Определения аминосоединений: реакции дериватизации хлординитрозамещенными бензофуразана и их N - оксидами тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ

ст. с-.

с: На правах рук.кшсл

©

ВВШ1ЬЬ£ ^КГчДИЛ ИИЛПОВЛЧ

ОПРЕДЕЛЕНИЯ Л М И НО С ОЕ Д И1ШН И й : РЕАКЦИИ ДЕРИВЛТИЗАЦИИ ХЛОРДИНИТРОЗАМЕ-ШгММЫЛШ БЕНЗОФУРАЗАНА И ИХ

02.00.02—аналитическая химия

АВТОРЕФЕРЛ Г дпссептпшш ¡¡а сонотолпе ученой степени доктора химических наук

Москва 1997

Работа выполнена па кафедре аналитической химии Казан' ского государственного технологического университета.

Официальные оппоненты: доктор химических наук,

профессор Кузнецов В. В.,

доктор химических наук, старший научный сотрудник Островская В. М.,

доктор химических наук, доцент Шеховцова Т. Н.

Ведущая организация: Государственный Научный Центр

РФ „НИОПИК" (г. Москва)

Защита состоится 26 июня 1997 г. в 16 часов 10 минут, в ауд. 337 на заседании диссертационного совета Д 053.05.60 по химическим наукац при Московском государственном университете им. М. В. Ломоносова по адресу:

119899, ГСП-3, Москва, 8-334, Воробьевы горы, МГУ, химический факультет.

С диссертацией иокно ознакомиться в библиотеке химического факультета МГУ им. М. В. Ломоносова

Автореферат разослан , 12. . мая 1997 г.

Отзывы и замечания просьба отправлять по адресу: 119899, Москва, ГСП-3, Воробьевы горы, МГУ, Химический факультет, кафедра аналитической хмыип, ученому секретарю диссертационного совета.

Ученый секретарь ¿¿Ул*'

диссертационного совета, т^г

кавдидат химических паук ¿/ Торочешнвкова И. И.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Соединения, содержащие аминиые функционал этые группы, представляют собой важнейшие классы органических веществ, широко распространены а живом природе и находят разностороннее применение в химической технологии, медицине, технике. Многие из аминосоедннений являются оысокотоксичными и их содержание требует контроля как в технологических смесях, так и в промышленных экосистемах.

Ряд факторов объективно усложняют аналитические процедуры разделения и определения лминосоедннений с различных объектах. К ним можно отнести высЛую полярность молекул, что приводит ;< ухудшению элюационных, экстракционных характеристик определяемых веществ. Сильная изменчивость свойств аминосоединенпй и 1ав;1сн.\!0ст:1 от ечепена замещения аминогруппы также затрудняет использование традиционных методов органического аиализа. Кроме того, большая часть аминосоедннений как биогенного, так и экзогенного происхождения имеет неудовлетворительные аналитические характеристики нз-за слабо выраженных хромофорных, электрофорных или флуорофорных свойств. В связи с этим при аналитических определениях этих веществ реакция лериватизации становится необходимой, а а некоторых случаях безальтернативной стадией пробоподготовки образца к анализу. Недостатком используемых для этих целей реагентов является невозможность получения производных Ы-замешенных, малоосновных аминосоедннений, низкая селективность в присутствии других классов органических веществ (например, фенолов), а также неизбирательность отклика аналитического сигнала на присутствие в анализируемом образце аминосоедннений различных классов. Эти факторы ограничивают возможности, а при анализе матриц сложного состава зачастую делают невозможным использование в органическом анализе таких систем, как проточно-инжекцнонный анализ, тест-методы

В то же время потребность в использовании экономичных и производительных аналитических методов для определении аминосоединенпй в технологических средах, промышленных экосистемах вызывает необходимость изыскания таких реакций дериватизаини, которые обеспечивают избирательность и чувствительность детектирования аналнта.

Целыо работы является изучение возможностей применения хлординитрозамещенных бенз-2,1,3-оксадиазола и их М-оксидов для избирательного и чувствительного определения аминосоедннений а проточно-инжекционном, спекгрофотометрическом и хроматографических методах анализа, тест-методами,

установление общих закономерностей влияния среды, химической природы модифицирующего реагента и аминосоединения на аналитические свойства образующихся производных дннитрозамещенных бенз-2,1,3-оксадиазола, обоснование условий проведения реакций дериватнзацни определяемы веществ.

В рамках поставленной цели необходимо было решить следующие задачи;

- изучить спектральные, про толптические, электрохимические свойства производных аминосоединении различных классов угановить сослав продуктов аналитических реакций,

- установить связь между аналитическими характеристиками производных аминосоединеннн и составом используемых растворителе», изучить влияние компонентов анишзируемой матрицы на регистрируемый сигнал при проведении определений в равновесных и неравновесных условиях;

-выявить условия использования и хранения рабочих растворов релгеитов при аналитических определениях;

- изучить реакционную способность реагентов как фактора, обеспечивающего чувствительность и избирательность детектирования аминосоединешш;

- обосновать принципы повышения избирательности и чувствительности определения аминосоединеннн в виде их производных в равновесных и неравновесных условиях;

- изучить возможности применения реакций дериватнзации аминосоединешш в спектрофотометрическом, хроматографическом, проточно-инжекцнонном анализе, тест-методах;

- выявить возможности применения реакций дериватизации для изучения генетически детерминированных процессов биотрансформацин аминосодержащих лекарственных веществ в организме человека.

Работа выполнена в рамках планов Государственной стандартизации (N 1SS от 21.03.S0 N 11-35-46, АН СССР, код 2.9.2.1, N гос. регистрации 80022487 от 23.03.80). ИТП Гособразования СССР "Создание новых высокоэффективных методов и приборов анализа веществ и материалов" (задание 9. IS), НТП Гособразования СССР "Тонкий органический синтез" (задание 5.7), РНТП "Экологически безопзеные процессы химии и химической технологии" (тема 109), программы "Новые высокоэффективные методы анализа веществ и материалов" РНТП "Университеты России" (1992-1995 гг.). заказ-нарядам 53-34 (19S9-1994 гг ) Госкомитета по высшей школе РФ, Фонда ISTC (Grant No 498, 1997 г.).

Шучнял новизна:

Для химической модификации определяемых алкил- и ариламннов, гетероароматических аминов, гидразинов и лщразидов кислот впервые предложены хлордишпрозамещешше бе>в-2,1,3-оксадиазола и их N-оксиды;

- систематическое исследование реакций дериватизацни позволило выявить характер влияния степени замещения аминогруппы и заместителей в модифицируемом соединении на спектральные Н'протолитические свойства производных аминосоедпнений;

- комплексом физико-химических методов изучены спектральные, кислотно-основные и другие характеристики синтетически выделенных динитробензофуразановых и днннтробензофуроксановых производных аминосоединсний различных классов, установлен их состав, определены количественные характеристики спектральных и протолитических свойств пронзпрдных;

- в результате систематического изучения влияния состава среды на аналитические свойства производных (NH- и ОН-кислот) показано, что равновесные процессы ионизации ионогеы и последующего разъединения ионных пар до свободных ионоз приводят к непостоянству их спектральных характеристик в неводных средах и появлению артефактов при элюировашш в условиях нормально-фазной ВЭЖХ. Количественно охарактеризованы константы равновесии ионизации и диссоциации соединений;

на основе исследования влияния свойств растворителя, компонентов апалн шрчемыч сред мл спектральные (УФ-, видимая и инфракрасные области), •).)"к 1 рочпмические свойства производных сформулированы критерии достня&ния и \Гп1|г.че."л.чосги н чувствительности лстеетнропаннн аналитическою сигнала и равновесных 11 ПСрЛШкППЛ'ИЫХ услпппяч,

- н результат« изучения кинеыки реакции •!-:а1»р-5,7-дш>итробе!гаофураза1!а н 7-хлор-Л.б-дими I р.>'Я-1> з^фуроксина с рядом амнпосоедтгеш'н в средах разного состава показана иозмолдшси. использования приема ч-ипетичоской "дискриминации" для лостп/Кенмя 1помраг1.м1,!1Г»гтн детектирования определяемых нетест в в смесях сложного состава, обосиокины условия кснолмованнч реагентов при аналитических определениях, выр<10о1апь: кртерин их выбора лля лериватиззшш амнносоединенни различных классом;

- показана возможность использования реакций лериоатн ¡ацпи ¡¡ял разработки гесг-■ •етп.пон. прп! од'пл" ,г"ч лппяпелемия токсичных соединений в водной и воздушных средах,

- озктгскп ягоможиояь 1'сп«.чм«р*ии* реакций деркяатояашш аминосодержащнх лекарственных веществ для изучения фсноипшчссклч лсойенносгеД бгтотр'нсформациц ксенобиотиков в организме человека.

Практическая значимость работы. На основании результатов систематического изучения реакций дериватизации аминосоединенин хлордишггрозамещеннымн бенз-2,1,3-оксадиазола и их К'-оксидами в смешанных растворителях сформулированы основные-закономерности проведения аналитических определений с учетом состава растворителя, компонентов англизируемой матрицы, реакционной способности реагента, природы определяемого вещества.

Выянленм основные факторы, предеяягашге избирательность и чувствительность детектирования аналитов в виде пронзв тных к равновесных и неравновесных условия.-;

Предложены методики избирательного и чуйгвительното спектрофотометрнческого, чроматографического и нроючно-ннжекцнонного определения аминосоедпнений в промышленных и модельных смесях, сточных водах, биологических субстратах, содержащих близкие по химической природе и свойствам компоненты. Разработаны тест-методы лля избирательного и чувствительного детектирования токсичных аминосоедннений в воздушной и водной средах.

Разработан метод определения генетически детерминированного процесса биотрансформацпи ксенобиотиков по типу ацетилирования в организме человека, пригодный для оптимизации безопасной дозировки лекарственных вешсств.

Па защиту иыносягсн:

- результаты изучения продуктов реакций деривапиаиин гидразинов, гидразидов кислот, алкнл- и ариламинов, гетероциклических аминов хлордммитрозамещеннымн бенч-2,1,3-оксадимола и их М-оксидами методами спектрального анализа и масс-спектромефии, диэлектрической спектроскопии, хроматографии, потенцнометрин, коидуктометрии,

вольтам перемести.

- обоснование роли растворителя, компонентов анализируемой матрицы а формировании аналитического сигнала при определениях аминосоедннсшш и и иле их про вводных в равновесных и неравновесных условиях;

- обоснование выбора условий избирательного и чувствительного детектирования амниосоедннешш в виде бензоксадиазольиых производных с учетом свойств определяемого вещестпа, состава реакционной среды, электрофнльных свойств используемого реагента,

- метод определения фенотипа бнотрансформацнн амнносодержащпх лекарственных веществ по типу ацетнлнрования и результаты его клинического использования;

методики спектрофотометричсского, хроматографического. проточно-ннжекшюиного определения гидразинов, гндразидов кислот, ацнл- и ллкиламниов, гетероциклических аминов в промышленных и модельных смесях, сточных подач и воздушной среде;

- тест-методы колористического, спектрофотометрического и хроматографического определения токсичных пмнносоединсннй в воздушных и водных средах.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены на VI Менделеевской дискуссии (Харьков, 1983), 3 Всесоюзном совещании "Комплексы с переносом заряда н ион-радикальные соли" (Черноголовка, 1984), 3 всесоюзном совещании "Проблемы сольватации и комплексообразования п неводных средах* (Иваново, 1984), конференциях по ЭМА (Томск, 19S5, Москва, 1994), ! Всесоюзной конференции "Химия и применение неводных растворов" (Иваново, 1986), Vtl Всесоюзном совещании "Применение вычислительной техники в химических исследованиях н спектроскопии молекул" (Рига, 1986), Всесоюзной конференции "Кислотно-основные равновесия и сольватация в неводных средах" (Харьков. 1987), семинаре "Экология п аналитическая химия" (Ленинград, 1991), VI Всесоюзной конференции по аналитической химии органических веществ (Москва, 1991), Всесоюзной конференции " Аналитическая химия объектов окружающей среды" (Сочи, 1991), семинарах "Технология ключевых соединений, используемых в синтезе биологически активных веществ" (Пенза, IS91), "Современные методы анализа промышленных материалов и природных объектов" (Санкт-Петербург, 1992), симпозиуме "Екологня-92" (Бургас, Болгария, 1992), XV Менделеевском съезде (Минск, 1993), симпозиуме по проточному анализу (Москва, 1994), H-1V Национальных конгрессах "Человек и лекарство' (Москва, 1995-97 гг.), 1 съезде Российского научного общества фармакологов (Волгоград, 1995), международных симпозиумах "Kinetic in Analytical Chemistry" (Москва, 1995), Chromatography and spectroscopy in Environmental analysis and toxicology" (Санкт-Петербург, 1996), "Neurochemistry and Pharmacology of Drug Addiction and Alcoholism" (Санкт-Петербург, 1996), Всероссийских конференциях "Экоаналитнка-9б" (Краснодар, 1996), "Мутагены и канцерогены окружающей среды. Проблемы антимутагенеза" (Казань, 1996), Казанском и Московском семинарах по аналитической химии (199), 1993), научном семинаре ЦХЛС-ВНИХФИ (Москва, 1990), научных семинарах кафедры аналитической химии МГУ им. М.В.Ломоносова (1992, 1996), научном семинаре КГТУ (1992), итоговых конференциях КГТУ(1982-1996).

Личный пклад автора в разработку проблемы выразился в обосновании и постановке исследований, разработке методик эксперимента и руководстве его проведением.

¡■ынолчснии экспериментальных исследовании и систематизации полученных данных.

Основные выводы и положении диссертации сформулированы автором.

Нч'.писшцш. Основное содержание-диссертации изложено в 115 работах в виде с га! ей. -leütcori докладол, вчюрсмос свидетельств и патентов РФ, Рекомендуемых Справочных Данных ГССД, миюдпческих указаний

Струю ура и о'п.ем .Tiiccepiiimiii Диссертационная работа состоит из введения, 5 глав. заключен»«, выводов и списка цитируемой литературы. Диссертация изложена на 239 с границах машинописно: о текста, онержит 60 рисунков. 34 таблицы м библиографию 419 наименований В ttpii.w.».em;»t к диссертации представлены акты использования методик аналитических определении амяносс-динений

гя»«я посвящена обзору работ по использованию приема дерииагнзаннн ана-¿м:ив как ?7феми»но1 и учучшения ¡¡к г!ид*?!«ч«ясих свойств при чх определениях

хроматографическими, оптическими и гсст-ме^лами, а нршачтгу-нчхгетшинной ¿изд.г??, сформулированы основные задачи исследования.

Главы со второй по пятую посвящены изложению и обсуждению полученных результатов. Но второй главе обсужден экспериментальный материал по изучению реакций хлор-динитрозамещенных бензофуразана и бензофуроксана с гидразином и его замещенными, гндразидами кислот, алкил-, а рил- и гетероароматическими аминами. Обсуждению влияние растворителя и компонентов среды на аналитические свойства бензофуразановых и бензо-фуроксановых производных аминосоединений посвящена глава-3. В 4 главе рассмотрена реакционная способность хлординитробензофуразанов и их N-оксидов, обсуждено влияние растворителя и компонентов реакикшн oft среды на кинетику реакций дериватизащш в рав-н: >сспых условиях и к системе прото* ю-инжекиионного анализа. Иозможности применения реакций дернватизашш аналптов для повышения чузсшггелыюсги к избирательности определений в спектрофотометричесхом, хроматографнческом, проточно-инжекциониом анализе, а также » тест-методах рассмотрены в главе 5. Здесь же обсуждены приложения этих реакций для изучения генетически детерминированных процессов биотрасформаци.. лекарственных ьещсстз.

РЕАКЦИИ ДИНИТРОЗАМЕЩЕННЫХ БЕНЗОФУРАЗАНА И ИХ N-ОКСИДОВ

С АМН И ОСОНДИ UFJIИ ЯМ И

В рамках- исследования впервые изучены в качестве реагентов дня дернватизашш

аминосоединений различных классов (алкил-, арнл- и гетере лроматические амины, гидразин и его замешенные, гидразнды кислот, аминокислоты) при их спектрофотометрических, хроматографических и проточно-инжекционных определениях 4-хлор-5,7-

динитробензофуразан (1>Ф!) , 7-хлор-4,б-диннтробензофуроксан

■ 0]Н' т

(Г)<1'0) ° А , а также их структурные аналоги 5-хлор-4,6-дш|итробензофуразан, 5,7-дихлор-4,6-дш1итробензоф)'роксап. Результаты, полученные и ходе исследования, сопоставлены с литературными « собственными экспериментальными данными по аналитическим свойствам производных основных классов дериватизирующнх реагентов (альдегидов, сульфохлоридов, ангидридов кислот, изоцнанатсв, диазотирующих соединении, моионитрохлорбензофуразаиа, дншггро- нтришпрохлорбензолов). Кроме того, в качестве потенциальных реагентов исследованы полинитролириднны, фуроксано- и фуразапопиридины. При изучении реакции дшштрозамещенных бензофуразака и бензофуроксана особое внимание уделено возможности дериватизацни соединений с разной степенью замещения нуклеофильнои аминогруппы, розличающихен по основности; выявлению зависимости аналитических свойств производных от природы используемых реагентов н определяемых веществ ; установлению факторов, влияющих на реакции дериватизацни анапитов и определяющих чувствительность и избирательность их аналитических определений.

Реакции гидразина и его замещенных. Взаимодействие гидразина и его солеи с БФЗ н БФО приводит к образованию окрашенных бис-производных с двумя кислотными ЫН-группами, однако при условии избытка нуклеофнла возможно образование монозамещенного продукта реакции.

А. Л

с1 к' n N n

НОз ^ РгМ

Из-за стадийности взаимодействия аналитическая реакция протекает во времени (за 15-20 мин). Бензофуразановое производное гидразина имеет высокую интенсивность поглощения (3,9.104 л/моль.см). Бещофуроксановые производные гидразина и его замещенных оказались неустойчивыми. По-видимому, это связано с повышенными окислительными свойствами гетероциклического фрагмента реагента из-за наличия в нем М-оксндного атома кислорода, которые приводят к внутримолекулярным редокс превращениям производных нуклеофнлов, в свою очередь обладающих восстановительными свойствами.

В определенных условиях для бензофуразанового производного гидразина в растворах наблюдаются радикальные изменения его спектральных свойств, не связанные с процессами распада растворенного вещества (рис.1). Они выражаются в уменьшении интенсивности* полосы поглощения с Хт=636 им, имеющей аналитическое значение, и появлении новой полосы поглощения с Х™= 520 нм по мере уменьшения концентрации растворенного вещества в полярных средах (ДМСО, спирты, дибутилфталат и др.) или при постоянном содержании производного в неводных растворителях по мере увеличения концентрации в них таких соединений различной природы, как вода, алииламины, уксусная кислота и др. Результаты хромато графического. электрохимического, масс-спектрального

исследования вещества показывают, что они связаны с процессом установления равновесия

между днуми формами существования вещества и носят полностью' обратимый характер, Э находи г подтверждение при изучении спектральных свойств производного пщрззниа в ходе проведения циклов разбавление • концентрирование, а также при исследовании влиянии содержания малополярных компонентов « бинарных срезах (кривые 4 и 5), Повышение доли СИСЬ в растворах производного ДМСО ведет к полному восстановлению спектральных характеристик растворенного вещестиа. Аналогичные зависимости фпксприогся в других бинарных смесях растворителей, содержат!« малополярные компонешы. Повышение кислотности среды также способствует сохранению свойств .•пн.чниводиоиои полосы поглощения, причем характер изменения спектров поглощения для соединения при этом противоположен по вызываемому эффекту влиянию pH на электронные снекгри ирои ¡водных ..ервичных ариламинов С'!КС\' является единственным растворителем с относительно высокими полярными свойствами, а котором спектральные w^'cr-n ""^"»«чм во ьсем ¡¡¡¡ггрзлдг солержаннй растворенного веществ?

Рис. 1. Спектры поглощения 4,4'-гидразобис-5,7-динитробензофуразана в ДМСО (1-3) и смеси ДМСО - СИСЬ (4,5) -при концентрациях (моль/л): 1 - 2,7.10'*; 2 -2,7.10"'; 3 - 2,7.10"*; 4,5-5,3.10'. Состав смеси ДМСО-СНСЬ {объема.): 4 - 64:36; 5 - 40:60; 1 = 0,2-1 см

Л, цл

В то же время в присутствии веществ с выраженными электроноакцепторними свойствами (пикриновая кислота, БФЗ, тидрокенпроизводное БФЗ) происходит необратимое смещение спектральных характеристик производного гидразина в сторону образования аналитической формы с л,„= 636 нм независимо от состава растворителя и компонентой среды Влияние этих соединений противоположно по вызываемому эффекту роли веществ с элсктронодокориыми свойствами (алкилашшы, гидразин к др.). Эти результаты указывают на проявление, нвряду с протолиткческнмн, донорно-акцепторных взаимодействий и растворах

Кроме изменения значений молярных коэффициентов поглощения аналитических форм производного гидразина по мере повышения концентрации происходит изменение дпольного момента растворенного вещества, а также его электрохимических свойств (рис.2, кривые 1 и 2). Фурье-ИК спектры производного в ДМСО и его смеси с тетрахлоридом углерода характеризуются сильными изменениями соотношений ннтенсивностей поглощения у^и/уиди см'1 (валентные ассимметричные колебания МОг-

~5Ö3 600 7С0

группы) и УдоУ^им (колебания -С=С-С=Ы- группы) по мере изменения содержания растворенного вещества или малополярной среды в бинарной смеси растворителей. При это" соотношение интенсивностсй для Уия/У)но возрастает при уменьшении концентрации и падает при увеличении доли СС1< и смеси. Для отношения интенсивностсй Уил/Ущм аналогичные зависимости имеют противоположную направленность.

1'ис.2. Зависимость диполыюго момента (р,отн.ед.,1), приведенного предельного тока (¡/с.10'\ мкЛл/моль, ЕГ;=-1.72 В, 2),

600

гоо

молярных коэффициентов поглощения при Х=520 (3) и 635 им (4) в ДМСО от концентрации 4,4'-гидразобис-5,7-

динитробензофуразана.

•¿¡¡¿щ/амЕРЗ

Экспериментальные данные указывают на существование в растворах производного гидразина подвижного равновесия между двумя формами вещества. По-видимому, роль компонентов среды для рассматриваемого равновесия заключается во влиянии на степень сопряжения в молекуле бис-производного за счет изменения электронной проводимости межъядерных аминогрупп, которая определяется ря-ря-отталкиванием НЭП атомов азота.

Свойство бис-производного пиразина сохранять неизменными свои спектральные характеристики (\„,=636 им) в присутствии избытка реагента или его шдролизованной формы использовано для избирательных и чувствительных определений аналита со спектрофотометричсским детектированием в различных методах анализа.

Рассматриваемый пример влияния состава реакционной среды на свойства соединения является частным случаем проявления роли сольватационньтх эффектов на аналитические характеристики бензофуроксановых (бензофуразановых ) производных амнносоединешш. Этот фактор определил необходимость систематического изучения роли среды для производных амнносоединений различных классов.

Для замещенных пиразина (фенилгндразнн, К'.М-днфенил гидразин и др.), гидразидов кислот образование бне-пронзводных не фиксируется и подобные спектральные равновесия не наблюдаются. В отличие от гидразина, взаимодействие БФЗ с ними приводит к образованию окрашенных производных практически при сливании растворов реагирующих веществ. Предпочтительными средами для проведения реакций дериватизацин являются спирты и их водные смеси. В отдельных случаях, например при дериватизацин гидразидов изоиикстииовой н других кислот, из-за ограниченной растворимости производных в водно-спиртовых средах использованы водно-диметилсульфоксидные смеси. Образование окрашенных производных, пригодных для проведения избирательных спектрофотометрических определений, ■ протекает при взаимодействии БФЗ с

семикарбазидом, фенилпшразонами. Продуюы аналитических реакций характеризуются высокой интенсивностью поглощения в области 510-550 им, коэффициенты молярного поглощения достигают 2,7. !04 л/моль см. Это является предпосылкой чувствнтел1?юго деи'ктированпя анализов в виде их производных.

Усыновлено, что реакции образован»! производных протекают даже в сияьиокислых средах Оптимальные условия проведения определений реализуются при рН 5,5-7,2.

Реакции с алкнл-, арпламннами с различной степенью замещения аминогруппы. Реакции лериватизашш, приводящие к введению поляризующих заместителей и карбоциклнческое кольцо реагента с сильно выраженным хннондным характером, мшуо приводить к изменению поляризации молекулярного диполя, влияя тем самым как на положение полос поглощения, так ч их интенсивность. Это проявляется в электронных спектрах производных соединений с первичными, вторичными и третичным» нуклеофильиыми аминогруппами (рпс.З).

Рис 3 Спектры поглощения 5,7-динитробензофуразановых (1-3,5-8) и 4,6-дшштробензофуроксановых (4) производных: I - метиламина; 2 - а-амино-р-индолилпропановой кислоты (триптофан); 3,4 - анилина; 5 - индола; 6 - N,N,-диметиланилнна; 7 - 2,3-диметилнндола; 8 - 2,2,4-триметил-1,2-дигидрохшкшша, 8 -4-хлор5,7-д1житробензофуразан, 9 - 7-хлор---,6-динитробекзофуроксан в ацетонитриле, L = 1 см.

Для производных как ал кил-, так и арияамииов характерна зависимость максимумов полос поглощения от степени замещения аминогруппы.Для производных анилина и N,N-днметнланилина величина Д>.,„ достигает 180 нм. При наличии в аминосоедикеини

электронодонор.ных заместителей для производных характерен батохромный сдвиг в то время как элекгроьоакцепторные заместители приводят, как это видно на примере нндола и

его замещенных, к гнпеохромному сдвигу Х,„. Аналогичные зависимости наблюдаются и для непредельных алифатических аминосоедннеиий.

Образующиеся в результате реакции производные имеют высокую интенсивность полос поглощения (значения е для большинства из них составляют 1,7 - 3,9.104 л/моль.см). Это позволяет проводить чувствительные определения веществ. Характерная для производных соединений с различной степенью замещения аминогруппы зависимость спектральных свойств (спектральная селективность) положена в основу избирательного детектирования аналитов спектрофотометрппеским методом и в системе ПИЛ.

Несмотря на высокую контрастность спектров поглощения беизофуразаковых производных первичных алкил- и ариламинов, определения этих веществ осложнены наложением полосы поглощения гидроксипроизводного реагента. В связи с этим для дериватизацин соединений с первичной аминогруппой предпочтительнее использование БФО (кривые 3 и 4).

Длинноволновые полосы поглощения производных имеют сложную природу. Так, для 4-(4'-1штроанпл1шо)-5,7-дннитробензофуразана после Гауссового разложения длинноволновой полосы обнаруживается 5 индивидуальных полос, которые можно отнести к о- и п-составляющим внутримолекулярного переноса заряда от донора к акцеп тору. Это определяет сложный характер влияния природы растворителя на аналитические свойства изученных производных

Результаты исследования производных свыше 60 первичных аминосоедннеиий (элементный анализ, ИК- и масс-спектрометрия, потенцнометрия, кондуктометрия) указывают на то, что они являются продуктами взаимодействия со связью углерод-азот. Электроноакцепторные нитро- м фуразановые (фуроксановые) группы определяют высокую NH-кислотность производных. Гидролизованпые формы реагентов проявляют ОН-кислотность. Для изученных соединений наблюдается зависимость кислотности производных от положения акцепторных заместителей в реагенте и поляризующего действия заместителей в нукпеофиле. Так, зависимость рК, от о-констант заместителей в арнламине для 4-(Я-феш1ламино)-5,7-динитробешофуразанов записывается как рК. = 2,64а + 5,48 (г = 0,9S2,n-13) вДМФА и рК, = 2,46а -t 1,3 (г = 0,987, п= 13) в ДМСО. Более высокие значения констант реакции р по сравнению с замещенными фенолов (р = 2,01), бензойных кислот (р =1,00) свидетельствуют о сильном изменении электронной плотности в реакционном центре (межъядерном атоме азота) при диссоциации соединений. Это определяет повышенную чувствительность аналитических свойств растворенных веществ к природе растворителя.

На примере реакций БФЗ и БФО с индолом и его замещенными (триптофан, 2,3-димегпиншдол др.) показано, что взаимодействие соединений со вторичными аминогруппами приводит к образованию продуктов со связью углерод-азот. При взаимодействии БФЗ с триптофаном, имеющем первичную аминокислотную и вторичную аминогруппы, образуслся продукт со связью углерод-азот с участием аминогруппы гетероциклического кольца нуклеофила. Это, по-видимому, связано с цвиттер-ионной природой реагирующего соединения, которая приводит к уменьшению нуклеофильных 'войств первичной аминогруппы.

Реакции ПФЗ и БФО с ариламинами, содержащими третичные аминогруппы, в случае обраюнання продуктов со связью углерпд-азот должны приводить к появлению четвертичных аммониевых солей. На примере Ы^-диметиланилина показано, что эти продукты рсакиии не являются солями (не содержат хлорид-ионы). Их состав отвечает лро-ишо.шч.чу со свячью утдерод-углерод. 'ïtot результат согласуется с литературными данными об амбидентных свойствах аминосоединенпй в реакциях с соединениями с высокой ■ысктрофнльностыо, которые вызывают образование устойчивых производных со спя )ыо углерод-углерод.

Установлено, что оптимальными условиями при проведении реакций дериватизащш амнносоединений являются слабокислые и нейтральные среды (pli 5,5 - 7,4).

ВЛИЯНИЕ ПРИРОДЫ РАСТВОРИТЕЛЯ И КОМПОНЕНТОВ СРЕДЬ!

НА АНАЛИТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА БЕНЗОФУРАЗАНОВЫХ И

БЕНЗОФУРОКСАНОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ

В отличие от производных аммиака, алкиламинов, для которых характерно незначительное влияние природы используемого растворителя на аналитические свойства (?.т, е) растворенного вещества, в случае дннитробензофуразановых и диннтробензофуроксановых производных ароматических аминов наблюдаете* разнообразное проявление роли растворителя на детектируемый аналитический сигнал. Так, при постоянных концентрациях для производных ариламинов фиксируется характерная зависимость положения максимумов длинноволновых полос поглощения от основности ((3) используемого апротонного растворителя. Величина ДХ*, в ряду бензол - ДМСО достигает 60 нм В то же время в амфипротонных средах (спирты, вода, смешанные растворители) эта зависимость практически исчезает, значения и fi производных в этих средах меняются незначительно. Эти данные указывают на сольватацию растворенных веществ, проявляющих NH-кислотиость , с участием кислотных аминогрупп. В протонных средах наряду с этим процессом происходит сольватация с участием ацн-форм нитрогрунп карбоциклического кольца. Антибатиый характер влияния указанных процессов на спектральные свойства приводит к постоянству аналитических свойств производных и амфипротонных средах. В свою очередь для гидрокенпроизводных бензофуразаноц (гндролизованных форм реагентов) при постоянной концентрации ионогена наблюдается удовлетворительная корреляция X«, (vm) с сольватохромным параметром полярности (поляризуемости) среды я*. Для полосы поглощения Шд°'д 4-гидрокси-5,7-динитробензофуразана, например, уравнение регрессии записывается как'у„» 27033 - 4534Я* (Г » 0,989) и введение и корреляцию параметра () при многофакторном корреляционном анализе не приводит к улучшение значения г. Это свидетельствует о сохранении внутримолекулярной водородной связи в соединении в средах разного состава. Отличия в ' поведении ОН- и NH-производных, очевид! , обусловлены более высокой электроотрицательностыо атома кислорода в реашиог том центре для первых.

На потенциальное влияние растворителя на аналитический сигнал указывают и зависимости Стоксовских радиусов (г,) анионов соответствующих производных, а также

значений la Iw от обратной величины диэлектрической проницаемости (1/е) используемых растворителей. Для первых из них характерна чрезвычайно высокая чувствительность г," к природе растворителя по сравнению с иесольоатирусмыми или малосольватнруемыми нонами. Для зависимостей lg K>íc - 1/е; в свою очередь, наблюдаются многочисленные отклонения от линейности, свидетельствующие о проявлении аффектов специфической сольватации изученных производных."

Для производных первичных ариламинов и гидролизовапиых форм реагентов непостоянство спектральных свойств по мере изменения их концентрации в протонных и апротонных средах связано с проявлением равновесных процессов ионизации растворенного вещества и последовательного разъединения ионных пар до сольватированных ионов

(нх). о (н'х"). о (н1!х), <=> н\ + х\

- В таких растворителях, как галогенуглеводороды, алкаиы, в интервале содержании 10"! - 10'2 моль/л наблюдается постоянство значений экстинции для растворенного вещества (рис. 4, А). Указанны- растворители из-за отсутствия донорных гвонств (ДК) не способны ионизировать растворенное соединение и око находится в растворе в молекулярной форме. Такие же спектральные характеристики ионогенов наблюдаются в шпрометане, имеющем достаточно высокое значение диэлектрической проницаемости (е), но не обладающем донорными свойствами. Батохромный сдвиг полосы поглощения при введении в раствор алкиламина связан с образованием ионных пар (криаая 9).

Рис.4. Спектры поглощения 4-гидрокси-5,7-дишгтробензофураэана (1-5,8,9) и его калиевой соли (6,7) в хлороформе (А), 1,4-диоксане (Б), смеси 1,4-диоксан-вода (82:18, объемных, Б; кривая 8), метаноле (В) и ацетонитриле (Г) при концентрациях (моль/л): 1 - 10'5; 2 - 2,4.10'5; 3 - К»"4; 4 -10'3; 5 - 10°; б - 10'1; 7 - Ю'3 в присутствии дибснзо-18-краун-6; 8 - 10"2; 9 - 10'3 в присутствии тригексиламина.

210 На ио ш ^

В свою очередь в 1,4-диоксане (рие.4. Б), обладающем' достаточно высокими донорнь ми свойствами, наблюдается концентрационная зависимость спектров поглощения, связанная с равновесием между молекулярной формой ионогена и ионными парами. Однако из-за низкого значения е растворителя диссоциация ионных пар не происходит. В водно-

дноксановон смеси наблюдается батохромное смещение полосы поглощения ионогена и в

растворе фиксируется наличие ионов.

В метаноле, имеющем меньшее, чем у ннтрометана, значение е при высоком'ДМ, наблюдается ионизация растворенного вещества и последующая диссоциация ионных пар ил сольпатиронанные номы Процесс днссошгацни, однако, происходит неполностью и в растворе наблюдается равновесие между различными формами существования вещества." Постоянстьо спектров поглощения ионогена и его калиевой соли, а так-же раствора соли в присутствии краун-эфира (кривые б и 7) во всем интервале их содержаний указывает па тождественность спекфальиых характеристик ионных пар и еольватирсваиного нона.

В аиетопифнле при более высоком, чем у метанола значении к, но менее выраженных донорних свойствах снова наблюдаются концентрационные зависимости спектров поглощения, свидетельству-тшие о проявлении равновесных процессов ионизации попоена и ."»гсоииации ионных пар. Об этом же свидетельствуют результаты расчета ранга .матриц свеюн01 лощегнт гичрокса- я ямннопроизводных бензофуразаиов (тзбл.1). Ранг матрицы соответствует числу шг№? поглощающих тзетни и указшзет нч равновесное существование молекулярной формы ионогена, ионных нар и со.тьвятириьашшх попов в растворе. Спектральные равновесия, наблюдаемые для изученных веществ, определяются, таким образом, совокупностью ионизирующих (ДЫ) и диссоциирующих (с) свойств растворителя.

Таблица 1

Число поглощающих компонентов в растворах ОН- и N5 {-кислот по результатам расчета ранга матрицы светопоглощения

Соединение

1'астворнтель 4-Гидрокси-5,7- 4-Гидроксн-5- 4,6-Дигпдрокси- 4-(4'-Иитро-

дннитробензо- нитробензофу- шггро- фенпламино)-

фуразан разаи беизофуразан 5,7-

динитробензофу-

раэан

Диоксан 2 2 2 2

Ацетоннтрнл 3 3 3 3

Ацеггон 3 - - 3

Метанол 3 3 3 -

ДМФД } 2 2 2

дмсо 1 2 2 2

Подобные равновесия в растворах зафиксированы для амннопроизводных шгтропиридинов, фуразаношфидинов и фуроксанопиридиков, изученных в качестве потенциальных реагентов для деркватшацни аминосо единений. Следует отметкгь, что эти

ионные равновесия носят полностью обратимый характер, что подтверждается проведением циклов разбавление - концентрирование иоиогенов.

Для ряда соединений на основании спектрофото.четрнческих и электрохимических намерений (кондуктометр!«, потсицномстрня) определены значения кажущихся констант равновесий ионизации н диссоциации. Результаты расчета показывают, что величины кажущихся констант диссоциации, определенных из спектрофогометрических и каидукто,\,стричесхих измерений, различаются па несколько порядков при боле: ншкнх численных значениях для последних. Это связано с тем, что спектрофо «»метрический меюд, не различая свободные ноны и ионные пары, фиксирует их сумму, в то время как и кондуктомстрнн детектируются только свободные ионы. Результаты определения K1W1„ рассчитанных безиндикаториьш методом и с использованием индикаторного способа по Кольтгофу, коррелируют в соответствии с уравнением

№„» = -0,58 + 0,35lgK1M,,",M (г = 0,9S5), указывая иа одинаковую природу описываемых равновесий. В целом численные значения Киои и Км«. характеризуя степень протекания равновесных ппоцессов, определяются N11-(ОН)-кислотностью соединений, величинами е и ДЫ использованных растворителей. Так, значения Киоц для 4-гндроксн-5,7-дтштробензофуразана, 2,4,6-трнннтрофснола, 4,6-дигидроксн-7-интробешофуразана и 5-анилино-4,6-дннитробетофуразана в метаноле равны, соответственно, 7,6; 2,1; 1.9 н 0,42.

Наблюдаемые равновесия вследствие влияния на спектральные характеристики веществ могут вызывать ошибки при спектрофото.четрнческих определениях аминосоединений в не водных средах, а также проявляются в виде артефактов в нормально-фазном (НФ) варналте ВЭЖХ. Последние фиксируются в виде двух хро.матографических пиков при элюировашш химически чистых производных типичными для НФ-ВЭЖХ системами элюентов. Так, для 4-гидроксн-5,7-дшштробешофуразана при элюировашш смесью CHjCIj - МеОИ переменного состава наблюдается линейная зависимость интенсивности пика, соответствующего ионам (V, - 650 мкл), от содержания полярного компонента в элюеите. В свою очередь концентрационный профиль, соответствующий ионным парам (Vr = 550 мкл), антибатен по интенсивности содержанию метанола. В чистом метиленхлориде фиксируется только один пик (V, - 2080 мкл), соответствующий, по-видимому, молекулярной форме ионогена. Отнесение хроматографнчеекпх пиков проведено с использованием калиевых солей ионогенов, к которых» дня смещения равновесных процессов добавляли махроцикдические лигапды. Указанные равновесные процессы устанавливаются достаточно медленно и соотношение различных форм ионогена в значительной степени определяется природой используемых дпя приготовления рабочих растворов растворителей. В обращенно-фазном (ОФ) варианте ВЭЖХ, в котором используются растворители с высокой ионизирующей и диссоциирующей способностью, такие равновесные процессы не влияют на параметры элюировашш производных и результаты их спектрофотометрического детектирования.

Электргчюакценторный характер гетероциклических фрагментов используемых для дериватизацин реагентов, высокая поляризуемость связи C=N- приводит в ряде случаев к неожиданным эффектам при аналитических определениях аминосоединений в виде их производим* в матрицах сложного состава. Например, при определениях ряда

лекарственных веществ и депротешшзнрованных биосубстратах человека (моча, крии„, эикулит, слюна) ¡1 виде 5,7-дннитробепзофуразаиовых производных при физиологических уровнях значений рН в спектрах поглощения фиксируется чрезвычайно интенсивное поглощение в области 400-700 им и спектрофо-хшетрические определения становятся невозможными. В то же время специальные исследования показали, что потенциально ишерфсрирующне компоненты этих биосубстратов (мочевина, мочевая кислота, креатин, креатинин, уробилин и др.) не образуют производных с реагентом, поглощающих в указанной области спектра, либо их содержание в анализируемой матрице столь мало, что они не могут быть ответственными за столь интенсивное поглощение раствора. При изменении пробоподготовки аналишруемых сред, которое заключается в предварительном нодкисленни раствора трихлоруксусной кислотой, после чего проводится реакция дериватизации определяемых веществ и рН субстрата возвращается до исходного, физиологического значения, приводит к полному исчезновению мешающего влияния биогенных компонентов образца при спею рофато.метрическом определении. Наблюдаемые спектральные зависимости, по-видимому, связаны с эффектом кооперативных взаимодействий биогенных компонентов биосубстрата с реагентом, который устраняется в кислой среде за счет солеобразования гетероциклических азотистых оснований. В ОФ-ВЭЖХ проявление указанного эффекта, напротив, оказалось удобным при проведении рутинных определений лекарственных веществ и их метаболитов в биосубстратах, поскольку при этом происходит упрощение хроматограмм. В то же время дериватизашп аналитов бензофуразанами позволяет повысить пределы их обнаружения по сравнению с детектированием по «бензольной» полосе.

В целом результаты изучения влияния природы используемых растворителей, компонентов анализируемых сред на детектируемый сигнал указывают на определяющую роль этого фактора при повышении изгнрателыгасти и чувствительности определений аминосоединений.

РЕАКЦИОННАЯ СПОСОБНОСТЬ ДИНИТРОЗАМЕЩЕННЫХ БЕНЗОФУР АЗАНА

И ИХ К'-ОКСИДОВ

Для выработки критериев выбора реагентов при определениях аминосоединений различных классов и оптимизации условий их проведения изучена кинетика реакций 4-хлор-5,7-динитробензофуразана и 7-хлор-4,6-днннтробензофуроксана с рядом ароматических, гетероароматических аминов, пиразином и водой.

Результаты кинетических исследований свидетельствуют о высокой реакционной способности БФО и БФЗ. Так, константы скорости реакции тих электрофилов с анилином в бензоле равны, соответственно, 138 и 39,3 л/моль см, превосходя аналогичные значения констант скорости для 2,4,6-тринитрохлорбенэолаи 2,6-динитрохлорбензола на три и пять порядков. БФО за счет влияния К-о:.сидного кислорода имеет более высокую реакционную способность по сравнению с БФЗ в реакциях с веществами, имеющими первичные и вторичные аминогруппы Однако в реакциях с соединениями, содержащими заместители и положения 2 к аминогруппе (например, 2,2>4-триметнл-1,2-днгилрохинолмноч) или с такими арил&мкнами, как дифеннл- и трифениламнн, происходи г обращение реакционной

способности БФО относительно БФ1. Этот эффект, по-видимому, обусловлен стерическнми затруднениями из-за влияния Ы-оксидного кислорода гетероциклического кольца и использован для избирательных аналитических определении компонентов смессй, содержащих соединения с различной степенью замещения аминогруппы.

Влияние м- и п-заместителей в ароматическом кольце нуклеофнла <-Н, -СНз, -ОН, -Вг, -С1, -КО?) на константы скорости взаимодействия с БФЗ >■ БФО описывается корреляционными уравнениями с использованием обычных о-конетант

к = (1,78 ± 0.09) - {3,4 ± 0,3) о, (п = 8, г = 0,985, БФЗ) и

к = <2.38 -1-0,07) - <3.3 ± О.З)о« (п=3,г = 0,984, БФО).

Величины констант реакции <р) для БФО и БФЗ, как видно, значительно ниже аналогичных значении р для реакций первичных и вторичных арнламинов с бензоил-, пнкрнягагогенидами, галоид-2,6-динктро бензолами <4-5 сд ), что свидетельствует об изменение чувствительности к слиянию заместителей в ядре нуклеофнла по «ере возрастания эдектрофильносги реагентов.

В целом результаты изучения юшегики реакций БФО н БФЗ с аминососдннениймй указывают па возможность дериватнзашш даже таких малоосновных нуклеофнлов, как трифениламнн, а также служат предпосылкой для использования приема кинетически «дискриминированных» реакций дериватизации в соответствия с основностью определяемых иещесто и за счет вариации электрофильиымн свойствами используемых реаге»ггов. •

Учитывая высокую реакционную способность, проявляемую БФО и БФЗ при взаимодействии с амнносоединениями, была также шучеиа их устойчивость к потеициалыюму воздействию химических процессов, являющихся конкурентными по отношению к основной реакции (гидролитические и редокс превращения). Оказалось, что в спиртах, ДМСО, ДМФА и других полярных неводных растворителях даже после их обезвоживания реагенты быстро претерпевают гидролитические превращения с образованием пщрошшрошводных за счет взаимодействия с остаточными количествами воды. Так, константа скорости псевдоперэого порядка гидролиза БФЗ в метанол-водной смеси (98:2, объемных) составляет 3,7.10 мин"' в полная инактивация реагента происходит за 1 час. Аналогичные результаты получены для М-оксидов бензофуразана. В то же время реакции гидролитического превращения бешофур азанов и бснзофуроксаноо в ацетоннтрил-водных смесях протекают не до конца и устанавливается равновесное соотношение гндролкзованной и непщролнзованной форм реагента. При этом гидролитический процесс в данной систем» растворителей носигг аномальный характер, поскольку константы скорости псевдопервого порядка (7.10"4 мшГ1 для смеси СНЬСГ^НгО для соотношений их объемов от 98:2 до 99,8:0,2) не зависят от содержания нуклеофнла в реакционной среде. Подобное поведение реагентов, по-видимому, связано с процессами избирательной сольватации компонентов реакционной смеси микрогетсрогенными фазами различной природы, которая характерна для смесей ацетошгтрил-вода согласно литературным данным. Это свойство ацетошприла позволило оптимизировать процедуры приготовления, ^ранения рабочих растворов реакционноспособных реагентов при их использовании для определений в спехтрофотометрпческом, хроматографическом и проточно-инжекцкониом методах. В ходе

аналитических определений амикосоеди нений: к »згяззшшх. средах конкурентные реакции

гидролитических превращений реагентов практически не влияли на степень завершения основной реакции за счет оптимизации условий; их проведения, а также использоьяния рл кзичий внуклеофильнмх свойствах аналитеа а растворителя.

Компоненты реакционных сред, обладающих редокс свойствами, могут также приводить к инактивации свойств, реагентов. Так, при определениях соединений я смесях, содержащих компоненты с восстановительными свойствами, оказалось необходимым проведение предварительных реакций лсриваниацин для устранения мешающего влияния последних. Выбор резгенток для определений амшшсоединешш проводился и с учетом редоке свойств аналлтов. Для- дернватнзацш* соединений, содержащих гидразиновые фрагмент!.), можно использовать только бензоф>разан, так как соответствующие беизофуроксаиовые производные ан шитов неустойчивы из-зп внутримолекулярных релокс превращений, связанных с наличием;в.реагенте №окси»шага кислорода.

ftauejiue up'ijo.Tsf ряеьворалещ tr стмвлиеииш. реакшгенгкяй ереаы на реакционную, способность. Природа растворителя, влияя на скорость, аналитических реакций, играет, очень важную роль при- достижении, избирательности н чувствительности определений- аминосоединений а- смесях сложного, состава как в равновесных, так и в неравновесных условиях, в. системе ПИЛ. При этом характер влияния свойств растворителя на реакционную, способность, использованных реагентов оказался, отличным от влияния среды на спектральные свойства, производных . Определяющий- характер на скорость аналитических, реакций вносят полярность » основность среды, оцениваемые эмпирическими,сольватохромными параметрами EtN и ($, соответственно. Taie, при изучении кинетики взаимодействия В<1>4 с пшрззпгом установлено, что образование бис-производного происходит стадийно, включая быстрое образование моитаи.!е2;еннога производного, которое затем во времени реагирует с БФЗ с образованием бис-продукта. Изучение влияния состава реакционной среды на скорость этой реакции в CHjCN, спиртах {MeOIl, EtOH, 2-ftOi i), а также в их водных смесях показало, что наиболее высокие численные значения констант скорости псевдопервого пйрядка (к|) фиксируются в этанол-йодных средах (8,1,10' 2 мин"'). При этом величины kj в данной смеси практически не зависят от соотношения содержаний растворителей в смеси, а » 2-РгОН возрастают от 3,9.10'г до 9, !. 10'2 мин'1 при переходе от безводного растворителя к смеси 2-PrOH-HjO (80:20). В МеОН и его водных смесях также сохраняется постоянство значений ki независимо от их состава (5,8.10'J мин"1), в то время как в CHjCN величины констант скорости возрастают от 0,37.10'2 мни"1 (безводный растворитель) до 1,2.10'кмин ' длясмесн CHjCN-HjO (5:95).

Значения констант скорости реакции БФЗ с гидразином, полученные в равновесных условиях, хорошо согласуются с интенсивностью сигнала при ПИЛ определениях гидразина в виде 5,7-динитробешофуразанового производного с использованием в качестве потока носителя Н20, MeOH,EtOH,2-PrOH,C7I3CN, ДМСО н нх водных швеей (рис. 5 ).

Рис.5. Влияния содержания воды (%) в бинарной смесн потока носителя на интенсивность сигнала при проточно-инжекционных определениях гидранта (6.10'6 моль/л) в растворителях: 1 - этанол; 2 - пропанол-2; 3 - метанол; 4 -ацетонитрил; 5 - ДМСО.

В условиях неравновесных химической реакции и гидродинамических процессов в реакционной спирали интенсивность сигнала (Н) представляет собой степень завершения аналитической реакции, выступая как кинетическая характеристика процесса. Как видно, несмотря на различия в физических свойствах используемых растворителей, лучшие условия детектирования аналита реализуются в смеси HjO-EtOH и дальнейшее изменение H согласуется с основностью используемых сред. В более полярных с точки зрею» диэлектрических свойств и дипольного момента растворителях (Н20, CHjCN, ДМСО) наблюдается более низкая интенсивность сигнала. Аналогичный характер влияния состава потока носителя на значения H фиксируется при ПИА определения замешенных пиразина ( t, 1-диметилгвдразина и др.), гетероциклических аминов (2,2,4-триметил-1,2-дипшрохинолнн н др.). Особенно наглядно роль свойств растворителя ва реакционную способность реагентов в условиях неравновесной химической реакции проявляется при сопоставлении значений H в средах разного состава для различающихся по основным свойствам аналптов. Так, при ПИА определениях анилина интенсивность сигнала возрастает в ряду CHjCN < МеОН < EtOH < РЮН-2 в соответствии с изменениями основности (ß) этих растворителей. Напротив, для более кислого м-щпроаннлкна порядок изменения значений H соответствует возрастанию полярности растворителя ErN в ряду CHjCN < РгОН-2 < ЕЮН < МеОН. Для гидразидоа ароматических кислот, отличающихся пониженной основностью по сравнению с гидразином и его замещеиными, предпочтительными с точки зрешш интенсивности регистрируемого сигнала оказались более полярные смеси ДМСО -Н20. Совокупность этих экспериментальных данных можно трактовать с учетом механизма активированного ароматического нуклеофильного замещения как возможность того, что при взаимодействии реагентов с основными аминосоединеннями скоростьопределяюшей стадией аналитической реакции является распад анионного с-комплекса и элиминирование уходящей группы (HCl), который облегчается в основных средах за счет проявления основного катализа растворителем, В свою очередь, для аыалитов с пониженной основностью скоростьопределяющей стадией реакции может служить обратимое образование промежуточного полярного сг-комплекса, стабилизируемого полярными свойстьами реакционной среды. Экспериментальные данные, кроме того, определяют критерии выбора состава реакционной среды как в равновесных, так и в неравновесных условиях для повышения избирательности за счет создания эф'фекта кинетически

1 и, мм

—к—'—60 ' m с(и*0)-Х

«дискриминированных» реакций дернватшацни, а также чувствительности аналитических" определений.

Результаты и ¡учения влияния среды на скорость взаимодействия амнносоединсннй различной-природы с реаге; гами в неравновесных условиях кроме того, указывают на меньшую значимость гидродинамических процессов по сравнению с фактором, связанным с химической реакцией, положенной в основу детектировать аналитического сигнала.

Свое влияние на реакционную способность используемых геагентоа могут оказывать н те компоненты реакционной среды, которые сопутствуют анашгту в анализируемых образцах. Так, при П! 1А определениях гидразина в присутствии соединений основного характера (алкнламипы, аммиак, 1.1-диметилгидразни) наблюдается резкое возрастание (в 4-5 раз) интенсивности детектируемого сигнала. При высоких содержаниях аминов в потоке носителя происходит уже уменьшение : лтенснвностн регистрируемого сигнала за счет влияния конкурентной реакции интерферирующего компонента с реагентом. Только в случае (СНз)зК и других третичных алкиламинов, не образующих с реагентом производных, после первоначального возрастания «нтсисшшостп сигналя наблюдается сто постоянство вплоть до отношения содержаний амин/гидразин - 100:1. В то же время при раздельных ПИА определениях указанных амнносоединецнй они не детектируются в тех условиях, при которых происходит регистрация сигнала производного гидразина (Х=б35-б40 им). Более того, при замене алки-ламннов и .-лкнлпщразинов на нх арилзамещенные аналога, имеющие пониженную основность аминогруппы (анилин, фенил гидразин и др.), влияние посторошшх соединений на результаты ПИА определений гидразина не наблюдается. Эти экспериментальные данные явно указывают на проявление основного катализа детектируемой аналитической реакции основными компонентами анализируемой смеси. Используя свойство (СНз)зК проявлять каталитический эффект на неравновесную реакцию гидразина с БФЗ в системе ПИА, удается уст ранять мешающее влияние алкиламинов, алкилгндразтпгоз, аммиака. При этом одновременно достигается повышение чувствительности определений и предел обнаружения гидразина достигает 12 нг/мл. Необходимо отметить, «по ускорение аналитической реакции гидразина с БФЗ в присутствии алкиламинов происходит и в равновесных условиях. Однако при этом, как и следовало ожидать, не происходит возрастание интенсивности регистрируемого сигнала после завершения реакции.

При изучении влияния природы буферных растворов на скорость аналитических реакций оказалось, что лучшие условия для проведения дериватнзашш определяемых веществ в равновесных и неравновесных условиях при равных значениях рН обеспечивают фосфатные и боратные буферы.

ПРИМЕНЕНИЕ РЕАКЦИЙ ДЕРИВАТИЗАЦИИ ДЛЯ ВИЗУАЛЬНОГО, СПЕКТРО-

ФОТОМЕТРИЧЕСКОГО, ХРиМАТОГРАФИЧЕСКОГО И '

ПГОТОЧНО-ИНЖЕКЦИОННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИНОСОЕДИНТ2Ч11Й

Возможности регулирования избирательности, н чур-твительности аналитических определений связаны с использованием спектральных характеристик образующихся в результате реакций производных аминососдинений различной природы; применением приема ки-

нстической «дискриминации» реакций дериватнзации по основности аналитов; подбором растворителей и компонентов реакционной среды с определенным сочетанием их полярных и основных свойств для целенаправленного изменения свойств аналита и интенсивности детектируемого сигнала; вариацией электрофильными свойствами аналитических реагентов. Сочетание этих факторов было использовано для разработки методик спектрофстометриче-ского, проточно-инжекционного, хроматографического определения аминосоединений, а также в тест-методах. Эффективность используемого приема, предусматривающего изменение в благоприятную сторону аналитических свойств аналита, проверена на примерах определений аминосоединений в наиболее характерных для них объектах анализа (биосубстраты человека, лекарственные формы, промышленные продукты, производственные воды), а также в искусственных смесях, моделирующих промышленные водные и воздушные среды.

Основными преимуществами хлординитрозамещенных бензофуразана п бензофурок-сана, которые выявлены при определениях аминосоединений различных классов по сравнению с традиционными реагентами (альдегиды, сульфохлорлды, нзоцианаты, мононнтрога-'логенбензофуразаны, диазотирующке реагенты и др.), являются возможность визуальной оценки природы определяемых веществ по характерной окраске производных; избирательность реакций дериватнзации аминосоединений в присутствии органических веществ других классов; способность образовывать про.аводные малоосновных (ди-, трифеииламин и др.) соединении; спектральная селективность производных вридаыннов по сравнению с производными алкиламинов; высокая скорость реакций дериватнзации и мягкие условна их проведения.

Реакции дериватнзации о спектрофотоиетрнческом аиалше. Избирательность спгктрофотометрчческих определений гидразина и его замещенных, гноразидов кислот, арнл- и гетероароматнческих аминов оказалось возможным регулировать за счет использования спектральных свойств производных, а также создания условий для протекания кинетически контролируемых реакций интерферирующих компонентов анализируемого образца с реагентом. Последнее достигается при вариации используемых растворителей к реагентов.

Примеры избирательных спеетрофотомэтрических определений гидразина и гидрази-дов кислот в смесях приведены в табл. 2. Благодаря спектральным свойствам возможны определения гидразина в присутствии большого (5О0-кратныЯ и выше) избытка типичных компонентов промышленных смесей, в том числе при синтезе лекарственных веществ (ветразин, изониазнд, фосфабензид, апрессин I др ). Это позволяет проводить определения чистоты лекарственных веществ, а также контролировал» образование токсиканта при хранении лекарственных форм как продукта распада основного вещества.

В свою очередь гндразиды кислот (лекарственны? вещества) можно определять в присутствии гидразина благодаря тому, что производное пиразина имеет незначительное поглощение в той области спектра, для которого фиксируются максимумы поглощения производных гидразидов кислот.

Избирательность спектрофотомегрических определений замещенных гидразина в присутствии первичных ариламинов можно регулировать проведением двух последовательных реакций дериватнзации. Так, при определении фенилгидразина в кислой сточной воде, в которую попадают в большом количестве анилин и гидросульфит-ионы, вначале можно провести дериватизацию компонентов анализируемой смеси ароматическими альдегидами

<amii.4im.iM, салтилавмм). Ирг» этом устраняется мешающее влияние гкяросульфит-иоиа и анилина. Последующая реакция дериватнзации 4-хлор-5,7-дшштробеиофуразаном приводит к образованию и птснеитм ок-ргщ'енного производного (Х-520 им) фсмилгидразона соответствующего альдспш. Определениям феннлгидразииа при (.1! 1 в виде такого продукта аналитической реакции »го »жшают более чем 1000-кратный избыток гидросульфит ного производного 51 Ш-кратенй '¡'«быток производного анилина.

Таблица 2

Результаты стгектрофотометрического определения гидразина и гндразидов кислот в виде 5.7-динитробензофуразановых производных в смесях Сп-б. Р==0,95, V ¡0 мл)

Компонент Введено Введено X Найдено Найдено р О;

смеси (X) гид|»азина,мхг мг гидразина, мкг X, мг

3,4-Дт:етокснбенэил- • ¡1.32 21,! ± 0,6 - 0.03

гидразина гидрохлорид •

(ветразин)

Семикзрбззнд 35,1 , 0,203 35,2 ± 0,9 0,04

Анилин 1.41 0,047 1,35 ± 0,07 0,05

Анилин 30,48 0,58 30,1 ± 0,8 0,04

Метилгидразин 2,15 83,1 2,19 ± 0,07 0,04

Ы.Ы-Диметилпщразин 2,19 80,7 2,24 ± 0,07 0,03

Тиоеемикарбазид 1,68 5,1 1,74 ± 0,08 0,04

Фенол 31,75 5,1 31.4 ± 0,8 * 0,03

Гндразид изоникотиновой 1,75 3,53 1,71 ± 0,07 3,6 ± 0,1

кислоты (изониаз1ш)

Гндразид дифенилфосфи- 11,8 5,62 11,2 ± 0,4 5,7 ± 0,1

ннлуксусной кислоты

(фосфабензид)

Гидразнд бензойной 34,03 3,61 34,3 ± 0,9 3,7 £ 0,1

кислоты

Дернватизация определяемых веществ динитрозамещенными беизофуразана а бснзс-фуроксана позволяет проводить раздельные спеетрофотометрическле определения со^шше-ний, содержащих иуклеофнлыше аминогруппы с различной степенью замещения (тибл.З). Избирательность детектирования производных вторичных и третичных аминосоедкиений . присутствии веществ с первичными аминогруппами основывается иа различии в их спектральных характеристиках. В соою очередь первичные ариламины определяются л присутствии вторичных и третичных амнносоедшшшй за счет проведения кинетически контролируемого процесса дериватизащш компонентов смеси путем вариации состава среды и используемого для этих целей реагента. Сочетание этих приемов позволяет проводить сценку качества промышленных продуктов сложного состава с использованием сравнительно простого аналитического метода. Спектрофотометрнческяе определения при анализе таких продуктов промышленного синтеза, гак атгиоксидант ацетоиакил, имеют определенное преимущество перса чромато Графическими методами (ВЭЖХ, П'СХ), поскольку для по-

следних наблюдается быстрое снижение эффективности колонки за счет процессов хемо-сорбции на ней смолообразующих компонентов матрицы.

Таблица 3

Результаты спектрофотометрического определения ароматических, гетероароматнче-

Определяемые вещества Состав смеси (мкг/мл) Введено аналнта, мкг/мл Найдено аналнта, мкг/мл 5,

Анилин 2,2,4-триметнл-1,2-ди-пщрохинолин (ДГХ) Анилин ДГХ 0,53 0,43 0,51 ± 0,02 0,44 ± 0,02 0,03 0,03

Анилин Димер ДГХ Анилин Димер ДГХ 0,52 0,58 0,50 ± 0,02 0,54 ±0,02 0,03 0,03

Первичные амины Димер ДХГ Промышленный продукт ацетонашш 98,1% (по паспорту) 1,4 ± 0,2 (%) 98,4 ± 0,5 (%) 0,04 0,01

К.Ы-Днмстиланилин Анилин (3 81) 1чт,М-Днметиланилин 1,18 1,19 ± 0,02 0,02

Анилин м-Нитроанилин Анилин м-Ннтроанилин о-Ннтроаншшн (6,9) п-Ннтроанилш (6,9) 1,83 4,62 1,87 ± 0,06 4,7 ± 0,2 0,03 0,04

2-Нафтиламнн фенил-а-нафтиламин 2-Нафтиламин Фенил-а-нафпшамии 2,89 2,09 2,84 ± 0,07 2,12 ± 0,05 0,03 0,03

Индол Анилин Индол 1,18 1,15 ± 0,02 0,02

Анилин Дифениламин Анилин Дифениламин 3,79 1,51 3,69 ± 0,09 . 1,52 ± 0,05 0,03 0,03

Триптофан Пролин Алании, фенилала-нин, гистидин, тирозин, валин, лейщ..., изолейции, глутамн-новая кислота, глицин, лизин (по 5) 10,5 7,2 9,9 ± 0,4 7,6 ± 0,4 0,04 0,05

2-Аминофенол (после экстракции) 2-Аминофенол, фенол (1) в воде 0,081 0,076 ±0,004 0,05

Создание условий для кинетической «дискриминации» реакций образован)!]) производных по основности определяемых веществ дает возможность проводить, например, избирательные слекгрофотомегрические определения анилина и м-шпроанилина в присутствии избытка изомерных ннтроанапинов. Различие в спектральных характеристиках бензо-фуроксановых производных аминокислот позволяет проводить прямые спектрофсггометрн-

четкие определения таких гетероциклических аминокислот, как пролин и триптофан в куль-¡ура.тьпых жидкостях и процессе их регуляторного синтеза.

lia примере определения 2-амипофепола в присутствии фенола проявляется важное препмч'шес: но лини iрозамеп. иных бгмзофуразана и бензофур( <сана как реагентов для де-риватизашш а.мпносоедппепий но сравнению с сульфохлоридами, изоцианатами,диазотм-рукчннми п друшми рейтингами. Оно заключается в избирательности реакций дерняагизв-нни определяемых аминосоедннсннй п присутствии органически., веществ других классов (фенолов, '.'impuni и др )

Благодаря высокой интенсивности полос поглощения производных пределы обнару-,кення при спеырофоюметрическнх определениях большинства аминосоедниенин достигя-Ю1 2 lu" моль .! При фоюме!рическпх определениях гидразина в производственных водах ТЭС с использованием кювет . длиной поглощающего слоя 5 см предел обнаружения акали га составил 2 10'',моль/л.

1Чч-1-меюды для определении алнпососдинсннй в поздушных н полных средах. Высокая реакционная способность .хлорднннтротамешенных Сешофуразана и беизоф>рои-сана, возможность дерпватизацни соединений с первичными, вторичными и трцнчнмг.ш аминогруппами, достигаемая при этом визуализация аналитического сигнала оказались привлекательными для использования реагентов в тест-методах, реализованных в виде тест-полосок, нмикаторных трубок и хемосорбционных пробоотборников ня их основе, непрерывного газового анализа на основе газосигнализатора ГСП-11, а также капельных реакций на пластинках ТСХ. При изучении реакций амнносоедннений в гетерофазных условиях (на сшшкагеле. окиси алюминия, цеолитах, в пленках эфиров целлюлозы), а также в условиях ТСХ обнаружилось, что дернватизация даже таких малоосновных ариламинов, как дифениламин и трпфеннламин, завершаете за 2-3 минуты. Для анилина и его замещенных, гидрантов кислот развитие окраски происходит в течение нескольких сек-, ид после взаимодействия анялита с реагентом селективного слоя. Сопоставление резуль.зтоо, полученных при изучении кинетики реакций тех же иешеств с БФЗ и БФО в растворе и в условиях гетерогенного взаимодействия показывает относительное возрастание скорости дерпватизацни вю-ричных и третичных ариламинов на твердом носителе. Это можно объяснить известной способностью енликагеля, окиси алюминия и других фаз к образованию я-комплексои с ароматическими соединениями, что должно вызывать повышение основности и, в свою очередь, нуклеофильностп определяемых веществ.

Гегерофазные реакции определяемых веществ с реагентами, выбор которых осу шесг-влялся в соответствии с закономерностями, описанными выше, приводят к образованию окрашенных производных. Характер окраски при этом зависит от природы аналита (степени замещения аминогруппы, заместителей, их положения) Для производных первичных ариламинов, замещенных гидразина, гидразндов кислот характерна окраска оранжевого, красного цвета. Для производных гидразина, вторичных.» третичных ароматических и «ле-роароматическнх аминов происходит развитие окраски до "зеленого, синего цвета. Такая характеристичность спектральных свойств производных удобна для использования <и тест-методах, капельном варианте проведения аналитических реакций, а также в ТСХ, поскольку позволяет визуально оценивать потенциальный состав анализируемой матрицы, проводить скрининг реакционных смесей с участием амтгосоединенин. Благодаря высокой тпенсип-

iiocrti поглощения при этом достигается высокая чувствительность определений. Так, пре дел визуального обнаружения гидразина на пластинках ТСХ достигает 0,05 мкг, для другн; амнносоеднненнй он составляет 0,1-1 мкг. Образующиеся в результате гетерофазных реак ций окрашенные производные аминосоединсний имеют высокую устойчивость при хране mivi в обычных условиях, что важна для документирования результатов ана^нггических оп ределеннн.

Лучшими аналитическими характеристиками в качестве носителя при изготовленш индикаторных трубой и хсмосорбционном варианте их использования обладает снликагел! ШСМ с фракцией 0,1-0,3 мм. Для изготопл^ння тест-пленок предпочтительнее использова кие нитроцеллюлозы как пленкообразующей основы. Иммобилизация реагентов проводилась пропиткой (индикаторные трубки), совместным отливом (тест-полоски) при выдержи вании массы реагента и носителя в системах растворителей, исключающих гидролнтнческук инактивацию хромогенных реагентов, В непрерывном газовом анализе в качестве растворителя реагента использован дибупшфталат, обеспечивающий устойчивость используемы* реагентов в дозирующем узле, однородное смачивание рабочей зоны индикаторной ленты i высокую чувствительности детектирования токсикантов при аспирировании через рабочук зону анализируемого воздуха.

Индикаторные тест-полоскн на основе иммобилизованных в нитроцеллюлозу реагентов были использованы для определений ароматических, гетероароматических аминов i гидразинов в водной среде. После выдерживания тест-полосок в потоке анализируемого раствора в течение 2-3 минут (для разбавленных (1Q"4 молы л и ниже) растворов токенкантое - в течение 15 минут) тест-полоски окрашивались в красный (анилин, феннлгндразнн, 1,1-диметилгидразин и др.) или сине-зеленый цвет (Ы.К-днметнланилин, 2Л,4-триметнл-1,2-дигидрохннолин). При этом визуально отслеживается зависимость интенсивности окраски тест-полоски от концентрации токсиканта в воде, позволяя проводить колористическую оценку его содержания. Благодаря своей прозрачности тест-полоскн оказались пригодными для спектрофотометркческих определений аналетов в водных средах. Фотометрирование тест-полосок при аналитических длинах волн, соответствующих природе определяемого вещества, показывает удовлетворительную корреляцию между светопоглощением апенкн и содержанием токсиканта (мг/л) в воде

А = 3.37 С» т 0.03 (г = 0.992, X = 510 нм) для анилина,

А = 0.49 С, - 0.01 (г = 0.990, X - 510 ..я) г ля фенилгидразина,

А = 0.14 С, - 0.01 (г = 0.987, X = 640 нм) для КМ-диметилашшша. Определениям аминосоедннений тест-полосками не мешают фенолы, карбоновые кислоты, алкиламины, аммиак, неорганические вещества. Также возможны избирательные определения третичных (Ы,Ы-днмеггиланнлин) в присутствии первичных (анилин) аршюминов.

При определениях амнносоедниений различной природы в воздушных средах с помощью индикаторных трубок, как и в случае тес t-полосок, на носителе наблюдается образование окрашенных производных. При скорости аспирации воздушной среды 1-2 л/мин обнаруживается хорошо выраженная зависимость между толщиной окрашенной зоны и содержанием токсичных ариламинов. Сочетание характерной окраски производных it линейно-колористическая зависимость толщины окрашенного слоя носителя позволяют актуально оценивать как природу определяемых веществ, так и их концентрацию в анализируемой

марине. Продели визуальною обндру'лсешп ариламинов (0,05 мг/м' н выше) в большинстве случаев значтельно ниже нормируемых показа гелей токсичных веществ. Так, о-хлоранилин н N.N-днмегнланилин обнаруживаются при их содержании в воздухе, соответствующем 0,25 ! 1ДК,.., ч-юлмшт - при тог. ей грации 0,05 ПДКр,. Определениям ариламинов при этом не мешают такие компоненш воздушной среды, как аммиак, алкпламииы, растворители и другие органические вешествн различной природы.

Благодари высокий реакционной способности ислользуемь..; реагентов индикаторные трубки оказались пригодными для селективного группового хемосорбционного извлечения химически неустойчивых ариламинов из воздушной среди. Эффективность хсмосорбинон-ного n(4ió(ion\>p;i для анилина и м-хлорпшшша при скорости аспирации воздуха 0,5 - 2,5 л/мин составднлп ЭэЧЬ Последующая десорбция 4,6-дкнитробензофуроксановых пронзьод-ных, протекающая количестве .но в ацетснитрнле и метаноле, позволяет проводить определении ариламинов методом ОФ-ВЭЖХ. Пределы обнаружения токсикантов в этом варианте использования индикаторных трубок состаидяюг 0,1 ыг.'м3, ' .

Спектральная селективность нроизьочных арнлзмнноп относиюиаа производных злкнламинов, аммиака, избирательность взаимодействия использованных реагентов с cpia-шческнми соединениями различных классов позволили адаптировать гетерофазные реакции зериватнзации определяемых ариламинов к системе фотометрического детектирования по-туавтоматн'еского газосигнализатора боевых отравляющих веществ ГСП-П. После изменений электронноП схемы прибора, позволяющих увеличить продолжительность рабочего шхла прибора, срабатывание звуковой и цветовой сигнализации газосигнализатора при ¡ревышешш допустимых уровней содержания анилина, л- и м-толуидинов, хлорашшшов, 1-№изндт<а к воздухе происходит при продолжительности аспирации воздуха 3-8 минут. Определению содержания токсикантов не мешают титинпие компоненты воздушной средь, тоизводсчвснных помещений, такие как аммиак, алкнламнны, органические рлотиориi tr.nn

Реакции дершта тнзанни и нрото'шо-ннжекинонпмх определен!.их амнш.ч'оедн-iCHHH. Благодаря реакционной способности реагентов и спектральным характеристикам ■ронзводных хлординитрозамещенные бензофуразапа и бензофуроксана оказались Dtji'^fi,-нвнымн при избирательных определениях еминосоединений в неравновесных условиях нстемы ПИА. Аналитические характеристики ПИА определении некоторых соединений ринедены в табл.4

Главными факторами достижения высокой избирательности и чувсгвителы'.осчч сп-еделеннй в системе ПИА при анализе смеси амнносоедынешш оказались вариаций cocí от воритслей, используемых в потоке носителя в сочетании с выбором дериватизирующего ¡агента с подходящими электрофнльны.ми свойствами. Достигаемый при этом эффект ки-гтической «дискриминации» позволяет проводить избирательное спекгрофоточсгрнческос ¡тестирование в системе ПИА исходных или конечных продуктов промь.<"".енных рс.к-ш, оценивать чистоту лекарственных веществ (табл. 5)/ В ряде случаев избирательность тределений достигается благодаря спектральным свойствам образующихся в потока прошеных. Понижения предела обнаружения, в случае гидразина'достигающего 12 нг/мл, мож-) достичь за счет использования каталитического влияния основных компонентен лнллп-руемой матрицы.

Таблица 4

Аналитические характеристики проточно-инжекцнонных определении аминосоедииений

Определяемое вещество Уравнение регрессии Интервал определяемых концентраций мкг/мл Коэффициен -корреляции Производи тельность, проб/час

Гидразин Н(мм)=445С+0,4 0.015-0,4 0 О091 45

Изониазид Н(мм)=73,7С-0,7 0.15-2,5 0,9986 32

Фоефабензид Н(мм)=28,5С-0,7 0,25 - 3.5 0,9993 28

Гидразид салициловой кислоты Н(мм)=35,6С-0,8 0,35 - 4,0 0,9992 28

Бензгидразид Н(мм)'41,2С+0,5 0,2 - 2,5 0,9987 30

Апрессин Н(мм)=58,2С-0,8 0,15-2.5 0,9991 30

Анилин Н(мм)~374С+2 0,05 - 0,8 0,9993 28

п-Броманилнн Н(мм)=106С+2 0,12-2,7 0,9991 28

2,2,4-Т;.;шетнл- 1,2-дигидро- хннолнн Н(мм)=94,2С-1 0,15-2,5 0,9995 26

1,1-Диметил-гндразин Н(мм)= 136,10+1 0,05 - 0,42 0,9991 24

м-Нитроаиилин Н(мм)=3,5С+1 1,5-30 0,9989 28

Реакции дериватмзацин при изучении геастическп детерминированных процессов Спограпеформацни лекарственных веществ. Возможность избирательных определений лекарственных вещеста (шокиазнд, фосфабензвд и др.) в биологических субстратах человека положена в основу метода определения генетически детерминированного процесса биотрансформации ксенобиотиков {лекарственные вещества изониазид, апрессин, амфетамины, пеницилламины и Др., промышленные токсиканты) по типу ацетилирования, который определяется активностыо фермента К-ацети., .■раи"феразы в цитозоле печени

Ы-ацегилтрансферща

РЛ'ЬЬ + СНз -С(0)-Б-КоА----------------► Я-Ш-С(0)-СН}

Характерное для этого процесса генетически детерминированное распределение пс скорости метаболических превращений приводит к эффекту передозировки лекарственны» веществ (побочным эффектам) для медленных ацетиляторов или неэф(} етизности лекарственной терапии для быстрых инаетиваторов. Определение фенотипа о. овано на изученш фармакокинетических параметров выведения свобода о изониазид; (фармакогенетического маркера) с мочой пациента хроматографическ!- <н (ВЭЖХ, ТСХ) 1 спектрофотометрнческим методами. Результаты, полученные при испот. ювании различны; аналитических методов, хорошо согласуются между собой. Это позвол: т использовать дл.' определения фенотипа наиболее адаптированные к клиническим услов! м методы спектро

'¡■«и'мсцнш и ГСХ Деривапшкия яналитов в биосубстрате 4-хлор-5,7-

димн ;роГ>е!поф\р.'паном приводит к повышению чувствительности определения в ВЭЖХ, ТСХ, а в спеклрофотомегрическом .методе повышает избирательность детектирования.

■ - - Таблица 5

¡Ччулы.иы нрошчпп-пп.кекинонны1; определений амнносоедннсннй в разичнмх

объектах /п-6. Р-'О.УЗ)

| О преде. >;"-'.! ,v компонент смеси, бпо- Введено вна- Найдено

| веществ;: cyocip.n, лекарствеишл форма (мг/мп; лпта, мкг/мл мкг/мл

Гидразин Фосфабеи )ид (2,0) 0,526 0,53 ± 0,02 0,04

Гидразин 1 |ро\:ип!лспкые ¿оды 0,023 ± 0,002 0,022 1- 0,001 0,04

М- Метиламин (0,4), диметнла- 0,50 0,52 ± 0,03 0,06

Диме;;!...-;!,-""""« мнн (0,9), тг>ч«етипам1Ш гндразиноднуксусная кислота (0,5)

Фосфабензнд Кровь 10,25 9,9 ± 0,4 0,04

Изониазид Моча 4,25 4,2 ± 0,2 0,03

2,2,4-Трцмегил- Анилин (9,3), ацетон (29,0), 0,865 0,87 ± 0,02 0,0Л

1,2-дигндрохнно-лнн (ДГХ) HCl (4,0)

Анилин ДГХ (17,3), ацетон (29,0) 0,465 0,'46 ± 0,01 0,03

п-1>ромаинлнн Адамантн:|-2-">н (7,5), iJ-(2-адаманз ил)-4-ёромаш:лпн (15,05) 1.376 1,32 ± 0,04 0,03

Анилин м-Ннтро.тпнлнн (11,2). о-Нпгроаннлин (56), п-Ннтроаншцш (56) 0,56 0,57 i. 0,03 0.0:'.

м-Нтроанилии о-Нитрознилин (41), п-Ннтроаннлин (41) S ''В 3,4 £ 0,3 0.04

В таблице 6 приведены фармакокннетпческие параметры выведения изонназнда ;мя выборки из 26 пациентов, показывающие значительные различия и периоде полувьшедення, количеству выводимой дозы лекарственного вещества быстрыми и медленными ацетнлито-рами. Менее выраженной бнмодпльчостыо характеризуется биотрансформаци* лекарственного препарата фосфабензвд.

Предложенный метод прошел клиническую апробацию и показана во-подноси, ен> использования для оптимальной дозировки лехарственнь'гх средств с учетом феят>»опиче-ских особенностей пациента. На основании результатов изучения кинетики выпедт,. л изонназнда из ор1Лнизма пациентом в присутствии некоторых известных нндутороп М-ацетилтрансферазы (пантотеиат кальция, пнридоксина гидрохлорнд). а также иопего нравственного препарата-иммуномодулятора ксимедон. тмошчз возможность ьри'-ичн:,■■,<л у, г

тода при подоорс лекарственных веществ для целенаправленной регуляции (модификации) скорости генетически детерминированных процессов биотрансформации ксенобиотиков. Это важно для повышения эффективности лекарственной терапии и устранения (уменьшения) побочных эффектов от их применения с учетом фенотиш'ческих особенностей пациентов.

Таблица 6

Фарма ко кинетические параметры выведения изониазида по данным исследования мочи после однократного перорального приема 450 чг преп оата

(26 пациентов)

Параметр Быстрые ацетиляторы Медленные ацетиляторы

Период полу вы ведения час 2,5 ± 0,5 4,5 ± 0,6,

Количество выводимой дозы, % 7 ± 2 16 ± 2

Константа скорости выведения, 1/час 0,28 ± 0,05 0,15 ±0,02

Максимальное количество выведенного препарата, мг 29 х 7 72 ± 11

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ВЫВОДЫ

1. В качестве реагентов для дериватиэашш аминосоедннений различных классов впервые предложены хлордшштрозамещенные бензофуразана и бензофуроксана. Показана высокая эффективность их использования при визуальном, спектрофотометгрическом, хро-матографическом, проточно-ннжекционном определении аминосоедннений в сравнении с традиционными реагентами.

2. Реакции дериватнзацни гидразина и его замещенных, пщр азидов кислот, алкил-, арил- и гетероароматических аминов, аминокислот хлордин.лрозамещенными бензофуразана и бензофуроксана приводят к образованию производных с интенсивными (1,7.-3,9.104 л/моль.см) полосалт поглощения, положение которых определяется степенью замещения аминогруппы модифицируемого соединения, природой и положением заместителей в нем, сольватаиионными эффектами. На основании данных масс-, ИК-, электронной спектроскопии, электрохимических и хроматографнческих исследований установлен состав производных, обоснован выбор реагентов для проведения реакций химической модификации амнно-соединеннй различной природы.

3. Влияние растворителя и компонентов раствора на спектральные, электрохимические, диэлектрические характеристики изученных производных, параметры элюирования связано с эффектами специфической сольватации >Ш- (ОН-) кислот и сопряженных им анионов, изменением электронной проводимости межьядерных аминогрупп, а также проявлением равновесных процессов и'-низации ионогена с образованием ионных пар и последующего разьединения их до сольватированных ионов.

А В результате исследования кинетики реакций 4-х.п{>р-5,7-лишпробензофураза»а и 7-.\.тор"1.6-,чн1П||робензофуроксш|а с рядом ароматических, гетероароматических соединений и с полон п средах разного состава установлена возможность использования приема кинет пческон «дискриминации по основное! и анал'ита, а тах^се д счет сгеряческих затруднений реакции образования произпоаных; выявлены условия приготовления, хранения и применения рабочих растворов реагентов.

5 На огиокашш результатов изучения влияния природы растворителя и компонентов среды на реакции аминосоелнненин с аналитическими реагентами в равновесных условиях, а также и системе проточно-инжекциониого анализа обнаружено, что скорость аналитической реакции (интенсивность детектируемого сигнала и ПИЛ) для малоосновиых акалитов определяйся полярностью, а лая основных соединений - основностью используемых растворителей. Показана возможность использования основного катализа растворителем и компонентами реакционной сре.чы для повышения избирательности и чувствительности детектирования апалитов ' ,

6. Установлено, что основными факторами регулирования игбнрятет.ноети и чувствительности сиектрофотометрического детектирования лиалита в результате протсденн* реакции дериватизацни являются использование спектральных характеристик образующихся производных, подбор растворителей с определенными основностью и полярностью для целенаправленного изменения свойств производных и степени завершения аналитической реакции, использование приема кинетической «дискриминации» в соответствии с иуклео-фильнымн свойствами аналнтов, вариация электрофильными свойствами применяемых реагентов.

7. На оенопяшт установленных закономерностей выявлены рабочие условия избирательных спектрофотометрнчсскнх > ироточно-лнжекциониых определений гипразипа н его замещенных, гилразндов кислот, ароматических и гетероароматн'-чких амнион а смесях сложною состава, содержащих другие аминосоединення, различные органические и неорганические иещества. Предложены методики избирательных и чувствительных спектрофото-метрическнх. хроматографических, проточно-инжекционных определений аминосоелнненин в лекарственных веществах, химических продуктах, сточных водах, биосубстратах человека с пределом их обнаружения 2.10"' моль/л.

Предложены тест-методы в виде индикаторных трубок, тест-полосок, непрерывного газового анализа с применением газосигнализатора ГСП-11 гт визуального, фою >.етри-ческого и хроматографического определения токсичных аминосоединсний с воздушных ч водных средах с пределами их обнаружения 0,05 мг/м3 (0,1 мг/л).

9. Предложен и прошел клиническую апробацию метод установления генетически детерминированных процессов биотр'нсформашш ксенобиотиков в организме чедоасгск гго типу ацетилирования. Показана возможность использования метода для оптимизации безопасной дозировки лекарственных средств, подбора лекарств для предотвраи.г шя л уменьшения побочных эффектов от их применен™ с учетом фейотнпических особенностей пациентов.

Ocuouuoe содержание диссертации наложено и работах:

1. Центовскнй В.М., Евгеньев М.И., Петухова Л.В. Определение констант диссоциации ннтробензофуразанов в полярных и ненолярных растворителтх//Тез.докл. VII Менделсевск. дпсскуссин.-Харьков. 1983.-Т.2. С.39

2. Центовский В.М., Петухова Л.В., Евгеньев М.И., Левинсон Ф.С. Спектрофотометрическое и кондуктомэтрическое исследование растворов 4-пщрокси-5,7-динитрабензофуразана и его калиевой соли// Журн. общ. химии, 19S4.-T.S4, N 3.-С.679-6ЯЗ.

3. Центовский В.М., Петухова Л.В., Евгеньев М.И. Ионные равновесия в растворах бензофуразанов//Тез.докл. 3 Всес. Совещания «Комплексы с переносом заряда и ион-радпкальные солн».-Черноголовка. 1984. С. 113

4. Центовскнй В.М., Петухова Л.В., Евгениев М.И. Сольватация ннтробензофуразанов в протонных и апротонных расгворителях//Тез. докл. 3 Всес. Совещания «Проблемы сольватации и компдексообразования в неводных средах».-Иваново, 19S4, т.1, с. 164

5. Центовский В.М., Петухова Л.В., Евгеньев М.И. Константы равновесия бензофуразаноа в метаноле//Журн. общ. химии,- 19S5.-T.55,N 1.-С. 176-179.

6. Центовский В.М, Евгеньев М.И,, Петухова Л.В. Сольватация нптробензофуразансч в протонных ц «протонных растворителях //Сольватационные процессы в растворах/ Под ред.ГА Крсстоза, Ийпново, ИХТИ, 198S. С.32-35.

7. Центовский В.М., Евгеньев М.И., Петухова Л.В. Электропроводность натриевой соли 4-оксн-5,7-динцтробе1;зофуразана, //Рекомендуемые Справочные Данные. N Р106-85 от 24.04 85. ВШЩГССД

8 Центовскнй В.М,, Евгеньев М.И., Петухова Л.В., Левинсон Ф.С. Электронные спектры замещенных нитробекзофуразана//Журн. общ. химии.-19S5.-T.56, N 5.-С. 1160-1163.

9. Центовскнй В.М., Евгеньев М.И., Шулаева И В. Кислотные свойства ряда нитрозамещенных окси-, ашшопкридшюв, нигроднфешшаминов в апротонных диполярных растворителях //Тез.докл. 1 Всес. Конф. «Химия и применение неводных растворов».-Иваново.-1986.с. 127

10: Центовскнй В.М., Евгеньев М.И., Фаляхов И.Ф., Евгеньева И.И., Шулаева И.В., Князев A.B. Кислотно-основные свойства ряда окси- и аминопирндинов в апротонных полярных растворителях '/Журн. общ. ximnu.-1987.-T.57, N 3.-С.660-663.

11. Центовский В.М., Евгеньев М.И., Шугаев- И.В., Левинсон Ф.С., Хасанов Р.Х. Сольватация производных нитробензофуразана в неводных растворителях // Тез. докл, Всес. конф. «Кислотно-основные равновесия и сольватация в неводных средах».-Харьков. 1987. С.151

12. Левинсон Ф.С.. Центовский В.М., Шаршш Г.Л., Евгеньев М.И., Акимова С.А., Петушкова Н.И. Кислотность анилино и нитроанилинопроизводных ннтробензофуразанов в ДМФА и ДМСО // ЛСурн. общ. хим1Ш.-1988.-Т,58, N 5.-С.1080-1082.

13. Центовский В.М.. Евгеньев М.И., Шулаеоа И.В., Левинсон Ф.С., Хасанов Р.Х. Ионные равновесия в неьодных растводах бензофуразанов // Журн. общ. химии.-1989.-Т.59, N 2.- С.405-409.

i 4 Г-'вгеньев MU, Цснювский B.M., Шулаева И.В., Евгеньева И.И. Электронные спектры

гн.чрокси- и амчнопирндннов » диметилсульфокснде н диметилформамипе I! Изв. вузов. Химии и хим. технологии -19S9, N S -С.34-37. ' ^ Цопоьским В М "Fsrw- я М И., Шулаева И.В., Евгеньева Н.П. Конспшти равновесия 5-окс:1-2А6-зриннгр\чтрид;>на и 4-o),c:!-?-Kiirj,o£!eiuo(Iiyj>a'Kita" протонных, .и. апротонных дш!С'ЛЛрпь!\ расгворшсдих // Ж c5i:t химии 1 l)S9 -Г.50, N 12 -С.27 : ¡-2 ': lo I-ni ci:ьен М.И , Пяюншя И.И . Николаева Н.Г., Москва Л.Л., Лсмшсон Ф С., ¿IovioiKi» !> II Колнчсггдошэс определение нэотюгмда н гитразииа при их совместном присутствии И Хнм.-фарм журн. -1WI.-T.25, N 10.-С S0-S2 17 Ег.геньен МП, Ле^ппсон ФС Производные дннитроСснаоф^разана как селективные реагешм лля op'-iiivieci-oro анализа // Химия п. гер;>шн;л1г:сс'снх cccv":tne:ü:ü-100].-N 11.-C.I.>65.

Рпгеньев М.И., Левннсон Ф.С., Шаршш Г.П., Евгеньева И.И., Акимова С.Д., Москва И.-л Peas си¡ 'res. мы «a» и хоомагографш ароматических аминов.

Авт.свнд. N 1042372 (СССГ), П И !< .4.

19. Евгеньев М.И,, Сарандоза Л.Б., Евгеньева И.И., Юсупова Д.М., " н . Фаяяхов И.Ф Реагент для раздельного определения ашиша и м-нитроашдаша в смеси. Авт.свнд. N I770S57 (СССР), опубл. Б.И. ¡992, N 39.

20. Евгеньеа М.И., Николаева Н.Г., Евгеньева И.И., Цивунин B.C. Определение ароматических аминов в промышленных антиокендантах. Сб. "Современные методы анализа промышленных материалов и природных объектов".-С-Петербург. ЛДН'ГП. 1992 Ч.1.-С.42-45.

ЗГЕвгеньсз М.И., Ннколаеза Н.Г., Евгеньева И.И., Левннсон Ф.С., Будннков Г.К. Селектвиое определение шдрг-ннеа н гилразидов в их смеси // Журн.аналиг.химии.-

1992 -Т 42, N 6 -С.! 123-1 ¡27 22. Енгеш.ев М.И, Евгеньева И.И, Москва Н А, Деггсреи В.В, Д)*>и»скиГ| КЛ., Цикуты ВС. Экс1ракцнотю-::ромг.тографичсскос определение К-матилзамет'йиш.ч пило,,.: сточныч иолах // Хим.- фарм.журн. - 1992 -У 26. X 7-8 -С.89-91 23 Евгеиьен МИ. Езгеш.сва ИИ., Сараидоиа А.Б., лиерло-Лигоновнч Л \ Спектрофотометрнческос определение анилина и м-нитроаш.-лнгм » рсаашонныч смлич. содержащих изомерные нитроанилины // Изв. вузов. Химил и хнм техпо.ч -1992 -т .">5, n 1 1-12-С 45-4S.

24. Евгсньев МП., Николаева И.Г., Еигеньев;'. И.И., Желтухи» Ид Спектрофотсметрнческое определение феинлгндразина г, сточных ьодлх Жури аиалит.химии. I992.-T.47, N 9.-С. 1699-1703.

25. Евгеньев М И., Евгеньева И И., Мосхвэ ПЛ., Лемшсон Ф.С. 5-\j)i>p-4,6-диннтробензофуразан кач реагент в тонкослойной хроматографии ароматических a. iuUoh // Заводск.лабораторня. 1992.-T.5S, N 4.-С.И-12

26. Евгеньев М.И., Левннсон Ф.С., Евгеньева И И., Москва Н.А., Тарасова Р.И., Ошие д.Ф. Реагент для раздельного определения гидразинов и гидразидов п нхь смеси Авт евпл СССР "N1 1642372. Б И 1992, N 9.

27. Евгеньев М.И., Левинсон Ф.С., Фаляхов И.Ф., Евгеньева И.И., Николаева Н.Г., Москва H.A., Жслтухпн И.А., Юсупова Л.М.Способ определения первичных и вторичных аминов.

' Аст.свнд. N 1735745 (СССР), 1902, N 19.

28. Методы анализа токсикантов в биологически активных веществах, сочных волах и воздушной среде / Сост. Евгеньев W.U., Евгеньева И.И., Москва H.A. / 1'уководстао к лабораторным работам. Казань. РИО КХТИ, 1992.-22 с.

29. Евгеньев М.И., Николаем Н.Г., Евгеньева И.И., Левинсон Ф.С.. Селективное определение феннлгнлразика в сточных подах // Сб. трудов Межгунзрод; ;го симпозиума Еколопт-92, Болгария, Бургас, 1992.-С.172-175.

30. Евгеньев М.И., Николаева Н.Г., Евгеньева И.И., Левинсон Ф.С., Победпмскин Д.Г. Способ спектрофотометркческого определения аминокислот. Патент РФ №2012869

31. Ешеиьез М.И., Евгеньева И.И., Николаева Н.Г., Левинсон Ф.С., Москва H.A., Желтухи» И. А. Способ определения фенилгидразина в сточных водах. Патент РФ А'»201 S809

32. Евгеньеа М.И. Производные бенз-2,1,3-оксадиазола в анализе амнносоединений в объектах окружающей среды //Тез. докл. XV Менделеевского съезда по общей и прикладной химии.-1993.-Минек. T.l. с.365

33. Евгеньев М.И., Евгеньева И.И., Москва H.A., Николаева Н.Г., Желтухнн H.A., Будннпв Г.К, Селективное спеетрофотометрическое определение аминов различной степени эамещепя в смесях. // Журн.анзлит.химии.-1993.-Т.43, N 7.-С. 1226-1234.

34. Евгеньев М.И., fleiyxosa Л.В. Устойчивость 4-хлор-5,7-динитробе.чзофуразана к гидролизу в смешанных растворителях // Изз. вузов. Химия и хим.технод. 1993.-Т.36, N П.-С.40-43.

35. Евгеньев М.И., Евгеньева И.И. Влияние природы растворителя на реакцию 4-хлор-5,7-динитробешофуразана с гидразнн-гидратом. //Изв. Вузов. Химия и хим. технология. 1994.-Т.37, N 2.-С.41-45.

36. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Евгеньева И.И., Будников Г.К. Определение ароматических аминов в воздушных средах индикаторными трубкам» И Изв. Вузов. Химия и хим. технология.-19v5.-t.38, N 1-2.-с,66-69

37. Евгеньев М И., Евгеньеза И.И., Николаева Н.Г., Гармонов С.Ю., Самуилов Я.Д., Будников Г.К. Влияние природы среды на спектрально-аналитические характеристики дннитробензофупазанового производного гидразина // Журн. аналит. химии,- 1995.-Т.50, N 6. -С.642-647.

38 Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю„ Евгеньева И.И., Будников Г.К. Проточно-кнжекцмонный анализ лекарственных веществ в биологических жидкостях и лекарственных формах // Тез. докл. 11 Нац. Конгресса «Человек к лекарство»,- M-.1995.-c.319

39. Евгеньеа М И., Гармонов С.Ю., Евгеньева И.И., Молгачева И.В., Левинсон Ф.С. Фотометрическое определение гидразина в теплоносителях ТЭС // Изв.вузов. Химия и хнм.технология.-1995.-Т^8, J61-2.-C.70.

40. Евгеньев М.И., Гармонов С. 10., Молгачева И.В., Андрюшнка И.А., Исхаков A.A. Методика определения гидразина в производственных водах ТЭС //Энергетик.-19?5. N 4.-С.29-31

•! i ! vl'c:! vc\ M.I. l-лрл'п'та !!. L:vi:isoM F.S. Selective spectrophotometry and F1A determination of Ai\I- and IieicioaruiiMtie. amines in mixtures// Absir. V int. Symp. «Kinetic fn Anaiyt.

- ri>em ». Moskow.-lV'J-S.- L 26

■<- 1-\»г.Г>чч M 1. Oarnsumn S Y , Evgen'yeva 11, Budnikov G.C Flow-injection analysis oflly-■.ha/ii'.e ami us v/istiuau! asdinitivbcnzofurazan derivatives// Abstr. V in!. Symp «Kir,ctie in •Wlvt Cbcr.i.ft. Moskuw.-»y95.-i'. 42

: - l'\iicn'yev \! I . Gannonm S Y., Evgen'yeva 11. Detector tubes for the determination of )tai-au'ous aiylan:;::« m ait ■■'/ Abstr V Int. Symp. «Kinetic in Anaiyt. Chem.». Mosko\v.-1995 -P 19

"■1 Епгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Трубником Г.Г, Евгеш.ева Ч.И., Погорельцев В.И , Емельянов В II, рудников Г.К., Палпмухаметопл Д.А Спектрофотомстрнческое определение фосфабснзнда и биологических жидкостях // Хпм.-фарм жури.-1995 -Т.29, N 8. С.59-62.

45. Evgcnyev М I. Garmonov S.Y., Evgenyeva 1.1., Budnicov G.K. Determination of Hydrazine dertvRtivw by flow-Icjcctfon anatvw with photometric detection tt Talanta.-1995.-V.42, Ж>10,-

P. 1455-1469'

46. Евгениев M.H., Еагеньееа И.И., Левннсои Ф.С. Проточно-ннжекцнонное «"редедецие ариламииоа с фотометрическим' детектированием //Заводск. лаборатория,-1996,-Т.62, Ла11. -С.715-718.

47. Евгсны-а М.И., Гармонов С.Ю., Еигсньева И.И. Проточные методы в контроле качества лекарственных препаратов // Тез. докл. 111 Росснйск. нац. коиг. «Человек и лекарство». М, Фарммединфо.-199б.-с.306

48. Евгеньез М И., Гармонов С.Ю., Евгеньева И.И., Буд>шков Г.К. Применение 4-хлор-5,7-лш!нтрооею-2,1.3-оксадназола в проточно-инжекцнонном анализе замешенных гидразина И Журн.аналит.хн.мнн -¡096.-Т.51, "з7. -С.715-720.

49. Евгениев М.И , Гармонов С.¡О, Медведев В.В. Автоматически:; анализ анилина и ач замещенных в воздушных средах // Заводск. лабораторня,-199б.-Т,62, №3. -С.8-10.

50. Evgen'yev М.!., Garmonov S.Y., Evgen'yeva 1.1., Lcvinson F.S., Pobedimsky D O Test-methods for visual and chromatographic determination of toxic aminocompounds in air // Proceed. 2-nd Intern. Symp. «Chromatography and Spectroscopy in Environmental analysis and toxicology» St. Petersburg.-1996. L3a-5

51. Evgen'yev M.I., Evgen'yeva I.I., .Moskva N.A., Levinson F.S. Selective flow-injection and spectrophotometric determination of Aryl- and Heteroaromatic amines // Proceed. 2-iv' Intern Symp. «Chromatography and Spectroscopy in Environmental analyses and toxicology); St.Petersbtirg.-I996.-P.79

52. Evgcn'yev M.I .Garmoriov S.Y , Evgen'yeva I.LContinuous automatic analysis of aniline and its substituted in air with photometric detection // Proceed. 2-nd Intern. Symp, '^Chromatography and Spectroscopy in Environmental analysis and toxicology». St.Petersburg.-199G -I1.;-: I

53. Evgen'yev M.I.,Garmonov S.Y., Evgen'yeva 1.1. Fiow-ittjeciioii determination .»'Hydrazine and its substituted with spectrophotometric detection in Biological fluids, drugs and waste waters // Proceed. 2-nd Intern. Symp. «Chromatography and Spectroscopy in Environmental analysis and toxicology». St Petersburg.-1996.-P.82

54 Evgen'yev M ¡..Garmonov S.Y., Evgen'yeva ¡.I., Pogoretaev V.I. Chromatographic rtnd «pec-trophotometric determination of pher.otype of substance biotransformation accjdinu to acetyh-iion

type // Proceed. 2-nd intern. Synip. «Chromatography and Spectroscopy in Environmental analysis and toxicology». St.Petersburg.-1996.-P.84

55. Евгепьев МИ., Гармонов С.Ю., Погорельцев В.И., Куртбелилова Х.И., Вашшухаметова Д.А. Определение фенотипа ацетнлирозання для терапевтического мониторинга лекарственных средств // Клнпич. лаборат. диагностика.-1996 N 5.-С.24-27.

• 56 Evgen'yev M.I.,Garmonov S.Y., Pogoreltzev V.I., Valimuchametova D.A. Monitoring of antial-coho! phosphabenzid preparation in Human biosubstrates // Pioceed. Int. Conf. «Neurochemistry and Pharmacology of Drug Addiction and Alcoholism". St.Petersburg.-l996. P.82

57. Евгеньев М.И., Лештсон Ф.С., Евгень^ва И.И. Способ определения ароматических аминов и воздухе // Патент РФ N 2052190 опубл. БИ N 1,1996

58. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Евгеньева И.И., Левинсон Ф.С., Победимский Д.Г. Индикаторные трубки для линейно-колористического и хроматографического определения токсичных амииосоедииешш в воздухе II Тез. докл. Всерос. конф. «Экоаиалитнка-96». Краснодар.-1996 -с.282