Синтез 4,4-диметокси-2,3,5-трихлор- и 3,4,4-триметокси-2,5-дихлорциклопент-2-ен-1-онов, свойства и применение тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.03 ВАК РФ
|
Кислицина, Ксения Сергеевна
АВТОР
|
||||
|
кандидата химических наук
УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ
|
||||
|
Уфа
МЕСТО ЗАЩИТЫ
|
||||
|
2009
ГОД ЗАЩИТЫ
|
|
02.00.03
КОД ВАК РФ
|
||
|
|
||||
На правах рукописи
КИСЛИЦИНА КСЕНИЯ СЕРГЕЕВНА
СИНТЕЗ 4,4-ДИМЕТОКСИ-2,3,5-ТРИХЛОР- И 3,4,4-ТРИ-МЕТОКСИ-2,5-ДИХЛОРЦИКЛОПЕНТ-2-ЕН-1-ОНОВ, СВОЙСТВА И ПРИМЕНЕНИЕ
02.00.03 - Органическая химия
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук
Уфа-2009
003489949
Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте органической химии Уфимского научного центра РАН
Научный руководитель: кандидат химических наук,
доцент
Иванова Надежда Александровна
Официальные оппоненты:
доктор химических наук, профессор Куковинец Ольга Сергеевна
кандидат химических наук, доцент
Байбулатова Наиля Зиннуровна
Ведущая организация: Учреждение Российской
академии наук Институт нефтехимии и катализа РАН
Защита диссертации состоится 22 января 2010 г. в 1400 часов на заседании диссертационного совета Д 002.004.01 в Учреждении Российской академии наук Институте органической химии УНЦ РАН по адресу: 450054, Башкортостан, г. Уфа, проспект Октября, 71, зал заседаний, e-mail: chemorg@anrb.ru, телефакс: (347) 2356066
С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Уфимского научного центра РАН и с авторефератом на сайте http://www.chem.anrb.ru.
Автореферат разослан 22 декабря 2009 г.
Ученый секретарь диссертационного совета доктор химических наук, профессор ■— Валеев Ф.А.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Среди многочисленных биологически активных соединений, содержащих в своей структуре циклопентеноновые фрагменты, особый интерес представляют природные хлорсодержащие циклопентеноны, проявляющие антираковые, антивирусные, фунгицидные, гербицидные и др. виды активности. Представители оригинальной серии трихлорцикло-пентеионов*, ранее синтезированные в лаборатории из гексахлорцикло-пентадиена (ГХЦПД), оказались весьма привлекательными в качестве базисных синтонов в синтезе биоактивных соединений циклопентенонового типа, в том числе, аналогов хлорвулонов, простагландинов и др. Поэтому исследования, направленные на разработку практичных вариантов синтеза хлорциклопентенонов и раскрытие их синтетического и фармакологического потенциалов, безусловно, актуальны и представляют научный и практический интерес.
Настоящая работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Института органической химии УНЦ РАН по теме: «Синтез и исследование хлорсодержащих циклопентаноидов и родственных структур, модифицированных простаноидов, таксоидов, эпотилонов и их аналогов» (№ государственной регистрации 01.20.00.13595), а также при финансовой поддержке программ РФФИ-Поволжье (грант № 08-03-99012 р_офи) и Федерального Агентства по Науке и Инновациям (Госконтракт 02.512.12.2015) и контракта с АН РБ №11 ГНТП РБ «Химические технологии и новые материалы для инновационного развития РБ» по теме «Новые антивирусного и противоопухолевого действия карбануклеозиды, 15-дезокси-дельта(12,14)-простагландин 1(2) и родственные соединения».
Цель работы. Разработка синтетических подходов к новым разнотипно функционализированным оксигенированным хлорциклопентенонам, изучение свойств и возможностей их использования в конструировании биоактивных циклопентаноидов, а также синтез и создание лекарственной формы 11-дезоксимизопростола - простагландиновой компоненты разрабатываемого препарата для гинекологии.
Научная новизна н практическая ценность работы. Разработан практичный «однореакторный» метод синтеза 4,4-диметокси-2,3,5-трихлор-и 3,4,4-триметокси-2,5-дихлорциклопент-2-ен-1-онов из ГХЦПД.
Кислотным гидролизом 4,4-диметокси-2,3,5-трихлорциклопент-2-ен-1-она получено новое производное 1,2,4-циклопентантриона - 3,5-дихлор-1,2,4-циклопентантрион.
Взаимодействием 4,4-диметокси-2,3,5-трихлор- и 4а-гидрокси-2,3,5/3-трихлорциклопент-2-ен-1-онов с урацилом синтезированы новые «яр2-связанные» карбануклеозиды.
Ахметвалеев Р.Р,, Акбутина Ф.А., Иванова H.A., Мифтахов М.С. Изв. АН Сер. хим. - 2001. - Т. 9. - С. 1417.
Разработан синтез новых производных мизопростола PGB-типа.
В результате биологических испытаний синтезированных соединений установлено, что 11-дезоксимизопростол обладает высокими утеротони-ческой (сравнимой с мизопростолом) и антиагрегационной (сравнимой с Вазапростаном) активностями (группа новых лекарственных средств
лаборатории биоорганической химии___ИОХ___УНЦ РАН),__а___ряд---
синтезированных хлорсодержащих циклопентенонов проявляют значительную антилизоцимную, антикарнозивную и бактерицидную активности в отношении Klebsiella pneumoniae и Staphylococcus aureus (Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН г. Оренбург).
Разработана таблетированная лекарственная форма для бинарного (простагландин+стероид) препарата для гинекологии и осуществлен выпуск опытной партии.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы представлены на V Юбилейной всероссийской научной Internet-конференции «Интеграция науки и высшего образования, в области био- и органической химии и биотехнологии» (Уфа, 2006), X Молодёжной школе-конференции по органической химии (Уфа, 2007), XLV Международной научной студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс» (Новосибирск, 2007), 18 Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Москва, 2007), Международной конференции по органической химии «Химия соединений с кратными связями» (Санкт-Петербург, 2008), VIII Региональной конференции для студентов, аспирантов и молодых ученых по математике, физике и химии (Уфа, 2008), Международной конференции по химии «Основные тенденции развития химии в начале XXI века» (Санкт-Петербург, 2009), Международной конференции «Новые направления в химии гетероциклических соединений» (Кисловодск, 2009), Всероссийской конференции по органической химии (Москва, 2009), Итоговой конференции по результатам выполнения мероприятий за 2009 год в рамках приоритетного направления «Живые системы» ФПЦ «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 20072009 годы» (Москва, 2009).
Публикации. По теме диссертации опубликованы 5 статей, 4 из которых - в журналах, рекомендованных ВАК, тезисы 10 докладов и получен 1 патент.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, литературного обзора на тему «5,5-Диметокси-1,2,3,4-тетрахлорциклопентадиен в реакции [4+2]-циклоприсоединения и синтезе функционализированных трихлорциклопентенонов», обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка литературы. Работа изложена на iS'Q страницах, содержит 2 таблицы и приложение. Список цитируемой литературы включает 168 наименований.
Соискатель выражает глубокую благодарность доктору химических наук, профессору Мифтахову Майсуру Сагарьяровичу за постоянное внимание, консультации и поддержку при выполнении работы
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
В синтетических подходах к биологически активным молекулам цикло-пентаноидного типа перспективными и часто используемыми базисными исходными являются соответствующим образом функционализированные циклопент-2-ен-1-оны. Полученные ранее в нашей лаборатории из диметок-сипроизводного ГХЦПД 2 максимально и разнотипно функционализированные оксигенированные хлорциклопентеноны 3-5 обладают высоким синтетическим потенциалом и весьма перспективны для последующего разностороннего приложения.
а .С1 МеО ОМе м
а^Х^а си^ЛуС!
СМа сГТ°)
сЛтодь \-f-0\k
1 ^2 \ 5 о ^ OR
СГ 1"0№ 0,\fc 0№ 4 §
R = апкенил, арил, фурил, алленил, бензил и др.
Наличие в них дифференцированных кетофункций, енонового фрагмента, разнотипных sp2- и зр3-связанных атомов хлора даёт возможность осуществления разнообразных регио- и стереоселективных трансформаций и использования их в синтезе биоактивных циклолентаноидов.
Химические свойства и аспекты приложения в направленном синтезе хлорциклопентенонов 3 и 5 хорошо изучены, в то же время трихлорцикло-пентенон 4, ввиду его малой доступности, практически не исследован.
Первая часть диссертационной работы посвящена разработке практичных вариантов синтеза соединения 4, изучению типовых для хлорциклопентенонов реакций и поиску биоактивных структур.
1. «Опе-pot» синтез 4,4-диметокси-2гЗ,5-трихлор- и 3,4,4-трнметок-
си-2?5-дихлорциклопент-2-ен-1-онов из ГХЦПД
Предложенный нами метод получения указанных в заглавии
соединений базируется на известном свойстве диметоксипроизводного 2 при действии избыточного количества МеО-аниона вступать в реакцию
последовательного замещения атомов хлора с образованием три- и
тетраметоксипроизводных б и 7 и, как нами впервые было показано, соответствующего пентаметоксипроизводного 8 (схема 1).
Полученные соединения 6-8 представляют интерес в качестве предшественников хлорциклопентенонов 4 и 9. Действительно, кислотным гидролизом (50%-ная Н2504, 60°С) с высокими выходами они были трансформированы в хлорциклопентеноны^целевой^ихлорцйклопентенон 4 и новый дихлорциклопентенон 9. Примечательно, что в этих условиях в тетра- и пентазамещенных 7 и 8 гидролизовалась лишь одна диметилкетальная группировка.
Схема 1
I}{
МеО ОМе МеОч ОМе МеО ОМе ,а с\ V .а
сг с.
МеО. ОМе СЦ V -С1
, , ОМе 6 ОМеС^76ме Ме°
ОМе ОМе
Т7
1о
,С1
а
-ОМе ОМе
МеО
С1
-ОМе , ОМе
Модифицировав методику проведения опыта, а именно, проводя реакцию нуклеофильного замещения хлора и гидролиз последовательно в одной и той же колбе, нам удалось разработать простой и практичный однореакторный способ получения указанных хлорциклопентенонов из ГХЦПД. Методика позволяет получать соединений 4 и 9 в мультиграммовых количествах.
Схема 2
1. КОН, МеОН, 55°С, 10 Ь;
С1
2. НзО+, 60°С, 8 Ь С1/ ¿м°еМе 4,75 %
1. КОН, МеОН, 70°С, 20 И;
2. НзО+, 60°С, 5 Ь
Оу,
/-/-ом
_ -ОМе МеО' ¿Ме 9, 70 %
Располагая достаточными количествами хлорциклопентенонов 4 и 9, мы приступили к исследованию их свойств с целью получения набора
полигетерофункционализированных циклопентенонов и изучения их химических и фармакологических свойств.
1.2. Восстановительные трансформации три- и дихлорциклопентемонов
Ранние исследования показали, что результат восстановительного дехлорирования хлорциклопентенонов зависит как от применяемого восстановительного реагента, так и от структуры исходного соединения.
1.2.1. Восстановительное дехлорирование хлорциклопентенонов СгС12 и Хп
Известно, что СгС12 успешно применяется для восстановительного дехлорирования а-галоидкетонов. Как и ожидалось, взаимодействие трихлорциклопентенона 4 с СгСЬ с хорошими выходами привело к соответствующему дихлорциклопентенону 10. Однако, в случае триметоксипроизводного 9 с невысоким выходом (10-15%) неожиданно было получено соединение 11 (схема 3).
Схема 3
О О
С А С1ч
Ь . 10.50% + 9,10%
ТУ
{- ОМе »—/-ОМе
а' ОМе О ОМе
10,90%; ±
МеО ОМе МеО ¿Ме МеО ¿Ме .
Д, 10-15% 9 12,88%
а. СгС1га^ Ме2СО, 20°С, 3 Ь; Ь. гп^Н4С1-МеОН, 64°С, 1 Ь Структура последнего доказана с помощью спектров ЯМР *Н и 13С. Так, в спектре ЯМР *Н присутствуют два синглета при 3.41 и 4.25 м.д., соответствующие эр3- и зр2- связанным МеО-группам. В спектре ЯМР 13С этим группам соответствуют сигналы при 56.39 и 58.69 м.д. Подтверждением структуры соединения Ц является появление в спектре ЯМР 13С сигнала в сильном поле (73.35 м.д.), соответствующего атому С-4.
При восстановлении соединения 4 с помощью цинковой пыли в присутствии ЫН4С1 наряду с дихлорпроизводным 10 наблюдалось образование метоксипроизводного 9. Замена МеОН на ТНЕ приводила к уменьшению конверсии, и выход соединения 10 не превышал 30%.
Метоксипроизводное 9 не реагировало с ' Zn в МеОН, однако в условиях 7п-ЫН4С1-МеОН превращалось в монохлорпроизводное 12 с высоким выходом (88%).
1.2.2. Особенности боргидридного восстановления
Легко протекающая реакция боргидридного восстановления соединения 4 с высоким выходом привела к стереохимически однородному цис-хлоргидрину 13. Наблюдаемый стереохимический результат реакции обусловлен практически полным стерическим контролем направления атаки реагента атомом С1 при С-5.0 г/нс-ориентации заместителей при С-1 и С-5 в хлоргидрине 13 свидетельствует значение J¡¡ 5.0 Гц в спектре ЯМР 'Н. Полученный хлоргидрин 13 оказался неустойчивым и при стоянии в растворе частично, а в условиях кислотного гидролиза (ая- НС1-Ме2СО) полностью подвергался декетализации, сопровождающейся цис, трансизомеризацией. В результате данной реакции основным продуктом является транс-хлоргидрин 14Е 2.5 Гц). Содержание соответствующего цис-изомера согласно значениям интегральных интенсивностей в спектре ЯМР 'Н реакционной массы, не превышает 10% (схема 4).
Схема 4
О ОН ОН ОН
а. ^ВН4, МеОН, 0°С, 1 Ь (95%); Ь. НзО+, Ме2СО, 20°С, 2 Ь (91%)
Аномальная самопроизвольная декетализация соединения 13, по-видимому, обусловлена внутримолекулярным содействующим влиянием гидроксильной группы.
Реакция восстановления метоксипроизводного 9 также приводила к соответствующему г/ыс-хлоргидрину 15 (.//.з 6 Гц), но в более жёстких условиях (схема 5). В отличие от производного 13, соединение 15 не подвергается самопроизвольной декетализации.
Схема 5
^ВН4, МеОН,
50°С, 2 ч }—ОМе
МеО' ¿Ме Мс0 ОМе
15,85%
Реакция боргидридного восстановления циклопентендиона 16, приводящая к образованию цис,цис-циклопентендиола 1_7, была описана в более ранней публикации сотрудников нашей лаборатории
Аналогичная реакция родственного циклопентенонового хлоргидрина 14 привела к иному результату. В ходе восстановления
* Гималова Ф.А., Егоров В.А., Валеев Р.Ф., Мифтахов М.С. Ж. орг. химии. -2007. - Т. 41. -Вып. 2.-С. 312.
гидроксициклопентенона 14 (Е/2=9:1) наблюдалось изменение соотношения полученных изомерных диолов 17 и 18 до 2:1 (определено по величине интегральных интенсивностей сигналов протонов Н-1, Н-4 и Н-5 в спектрах ЯМР 'Н смеси диацетатов № и 20, полученных с 65% выходом ацетилированием соответствующей смеси диолов).
Схема 6
С1.
о он
'Ч-Ау0' ИаВН,,, ЕЮН, >_/ 0°С, 1 И. 40% «—/
° И ° ° пон
о ои оя
СГон 0 С, 1Ь, 58 /о 0У^*0ц 2:1 С|/ '0К м,ея=9:1 Ас20,Г12.К=Н Ас20,П8, К=Н
Ру 12> К=Ас Ру 20, К=Ас
Характеристичным в отнесении вицинального цис- и транс-дизамещения в циклопентенах (и циклопентанах) является значение КССВ протонов при этих заместителях, причем большее значение КССВ (5-6 Гц) наблюдается в случае г/ис-дизамещения, и меньшее значение (2-4 Гц) характерно для транс-дизамещения.
Таким образом, боргидридное восстановление кетоспирта 14 сопровождается изомеризацией, приводя к смеси стереоизомерных цис.цис-и цис, /лрднс-трихлорциклопентендиолов 17 и 18 в соотношении 2/Е= 2:1.
2. Реакции 4,4-диметокси-2,3,5-трихлор- и 3,4,4-тримстокси-2,5-дихлорциклопент-2-ен-1-онов с гетеронуклеофилами
Хлорциклопентеноны 4 и 9 являются активными акцепторами михаэлевского типа и легко вступают во взаимодействие с различными К-, О- и Б-нуклеофилами по Ас^Е механизму, приводя к соответствующим 3-замещенным производным.
2.1. Реакции с ]Ч-нуклеофилами
Подобно соединениям 3 и 5, реакции трихлорциклопентенона 4 с ациклическими аминами в МеОН в присутствии КОН протекают гладко и региоспецифично, давая енаминокетоны 21 и 22.
Реакция трихлорциклопентенона 4 с оптически активным (+)-а-метилбензиламином (С6Н6, 20°С) приводила к продукту замещения 23, представляющему собой неразделяемую на 8Ю2 смесь диастереомеров, о чем свидетельствовало удвоение сигналов в спектре ЯМР |3С практически всех атомов углерода, максимальное различнее ХС (Д 0.9 м.д.) наблюдалось для ЫСН-группы.
-ОМе Ме21Ч" ¿ме
21,66%
a. Ме1ЧН2*НС1 (5 еф, КОН, МеОН, 20°С, 4 Ь;
b. Ме2ГШ*НС1 (2 еф, КОН, МеОН, 20°С, 4 Ь;
c. (+)-РЬСН(СН3)МН2 (2 еф, С6Нб, 20°С, 4 Ь
Реакции трихлорциклопентенона 4 с циклическими аминами в МеОН легко протекали при 20°С, приводя за 15-30 мин к соответствующим енаминам 24-27 с выходами от умеренных до высоких.
Следует отметить, что аналогичная реакция дихлорциклопентенона 10 приводила к продуктам с несколько меньшими выходами, чем в случае с трихлорциклопентеноном. Вероятно, это обусловлено активирующим влиянием атома хлора при С-5 в молекуле циклопентенона 4 (схема 8).
Схема 8
.с
1 -ОМе /""Т ОМе 24,55%
'У пм>
С1
О
ОМе ОМе
25,92%
С1 ОМ
ОМе ОМе
41х=сц 10,Х=Н
, -ОМе ОМе
а.СЗМН (2-3 е(Й, МеОН, 20»С, 20 пип
27, 55%
2.2. Реакции с О-, Б- и Р-нуклеофилами
С целью расширения круга нуклеофилов в реакцию с трихлорциклопентеноном 4 были введены О-, Б- и Р-содержащие нуклеофилы. Как следует из результатов опытов, РЬБШ и МеОК реагировали с трихлорциклопентеноном 4 по обычной схеме С-3-присоединения-отщепления, приводя к винилоговым метиловому и фенилтиоэфирам 9 и 28 с высокими (96% и 88%, соответственно) выходами.
Следует отметить, что взаимодействие нейтрального электронодонорного типа нуклеофила (ЕЮ)3Р протекало по схеме 8М2
замещения атома С1 при С-5 с образованием фосфоната 29 с умеренным выходом.
Схема 9
О о о
СкА'С1 ЬС1\ЛуС' а СкАС'
У-ОМе У—/-ОМе ' /—/-ОМе
С1 ОМе Ме° ОМе
28,96% 1 9,88% С /
О К С1у11 Р(ОЕ1)2
/-/-ОМе а. КОН, МеОН, 20°С, 2 Ь ; С1 ОМе Ь. РЬвН, МеОН, MeONa, 20°С, 1 Ь ;
29,40% с. (ЕЮ)3Р, McCN, 50°С, 3 Ь
Дихлорциклопентенон 10 в реакции 8-кетовинилирования показал меньшую активность: выход целевого фенилтиопроизводного 30 составил 85%.
Схема 10
О
С1
1>Ь8Н, МеОН,
/-ОМе McONa, 20°С, 2 Ь ^_/_0Ме С ОМе р,й ОМе
30,85%
3. Некоторые реакции производных 4,4-диметокси-2гЗ,5-трнхлор-циклопент-2-ен-1-она
3.1. Реакции окисления
Окисление тиофенилпроизводного 28 /гг-СРВА эквивалентным количеством окислителя приводило к сульфоксиду 31 - продукту неполного окисления, а при использовании четырехкратного избытка окислителя - к индивидуальному сульфону 32 с выходом 60%
Схема 11
О О О О
с А л а сц11 о сИ1 а ■
, /-ОМе у—/-ОМе V—/-ОМе У—/-ОМе
И* ОМе К ОМе ¿Ме т ОМе
28 31,Н=80РЬ(50%) 30 33,60%
32,К=802РЬ(60%) ~~
а. т-СРВА, СН2С12, 4 Ь, 0°С -»-20° С
При окислении тиофенилпроизводного 30 достичь 60%-ного выхода хлорсульфона 33, сравнимого с выходом хлорсульфона 32, удавалось лишь при использовании 6 экв. /п-СРВА.
3.2. Реакции восстановления
Дехлорирование диметиламинопроизводного 22 Хп при кипячении в МеОН за 2 ч с высоким выходом (80%) приводило к продукту С-5 дехлорирования 34.
Интересную закономерность мы обнаружили при изучении восстановительного дехлорирования дихлорсульфида 28 и сульфона 32. Так. кипячение соединения 28 с Хп в МеОН селективно приводило к его монохлорпроизводному 30, подтверждением строения которого является наличие в спектре ЯМР 'Н характеристичного сильнопольного сигнала СН2-фуппы при 2.77 м.д. При дехлорировании сульфона 32 в тех же условиях наблюдалось частичное десульфонирование, и наряду с ожидаемым 33 образовывалось значительное количество соединения 35.
Схема 12
О О
С1
"УУ01
>—/-ОМе
йьМеОН,
1 Ь - V ОМе
К ОМе К ОМе
22, 11ИЧМе2 34. 80%
28, И=8РЬ 30, К=5РЬ, 80%
О О
С1 гп-МеОН, а
-ОМе
64°С, 30 тиГ «_/-ОМе
+
РЬ02в ¿Ме РЬО^ ОМе
32 33,60%.
О реакции восстановления ЫаВН4 метоксипроизводного 9, приводящей к соответствующему г/ие-хлоргидрину (У/^ 6 Гц), см. разд. 2.2.2.
Кетогруппа в тиофенилпроизводном 28, так же как и в хлорцикпо-пентеноне 4, при действии №ВН4 легко восстанавливается с образованием стереохимически однородного !/мс-хлоргидрина 36 Цц 5.5 Гц). Последний при хранении в растворах, как и хлоргидрин 13, претерпевает самопроизвольную декетализацию с образованием кетоспирта 37.
Схема 13
О ОН ОН
с А .а
счА/а
^ \-1 ом
^ВН4, МеОН, .. ,
4 - " '-ОМе
50°С, 2 ч ¿Ме
36,70% 37
4. Взаимодействие 4-гидрокси-2гЗ,5-трихлорциклопент-2-ен-1-она с IV- и 8-нуклерфилами
Как известно, 3-гидроксициклопент-2-ен-1-оны широко используются в синтезе простагландинов «купратным» способом по схеме тройного
конвергентного сочетания. Реакции сопряжённого присоединения нукпеофилов к хлорсодержащим гидроксициклопентеноном типа 14 не исследованы. Поэтому представлялось интересным изучить химическое поведение 4-гидрокси-2,3,5-трихлорциклопент-2-ен-1-она 14 в реакциях с нуклеофильными агентами.
Нами были исследованы реакции гидроксициклопентенона 14 с Ме2>Ш, Е12ЫН, РИБН и предложены критерии спектрального отнесения полученных диастереомерных Ы-содержащих циклопентеноновых хлоргидринов. Показано, что исследуемое соединение 14 (Е/2=9:1) гладко реагирует С этими нуклеофилами по схеме Лс^Е-замещения по наиболее активированному винильному атому С1 при С-3, причём, взаимодействие в стандартных щелочных условиях в ходе реакции сопровождается частичной изомеризацией с образованием значительных количеств соответствующих 1/нс-изомеров. Этот процесс наиболее характерен для аминохлоргидринов 38а,Ь (£/2=2:1) (схема 14).
Схема 14
Е1,М1, МеОН, 20°С,.
СГ ОН 14,£#=9:1
2 Ь (54%)
Ме2ГШ* НС1, КОН,
Е1,М ОН ЕуЧ ОН 381)
38а О
2:1
МеОН, 20°С, 2 И (43%)
РЬБШ, МеОН, 20°С,
Ме^ . ОН
ОН
38с 3:1
38с О
Ме21Ч
1 Ь (96%)
38е
ОН
4:1 ЗМ и фенилтиопроизводных
Характеристичными в отнесении амино-циклопентенонов 38а-Г являются сигналы протонов при С-4 и С-5 с различающимся значением КССВ в спектрах ЯМР 'Н (7 1.4-1.8 Гц у трансизомеров и J5.3-5.8 Гц у цис-изомеров).
Сигналы протонов при С-5 более сильнопольны у /праис-изомеров 38а и 38с вследствие экранирующего влияния гуис-вицинально расположенной гидроксильной группы. В спектрах ЯМР |3С цис- и «ра//с-изомеров 38 также характеристичны сигналы С-4 и С-5. Они более сильнопольны у минорных г/ис-изомеров 38Ь,с1 из-за действия эффекта стерического сжатия.
Таким образом, отличительной особенностью изученных реакций Ы-хлор(тио)винилирования ¡/ис,ш/за;/с-хлоргидрина 14 является образование значительных количеств г/ис-аддуктов 38Ь,с1Х Этот факт можно объяснить енолизацией соединений 14 в условиях реакции и отсутствием стереоселективности на этапе протонирования диенолятов В.
Х= С1, N1*2, БРЬ
5. Синтез 5-гидроксиметилпроизводных трихлорциклопентенонов
3 и4
С целью С-5 С-функционализации и получения новых циклопентеноновых блоков для карбануклеозидов, . содержащих гидроксиметильную группу, была изучена реакция альдольной конденсации хлорциклопентенонов 3 и 4 с формальдегидом.
Кипячением трихлорциклопентенонов 3 и 4 с 1.5-2.0 экв. параформа в ТГФ в присутствии К2СО3 были получены целевые 5-гидроксиметилпроизводные 39-41. Следует отметить, что выход бициклического этиленкеталя 41 был несколько выше, чем соответствующего метоксикеталя 39 (схема 16).
Схема 16
О О О
(СН2Р)П;Ме01?УуС' (сн2о)п,таг}СУДу^;он
/—Г"ОМе К2СО3 У—/-ОМе К2СО3
Ме° ОМе СГ ¿Ме С1 ¿Ме
М, 50% 4 39,68%
а\А/С1 С|\Л^ои
УУ (СН20)п,Т1ГГ, Г-а
3 ^ 41,76%
При замене растворителя на МеОН наблюдали замещение атома С1 при С-3 на МеО-группу, приводящее к соответствующему 3-метоксизамещенному 40.
Попытка трансформировать полученные метиленоксипроизводные 3941 в соответствующие эпоксипроизводные в стандартных условиях (К2СО3 или ЫаН, ЮТ, 20°С—>65°С) удалась лишь в случае триметоксипроизводного 41. Так, из дихлорциклопентенона 4®, используя ИаН в ЮТ при комнатной температуре (30 мин) с невысоким выходом (25%) получили эпоксид 42 (схема 17).
VVs0"
CI.
NaH, THF,
/—f-OMe 20°C, 30 min Me° OMe Me° OMe
40 42,25%
OMe
6. Гидролиз хлорциклопентенонов 4 и 9. Сиитез 3,5-днхлор-1,2,4-циклопентантриона
Гидролиз кетальной функции исходного соединения 4 удалось осуществить выдерживанием его в конц. Н2504 при 0°С, в. результате с высоким выходом был выделен симметричный дикетон 43.
Схема 18
О
С С1
О
С1 С1
H2SO4, о°с
ОМе
С1 ОМе 4
С1 О 43, 90%
Гидролиз триметоксипроизводного 9 разбавленной H2SO4 при нафевании привёл с выходом 70% к новому 3,5-дихлорзамещенному 1,2,4-циклопентантриону 44. Также показана возможность его получения непосредственно из ГХЦПД, выход 44 в этом случае составил 32%.
Схема 19
МеООМе <ГЧ) НС)' О <Г \]
9 UMe 44 44, R=H
CH2N2^ R=Me
а) 18 N H2S044Üoxan (1:1), U0°C, 20 min (56%); b) 40% H2S04-Me0H (1:2), 75°C, 2 h (70%); с) 1.10 eq. KOH-MeOH, 70°C; 2. conc.H2S04,75°C, 8 h (32%).
о о 9H
w ^
/ % /7 % tf %
ov .О О О О О
44а. Х=С1 44, Х=С1 Ш Х=С1
46а, Х=Н 46, Х=Н 46Ь,Х=Н
Согласно литературным данным, циклопентантрион 46 может существовать в форме енолов 46а,Ь, из которых форма 46а, безусловно, выигрышна по сравнению с 46Ь из-за отсутствия электростатического отталкивания между смежными карбонилами и стабилизации за счет образования внутримолекулярной водородной связи.
______________Полученное дихлорпроизводное 44,— вследствие дополнительной
активации атомами хлора метановых протонов, ещё сильнее подвержено енолизации. Действительно, спектральные данные (однопротонные синглеты метанового протона при 5.00 м.д. и енольного гидроксила при 1.16 м.д. в спектре ЯМР 'Н и поглощение при 1614, 1714 и 3377 см'1 в ИК-спектре) и реакция с диазометаном указывают на его существование в виде енола 44а.
Полученный 3,5-дихлор-1,2,4-циклопентантрион 44 является новым представителем «оксокарбонов» и перспективен для использования в направленном синтезе, в частности, как и 1,2,4-циклопентантрион, в синтезе простагландинов.
7. Синтез новых полигетерофункционализированных карбанук-леозидов
В настоящее время в терапии вирусных инфекций перспективными являются средства на основе карбануклеозидов (анти-Н1У препараты: СагЬоук, АЬасаук, Еп1есау1г для лечения НБУ-инфекций и др.), которые по сравнению с обычными нуклеозидами химически и метаболически более стабильны.
Принимая во внимание склонность хлорциклопентенонов вступать в реакции замещения с различными гетеронуклеофилами, ранее нами была продемонстрирована возможность получения («/^-связанных» карбануклеозидов.
Продолжая исследования в этом направлении с целью оптимизации условий синтеза и дизайна целевых карбануклеозидов, мы модифицировали условия реакции и выделения продукта, что позволило за 40 мин (ранее -доЗ суток) достичь 100% конверсии трихлорциклопентенона и 60%-ного выхода целевого продукта. Взаимодействием урацила и его замещенных с другими трихлорциклопентенонами мы получи ряд новых аналогов карбануклео-зидов.
НО
АЬасау1Г СагЫтг
О
О
42: Х=\'=Н (а); Х=К, У=Н (Ь); Х=ОН, \'=Ме (с) а. Х1МЧаОН (1.5/1.5 еф, ТНЕ-Н20 (1:1), 70°С; Ь. Х11гЛЧаОН (1.5 е^1.5 еф, Шохап-Н20 (1:1), 95°С; с. ХИгЛЧаОН (1.5/3.0 еф, Шохап-Н20 (1:1), 95°С; (1. ХигЛЧаОН (1.5/3.0 еф, CHзCN-H20 (1:1), 95°С.
Совершенно неожиданным оказался крайне низкий выход (не более 7%) соединения 48, продукта взаимодействия урацила с хлорциклопентеноном 4, в условиях оптимальных для проведения аналогичной реакции урацила с трихлорциклопентеноном 3, а именно: кипячение в диоксане в течение 1 часа эквивалентных количеств трихлорциклопентенона 4 и урацила с двукратным количеством щелочи.
Подобные различия в результатах можно объяснить стерическими препятствиями, вызываемыми МеО-группами соединения 4 при подходе объёмистых реагентов к реакционному центру С-3 в ходе реакции. В соединении 3 подобная ситуация не наблюдается, поскольку диоксолановое кольцо находится в фиксированном, перпендикулярном относительно плоскости цйклопентенового кольца, положении. Взаимодействием урацила с хлорциклопентенонами 4 и 41 с невысокими выходами были получены новые карбааналоги нуклеозидов 49 и 50.
Схема 21
п
О
Схема 22
о
о
о
О
а. ИгЛЧаОН (1.5 ец/З.О ец), Шохап-Н20 (1:1), 95"С
Все полученные карбанукпеозиды представляют собой высокоплавкие кристаллические вещества. Синглетные сигналы протонов амидных групп в спектрах ЯМР 'Н синтезированных аддуктов, находящиеся в очень слабом поле (8-11 м.д.), свидетельствуют об N-1-замещении в урацильном цикле.
Таким образом, реакция хлорциклопентенонов с урацилом открывают
практичный____и_____эффективный путь—к—новым «¿//-связанным»
карбануклеозидам.
8. Практический аспект работы. Синтез 11-дезоксимизопростола и создание лекарственной формы для бинарного препарата (стероид + простагландин) для гинекологии
8.1. Синтез 11-дезоксимизопростола
Как известно, первым из внедренных в практику лекарственных средств на основе простагландинов (PG) является аналог PGEi - (±)-мизопростол Д. Препараты на его основе (Cytotec, Artrotec) эффективны при лечении индуцированных нестероидными противовоспалительными средствами гастропатий желудочно-кишечного тракта. Кроме того, в последнее десятилетие мизопростол очень активно используется в комбинированных средствах «антигестагенный стероид+простагландин» для акушерства и гинекологии, в качестве стероида используется высокомодифицированный стероид Мифепристон (Мифегин, RU 486).
О
Ме2\ Уч /Ч /Ч /С02Ме
ULi^, ?н
110 ОН
51, Мизопростол
1Ш 486 (Мифепристон, 1ддд/С°!Е'
Мифегин, Пенкрофтон) \ / ■
52, Дезоксимизопростол Несколько лет назад в нашей лаборатории было синтезировано
соединение сходной топологии - 11-дезоксипроизводное мизопростола 52. Несмотря на отсутствие фармакологически важной 11-окси-функции РОЕ, противоязвенное действие соединения 52 (испытано на 8 моделях язв) оказалось выше, чем у мизопростола. Кроме этого, по сравнению с мизопростолом полученный аналог оказался в 2 раза менее токсичным.
Отсутствие данных об утеротонических свойствах 11-дезоксимизопростола стимулировало нас изучить его утеротоническую активность и выяснить возможность использования 11-дезоксимизопростола 52 в качестве простагландиновой компоненты для создания отечественного комбинированного препарата для гинекологии.
Необходимое для данных исследований количество 11-дезоксимизопростола было синтезировано по ранее разработанной в лаборатории схеме «купратного» синтеза.
Приготовленный in situ из винилстаннана 55 купратный реагент высшего порядка 56 гладко реагировал с еноном 52 по схеме сопряженного 1,4-присоединения, приводя после кислотной обработки реакционной массы и хроматографической очистки «сырого» продукта к неразделимой на силикагеле C-16-эпимерной смеси целевого 52 с общим выходом 76-78%.
а. ==СН2М8Вг; Ь. Ме38Ю, 1ш, СН2С12; с. Ви35пН, ЛИ! 14; 4 Ме2Си(С1Ч)и2, ТЩ-; е . 56; Г. Н30+
В ходе наработки была оптимизирована стадия очистки, что сделало процесс выделения простагландина более технологичным. Так, предварительная флеш-хроматография продукта в виде силиловых эфиров 58 позволила намного эффективнее очистить продукт от примеси исходного енона 57 и «станнильных» остатков. Последующий кислотный гидролиз силильной группы и повторная флеш-хроматография давала целевой 11-дезоксимизопростол 52 с минимальными потерями и высокой степенью чистоты (согласно данным ВЭЖХ и ГЖХ).
8.2. Лекарственные формы 11-дезоксимизопростола
В гинекологической практике для родовспоможения и абортов на ранних стадиях беременности последовательно применяют таблетки Мифепристона и затем, по истечении 24 ч, таблетки мизопростола, в результате чего эффективность действия достигает более 95%.
На ОАО «Фармстандарт Уфа Вита» была получена опытная партия таблетированной лекарственной формы 11-дезоксимизопростола 52 с использованием глицирризиновой кислоты в качестве эффективно
Схема 23
О
58, R=SiMe3,OR 52, R=OH
клатратирующего и стабилизирующего агента, повышающего активность простагландина.
Простагландины серии Е проявляют антиагрегационные свойства. Например, на основе PGE) создан препарат Вазапростан, активно применяемый в виде внутривенных инъекций для лечения хронического облитерирующего атеросклероза нижних __ конечностей. Для изучения антиагрегационной активности 11-дезоксимизопростола нами была получена его натриевая соль и на её основе создана водорастворимая лекарственная форма для внутривенного введения. С этой целью первоначально щелочным гидролизом 11-дезоксимизопростола в стандартных (К2С03, Ме0Н-Н20/1:1) для подобных целей условиях была получена кислота 59, и далее её обработкой MeONa в безв. ТГФ - натриевая соль 60 (схема 24).
Схема 24
О
52 ОН r59,R=H,OH
b Чбо, R=Na а. К2С03, Ме0Н-Н20 (1:1) (64%); b. MeONa, TIIF.
8.3. Синтез PGB-аналогов мизопростола
В стабилизированных формах мизопростола даже до истечения сроков хранения наблюдается образование ряда продуктов распада. В ходе сравнительного изучения биологических свойств мизопростола и 11-дезоксимизопростола для оценки возможных примесей в обоих препаратах необходимы были образцы минорных побочных продуктов.
Для рацемического С-16 эпимерного мизопростола 52 это, в основном, 8,12- и 13,14-г/мс-изомеры, а также его PGB-аналог 6f.
Исходя из простых и доступных простагландиновых блоков -циклопентенона 57 и ацетиленового эфира 54 нами осуществлен оригинальный синтез этилового эфира 6Б. Ключевой стадией синтеза является хемоселективная конденсация литиевого производного ацетилена 61 с циклопентеноном 57. Продукт конденсации 62 в ходе очистки на колонке с Si02 частично изомеризовался в термодинамически более выгодный ениновый спирт 63: менее чем на 10% при предварительной обработке силикагеля Et3N и на 50% без таковой. Окисление изомеризованного спирта 63 с помощью РСС приводило к соединению 64. Более быстрый путь перехода 62 —> 64 - непосредственное? окисление адцукта 62 с помощью РСС. В обоих случаях соединение 64 получалось со сравнимо хорошим выходом. Заключительное восстановление ениновой системы соединения 64 Zn в МеОН приводило к целевому аналогу мизопростола 6£ (схема 25).
Было замечено, что восстановление ацетиленового производного 64 Ъл пылью в АсОН при комнатной температуре протекает медленно (для полной конверсии требовалось 18 ч) и в результате приводит к хроматографически (ТСХ) однородному веществу, однако, согласно данным ЯМР 13С, представляющему смесь целевого 66 и его насыщенного (РСВ0) аналога 65 в соотношении (1:4). Если восстановление проводить при кипячении, то за короткий период (30-40 мин) с • высокими (около 90%) выходом и селективностью (66:65,5:1) образуется целевой РвЕ^-аналог 66.
Схема 25
О
OSiMe,
ы OSiMe3 61
A/\/\/vC(№ а
57
ОН
A/\/\/\/C02Et _<L
vlw
но.
63,50%
ОН
о
65, 88%
66, 60%
a. MeLi, TIIF, -78°С->- 20°С; Ь. 61, THF, -78°С; с. Si02; d. РСС, СН2С12, -10°С; е. Zn, АсОН, 20°С, 18 h; f. Zn, АсОН, 100°С, 40 min
9. Биологическая активность синтезированных соединений
9.1. Биологическая активность 11-дезоксимнзопростола
В результате исследования утеротонической активности 11-дезоксимизопростола в опытах in vitro по методу Магнуса (на
изолированном роге матки небеременных крыс) обнаружено, что в дозе 100 мкг/кг 11-дезоксимизопростол обладает более выраженным по сравнению с мизопростолом утеротоническим действием.
Изучение влияния на агрегацию тромбоцитов in vitro на обогащенной тромбоцитами плазме человека (индукторы: растворы АДФ, адреналина, коллагена) показало, что 11-дезоксимизопростол в дозе 2х 10'6 г/л проявляет более выраженные антиагрегационные свойства, по сравнению с мизопростолом (агрегация, вызываемая АДФ) и сравним с действием
Вазапростана, известного и широко используемого в медицинской практике, антикоагулянта (агрегация, вызываемая коллагеном).
9.2. Биологическая активность хлорциклопент-2-ен-1-онов 3, 4 н их производных
-------------------------------------Трихлорциклопентеноны 3, 4 и ряд их производных (1_0, 22, 24, 25, 28,
30) были исследованы на антиоксидантную (АОА) и антимикробную активности и влияние на персистентные характеристики (антилизоцимную AJIA и антикарнозивную активности АКрА) микроорганизмов (Klebsiella pneumoniae и Staphylococcus aureus)
Показано, что исследованные соединения обладают достаточно низкой антиоксидантной активностью.
Сопоставлением двух рядов хлорциклопентенонов - этиленкетальных и диметоксикетальных - установлено, что наиболее активными являются соединения 1-го ряда, как в отношении АОА, так и в проявлении антиперсистентных свойств (АПС). Родоначальники этих рядов -соединения 3 и 4 проявляют одинаково высокую АЛА в отношении Klebsiella pneumoniae и среднюю - в отношении Staphylococcus aureus. Соответствующие дехлорированные аналоги этих соединений либо индифферентны, либо оказывают стимулирующее действие на персистентные свойства указанных микроорганизмов.
В ряду диметоксикетальных хлорциклопентенонов высокая (на 60% и более) АЛА в отношении Staphylococcus aureus обнаружена у 3-аминопроизводных 22,24,25.
Найдено, что большинство изученных соединений обладают антимикробными свойствами в отношении указанных микроорганизмов.
ВЫВОДЫ
1. Разработан эффективный однореакторный способ превращения гексахлорциклопентадиена в 4,4-диметокси-2,3,5-трихлор- и 3,4,4-триметокси-2,5-дихлорциклопент-2-ен-1-оны - синтетически ценные разнотипно функционализированные циклопентеноновые блоки.
2. Обнаружены особенности в превращениях хлорциклопентенонов и хлоргидринов:
- селективное образование 1,5-г^ис-хлоргидринов при восстановлении трихлорциклопентенонов NaBH4;
.- легкость кислотного гидролиза кетальной функции 1,5-цис-хлоргидринов, сопровождающегося цис, транс-изомеризацией;
3. Исследованы реакции 4,4-диметокси-2,3,5-трихлор- и 3,4,4-триметокси-2,5-дихлорциклопент-2-ен-1-онов и 4-гидрокси-5-хлорцикло-пент-2-ен-1-она с гетеронуклеофилами и предложены критерии спектрального отнесения полученных диастереомерных N-содержащих циклопентено-новых хлоргидринов.
4. Впервые кислотным гидролизом дихлорциклопентенона получен 3,5-дихлор-1,2,4-циклопентантрион, новый представитель «оксокарбонов», перспективных для использования в направленном синтезе.
5. Разработан синтез новых аналогов мизопростола PGB-типа.
6. В результате биологических испытаний обнаружено, что 11-дезок-симизопростол проявляет высокую утеротоническую и антиагрегационную активности, а ряд синтезированных хлорированных циклопентенонов обладает значительными антимикробным действием, антилизоцимной и антикарнозиновой видами активности в отношении Staphylococcus aureus и Klebsiella pneumoniae.
7. Для проведения предклинических исследований 11-дезоксимизо-простола разработана таблетированная лекарственная форма для бинарного (простагландин+стеровд) препарата для гинекологии и осуществлен выпуск опытной партии.
Основное содержание работы изложено в следующих публикациях
1. Ivanova N.A., Miftakhov M.S., Kislitsina K.S. Efficient one-pot synthesis of chlorinated cyclopentenones from hexachlorocyclopentadiene // Mendeleev Commun. - 2007. -№.11.- P. 306-307.
2. Иванова H.A., Кислицина K.C., Мифтахов M.C. Прямой синтез 4,4-диметокси-2,3,5-трихлор- и 3,4,4-триметокси-2,5-дихлорциклопент-2-ен-1-онов из гексахлорциклопентадиена и некоторые аспекты их реакционной способности // Журн. орг. химии. - 2008. - Т. 44. - Вып. 9. -С. 1271-1277.
3. Иванова H.A., Кислицина К.С., Торосян С.А., Мифтахов М.С. О реакциях 4-гидрокси-2,3,5-трихлорциклопент-2-ен-1-она с Me2NH, Et2NH и PhSH. Некоторые аспекты стереохимического отнесения в циклопентеноновых хлоргидринах // Журн. орг. химии. - 2008. - Т. 44. - Вып. 9. - С. 12781281.
4. Иванова H.A., Кислицина К.С., Мифтахов М.С. Об особенностях боргидридного восстановления 4-гидрокси-2,3,5-трихлорциклопент-2-ен-1-она//Журн. орг. химии. -2008. - Т. 44. - Вып. 5. - С. 772-773.
5. Иванова H.A., Кислицина К.С., Халикова Г.М., Мифтахов М.С. 2,3,5-Трихлорциклопент-2-ен-1-оны в синтезе новых «¿^-связанных» карбануклеозидов // VIII Региональная школа-конференция для студентов, аспирантов и молодых ученых по математике, физике и химии. Научные статьи. Уфа. - 2008. - С. 108-111.
6. Иванова H.A., Кислицина К.С., Мифтахов М.С. Способ получения 4,4-диметокси-2,3,5-трихлорциклопент-2-ен-1-она. Патент на изобретение № 2320637 от 27 марта 2008.
7. Иванова H.A., Кислицина К.С., Мифтахов М.С. Технологичный синтез хлорированных циклопентенонов из гексахлорциклопентадиена // V Всероссийская научная Интернет-конференция «Интеграция науки и
высшего образования в области био- и органической химии и механики многофазных систем». - Уфа. - 2006. - С.42.
8. Иванова H.A., Кислицина К.С., Мифтахов М.С. Взаимодействие 4,4-диметокси-2,3,5-трихлорциклопент-2-ен-1-она и его производных с некоторыми гетеронуклеофилами // Тезисы докладов X Молодежной конференции по органической химии. - Уфа. - 2007. - С. 121.
9. Иванова H.A., Гималова Ф.А., Егоров В.А., Миннибаева Э.М., Кислицина К.С., Усманова Ф.Г., Мифтахов М.С. Практичные синтезы хлорсодержащих циклопентанонов из гексахлорциклопентадиена и аспекты их применения в конструировании биомолекул // Тезисы докладов 18 Менделеевского съезда по общей и прикладной химии. -Москва.-2007.-С. 174.
10. Иванова H.A., Кислицина К.С., Мифтахов М.С. /я/?анс-4-Гидрокси-2,3,5-трихлорциклопент-2-ен-1-он. Некоторые аспекты реакционной способности // Тезисы докладов Международной конференции по органической химии «Химия соединений с кратными связями». - Санкт-Петербург. - 2008. - С. 158.
11. Иванова H.A., Халикова Г.М., Кислицина К.С., Мустафин А.Г., Мифтахов М.С. Синтез новых «Бр2-связанных» карбануклеозидов // Тезисы докладов VIII Региональной конференции для студентов, аспирантов и молодых ученых по математике, физике и химии. - Уфа. - 2008. - С. 166.
12. Иванова H.A., Кислицина К.С., Мифтахов М.С. Синтез 3,5-дихлор-1,2,4-циклопентантриона // Тезисы докладов VIII Региональной конференции для студентов, аспирантов и молодых ученых по математике, физике и химии. - Уфа. - 2008. - С. 167.
13. Иванова H.A., Кислицина К.С., Егоров В.А., Гималова Ф.А., Мифтахов М.С. Хлорсодержащие производные 1,2,3-циклопентантрионов // Тезисы докладов Международной конференции по химии «Основные тенденции развития химии в начале XXI века». - Санкт-Петербург. - 2009. - С. 345.
14. Иванова H.A., Халикова Г.М., Кислицина К.С., Мифтахов М.С. Синтез новых полигетерофункционализированных карбануклеозидов // Материалы Международной конференции «Новые направления в химии гетероциклических соединений». - Кисловодск. - 2009. - С. 470.
15. Иванова H.A., Кислицина К.С., Мифтахов М.С. Эффективный синтез новых аналогов мйзопростола // Тезисы докладов Всероссийской конференции по органической химии. - Москва. - 2009. - С. 198.
16. Мифтахов М.С., Востриков Н.С., Иванова H.A., Гималова Ф.А., Гимазетдинов А.М., Валиуллина З.Р., Кислицина К.С. и др. // Тезисы докладов Итоговой конференции по результатам выполнения мероприятий за 2009 год в рамках приоритетного направления «Живые системы». - Синтез соединений простаноидной и стероидной природы для Создания потенциальных лекарственных средств для медицины и ветеринарии. - Москва. - 2009. - С. 164.
^ Отпечатано с готовых диапозитивов в ООО «Пршп+»,
-' заказ № 220, тираж 100, печать л. 2Д 450054, пр. Октября, 71
