Синтез и модификация O- и N-аминопропилтритерпеноидов тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.03 ВАК РФ

На правах рукописи

004609471

ГИНИЯТУЛЛИНА ГУЛЬНАРА ВЛАДИМИРОВНА

СИНТЕЗ И МОДИФИКАЦИЯ О- И ЛГ-АМИНОПРОПИЛТРИТЕРПЕНОИДОВ

02.00.03 - Органическая химия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

з о СЕН 2010

Уфа 2010

004609471

Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте органической химии Уфимского научного центра Российской академии наук.

Научный руководитель: доктор химических наук, профессор

Казакова Оксана Борисовна

Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор

Ишмуратов Гумер Юсупович

доктор химических наук, профессор

Ахметова Внира Рахимовна

Ведущая организация: Учреждение Российской академии наук

Тихоокеанский институт биоорганической химии ДВОРАН

Защита диссертации состоится 1 октября 2010 года в 1400 часов на заседании диссертационного совета Д 002.004.01 в Учреждении Российской академии наук Институте органической химии Уфимского научного центра РАН по адресу: 450054, Башкортостан, г. Уфа, проспект Октября, 71, зал заседаний; факс (347) 2356066; е-таН: chemorg@anrb.ru

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Уфимского научного центра РАН.

Автореферат разослан «30» августа 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор химических наук, профессор

Ф. А. Валеев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Интерес к растительным метаболитам как к наиболее доступным химическим соединениям возник в самом начале становления химической науки и с развитием химии постоянно углублялся и расширялся. Одно из ведущих мировых направлений создания новых лекарственных препаратов сегодня - это синтетические трансформации метаболитов, позволяющие усилить или изменить их нативную биологическую активность. Медицинская химия последних двух десятилетий накопила целый ряд ярких примеров разработки высокоэффективных лекарственных препаратов, к которым относятся производные таксола, форсколина, артемизинина, глицирризиновой кислоты, арглабина и других метаболитов. В ряду тритерпеновых соединений по доступности и потенциалу для медицинского применения абсолютными лидерами являются гликозид корня солодки глицирризиновая кислота и ее агликон глицирретовая кислота, бетулин -основной компонент бересты березы, урсоловая и олеаноловая кислоты -метаболиты травянистых и кустарниковых растений. Убедительно показано, что тритерпеноиды, имеющие в структуре длинноцепочечные кислород- и азотсодержащие фрагменты, перспективны для разработки противовирусных и противоопухолевых препаратов. В этой связи синтез тритерпеноидов с О- тл Ы-аминопропильными фрагментами представляется актуальным. При разработке синтетических подходов к получению соединений такого типа нами приняты во внимание достижения в области синтеза и фармакологической активности стероидных полиаминов, в частности, скваламина, тродускумина и их аналогов.

Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Учреждения Российской академии наук Института органической химии Уфимского научного центра РАН по темам: «Химическая трансформация и синтез аналогов биологически активных терпеноидов» (регистрационный номер 01.20.0500681) и «Химия и биологическая активность растительных веществ флоры РФ; их биогенез и функция» (регистрационный номер 01.20.0801441). Работа осуществлялась при частичной финансовой поддержке Российского Фонда Фундаментальных Исследований (гранты № 08-03-00868-а, № 08-03-16067-моб_з_рос) и гранта Президента Российской Федерации для государственной поддержки молодых российских учёных и ведущих научных школ (МК-7360.2010.3).

Цель работы. Синтез и модификация О- и Л/-аминопропилпроизводных пентациклических тритерпеноидов с потенциальной фармакологической активностью.

В соответствии с целью поставлены следующие задачи:

- разработка подходов для модификации тритерпеноидов с использованием реакции цианэтилирования их спиртов, аминов, амидов, кетоксимов и амидоксимов с последующим восстановлением и превращениями цианоэтильных производных;

- синтез и модификация амидов тритерпеновых кислот с Л'-метилпиперазином и алканполиаминами;

- синтез тритерпеновых аналогов скваламина и стероидных полиаминов;

- скрининг активности производных тритерпеноидов и выявление новых фармакологически перспективных агентов.

Научная новизна и практическая значимость. Синтезировано 100 не описанных ранее в литературе производных бетулина, олеаноловой, урсоловой и глицирретовой кислот, содержащих 2-цианоэтокси-, 3-аминопропокси-, 2-цианоэтил-, Л'-(З-аминопропил)-, бис(2-цианоэтил)-, Лг-бис(3-аминопропил)-, 2-цианоэтоксиимино-, 3-аминопропоксиамино-, 3-амидоксимпропоксиамино- и N-метилпиперазиниламидные фрагменты, а также цепочки бис(2-аминоэтил)амина, Лг-(3-аминопропил)-1,4-диаминобутана.

Проведен синтез диэфиров, в которых два каркаса 3-аминопропокси- и 3,4-секо-2-цианобетулиновой кислоты ковалентно связаны этиленгликолевым спейсером.

Осуществлен синтез серии Л^-метилпиперазиниламидов олеаноловой, урсоловой, глицерретовой, мороновой, бетулоновой кислот и модификация последнего с образованием О- и iV-аминопропилатов.

Предложен способ получения индивидуальных метиловых эфиров За- и Зр-амино-3-дезоксибетулиновой кислоты, основанный на разделении их /и/7е/ябутоксикарбонатов методом колоночной хроматографии и последующем снятии защитной группы муравьиной кислотой.

Предложен способ получения производных 20(29)-дигидролупана путем восстановления 20(29)-лупенов дибораном в атмосфере аргона.

За счет введения Лг-(3-аминопропил)-, З-аминопропил-З-аминопропокси-, 3-аминопропоксиамино- и 3-амидоксимпропоксиаминофрагментов в структуру тритерпеноидов значительно повышается их растворимость в протонных растворителях.

Среди новых производных тритерпеноидов обнаружены соединения, обладающие противоопухолевой, противовирусной, антимикробной и противотуберкулезной активностью. В экспериментах in vivo выявлена противоопухолевая, антиметастатическая, антиоксидантная и цитопротекторная активность 3-оксо-17-(4-метилпиперазин-1-ил)-карбонилолупа-20(29)-ена. В условиях неопластического роста это соединение проявляет выраженую противоопухолевую активность, не стимулирует диссеминацию опухоли, снижает

тяжесть патологических изменений в тканях, вызванных паранеопластическими синдромами. Введение фрагмента /V-метилпиперазина в структуру бетулоновой кислоты и последующая модификация ведут к снижению противовоспалительной, гепатопротекторной и антиоксидантной активности.

Установлена высокая противоопухолевая активность in vitro 3(3-[3-(аминопропокси)]-17-(4-метилпиперазин-1 -ил)-карбонилолупа-20(29)-ена и Зр-гидрокси-28-[3-(аминопропокси)]-олеан-12-ена к широкому спектру линий опухолевых клеток человека. Показано, что аминопропоксифрагмент является новой фармакофорной группой в синтезе противораковых агентов на основе тритерпеноидов.

В экспериментах in vitro выявлены эффективные в отношении вируса папилломы ЗР-гидрокси-28-[3-(аминопропокси)-2-цианоэтил]-лупа-20(29)-ен и 3-дезокси-3-(2-этоксиимино)-11-урс-12-ен-28-овая кислота (индексы селективности SI составили 25 и 30, соответственно).

Апробация работы. Результаты исследований доложены на Международной конференции по природным и физиологически активным веществам (Новосибирск, 2004 г.); Международном симпозиуме по органической химии (Судак, АР Крым, Украина, 2006 г.); двух Молодежных научных школах по органической химии (Уфа, 2007 г., Екатеринбург, 2008 г.); V Всероссийской конференции "Химия и технология растительных веществ" (Уфа, 2008 г.); Международной конференции "Биологически активные вещества: фундаментальные и прикладные вопросы получения и применения" (Новый свет, АР Крым, Украина, 2009 г.); Всероссийской конференции "Химия растительных веществ и органический синтез" (Сыктывкар, 2009 г.); трех Всероссийских конференциях с молодежной научной школой "Химия и медицина" (Уфа, 2007 г., 2009 г., 2010 г.); 8-ом Международном симпозиуме по противоопухолевой терапии (США, 2010 г.); 2-ом Международном конгресс-партнеринге и выставки по биотехнологии и биоэнергетике "ЕвразияБио-2010" (Москва, 2010 г.); первой конференции серии ChemWasteChem: "Химия и полная переработка биомассы леса" (Санкт-Петербург, 2010 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 статей в рекомендуемых ВАК журналах и тезисы 14 докладов на конференциях и симпозиумах.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы на тему "Синтез, превращения и фармакологическая активность стероидных полиаминов" (глава 1), обсуждения результатов (глава 2), фармакологической части (глава 3), экспериментальной части (глава 4), выводов, списка цитируемой литературы и приложения. Список литературы включает 229 наименований. Объем работы составляет 178 страниц, в том числе 1 рисунок, 9 таблиц.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1.1. Синтез аминопропоксипроизводных бетулина, эритродиола, уваола и олеантриола

Среди значительного числа работ по модификации тритерпеноидов мы не встретили данных синтеза аминопропоксипроизводных. В то же время их получение возможно в результате восстановления нитрильной группы в продуктах цианэтилирования гидрокситритерпеноидов. В результате реакции цианэтилирования спиртов 1-3 акрилонитрилом в диоксане в присутствии 40% раствора КОН и межфазного катализатора, протекающей с полной конверсией, получены смеси 28-моно- 5, 7, 8 и 3,28-бисцианэтильных эфиров 6, 9, 10 с преобладанием последних (схемы 1, 2). Индивидуальные соединения выделяли с

Условия: а. СН2=СНСМ, 1,4-диоксан, 40% КОН, ТЭБАХ, 25 °С, 26-36 ч, выходы: 15% (5), 83% (6), 56% (17), 67% (20), 20% (22); Ь. Н2> №-Иапеу, МеОН, 100 атм., 100 °С, 19 ч, выходы: 8286%; с. Ш1Ш4, ВРз-ИгО, ТГФ, 65 °С, 6 ч, выходы: 86% (19), 69% (21).

использованием колоночной хроматографии. В случае олеантриола 4 наблюдалась региоселективность реакции цианэтилирования по положениям СЗ и С28 без затрагивания С19 (схема 1).

В результате каталитического гидрогенолиза соединений 5-10, 17 синтезированы аминопропоксипроизводные бетулина, эритродиола, уваола и олентриола 11-16, 18. При восстановлении соединения 6 дибораном, генерируемым in situ, в атмосфере аргона с количественным выходом получен 3 Р,28-бис-(3-аминопропокси)-20(29)-дигидробетулин 19.

Отметим, что описанное в литературе получение 20(29)-дигидролупанов основано на восстановлении газообразным водородом в присутствии катализаторов и водородом, полученным in situ. Таким образом, нами предложен еще один эффективный способ получения 20(29)-дигидролупанов с использованием диборана в инертной среде.

2,7,9,13,15 Х = СН3,У = Н 3,8,10,14,16Х = Н,У = СН3

Условия: а. СН2=СНСЫ, 1,4-диоксан, 40% КОН, ТЭБАХ, 25 "С, 26-36 ч, выходы: 32-38% (7, 8), 58-62% (9,10); Ь. Н2, М-Иапеу, МеОН, 100 атм., 100 °С, 19 ч, выходы: 68-84%.

В результате цианэтилирования соединения 19 и последующего восстановления дибораном синтезирован зр,28-бис-(3-аминопропил-3-аминопропокси)-20(29)-дигидробетулин 21. Цианэтилирование соединения 11 акрилонитрилом привело к нитрилу 22. За счет введения АЦЗ-аминопропил)- и 3-аминопропил-3-аминопропоксифрагментов в структуру бетулина (например, соединения 12, 19, 21) значительно увеличилась растворимость в протонных растворителях, что важно при разработке лекарственных форм препаратов на основе тритерпеноидов.

х

Схема 2

НО

1.2. Синтез и модификация тритерпеноидов с двумя лупановыми каркасами

Введение аминопропоксифрагмента реализовано на примере тритерпеновой структуры, содержащей два лупановых каркаса. Этилен-1,2-бис(бетулонат) 24 синтезировали с количественным выходом в результате взаимодействия хлорангидрида бетулоновой кислоты 23 с этиленгликолем в соотношении 2:1 при кипячении в хлороформе (схема 3). Далее оксогруппы диэфира 24 восстановили КаВЩ получившийся этилен-1,2-бис(бетулинат) 25 цианэтилировали акрилонитрилом до 2-цианоэтоксипроизводного 26 с последующим каталитическим гидрогенолизом до этилен-1,2-бис((3(3-3-аминопропокси)-

Условия: а. НОССНгЬОН, Et3N, СНСЬ, 60 °С, 6 ч, выход: 84%; b. NaBH4, изопропанол, 25 °С, 2 ч, выход: 87%; с. CH2=CHCN, 1,4-диоксан, 40% КОН, 25 "С, 15 ч, выход: 72%; d. Н2, Ni-Raney, МеОН, 12 ч, 100 °С, 100 атм, выход: 86%; е. NH2OH-HCl, пиридин, 2 ч, 115 "С, выход: 86%; f.р-TsCl, пиридин, 5 ч, 115 °С, выход: 83%.

бетулината) 27. В результате Бекмановской перегруппировки бисоксима 28 синтезирован этилен-1,2-бис((3,4-секо-2-циано)бетулинат) 29.

Таким образом, впервые проведен синтез диэфиров, в которых два каркаса 3-аминопропокси- и 3,4-секо-2-цианобетулиновой кислоты ковалентно связаны этиленгликолевым спейсером.

1.3. Синтез и модификация амидов тритерпеновых кислот

Известно, что тритерпеновые кислоты с длинноцепочечными кислород- и азотсодержащими фрагментами перспективны для разработки противовирусных и противоопухолевых препаратов. Введение заместителей такого типа основано на постепенном наращивании боковой цепи или на использовании коммерчески доступных реагентов. Для синтеза аминопропокси- и метиленполиаминных производных тритерпеновых кислот нами использованы оба подхода.

1.3.1. Синтез аминопропиламинопроизводных бетулиновой и олеаноловой кислот

Для формирования полиаминной цепи в качестве исходных соединений использовали амиды бетулоновой 30-32 и олеаноновой 33 кислот. При взаимодействии амидов 30 и 33, содержащих фрагмент 1,6-диаминогексана, с акрилонитрилом в диоксане в присутствии 40% КОН и ТЭБАХ наблюдалось исчерпывающее цианэтилирование М^-групп с образованием бис-Л-пропионитрилов 34 и 37. В случае амида 31 конверсия атомов водорода была неполной, по-видимому, из-за стерических факторов, и продуктом реакции стал Л^-пропионитрил 35. Восстановление нитрилов 34 и 37 алюмогидридом лития при кипячении в ТГФ привело к производным лупанового 38 и олеананового 42 типов с фрагментом 6-[бис(3-аминопропил)амино]гексиламина в положении С28.

Продукт восстановления Л-пропионитрила 35 1лА1Н4 охарактеризован в виде СЦУ-диацетата 40. В результате восстановления цианопроизводного 34 №ВН4 в изопропаноле, далее цианэтилирования и восстановления получен (ЗР)-3-(3-аминопропокси)-28-{6-[бис(3-аминопропил)амино]гексиламино}лупа-20(29)-ен 43 с количественным выходом. Цианэтилирование амида 32 потребовало присутствия Си(ОАс)2, его восстановление 1ЛА1Н4 привело к 28-((3-аминопропил)-4,4'-диаминодифенилсульфон)производному 41. Согласно спектральным данным, в указанных условиях восстановление сульфогрушты не происходит.

Условия: а. СНг'СНСМ, 1,4-Диоксан, 40% КОН, 25 °С, 15 ч, выходы: 68-78%; Ь. 1ЛЛ1Н4, ТГФ, 60 "С, 3 ч, выходы: 62-74%; с. Ас20, пиридин, 115 "С, 4 ч, выход: 70%; (I. КаВН4, изопропанол, 25 17, 2 ч, выход: 87%; е. Н2, №-11апеу, МеОН, 8 ч, 10№С, 100 атм, выход: 88%; Г СН2=СНСЫ, 1,4-диоксан, Си(ОАс)2, 101 "С, 20 ч, выход: 80%.

1.3.2. Синтез и модификация Л-метилпиперазиниламидов тритерпеновых кислот

В литературе показана перспективность введения фрагмента замещенного пиперазина в молекулу тритерпеноида. Так, пиперазиниламиды глутарилбетулиновой кислоты обладают анти-ВИЧ активностью, урсоловой кислоты - антималярийной активностью и цитотоксичностью.

Нами осуществлен синтез серии (4-метилпиперазин-1-ил)амидов на основе бетулоновой 44, олеаноновой 45, урсоновой 46, мороновой 47 и 3-кетоглицирретовой 48 кислот путем взаимодействия их хлорангидридов с № метилпиперазином с выходами 75-86%. Далее проведена модификация цикла Л Д'-метилггиперазиниламида бетулоновой кислоты 44, заключавшаяся в синтезе 3,4-секо-2-цианоамида 55 и 3,4-секо-3-аминоамида 56. Другое направление модификации амида 44 заключалось во введении аминопропильного фрагмента в положение СЗ. Для этого цианэтилированием Л'-метилпиперазиниламида бетулиновой кислоты 49 и оксима 52 синтезировали 2-цианоэтилпроизводные 50 и 53. Восстановление соединения 50 комплексом КаВН4-СоС12 привело к аминопропокситритерпеноиду 51, в то время как результатом реакции соединения 53 с дибораном стало 3-аминопропоксиамино-20(29)-дигидропроизводное 54. В результате ацилирования амида 49 синтезированы никотиноил- 57 и гемисукцинилпроизводные 58.

Условия: а. NaBH4, изопропанол, 25 "С, 2 ч, выход: 93%; b. CH2=CHCN, 40% КОН, ТЭБАХ, 1,4-диоксан, 25 °С, 12-16 ч, выходы: 62-67%; с. NaBH4, СоСЬ, метанол, 25 °С, 6 ч, выход: 81%; d. NH2OH-HCl, пиридин, 115 °С, 2 ч, выход: 76%; е. р-TsCl, пиридин, 115 °С, 5 ч, выход: 85%; f. LiAlH4, ТГФ, 60 °С, 3 ч, выход: 85%; g. NaBH4, BF3Et20, ТГФ, 64 "С, 6 h, выход: 72%; h. C5H4NCOCl, пиридин-трибутиламин, 22 °С, 4 ч, выход: 85%; i. янтарный ангидрид, DMAP, пиридин, 115 "С, 14 ч, выход: 89%.

1.3.3. Синтез амидов тритерпеновых кислот с алканполиаминами

С использованием второго подхода, основанного на взаимодействии хлорангидридов бетулоновой и олеаноновой кислот с алканполиаминами, синтезированы амиды 59-61 и 67, содержащие в боковой цепи фрагменты диэтилентриамина, триэтилентетрамина и спермидина. В результате

Условия: а. Ш2(СН2)2ЬИ1(СН^Н2 или Ш2(СН2)2№1(СН2)2т(СН2)2Ь1Н2 или >Ш2(СН2)3Ш(СН2)4Ш2, ЕШ, СНСЬ, 60 "С, 16 ч, выходы: 48-54%; Ь. ЫаВН4, изопропанол, 25 °С, 2 ч, выходы: 90-92%; с. Вос20, СН2С12,25 °С, 5 ч, выходы: 60-64%.

восстановления карбонильной группы при СЗ в амидах 59, 60 синтезированы производные бетулиновой кислоты 62, 63, действием на амиды 59, 60 ди/ире/ибутоксикарбоната получены Вос-А'-амиды 64, 65.

1.4. Модификация кетоксимов тритерпеноидов

1.4.1. Синтез и модификация 3-дезокси-3р-(3-аминопропоксиамино)-трнтерпеноидов

Тритерпеновые оксимы являются важными субстанциями как для химических превращений, так и в силу своих ценных биологических свойств. Например, оксим бетулоновой кислоты является перспективной платформой для разработки лекарственных форм препаратов для лечения и профилактики гриппа.

Синтез и модификация цианэтильных производных кетоксимов тритерпеноидов в литературе не описаны.

Цианэтилирование оксимов бетулоновой кислоты, ее метилового эфира, олеаноновой и урсоновой кислот акрилонитрилом протекало легко и с хорошим выходом с образованием 2-цианоэтоксииминопроизводных 72-75 (схемы 7, 8). Восстановление полученных соединений проводили водородом в присутствии катализатора МьЯапеу (соединения 74, 75) и дибораном (соединения 72, 73) с образованием 3-дезокси-ЗР-(3-аминопропоксиамино)производных 76-79 с количественными выходами. В результате восстановления 72 дибораном карбоксильная группа была восстановлена до спиртовой.

На примере соединения 73 проведена дальнейшая модификация боковой полиаминной цепи. Концевую №}2-группу метилового эфира 3-дезокси-3|3-(3-аминопропоксиамино)-20(29)дигидробетулиновой кислоты 77 цианэтилировали и восстанавливали с образованием 3-дезокси-ЗР-(3-аминопропил-3-аминопропоксиамино)производного 81 с хорошим выходом.

При кипячении 73 с азидом натрия в присутствии хлорида аммония синтезирован тетразол 82 (схема 7).

Соединение 73 стало основой для получения и трансформации амидоксима 83. Его синтез осуществлен взаимодействием нитрила 73 с гидроксиламином при кипячении в изопропаноле. В результате последующего цианэтилирования и каталитического гидрогенолиза получили тритерпеноид лупанового типа с (3-аминопропил-3-аминопропокси)-3-амидоксимпропоксииминофрагментом 85. Как и в случае соединений 12, 19, 21, производные с 3-аминопропоксиамино- и 3-амидоксимпропоксиаминофрагментами 76, 81 и 85 хорошо растворялись в протонных растворителях.

Схема 7

Условия: а. СН;=СНСЧ ¡,4-диоксан, 40% КОН, 25 "С, б ч, выходы: 83-85%; Ь. №ВН4, ВКз'Е(20, ТГФ, 65 "С, 6 ч, выходы: 82-92%; с. Н2, №-Капеу, МеОН, 100 °С, 100 атм, 9 ч, выход: 67%; (1. NaNз, НН4С1, ДМФА, 153 °С, 22 ч, выход: 62%; е. КН;ОННС1, ЫаНСОз, изопропанол, 70 °С, 8 ч, выход: 67%.

Схема 8

V

X

Н2Ы'

нон

, соон

'соон

ь

70, 74,78 Х = СН3, У=Н, 71,75,79 Х = Н, У = СН3

Условия: а. СП^СНСМ, 1,4-диоксан, 40% КОН, 25 "С, 6 ч, выходы: 82-88%; Ь. Н2, №-Яапеу, МеОН, 100 °С, 100 агм., 9 ч, выходы: 79-84%.

Таким образом, на основе кетооксимов бетулоновой, олеаноновой и урсоновой кислот разработаны новые направления функционализации с получением тритерпеноидов с 3-аминопропоксиамино- и (З-аминопроггал-З-аминопропокси)-3-амидоксимпропоксииминофрагментами в положении СЗ.

1.4.2. Синтез и модификация З-амино-З-дезоксибетулиновой кислоты

Получение индивидуальных За- и ЗР-аминотритерпеноидов практически всегда затруднено ввиду их близкой хроматографической подвижности. Учитывая, что 3-аминотритерпеноиды перспективны для синтеза практически ценных производных, разработка эффективных путей их получения является актуальной задачей. Мы предлагаем следующий подход в их разделении.

Для восстановления оксима метилбетулоната 69 до З-амино-З-дезоксибетулиновой кислоты мы использовали цианоборгидрид натрия (выход 85%, соотношение За-НУЗР-Н = 9/1). Попытка использовать в данной реакции МаВНдЛчЧСЬ-бНгО оказалась безуспешной. Использование для восстановления оксима метилбетулоната 69 трисацетоксиборгидрида натрия привело к З-амино-З-дезоксибетулиновой кислоте, но с меньшим (-30%) выходом.

Для получения индивидуальных метиловых эфиров За- и ЗР-амино-З-дезоксибетулиновой кислоты мы предлагаем следующий подход. В результате этерификации ди/ире/ибутилкарбонатом смеси аминов 86 и 87, полученных восстановлением оксима метилбетулоната 69, За- и Зр-7У-(/я/>еибутоксикарбонил)-эпимеры 88 и 89 хорошо отделялись в результате хроматографической очистки (схема 9). Структура ЗР-эпимера 89 установлена

методом рентгеноструктурного анализа. В индивидуальном виде метиловые эфиры За- и ЗР-амино-З-дезоксибетулиновой кислоты 86 и 87 были получены из соответствующих Вос-производных 88 и 89 при использовании муравьиной кислоты.

Далее проведена модификация Зр-амино-З-дезоксибетулиновой кислоты 87. Её цианэтилирование привело к Зр-^-пропионитрилу 91, который восстановили 1лА1Н4 и окислили реактивом Джонса до кислоты 92. Зр-Амино-З-дезоксибетулиновая кислота 87 реагировала с изоникотиновым альдегидом с образованием имина 93. В результате восстановления ЛЧЗос-эфира 89 1лА1Н4 получили З-дезокси-ЗР-метоксиаминобетулин 90.

Схема 9

Условия: а. №ВН3СЫ, ЫН4ОАс, 15% "ПС13, МеОН, 0 "С, 24 ч, выходы: 22% (86), 66% (87); Ь. ВосгО, СН2С12, 25 °С, 12 ч, выходы: 24% (88), 74% (89); с. НСООН, МеОН, 20 °С, 2 ч, выходы: 89-92%; а. ИА1Н4, ТГФ, 60 "С, 4 ч, выход: 76%; е. СН2=СНШ, 1,4-диоксан, 40% КОН, 25 °С, 26 ч, выход: 62%; Г Реактив Джонса, ацетон, 25 °С, 6 ч, выход: 64%; g. С5Н4СНО, бензол, 80 °С, 8 ч, выход: 86%.

Таким образом, предложен практичный метод получения индивидуальных метиловых эфиров За- и Зр-амино-З-дезоксибетулиновой кислоты, основанный на разделении их /иретябутоксикарбонатов методом колоночной хроматографии и последующем снятии защитной группы с помощью муравьиной кислоты. Осуществлен синтез производных Зр-амино-З-дезоксибетулиновой кислоты с метоксиаминным, 2-цианоэтильным, Лг-аминопропильным и изоникотиноильным фрагментами.

1.4.3. Синтез азотсодержащих производных 3-амино-3,4-секо-4(23),20(29)-лупдиена

Путем превращения оксима метилбетулоната по реакции Бекмана в 3,4-секонитрил 94 и его восстановления иА1Н4 мы получили еще одно доступное соединение 95 с аминометиленовой группой. С использованием разработанных подходов проведено его цианэтилирование и восстановление, а также ацилирование хлорангидридами 3- и 4-пиридинкарбоновых кислот с образованием новых азотсодержащих тритерпеноидов 97-99.

Условия: а. 1лА1Н4, ТГФ, 60 "С, 6 ч, выходы: 74-82%; Ь. СН2=СНСЫ, 1,4-диоксан, 40% КОН, 25 "С, 20 ч, выход: 81%; с. С5Н4КСОС1 или 1-С,Н4ЫСОС1, пиридин, ОМАР, 115 "С, 14 ч, выходы: 75% и 80%.

Таким образом, на основе 3-амино-3,4-секо-4(23),20(29)-лупдиена осуществлен синтез Л'-аминопропильных и А^ацильных производных.

1.5. Синтез тритерпеновых аналогов скваламина и стероидных полиаминов 1.5.1. Синтез 3-дезоксиспермидинобетулина

Основываясь на литературных методах синтеза скваламина, для получения его тритерпенового аналога мы апробировали несколько из них. Первый подход заключался во взаимодействии ЗР-амино-З-дезоксибетулиновой кислоты 87 с третбутил-^-(4-цианобутил)-А-3-(йодпропил)-карбонатом 100, выход Зр-Л'-1-(Лг(3-(4-аминобутил)-1,3-диаминопропил))-3-амино-3-дезоксиметилбетулина 102 составил 24% (схема 11). Второй подход основывался на реакции восстановительного аминирования кислоты 87 /я/?етбутил-Лг-(4-аминобутил)-Л'г-3-(оксопропил)карбонатом 101 в присутствии КаВН3СМ, выход конъюгата 102 составил 21%. Поскольку эти два подхода требуют использования дорогостоящих

Схема 10

реактивов, наиболее приемлемым считаем третий, заключающийся во взаимодействии метилового эфира бетулоновой кислоты 103 с Л-(3-аминопропил)-1,4-диаминобутаном в присутствии каталитического количества ТК1РгО)4 с образованием основания Шиффа, восстановление которого цианоборгидридом натрия привело к конъюгату метилбетулоната со спермидином 104 с выходом 34%.

Схема 11

Условия: a. K2C03, CH3CN, 80 °С, 20 ч; b. LiAlH4, ТГФ, 60 °С, 3 ч; с. НСООН, МеОН, 20 °С, 2 ч; d. бензол, Ti(OíPr)4,80 °С, 16 ч; е. NaBHjCN, NH4OAc, 15% TiCl3, МеОН, 25 "С, 12 ч.

Схема 12

Условия: a. NH2(CH2)3NH(CH2)4NH2, бензол, Tí(OjPt)4, 80 "С, 18 ч, выход 86%; b. NaBH3CN, NH4OAc, 15% TiCl3, МеОН, 25 "С, 14 ч, выход: 34%.

1.5.2. Синтез тритерпеноидов, содержащих аминопропоксифрагменты в положениях СЗ, С20 и С28

С целью получения "разветвленных" (то есть имеющих аминопропоксифрагменты одновременно в положениях СЗ, С20 и С28) в качестве аналогов стероидных полиаминов проведено цианэтилирование ЗР,20Д,28-три-О-гидрокси-29-норлупана 106 и 29-норлуп-20-сш-оксиминобетулина 107 с

последующим восстановлением дибораном с образованием целевых 3ß,20Ä,28-три(З-аминопропокси)- 109 и Зр,28-ди-0-(3-аминопропокси)-29-норлуп-(3-аминопропоксиамино)тритерпеноидов 111.

Схема 13

Условия: а. 1лА1Н4, ТГФ, 60 "С, 2 ч, быход 60%; Ь. ЫН2ОН НС1, шфидин, 115 "С, 2 ч, выход 87%; с. СН2=СНСН 40% КОН, ТЭБАХ, 1,4-диоксан, 25 °С, 6 ч, выходы: 56-69%; 4 ЫаВН4, ВРз-Е^О, ТГФ, 65 "С, 6 ч, выходы: 70-82%.

Таким образом, с использованием реакций цианэтилирования тригидроксилупана, 20-оксиминобетулина и восстановления синтезированы разветвленные О- и Л'-аминопропокситритерпеноиды, являющиеся аналогами стероидных полиаминов.

2. Фармакологическая активность новых азотсодержащих тритерпеноидов*

В результате фармакологических исследований протестировано 19 производных бетулина, олеаноловой, урсоловой и глицирретовой кислот.

Изучение свойств производных 3-оксо-17-{4-метилпиперазин-1-ил)-карбонилолуяа-20(29)-ена проведено в Новосибирском институте органической химии им. H.H. Ворожцова СО РАН, антимикробной активности производных тритерпеноидов - в Институте клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН (г. Оренбург), противовирусной активности - в ГУ НИИ эпидемиологии и микробиологии МЗ Республики Беларусь (г. Минск), противовирусной и противотуберкулезной активностей - в подразделениях Национального института аллергологии и инфекционных заболеваний США, цитотоксячности - в Национальном институте рака (США).

Установлено, что 3-оксо-17-(4-метилпиперазин-1-ил)-карбонилолупа-20(29)-ен проявляет выраженную противоопухолевую активность, не стимулирует диссеминацию опухоли, снижает тяжесть патологических изменений в тканях, вызванных паранеопластическими синдромами. Введение фрагмента N-метилпиперазинила в структуру бетулоновой кислоты и последующая модификация ведут к снижению противовоспалительной, гепатопротекторной и антиоксидантной активности.

зр,28-Ди-[3-(аминопропокси)]-лупа-20(29)-ен 12 проявил противоопухолевую активность in vitro по отношению к клеткам рака толстой кишки одной линии, лейкоза двух линий; зр-0-гидрокси-28-[3-(аминопропокси)]-олеан-12-ен 13 активен в отношении клеток рака толстой кишки двух линий, рака молочной железы одной линии, лейкоза четырех линий, меланомы одной линии; Зр-[3-(аминопропокси)]-17-(4-метилпиперазин-1-ил)-карбонилолупа-20(29)-ен 50 показал широкий спектр цитотоксичности в отношении клеток пяти линий рака легкого, семи линий рака толстой кишки, четырех линий рака молочной железы, пяти линий рака яичников, шести линий лейкоза, четырех линий рака почки, семи линий меланомы, двух линий рака предстательной железы, трех линий рака центральной нервной системы. По результатам углубленного изучения соединения 13 и 50 можно рекомендовать для изучения противоопухолевой активности in vivo. Показано, что аминопропоксифрагмент является новой фармакофорной группой в синтезе противораковых агентов на основе тритерпеноидов.

Бетулин и бетулоновая кислота обладают антимикробной активностью в отношении клонов Staphylococcus aureus в концентрации 90 мг/мл, бетулин проявляет бактериостатический эффект в отношении клонов Klebsiella pneumoniae в концентрации 60 мг/мл. 3-Оксо-17-(4-метилпиперазин-1-ил)-карбонилолупа-20(29)-ен 44 и 2-цианоэтоксииминопроизводное 73 оказывают антимикробное действие в отношении клонов S. aureus в концентрации 100 мг/мл.

Среди исследованных соединений 22, 31, 32, 44, 73, 75, 87, 94 в отношении респираторных инфекций новых перспективных противовирусных агентов не выявлено.

В экспериментах in vitro обнаружена ингибирующая активность соединений 22 и 75 по отношению к вирусу папилломы человека (штамм HPV-11) с индексами селективности SI25 и 30, соответственно.

В исследованной концентрации >10 Мкм/мл процент торможения роста бактерии Micobacterium tuberculosis штамма H37Rv бетулином и его производными (1, 4, 5, 9, 13, 31, 44, 50, 51, 63, 68, 69, 73, 75, 94, 103, 105) имел диапазон от -33.97% до 14.76%, что свидетельствует о низкой активности. Оксим бетулоновой 69 и метиловый эфир 2-циано-3,4-секо-лупа-20(29)-ен-28-овой 94

кислот тормозят рост микобактерий на 77.55% и 60.06%, достаточно высокая активность может быть связана с агрегацией этих веществ с бактериями.

ВЫВОДЫ

1. Выполнен цикл исследований по направленному синтезу новой группы фармакологически перспективных О- и jV-аминопропилтритерпеноидов лупанового, олеананового и урсанового типов.

2. В результате реакций цианэтилирования гидроксильных групп бетулина, эритродиола, уваола, олеантриола, триоксилупана и этилен-1,2-бис(бетулината) с последующим восстановлением цианоэтильных фрагментов в положениях СЗ, С20 и С28 синтезированы 3-аминопропокси- и З-аминопропил-З-аминопропокситритерпеноиды.

3. На основе хлорангидридов бетулиновой и олеаноловой кислот синтезированы тритерпеноиды с длинноцепочечными алканполиаминными фрагментами (6-[бис(3-аминопропил)амино]гексиламино-; бис(2-амииоэтил)амино-, jV-(3-аминопропил)-1,4-диаминобутил-) в положениях СЗ и С28.

4. Впервые проведено цианэтилирование тритерпеновых кетоксимов и амидоксимов с образованием 2-цианоэтоксиимино- и 3-(2-цианэтило-2-цианоэтокси)амидоксим-пропоксииминопроизводных, ставших важными синтонами в синтезе соединений с 3-аминопропоксиамино- и (З-аминопропил-З-аминопропокси)-3-амидоксимпропоксииминофрагментами. Осуществлен синтез производных Зр-амино-З-дезоксибетулиновой кислоты с метоксиаминной, 2-цианоэтильной, JV-аминопропильной и изоникотиноильной группами.

4. Реализовано три подхода для синтеза тритерпеноидного конъюгата со спермидином в положении СЗ, наибольший выход (34%) достигался в реакции восстановительного аминирования метилового эфира бетулоновой кислоты спермидином. В результате цианэтилирования и восстановления 3(3,20^,28-тригидроксилупана и 20-оксиминобетулина синтезированы аналоги стероидных полиаминов, имеющие О- и Лг-аминопропилфрагменты в положениях СЗ, С20 и С28.

5. Среди производных тритерпеноидов выявлены новые терапевтически перспективные соединения: 3-оксо-17-(4-метилпиперазин-1 -ил)-карбонилолупа-20(29)-ен является корректором паранеопластических повреждений и токсических эффектов цитостатической полихимиотерапии; Зр-0-гидрокси-28-[3-(аминопропокси)]-олеан- 12-ен и 3(3-[3 -(аминопропокси)]-] 7-(4-метилштеразин-1 -ил)-карбонилолупа-20(29)-ен проявили противоопухолевую активность в отношение различных клеток in vitro и рекомендуются для изучения ш vivo. ЗР-Гидрокси-28-[3-(аминопропокси)-2-цианоэтил]-лупа-20(29)-ен и 3-дезокси-3-(2-

этоксиимино)-12-ен-урс-28-овая кислота являются эффективными ингибиторами вируса папилломы человека in vitro.

Основное содержание работы изложено в следующих публикациях:

1. Giniyatullina G.V., Flekhter ОБ., Baikova I.P., Starikova Z.A., Tolstikov G.A. Effective synthesis of methyl 3P-amino-3-deoxybetulinate. // Chem. Nat. Сотр. - 2008. - Vol. 44. - No. 5. - P. 603-605.

2. Giniyatullina G.V., Flekhter O.B., Tolstikov G.A. Synthesis of squalamine analogues on the basis of lupane triterpenoids. H Mendeleev Communications. - 2009. - Vol. 19. -No. l.-P. 32-33.

3. Казакова О.Б., Гиниятуллина Г.В., Толстиков Г.А., Катаев В.Е., Мусин. Р.З. Синтез и модификация тритерпеноидов с двумя лупановыми каркасами. /У Биоорганическая химия. - 2009. - Т. 35(5). - С. 714-720.

4. Казакова О.Б., Гиниятуллина Г.В., Толстиков Г.А., Медведева Н.И., Уткина Т.М., Карташова O.JI. Синтез, модификация и антимикробная активность N-метилпиперазиниламидов тритерпеновых кислот. // Биоорганическая химия. -2010. -Т. 36(3). - С. 416-422.

5. Kazakova О.В., Giniyatullina G.V., Yamansarov E.Yu., Tolstikov G.A. Betulin and ursolic acid synthetic derivatives as inhibitors of Papilloma virus. // Bioorg. Med. Chem. Lett. - 2010. - Vol. 20. - No. 14. - P. 4088-4090.

6. Флехтер О.Б., Третьякова E.B., Смирнова И.Е., Гиниятуллина Г.В., Васильев О.Н., Галин Ф.З., Толстиков Г.А. Synthesis of di- and triterpene dimers on the basis of dihidroquinopimaric and Betulonic Acids. // Book of abstracts 2nd International Conference on Natural Products and Phisiologically Active Substances and 3rd EuroAsian Heterocyclic Meeting «Heterocycles in Organic and Combinatorial Chemistry», г. Новосибирск, 12-17 сентября 2004, С. 62.

7. Гиниятуллина Г.В., Флехтер О.Б. Галин Ф.З. Толстиков Г.А. Синтез тритерпеновых аналогов скваламина на основе бетулина. // Book of abstracts International Symposium on Advanced Science in Organic Chemistry. June 26-30, 2006, Sudak, Crimea, C-035.

8. Гиниятуллина Г.В., Флехтер О.Б., Толстиков Г.А. Синтез тритерпенового А-секополиметиленполиамина на основе бетулина. // Тезисы докладов VI Всероссийского научного семинара с молодежной научной школой "Химия и медицина", Уфа, 26-30 ноября 2007, С. 137.

9. Гиниятуллина Г.В., Флехтер О.Б., Медведева Н.И., Байкова И.П., Толстиков Г.А. Синтез тритерпеновых метиленполиаминов на основе 3-ацетилбетулина. // Тезисы докладов V Всероссийской научной конференции «Химия и технология растительных веществ», Уфа, 8-12 июня 2008, С. 106.

10. Гиниятуллина Г.В. Первый синтез аналога скваламина на основе лупановых тритерпеноидов. // Тезисы докладов XI Молодежной научной школы-конференции по органической химии, Екатеринбург, 24-28 ноября 2008, С. 73-75.

11. Гиниятуллина Г.В., Казакова О.Б., Толстикова Т.Г., Сорокина И.В., Толстиков Г.А. Химическая модификация Л-метилпиперазида бетулоновой кислоты - нового эффективного противоопухолевого агента. // Тезисы докладов XI Молодежной

научной школы-конференции по органической химии, Екатеринбург, 24-28 ноября 2008, С. 287-289.

12. Байкова И.П., Гиниятуллина Г.В., Казакова О.Б., Спирихин Л.В., Толстиков Г.А. Синтез и строение О-пропиламинопроизводных бетулина, эритродиола и уваола. // Тезисы докладов международной конференции «Биологически активные вещества: фундаментальные и прикладные вопросы получения и применения», 25-30 мая, Новый свет, АР Крым, Украина, 2009, С. 15.

13. Гиниятуллина Г.В., Казакова О.Б., Касрадзе В.Г., Толстиков Г.А. Модификация тритерпеноидов с двумя лупановыми каркасами. // Сборник докладов и тезисов Всероссийской конференции "Химия растительных веществ и органический синтез". Сыктывкар, 2-5 июня 2009, С. 26.

14. Казакова О.Б., Гиниятуллина Г.В., Кузнецова Н. В., Толстиков Г.А. Синтез и модификация TV-метилпиперазинамидов тритерпеновых кислот. // Тезисы докладов VII всероссийской конференции с молодежной научной школой "Химия и медицина, 0рхимед-2009" Россия, Уфа, 1-5 июля 2009, С. 178.

15. Гиниятуллина Г.В., Казакова О.Б., Толстиков Г.А., Медведева Н.И., Утаина Т.М., Карташова О.Л. Синтез, модификация и антимикробная активность N-метилпиперазиниламидов тритерпеновых кислот. // Тезисы докладов VIII всероссийской научной конференции с международным участием "Химия и медицина", Россия, Уфа, 6-8 апреля 2010, С. 196.

16. Apryshko G.N., Kazakova О.В., Tolstikov G.A., Giniyatullina G.V., Tretyakova E.V., Smirnova I.E., Pugacheva R.B., Lysenko S.A. The computational predicting mechanisms of action and molecular targeting of antineoplastic betulin and quinopimaric acid derivatives. // Proceedings of 8th International symposium on targeted anticancer therapies, Bethesda, MD, USA, March 4-6, 2010, D03, P. 43.

17. Казакова О.Б., Гиниятуллина Г.В., Толстиков Г.А. Производные тритерпеноидов - эффективные ингибиторы вирусов папилломы и птичьего гриппа (H1N1) // Тезисы докладов 2-го Международного конгресс-партнеринга и выставки по биотехнологии и биоэнергетике "ЕвразияБио-2010", Москва, 13-15 апреля, 2010, С. 85-86.

18. Сорокина И.В., Баев Д.С., Толстикова Т.Г., Жукова H.A., Казакова О.Б., Гиниятуллина Г.В. jV-метилпиперазиниламид бетулоновой кислоты - корректор противоопухолевой химиотерапии. // Тезисы докладов 2-го Международного конгресс-партнеринга и выставки по биотехнологии и биоэнергетике "ЕвразияБио-2010", Москва, 13-15 апреля, 2010, С. 172-173.

19. Гиниятуллина Г.В., Казакова О.Б., Толстиков Г.А., Апрышко Г.Н. Цитотоксическая активность аминопропилоксипроизводных бетулина и эритродиола. // Тезисы докладов первой конференции серии ChemWasteChem: "Химия и полная переработка биомассы леса", Санкт-петербург, 14-18 июня, 2010, С. 26.

Отпечатано в типографии ГОУ ВПО «Башгосмедуниверситег РОЗДРАВА» Лицензия №0177 от 10.06.96г. Подписало в печать 26.08.2010 г. Тираж 230 экз. Заказ № 699. 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР "Синтез, превращения и 10 фармакологическая активность стероидных полиаминов"

Введение

1.1. Синтезы скваламина на основе холевых кислот

1.1.1. Синтез на основе Зр-ацетокси-5-холевой кислоты

1.1.2. Синтез 2AR- и 245-скваламина на основе стигмастерола

1.1.3. Синтез на основе 7а-(бензилокси)-3 -диоксолан-холестан-24Л-ола

1.1.4. Синтез на основе сульфата холевой кислоты

1.1.5. Синтез на основе 3-кето-23,24-биснорхол-4-ен-22-ола

1.1.6. Синтез на основе метил-3-кето-5а-хенодеоксихолоната

1.1.7. Синтез на основе десмостерола

1.1.8. Синтез на основе метилгиодезоксихолоната

1.2. Синтезы аналогов скваламина

1.2.1. Синтез За-эпискваламина

1.2.2. Синтез аналогов скваламина на основе метилового эфира 22 гиодезоксихолевой кислоты

1.2.3. Синтез аналогов скваламина на основе 22-гидрокси-23,24-динорхол-4-ен- 23 З-оиа

1.2.4. Синтез стероидных метиленполиаминов на основе холестан, 4-холестен, 24 5-холестен-З-онов

1.2.5. Синтез аналогов скваламина на основе холестерола

1.2.6. Синтез 7-фтор-З-аминостероидов

1.2.7. Синтез аналогов скваламина на основе 3Р-ацетокси-23,24-динор-5- 28 холеновой кислоты

1.2.8. Синтез конъюгатов холилглицина с 7У-(3-аминопропил)-1,3- 29 пропандиамином

1.2.9. Синтез аналогов скваламина на основе холановых кислот

1.2.10. Синтез конъюгатов желчных кислот с полиаминоазидотимидином

1.3. Синтез тродускумина и его аналогов

1.4. Стероидные полиамины из феромона морской миноги и их аналоги

1.5. Полимиксин В и его стероидные аналоги

1.5.1. Синтез стероидных карбаматов

1.5.2. Синтез стероидных катионных пептидов

1.6. Аналоги скваламина, содержащие два или четыре стероидных каркаса

1.7. Биологические свойства скваламина, тродускумина и их аналогов 43 Выводы

ГЛАВА 2. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

2.1. Синтез аминопропоксипроизводных бетулина, эритродиола, уваола и 54 олеантриола

2.1.2. Синтез и модификация тритерпеноидов с двумя лупановыми каркасами

2.2. Синтез и модификация амидов тритерпеновых кислот

2.2.1. Синтез аминопропиламинопроизводных бетулиновой и олеаноловой 64 кислот

2.2.2. Синтез и модификация JV-метилпиперазиниламидов тритерпеновых 71 кислот

2.2.3. Синтез амидов тритерпеновых кислот с алканполиаминами

2.3. Модификация кетоксимов тритерпеноидов 76 2.3.1. Синтез и модификация З-дезокси-ЗР-(З-аминопропоксиамино)тритерпеноидов

2.3.2. Синтез и модификация З-амино-З-дезоксибетулиновой кислоты

2.3.3. Синтез азотсодержащих производных 3-амино-3,4-секо-4(23),20(29)- 83 лупдиена

2.4. Синтез тритерпеновых аналогов скваламина и стероидных полиаминов

2.4.1. Синтез 3-дезоксиспермидинобетулина

2.4.2. Синтез разветвленных аминопропокситритерпеноидов

ГЛАВА 3. ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ НОВЫХ 88 ПРОИЗВОДНЫХ ТРИТЕРПЕНОИДОВ

ГЛАВА 4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ВЫВОДЫ

Интерес к растительным метаболитам как к наиболее доступным химическим соединениям возник в самом начале становления химической науки. С развитием химии этот интерес постоянно углублялся и расширялся. Одно из самых интересных и перспективных областей изучения растительных метаболитов сегодня — это синтетические трансформации, позволяющие усилить или изменить их нативную биологическую активность, и далее использовать полусинтетические производные для разработки лекарственных препаратов. На сегодняшний день синтетические трансформации природных соединений является одним из ведущих мировых направлений создания новых лекарственных препаратов. Около половины используемых в мировой медицинской практике препаратов основаны на природных соединениях, в том числе растительного происхождения. Эти соединения имеют такие преимущества как исходная биологическая активность и природная подготовленность их молекул к синтетическим трансформациям. Медицинская химия последних двух десятилетий накопила целый ряд ярких примеров разработки высокоэффективных лекарственных препаратов, к которым следует отнести производные таксола, форсколина, артемизинина, глицирризиновой кислоты, арглабина и других метаболитов. В ряду тритерпеновых соединений по доступности и потенциалу для медицинского применения абсолютными лидерами являются гликозид корня солодки глицирризиновая кислота и ее агликон глицирретовая кислота, бетулин - основной компонент бересты березы, урсоловая и олеаноловая кислоты - метаболиты травянистых и кустарниковых растений (брусники, черники, клюквы, облепихи, омелы, толокнянки, боярышника, шиповника, рододендронов и многих других). Разработка новых направлений модификации метаболитов - лидеров с получением на их основе соединений с важной фармакологической активностью является актуальной.

-I чсоон но

CH2OH олеаноловая кислота X = СН3, Y = Н урсоловая кислота X = Н, Y = СН3

Hi бетулин глицирретовая кислота

Значительную группу биологически активных тритерпеноидов составляют азотсодержащие производные. Убедительно показано, что наличие азотсодержащего заместителя в различных положениях структуры тритерпеноида обуславливает различные виды активности [1-9]. В качестве примеров можно привести никотиноаты бетулина и глицирризиновой кислоты (ниглизин), обладающие широким спектром активности [10, 11]. Длинноцепочечные амиды, бетулиновой кислоты обладают анти-ВИЧ активностью, механизм их действия заключается в ингибировании стадии слияния оболочки вирусной частицы с клеточной мембраной [12-14]. Тритерпеноиды, имеющие в боковой цепи длинноцепочечные кислород- и азотсодержащие фрагменты, перспективны для разработки противовирусных и противоопухолевых агентов [15-17]. Так, дипептид бетулоновой кислоты с фрагментом фенилаланина оказывает влияние на ранние этапы цикла репродукции вируса, заслуживают внимания его высокая активность в отношении вируса простого герпеса и иммуностимулирующее действие [18]. 2-Циано-3,12-диоксоолеан-1,9(11)-диен-28-овая кислота (CDDO), ее метиловый эфир и имидазолид активны в отношении клеток лейкемии, множественной миеломы, молочной железы, легких, остеосаркомы и проходят первую стадию клинической апробации. Оксим бетулоновой кислоты является перспективной платформой для разработки лекарственных форм препаратов для лечения и профилактики гриппа [19, 20].

При разработке стратегии синтеза новых азотсодержащих производных тритерпеноидов мы обратили внимание на успехи, полученные в синтезе скваламина, тродускумина и их аминостерольных аналогов. Отметим, что исследование метаболитов морских организмов во второй половине минувшего века оформилось как отдельное крупное направление биоорганической химии, оказывающее влияние на развитие синтетической органической химии. В длинном ряду морских метаболитов, поражающих разнообразием и сложностью своих структур, заметное место занимают полиаминные соединения. Среди стероидных полиаминов обнаружены соединения, обладающие сильной антибактериальной, противоопухолевой активностью, и эффективные в отношении возрастной дистрофии желтого пятна. Более того, лактат скваламина "Evizon" проходит клиническую апробацию в качестве противоопухолевого средства для лечения рака яичников, предстательной железы, легких и возрастной дистрофии желтого пятна. Тродускумин находится на первой стадии клинических исследований для лечения ожирения, более того, Управление по контролю за качеством пищевых продуктов и лекарственных препаратов США (FDA) разрешило его испытания для двух типов диабета. Синтезу, превращениям и фармакологической активности стероидных полиаминов посвящен литературный обзор настоящей диссертации.

Кроме того, в литературе практически отсутствовали примеры, за исключением работ [1, 21, 22], по использованию реакции цианоэтилирования для модификации тритерпеноидов. Небольшая литературная справка о возможностях этой реакции приведена в начале главы 2.

Учитывая вышесказанное, была сформулирована цель работы - синтез и модификация О- и TV-аминопропилпроизводных пентациклических тритерпеноидов с потенциальной фармакологической активностью.

Стратегия синтеза новых производных тритерпеноидов включала:

1. разработку подходов для модификации тритерпеноидов с использованием реакции цианэтилирования их спиртов, аминов, амидов, кетоксимов и амидоксимов с последующим восстановлением и превращениями цианоэтильных производных;

2. синтез и модификацию амидов тритерпеновых кислот с N-метилпиперазином и алканполиаминами;

3. синтез тритерпеновых аналогов скваламина и стероидных полиаминов;

4. скрининг фармакологической активности производных тритерпеноидов и выявление новых терапевтически перспективных агентов.

выводы

1. Выполнен цикл исследований по направленному синтезу новой группы фармакологически перспективных О- и TV-аминопропилтритерпеноидов лупанового, олеананового и урсанового типов.

2. В результате реакций цианэтилирования гидроксильных групп бетулина, эритродиола, уваола, олеантриола, триоксилупана и этилен-1,2-бис(бетулината) с последующим восстановлением цианоэтильных фрагментов в положениях СЗ, С20 и С28 синтезированы 3-аминопропокси- и З-аминопропил-З-аминопропокситритерпеноиды.

3. На основе хлорангидридов бетулиновой и олеаноловой кислот синтезированы тритерпеноиды с длинноцепочечными алканполиаминными фрагментами (6-[бис(3-аминопропил)амино]гексиламино-; бис(2-аминоэтил)амино-, Аг-(3-аминопропил)-1,4-диаминобутил-) в положениях СЗ и С28.

4. Впервые проведено цианэтилирование тритерпеновых кетоксимов и амидоксимов с образованием 2-цианоэтоксиимино- и 3-(2-цианэтило-2-цианоэтокси)амидоксим-пропоксииминопроизводных, ставших важными синтонами в синтезе соединений с 3-аминопропоксиамино- и (3-аминопропил-3-аминопропокси)-3-амидоксимпропоксииминофрагментами. Осуществлен синтез производных 3 р-амино-3-дезоксибетулиновой кислоты с метоксиаминной, 2-цианоэтильной, TV-аминопропилыюй и изоникотиноильной группами.

4. Реализовано три подхода для синтеза тритерпеноидного конъюгата со спермидином в положении СЗ, наибольший выход (34%) достигался в реакции восстановительного аминирования метилового эфира бетулоновой кислоты спермидином. В результате цианэтилирования и восстановления ЗР,20Я,28-тригидроксилупана и 20-оксиминобетулина синтезированы аналоги стероидных полиаминов, имеющие О- и TV-аминопропилфрагменты в положениях СЗ, С20 и С28.

5. Среди производных тритерпеноидов выявлены новые терапевтически перспективные соединения: 3-оксо-17-(4-метилпиперазин-1-ил)карбонилолупа-20(29)-ен является корректором паранеопластических повреждений и токсических эффектов цитостатической полихимиотерапии; ЗР-0-гидрокси-28-[3-(аминопропокси)]-олеан-12-ен и 3р-[3аминопропокси)]-17-(4-метилпиперазин-1-ил)-карбонилолупа-20(29)-ен проявили противоопухолевую активность в отношение различных клеток in vitro и рекомендуются для изучения in vivo. 3(3-Гидрокси-28-[3-(аминопропокси)-2-цианоэтил]-лупа-20(29)-ен и 3-дезокси-3-(2этоксиимино)-12-ен-урс-28-овая кислота являются эффективными ингибиторами вируса папилломы человека in vitro.

1. Khokhar A.Q., Askam V. 2,2-disubstitued derivatives of 3,1 l-dioxo-18a- and 18(3-olean-12-en-30-oic acid. //Patent GB1214192 (1970).

2. Толстиков Г. А., Шульц E. E., Балтина Л. А., Толстикова Т. Г., Флехтер О.Б. Бетулин и его производные. Химия и биологическая активность. // Химия в интересах устойчивого развития. — 2005. — Т. 13. № 1. — С. 1-30.

3. Толстикова Т. Г., Сорокина И. В., Толстиков Г. А., Толстиков А. Г., Флехтер О. Б. Терпеноиды ряда лупана биологическая активность и фармакологические перспективы. I. Природные производные лупана. // Биоорг. химия. - 2006. - Т. 32. - № 1. - С. 42-55.

4. Kuo R.-Y., Qian К., Morris-Natschke S. L., Lee К.-Н. Plant-derived triterpenoids and analogues as antitumor and anti-HIV agents. // Nat. Prod. Rep. — 2009.-Vol. 26.-No. 10.-P. 1321-1344.

5. Laszczyk M. N. Pentacyclic triterpenes of the lupane, oleanane and ursane group as tools in cancer therapy. // Planta Medica. 2009. - Vol. 75. - No. 15. - P. 15491560.

6. Lee K.-H. Discovery and development of natural product-derived chemotherapeutic agents based on a medicinal chemistry approach. // J. Nat. Prod. -2010.-Vol. 73.-No. 3.-P. 500-516.

7. Pompei R., Laconi S., Ingianni A. Antiviral properties of glycyrrhizic acid and its semisynthetic derivatives. // Mini-Reviews Med. Chem. 2009. - Vol. 9. - No.8.-P. 996-1001.

8. Wang S.-R., Fang W.-S. Pentacyclic triterpenoids and their saponins with apoptosis-inducing activity. // Curr. Top. Med. Chem. 2009. - Vol. 9. - No. 16. — P. 1581-1596.

9. Балтика Л. А. Трансформации глицирризиновой кислоты. Поиск новых физиологически активных соединений. //Дисс. докт. хим: наук. — Уфа: ИОХ УНЦ РАН.- 1995.-520 с.

10. Карачурина Л. Т. Биохимические механизмы гепатопротекторного действия тритерпеноидов группы лупана и их фармакологическая активность. // Дисс. канд. биолог, наук. Уфа: ИОХ УНЦ РАН: - 2004. - 148 е.

11. Huang L., Ho Ph., Lee K.-H., Ghen C.-H. Synthesis and anti-HIV activity of bi-functional betulinic acid derivatives. // Bioorg. Med. Chem. 2006. - Vol. 14: -No. 7.-P. 2279-2289. '

12. Fulda S. Betulinic acid: a natural product with anticancer activity. // Mol. Nutr. Fodd Res.-2009.-Vol. 53.-No. l.-P. 140-146. *

13. Tripathi E., Kumar P., Singh R. A review on extraction; synthesis and anticancer activity of betulonic acid: // Gurr. Bioact. Compd. 2009. - Vol. 5. -No. 2.-P. 160-168.

14. Савинова О.В., Павлова Н.И., Бореко Е.И. Использование новых производных бетулина в комбинации с ремантадином для ингибирования репродукции вируса гриппа. // Антибиотики и химиотерапия. — 2009. — Т. 54.- № 5/6. С. 5-6.

15. Бореко Е. И:, Павлова Н. И., Савинова О. В., Флехтер О. Б., Нигматуллина Л. Р., Балтина Л. А., Галин Ф: 3., Толстиков Г. А. // Патент Республики Беларусь №7811 от 2005.11.10 (2005). ". ' . ■

16. Петренко Н. И., Шульц Э: Э., Толстиков Г. А, Синтетические трансформации высших терпеноидов. VI. Цианэтилирование бетулина и 3-ацетилбётулина. //Химия природ, соедин. 1999. - Спец. выпуск. - С. 22-23.

17. Karigiannis G, Papaioannou D: Structure, biological activity and synthesis of polyamine analogues and conjugates. // Eur. J. Org. Chem. 2000. - Vol. 2000. — No. 10.-P. 1841-1863.

18. Рогоза Л.Н., Салахутдинов Н.Ф., Толстиков F.A. Растительные алкалоиды- производные метиленполиаминов. // Успехи химии. — 2005. Т. 74. - № 4. -С. 411-427.

19. Рогоза Л.П., Салахугдинов Н.Ф., Толстиков Г.А. Алкалоиды животного происхождения производные полиметиленаминов. I. Продукты метаболизма морских организмов и микроорганизмов. // Биоорг. химия. — 2005. - Т. 31. - № 6. -С. 563-577.

20. Рогоза Л.Н., Салахугдинов Н.Ф., Толстиков Г.А. Алкалоиды животного происхождения производные полиметиленаминов. И. Полиаминные нейротоксины. // Биоорг. химия. - 2006. - Т. 32. - № 1. - С. 27-41.

21. Рогоза Л.Н., Салахутдинов Н.Ф., Толстиков Г.А. Синтез линейных производных метиленполиаминов природного происхождения и их аналогов. // Химия в интересах устойчивого, развития. — 2006. — Т. 14. № 1. — С. 497521.

22. Boman Н. G. Antibacterial peptides: key components needed in immunity. // Cell. 1991. - Vol. 65. - No. 2. - P. 205-207.

23. ZasIoffM. Antibiotic peptides as mediators of innate immunity. // Curr. Opin. Immunol. 1992. - Vol. 4. - No. 1. - P. 3-7.

24. ZasIoffM. Antibacterial molecules from frogs, sharks and man. // Phylogenet. Perspect. Immun. Insect Host Def. 1994. - P. 31-41.

25. Stone R. Deja vu guides the way to new antimicrobial steroid. // Science. -1993. Vol. 259. - No.5098. - P. 1125.

26. Cho J., Kim Y. Sharks: a potential source of antiangiogenic factors and tumor treatments. // Marine Biotechnology. 2002. - Vol. 4. - No. 6. - P. 521'- 525.

27. Enache L. A. Total synthesis of squalamine dessulfate. Conjugate addition to Ru (II) complexes of styrenes. // Dissertation doctor of philosophy in chemistry. -1997. Chicago. 163 P.

28. Savage P. В., Li C., Taotafa U., Ding В., Guan Q. Antibacterial*properties of cationic steroid antibiotics. // FEMS Microbiology Lett. 2002. - Vol. 217. - No. 1. -P. 1-7.

29. Shawakfeh K. Q. The synthesis, characterization and biological testing of new squalamine analogs. // Dissertation doctor of philosophy in chemistry. 1998. -178 P.

30. Butler M.S. Natural products to drugs: natural product-derived compounds in clinical trials. // Nat. Prod. Rep. 2008. - Vol. 25. - No. 3. - P. 475-516.

31. Moore K. S., Wehrli S., Roder H., Rogers M., Forrest J. N. Jr., McCrimmon D., ZasIoffM. Squalamine: an aminosterol antibiotic from the shark. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. - No. 4. - Vol. 90. - P. 1354-1358.

32. Rao M. N., Shinnar A. E., Noecker L. A., Chao T. L., Feibush В., Snyder В., Sharkansky I., Sarkahian A., Zhang X., Jones S. R., Kinney W. A., Zasloff M.

33. Aminosterols from the dogfish shark Squalus acanthias. II J. Nat. Prod. 2000. -No. 5.-Vol. 63.-P. 631-635.

34. Moriarty R. M., Tuladhar S. M., Guo L., Wehrli S. Synthesis of squalamine. A steroidal antibiotic from the shark. // Tetrahedron Lett. 1994. - Vol. 35. - No. 44. -P. 8103-8106.

35. Moriarty R. M., Enache L. A., Kinney W. A., Allen C. S., Canary J. W., Tuladhar S. M., Guo L. Stereoselective synthesis of squalamine dessulfate. // Tetrahedron. Lett. 1995. - Vol. 36. - No. 29. - P. 5139-5142.

36. Yun S.-S., Li W. Identification of squalamine in the plasma membrane of white blood cells in the sea lamprey, Petromyzon marinus. // J. Lipid Res. 2007. — Vol. 48. - No. 12. - P. 2579-2586.

37. Brunei J. M., Salmi Ch., Loncle C., Vidal N., Letourneux Y. Squalamine: A Polyvalent Drug of the Future? // Curr. Cancer Drug Targets. 2005. - Vol. 5. -No. 4.- P. 267-272.

38. Liang F., Wan Shuhui, Li Z., Xiong X., Yang L., Zhou X., Wu C. Medical applications of macrocyclic polyamines. // Current Med. Chem. 2006. - Vol. 13. -No. 6. -PI 711-727.

39. Emerson M.V., Lauer A.K. Emerging therapies for the treatment of neovascular age-related macular degeneration and diabetic macular edema. // Biodrugs. 2007. - Vol. 21. - No. 4. - P. 245-257.

40. Ciulla Т., Oliver A., Gast M. Squalamine lactate for the treatment of age-related macular degeneration. // Expert Rev. Ophthalmol. 2007. - Vol. 2. - No. 2. -P. 165-175.48. http:// clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00094120?term=squlamine&rank=4

41. Singh R., Sharma M., Joshi P., Rawat D.S. Clinical status of anti-cancer agents derived from marine sources. // Anti-Cancer Agents Med:. Chem. 2008. - Vol. 8. - No. 6.-P: 603-617.

42. Kinney W. A., Zhang X., Williams J. I., Johnston S., Michalak R: S., Deshpande M., Dostal L., Rosazza J. P. N. A short formal synthesis of squalamine from a microbial metabolite. // Org. Lett 2000. - Vol. 2. - No. 19. - P. 29212922.

43. Pearson A. J., Chen Y. S., Han G. R., Hsu S. Y., Ray T. A new method for the oxidation of alkenes to enones.1 An efficient synthesis of A5 — 7 — oxo steroids.//J. Chem. Soc., Perkin Trans 1. 1985. - No. 2. P. 267-273.

44. Kallner A. On the biosynthesis and metabolism of allodeoxycholic acid in the rat. Bile acids and steroids 175. // Acta: Chem. Scand. 1967. - Vol. 21. - No. 2. P. 232.

45. Tal D, M., Frisch G. D:,,Elliott W; HLBile acids^LXIX. Selective K-selectride reduction of 3,7-diketo steroids. //Tetrahedron. 1984. - Vol. 40. - No. 5. - P. 851854.

46. Djerassi C. The oppenauer oxidation. // Org: React. 1951. - Vol. 6. - No. 6. -P. 207-272. ; ,

47. Shultz A. G., McCloskey P. J., Court J. J. Enantioselective conversion of anthranilic acid derivatives to chiral cyclohexanes. Total synthesis of (+)-pumiliotoxinC. // J. Am. Chem. Soc. 1987. - Vol: 109.-No. 21. -P. 6493-6502.

48. Cunico R. F., Bedell. L. The triisopropylsilyl group as a hydroxyl protecting function. // L Org. Chem. - 1980. - Vol. 45. - No. 23. - P. 4797-4798.

49. Wetter H., Oertele К. Thexyldimethylsilyl chloride an easily accessible reagent for the protection of alcohols. // Tetrahedron Lett. 1985. - Vol. 26. - No. 45. - P. 5515-5518.

50. Arnostova L. M., Pouzar V., Drasar P. Preparation of steroid hydroxy sulfates. // Synth. Commun. 1990. - Vol. 20. - No. 10. - P. 1521-1529.

51. McGill J. M., LaBell E. S., Williams M. Hydride reagents for stereoselective reductive amination. An improved preparation of 3-endo-tropanamine. // Tetrahedron Lett. 1996. - Vol. 37. - No. 23. - P. 3977-3980.

52. Li C., Budge L. P., Driscoll C. D., Willardson В. M., Allman, G. W., Savage P. B. Incremental conversion of outer-membrane permeabilizers into potent antibiotics for gram-negative bacteria. // J. Am. Chem. Soc. 1999. - Vol. 121. -No. 5.-P. 931-940.

53. Zhou X. D., Cai F., Zhou W. S. A new highly stereoselective construction of the sidechain of squalamine through improved Sharpless catalytic asymmetric dihydroxylation. // Tetrahedron Lett. 2001 - Vol. 42. - No. 13. - P. 2537-2539.

54. ZlioUfX^- Di^GanF., ZhoutW: SLA stereoselective synthesis of squalamine. // . Tetrahedron. - 2002. - Vol. 58. - No. 52. - P. 10293-10299;

55. Zhou X. D., Zhou W. S. // Chinese Patent ZL99124007.3

56. Zhang D:-H, CailF., Zhou?X.-D:, Zhou W.-S. A concise and' stereoselective synthesis of squalamine. // Org: Lett. -2003: Vol. 5. -No. 18. - P. 3257-3259.

57. Corey E. J., Grogan> M. J. Stereocontrolled syntheses of 24(5),25 -epoxycholesterol and related! oxysterols; forv studies oni the activation of LXR receptors. // Tetrahedron Lett. 1998. - No. 51. - Voir39. - P: 9351-9354. /

58. Yadav J; S., Mysorekar S. V. A facile conversion of tertiaiy alcohols to olefins. // Synth: Gommun. 1989! -Vokl9r-No: 5&6u-P: 1057-1060^

59. Goodnow Jr. R., Konno K., Niwa M., Kallimopoulos Т., Bukownic R., Lenares D., Nakanishi K. Synthesis of glutamate; receptor antagonist philanthotoxin 433' (PhTX - 433) and its analogs. // Tetrahedron. - 1990. - Vol. 46. - No. 9. - P. 32673286.

60. Foricher J., Furbringer C., Pfoerttner K. Process for the catalytic oxidation of isoprenoids having allylic groups. // Patent US 5030739 (1991).

61. Gondos G., Orr C. Reduction of steroid 17-ketones by enantiomeric chiral reducing agents. // J. Chem. Soc., Chem. Commun. — 1982. — No. 21. P. 12391240.

62. Okumura K., Nakamura Y., Takeuchi S., Kato I., Fujimoto Y., Ikekawa N. Formal synthesis of squalamine from desmosterol. // Chem. Pharm. Bull. 2003. — Vol. 51.-No. 10.-P. 1177-1182.

63. Shen J.M., Zhou X.D., Zhou W.S. Formal synthesis of squalamine from methylhyodeoxycholanate. // Acta Chimica Sinica. — 2006. — Vol. 64. — No. 14. — P. 1513-1516.

64. Zasloff M. Use of squalamine for the manufacture of a medicament for inhibitingNHE. //Pat. WO 9640151.

65. Kim H. S., Choi B. S., Kwon K. S., Lee S. O., Kwak H. J., Lee С. H. Synthesis and antimicrobial activity of squalamine analogue. // Bioorg. Med. Chem. 2000. -Vol. 8. - No. 8. - P. 2059-2065.

66. Choucair В., Dherbomez M., Roussakis C., El kihel L. Synthesis of 7a- and 7f3-spermidinylcholesterol, squalamine analogues. // Bioorg. Med. Chem. Lett. -2004.-Vol. 14.-No. 16.-P. 4213-4216.

67. Ji S;H:, Xiao Q., Ju Y., Zhao Y. Synthesis of novel dimeric steroidal-nucleoside phosphoramidates. // Chem. Lett. — 2005. —Vol. 34. No. 7. - P. 944:

68. Ji G.-J., Xue C.-B., Zeng J.-N., Li L.-P., Chai W.-G., Zhao Y.-F. Synthesis of N-(diisopropyloxyphosphoryl)amino acids and peptides. // Synthesis. 1988. -Vol. 1988.-No. 6.-P. 444.

69. Wu D., Ji S., Wu Y., Ju Y., Zhao Y. Design, synthesis, and antitumor activity of bile acid-polyamine-nucleoside conjugates. //Bioorg. Med. Chem. Lett. 2007. -Vol. 17. —No. 11. — P. 2983-2986.

70. Shu Y., Jones S.R., Kinney W.A., Selinsky B.S. The synthesis of spermine analogs of the shark aminosterol squalamine. // Steroids. — 2002. — Vol. 67. No. 3,4.-P. 291-304.

71. Hoye T.R., Dvornikovs V., Fine J.M., Anderson K.R., Jeffrey C.S., Muddiman D.C., Shao F., Sorensen P.W., Wang J. // J. Org. Chem. 2007. - Vol. 72. - No. 20.-P. 7544-7550.

72. Fine J. M., Sorensen P. W. Isolation and biological activity of the multi-component sea lamprey migratory pheromone. // J. Chem. Ecol. — 2008. Vol. 34. -No. 10.-P. 1259-1267.

73. Seiler N., Knodgen В., Haegele K. N-(3-Aminopropyl)pyrrolidin-2-one, a product of spermidine catabolism in vivo. II Biochem. J. — 1982. — Vol. 208. — No. l.-P. 189-197

74. Geall A.J., Taylor R.J., Earll M.E., Eaton M.A.W., Blagbrough I.S. Synthesis of cholesteryl polyamine carbamates: pKa studies and condensation of calf thymus DNA. // Bioconjugate Chem. 2000. - Vol. 11. - No. 3. - P. 314-326.

75. Blagbrough I. S., Al-Hadithi D., Geall A. J. DNA condensation by bile acid conjugates of thermine and spermine. // Pharm. Pharmacol. Commun. 1999. -Vol. 5.-No. 3.-P. 139-144.

76. Kim H.-S. Kwon K.-C., Kim K. S., Lee С. H. Synthesis and antimicrobial activity of new 3a-hydroxy-23,24-bisnorcholane polyamine carbamates. // Bioorg. Med. Chem. Lett.-2001.-Vol. 11.-No. 11.-P. 3065-3068.

77. Savage P. B. Cationic steroid antibiotics. // Curr. Med. Chem: Anti -Infective Agents. - 2002. - Vol. 1. - No. 3. - P. 293-304.

78. Blagbrough I.S., Geall A.J., Neal A.P. Polyamines and novel polyamine conjugates interact with DNA in ways that can be exploited in non-viral gene therapy. II Biochem. Soc. Transaction. 2003. - Vol. 31. - No. 2. - P. 397-406.

79. Savage P. В. Design, synthesis and characterization of cationic peptide and steroid antibiotics. // Eur. J. Org. Chem. 2002. - Vol. 2002. - No. 5. - P. 759-768.

80. Ding В., Yin N., Liu Y., Cardenas-Garcia J., Evanson R., Orsak Т., Fan M., Turin G., Savage P. B. Origins of cell selectivity of cationic steroid antibiotics // J. Am. Chem. Soc. 2004. - Vol. 126.-No. 42.-P. 13642-13648.

81. Savage P. В., Li Ch. Cholic acid derivatives: novel antimicrobials. // Exp. Opin. Invest. Drugs. 2000. - Vol. 9. - No. 2. - P. 263-272.

82. Salunke D. В., Hazra B. G., Pore V. S. Bile acide — polyamine conugates as synthetic ionophores. // Archivoc. 2003. - Vol. ix. — P. 115-125.

83. Chen W.-H., Shao X.-B., Moellering R., Wennersten C., Regen S. L. A bioconjugate approach toward squalamine mimics: insight into the mechanism of biological action. // Bioconjugate Chem. 2006. - Vol. 17. - No. 6. - P. 15821591.

84. Brunei J. M., Letoumeux Y. Recent advances in the synthesis of spermine and spermidine analogs of the shark aminosterol squalamine. // Eur. J. Org. Chem. -2003. Vol. 2003. - No. 20. - P. 3897-3907.

85. Kikuchi K., Bernard E. M., Sadownik A., Regen S. L., Armstrong D. Antimicrobial activities of squalamine mimics. // Antimicrobial agents and chemotherapy. 1997. - Vol. 41. - No. 7. - P. 1433-1438.

86. Selinsky B. S., Zhou Z., Fojtik K. G., Jones S. R., Dollahon N. R., Shinnar A. E. The aminosterol antibiotic Squalamine permeabilizes large unilamellarphospholipid vesicles. // Biochim. Biophys. Acta. 1998. - Vol. 1370. - No. 2. - P. 218-234.

87. Bussolino F., Mantovani A., Persico G. Molecular mechanisms of blood vessel formatio". // Trends Biochem. Sci. 1997. - Vol. 22. - No. 7. - P. 251-256.

88. Beck L., Jr., D'Amore P. A. Vascular development: cellular and molecular regulation. // FASEB J. 1997. - Vol. 11. - No. 5. - P. 365-373.

89. Collins D. C., Frey L. L., Kinney W. A., Moriarty R., ZaslofFM. A. Method for inhibiting angiogenesis using squalamine and squalamine steroid derivatives. // Patent US 5721226(1998).

90. Khan S.N., Kim B.J., Kim H.-S. Synthesis and antimicrobial activity of 7-fluoro-3-aminosteroids. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2007. - Vol. 17. - No. 18. -P. 5139-5142.

91. Alhanout K., Brunei J.M., Raoult D., Rolain J.M. In vitro antibacterial activity of aminosterols against multidrug-resistant bacteria from patients with cystic fibrosis // J. Antimicrob. Chemother. 2009. - Vol. 64. - No. 4. - P. 810814.

92. Levai L., Fodor G., Ritvay-Emandity K., Fuchs O., Haos A. // Ber. 1960. -Vol. 93.-P. 387.

93. Frye L.L., Zasloff M.A., Kinney W.A., Moriarty R., Collins D.C. Method for inhibiting angiogenesis using squalamine and squalamine steroid derivatives. // Patent US 5721226 (1998).

94. Nobili S., Lippi D:, Witort E., Donnini M:, Bausi L., MinbE., Capaccioli» S. Natural compounds for cancer treatment and; prevention. // Pharmacol. Res. — 2009: Vol. 59. - No. 6. - P. 365-378.

95. Bruss K. American cancer society guide to complementary ands alternative cancer methods. // Athlanta, GA: american cancer society. 2000.

96. Higgins R. D., Sanders R. J., Yan Y., Zasloff M., Williams J. I. Squalamine improves retinal neovascularization. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2000. - Vol. 41.-No. 6.-P. 1507-1512.

97. Genaidy M., Kazi A. A., Peyman G. A., Passos- Machado E., Far ahat Hassan G., Williams J. I., Holroyd K. J., Blake D. A. Effect of squalamine on iris neovascularization in monkeys. // Retina. 2002. - Vol. 22. - No. 6. - P. 772-778.

98. Giulla T. A., Criswell M. IT, Danis R. P:, Williams J. I., McLane M. P;, Holroyd K. J. Squalamine lactate reduces choroidal neovascularization in a laser-injury model in the rat; // Retina. 2003. - Vol. 23. - No. 6. - P. 808-814;

99. Mokdad A. H, Bowman B. A., Ford E. S., Vinicor F., Marks J. S., Koplan J. P. The continuing epidemics of obesity and diabetes in the United States. // J. Am. Med. Assoc. 2001. - Vol. 286. - No. 10. - P. 1195-1200.

100. Chen H.-H., Park J. Use of squalamine and. its analogues in ophthalmic compositions. // W09726888 (1997).

101. AhimaR. S., Patel H. R., Takahashi N., Qi Y., Hileman S. M., Zasloff M: A. Appetite suppression and weight reduction by a centrally active aminosterol*. // Diabetes. 2002. - Vol. 51. - No. 7. - P. 2099-2104.

102. Наметкин C.C., Родионова B.M., Мельникова HIT. Реакции и методы исследования органических соединений. // М.: Государственное научно-техническое издательство химической литературы. — 1952. — С. 49-208.

103. Сымон А.В., Каплун А.П., Власенкова Н.К., Герасимова Г.К., Ле Банг Шон^ Литвин Е.Ф:, Козлова Л.М., Суркова Е.Л;, Швец В.И. Эпимеризация гидроксильной группы, в тритерпенах лупанового ряда. // Биоорган, химия: — 2003. Т. 29. - № 2. - С. 208-213.

104. Dunkelblum Е. The reaction of diphenylcyclopropenone with diborane. // Tetrahedron. 1972. - Vol. 28. - No. 14. - P. 3879-3883

105. Monato S.B., Baneijee S.K., Chakavarti R.N. Effect of Raney nickel on triteфenoids. // Bull. Calcutta Sch. Trop. Med. 1968. - Vol. 16. - No. 4. - P. 122.

106. Suokas E., Hase T. Triterpenes. The synthesis of novel 18PH,19(3-substituted lupane derivatives. // Acta Chem. Scand., Ser. B. 1974. - Vol. 28. - P. 793-796.

107. Semmler F.W., Jonas K.G., Richter W. // Ber. 1918. - Vol. 51. - P. 417-424.

108. Bilham P., Kon G. A.R., Ross W.C.J. Sapogenins. Part XII. The position of the carboxyl group in certain triterpene acids. // J. Chem. Soc. 1942. - Vol. 36. — No. 1.-P. 35-42.

109. Lin L.-H., Lee L.-W., Sheu S.-Y., Lin P.-Y. Study on the stevioside analogues of steviolbioside, steviol, and isosteviol 19-alkyl amide dimers: synthesis and antibacterial activity. // Chem. Pharm. Bull. 2004. - Vol. 52. - No. 9. - P. 11171122.

110. Катаев B.E., Милицина О.И., Стробыкина И.Ю., Ковыляева Г.И., Мусин Р.З., Федорова О.В., Русинов Г.Л., Зуева М.Н., Мордовской Г.Г., Толстиков А.Г // Хим.-фарм. журнал. 2006. - Т. 40. - С. 12-13.

111. Shirota О, Sekita S., Satake М., Morita Н., Takeya К., Itokawa Н. Nine regioisomeric and stereoisomer^ triterpene dimers from Maytenus chuchuhuasca. II Chem. Pharm. Bull. 2004. - Vol. 52. - No. 6. - P. 739-746.

112. Ma Ch.-M., NakamuraN., Hattori M. Chemical modification of oleanene type triterpenes and their inhibitory activity against HIV-1 protease dimerization. // Chem. Pharm. Bull. 2000.- Vol. 48.-No. 11.-P. 1681-1688.

113. Kumar S:, Misra ;N., Raj K.,,Srivastava>K., Puri: S.K. Novel- class of hybrid^ naturalVproducts derivedVfiromv lupeol as antimalarial agents: // Nat; Prod: Res. — 2008;-УоЕ22:-N6:4:-РГЗ 05-31 9f<

114. Толстиков Г.А., Балтина Л. А., Гранкина В.П., Кондратенко P.M., Толстикова Т.Г. Солодка: биоразнообразие, химия, применение в медицине. // Новосибирск: Академическое издательство "Гео". — 2007. С. 97 - 98.

115. Cragg G. М., Newman D. J. A tale of two tumor targets: topoisomerase 1 and tubulin. The Wall and Wani contribution to cancer chemotherapy. // J. Nat. Prod.-2004. Vol. 67. - No. 2. - P. 232-244.

116. Терентьев А., Терентьева E. // Журнал орг. химии. 1942. - № 12. - С. 415.

117. Титце Л., Айхер Т. Препаративная органическая химия. // Москва: Мир, 1999.-704 с.

118. Pandey P. S., Singh R. B. Synthesis of a head to head cholaphane. // J. Chem. Soc. Perkin Trans I. 2002. - Vol. 28. - P. 5045-5046.

119. Gunatilaka A. A. L. Triterpenoid quinonemethides and related compounds (celastroloids). // Prog. Chem. Org. Nat. Prod. 1996. - Vol. 67. - P. 1-123.

120. Janin Y. L. Antituberculosis drugs: ten years of research. I I Bioorg. Med. Chem.-2007.-Vol. 15. -No. 71 -P. 2479-2513.

121. Wade R. C. Catalyzed reductions of organofunctional groups with sodium borohydride. //J. Mol. Cat. 1983. - Vol. 18. -No.3. -P. 273-297.

122. Saxena B.B., Zhu L., Hao M., Kisilis E., Katdare M., Oktem O., Bomshteyn A., Rathnam P. Boc-lysinated-betulonic acid: a potent, anti-prostate cancer agent. // Bioorg. Med. Chem. 2006. - Vol. 14. - No. 18. - P. 6349-6358.

123. Geall A. J., Blagbrough I. S. Homologation of polyamines in the synthesis of lipo-spermine conjugates and related lipoplexes. // Tetrahedron. Lett. 1998. - Vol. 39. - No. 5-6. - P. 443-446.

124. Pezutto J.M., Kim D.S.H.L. Methods of manufacturing betulinic acid. // Patent US 5.804.575 (1998).

125. Shoolery J.N., Rogers M.T. Nuclear magnetic resonance spectra of steroids. // J. Am. Chem. Soc. 1958. - Vol. 80. - No. 19. - P. 5121-5135.

126. Tkachev A.V., Denisov A. Yu. Oxidative decarboxylation by hydrogen peroxide and a mercury (II) salt: a simple route to nor-derivatives of acetyloleanolic, acetylursolic and dehydroabietic acids. // Tetrahedron. 1994. -Vol. 50. - No. 8. - P. 2591-2598.

127. Ma C.-M., Cai S.-Q., Cui J.-R., Wang R.-Q., Tu P.-F., Hattori M., Daneshtalab M. The cytotoxic activity of ursolic acid derivatives. // Eur. J. Med. Chem. 2005. - Vol. 40. - No. 6. - P. 582-589.

128. Kim D.S.H.L., Pezzuto J.M., Pisha E. Synthesis of betulinic acid derivatives with activity against human melanoma. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998. - Vol. 8.-No. 13.-P. 1707-1712.

129. Nagarajan S., Ganem B. Chemistry of naturally occurring polyamines. 10. Nonmetabolizable derivatives of spermine and spermidine. // J. Org. Chem. -1986. Vol. 51. - No. 25. - P. 4856-4861.

130. H. И. Медведева, О. Б. Флехтер, О. С. Куковинец, Ф. 3. Галин, Г. А. Толстиков, И. Баглин, К. Кавэ // Изв. АН Сер. Хим. 2007. - №. 4. - С. 804806.

131. Виноградов B.M., Рябинин A.A., Коновалова H.E. Химия в естественных науках. // Ленинград, издательство ЛГУ. 1965. - Т. 40. - С. 145.

132. Гусев Г.П., Ложкина Т.К., Матюхина Л.Г., Салтыкова И.А., Соколова М.М. // Бюлл. экспер. биол. 1975. - №3. — С. 63.

133. Kim J.Y., Коо Н.-М., Kim D.S.H.L. Development of С-20 modified betulonic acid derivatives as antitumor agents. // Bioorg. Med. Chem. Lett. — 2001. -Vol. 11.-No. 17.-P. 2405-2408.

134. Vystrcil A., Krecek V., Budesinsky M., Protiva J. Isomeric oximes of 30-norlupan-20-one and its derivatives. // Coll. Czech. Chem. Commun. — 1986. — Vol. 51.-No. 3.-P. 581-592.

135. Гершанович M.JI., Филов B.A., Акимов M.A., Акимов А.А. Введение в фармакотерапию злокачественных опухолей. // Санкт-Петербург, издательство "Сотис". 1999. - С. 105.

136. Камышников B.C. Справочник по клинико-химической диагностике. // Минск, издательство "Беларусь". — 2000. — Т. 2. С. 207.

137. Alley М.С., Scudiero D.A., Monks Р.А., Hursey M. L., Czerwinski M.J., Fine D.L., Abbott B.J., Mayo J.G., Shoemaker R.H., Boyd M.R. // Cancer Res. 1988. - Vol. 48. - No. 3. - P. 589-601.

138. Grever M.R., Schepartz S.A., Chabner B.A. The national cancer institute: cancer drug discovery and development program. // Seminars in Oncology. 1992. -Vol. 19.-P. 622-638.

139. Boyd M.R., Paull K.D. Some practical considerations and applications of the National Cancer Institute in vitro anticancer drug discovery screen. // Drug Dev. Res. 1995. - Vol. 34.-P. 91-109.

140. Shoemaker R. H. The NCI60 human tumour cell line anticancer drug screen. // Nature Rev. Cancer. 2006. - Vol. 6. - No. 10. - P. 813-823.

141. Бухарин O.B. Персистенция патогенных бактерий. // Москва, издательство "Медицина". 1999. - С. 262-297.

142. Балтина JI. А., Сомов Н. А., Сердюк Н. Г., Муринов Ю. И., Флехтер О. Б., Краснова JI. В., Толстиков Г. А. Способ получения глицирризиновой кислоты. //ПатентРФ 2074190. Опубл. 27.02.1997.

143. Нигматуллина JT. Р. Синтез новых физиологически активных веществ на основе тритерпеноидов лупанового ряда. // Дисс. канд. хим. наук, Уфа, 2005 г.

144. Klinot J., Sumanova V., Vystrcil К. 3,4-Seco derivatives of betulonic acid. // Collect. Czech. Chem. Commun. 1972. - Vol. 37. - No. 2. - P. 603-609.

145. Bednarczyk-Cwynar В. Synthesis of lactam and thiolactam derivatives of oleanolic acid that are activators of transdermal transport. // Ph.D. Thesis. — Poznan: Poznan University of Medical Sciences, Pharmaceutical Faculty. 2007. -P. 266.

146. Ралдугин B.A., Друганов«А.Г., Климов В.П., Шубин,A.H., Чекуров В.М. Способ получения биологически активной суммы тритерпеновых кислот. // Патент РФ№ 2108803 (1997).

147. Наумова Б.С., Чекмарева И.Б., Жданович Е.С., Преображенский Н.А. Получение производных никотиновой кислоты. // Хим.-фарм. журнал. 1969. -Т. 3. -№ 5. - С. 11-12.

148. Meyer Н., Graf R. // Berichte der Deutschen Chemischen Gesllschaft LXI. -1928. Vol. 2. - P. 2202 - 2215.

149. Физер Л., Физер М. Синтезы органических препаратов. // Москва, Изд-во иностранной литературы. 1952,- Т. 3. - С. 338.

150. Карякин Ю. В., Ангелов А. И. Чистые химические вещества. // Москва, Химия. 1974.-С. 91.

151. Ahmad V.U., Atta-ur-Rahman. Handbook of Natural Products Data. Pentacyclic Triterpenoids. // Amsterdam — London New York — Tokio: Elsevier. - 1994. - P. 742.

152. Wrzeciono U., Mikolajewska A. Triterpene nitrogenous derivatives VI. 3- and 28-Aminolupane derivatives. III. // Rocz. Chem. 1972. - Vol. 46. - No. 7/8. - P. 1285-1293.