Синтез и изучение свойств пептидных производных протогемина IX, содержащих остатки полифункциональных аминокислот тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

Использованные сокращения.

Введение.

Литературный обзор.

1 Нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ.

2 Ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ.

3. Ингибиторы протеиназы ВИЧ.

4. Ингибирование процесса интегрирования вирусной ДНК в геном человека.

5. Перспективные направления в поисках новых ингибиторов развития ВИЧ-инфекции.

5.1. Ингибиторы процесса адсорбции ВИЧ.

5.2. Ингибиторы процесса проникновения ВИЧ в клетку.

5.3. Ингибиторы процесса «раздевания» ВИЧ.

6. Альтернативные подходы к подавлению ВИЧ-инфекции с использованием соединений природного происхождения.

Обсуждение результатов.

1 .Твердофазный синтез пептидов и геминпептидов по Fmoc-стратегии с применением полимера с 2-хлортритилхлоридной якорной группой.

2. Твердофазный синтез геминпептида (XXII) с использованием Вос-стратегии в сочетании с полимером Меррифилда.

3. Синтез пептидных производных протогемина IX классическим методом в растворе.

4. Биохимические и биологические испытания синтетических геминпептидов.

4.1. Исследование влияния геминпептидов на функционирование протеиназы ВИЧ-1.

4.2. Исследование ДНК-гидролизующей активности геминпептидов.

4.3. Исследование противовирусного действия синтетических геминпептидов.

4.4. Исследование интерферониндуцирующей способности геминпептидов.

4.5. Изучение взаимодействия гемина и синтетических геминпептидов с клеточной мембраной, клетками и транспортным белком крови.

Экспериментальная часть.

Выводы.

Создание эффективных и безопасных лекарственных препаратов для лечения вирусных и онкологических заболеваний является в настоящее время одной из первостепенных задач, стоящих перед современной наукой. С целью поиска потенциальных мишеней для химиотерапии заболеваний, вызванных вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), тщательным образом изучаются отдельные стадии репликативного цикла ВИЧ и этапы развития инфекции. В настоящее время в медицине реализуется несколько подходов к проблеме подавления вирусной инфекции. Основными из них являются химиотерапия, связанная с применением противовирусных препаратов прямого действия, в частности, блокирующих репликацию вируса, и иммуномодуляция, направленная на стимуляцию и укрепление иммунной системы организма. Схемы лечения, предлагаемые сегодня, как правило, включают комбинированную терапию с использованием нескольких препаратов с разными механизмами действия. Существенным недостатком большинства лекарственных средств, применяемых в медицинской практике, является их несовместимость с некоторыми другими лекарственными препаратами, а также ряд нежелательных побочных действий и токсических эффектов, возникающих при клиническом применении. Серьезную проблему представляет резистентность, развивающаяся в процессе применения противовирусных лекарственных средств.

В последнее время возрос интерес к соединениям природного происхождения, и среди них ведется интенсивный поиск противовирусных препаратов нового поколения, отвечающих всем необходимым требованиям по эффективности, высокоспецифичности, нетоксичности, а также объединяющих в одном соединении вируцидные и иммуномодулирующие свойства.

Известно применение порфиринов в качестве противоопухолевых средств. Интерес к производным порфиринов и их металлокомплексам также связан с обнаружением у них противовирусной, включая анти-ВИЧ, активности, в том числе и у протогемина IX. Понимание механизма противовирусного действия порфиринов, в частности гемина, может послужить основой для рационального дизайна эффективных препаратов. Перспективность этого направления подтверждается данными о высоким сродстве порфиринов и их производных ко многим клеточным органеллам, включая мембрану и нуклеиновые кислоты. Сообщалось о способности гемина участвовать в регуляции биохимических процессов клетки.

Ранее пептидные производные гемина использовались в качестве удобных моделей для изучения функционирования активных центров гемопротеидов, в частности гемоглобина. Была выявлена их способность обратимо связывать кислород, окислять

Синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД) - тяжелое заболевание, вызываемое вирусом иммунодефицита человека - ВИЧ, поражающим преимущественно иммунную систему. ВИЧ отнесен к семейству Retroviridae, подсемейству Lentivirinae [1]. Это сравнительно просто устроенный ретровирус, содержащий двухспиральную РНК и характеризующийся наличием в своей структуре особого фермента - РНК-зависимой ДНК-полимеразы (обратной транскриптазы). Известно 2 типа вируса: ВИЧ-1 и ВИЧ-2. ВИЧ имеет уникальную антигенную изменчивость, благодаря тому, что скорость его транскрипции значительно выше, чем у других вирусов. Это затрудняет диагностику и специфическую профилактику ВИЧ-инфекции.

Рис. 1. Схема развития ВИЧ инфекции в клетке.

Тщательным образом изучаются отдельные стадии репликативного цикла ВИЧ с целью поиска потенциальных мишений для химиотерапии данного вирусного заболевания и контроля за развитием ВИЧ-инфекции (рис.2). В процессе вирусной репликации часто бывает трудно различить вирусные белки, взаимодействующие с клеткой и белки самой клетки. Тесная связь многих этапов жизненного цикла вируса с метаболизмом клетки-хозяина затрудняет создание препаратов, которые избирательно подавляют репликацию вируса и в то же время минимально воздействуют на клетку.

Антитела

Блокаторы У Хемокины

CD4 CR-5

ИТТНК гранскриптаза ДНК \ tfc

Ингибиторы редуктазы

ДНК днк

Ингибиторы ' \ клетка Транскриптазы

Ингибиторы интегр

Ингибиторы протеазы

Интерфероны

- Антитела

Рис. 2. Группы препаратов, угнетающих различные этапы жизненного цикла ВИЧ.

выводы

1. Разработана новая модификация твердофазного метода синтеза геминпептидов с применением полимера с 2-хлортритилхлоридной якорной группой, Na-Fmoc- и co-Trt-защит функциональных групп пептидов.

2. Классическими методами в растворе и на твердой фазе осуществлен синтез ряда новых и известных геминпептидов, содержащих незащищенные остатки полифункциональных аминокислот.

3. Обнаружена способность гемина и геминпептидов ингибировать протеиназу ВИЧ-1 in vitro.

4. Показано, что геминпептиды обладают нуклеазной активностью in vitro.

5. Обнаружена способность геминпептидов ингибировать репликацию ВИЧ-1 в культуре клеток in vitro.

6. Выявлено иммуномодулирующее действие геминпептидов, а именно интерфероногенез.

7. В результате изучения пригодности геминпептидов для практического использования смоделировано их взаимодействие с бычьим сывороточным альбумином, основными типами клеток крови и клеточной мембраной. Показана перспективность дальнейшего развития исследований геминпептидов в качестве потенциальных лекарственных препаратов.

1. Воробьев А.А., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбакова A.M.// Микробиология./ М.: Медицина, 1998. 334 С.

2. Huang P., Farquhar D., Plunkett W. Selective action of 3'-azido-3'-deoxythymidine 5'-triphosphate on viral reverse transcripteses and human DNA polymerases.// J. Biol.Chem. 1990. Y.265. P.l 1914-11918.

3. De Clercq E. HIV-1-Specific RT inhibitors: highly selective inhibitors of human immunodeficiency virus type 1 that are specifically targeted at the viral reverse transcriptase.// Med. Res. Rev. 1993. V.13. P.229-258.

4. Richman D. D., Fischl M. A., Grieco M.H. The toxicity of azidothymidine (AZT) in the treatment of patients with AIDS and AIDS-related complex.// N. Engl. J. Med. 1987. V.317. P.192-197.

5. Browne M. J., Mayer К. H., Chafer S. B. 2', 3'-Didehydro-3'-deoxythymidine (D4T) in patients with AIDS or AIDS- related complex: a phase I trial.// J. Infect. Dis. 1993. V.167. P.21-29.

6. Yarchoan R., Perno C.F., Thomas R.V. Phase I studies of 2',3'-dideoxycytidine in severe human immunodeficiency virus infection as a single agent and alternating with zidovudine (AZT).// Lancet. 1988. №1. P.76-81.

7. Yarchoan R., Mitsuya H., Thomas R.V. In vivo activity against HIV and favorable toxicity profile of 2',3'-dideoxyinosine.// Science. 1989. V.245. P.412-415.

8. Meng T.-C., Fischl M. A., Boota A.M., Spector S.A. Combination therapy with zidovudine and dideoxycytidine in patients with advanced human immunodeficiency virus infection.//Ann. Intern. Med. 1992. V.116. P. 13-20.

9. Yarchoan R., Pluda J.M., Thomas R.V. Long term toxicity/activity profile of 2',3'-dideoxyinosine in AIDS or AIDS -related complex.// Lancet. 1990. V.336. P.526-529.

10. Lambert J.S., Seidlin M., Reichman R.S. 2',3'-Dideoxyinosine (DDI) in patients with the acquired immunodeficiency syndrome or AIDS -related complex.// N. Engl. J. Med. 1990. У322. P.1333-1340.

11. Butler K.M., Husson R.N., Bailis F.M., Brouwer P. Dideoxyinosine in children with symptomatic human immunodeficiency virus infection.// N. Engl. J. Med. 1991. V.324. P.137-144.

12. Kohlstaedt L.A., Wang J., Friedman J.M., Rice P.A., Steitz T.A. Crystal structure at 3.5 A resolution of HIV-1 reverse transcriptase complexed with an inhibitor.// Science. 1992. V.256. P.1783-1790.

13. De Clercq E. HIV resistance to reverse transcriptase inhibitors.// Biochem. Pharmacol. 1994. Y.47. p.155-169.

14. Mellors J.M., Larder B.A., Schinazi R.F. Mutations in HIV-1 reverse transcriptase and protease associated with drug resistance.// Int. Antiviral News. 1995. V.3. P.8-13.

15. Katz P.A., Skalka A.M. The retroviral enzymes. // Annu. Rev. Biochem. 1994. V.63. P.133-173.

16. Miyasaka Т., Tanaka H., Baba M., Hayakawa H., Walker R.T., Balzarini J., De Clercq E. A novel lead for specific anti-HIV-1 agents: l-(2-hydroxyethoxy)methyl.-6-(phenylthio)thymine.// J. Med. Chem. 1989. V.32. P.2507-2509.

17. De Clercq E. Non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors (NNRTIs).// Exp. Opin. Invest. Drugs. 1994. V.3. P.253-271.

18. Merluzzi V.J., Hargrave K.D., Labadia M. Inhibition of HIV replication by a non -nucleoside reverse transcriptase inhibitor.// Science. 1990. V.250. P.1411-1413.

19. Murphy R. L., Montaner J. Nevirapine : a review of its development, pharmacological profile and potential for clinical use.// Exp. Opin. Invest. Prugs. 1996. V.5. P.l 183-1199.

20. Esnouf R., Ren I., Ross C. Mechanism of inhibition of HIV-I reverse transcriptase by non-nucleoside inhibitors.//Nat. Struct. Biol. 1995. V.2. №4. P.303-308.

21. Моисеев С.В. Ифавиренц (Стокрин) ненуклеозидный ингибитор обратной транскриптазы в лечении ВИЧ-инфекции.// РЖ "Клиническая фармакология и терапия". 2000. №9 (1). С.66-70.

22. Jeffrey S., Baker D., Tritch R. Aresistance and cross resistance for Sustiva.// 5th Conference on Retroviruses and Opportunistic Infections. Chicago. 1998. Abstr.702.

23. Schinasi R.F. Porphyrin and phtalocyanine. Antiviral compositions.// Pat. WO 89/11277 (PCT). A61K31/40. 1989.

24. Tsutsui К., Mueller G. Hemin inhibits virion-associated reverse transcriptase of Murin leukemia virus.// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1987. Y.149. №2. P.628-634.

25. Crawford S., Goff S.P. A deletion mutation in the 5 part of the pol gene of Molony murine leukemia virus blocks proteolitic processing of gag poliproteins.// J. Virol. 1985. V.3. P.899-907.

26. Kohl N.E., Emini E.A., Schleif W.A., Davis L.J.,Heimbach J.C., Dixon R.A.F., Scolnick E.M., Sigal I.S. Active human immunodeficiency virus protease is required for viral infectivity.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1988. V.85. P.4686-4690.

27. Scharpe S., Meester I.D., Hendriks D., Vahoof G., Sande N., Vriend G. Proteases and their inhibitors: today and tomorrow.// Biochimie. 1991. V.73. P.121-126.

28. Von der Helm K., Gurtler L., Eberle J., Deinhardt F. Inhibition of HIV replication in cell culture by the specific aspartic protease inhibitor pepstatin A.// FEBS Lett. 1989. V.247. P.349-352.

29. Navia M.A., Fitzgerald P.M.D., McKeveer B.U., Leu C.-T., Heimbach J.C., Herber W.K., Sigfl I.S., Darke P.L., Springer J.P. Three-dimensional structure of aspartyl protease from human immunodeficiency virus HIV-1.//Nature. 1989. V.337. P.615-620.

30. Mohana Rao J.K., Erickson J.W., Wlodawer A. Structural and evolutionary relationships between retroviral and eucaryotic aspartic proteinases.// Biochemistry. 1991. V.30. P.4663-4671.

31. Krausslich H.G., Wimmer E. Viral proteinases.// Ann. Rev. Biochem. 1988. У.51. P.701-754.

32. Hammarskjold M.L., Rekosh D. The molecular biology of the human immunodeficiency virus.// Biochim. Biophys. Acta. 1989. V.989. P.269-280.

33. Silva A.M., Cahcau R.E., Sham H.L., Erickson J.W. Inhibition and catalytic mechanism of HIV-1 aspartic protease.// J. Mol. Biol. 1996. V.255. P.321-346.

34. Wlodawer A. Structure-based inhibitors of HIV-1 protease.// Annu. Rev. Biochem. 1993. V.62.P.543-585.

35. Szelke M. In aspartic proteinases and their inhibitors.// Ed. Kostka. N.Y. 1985. P.421

36. Tomasselli A.G., Howe W.J., Sawyer Т.К., Wlodawer A., Heinrikson R.L. The complexities of AIDS: an assessment of the HIV protease as a therapeutic target.// Chem. Today. 1991. V.9. P.6-27.

37. Norbeck D.W., Kempf D.J. HIV protease inhibitors.// Ann. Rep. Med. Chem. 1991. V. 26. P.141-150.

38. Ruff J.R. HIV protease: a novel chemotherapeutic target for AIDS.// J. Med. Chem. 1991. V.34. P.2305-2314.

39. Vacca J.P., Guare J.P., de Solms S.J., Sanders W.M., Giuliana E.A., Young S.D., Darke P.L., Zugay J., Sigal I.S., Schleif W.A. et al. L-687,908, a potent hydroxyethylene -containing HIV protease inhibitor.// J. Med. Chem. 1991. V.34. P.1225-1228.

40. Rich D.H., Green J., Toth M.V., Marshall G.R., Kent S.B.H. Hydroxyethylamine analogues of the pl7/p24 substrate cleavage site are tight-binding inhibitors of the HIV protease.// J. Med. Chem. 1990. V.33. P. 1285-1288.

41. Roberts N.A., Martin J.A., Kinchington D., Broadhurst A.V., Craig J.C., Duncan I.B., Galpin S.A., Handa B.K., Kay J., Krohn A. et al. Rational design of peptide-based HIV proteinase inhibitors.// Science. 1990. V.248. P.358-361.

42. Krohn A., Redshaw S., Ritchie J.C., Graves B.J., Hatada M.H. Novel binding mode of highly potent HIV-proteinase inhibitors incorporating the (R)-hydroxyethylamine isostere.// J. Med. Chem. 1991. V.34. P.3340-3342.

43. Galpin S., Roberts N. A., O'Connor Т., Jeffries D. J., Kinchington D. Antiviral properties of the HIV-1 proteinase inhibitor Ro 31-8959.// Antiviral Chem. Chemother. 1994. V.5. P.43-45.

44. Chong K.-T., Ruwart M.J., Hinshaw. R.R., Wilkinson K. F„ Rush B.D., Yancey M.F. Peptidomimetric HIV protease inhibitors: phosphate prodrugs with improved biological activities.// J. Med. Chem. 1993. V.36. P.2575-2577.

45. Kempf D.J., Norbeck D.W., Codavoci L., Wang X. C., Paul D. A., Knigge M. F., Vasavanonda S., Craig-Kennard A., Sadivar A., Rosenbrook W. et al. Structure-based C2 symmetric inhibitors of HIV protease.// J. Med. Chem. 1990. V.33. P.2687-2689.

46. Bone R., Vacca J.P., Anderson P.S., Holloway M.K. X-ray crystal structure of the HIVprotease complex with L-700,417, an inhibitor with pseudo-Сг symmetry.// J. Am. Chem. Soc. 1991. V.113. P.9382-9284.

47. McQuade T.J., Tomasselli A.G., Lui L., Sawyer Т.К., Heinrikson C.R.L., Karacostas V., Moss В., Tarpley W.G. A synthetic HIV-1 protease inhibitor with antiviral activity arrests HIV-like particle maturation.// Science. 1990. V.247. P.454-456.

48. Lam P.Y.S., Jadhav P.K., Eyermann C.J., Hodge C.N., Ru Y., Bacheler L.T., Meek J.L., Otto M.J. Rational design of potent, bioavailable, nonpeptide cyclic ureas as HIV protease inhibitors.// Science. 1994. V.263. P.380-384.

49. Otto M. J., Reid C. D., Garber S., Lam P. Y.-S., Scarnati H. In vitro anti-human immunodeficiency virus (HIV) activity of XM323, a novel HIV protease inhibitor.// Antimicrob. Agents Chemother. 1993. V.37. P.2606-2611.

50. Kim E.E., Baker C.T., Dwyer M.D., Murcko M.A., Rao B.G., Tung R.D., Navia M.A. Crystal structure of HIV-1 protease in complex with VX-478, a potent and orally bioavailable inhibitor of the enzyme.//J. Am. Chem. Soc. 1995.-V.117.-P.1181-1182.

51. Wei X., Ghosh S.K., Taylor M.E., Johnson V.A. Viral dynamics in human immunodeficiency virus type 1 infection.//Nature. 1995. V.373. P. 117-122.

52. Ho D.D., Neumann A.U., Perelson A.S., Chen W. Rapid turnover of plasma virions and CD4 lymphocytes in HIV-1 infection.//Nature. 1995. V.373. P.123-126.

53. Craig J.C., Whittaker L., Duncan I.B., Roberts N.A. In vitro resistance to an inhibitor of

54. HIV proteinase (Ro 31-8959) relative to inhibitors of reverse transcriptase (AZT and TIBO).// Antiviral Chem. Chemother. 1993. V.4. P.335-339.

55. Dianzani F., Antonelli G., Turriziani 0., Riva E., Dong G., Bellarosa D. In vitro selection of human immunodeficiency virus type 1 resistant to Ro 31-8959 proteinase inhibitor.// Antiviral Chem. Chemother. 1993. V.4. P.329-333.

56. Mellors J.W., Larder B.A., Schinazi R.F. Mutations in HIV-1 reverse transcriptase and protease associated with drug resistance.// Int. Antiviral News. 1995. V.3. P.8-13.

57. Sarubbi E., Seneci P.F., Angelastro M.R., Peet N.P., Denaro M., Islam K. Peptide aldehydes as inhibitors of HIV protease.// FEBS Letters. 1993. V.319. №3. P.253-256.

58. Louis J.M., Dyda F., Nashed N.T., Kimmel A.R., Davies D.R. Hydrophilic peptides derived from the transframe region of gag-pol inhibit the HIV-1 protease.// Biochemistry. 1998. V.37. №8. P.2105-2110.

59. Schramm H.J., Billich A., Jaeger E., Rucknagel K.-P., Arnold G., Schramm W. The inhibition of HIV-1 protease by 'interface' peptides.// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1993. V.194. №2. P.595-600.

60. Schramm H.J., Boetzel J., Buttner J., Fritsche E., Gorhing W., Konig S., Thumfart O., Wenger Т., Nagel N.E., Schramm W. The inhibition of human immunodeficiency virus proteases by 'interface' peptides.//Antiviral Res. 1996. V.30. P.155-170.

61. Babe L.M., Rose J., Craik C.S. Synthetic 'interface' peptides alter dimeric assembly of the HIV 1 and 2 proteases.// Protein Sci. 1992. V.l. P.1244-1253.

62. Schramm H.J., Derosny E., Reboudravaux M., Buttner J., Dick A., Schramm W. Lipopeptides as dimerization inhibitors of HIV-1 protease.// Biol. Chem. 1999. V.380. №5. P.593-596.

63. Zutshi R., Franciskovich J., Slults M., Schweitzer В., Bishop P., Wilson M., Chmielewski J. Targeting the dimerization interface of HIV-I protease: inhibition with Cross-Linked interfacial peptides.// J. Am. Chem. Soc. 1997. V.l 19. P.4841-4845.

64. Misumi S., Kudo A., Azuma R., Tomonaga M., Furuishi K., Shoji S. The P2 (GAG) peptide, Aeamsqvtntatim, processed from HIV-1 Pr55 (GAG) was found to be a suicide inhibitor of HIV-1 protease.// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1997. V.241. №2.-P.275-280.

65. Zhang Z.-Y., Poorman R.A., Maggiora L.L., Heinrikson R.L., Kezdy FJ. Dissociative inhibition of dimeric enzymes.//J. Biol. Chem. 1991. V.266. №24. P.15591-15594.

66. Bouras A., Boggetto N., Benatalah Z., Sicsic S. Design, synthesis, and evaluation of conformationally constrained tongs, nef inhibitors of HIV-I protease dimerization.// J. Med. Chem. 1999. V.42. P.957-962.

67. Lescar J., Brynda J., Rezacova P., Stouracova R., Riottot M.M., Chitarra V., Fabry M., Horejsi M., Sedlacek J., Bentley G.A. Inhibition of the HIV-1 and HIV-2 protease by a monoclonalantibody.// Protein Sci. 1999. V.8. №12. P.2686-2696.

68. Debyser Z., Cherepanov P., Van Maele В., De Clercq E., Witvrouw M. In search of authentic inhibitors of HIV-1 integration.// Antivir. Chem. Chemother. 2002. V.13. №1. P.l-15.

69. Kalpana G.V., Marmon S., Wang W., Crabtree G.R., Goff S.P. Binding and stimulation of HIV-1 integrase by a human homolog of yeast transcription factor SNF5.// Science. 1994. V.266. P.2002-2006.

70. Marchand C., Zhang X., Pais G.C., Cowansage K., Neamati N., Burke T.R., Pommier Y. Structural determinants for HIV-1 integrase inhibition by beta-diketo acids.// J. Biol. Chem. 2002. V.277. №15. P.12596-12603.

71. Pannecouque C., Pluymers W., Van Maele В., Tetz V., Cherepanov P., De Clercq E., Witvrouw M., Debyser Z. New class of HIV integrase inhibitors that block viral replication in cell culture.//Curr. Biol. 2002. V.12. №14. P.l 169-1177.

72. Soultrait V.R., Caumont A., Parissi V., Morellet N., Ventura M., Lenoir C., Litvak S., Fournier M., Roques B. A novel short peptide is a specific inhibitor of the human immunodeficiency virus type 1 integrase.// J. Mol. Biol. 2002. V.318. №1. P.45-58.

73. Maroun R.G., Gayet S., Benleulmi M.S., Porumb H., Zargarian L., Merad H., Leh H., Mouscadet J.F., Troalen F., Fermandjian S. Peptide inhibitors of HIV-1 integrase dissociate the enzyme oligomers.// Biochemistry. 2001. V.40. №46. P.13840-13848.

74. Nair V. HIV integrase as a target for antiviral chemotherapy.// Rev. Med. Virol. 2002. V.12. №3. P.179-193.

75. Milligan J.F., Matteucci M.D., Martin J.C. Current concepts in antisense drug design.// J. Med. Chem. 1993. V.36. P.1923-1937.

76. De Clercq E. Anti-HIV activity of sulfated polysaccharides.// Carbohidrates and Carbohidrate Polimers, Analisis, Biotechnology, Modification, Antiviral, Biomedical and Other Applications. 1993. P.87-100.

77. Schols D., Pauwels R., Desmuter J., De Clercq E. Dextran sulfate and other polianionic anti-HIV compounds specifically interact with the viral gpl20 glycoprotein expressed by T-cells persistenly infected with HIV-1.// Virology. 1990. V.175. P.556-561.

78. Lorentsen K.J., Hendrix C.W., Xollins J.M., Kornhauser D. M., Petty B.G., Klecker R.W., Flexner C., Eckel R.H., Lietman P.S. Dextran sulfate is poorly absorbed after oral administration.//Ann. Intern. Med. 1989. V.lll. P.561-566.

79. Andrei G., De Clercq E. Molecular approaches for the treatment of hemorrhagic fever virus infections.//Antiviral Res. 1993. V.22. P.45-75.

80. Saag M. Pursing the Virus New Targets: European Conference on Clinical Aspects and Treatment of HIV Infection.// Lisbon. 1999.-P. 24-26.

81. Cocchi F., DeVico A.L., Garsino-Demo A. Identification of RANTTES, MIP-1 beta as major HIV-suppressive factors produced by CD8+ T cells.// Science. 1995. V. 270. P.1811-1815.

82. Simmons G., Reeves J.D., Hibbitts S., Stine J.T., Gray P.W., Proudfoot A.E., Clapham P.R. Co-receptor use by HIV and inhibition of HIV infection by chemokine receptor ligands.// Immunol. Rev. 2000. V.177. P.l 12-126.

83. Flexner C. New drugs: attacking chemokine receptors.// Hopkins HIV Rep. 2002. V.14. №2. P. 12.

84. Litovchik A., Lapidot A., Eisenstein M., Kalinkovich A., Borkow G. Neomycin B-arginine conjugate, a novel HIV-1 Tat antagonist: synthesis and anti-HIV activities.// Biochemistry. 2001. V.40. №51. P.15612-15623.

85. Jansen R.W., Molema G., Pauwels R., Schols D., De Clercq E., Meiler D.K.F. Potent in vitro anti-human immunodeficiency virus-1 activity of modified human serum albumins.// Mol. Pharmacol. 1991. V.37. P. 818-823.

86. Jansen R.W., Schols D., Pauwels R., De Clercq E., Meiler D.K.F. Novel, negatively charged, human serum albumins display potent and selective in vitro anti-human immunodeficiency virus type 1 activity.//Mol. Pharmacol. 1993. V.44. P. 1003-1007.

87. De Clercq E. Toward improved anti-HIV chemotherapy: therapeutic strategies for intervention with HIV infections.// J. Med. Chem. 1995. V.38. №14. P.2491-2511.

88. Swart P.J., Meijer D.K. Negatively-charged albumins: a novel class of polianionic proteins with a potent anti-HIV activity.// Int. Antiviral News. 1994. V.2. P.69-71.

89. Jiang S., Jin K., Strick H., Neutht A.R. HIV-1 inhibition by a peptide.// Nature. 1993. V.365. P.l 13.

90. Rossmann M.G. Antiviral agents targeted to interact with viral capsid proteins and a possible application to human immunodeficiency virus.// Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1988. V.85. P.4625-4627.

91. Mitsuya H., Yarchoan R., Broder S. Molecular targets for AIDS therapy.// Science. 1990. V.249. P.1533-1544.

92. Meruelo D., Lavie G., Lavie D. Therapeutic agents with dramatic antiretroviral activity and little toxicity at effective doses: aromatic polycyclic diones hypericin and pseudohypericin.// Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1988. V.85. P.5230-5234.

93. Stevenson N.R., Lenard J. Antiretroviral activities of hypericin and rose bengal: photodinamic effects on Friend leukemia vims infection of mice.// Antiviral Res. 1993. V.21. P.119-127.

94. Morellet N., Jullian N., De Rocquigny H., Maigret В., Darlix J.-L., Roques B.P. Detrmination of the structure of the nucleocapsid protein NCp7 from the human immunodeficiency virus type 1 by H NMR.// EMBO J. 1992. V.l 1. P.3059-3065.

95. Dannuil J., Surovoy A., Jung G., Moelling K. Specific binding of HIV-1 nucleocapsid protein to PSI RNA in vitro requires N-terminal zinc finger and flanking basic amino acid residues.// EMBO J. 1994. V.13. P. 1525-1533.

96. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д.// Иммунология./М., Мир. 2000. 581 С.

97. Fowler D.A., Xie M.Y., Sommadossi J.P. Protection and rescue from 2',3'-dideoxypyrimidine nucleoside analog toxicity by hemin in human bone marrow progenitor cells.// Antimicrobial agents and chemotherapy. 1996. V.40. №1. P.191-195.

98. Lee-Huang S., Chen H.-C., Kung H.-F., Huang P.L., Nava P.L., Li B.-Q., Huang H.I. In natural products as antiviral agents.// Eds. Chu C.K., Cutler H.G. Plenum. N.Y. 1992. P. 153-170.

99. Bouribaiar A.S., Lee-Huang S. Activity of plant-derived antiretroviral proteins МарЗО and Gap31 against Herpes-Simplex virus-infection in vitro.11 Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996. V.219. №3. P.923-929.

100. Ng T.B., Lam T.L., Au Т.К., Ye X.Y., Wan C.C. Inhibition of human immunodeficiency virus type 1 reverse transcriptase, protease and integrase by bovine milk proteins.// Life Sci. 2001. V.69. №19. P.2217-2223.

101. Marzilli L., Petho G., Lin M., Kim M., Dixon D. Tentacle porphyrins: DNA interaction.//J. Am. Chem. Soc. 1992. V.l 14. №19. P.7575-7577.

102. Moan J., Berg K. Photochemotherapy of cancer; experimental research.// J. Photochem. Photobiol. 1992. V.55. P.931-948.

103. Henderson B.W., Dougherty T.J. How does photodynamic therapy work?// Photochem. Photobiol. 1992. V.55. P.145-157.

104. Moan J., Berg K., Kvam E., Western A., Malik Z., Ruck A., Snhneckenburger H. Intracellular localization of photosensitizers.// In Photosensitizing Compounds: their Chemistry, Biology and Clinical Use. John Wiley and sons, N.Y. 1989. P.95-111.

105. Ehrenberg В., Malik Z., Nitzan Y. Fiuorescence spectral changes of hematoporphyrin derivative upon binding to lipid vesicles Staphylococcus aureus and Escherichia coli cells.// Photochem. Photobiol. 1985. V.41. P.429-435.

106. Stricklend J.I., Ixlarzillil L.G., May K.M., Wilson W.D. Porphyrin and metalloporphyrin on binding to DNA polymers: rate and equlibrium binding studies.// Biochem. 1998. V.27. P.8870-8878.

107. Ward В., Skorobogaty A., Dabrowiak J.C. DNA binding specificity of a series of cationic metalloporphyrinyl in complexes.// Biochem. 1986. V.25. P.7828-7833.

108. Aft R.L., Mueller G.C. The hemin- mediated DNA strend scission. // J. Biol. 1983. V.258. P.19069-19079.

109. Wir U., Ladan H., Malik Z., Nitzan Y. In vivo effects of porphyrins on bacterial plasmid DNA.//J. Photochem. Photobiol. B. 1991. V.l. P.295-306.

110. Nitzan Y., Shanberg В., Malik Z. Photodinamic effects of deuteroporphyrin on Gram positive bacteria.//Curr. Microbiol. 1987. V.15. P.251-258.

111. Nitzan Y., Ladan H., Gozansky S., Malik Z. Characterization of hemin antibacterial action on S. aureus.// FEMS Microbiol. Lett. 1987. V.48. P.401-406.

112. Heurath A.R., Strick N., Jiang S. Rapid prescreening antiviral agents against HIV-1 based on their inhibitory activity in site-directed immunoassays-approaches applicable to epidemic HIV-1 strains.//Antiviral Chem. Chemother. 1993. V.4. №4. P.207-214.

113. Tsutsui K., Mueller G. Hemin inhibits virion-associated reverse transcriptase of Murin leukemia virus. II Biochem. Biophys. Res. Commun. 1987.-V. 149, №2.-P.628-634.

114. Kraus W., Weisert A., Spies J. Verfahren zur herstellung eines neuen haminkomplexes.// Pat. BRD 3446887 C07D 487/22. 1986.

115. Tsunoo H., Ajisaka K., Fujiki Y., Miyajima H., Mizumoto K., Tsuboi H., Fujimoto H. Anti-HIV drug.//Pat. WO 93/03035 PCT/JP 92/00977. 1993.

116. Novogrodsky A., Suthanthiran M., Stenzel K.H. Immune stimulatory properties of metalloporphyrins.// J. Immunol. 1989. V.143. № 12. P.3981-3987.

117. Ениколопян H.C., Соловьева А.Б. Катализ металлопорфиринами реакций нецепного окисления олефинов.// Журн. физ. химии. 1988. Т.62. № 9. С.2289-2307.

118. Лукашова Е.А., Соловьева А.Б., Желтухина Г.А., Лубсандоржиева Л.К., Евстигнеева Р.П. Каталитическая активность гемин-пептидов в реакции гидроксилирования холестерина.//Журн. физ. химии. 1997. Т.69. №11. С.1972-1974.

119. Benton Р.А., Barrett D.J., Matts R.L., Lloyd R.E. The outcome of poliovirus infections in K562 cells is cytolytic rather than persistent after hemin-induced differentiation.// J. Virol. 1996. V.70. № 8. P.5525-5532.

120. Wu D.S., Stoller M.N. Indinavir urolithiasis.// Curr. Opin. Urol. 2000. V.10. №6. P.557-561.

121. Zhong D.S., Lu X.H., Conklin B.S., Lin P.H., Lumsden A.B., Yao Q., Chen C. HIV protease inhibitor ritonavir induces cytotoxicity of human endothelial cells.// Arterioscle. Thromb. Vase. Biol. 2002. V.22. №10. P. 1560-1566.

122. Miserez A.R., Muller P.Y., Spaniol V. Indinavir inhibits sterol-regulatory element-binding protein-lc-dependent lipoprotein lipase and fatty acid synthase gene activations.// AIDS 2002. V.16. №12. P.1587-94.

123. Евстигнеева P.П., Желтухина Г.А., Халиль В., Ефимова Е.И. Синтез аргининсодержащих пептидов и их конъюгатов с протогемином IX и тетрафенилпорфирином.//Биоорг. химия. 1999. Т.25. №8. С.573-581.

124. Рожкова Е.А., Желтухина Г.А., Евстигнеева Р.П. Модели пероксидаз.// Кинетика и катализ. 1999. Т.40. №2. С.256-260.

125. Радюхин В.А., Филиппович Е.И., Евстигнеева Р.П. Синтез моно-аминоацильных производных протогемина IX.// Журн. общ. химии. 1980. Т.50. С.673-678.

126. Евстигнеева Р.П., Лубсандоржиева JI.K., Желтухина Г.А. Твердофазный синтез пептидных производных протогемина IX.// ДАН. 1992. Т.326. С.452-455.

127. Гершкович А.В., Кибирев В.К. Химический синтез пептидов.// АН Украины. Ин-т биоорган, химии и нефтехимии. Киев: Наукова думка. 1992. 359 С.

128. Barlos К., Chatzi О., Gamos D., Stavropouls G. 2-Chlorotrityl chloride resin. Studies on anchoring of Fmoc-amino asids and peptide cleavage.// Int. J. Peptide Protein. Res. 1991. Y.37. P.513-520.

129. Евстигнеева P.П., Зарубина T.B., Желтухина Г. А., Небольсин В.Е., Калиберда Е.Н., Румш Л.Д. Твердофазный синтез конъюгатов олигопептидов с гемином и их влияние на протеиназу ВИЧ-1.// ДАН. 2001. Т. 381. № 5. С. 630-633.

130. Dryland A., Sheppard R.C. Peptide synthesis. Part 8. A system for solid-phase synthesis under low pressure continuous flow conditions.// J. Chem. Soc. Perkin Trans. I. 1986. №1. P.125-137.

131. Barlos K., Mamos P., Papaioannou D., Patrianakou S., Sanida C., Schafer W. Einsatz von Trt- und Fmoc- gruppen zum schutz polyfuntioneller a-aminosauren.// Liebigs Ann. Chem. 1987. S.1025-1030.

132. Машковский М.Д. Лекарственные средства. 4.2.// M.: Медицина. 1993. 688 С.

133. Tamamura Н, Murakami Т., Masuda М., Otaka A., Takada W. Structure-activity relationships of an anti-HIV peptide, T22.// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994. V.205. №3. P.1729-1735.

134. Гринштейн Дж., Виниц МЛ Химия аминокислот и пептидов./ М.: Мир, 1965. 824 С.

135. Eleftheriou S., Gatos D., Panagopoulos A., Stathopoulos S. Attachment of histidine, histamine and urocanic acid to resins of the trityl-type.// Tetrahedron Letters. 1999. V.40. P.2825-2828.

136. Радюхин В.А., Казакова H.A., Филиппович Е.И., Евстигнеева Р.П. Исследование путей синтеза пептидных производных протогемина IX.// Журн. общ. химии. 1982. Т.52. № 2. С.432-440.

137. Дергоусова Н.И., Румш Л.Д., Андреева Н.С. Мутант протеиназы ВИЧ-1 с измененной областью активного центра.// Молекул, биол. 1998. Т.32. С.692-698.

138. Richards A.D., Phylip L.H., Farmeric W.G. et al. Sensitive, soluble chromogenic substrate for HIV-1 protease.//J. Biol. Chem. 1990. V.265. №14. P.7733-7736.

139. Зарубина T.B., Желтухина Г.А., Небольсин B.E., Евстигнеева Р.П. Биологические эффекты и механизмы действия пептидных производных гемина.// Ученые записки МИТХТ. 2002. Выпуск 5. С. 72-74.

140. Klandorf Н., Chirra A.R., DeGruccio A., Girman D.J. Dimethyl sulfoxide modulation of diabetes onset in NOD mice.// Diabetes. 1989. V.38. №.2. P. 194-197.

141. Suleman H.B., Carraway M.S., Velsor L.W., Day B.J., Ghio A.J., Piantadosi C.A. Rapid mtDNA deletion by oxidants in rat liver mitochondria after hemin exposure.// Free Radic. Biol. Med. 2002. V.32. №3. P. 246-256.

142. Kostanyan I.A., Astapova M.V., Starovoytova E.V., Dranitzina S.M., Lipkin V.M. A new human leukemia cell 8.2 kDa differentiation factor: isolation and primary structure.// FEBS Lett. 1994. V.356. №2-3. P. 327-329.

143. Практикум по физико-химическим методам в биологии.// Под. ред. Литвина Ф.Ф. М.: МГУ 1981. С.5-38.

144. Строев Е.А., Макарова В.Г.// Практикум по биологической химии./ М.: Высшая школа. 1986. С.176-182.

145. Vekshin N.L.// Photonics of Biopolymers./ Moscow. MGU. 1999. P.145-147.

146. Gisin B.E. The monitoring of reactions in solid-phase peptide synthesis with picric acid.//Anal. Chem. Acta. 1972. V.58. P.248-249.

147. Kaiser E., Colescott R.L., Rossinger G.D., Cook P.J. Color test for detection of free terminal amino-group in the solid-phase synthesis of peptides.// Anal. Biochem. 1970. V.34. №2. P.595-598.

148. Березин И.В., Клесов A.A. Практический курс химической и ферментативной кинетики.// 1976. С.77-110.

149. Автор выражает глубокую благодарность и признательность чл.-корр. РАН, д.х.н., профессору Евстигнеевой Риме Норфирьевне ик.х.н., с.н.с. кафедры ХТТОС Желтухиной Галине Александровнеза ценные советы и всестороннюю помощь в выполнении данной работы.

150. Особая благодарность Генеральному директору ООО "Фарминтерпрайсез"к.х.н. Небольсину Владимиру Евгеньевичу за финансовую поддержку работы исодействие в проведении биологических испытаний.