India. 2004. P. 363.

8. Sobolevskaya M., Fotso S., Prokof eva N., Chaikina E., Shastina V., Sibirtzev J., Menzorova N., Rasskazov V., Hawas U., Helmke E., Kuznetsova Т., Laatsch H. Bioactive

metabolites of the marine actinobacteria // XI International Symposium on Marine Products: book of abstract.- Italy, Sorrento. 2004. P. 106.

Соискатель

M. П.

Соболевская Мария Павловна

Метаболиты морских бактерий. Химическая структура и биологическая активность. АВТОРЕФЕРАТ

Подписано в печать «14» августа 2007 г Формат 60x84/16 Тираж 100 экз Усл. печ. л. 1.2 Заказа №14228

Отпечатано в Типографии «Краски» 690048, г. Владивосток, пр-т 100-летия, 43, тел. 36-26-16, www.kpacku.com

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Биологически активные соединения морских факультативных актинобактерий

2.1.1. Макролиды, макролактамы и лактон-содержащие 10 соединения

2.1.2. Соединения хиноидной природы

2.1.3. Депсипептиды и дикетопиперазины

2.1.4. Алкалоиды

2.1.5. yff-Лактамные антибиотики

2.1.6. Другие биоактивные соединения

2.2. Биологически активные соединения морских бактерий рода Pseudoalteromonas 42 2.2.1 Антибиотические соединения из морских псевдоальтеромонад

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

3.1. Скрининг биологически активных соединений в морских актинобактериях

3.2. Биологически активные соединения из актинобактерии Streptomyces sp. КММ

3.3. Биологически активные соединения из актинобактерии Streptomyces sp. GW 33/

3.4. 2,3-ДИметокси-5-метил-6-нонапренил-1,4-бензохинон из 63 Nocardia sp. КММ

3.5. Фейгризолиды А, В» С и динактин из Streptomyces sp. В

3.6. Макролидные антибиотики из Streptomyces sp. Mei

3.7. Бромальтерохромиды А и А1 из Pseudoalteromonas maricaloris

4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

4.1. Культивирование актинобактерии Streptomyces sp. КММ 7210. и выделение цикло-(глицил-Ь-тирозила)

4.2. Культивирование актинобактерии Streptomyces sp. GW 33/ и выделение биологически активных соединений

4.3. Культивирование актинобактерии Nocardia sp. КММ и выделение убихинона Q

4.4. Культивирование актинобактерии Streptomyces sp. В и выделение фейгризолидов А, В, С и динактина

4.5. Культивирование актинобактерии Streptomyces sp. Mei 22. и выделение макролидных антибиотиков

4.6. Культивирование бактерии Pseudoalteromonas maricaloris

КММ 636 и выделение бромальтерохромидов А и А

ВЫВОДЫ

Актуальность проблемы. Последние двадцать лет были насыщены интересными открытиями в одном из молодых направлений биоорганической химии, а именно, в химии морских природных соединений. Эти открытия связаны с выделением из морских микро- и макроорганизмов необычных соединений новых структурных типов с разнообразными биохимическими и фармакологическими свойствами [1-7]. Океан является самым большим резервуаром микробиоты, к настоящему времени еще мало изученной. Надежды на обнаружение в морских экосистемах продуцентов новых биологически активных соединений стимулировали биохимические и химические исследования морских микроорганизмов [8]. Результатом этого явилось открытие в морских микроорганизмах необычных по химической структуре и биологическому действию метаболитов, многие из которых не имеют структурных аналогов среди биологически активных соединений, выделенных из наземных источников.

Некоторые морские организмы представляют собой сложные симбиотические комплексы [9-12]. Содержание симбионтных микроорганизмов в них может быть так велико, что суммарных вес этих бактерий и микроводорослей может значительно превышать вес самих макроорганизмов. В связи с этим существуют трудности при установлении истинного продуцента биологически активных веществ. Значительно возрос интерес к данному вопросу после того, как было установлено, что широко известные морские токсины тетродотоксин и сакситоксин не являются продуктами биосинтеза токсичных видов рыб и динофлагелят, соответственно, а продуцируются микроорганизмами, ассоциированными с этими макроорганизмами. Это означало, что при необходимости получения подобных соединений можно отказаться от заготовок больших количеств морского биологического сырья, а использовать микроорганизмы.

Химия морских микроорганизмов интенсивно развивается на протяжении последних лет. На диаграмме 1 [13] показано, что количество выделенных соединений из морских микроорганизмов возросло в несколько раз за два десятилетия.

Химия морских микроорганизмов явиляется основой развития морской биотехнологии и морской химической экологии, вносящих значительный вклад в понимание экологической роли метаболитов морских микроорганизмов.

600 500 400 ' 300 200 100

Q '^^ттщтглшгмшжт.■■■ . —.

1966 1970 1975 1980 1985 1990 1995 2000 2004 Диаграмма 1.

Число метаболитов морских микроорганизмов, выделенных за период

1966-2004 годы.

Согласно анализу литературных данных, морские микроорганизмы являются новыми перспективными источниками биологически активных соединений [14]. Морские микроорганизмы выделяют из различных субстратов - морской воды, донных осадков, из морских беспозвоночных и рыб, водорослей и морских трав [15, 16].

Основное внимание в процессе работы было уделено изучению биосинтетических возможностей морских бактерий. В обзоре литературы, который охватывает литературные источники периода с 1966 по 2006 годы, приведены данные по характеристике метаболитов актинобактерий и бактерий рода Pseudoalteromonas, которые явились основными объектами наших исследований.

Цель и задачи исследования. Целью работы являлось выделение и установление строения биологически активных вторичных метаболитов из морских актинобактерий родов Streptomyces и Nocardia и морской бактерии рода Pseudoalteromonas.

Для достижения этой цели были решены следующие задачи: 1) проведен скрининг и выбраны обьекты исследования; 2) получены суммарные экстракты из культур бактерий; 3) разработаны схемы выделения активных веществ; 4) осуществлено разделение полученных экстрактов и выделение индивидуальных природных соединений; 5) проведен анализ ЯМР-спектроскопических и масс-спектрометрических данных для выделенных соединений и установлены структуры этих соединений; 6) изучена биологическая активность веществ.

Научная новизна и практическая ценность работы. Литературный обзор, приведенный в диссертации, является новым справочным материалом по характеристике метаболитов актинобактерий и псевдоальтеромонад, полученных до настоящего времени. В ходе выполнения диссертации структурно идентифицированы 10 метаболитов актинобактерий. Для некоторых соединений были впервые получены данные двумерной ЯМР-спектроскопии и сделаны полные отнесения сигналов протонов и углеродных атомов. Используя данные матрично активированной лазерной десорбции/ ионизации масс-спектрометрии (МАЛДИМС), исследована зависимость продукции циклических депсипептидов, метаболитов Pseudoalteromonas maricaloris КММ 636 от присутствия в среде культивирования органических веществ и минеральных солей. Впервые среди морских актинобактерий обнаружены продуценты антибиотиков - фейгризолидов и бафиломицинов. Получены новые данные по цитотоксической активности выделенных соединений с использованием в качестве биологических моделей мышиных эритроцитов, опухолевых клеток карциномы Эрлиха, спермиев, яйцеклеток и развивающихся эмбрионов морского ежа Strongylocentrotus intermedins. Впервые показано, что макролидный антибиотик фейгризолид В индуцирует апоптоз в опухолевых клетках.

Публикации результатов исследования. Основные результаты данной работы опубликованы в таких журналах как "Известия Академии наук. Серия химическая", "Химия природных соединений" и "Letters in Applied Microbiology". Материалы работы также были представлены на одиннадцатом Международном симпозиуме по морским природным соединениям в 2004 году в Сорренто (Италия), на двадцать четвертой Конференции по биоразнообразию и природным продуктам в 2004 году в Нью-Дели (Индия), на первом Международном конгрессе по биотехнологии в 2002 году в Москве (Россия) и на двадцать третьем Международном симпозиуме по химии природных продуктов в 2002 году во Флоренции (Италия). По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, в том числе 4 статьи в рецензируемых журналах.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, посвященного вторичным метаболитам морских актинобактерий и бактерий рода Pseudoalteromonas, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка литературы, включающего 135 цитируемых работ. Работа изложена на 114 страницах, содержит 16 таблиц, 5 схем, 14 рисунков и 3 диаграммы.

5.ВЫВОДЫ.

1 Протестированы на присутствие антибиотических соединений 83 частично очищенные экстракты морских изолятов актинобактерий, выделенные из морских донных осадков бухты Троица (Японское море). Показано, что 17% актинобактерий синтезируют антибиотические соединения.

2 Впервые из морских актинобактерий рода Streptomyces выделен новый биологически активный циклический дипептид цикло-(глицил-Ь-тирозил) и известное соединение iV-ацетилтирамин.

3 Показано, что морские актинобактерии рода Nocardia являются продуцентами 2,3-диметокси-5-метил-6-нонапренил-1,4-бензохинона (убихинон Q9). Содержание убихинона Q9 в сухом остатке хлороформ-этанольного экстракта бактериальных клеток составляет 7%.

4 Впервые среди морских актинобактерий обнаружены продуценты макролидных антибиотиков - фейгризолидов и бафиломицинов, ранее полученных из наземных бактерий. Из Streptomyces sp. В 6169 были получены и структурно идентифицированы 4 антибиотика - фейгризолиды А, В, С и динактин. Из Streptomyces sp. Mei 22 были выделены 3 соединения, структурно идентифицированные как бафиломицины A], Bj и В2.

5 Из морской бактерии Pseudoalteromonas maricaloris КММ 636 выделены циклические депсипептиды нового структурного типа - бромальтерохромиды А и А1. Установлена стереохимия аминокислот, входящих в состав депсипептидов. Изучена зависимость синтеза бромальтерохромидов А и А1 бактерии P. maricaloris КММ 636 от присутствия в среде культивирования органических веществ.

1. Faulkner D. J. Marine natural products // Nat. Prod. Rep. 2001. Vol. 18. P. 149.

2. Faulkner D. J. Marine pharmacology // Antonie van Leeuwenhoek. 2000. Vol. 77. P. 135-145.

3. Imada C. Enzyme inhibitors of marine microbial origin with pharmaceutical importance // Mar. Biotechnol. 2004. Vol. 6. P. 193-198.

4. Blunt J. W., Copp B. R., Munro M. H. G., Northcote P. Т., Prinsep M. R. Marine natural products //Nat. Prod. Rep. 2004. Vol. 21. P. 1-49.

5. Fenical W. Chemical studies of marine bacteria: developing a new resource // Chem. Rew. 1993. Vol. 93. P. 1673-1683.

6. Xiong L., Li J., Kong F., Streptomyces sp. 173, an insecticidal micro-organism from marine // Letters in Applied Microbiology. 2004. Vol. 38. P. 32-37.

7. Magarvey N. A., Keller J. M., Bernan V., Dworkin M., Sherman D. H. Isolation and characterization of novel marine-derived actinomycete taxa rich in bioactive metabolites // Applied and environmental microbiology. 2004. Vol. 70. P. 75207529.

8. Дембицкий В. M. Бром- и йод, содержащие алкалоиды морских микроорганизмов и губок // Биоорганическая Химия. 2002. Т. 28. № 3. С. 196-208.

9. Kim Т. К., Garson М. J., Fuerst J. A. Marine actinomycetes related to the "Salinospora" group from the Great Barrier Reef sponge Pseudoceratina clavata //Environmental microbiology. 2005. Vol. 7. № 4. P. 509-518.

10. Montalvo N. F., Mohamed N. M., Enticknap J. J., Hill R. T. Novel actinobacteria from marine sponge // Antonie van Leeuwenhoek. 2005. Vol. 87. P. 29-36.

11. Wagner-Dobler I., Beil W., Lang S., Meiner M., Laatsch H. Integrated approach to explore the potential of marine microorganisms for the production of bioactive metabolites // Advanced in Biochemical Engineering/Biotechnology. 2002. Vol. 74. P. 207-236.

12. Bull А. Т., Stach J. E. M., Ward A. C., Goodfellow M. Marine actinobacteria: perspectives, challenges, future directions // Antonie van Leeuwenhoek. 2005. Vol. 87. P 65-79.

13. Maldonaldo L. A., Stach J. E. M., Pathom-aree W., Ward A. C., Bull А. Т., Goodfellow M. Diversity of cultivable actinobacteria in geographically widespread marine sediments // Antonie van Leeuwenhoek. 2005. Vol. 87. P. 11-18.

14. Stach J. E. M., Bull A. T. Estimating and comparing the diversity of marine actinobacteria // Antonie van Leeuwenhoek. 2005. Vol. 87. P. 3-9.

15. Moore B. S., Kalaitzis J. A., Xiang L. Exploiting marine actinomycete biosynthetic pathways for drug discovery // Antonie van Leeuwenhoek. 2005. Vol. 87. P. 49-57.

16. Fiedler H., Brunter C., Bull А. Т., Ward A. C., Goodfellow M., Potterat O., Puder C., Mihm G. Marine actinomyces as a source of novel secondary metabolites // Antonie van Leeuwenhoek. 2005. Vol. 87. P. 37-42.

17. Jensen P. R., Mincer T. J., Williams P. G., Fenical W., Marine actinomycete diversity and natural product discovery // Antonie van Leeuwenhoek. 2005. Vol. 87. P. 43-48.

18. Imada C. Enzyme inhibitors and other bioactive compounds from marine actinomycetes //Antonie van Leeuwenhoek. 2005. Vol. 87. P. 59-63.

19. Егоров H.C. Основы учения об антибиотиках. М.: Высшая школа, 1986. -325с.

20. Михайлов В.В., Кузнецова Т.А., Еляков Г.Б. Морские микроорганизмы и их вторичные биологически активные метаболиты. Владивосток: Дальнаука. 1999.-131с.

21. Nakamura Н., Iitaka Y., Kitahara Т., Okazaki Т., Okami Y. Structure of Aplasmomycin//J. Antibiotics. 1977. Vol. 30. P. 714-719.

22. Kundu M. K., Tomas J. V., Bhat S. V. Monoterpenic fragment analogues of Aplasmomycin as potential anti-malarials // Indian Journal of Chemistry. 1999. Vol. 38B. P. 1299-1300.

23. Pathirana C., Tapiolas D., Jensen P., Dwight R., Fenical W. Structure determination of madurolide: a new 24-membered ring macrolide glycoside produced by a marine bacterium (Actinomycetales) // Tetrahedron Letters. 1991. Vol. 32. P. 2323-2326.

24. Stritzke K., Schulz S., Laatsch H., Helmke E., Beil W. Novel caprolactones from a marine Streptomyces 11 J. Nat. Prod. 2004. Vol. 67. P. 395-401.

25. Pathirana C., Dwight R., Jensen P., Fenical W. Structure and synthesis of a new butanolide from a marine actinomycete // Tetrahedron Letters. 1991. Vol. 32. P. 7001-7004.

26. Venugopal J., Mukku V., Speitling M., Laatch H., Helmke E. New butenolides from two marine streptomycetes // J. Nat. Prod. 2000. Vol. 63. P. 1570-1572.

27. Cho K. W., Lee H., Rho J., Kim T. S., Mo S. J., Shin J. New lactone-containing metabolites from a marine-derived bacterium of the genus Streptomyces II J. Nat. Prod. 2001. Vol. 64. P. 664-667.

28. Asolkar R. N., Maskey R. P., Helmke E., Laatsch H. Chalcomycin B, a new macrolide antibiotic from the marine isolate Streptomyces sp. B70641I J. Antibiotics. 2002. Vol. 55. P. 893-898.

29. Gustafson K., Roman M., Fenical W. The macrolactins, a novel class of antiviral and cytotoxic macrolides from a deep-sea marine bacterium // J. Am. Chem. Soc. 1989. Vol. 111. P. 7519-7525.

30. Mitchell S. S., Nicholson В., Teisan S., Lam K. S., Potts В. С. M. Aureoverticillactam, a novel 22-atom macrocyclic lactam from the marine actinomycete Streptomyces aureoverticillatus II J. Nat. Prod. 2004. Vol. 67. P.1400-1402.

31. Ohta E., Ohta S., Kubota N. K., Suzuki M., Ogawa Т., Yamasaki A., Ikegami S. Micromonospolid A, a new macrolide from Micromonospora sp. // Tetrahedron Letters. 2001. Vol. 42. P. 4179-4181.

32. Tapiolas D. M., Roman M., Fenical W. Octalactins A and B: cytotoxic eight-membered-ring lactones from a marine bacterium Streptomyces sp. // J. Am. Chem. Soc. 1991. Vol. 113. P. 4682-4683.

33. Hernandez I. L. C., Godinho M. J. L., Magakhaes A., Schefer А. В., Ferreiria A., Berlinck R. G. S. iV-Acetyl-y-hydroxyvaline lactone, an unusual aminoacid derivative from a marine Streptomycete // J. Nat. Prod. 2000. Vol. 63. P. 664665.

34. Haneda M., Nawata Y., Hayashi Т., Ando K. Tetranactin, a new miticidal antibiotic. Determination of dinactin, trinactin and tetranactin in their mixture by NMR spectroscopy // J. Antibiotics. 1974. Vol. 27. P.555-560.

35. Schumacher R. W., Talmage S. C., Miller S. A., Sarris К. E., Davidson B. S., Goldberg A. Isolation and structure determination of an antimicrobial ester froma marine sediment-derived bacterium // J. Nat. Prod. 2003. Vol. 66. P. 12911293.

36. Lindel Т., Jensen P., Fenical W. Lagunapyrones A-C: cytotoxic acetogenins of a new skeletal class from a marine sediment bacterium // Tetrahedron Letters. 1996. Vol.37. P. 1327-1330.

37. Kwon H. C., Kauffman C. A., Jensen P. R., Fenical W. Marinomycins A-D, antitumor antibiotics of a new structure class from a marine actinomycete of the recently discovered genus "Marinispora" II J. Am. Chem. Soc. 2006. Vol. 128. P. 1622-1632.

38. Kitahara Т., Nagasawa H., Okazaki Т., Okai Y., Umezawa H. The structure of SS-228Y, an antibiotic from Chainia sp. // J. Antibiotics. 1975. Vol. 28. P. 280285.

39. Pathirana C., Jensen P., Fenical W. Marinone and Debromomarinone: antibiotic sesquiterpenoid naphthoquinones of a new structure class from a marine bacterium // Tetrahedron Letters. 1992. Vol. 33. P. 7663-7666.

40. Hardt I. H., Jensen P., Fenical W. Neamarinone, and new cytotoxic marinone derivatives, produced by a marine filamentous bacterium (actinomycetales) // J. Tetrahedron Letters. 2000. Vol. 41. P. 2073-2076.

41. Bernan V., Montenegro D., Korshalla J., Maiese W., Steinberg D., Greenstein M. Bioxalomycins, new antibiotics produced by the marine Streptomyces sp. LL-31F508 // J. Antibiotics. 1994. Vol. 47. P. 1417-1424.

42. Ford P., Gadepalli M., Davidson B. Halawanones A- D, new polycyclic quinines from a marine-derived Streptomycete II J. Nat. Prod. 1998. Vol. 61. P. 12321238.

43. Furumai Т., Igarashi Y., Higuchi H., Saito N., Oki T. Kosinostatin, a quinocycline antibiotic with antitumor activity from Micromonospora sp. TP-A0468//J. Antibiotics. 2002. Vol.55. P. 128-133.

44. Igarashi Y., Higuchi H., Oki Т., Furumai T. NMR analysis of quinocycline antibiotics: structure determination of kosinostatin, an antitumor substance from Micromonospora sp. TP-A0468 // J. Antibiotics. 2002. Vol. 55. P. 134-140.

45. Maskey R. P., Helmke E., Laatsch H. Himalomycin A and B: isolation and structure elucidation of new fridamycin type antibiotics from a marine Streptomyces isolate // J. Antibiotics. 2003. Vol. 56. P. 924-949.

46. He H., Ding W., Bernan V. S., Richardson A. D., Ireland С. M., Greenstein M., Ellestad G. A., Carter G. T. Lomaiviticins A and B, potent antitumor antibiotics from Micromonospora lomaivitiensis II J. Am. Chem. Soc. 2001. Vol. 123. P. 5362-5363.

47. Itoh Т., Kinoshita M., Aoki S., Kobayashi M. Komodoquinone A and B, a novel neuritogenic anthracycline, from marine Streptomyces sp. KS3 // J. Nat. Prod. 2003. Vol. 66. P. 1373-1377.

48. Itoh Т., Kinoshita M., Wei H., Kobayashi M. Stereostructure of komodoquinone A, a neuritogenic anthracycline, from marine Streptomyces sp. KS3 // Chem. Pharm. Bull. 2003. Vol. 51. № 12. P. 1402-1404.

49. Cheng X., Jensen P., Fenical W. Luisols A and B, new aromatic tetraols produced by an estuarine marine bacterium of the genus Streptomyces (Actinomycetales) // J. Nat. Prod. 1999. Vol. 62. P. 608-610.

50. Soria-Mercado I. E., Prieto-Davo A., Jensen P. R., Fenical W. Antibiotic terpenoid chloro-dihydroquinones from a new marine actinomycete // J. Nat. Prod. 2005. Vol. 68. P. 904-910.

51. Moore B. S., Seng D. Biosynthesis of the bicyclic depsipeptide salinamide A in Streptomyces sp. CNB-091: origin of the carbons // Tetrahedron Letters, 1998. Vol. 39. P. 3915-3918.

52. Balk-Bindseil W., Helmke E., Weyland H., Laatsch H. Maremycin A and B, new diketopiperazines from a marine Streptomyces sp. // Liebigs Ann. 1995. P. 1291-1294.

53. Yang S., Chan Т., Terracciano J., Loebenberg D., Chen G., Patel M., Gullo V., Pramanik В., Chu M. Structure elucidation of a new diketopiperazine Sch 725418 from Micromonospora sp. // J. Antibiotics. 2004. Vol. 57. P. 345-347.

54. Lee H., Shin H. J., Jang К. H., Kim T. S., Oh K., Shin J. Cyclic peptides of the nocardamine class from a marine-derived bacterium of the genus Streptomyces II J. Nat. Prod. 2005. Vol. 68. P. 623-625.

55. Pathirana C., Jensen P., Dwight R., Fenical W. Rare phenazine 1-quinovose esters from a marine actinomycete // J. Org. Chem. 1992. Vol. 57. P. 740-742.

56. Gebhardt K., Schimana J., Krastel P., Dettner K., Rheinheimer J., Zeeck A., Fiedler H. Endophenazines A-D, new phenazine antibiotics from the arthropod associated endosymbiont Streptomyces anulatus 11 J. Antibiotics, 2002. Vol. 66. P. 794-800.

57. Takahashi M., Kurosawa S., Ikeda D., Okami Y., Takeuchi T. Altemicidin, a new acaricidal and antitumor substance. I Taxonomy, fermentation, isolation and physico-chemical and biological properties // J. Antibiotics. 1989. Vol. 42. P. 1556-1562.

58. Takahashi M., Ikeda D., Nakamura H., Naganawa H., Kurosawa S., Okami Y., Takeuchi T.,. Iitaka Y. Altemicidin, a new acaricidal and antitumor substance. II Structure determination // J. Antibiotics. 1989. Vol. 42. P. 1562-1566.

59. Charan R. D., Schlingmann G., Janso J., Bernan V., Feng X., Carter G. T. Diazepinomicin, a new antimicrobial alkaloid from a marine Micromonospora sp.//J. Nat. Prod. 2004. Vol. 67. P. 1431-1433.

60. Macherla V. R., Liu J., Bellows C., Teisan S., Nicholson В., Lam K. S., Potts B. С. M. Glaciapyrroles А, В and C, pyrrolosesquiterpenes from a Streptomyces sp. isolated from an Alaskan marine sediment // J. Nat. Prod. 2005. Vol. 68. P. 780783.

61. Hashimoto M. Family of ^-lactam antibiotics with /^-lactamase inhibitory properties produced by marine actinomycete // J. Antibiotics. 1979. Vol. 31. P. 295-304.

62. Hashimoto M. New (3-Iactam antibiotic from cultured and collected marine organisms // J. Am. Chem. Soc. 1976. Vol. 98. P. 302-312.

63. Hosoda J. Chemical studies of /?-lactam antibiotics from marine bacteria // Agric. Biol. Chem. 1977. Vol. 41. P. 201-208.

64. Williams P. G., Buchanan G. O., Feling R. H., Kauffman C. A., Jensen P. R., Fenical W. New cytotoxic salinosporamides from the marine actinomycete Salinispora tropica /I J. Org. Chem. 2005. Vol. 70. P. 6196-6203.

65. Okami Y. Marine microorganisms as a sourse of bioactive agents // Microb. Ecol. 1986. Vol. 12. P. 65-78.

66. Cheng C., Jensen P., Fenical W. Arenaric acid, a new pentacyclic polyether produced by a marine bacterium (Actinomycetales) // J. Nat. Prod. 1999. Vol. 62. P. 605-607.

67. Seto H., Mizoue К., Otake N., Studies on the ionophorous antibiotics. The1."Xassignments of the С NMR spectra of Lonomycin A and Mutalomycin // J. Antibiotics. 1980. Vol. 37. P. 979-988.

68. Capon R., Scene C., Lacey E., Gill J., Wicker J., Heiland K., Friedel T. Lorneamides A and B: two new aromatic amides from a southern australian marine actinomycete//J. Nat. Prod. 2000. Vol. 63. P. 1682-1683.

69. Shumacher R. W., Harrigan B. L., Davidson B. S. Kahakamides A and B, new neosidomycin metabolites from a marine-derived actinomycete // Tetrahedron Letters. 2001. Vol. 42. P. 5133-5135.

70. Lopez J. M. S., Insua M. M., Baz J. P., Puentes J. L. F., Hernandez L. M. C. New cytotoxic indolic metabolites from a marine Streptomyces sp. // J. Nat. Prod. 2003. Vol. 66. P. 863-864.

71. Sasaki Т., Igarashi Y., Saito N., Furumai T. Watasemycins A and B, new antibiotics produced by Streptomyces sp. TP-A0597 // J. Antibiotics. 2002. Vol. 55. P. 249-255.

72. Maskey R. P., Helmke E., Feibig H., Laatsch H. Panmycin: isolation and structure elucidation of a novel cytotoxic 2,3-dihydroquinizarin analogue of y-indomycinone from a marine streptomycete isolate // J. Antibiotics. 2002. Vol. 55. P. 1031-1035.

73. Maskey R. P., Sevvana M., Uson I., Helmke E., Laatsch H. Gutingimycin: a highly complex metabolite from a marine streptomycete // Marine Natural Products. 2004. Vol. 43. P. 1281-1283.

74. Cho J. Y., Kwon H. C., Williams P. G., Kauffman C. A., Jensen P. R., Fenical W. Actinofuranones A and B, polyketides from a marine-derived bacterium related to the genus Streptomyces II J. Nat. Prod. 2006. Vol. 69. P. 425 428.

75. Formerly List of Bacterial Names with Standing in Nomenclature (LPSN), J.P. Euzeby Электронный ресурс., 2006.- http://www.bacterio.cict.fr

76. Burkholder P., Pfister R., Leitz F. Production of a pyrrole antibiotic by a marine bacterium//Appl. Microbiol. 1966. Vol. 14. P. 649-653.

77. Hanefelg U., Floss H., Laatsch H. Biosynthesis of the marine antibiotic pentabromopseudilin // J. Org. Chem. 1994. Vol. 59. P. 3604-3608.

78. Anderson R., Wolf M., Faulkner D. Autotoxic antibiotic production by a marine Chromobacterium II Marine Biol. 1974. Vol. 27. P. 281 -285.

79. Yoshikawa K., Takadera Т., Adachi K., Nishuima M., Sano H. Korormicin, a novel antibiotic specifically active against marine gram-negative bacteria, produced by a marine bacterium // J. Antibiotics. 1997. Vol. 50. P. 949-953.

80. Yoshikawa К., Adachi К., Nishida F., Mochida K. Planar structure and antibacterial activity of korormicin derivatives isolated from Pseudoalteromonas sp. F-420 // J. Antibiotics. 2003. Vol. 56. P.866-870.

81. Takahashi A., Nakamura H., Kameyama Т., Kurasawa S., Naganawa H., Okami Y., Takeuchi Т., Umezava H. Bisucaberin, a new siderophore, sensitizing tumor cells to macrophage-mediated cytolysis // J. Antibiotics. 1987. Vol. 40. P. 16711676.

82. Shiozawa H., Kagasaki Т., Kinoshita Т., Haruyama H., Domon H., Utsui Y., Kodama K., Takahashi S. Thiomarinol, a new hybrid antimicrobial antibiotic produced by a marine bacterium // J. Antibiotics. 1993. Vol. 46. P. 1834-1842.

83. Holland G., Jamieson D., Reicheldt J., Viset G., Wells R. Three aromatic acids from Alteromonas rubra II Chemistry and Industry. 1984. Vol. 3. P. 3-8.

84. Shigemori H., Bae M., Yzawa K., Sasaki Т., Kobayashi J. Alteramid A, a new tetracyclic alkaloid from a bacterium Alteromonas sp. associated with the marine sponge Halichondria okadai I I J. Org. Chem. 1992. Vol. 57. P. 43204323.

85. Gandhi N. M., Nazareth J., Devicar P. V. Magnedesin, a novel magnesium-containing antibiotic // J. Antibiotics. 1979. Vol. 26. P. 797-798.

86. Deng J., Hamada Y., Shioiri T. Total synthesis of alterobactin A, a super siderophore from an open-ocean bacterium // J. Am. Chem. Soc. 1995. Vol. 117. P. 7824-7825.

87. Kanon K., Kamino K., Leleo G., Adachi K., Shizuri Y. Pseudoalterobactin A and B, new siderophores excreted by marine bacterium Pseudoalteromonas sp. KP20-4 //J. Antibiotics. 2003. Vol. 56. P. 871-875.

88. Dalsgaard P.W., Larsen Т. O., Frydenvang K., Christophersen C. Psychrophilin A and Cyclopeptide D, novel cyclic peptides from the psychrotolerant fungus Penicillium ribeum II J. Nat. Prod. 2004. Vol. 67. P. 878-881.

89. Sorensen D., Larsen Т. O., Christophersen C., Nielsen P. H., Anthoni U., Dipodazine, a diketopiperazine from Penicillium dipodomyis II Phytochemistry. 1999. Vol. 51. P. 1181-1183.

90. Adamczeski M., Reed A. R., Crews P. New and known diketopiperazines from the Caribbean sponge, Calyx cf. podatypa II J. Nat. Prod. 1995. Vol. 58. P. 201208.

91. Integrating scientific databases 2.3 (Munchen, Germany), 2006.

92. Shaaban Mahmoud M. A. dissertation PhD/ Bioactive secondary metabolites from marine and terrestrial bacteria: isoquinolineguinones, bacterial compounds with a novel pharmacophor.-Georg-August-Universitet.-Gottingen, 2004.-406 p.

93. Schmidt E. W., Raventos- Suarez C., Bifano M., Menendez А. Т., Fairchild C. R., Falkner D. J. Scleritodermin A, a cytotoxic cyclic peptide from the lithistid sponge Scleritoderma nodosum II J. Nat. Prod. 2004. Vol. 67. 475-478.

94. Jayatilake G. S., Thornton M. P., Leonard A. C., Grimwade J. E., Baker B. J. Metabolites from an antarctic sponge-associated bacterium, Pseudomonas aeruginosa II J. Nat. Prod. 1996. Vol. 59. P. 293-296.

95. Wu T. S., Leu Y. L., Chan Y. Y. Constituent of the fresh leaves of Aristolochia cucurbitifolia II Chem. Pharm. Bull. 1999. Vol. 47. P. 571-573.

96. Lopez S. J. M., Insua M. M., Baz P. J., Puentes J. L. F., Hernandez C. L. M. New cytotoxic indolic metabolites from a marine Streptomyces II

97. J. Nat. Prod. 2003. Vol. 66. P. 863-864.

98. Furstner A. Chemistry and biology of roseophilin and prodigiosin alkaloids: a survey of the last 2500 years // Angew. Chem. 2003. Vol. 42. P. 3582- 3603.

99. Gerber N. N. A new prodiginine (podigiosine- like) pigment from streptomyces. Antimalarial activity of several prodiginines // J. Antibiotics. 1975. Vol. 38. P. 194-199.

100. Gerber N. N., Stanly D. P. Prodiginine (Prodogiosin- like) pigments from Streptoverticillium rubrireticuli, an organism that causes pink staining of polyvinyl chloride. // Applied Microbiology. 1975. Vol. 30. P. 807-810.

101. Gerber N. N. Minor prodiginine pigments from Actinomadura Madurae and ActinomaduraPelletieri//J. Heterocycl. Chem. 1973. Vol. 10. P. 925-929.

102. Wasserman H. H., Keith D. D., Rodgers G. C. The structure of metacycloprodigiosin. //Tetrahedron Letters. 1976. Vol. 32. P. 1855- 1861.

103. Gerber N. N., Lechevalier M. P. Prodiginine (Prodogiosin-like) pigments from Streptomyces and other aerobic Actinomycetes // Can. J. Microbiol. 1976. Vol. 22. P. 658-667.

104. Manderville R. A. Synthesis, proton- affinity and anti- cancer properties of the prodogiosin-group natural products // Curr. Med. Chem. -Anti-Cancer Agents. 2001. Vol. l.P. 195-218.

105. Collins M. D. Chemical Methods in Bacterial Systematics. Eds. Goodfellow M., Minnikin D. Academ. Press. London. 1985. P. 279.

106. Кузнецова T.A., Дмитренок A.C., Соболевская М.П., Шевченко JI.C., Михайлов В.В. Убихинон Q9 из морского изолята актинобактерии Nocardia sp. //Известия АН, серия химическая. 2002. № 10. С. 1798-1800.

107. Tomson R. Н. Naturally Occurring Quinones. Chapman and Hall. London- New York. 1987. P.732.

108. Соболевская М.П., Фотсо С., Хаваш У., Денисенко В.А., Хелмке Э., Прокофьева Н.Г., Кузнецова Т.А., Лаач X., Еляков Г.Б. Метаболиты морского изолята бактерии Streptomyces sp. 6167 // Химия природных соединений. 2004. № 3. С. 237-239.

109. Tang Y., Sattler I., Thiericke R., Grabley S. Feigrisolides А, В and D, new lactones with antibacterial activities from Streptomyces griseus II J. Antibiotics. 2000. Vol. 53. P. 934-943.

110. Haneda M., Nawata Y., Hayashi Т., Ando K. Tetranactin, a new miticidal antibiotic. Determination of dinactin, trinactin and tetranactin in their mixture by NMR spectroscopy // J. Antibiotics. 1974. Vol. 27. P.555-560.

111. Meyers E., Pansy F., Perlman D., Smith D., Weisenborn F. The invitro activity of nonactin and its homologs: monactin, dinactin and trinactin // J. Antibiotics. 1965. Vol. 18. P. 128-132.

112. Прокофьева Н.Г., Калиновская Н.И., Лукьянов П.А., Кузнецова Т.А. Мембранотропное действие циклических липопептидов, продуцируемых морским изолятом бактерии Bacillus pumilus II Биология моря. 1996. Vol. 22. №3. Р. 179-183.

113. Imada С. Enzyme inhibitors and other bioactive compounds from marine actinomycetes // Antonie van Leeuwenhoek. 2005. Vol. 87. P. 59-63.

114. Niwa Т., Tsuruoka Т., Goi H., Kodama Y., Itoh J., Inouye S., Yamada Y., Niida Т., Noba M., Ogawa Y. Novel glycosidase inhibitors, nojirimycin В and D-mannonic-<5-lactam. //J. Antibiotics. 1984. Vol. 38. P. 1579-1582.

115. Werner G., Hagenmaier H. Bafilomycins, a new group of macrolide antibiotics // J. Antibiotics. 1984. Vol. 37. P. 110-117.

116. Werner G., Hagenmaier H., Albert K., Kolshorn H. The structure of bafilomycins, a new group of macrolide antibiotics // Tetrahedron Letters. 1983. Vol. 24. P. 5193-5196.

117. Kondo K., Nishi J., Ishibashi M., Kobayashi J. Two new tryptophan-derived alkaloids from the okinawan marine sponge Aplysina sp. // J. Nat. Prod. 1994. Vol. 57. №7. P. 1008-1011.

118. Gauthier M. J., Flatau G.N. Antibacterial activity of marine violet-pigmented Alteromonas with special reference to the production of brominated compounds // Can. J. Microbiol. 1976. Vol. 22. P. 1612-1619.