Синтез и свойства гидрофильных реакционно-способных сополимеров, антимикробных и иммуногенных веществ на их основе тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.06 ВАК РФ

На правах рукописи

СОЛОВСКИИ Михаил Васильевич

СИНТЕЗ И СВОЙСТВА ЩРОФДОЬНЫХ РЕАКЦИОННО-СПОСОБНЫХ СОЛОЛШЕРСВ, АНТИМИКРОБНЫХ И . ЖОТОГЕННЫХ ВЕЩЕСТВ НА ИХ ОСНОВЕ

02.00.06 - химия высокомолекулярных соединений

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук

Санкт-Петербург - 1996

Работа выполнена в Институте высокомолекулярных соединений Российской Академии наук

Научный консультант: член-коррсспондент РАН, профессор Панарин Евгений Оедорович

Официальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор Власов Геннадий Петрович, доктор химических наук, старший научный сотрудник Чупоз Бладимир Владимирович,

доктор технических наук, доцент Памолина Ирина Игоревна.

Ведущая организация - Санкт-Петербургский Технологический

университет

заседании диссертационного совета Д 002.72.01 при Институте высокомолекулярных соединений Российской академии наук (Санкт-Петербург, 199004, Большой пр., 31).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института вцсокомолекулярнпх соединении РАН.

Учений секретарь

диссертационного совета

кандидат физико-математических наук,

Защита состоится

1396 г. в 10 часов на

Автореферат разослал

старший научный сотрудник

Д.А.Дмитроченко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Важной задачей химии высокомолекулярных соединений на современном этапе является использование макро-молекулярного состояния вещества для направленной модификации свойств низкомолекулярных биологически активных веществ (ЕАВ), приводящей к получению биологически активных полимеров (ЕАП). И, хотя в общей проблеме синтеза 1-'ЛП достигнуты очевидные успехи, остается ряд нерешенных фундаментальных и прикладных вопросов.

Прежде всего это относится к синтезу гидрофильных реакцион-носпособянх полимеров-носителей ЕАБ. В частности, необходимы бионедеградируемые гидрофильные функциональные сополимеры с ограниченными низкими значениями молекулярных масс и с узглм мо-лекулярно-массовым распределением, способные после выполнения своей биологической функции выводиться из организма по механизму почечной фильтрации. Необходима разработка методов синтеза таких сополимеров, позволяющих в процессе сополимеризации исключать образование трудно выводимых из организма полимерных фракций. Необходима разработка доступных универсальных способов введения радиоактивной метки в сополимеры-носители с целью изучения их фармакокинетики в живом организме. Необходимы сополимеры, содержащие высокореакционноспособные активированные сложноэфирные группы, что позволяет проводить их взаимодействие с БАВ, содержащими первичные алифатические аминогруппы, селективно, в мягких условиях. В качестве необходимого этапа разработки КАП "прививочного типа" следует признать изучение кинетики взаимодействия полимера-носителя с конкретными ИЗ с целью оценки юс реакционной способности и определения оптимальных условий проведения процесса связывания ЕАВ с носителем. Этому вопросу, как правило, уделяется мало внимания. Большой интерес представляют не только двойные, но и тройные гидрофильные функциональные сополимеры как полимерные реагенты и носители нескольких ЕАВ с различным механизмом биологического действия, как основа полимеров с полифунчциональной биологической активностью. Принципиальной научной задачей является установление связи между строением гидрофильных реакциоиноспособных сополимеров-носителей и их собственной биологической активностью, между особенностями отроения Бдп и уровнем проявляемого ими биологического эффекта.

Серьезной практической задачей, возникшей в связи со снижением эффективности антибиотикотерапии в результате распространения в клиниках антябиотикоустойчивых возбудителей бактериальных инфекций. является разработка и внедрение в медицинскую практику пол ¡мерных антисептиков, предназначенных для борьбы с раневой и ожоговой инфекцией, сочетающих высокую антимикробную активность с низким кокно-раздражающим действием. Для комплексной терапии раневых инфекций нужны МП, обладающие одновременно и антимикробной, и репаративной активностью. Народному хозяйству нужны полимерные биоцида о пролонгированным эффектом защитного фунги-цидного действия.

Чрезвычайно важен синтез ШТ - иммуногенов, используемых при разработке высокоспецифических и высокочувствительных иммунологических методов выявления и профилактики профессионального онкологического риска. Это обусловлено, с одной стороны, ростом профессиональных форм опухолей в различных промышленных производствах, с другой - отсутствием достаточно эффективных методов выявления и профилактики онкологического риска. Совершенствование методов профилактики на ранних, доклинических стадиях заболевания позволит снизить онкологическую заболеваемость, которая после сердечно-сосудистых заболеваний занимает второе место по данным отечественной и зарубежной статистики.

Решение перечисленных основных вопросов, содействующих дальнейшему развитию научного направления, связанного с синтезом, доследованием и использованием БАЛ, в той части, которая относится к разработке полимерных антимикробных и иммуногенных вещеотв, и составляет предмет настоящей работы. Работа является частью плановых исследований ИБС РАН по теме: "Разработка научных основ направленного синтеза и изучения свойств физиологически активных полимерных систем" (Государственный регистрационный й "Орион-!"), выполнена в соответствии о Общеакадемической программой "Новые материалы и вещества", согласно Приказу-п остановлена*) МХП и АН СССР й 141/26 от 20.02.8G (задание 1.03.13.25 "Падифункциональ-иые системы на основе катапола") и по плану международного научного сотрудничества между Российской и Чешской Академиями Наук по проблеме "Полимеры для биологии и медицины".

Цель работы. Целью диссертационной работы является разработка доступных методов синтеза гидрофильных реакционноспособных

двойных и тройных сополимеров Л/-винилпирролидона (ЗП) и А/ --(2-г:{дроксипропил)г.!егакрила1.нада (ГТГ/А) с ограниченными низкими значениями молекулярных масс я узким молекулярно-массовнм распределением (ММР), в том числе ¡1 содержащих радиоактивную метку; исследование реакций взаимодействия реакционнсопособных сополимеров ВП и ГША с антисептиками и антибиотиками; синтез полимерных производных антимикробных и аммуногенных веществ, выявление связи строения полимера с его биологической активностью и путей практического применения синтезирован.тах биологически активных полимеров.

Научная новизна. Полученп новке низксмолекулярные высокореак-ционнсспособные сополимеры ГША с п-иатрофекилавыми эфира},ш непредельных юенсксиуксусшх кислот (ООУК) и терпачиыеры ВП - п-ак-рилоилагшю ФОУК - п-нитрофениловый эфир п-акрилошкшино ФОУК, реагирующие в мягких условиях с высокой скоростью как с ЕАВ, содержащими первачнае алифатические аминогруппы, так и с полимерными первичными аминами - сополимерами ВП с вшшл- и с аллилами-нами.

- Обнаружен "орто-эффект" в реакции аминолиза п-нитрофениловых эфиров о-акрилоил(метакрилоил)амино ФОУК, п-акрилоил(метакрило-ил)амико-ФОУК и их сополимеров с ГПМА 6-аминопенициллановой кислотой (6-АПИ), выражающийся в большей скорости исследованной реакции в случае а-изомерных мономерных и полимерных п-нитрофениловых эфиров по сравнению с соответствующими п-производными.

- Установлено, что введение фенол- или катехолсодержащкх звеньев в макромолекулы сополимеров ВП-крогоновая кислота (КК) сопровождается компактизацней полимерного клубка макромолекулы и приводит к появлению у модифицированного таким образом сополимера иммуностимулирующей активности.

- Впервые разработаны доступные одностадийные универсальные методы введения радиоактивной метки в гидрофильные полимеры: а) путем проведения радиационной (со)полимеризации мономеров в атмосфере молекулярного трития; 0) путем радиационной (со)полимеризации мономеров в этаноле, содержащем радиоуглеродную метку.

- Впервче обнаружено, что антимикробная активность полимерных комплексов катамп.та ЛБ с карбокснлсодеряада.ш сополимерами ВП непосредственным образом зависит от их стабильности в водных ра-стпорнх: менее стабильные полимерные комплексы имеют большую ан-

тимикробную активность. С учетом обнаруженной закономерности выявлен полимерный комплекс катамина АБ - кагапол, разрешенный к применению в медицине, ветеринарной хирургия и пищевой промышленности. Катапся - новое эффективное полимерное антисептическое средство, не имеющее аналогов в нашей стране и за рубежом.

- 3 качестве канцероген-полимерных антигенов (КПА) синтезированы новые амвдное к азо-производные бензидина, азо-производные 2--нафтиламика и 3-гидраксяантранилозой кислоты. Впервые установлено, что иммунизация кроликов подученными КПА приводит к продукции зысокоспецифических антител против канцерогенов как гаптенов. Новизну этой части работы определяет то, что в известном и широко развиваемом принципе конструирования гаптен-полимерных антигенов на основе синтетических полиэлектролитов в качестве гаптенов впервые использованы канцерогенные вещества, а в качестве макромолекулярного носителя - новые низкомолекулярные тройные фенолсодержащие сополимеры ВП-КК-п-кротон оиламинофенол, обладайте адъювантным действием.

- На примере полимерных коныэгатов бензидина показано, что специфичность иммунного ответа на введенный КПА. не зависит от характера ковалентной связи синтетический полимер-гаптен, а целиком определяется химической природой полимера, использованного в качестве носителя.

Новизку работы в целом подтверждают 14 Авторских свидетельств и Патентов на изобретения.

Практическое значение результатов. Предложенные в работе методы введения тритизвой и радиоуглеродной меток в гидрофильные полимеры универсальны и могут быть применены для получения меченого полимера на основе любого мономера винилового ряда, способного полимеризоваться под действием ^-излучения.

- Полимерные акиднае производные ампициллина и 6-АПК на основе сополимеров Ш1А о п-нитрофениловыми эфнрами // -матакрилоилолн-гопептидов и непредельных ФОУК представляют практический интерес как ЕАП, сочетающие свойства полимера-плазмозаменителя и антимикробного препарата.

- Низкое кожно-раэдражающез дейотвие, высокий уровень и широкий спектр антимикробного действия катапола и его высокая терапевтическая активнооть при профилактике и лечении раневой инфекции обеспечивают получение значительного социального о^акта при при-

- с -

менении катапода в медицинской практике. Катапол активно подавляет первичную микрофлору ран, предупреждает вторичное инфицирование и суперинфицирование ран госпитальными штаммами микроорганизмов, в том числе и антибиотикоустойчивыми. Местное применение 0,5-1^ водных растворов ката л сига у больных с открытым переломом костей, гнойными ранами мягких тканей, остеомиелитом, ожогами в 2-3 раза более эффективно, чем использование традиционных антисептиков (перекиси водорода, риванала, фурацялияа и других) . Это позволяет проводить первичную и отсроченную хирургическую обработку ран. Выраженным лечебным действием обладают разработанные в АО "Пластдолимер" совместно с ИЗС РАН гидрофильные поливинилепяртовые катаполсодерхащие плёночные материалы марок "Асеплен К-Г', "Асеплен К-2", "ПК-2". Эти материалы обеспечивают необходимый антимикробный эффект (плёнки ПК-2 также и ре-паративное действие) и легко удаляются с поверхности раны без ее травмирования. Катапол оказался эффективным антисептическим средством не только в медицине, но и в ветеринарной хирургии. Высокие лечебные качества препарата выявлены в Санкт-Петербургском ветеринарном институте при лечении гнойно-воспалительных осложнений све.-.-шх инфицированных и операционных ран у крупного рогатого скота. В Санкт-Петербургском научно-исследовательском и проектном институте рыбопромыслового флота разработаны метода обеззараживания пресной и морской воды катаполом и использования ее для технологических целей при санитарной обработке оборудования, контактирующего с пищевыми продуктами, а также для формирования защитных покрытий на мороженую рыбу из обеззараженной катаполом морской вода. В Государственном Эрмитаже разработан катапсдсодер-жащий состав для мастиковки мраморных скульптур. Наличие в соо-таве катапола предотвращает развитие в нем водорослей и плесневых грибов и обеспечивает устойчивость реставрации памятников культуры из мрамора и других пород камня. В СКТБ "Биофизприбор" (г.Сашст-Петербург) разработана методика дезинфекции пояса с кабелем отведении (ПКО) в устройстве съема физиологической информации, обеспечивающая надежную дезинфекцию ПКО при одновременном сохранении качества снимаемой информации.

- Синтезированная полимерная система на основе терполимера ВП-КК--2-ГЭМАК, содержащая катамин АБ и ковалентно связанный ацемин и обладающая полифункциональной (антимикробной и репаративной) биологической активностью, монет найти применение в комплексной те-

рапии раневых инфекций.

- По данным Санкт-Петербургского химико-фармацевтического института фунгицидные таблетки, содержащие разработанные полимерные соли антисептика мертиолата, надежно защищают оптические детали, помещенные в герметические пакеты, от биологических повреждений.

- Иммуксыворотки, содержащие высокоспецифические антитела против канцерогенов как гаптеков, внедрены в ПО "Шинный завод" (г.Санкт-Петербург) в качестве высокочувствительных тест-систем иммунодиагностики профессионального онкологического риска.

На защиту выносятся:

1. Разработка методов синтеза сополимеров ГША с п-нитрофени-ловыми афирами непредельных ФОУК с низкими молекулярными массами, с узким ММР. Исследование аминолиза полученных реакционно-способных сополимеров антибиотиком ампициллином, 6-аминопеницилла-новой кислотой и полимерными первичными аминами - сополимерами

ВП с винил(аллил)амином.

2. Результаты работ по синтезу и изучению свойств бинарных сополимеров ВП с непредельными гидрофобными кислотами и тройных оополимеров ВП - непредельная кислота - п-нитрофениловый эфир непредельной кислоты, ВП-КК-п-кротоноиламинофенол, ВП-КК-2-гидрок-сиэтилметакрилат.

3. Методы синтеза гидрофильных (со)полимеров, содержащих радиоактивную (тритиевую, радиоуглеродную) метку,

4. Результаты исследования взаимодействия в водных и в водно--сапевых растворах карбоксилсодеряащих сополимеров ВП с катион-ными поверхностно-активными веществами (ПАВ) из ряда хлоридов ди-метилбензилалкиламмония.

5. Разработка и внедрение а медицину в двух лекарственных формах полимерного антисептического средства катапол - комплекса карбоксилсодерлсащего сополимера ВП с катионным ПАВ (катамином АБ), предназначешюго для профилактики и лечения раневой и ожоговой инфекции.

6. Результаты работ по синтезу и исследованию биологической активности полимерных амидных производных антибиотика ампициллина и 6-АПК, полимерных солевых производных антибиотика грамицидина С, полимерной системы, содержащей ковалентно связанный аце-мии и комплекс с катамином АБ, полимерных оолевых и амидных производных антисептика мертиолата.

7. Результата работ по синтезу, исследованию иммуногенности и использованию в иммунодиагностике гаптенов полимерных амидных производных антибиотика неомицина, полимерных амид1шх и азопро-изводных экзогенных и эндогенного канцерогенных веществ.

Личное участие автора заключалось в формировании цели и задач проведенной работы, в руководящей роли на всех ее этапах, в выполнении отдельных этапов экспериментальных исследований, в организации и проведении совместных работ с организациями медико-биологического профиля и другими учреждениями, в анализе и оценке результатов выполненной работы, формулировании основных выводов.

Апробация паботы. Основные результаты работы докладывались и обсуждались на: Всесоюзной конференции "Итоги и перспективы научных исследований в области разработки синтетических лекарственных средств и технологии их получения" (Москва, 1970); I— (Ленинград, Г976), П— (Иркутск, 1982) и Ш— (Иркутск, 1987) Всесоюзных конференциях "Водорастворимые полимеры и их применение"; на (Москва, 1978) и П— (Горький, 1981) Всесоюзных конференциях по биологическим повреждениям; П— (Ленинград, 1975), У1— (Алма-Ата, 1983), УП^ (Минск, 1985), У1ПМ (Киев, 1989), IX— (Звенигород, 1991) Всесоюзных симпозиумах "Синтетические полимеры медицинского назначения"; УП1— национальном симпозиуме с международным участием "Полимеры-83" (Варна, 1983); Уом Международном микросимпозиуме "Радикальная полимеризация" (Уфа, 1984); Всесоюзном симпозиуме по теоретической я прикладной радиационной химии (Обнинск, 1984), Всесоюзной научной конференции "Исследование, консервация и реставрация этнографических предметов (Рига, 1987); Всесоюзной конференции "Фундаментальные проблемы современной науки о полимерах" (Ленинград, 1990); IX— Всесоюзном симпозиуме по целенаправленному изысканию лекарственных веществ (Юрмала, 1991); П— Советско-итальянском симпозиуме по полимерам (Ленинград, ID9I); Х1Х^ (Ленинград, 1979) и XX (Ленинград, 1983) научных конференциях ИЗС АН СССР.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 65 научных трудов.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа представляет собой рукопись, изложенную на 321 стр. машинописного текста, включая 57 рисунков, 64 таблиц, библиографию из 298 наи-

менований. Диссертация состоит из введения, 5 глав, списка литературы и заключения.

Во введении сформулированы цель и основные задачи диссертационной работы.

В первой главе (литературном обзоре) рассмотрены вопросы, относящиеся к характеристике основных типов полимеров - носителей ИВ, к собственной биологической активности и фармакокинети-ке синтетических гидрофильных полимеров в живом организме. Обсуждены вопросы синтеза и свойства полимерных активированных эфи-ров, модификации антибиотиков и катионных ПАВ водорастворимыми синтетическими полимерами.

Во второй главе описаны результаты исследований по синтезу и изучению свойств гидрофильных реакционноспособных сополимеров ВП и ГПМА - носителей ЕАВ.

Третья глава посвящена синтезу и исследованию водорастворимых полимерных производных антимикробных веществ на основе реакционноспособных сополимеров ВП и ШЛА.

В четвертой главе обсуждены результаты работы по синтезу и изучению полимеров с иммуногеннсй активностью на основе реакционноспособных сополимеров ВП.

В пятой главе (экспериментальной части) представлены использованные методики по синтезу, исследованию строения и свойств гидрофильных реакционноспособных сополимеров и производных ЕАВ на их основе.

В заключении подведены итоги диссертационной работы.

ОСНОВНОЕ ССДЕРШИЕ РАБОТЫ

Глава П. Синтез и исследование гидрофильных реакционно-способных сополимеров {V -винилпирролидона и

2-гидроксипропил)-метакрилаиида - модификаторов биологически активных веществ

2.1. Синтез и исследование сополимеров ^-винилпирролидона и //-(2-гидроксипропил)метакриламида, содержащих активированные сложноэфирные группы

С целью разработки высокореакционноспоообных сополимеров -модификаторов биологически активных аминов, аминокислот, пепти-

дов в качестве сомономеров били синтезированы п-нитрофениловые (-ОНф) эфиры непредельных феноксиуксусных кислот общей формулы:

R.-CH-C-C-^H^g^

R¿ О ja-e CCH^-O^g^Q

Ia RíRrH.n-üjowep; I ^RfH, м-и^омер j ,г-изомер.

Эфири la-e синтезировали "карбодшшидним" методом. Для получения реакционноспособных сополимеров проводили сополимеризацкв ГПГ.ТА с полненными эфира.ми 1а_е, а также с п-ннтрофениловыми эфирами ^-метакрилоилолигопептидов1^ в ацетоне в присутствии динитрила азоязомасляной кислоты (ЛАК). Сополимерпзация ГПМА с исследованными моноыернымп п-нитрофенилошми эфирами протекает с невысокой скоростью. При [М2] > 5 мол.$ конверсия за 24 часа не превышала 23%, а за 48 часов - 68/5. При этом скорость процесса не зависит от химической природы мономерного п-нятрофенялового эфира 1а_е и значительно ниже скорости сополимеризацки ГГЕ.ТА с соответствующей п-акрилоял(глетакрилоил)аминофеноксиуксусной кислота^ п-А(М) АООУК. Различия в скоростях сополиыеризации моноглерных п-нитро-фениловых эфиров 1а_е не выявлено по причине сильного ингибирую-щего эффекта п-нитрофеноксилыюй группы. С этим эффектом связано уменьшение шкода и значении Mvv сополимеров при увеличении содержания мономерного эфира н мономерной смеси, а также снижение полидисперсности по молекулярной массе. Сополимеры ГПМА с моно-нерными_п-нитрофенилов1Ми эфирами характеризуются низкими значениями (13000-22000), узким № ( =1,2-1,6) и могут быть использованы для модификации ЕАВ без дополнительного фракционирования.

Реакционную способность этих сополимеров оценивали по скорости взаимодействия с FAB, содержащими стерически затрудненную первичную аминогруппу: антибиотиком ампициллином (П) и б-АПК(Ш) в дасо, при 25°С, при варьируемом молярном соотношении реагирующих функциональных групп Я - [A/H2l^['-(¡-0H(f>'j • в табл.1 приве-

----, о

' П-нитрофениловые эфиры hl -метакрилоильных производных олиго-

пептидов были предоставлены сотрудниками ИМХ (г.Прага).

(Ь>-сн-с-л/н-сн-ся С^сн] М-сн-сн I 13

ЫН, О ¿__д;_<:н_С00к

I °

СООШ

о

дены значения констант скоростей аминодиза (Кд-) сополимеров ГШ.1А-Мг, ампициллином при м = 50. Примечательно, что сополимеры ГПУА с п-нитрофениловыми эфирами непредельных ФОУК реагируют с ампициллином быстрее, чем известные реактивные полимерные эфиры - сополимеры ГША с п-нитрофениловыми эфирами N -метакрилсил-олигопептидов. Этот факт, по-видимому, обусловлен наличием элек-

¿Р*

троноакцепторной феноксиметильной группировки

у реакционного центра - атома углерода карбонильной! группы слож-ноэфирной связи -, повышающей заряд на реакционном центре. По своей реакционной способности к ампициллину сополимеры 1-3(табл.1)

Таблица I

Константы К| скоростей аминолиза реактивных сополимеров ГПМА-М2 ампициллином, t= 25°С, ДМСО

й п/п м2 К^Ю2 сек-1

I МА-Гли-Гли-ОНф 0,60 ± 0,02

2 НА - Гли-Оал-ОНу 0,32 - 0,01

3 МА-Гли-Вал -Фал-011ф 0,16 ± 0,007

4 п-ШЮУК-ОНф 2,30 - 0,09

5 м-МЛФ0УК~0нф 2,40 ± 0,07

6 (Г-МАФОУК-ОНф 2,50 - 0,08

располагаются в ряд: 1> 2> 3. Это может быть связано с увеличением стерических препятствий, вызванных заменой гляцил-глицино-вого остатка на остатки других олигопептидов, затрудняющих подход молекулы антибиотика к реакционному центру. В табл.2 приведены значения ^"1/5, промежутка времени, за который 20$ реактивных п-натрофеншссикарбонильгаи групп подвергаются аминолизу, в реакции п-нитрофениловых эфиров мономерных 20УК и их сополимеров о ГГМА с 6-АПК. Видно, что исследованные моншерные и поли-

Таблица 2

Значения (- 1/5 для реакции агллнолиза п-нитрофениловых эфиров 1^2 и их сополимеров с ГШ С-аглннопенициллановой кислотой, п= 12, = 25°С, ЛГ.1С0

м 2 Т1/5, мин

мономер «2 сопол иглер М2 с ГПМА

п-!.'АФ0УК-0Цф 13,6 1 0,3 22,9 0,6

о-КАООУК-ОНй 5,0 0,4 10,0 ± 0,6

п-ААФОУК-ОНф 12,4 ± 0,3 19,4 ± 0,7

о-ААООУК-ОНф 3,8 ± 0,2 6,7 - 0,3

мерные п-нктрофениловне эфири с высокой скоростью реагируют с 6-АПК. Найденные значения Т*1/5 при а = 12 составляют 4-23 мин. Скорость реакции уменьшается при переходе от п-нитрсфенилозых эфиров акрилоиламшо ООУК к п-нитрофениловым эфирам метакрилоил-амино ФОУК, а также при переходе от мономершгх эфиров к полимерным. Среди п-нитрофекиловнх эфиров как ААООУК, так и МАФОУК, наиболее бистро реагируют с 6-АПК соединения, содержащие п-нитро-фенильную слояноэфирную группу в орто-положении бензольного кольца. Методом Ш спектроскопии показано, что причина наблюдаемого эффекта состоит в том, что ъ мономерпих орто-производных тлеет место образование внутримолекулярной водородной связи между атомом водорода амидной группы и атомом кислорода карбонила сложно-эфирной группировки, приводящее к увеличению 5+заряда, локализованного кп атоме углерода карбонила схложозфирной группы. Тем самым облегчается нуклеофильная атака реакционного центра молекулой 5-АПК. Обнаружено, что "орто-эффект" проявляют и сополимеры ГША с орто-М(А)А<50УК-0Нф, возможно по той же самой причине, что и мономерные орто-изомерные п-нитрофзниловые эфиры.

С целью оценки реакционной способности сополимеров ГПМА с мономерными п-нитрофениловнми эфирами I в реакциях с полимерными первичными аминами исследовано взаимодействие сополимера ГПМА-п--ЦАФОУК-ОНф с сопол игле рами ВП с винил- или с аллиламинами. Установлено, что реакция мекцешшх ковалентных взаимодействий в исследованной системе: полимерный п-нитрофеняловый эфир - полимер-

nuil первичный амин протекает быстро при малых молярных избытках полиамина. При rt~ 5 конверсия реактивных п-нитрофеноксикарбо-нильных групп полиэфира в реакции с сополимером БП-винилашш (ВАм^ содержащим 10 мол.% групп, за 30 мин. составляет А1%. Скорость исследуемой реакции уменьшается с ростом молекулярной массы полимерного амина и зависит от степени удаленности пзрзичной аминогруппы от основной цепи сополимера (для сополимеров ВП-ал-лиламин она выше, чем для сополимеров ВП-ВАм). Скорость реакции замедляется по мере разбавления ДИСО водой, когда происходит разворачивание макромолекул полиамина вследствие электростатического отталкивания, однако и в очень разбавленных водных растворах ДЛСО она достаточно велика для проведения реакции полимерного п-нитро-фенилового эфира с полимерным первичным амином. Этот результат позволяет заключить, что реакционноспособные сополимеры ГША с п~нитрофенкловыми эфирами непредельных ФОУК могут быть использованы в качестве носителей не только при модификации низкомолекулярных EVB, содержащих стерически затрудненную первичную аминогруппу, но и при иммобилизации высокомолекулярных ЕАВ белковой природа.

Проведено сравнительное изучение реакционной способности сополимеров ГЕМА и ВП, содержащих п-нитрофенильные сложноэфирные группы. Поскольку п-нитрофешшовые эфиры непредельных кислот не вступают Е сополимеризацшо с ВП, сополимеры ВП, содержащие реактивные п-нитрофеноксикарбонильные группы jy0-rt получали решениями карбоксилсодержаиих сополимеров ВП с п-нитрофенолом. В качестве конденсирующего агента в этой реакции использовали М , /V --дициклогексилкарбодиимид (ДНК), а в качестве исходных сополимеров - сополимеры ВП с акриловой (АК), кротоповой, метакриловой (МАК) и п-акрилошшминофеноксиуксусной кислотами. Степень этери-фшеациа сополимеров ВП-АК, ВП-КК в исследованной реакции достига-

Ы0Л

1Уа Н , X - отсутствует

1Уб ^| = снз,Кг=Н , х - отсутствует 1У3 К,-Н((^=сНз , х - отсутствует 1УГ я, = кг ~ н , X = -Лт-^Уосн—

о *

ли 70%, в то время, как степень зтерификации сополимеров ВП-МАК, ВП-п-ААФОУХ не прев!:кала 36%. Этот результат, по-видимому, обусловлен тем, что имеющиеся в двух последних сополимерах микроблоки из гидрофобных звеньев МАК и п-ААФОУК стерически препятствуют взаимодействию с ДЩ. При изучении аминолиза полученных тер-, полимеров 1У3-1, било установлено, что только терполимеры 1УГ могут бить использованы для модификации ЛАВ, содержащих стерически затрудненные первичные аминогруппы, поскольку они легко реагировали с трстбутиламином я с ампициллином при малом избытке амина. Высокая реакционная способность терполшеров 1УГ обусловлена удаленностью реактивной -£-0Нф группы от основной полимерной це-

0

пи, а такке и тем, что она связана с электроноакцепторной фенокои-метильной группировкой. Терполимеры ЗП-АК-АК-ОНф, хотя и оказались более реактивными, чем терполимеры ВП-КК-КК-ОНф и ВП-МЛК--МАК-ОНф, но для взаимодействия с биологически активными аминами (аминокислотами) сложной природы они пригодны только при наличии в реакционной среде значительного избытка ЕАВ, что нецелесообразно. Вместе с тем терполимеры IX3, могут быть успешно использованы в реакциях с ЕАВ, содержащими стерически незатрудненные алифатические первичные аминогруппы, что было доказано проведением реакции терполимеров 1УЙ с дофамином - 2-(3,4-дигид-роксифенил)этиламином. Степень использования реактивных п-нитро-фенокешеарбонильных групп в этой реакции составляла 33-355?. Полученные полимерные амидные производные дофамина содер;.шли 2,4-5,1 тл.% связанного биогенного амина, хорошо растворялись в воде и, в отличие от исходных сополимеров ВП-ШС, обладали адъю-вантнымн свойствами.

2.2. Синтез тройных карбоксил- и гидроксилсодержащих сополимеров А/ -винилпирроладона

В общей проблеме разработки полимеров - носителей ЕАВ на основе ВП несомненный интерес представляет синтез тройных сополи-

- Ib -

меров ВП, содержании различные (¿ункционилыше группы. Такие терполимеры могут служить основой для получения гндрофилышх полимеров с полифункциональноП биологической активностью путем включения в их структуру двух и более Шз. Для этого подходящими могут быть, например, терполимеры ВП, содержащие карбоксильные и первичные гидроксильные группы. Такие терполимеры получали путем тройной радикальной сополимеризации ЗП с КК и с 2-гидроксиэтил-метакрилатси (ГЗМАК). Кинетику терполимеризации научали дилатометрическим методом в этаноле при 60° и 70°С, в присутствии 1,5 масс.$ ЛАК npn[MjtM2-t-M3]= 20 мисс. ¡2. Для сравнения в этих же условиях исследована бинарная сополимеризация ВП с ГЭМАК. Установлено, что тройная сополимеризация в исследованной системе при 60°С протекает медленно. Выход терпелимера ВП-КК-2-ГЗ'ДАК за 3 часа составляет 22%. Скорость бинарной сополимеризации ВП с 2-ГЭМАК высока, при этом она возрастает с увеличением содержания 2-ГЭГДАК в исходной мономерной смеси. Это свидетельствует о том, что 2-ГЭГ1АК является более активным мономером в исследуемом процессе, чем ВП. При увеличении температуры на Ю°С скорость сополимеризации во всех системах заметно возрастает. В этом случае при сополимеризации ВП с 2-ГЭМАК обнаружено явление резкого самоускорения сополимеризации. в диапазоне конверсия 28-35$ (гель-эффекта). Скорость тройной сополимеризации ВП с КК и с 2-ГЭМАК попревшему ниже, чем скорость бинарной сополимеризации ВП с 2-ГЭМАК, что связано с присутствием в тройной системе малоактивного моно-мера-КК, склонного к деградационной передаче цепи. Вместе с тем при 70°С при [Мт] :ГП2] :[м3] = 65,5:14,5:20 иоп.% выход терполиме-ра за 3 часа составляет уже 40/», а за 24 часа достигает 90$. Образующиеся терполимеры по сравнению с составом исходной мономерной смеси обогащены 2-ГЭИАК - наиболее активным сомонсмером при терполимеризации в исследуемой системе. При одинаковом составе исходной мономерной смеси увеличение ее концентрации приводит к увеличении содержания КК в терполимере. В зависимости от условий проведения терполимеризации получены ниэкомолекулярные терполимеры вП, содержащие от 10 до 23 мол./2 звеньев КК и от 15 до 34 мол.í? звеньев 2-ГЭМАК. Полученные терполимеры при "физиологических" значениях рН и температуры образуют прозрачные водные растворы.

- Id -

2.3. Тройные сополимеры М-влнилпирролидон - кротоновая кислота - п-кротоноиламинофенол

Интерес к водорастворимым тройным сополимерам ВП-КК-п-крото-ноиламинофенол (КАф) обусловлен тем, что наличие в их структуре фенолсодеркащж звеньев позволяет терполимеру вступать в реакцию азосочетання с FAB, относящимися к классу ароматических аминов. Наличие звеньев Ж открывает дополнительные возможности для связывания БАЗ. Тшсие терполимеры Уа-В получали взашлодеист-пием п-ампнофенола (п-А'1>) с сополимерами ВП-КК при активировании карбоксильных групп сополйлеров ДЩ. Детальное изучение этой

-С н-сн3

-сн-соон

С^-СН f)

Н£/чС=о

к+1 = т^млл.%

реакции показало (табл.3), что, изменяя молярное соотношение реагирующих компонентов, могло менять степень связывания п-Аф исходными сополимерами ВП-КК в широких пределах и получать терполимеры У0-13 различного состава с высоким (69-93%) выходам.

Таблица 3.

Синтез терполимерсв !ЗП-КК-п-КАф

Исходный сополимер ВП-КК (Mj-O,) Молярное соотношение :п-\ф Терполимер У ш а%

W 1 •юл./5 1 , ПОЛ./i щ * дл/г

тг ! ЮЛ • /о Mw Ми/ Ж Ш.* ДЛ/Г

11,ь 13000 1,7 0,10 L:0,5:0,5 Ус 7.G 3,9 0,05 34,5

i: 1 : 1 У 3,0 8,5 0,03 74,2

12,3 25000 1,7 0,20 1: 1:0,8 Уг 4Д 8,2 0,10 65,7

Определено и 0,1 и. раотзорс ацетата натрия в воде S. - степень свяпиванил п-ампнофенола сополимерами ВП-КК.

Полученные низкомолекуляршю терполимеры У, в отличие от исходных сополимеров ВП-КК, проявляет адъпвантную активность. Так, в случае иммунизации мншсй терполимером Уа одновременно с эритроцитами барана (Olí) достигался коэффициент иммуностимуляции (КИ) на вз'еданный антиген, равный 1,9. (В случае иммунизации мышей полным одъювантом Фрейнда (ПА$) совместно с ЭБ значение КИ составляло 1,4). Этот эффект, по-видимому, обусловлен тем, что наличие фенольных звеньев в макромолекуле терполимера ВП-КК--п-КАф может по сравнению с сополимером ВП-КК обеспечить дополнительные внутримолекулярные контакты посредством водородной связи, приводящие к формированию более устойчивой, чем рыхлый полимерный клубок, конформацпи, способствующий взаимодействию с рецепторами им-мунокомпетентных клеток. В известной мере в пользу этого предположения говорит тот факт, что наблюдаемая в ИК спектре терполимера У3 в пленке форт полосы валентных колебаний ОН групп бензольного кольца при 3433 см-"'' позволяет предположить участие ОН групп в образовании водородных связей с присутствующими в полимерной цепи акцепторами протонов. Высказанное предположение подтверждает также анализ значений характеристических вязкостей сополимеров, приведенных в табл.3, который показывает, что введение фенольных групп в макромолекулу сополимера ВП-КК сопровождается уменьшением значений [l¿ j , т.е. компактизацией полимерного клубка. Подобная картина наблюдается и при введении в макромолекулы сополимеров ВП-КК катехолсодержащих звеньев. В Ш спектрах полимерных производных дофамина также наблюдается отмсченние особенности в форме полосы 3433 см~А.

Помимо адъювантного действия терполимеры Уа-В проявляют и противоопухолевую акпншость.

2.4. Синтез сополимеров N -винилпирролидона с непредельными гидрофобными кислотами

В диссертации в качестве полимеров-носителей, содержащих гидрофобные фрагменты в сочетании с сильнокислотной карбоксильной группой, синтезированы сополимеры ВП с непредельными фенок-слуксусными кислотами. Указанные сополимеры У1а-Г получали соответственно путем соподимеризации ВП с о-винил ФОУК, с п-МАФОУК, с П-ААООУК и с п-кротоноштминофеноксиуксусной кислотой при 60°С и инициировании ДАК в массе или з этаноле, изспропаноле или хло-

роформе. Установлено, что при [(.^+М,,]>10 масс.%, :[м2]-= 90:10 иол.% сополимеризация ВП со всеми исследованными непредельными ООУК протекает с высокой скоростью. Выход сополимеров У1а-Г за 24 часа сополкмеризации в изопропаноле достигает 84-95$.

СН^н— sl

нгс/>--0

I

сн—с-

"V

ВП

R.

?

соон

то,

У1

УГ

R,=Ra=H

OCHf-

Rf НЛ=СНЗ, Х--^Н-<9>осн2

Х'-^сн^;

5

yiB R,= Ra=H 5 х=-с-АJH-tgyocHg-;

1 < ? Q

Пг R=CH3)R2=H7 x=-j-vHHg>-oc^-5

Сополимеры У1а~в при низкой конверсии и любом составе мономерной смеси обогащены звеньями Mg. Это свидетельствует о большей сополимеризационной активности о-винилФОУК, п-МАФОУК и п-ААФОУК по сравнению с ВП и приводит к получению композиционно неоднородных сополимеров У1а-В, легко растворимых в воде в форме Ma. (К) солей. Более однородными по составу являются сополимеры У1г.

Сополимеры ВП с другими непредельными гидрофобными кислотами: 9-ундециленовой (УК) и олеиновой (ОК), относящимися к труднойо-лимеризуемш мономерам, удалось получить методом радиационной со-полимеризации с выходом до 73-78,^. Сополимеры ВП-УК (У1д) и ВП-ОК (У1е) содержали 10-15 мол.Й звеньев Н2 и имели низкие значения характеристических вязкостен в 0,1 н.растворе в воде при 25°С (0,08-0,10 дл/г).

Проведена оценка возможности использования полученных сополимеров УТ в качестве полимеров-носителей гидрофобных ЕАВ катион-ной природы. С этой целью методом поляризованной люминесценции исследовано взаимодействие в водных растворах (рН 7,0) макромолекул этих сополимеров (а также для сравнения и сополимера ВП-КК)

с молекулами гидрофобного люминесцентного индикатора - теркуро-ния-4,4'-триэтиламмоний-п-терфенил дихлорида, являющегося ЕАВ миорелаксантного действия. Установлено (см.рис.), что яри постоянном молярном соотношении ^ •- БАВ/СООН молекулярная заторможенность теркурония резко возрастает (деполяризация лшинесцен-ции -р- падает) при введении в водный раствор теркурония вместо сополимера ВП-КК соответственно сополимеров ВП-п-!.1АФ0УК, ВП-Ш, ВП-УК близкого состава. Этот результат свидетельствует о том,

ВП-Г.^ в водном расгпоре, рН 7,0

I. Мз= КК (14 тл.%); 2. М^ п-МАФОУК (22 иол.%)

3. М^ 0К (13 мол.%); 4. УК (10 мол.Я)

что сополимеры ВП-п-МАООУК, ВП-ОК, ВП-УК интенсивно реагируют в водных растворах с гидрофобными ЕАВ, содержащими четвертичные аммониевые группы, с образованием водорастворимых комплексов. При этом наибольшая комгшексообразуицая способность обнаружена

у сополимера ВП-УК. Биологические испытания, проведенные в С-Пб. медицинской педиатрической академии проф. М.В.Неженцевым, показали, что комплекс теркурония с этил сополимером сохраняет биологическую активность теркурония и характеризуется и 2 раза меньшей острой токсичностью, чем теркуроний, что имеет важнее значение для таких токсичных БАБ, к которым относится теркуроний.

Полученные сополимеры ВН с непредельными гидрофобию/.!! кислотами представляют интерес не только как носители гидрофобных БАВ катионной природ!', но и как водорастворимые полимеры с собствен-пол биологической спачпчтстьы. Сополимеры ВП-УК, ВП-п-Г.".А'50УК проявляют выраженную противоопухолевую активность : на 50-61$ тормозят рост гепатемп и саркомы и обладают адъювантной активностью на уровне полного адъюпанта Фрейнда.

Крогле сополимеров ВП-УК, ЗП-ОК методом радиационной сополимеризации в этаноле были получены задорастворимые сополимеры ВП-КК, ВП-этилкротонат, ВП-аллилоьнп сиипт. Путем уменьшения концентрации исходной мономерной смеси до 3,10 касс.% при постоянной дозе облучения (50 кГр) удалось _прлучять указанные сополимеры с низкими молекулярными массами ( Мц/= 10.000-23.000), с узким ШР СМ^/ /ми= 1,5-1,9), с высоким (70-85$) выходом, с содержанием функциональных групп 13,5-21,1 мол.$).

Поскольку необходимым этапом доклинического изучения БАП является исследование их флрмлкокллетики в живом организме, синтез полимеров, содержащих радиоизотопные метки, становится специальной задачей химии биологически активных полимеров. В диссертации с использованием радиационного метода инициирования (со)полимери-зац:ш разработаны новые универсальные одностадийные способы введения тритиевой :: радиоуглеродной моток в полимеры ВП. Тритневую метку вводили в полп-ВП или в сополимеры ВП-КК путем радиационной (со)полимеризации мономеров в атмосфере молекулярного трития (с радиоактивностью 0,67-1,00 кюри) при мощности дозы ^-излучения 5 кГр/час в точение 1-5 часов. В случае гомополшлеризации ВП процесс проводили в массе или в этаноле. Установлено, что, как при полимеризации в массе, так и в растворе, увеличение количества трития в системе при постоянной дозе облучения увеличивает удельную радиоактивность полученного поли-ВП- Н и приводит к снижению его молекулярной массы. Разработанный способ введения радиоуглеродной метки в полимеры ВП состоял в проведении радиационной (со)полимеризации мономера в этаноле, содержащем радиоугле-

родную метку, с удельной радиоактивностью 0,19-0,06 мк/г, при исходной концентрации мономеров 30 иасс.%, при дозе облучения 5-50 кГр. Сущность предложенного метода заключалась в передаче цепи на меченный радиоуглеродом растворитель или продукты его радиолиза. Обнаружено, что увеличение дозы -облучения при постоянной радиоактивности этанола и исходной концентрации мономеров приводит к повышению зкхода целевого продукта и его удельной радиоактивности. По обоим разработанным способам получены образцы _низкомолекулярних поли-ВП, сополимеров ВП-КК, BII-УК, ВП-ЛС ( М\.'= 23000-40000) с удельной радиоактивностью, вполне достаточной для исследования их биологических характеристик в опытах иг vivo

Глава III. Синтез и изучение водорастворимых

полимерных производных антимикробных веществ

Основной задачей исследований, результаты которых описаны в главе Ш, является разработка методов синтеза БАП "прививочного" типа, обладающих антимикробной активностью. Синтез таких ЕАП проведен с учетом механизма антимикробного действия связываемого ЕЛВ (антисептика, антибиотика). Этим обстоятельством обусловлен выбор типа химической связи ЕАВ с полимерным носителем. Большое внимание уделено изучению соотношения химическое строение -- антимикробная активность в ряду синтезированных ЕАП и определению областей их практического использования.

3.1. Физико-химические и биологические исследования полимерных комплексов диметилбензилалкиламмония

С целью разработки полимерного антисептика многоцелевого назначения в качестве исходного ЕАВ был внбран катамин АБ (диметил-бензилалкиламмоний хлорид) УП, являющийся эффективным антимикробным препаратом. Вместе с тем высокое кокно-раздра;;сающее действие

Сн3ч +

D '-Г Н Vй

К - 8-18 17-37 —

катамина АБ ограничивает возможность его использования в качестве антисептика местного действия. Избранный способ модификации катамина АБ, относящегося к массу натленных поверхностно-активных веществ, полимерами - комплексообразовалие катамина АБ с карбоксилеодериащимл сополимерами БП в водных растворах. При этом необходимым этапом в разработке полимерных комплексов катамина АБ для медицинских и других целей явилось изучение закономерностей межмелекулярных взаимодействий полимер - катионное ПАЗ в водных растворах в зависимости от структуры полимера-носителя и ПАВ, рН, ионной силы и других факторов, определяющих стабильность полимерных комплексов ПАВ и их биологическую активность. В качестве полимеров - модификаторов свойств катамина АБ были выбраны водорастворимые и доступные сополимеры ВП-Г.1АК, ВП-АК, ВП-КК.

Для изучения взаимодействия в системе карбоксилсодержащий сополимер ВП - катионное ПАВ были привлечены методы поляризованной люминесценции, потенциометрического и турбидиметрического титрования. При этой в первом случае использовались специально синтезированные индивидуальные аналоги катамина АБ (диматилбензилал-киламмоний хлориды - ДМБААХ) и сополимеры ВП-МАК, ВП-АК, ВП-КК, содержащие антрилацилоксиметаиовие люминесцентные метки. * Было обнаружено, что при добавлении п водные растворы полностью ионизованных карбсксилсодержащих ссполшеров БП молекул ДМБААХ происходит уменьшение внутримолекулярной подвижности (ВМП) макромолекул сополимеров-носителей (увеличение времен их релаксации тем большее, чем длиннее алкнльный радикал 1\ в молекуле ДМБААХ. Это явление связано не только с посадкой ионоп ПАВ на макромолекулы сополимеров за счет электростатического притяжения, но и с гидрофобными взаимодействиями высших алкпльных радикалов ДМБААХ друг с другом на макромолекулах сополимеров, а также с неполяр-ними участками полимерных цепей. Установлено, что значения Ту/ возрастают по мере ионизации карбоксильных групп сополимеров. Наибольшая внутримолекулярная заторможенность макромолекул кар-боксллсодержащего сополимера ВП под действием ДМБААХ (11=14), ди-метплбензилтетрпдециламмоний хлорида, наблюдается при рН 8,5-9,0, т.е. при полной ионизации карбоксильных групп сополимера. Изучение зависимости макромолекул сополимеров ВП-МАК и ВП-КК близкого состава. иол.%, от ионной силы водного

^ Карбоксилсодержащие сополимеры ВП с антраценовой люминесцентной меткой получены п.н.с.М.Г.Краковяком и н.с.В.Е.Лущик (ШСРАП).

раствора (L ) в присутствии Л.'БЛЛХ (И=14) показало, что увелпче-

ванных сополимеров ЗП, что обусловлено уменкнением электростатического взаимодействия катионов ПАЗ с заряженными.группами полимера-носителя в результате экранирования заряженных групп полиэлектролита низкомолекуляриши ионами. Вместе с те;.; при ионной силе физиологического раствора комплексы сополимер - ПАВ не разрушаются, что подтверждают найденные значения времен релаксации: при 1,0; pli -9,0; I = 0,15 Ти/ макромолекул сополимеров ВП-—РЛА1С составляют 50 jîc, макромолекул сополимера ВП-КК - 40 не. В то не время значение Tw макромолекул этих сополимеров-носителей в отсутствии ПАВ в этих условиях равно 2Q не.

Методом потенциометрического анализа было установлено, что введение в водные растворы сополимеров ВПч\1АК(АК,КК) катамина АБ сопровождается заметным снижением рН раствора в результате прохождения ионообменной реакции, приводящей к выделению кислоты и к образованию обратимо-диссоциирующих полимерных комплексов УШа7в В табл.4 приведены составы синтезированных карбоксилсодержащих

сополимеров и значения степеней электростатического связывания в-0Л>) катамина АБ этими сополимерами. Сравнение значений в~эл соответственно для сополимеров 1-3, 4-6, 7-9 (табл.4) указывает на тс, что при постоянном значении $ доля молекул антисептика, связанного ионной связью с полимером-носителем, возрастает с ростом количества иоиогенных групп в сополимере. Среди сополимеров

нке L приводит к заметному увеличению ВПП макромолекул псследо-

УШ3 ^HjR^CHj ; R ~Ке = Н ; УИ1В R,= CH3 ;R=H

слизкого состава 2,4,7 и 3,5,8 при одном и том же значении £ существенно меньиие значения & найдены для сополимеров Б11-КК по сравнении с сополимерами БП-МАК, ВП-АК, что обусловлено различиями в микроструктуре использованных сополимеров ВН. В отличие от сополимеров ВП-КК, сополимеры ВП-.МАК и ВП-АК характеризуются достаточно высокой степенью микроблочности карбоксилсодержащих звеньев и тем саглм высокой локальной плотностью заряженных групп на цепи сополимера, что способствует их электростатическому взаимодействию с катамином АБ.

Таблица 4.

Степени электростатического связывания катамина АБ сополимерами ВП в воде

& п/п Сополимер ВП ^эл. *

Обозначение тг „ (Ь= 0,5 6= 1.0

МОЛ./о J Г

I 8,2 2,7-0,1 5,2±0,2

2 ВП-ГЛАК 9,8 6,3^0,2 10,2-0,4

3 16,8 7,3^0,3 12,6^0,6

4 10,7 6,6±0,3 П,3±0,4

5 ВП-АК 20,3 7,1-0,3 11,8^0,5

6 29,0 8,3-0,4 12,9±0,6

7 13,0 0,4±0,02 1,2-0,05

8 ВП-КК 20,3 I,0^0,05 3,3±0,2

9 29,6 2,5±0,Г 5,7^0,3

Методом туроидиметрического титрования удалось обнаружить существенно большую способность сополимеров ВП-ЫАК связывать катамин АБ по сравнению с сополимерами ВП-АК близкого состава. Так, мутность водного раствора поликомплекса УШа (£•- 0,0) на основе сополимера 3 составляет 40,0'Ю~~см~*, в то время, как мутность раствора поликомплекса УШ^ (£=0,8) на основе сополимера ВП-АК 5 составляет только 12,0*10~^см~*. Причина этого явления состоит в том, что, в отличие от метода потенциометричес-кого титрования, который позволяет оценить только вклад электростатических взаимодействий в процессе комплексообразования катамина АБ с сополимерами 1-9, метод турбидшетрии позволяет оце-

нить "общее" связывание катамина АБ с полиэлектролитамп 1-9. Полученные данные свидетельствуют о значительной роли не только электростатических, но и гидрофобных взаимодействий з процессе комплексообразования катам.ша АБ с карбоксилсодерлащими сополимерами ВП.

Таким образом, совокупность данных, полученных различными фи-зико-химическкми методами, показывает, что з водных и в водно--солевих растворах образуются водорастворимые комплексы между сополимерами ВП-ЫАК, ВП-АК, ВП-КК как с индивидуальными Д,МЕААХ, так и с катамином АБ. При этом комплексы стабилизированы гидрофобными взаимодействиями неполярных групп катионов ПАВ, связанных силами кулоновского взаимодействия с макромолекулами сополимеров-носителей. Стабильность поликомплексов зависит от рН, ионной силы раствора, соотношения взаимодействующих компонентов, состава сополимера, строения сополимера и ПАВ.

При микробиологическом исследовании полимерных комплексов катамина АБ УШ8"* было установлено, что антимикробная активность поликомплексов непосредственным образом зависит от их стабильности в водном растворе: более стабильные комплексы биологически менее активны. Так,, например, по значениям минимальных подавляющих концентраций (ШК) более стабильный комплекс катамина АБ с сополимером ВП-АК (29 мол.% АК) оказался в 2-4 раза менее активен, чем комплекс катамина АБ с сополимером ВП-КК (15 иол.% КК), содержащий то же самое количество антисептика. Обладающий невысокой стабильностью, водорастворимый полиэлектролитный комплекс сополимера ВП-КК с катамином АБ получил название катапол и был подвергнут углубленному медико-биологическому изучению.* Исследования показали (табл.5), что катапол сохраняет спектр и уровень антимикробного действия катамина АБ, но, в отличие от катамина АБ, характеризуется меньшей острой токсичностью, существенно меньшим кожно-раэдражаищим действием и более выраженным терапевтическим эффектом. При исследовании фармакокинетики катапола, содержащего радиоуглеродную метку в полимере-носителе, при перо-ральном применении было обнаружено, что катапол не попадает в кровь при пероральном введении, остается в желудочно-кишечном

^ Изучение проведено в С-Пб.Н:Ш травматологии и ортопедии им. Р.Р.Вредена под руководствам проф. Г.Е.Афиногенова.

Таблица о.

Сравнительные данные по отологической активности катапола и катампна АБ

Показатели Препарат

Катапол Катамин АБ

^50 при внутрибршинном введении мышам 90-19 22^8

мг/кг при подкожном введении мышам 196-7 47±1

Порог кожно-раздрэ/кающего действия % 11,0 0,1

МПК мкг/мя (8 гатам-мов) Стафилококк Кишечная палочка Протей Синегноиная палочка 6±1 75±Г4 400^10 400*10 6±1 25^2 125±43 106±18

Сроки заживления (дни) при лечении внутрикокной стафилококковой инфекции 3,2±0,4 8,0^1,2

тракте, из которого быстро (за 48 часов) выводится, что открывает перспективу использования катапола для лечения иелудочно-ки-шечных инфекционных заболеваний.

По результатам клинических испытаний Решением Фармакологического Комитета катапол разрешен к применению в медицине для лечения гнойных ран и ояогов. Производство катапола в виде 10% водно-солевого раствора освоено на АО "Оармакон" (г.Санкт-Петербург).

На основе катапола для лечения ожогов П-Ш3 степеней, временного закрытия пересаженных кохных аутотрансплантатов, донорских участков совместно с АО "Пластполимер" * разработаны гидрофильные поливинилспиртовые (ПВО плёночные материалы "Асеплен-К^' и "Асеплен-К2". Эти плёнки обеспечивают выраженный антимикробный эффект, обладают самодезинфицирующимя свойствами, легко удаляются с поверхности раны без ее травмирования, они разрешены к про-

^ От АО "Пластполимер" в работе участвовал ст.н.с.,к.х.н. В.Я.Богомольный.

изводству л к применению в медицине. С учётом ранее установленных факторов, влияющих на стаоильносгь комплексов карбоксилсодер-жащих сополимеров ВП с катамином Ali, таких, как увеличении состава сополимера ВП-КК и увеличение локальной плотности заряженных групп на цепи сополимера (при переходе от сополшлеров ВП-КК к сополимерам ВП-МАК близкого состава), удалось получить антимикробные плёночные ПВС материалы с пролонгированным выделением полимерных комплексов катамина АБ из плёнок, что важно в ряде вариантов использования таких плёнок в травматологии.

Катапол разрешен Ветеринарным Фармсоветогл к использованию в ветеринарной хирургии (для обработки рук ветеринарного персонала, для лечения свежеинфицированных ран к профилактики гнойных послеоперационных осложнений у крупного рогатого скота). Министерством здравоохранения СССР разрешено применение катапола в качестве антисептика для обеззараживания морской и пресной воды и последующего использования ее для санитарной обработки оборудования на предприятиях пищевых отраслей промышленности. Кроме того, катапол успешно прошел апробацию в космической медицине (при дезинфекции поясов с кабелем отведений в устройстве съема физиологической информации), а также при реставрации и защите памятников материальной культуры в Государственном Эрмитаже.

По своему механизму антибактериального действия (нарушение структуры и функции цитоплазматических мембран бактериальных клеток) гидрофобный декапептидкый антибиотик оснозного характера грамицидин С близок катамину АБ. В связи с этим, как и в случае катамина АБ, модификацию грамицидина С полимерами (с целью получения его водорастворимых биологически активных форм) осуществляли путем солеобразования антибиотика с гидрофильными сополимерами ГПМА - акриловая кислота в SQßß^- растворе диоксана в воде. Синтезированные полимерные соли содержали до 25 шсо.% грамицидина С, обладали высокой активностью как в отношении стафилококков, так и кишечной палочки и выгодно отличались от ^модифицированного антибиотика растворимостью в воде.

3.2. Полимерные производные антисептика мертиолата

Одним из наиболее активных антисептиков-биоцидов, известных в настоящее время, является мертиолат- натриевая соль этилртуть-тиосалициловой кислоты. Нами было предпринято исследование-по

модификации мертиолата гидрофильными синтетическими полимерами с целью снижения токсичности, уменьшения иго расхода, продления времени фукгицлдного защитного действия, изучения зависимости структура - биологическая активность. Били получены полимерные соли и амиды мертиолата. При синтезе полимерных солей Уш'в качестве полимеров-носителей использовали сополимеры ВП с випилами-ном, солей IX - гомополимеры галоидалкилатов ////-дшетиламино-этилметакрилата.

Солеобразование проводили в водно-диоксановом растворе, используя мертиолаг в виде этилртутьтиосалициловой кислоты, а полимеры-носители - в виде полимерных оснований. Полимерные амиды мертиолата X получали ацилированием сополимера ВП-ВАм смешанным ангидридом этоксимуравьиной и этилртутьтиосалициловой кислот. Выход полимерных амидов X составлял 60-73;», а степень использо-

СН,-С —

с=0

с=о

I

С=о

X

вания первичных аминогрупп в этой реакции находилась в пределах 19-26;';».

Проведенные в С-Пб.Химико-фармацевтическом институте профессором Н.Л.Заикиной микробиологические исследования показали (табл.6), что полученные полимерные соли и амиды мертиолата обладают высоким уровнем и широким спектром фунгистатического действия: в концентрациях 1-15 мкг/мл утнетают рост 10 стандартных штаммов плесневых грибов, рекомендованных ГОСТ для испытания грибостойкости различных материалов.

Таблица 6

Биологическая активность полимерных производных мертиолата

Препарат Содержание мертиолата , маес.% J%0 мг/кг Jwr МФК мкг/мл /о зарастания чашки Нетри грибом 2

Iх 2* Через 4 суток Через 9 суток

Полимеоная соль УШ 5,0 5Ü0 2,5 2,5 50 100

Полимерная соль IX 13,0 130 1.0 1,0 0 0

Полимерный амид X 12,6 830 15,5 15,5 100 100

Мертиолаг Oía соль) 100 44 0,2 1.0 100 100

1 - в отношении гриба Мисог тисейо

2 - -"- -"- 1чт1с11Иим сотрасйиш

ГЛФК - минимальная фунгистатическая концентрация

Фунгистатнческая активность зависит от содержания мертиолата в полимерном производном, а при одинаковом содержании антисептика - от характера связи мертиолата с полимерным носителем (полимерные сади оказались в 15 раз активнее полимерных амидов мертиолата). исе полимерные производные мертиолата оказались менее токсичными, чем его натриевая соль. Значения ЛД^д при внутрибрюшин-ном введении белым мышам составляют: для натриевой соли мертиолата 44 мг/кг, для его полимерных солей 130-850 мг/кг, для полимерных амидов мертиолата 750-1000 мг/кг. Фунгистатическая активность полученных полимерных производных мертиолата была исследована татке методом без контакта препарата с питательной средой, содержащей споры плесневых грибов, который позволяет

- У1> -

оценить летучесть фунгицида л его способность действовать на расстоянии от защищаемого объекта. Установлено (табл.6), что по способности продолжительного действия на расстоянии испытанные соединения располагаются в ряд: 1Х> "Л1> X =Я а соль мертиолата. В полимерных солях IX антисептик сильнее связан с полимером-носителем, содержащим большое количество четвертичных аммониевых групп, чем в солях УШ, летучесть паров его понижена, что и обеспечивает пролонгированное (до 9 суток) действие этих фунгицидов на расстоянии. В полимерном амиде X фунгицид прочно связан с полимером-носителем. Летучесть мертиолата при этом настолько понижена, что препарат становится малоактивным при действии на расстоянии. Эти результаты свидетельствуют о том, что подученные новые солевые полимерные производные мертиолата IX яеляются оригинальными, менее токсичными, чем мертиолат, фунгицидними средствами с пролонгированным эффектом фунгицидного действия на расстоянии, которые могут быть рекомендованы в качестве перспективных биоцидов для защиты материалов и изделий, помещенных в гер-мопакеты, от биоповреждений. При использовании полимерных солей IX в виде фунгицидных таслеток расход мертиолата (при достижении высокого биоцидного эффекта) может быть снижен в 33 раза.

3.3. Синтез сополимеров Д/ -(2-гидроксипролил)метакрил-амида, обладающих антимикробной активностью

В литературе отсутствуют сведения о синтезе полимеров ГПМА с антимикробной активностью. Вместе с тем придание известному плазмозаменителы - поли-ГГЖ - антимикробных свойств является важной научной и практической задачей.

Как показали предварительно проведенные исследования (см. раздел 2.1.), сополимеры ШЛА с п-питрофешиювыми эфирами А/-ме-такрилоилалигопептидов и непредельных ФОУК с высокой скоростью реагируют с ампициллином и с 6-АПК, что позволило применить эти реакции для получения полимерных амидных производных ампициллина Х1а~в и 6-АПК ХП. Как видно из формул Х1а_в, полимерные амид-ные производные ампициллина содержат между антибиотиком и основной полимерной цепью спейсерную олигопептидную группировку, которая, как показали чешские ученые, попав в лизосому, расщепляется лизосомальными ферментами, в результате этого антибиотик

-СИ,

9нз

С=о ыи снг сн-он

V-

"С На

Г П М А

(8-14) мол «/о д = - гли -

щ „ - Фал -0 =

га,

^Нд-си-с-л/н-сн-^н С^ц»

XI

а-в

XIе

А.1

Вал-Фал Х1в

отщепляется от полимера-носителя. Это особенно вакно в случае ампициллина, поскольку известно, что его полимерные амидные производные мало активны в отношении грамотрицательных бактерий.

Интерес к включению в структуру сополимеров ГША с п-нитро-фениловыми эфира!,1и непредельных феноксиуксусных кислот 6-амино-пенициллановой кислоты обусловлен тем, что оно непосредственно приводит к сополимерам ХП ГИ.1А с-мономерными феноксиметилпени-циллинами - известными р -лактамными антибиотиками.

-ГПМА-

ш.

т

сн2

То

Лн &

ОСИ-

ХН

7П&

■ С-д/Н-СН-

0 Г

■А/—си

СООК.

Реакцию связывания реактивных сополимеров Г1Г.1А с ампициллином и 6-АПК проводин в /¿'.СО при комнатной температуре, при двукратном молярном избытке биологически активной аминокислоты. 3 этих условиях выход продукта реакции достигал <30%, а степень использования реактивных -С-ОНф групп в реакциях составляла 67-83$.

О

Содержание неинактивированных пенициллиновых звеньев в полученных продуктах составляло в зависимости от состава исходного сополимера 9,5-26 масс./«, что обеспечило наличие высокой антибактериальной активности у полученных полимерных производных ампициллина и 6-АПК. Эти результаты свидетельствуют о том, что реакционная способность п-нитрофенильных сложиоэфирных групп в использованных сополимерах-носителях настолько высока, что становится возможным введение в их структуру с большими степенями замещения антибактериальных веществ, содержащих стерически затрудненные первичные аминогруппы. Существенно, что в ходе реакции не происходит значительной инактивации таких лабильных БАБ, какими являются $ -лактамные антибиотики, и поэтому могут быть получены гидрофильные сополимеры ГПМА, обладающие антибактериальным действием.

3.4. Синтез сополимеров М -викилпирролидсна с полифункциональной биологической активностью

Макромолекулярная природа полимеров-носителей лекарственных функций позволяет включать в их структуру несколько БАЗ, с различным механизмом биологического действия, что может привести к синтезу полимеров с полифункциональной биологической активностью. Такие полимеры необходимы, в частности, для комплексной химиотерапии бактериальных раневых инфекций, поскольку в данном случае важно комбинированное воздействие на течение раневого процесса и антимикробными веществами, а стимуляторами процессов ре-паративной регенерации тканей. В нашей работе с целью получения гидрофильных полимеров ВП с антимикробной и репаративной активностью в качестве полимеров-носителей были использованы терполи-меры ВП-КК-ГЭМАК. В качестве стимулятора процессов репаративной регенерации применяли ацемин ( £ -ацетиламянокапроновую кислоту), который вводили в структуру терполимеров посредством слсж-ноэфирной связи. Конденсацию терполимеров ВП-КК-ГЗМАК, содержащих 22-27 мол. % звеньев ГУМАК, с ацемин ом проводили в ДОФА в

присутствии ДЩ. Полученные продукты содержали 9-13 масс.# присоединенного ацемина, а степень этерификации исходного торполи-мора составляла 30^. В качестве антимикробного вещества использовали катамин ЛБ, который присоединяли к ациминсодержащим сополимерам ВП, как и в случае катапола, путем ионной связи, стабилизированной гидрофобными взаимодействиями длинных алкильных радикалов ПАВ на цепи полимера-носителя. Как показали биологические испытания, проведенные в С-Пб,медицинской педиатрической академии и в С-Пб.НПИТО им.Р.Р.Вредена, полученная полимерная система, содержащая 26 масс.'^ антисептика и 13 масс.% ковалентно-связанного ацемина, обладала антимикробным действием и проявляла выраженный репаративный эффект при заживлении накожных ран у крыс. Эти данные свидетельствуют о принципиальной возможности синтеза гидрофильных сополимеров ВП с полифункциональной (репаративной и антимикробной) биологической активностью. Испытанные одновременно композиции, содержащие катапол и ацемнн, также достоверно стимулировали репарагивные процессы в ранах крыс и сохраняли уровень антибактериальной активности катапола. Это позволило рекомендовать исследоьанные композиции (катапол+ацемин) к применению в медицинской практике, в частности, в составе полифункциональных гидрофильных ИБС плёнок марки ЛК-2, разработанных в АО "Пласт-полимер". Медицинские испытания этих материалов показали, что при наложении плёнок ПК-2 обнаружено ускорение репаративного процесса при поверхностных окогах на 2-4 дня. Полифункциональные плёнки ПК-2 стерильны и не оказывают токсического действия на рану. Решением Комитета по новой медицшюкой технике при МЗ СССР ПВС плёнки полифункциопальные марки ПК-2 и других марок, предназначенные для временного закрытия п профилактики ран и ожогов, утверждены к постановке на промышленное производство.

Глава 1У. Синтез иымуногенных веществ на основе

реакционноспособных сополимеров АУ-винил-пирроллдона

В главе 1У описаны результаты исследований по синтезу на основе двойных и тройных сополимеров ВП коньюгатов с антигенами или гаптенами (антибиотиками, канцерогенами), исследованию зависимости иммуногенной активности синтезированных конъюгатов от особенностей их химического строения, использованию полученных

высокоспецифических антител против антигенов и гаптенов в ni.ii.iy-но-фермэнтном анализе ЕАВ я в целях иммунодиагностики и профилактики ряда опасных заболеваний.

4.1. Полимерный комплекс антигена слизи синегнойной палочки

Для медицинской практики большое значение имеет получение высокоиммуногенннх препаратов, представляющих комплексы синтетических полиэлектролитов, включающие антигенные детерминанты вирусов и бактерий.

В Институте эпидемиологии и микробиологии имЛ.Ф.Гамалеи (г.Москва) из слизи синегнойной палочки штамма У» 93 выделен антиген гликолипопротеидной природы, обладающий способностью индуцировать формирование протективного ответа у мышей на заражение вирулентным штаммом синегнойной палочки. Однако защитный эффект, обеспечиваемый антигеном слизи синегнойной палочки (АССП), непродолжителен, а введение АССП в организм сопровождается острыми сенсибилизирующими реакциями. В нашу задачу входило изучение возможности повышения ишуногенности АССП путем комплексо-образования его с нетоксичными ионогенными сополимерами ВП, обеспечения высокого и продолжительного уровня иммунной защиты при однократной иммунизации, снижения побочных эффектов. В результате скрининга* ряда сополшеров ВП-КК, ВП-МАК, ВП-виниламян, различающихся по составу и молекулярной массе, был вмявлея сополимер ВП-КК И 523 ( 14,= 13 мсл.%, Му* 52000, ЛД^ЗООО мгДг), комплеко которого с АССП обладал высоким (титры антител против АССП составляли 1:1280-1:540) и пролонгированным (9 недель) эффектом иммунной защиты мышей, инфицированных синегнойной палочкой. При этом побочных реакций у животных, иммунизированных этим полимерным комплексом АССП, отмечено не было. Эти результаты свидетельствуют об эффективности использования АССП, модифицированного сополимером ВП-КК У> 523, в качестве препарата пролонгированного действия для иммунизации против синегнойной палочки.

ТГ]--

Скрининг проводили профессор А.Ф.Мороз, старшие научные сотрудники Н.Г.Анциферова и А.Д.Александров путем определения ¿Л Ус 1/0 протективного эффекта полимерных комплексов АССП.

Образование комплекса между сополимером ВН-КК ^ Ь23 и ЛС'СП било подтверждено методом поляризованной люминесценции. Введение в водный раствор сополимера 52о, содержал,чего антрилацилокси-метановую люминесцентную метку, антигена слизи синегнойной палочки вызывало падение деполяризации люминесценции, свидетельствующее об увеличении внутримолекулярной заторможенности макромолекул сополимера ЗП-КК в результате взаимодействия с этим бактериальным антигеном.

4.2. Модификация гаптеноь двойными и тройными сополимерами ^ -винилпирролидона

4.2.1. Полимерные производные антибиотика неомицина

Разработка высокочувствительных методов ишуноферментного анализа (®А) имеет большое значение для определения различных лекарственных препаратов, в частности, амнногликозидных антибиотиков в связи с их высокой ото- и нефротоксичностью, близостью лечебной и токсической дозы, необходимостью постоянного контроля концентрации аминогликозидного антиоиотика в сыворотке крови больного. В рамках разработки метода ША антибиотика - аыиногли-козида неомицина (Ш) в данной работе исследованы интенсивность иммунного ответа и специфичность антител к ИМ, полученных при иммунизации экспериментальных животных конъюгатами 12.1 с макро-молекулярными носителями: сополимером ВН-КК ( 10 мол.?», Му = 870000) и с сополимером ВП- А/ -гидроксифталимидный (ГФИ) эфир КК 10 ыол.%, ЛА^ = 11000). Конъюгат (сополимер ВП-КК)-

-П.Ч был получен "карбодиимндным методом", конъюгат (сополимер ВП- эфир КК) - Ш - методом активированных эфиров. Содер-

жание антибиотика в полученных полимегшых амидных производных НМ составляло 10-12 ыасс.Й. В серии экспериментов на животных было изучено влияние структуры полимера-носителя на иммунный ответ к неомицину. Установлено, что в случае введения коньюгатов ШЛ с сополшерами ВП а организм мыыьй в дозе 50 мкг на мышь в отличие от конъюгата бьгчий сывороточный альбумин - ¡СЛ. полученного во ВПИТ;М ст.н.с. 1!.II.Немцовой, наблюдался иммунный ответ на введенный неомицин - полимерный антиген и без использования полного адъюванта Фрейнда (1МФ), применение которого в медицине ограничено из-за вызываемых ш побочных эффектов. При

этом не било обнаружено влияния молекулярной массы на иммуноген-ные свойства конъюгатов 15.1 с сополимерами ВН. Обнаружение кмму-ногенной активности конч.югатов Ш с реакционноспосооными сополимерами ВП позволило сотрудникам лаборатории иммунологии В1ШТИЛФ разработать с их использованием метод получения высокоспецифических антител к неомицину и метод твердофазного Шк неомицина с нижним пределом определения антибиотика 25 нг/мл.

4.2.2. Синтез и исследование канцероген-полимерных антигенов

В настоящее время для иммунологической регистрации канцероген-белковых аддуктов, образующихся в организме при появлении в нем канцерогенных веществ, используются антитела, полученные с помощью азопротеинов, содержащих канцероген, присоединенный ковалентной связью к носителю белковой природы. Однако при иммунизации животных канцероген-азопротеинами индуцируются побочные антитела против общевидовых антигенов, что затрудняет интерпретацию результатов определения канцерогенов в биологических материалах .

В работе для повышения специфичности антител против канцерогенов предложено при получении канцероген-полимерного антигена (КПА) использовать в качестве макромолекулярного носителя синтетический полиэлектролит, не имеющий общих детерминант с белками сыворотки крови человека. Иммунизация животных таким антигеном может привести к образованию высокоспецифических антител против канцерогена без появления побочных антител против общевидовых антигенов. Канцерогенами выбора служили 2-нафтиламин, бензидин и эндогенное канцерогенное вещество - 3 гидроксиантра-ниловая кислота (3-ГАК). На основе терполимеров ВП-КК-п-КАф в качестве КПА были синтезированы водорастворимые полимерные азо-производные 2-нафтиламина, бензидина и 3-ГАК. Реакцию азосоче-тания проводили в водном растворе при рН 9,2-9,5. Синтезированные КПА 1-Ш имели следующее химическое строение:

ОТ

-сн—сн-

CHj соон

■ßn-

-сн-

сн.

с=о А/Н

КПА-1

т

8 К

-сн—«;н-¿и5 с оон.

16

С-о I,

л/н

НгАЬ<0>-<0>- -Л/= Л/ .он

КПА-IL

1 к* ¿Н, *

3,9

-сн-сн, с=о

5 I л/и

•вп-кн—сн-

J СН3 С=0

¿.3

.он (Wt сн КПА-Ш он (О^мДуЦ^л^

СООН ОН &/

J3S

I

Для исследования иммуногенности К ПА 1-III проводилась иммунизация3^ кроликов в одними растворами КИЛ 1,11,III вместе с ПЛФ или без него. Установлено, что полученные иммунсиворотки (соответственно А.Б,Б) не взаимодействуют в агаре с терполимеро.м ВП-КК-

В работе участвовали профессор Т.А.Коростелева и старшие научные сотрудники 1Ш онкологии им.проф.H.H.Петрова А.Т.Бело-хвостова и Л.С.Потаненкова.

-п-КАф, использованием как носитель при синтезе КПА, но реагируют с соответствующим КПА X —I-I с образованием одной четкой линии преципитации. При этом реакции антксивороток с белками сыворотки крови человека били отрицательными. Это свидетельствует о том, что в полученных антисыворотках отсутствуют антитела против об-щевидошх антигенов, Существенно, что с КПА 1,П,Ш реагировали антисыворотки кроликов, иммунизированных этими антигенами без ИАФ. Это также повышает иммунологическую специфичность антител против канцерогенов, как гаптенов, поскольку в антисыворотках А,Б,В отсутствуют антитела против компонентов ПАФ и упрощает схему иммунизации. Таким образом, результаты исследования иммупо-генности КПА 1-111 впервые показали принципиальную возможность получения высокоспецифических антител против канцерогенов как гаптенов при использовании в качестве полимерного носителя в КПА терполимера ВП-КК-п-КАф. При этом значительным преимуществом использования иммунсывороток А,Б и В соответственно против КПА 1,П,Ш, по сравнению с иммунсыворотками против канцероген-белковых азопротеинов является отсутствие необходимости в дополнительном истощении иммунсывороток для устранения антител против общевидовых антигенов.

С целью выяснения вопроса о роли характера связи между гапте-ном и полимером-носителем и придании КПА иммунологической специфичности были синтезированы "карбодиимидным методам" полимерные амидные производные бензидшш на основе терполимера ВП-КК-п-КАф (конъюгат 1У) и сополимера ВП-КК (конъыгат У) и исследована их иммуногеннос*ь, Исследование иммуногенности конъюгатов 1'У и У показало, что только при иммунизации кроликов конъюгатом 1У образуются антитела против бензидина как гаптена. Таким образам, совокупность полученных данных доказывает, что в продукции антител против канцерогенов как гаптенов важная роль принадлежит не характеру ковалентной связи между канцерогеном и полимером-носителем (азо-связь или амидпая связь), а использованию в качестве такого носителя терполимера ВП-КК—п-КАф, обладающего адъювантнш действием.

Иммунсыворотки А,Б, с тиграми антител против канцерогенов 1:128-1:256 (по данным реакции связывания комплемента), были использованы сотрудниками НИИ онкологии им.проф.Н.Н.Петрова.как тест-системы при определении соответственно 2-нафтиламина и

бензидшш в сыворотке крови рабочих ПО "Циннии завод", у которых возможна экспозиция этими канцерогенами. При помощи иммунсыво-ротки А 2-кафтилам.ин был обнаружен у 31 из 230 обследованных рабочих, что составляет 11,9/». При помощи яммунсыворотки кроликов, полученной путем иммунизации 2-нафтилам;ш-белковым антигеном, степень обнаружения 2-нафтилампна в крови рабочих составляла только 6,15а, т.е. била в 2 раза меньше. Использование иммунсыворотки Б позволило увеличить частоту выявления лиц с профессиональным онкологическим риском, содержащих бокзидин в крови, с 25'^, выявляемых при помощи иммунсыворотки кроликов, полученных путем их иммунизации бензидин-белковыми антигенами, до 42)». С помощью им-мунсыворстки В канцероген-белковые аддукты, содержащие 3-1'АК, были выявлены у 18 из 56 обследованных рабочих. Разработанные новые высокоспецифические, высокоэффективные способы иммунодиагностики профессионального онкологического риска внедрены на ПО "Иинныи завод" (Санкт-Петербург). В результате использования эти способов можно ожидать снижения заболеваемости профессиональными опухолями.

ЗАМ аЛЕШЕ

Основные результаты диссертационной работы могут бить сформулированы следующим образам:

I. Исследованы особенности двойной и тройной радикальной со-полимеризации под действием ДАК N -винилпирролидона (ВП) и /^-(2-гидроксипропил)метакриламида (ГП.1А) с мономерами, содержащими первичные гидроксилыше, карбоксильные или активированные сложноэфирные группы, приводящей к получению реакционноспособ-ных сополимеров ВП и ГПЫА-носптелей биологически активных веществ (БАВ). Установлено, что сополиме^нзация ВП с непредельшми феноксиуксусшми кислотами (¿ОУК), за исключением п-кротоноил-амино-ФОУК, протекает с высокой скоростью и соответствует модели I, I. Скорость тронной сополимеризации ВП с кротоно-вой кислотой (КК) и с 2-гпдроксиэтилмстакрилатом (2-ПЛ.1АК) ниже, чем скорость бинарно:; сополимеризации ВП с 2-ГЭ.МАК, что езязано с присутствием в тройной системе малоактивного мономера - КК. Образующиеся низкомолекулярные терполимеры Ш1-КК-2-ГХ1АК по сравнению с составом исходной мономерной смеси обогащены звень-

яш 2-Г011ЛК - наиболее активного сомономера при сополимеризации в исследованной системе. Сополимеризация ГПМА с п-нятрофениловы-ми эфирами непредельных уОУК протекает под сильным ингибирующим влиянием л-нктрод^еноксильной группы^регулирующим скорость процесса и молекулярную массу образующихся сополимеров. В результате этого полученные новые сополимеры Ш.1А с п-нитрофениловыми эфирами нопредельншс ООУК характеризуются низкими значениями молекулярных масс ( MiV= 10000-22000), узким молекулярно-массовым распределением (М»/Мп. -- 1,2-1,6) и могут быть использованы для модификации Щ3 без дополнительного фракционирования.

2. Реакциш.1и в цепях карбоксплсодеркащих сополимеров ВП синтезированы новые тройные сополшеры: ВП - акриловая (метакрило-вая, кротоновая, д-акрилоиламлнофеноксиуксусная) кислота - п-нл-трофениловый (-ОНф) эфир указанных непредельных кислот; ВП-КК--п-кротоноиламинофенол (п-КАф), представляющие интерес как полимерные реагенты и как полимеры-носители ЕАВ. Установлено, что терполимеры ВП-КК-п-КАф, а также конъюгаты терполимеров BII-KK--КК-ОПф с дофамином обладают ишуноадъювантной активностью.

3. Проведено систематическое изучение реакционной способности тройных сополимеров ВП и бинарных сополимеров ШЛА, содержащих звенья активированных сложных зфиров, в реакции аминолиза в органических растворителях при 25°С как модельными первичными алифатическими аминами, так и ЕАВ, содержащими стерически затрудненную первичную аминогруппу, антибиотиком ампициллином и 6-амино-пенициллановой кислотой (6-AIIK). Установлено, что в силу высокой реакционной способности сополимсры ШЛА с п-нитрофениловыми эфи-рами непредельных <£0УК и терполимеры ВП- п-акрилоиламино(АА)ФОУК-- п-ААФОУК-ОНф могут быть использованы для включения в их структуру в мягких условиях биологически активных аминокислот сложной природы. Впервые исследована кинетика межцепных ковалентных взаимодействий в J1J.1C0 при 25°С в системе: полимерный п-нитрофе-ниловый эфир (сополимер Ш.1А -п-петакрилоиламино-ФОУК-ОНф) -полшерный первичный амин (сополимеры ВП с винил- или с аллил-ампнамл). Определены факторы, влияющие на исследованный процесс полимер-полимерных взаимодействий.

4. Методом радиационной радикальной сополимеризации в растворе с высокими радиационно-хишческями выходами получены водорастворимые сополимеры ВП с труднополимеризуемыми мономерами: Ю{,

9-ундециленозой (УК) и с олеиновой (ОХ) кислотами, с этиловым эфиром кротоновой кислоты (ЗЭКК), а также с аллиловым спиртом (АС) с различны!.! содержанием функциональных групп. Определены условия проведения радиационной сополимеризации, позволяющие получать сополимеры _ВП с КК, ЭОКК, АС с регулируемой низкой молекулярной массой, М*=_(10-30)-10°, и с узким молекулярно-массо-вым распределением (М*/Мп. = 1,4-1,8). Показана возможность использования неописанных ранее сополимеров ВН-УК, ВП-ОК с варьируемым гидрофобногидрофильным балансом в качестве носителей гидрофобных БАВ, относящихся к классу солей бис-четвертичных аммониевых оснований.

5. Методом потенциометрического титрования, турбиднметрии и поляризованной люминесценции исследовано взаимодействие антисептика катамина АБ и индивидуальных диметилбензилалкиламмоний хлоридов с сополимерами ВП с метакриловой кислотой, АК и КК в водных и в водно-солевых растворах. Установлены факторы (строение сополимера и ДЖЛХ, соотношение реагирующей компонентов, состав сополимера, рН, ионная сила раствора), определяющие стабильность образующихся комплексов катамина АБ (ДМЕАА) и их антимикробную активность. В результате этих исследований выявлен полимерный комплекс катапол, сочетающий высокую антимикробную активность с низким кожно-раздражающим действием, разрешенный к применению в медицине для лечения гнойных ран и ожогов, в ветеринарной хирургии и в пищевой промышленности, успешно прошедшей апробацию при охране и реставрации памятников материальной культуры, в космической медицине.

6. Разработан новый универсальный одностадийный способ введения радиоуглеродной метки в (со)полиыеры ВП путем проведения радиационной (со)полимеризации ВП в этячоле, содержащем радиоизотоп 14С. По разработанному способу получен сополимер БП-КК, содержащий радиоуглеродную метку, и антисептик катапол на его основе. Изучена фармакокинетика полученного образца каталола при пероральном применении. Установлено, что катапол не попадает в кровь при пероральном введении, остается в желудочно-кишечном тракте, из которого быстро (за 48 часов) выводится, что открывает перспективу его использования для лечения желудочно-кишечнвз инфекционных заболеваний.

7. Совместно с АО "Пластполимер" разработаны гидрофильные ка-

таполсодсржащпе поливинплспиртовые (ПВС) плёночные материалы "Асеплен К-1 (К-2)", обладающие высокими антимикробными свойствами, разрешенные к производству и к применению в медицине в качество антисептических покрытии на раневые и ожоговые поверхности. Определены факторы, позволяющие управлять скоростью выделения полимерных комплексов ДМГАА из ГОС-плёнок, что открывает возможность разработки плёночных ППС-матеряалов с пролонгированным антимикробным действием.

8. Впервые синтезирована полимерная система с полифункциональной (антимикробной и репаративной биологической активностью) путем двустадипной фиксации на макромолекуле терполиглера ВП-КК--2-ГЭМАК стимулятора процессов репаративной регенерации тканей ацемина (за счет сложноэфирной связи) и антисептика катанина АБ (посредствогл ионной связи, стабилизированной гидрофобными взаимодействиями длинных алкильных радикалов катамина АБ на макромолекуле полимера-носителя), представляющая интерес для комплексной терапии раневого процесса.

9. Впервые с целью придания плазмозаменлтелю поли-ГПМА антибактериальной активности осуществлено введение в структуру сополимеров ГГГА с п-нитрофениловыми эфирами N -метакрилоилолигопеп-тидов и непредельных феноксиуксусных кислот в мягких условиях,

с высокими (до 83%) степенями замещения реактивных п-нитрофенокси-карбонильных групп соответственно антибиотика ампициллина и 6-АПК. При этом получены сополимеры ГША, обладающие антибактериальным действием.

На основе сополимеров ПЕ.1А-АК получены водорастворимые биологически активные полимернпе соли антибиотика грамицидина С.

10. На основе сополимеров ВП-ВАм и полимеров четвертичных аммониевых солей аминоалкиловых эфиров мегакриловой кислоты получены и охарактеризованы по составу амидные и солевые производные антисептика мертполата, обладающие высокой фунгистатической активностью, менее токсичные, чем мертиолат. Установлено, что фун-гистатическая активность и острая токсичность полученных полимерных производных мертиолата, а также эффективность их действия

на расстоянии от защищаемого объекта зависят от прочности связи антисептика с полимером-носителем.

II. В качестве иммуногенов выявлен малотоксичный полимерный комплекс антигена слизи синегнойной палочки с сополимером ВП-КК,

обеспечивающий высокий, пролонгированный эффект иммунной защиты против синегнойной инфекции, и синтезированы полимерные амидные производные неомицина на основе сополшеров ВП-КК и ВН-д/-гидро-ксифталимидный эфир КК, с помощью которых получены антитела против неомицина, использованные в качестве реагента при разработке метода иммуно-ферментного анализа этого антибиотика.

12. В качестве тест-диагностических канцероген-полимерных ан-• тигенов (KIIA) синтезированы и охарактеризованы методами спектрального анализа амидное и азопролзводкие бензидина, азопроиз-водные 2-нафтиламина и 3-гидроксиантран:1ловой кислоты на основе терполимера ВП-КК-п-КАф. Показано, что иммунизация кроликов полученными КПА приводит к образованию высокоспецифических антител против канцерогенов как гаптенов. Доказано, что эти антитела могут найти широкое применение как высокоэффективные тест-системы для иммунодиагностики рака и повышенного онкологического риска.

Основной материал диссертации изложен в следующих работах и изобретениях:

1. Solovskij 11. V. ,Ulbrich К..KopeXek I. Synthesis of H-(2-hydro-xypropyl)methacrylanide copolymers with antimicrobial activity.- Biomaterials, 1983, v.4, I.ir1, p.44-40.

2. Panarin E.P. .SolovskiJ U.V.,Zaikina if .A. .Afinocenov G.K. Biological activity of cationic polyclectrolyts - tlakroinol. Chem. Suppl. 1985, I..9, p„25-33.

3. Uolovskij lI.V.,Ulbrich K. ,IIazarova O.V. .Zubko И.V. .Panarin E.F, Корейek I. Investigation of the aminolysis cf p-nitrophenyl esters of (neth)acryloylahiinoi)henoxyacetic acids and their copolymers with JM2-liyJroxypropyl)mothacrylanide by 6-aJdino-penicillanic acid .-.'¿akrouol.Chem. ,1} 09,B.190,f.;9,S. 2245-2254.

4> Solovskij Ll.V. ,Iiazurova O.V.,Panarin E.F. .Korosteleva T.A., Belokhvostova A.I. .Potapenkova L.S. Conjugates of benzidine with a ternary phenolcontainins copolymer of N-vinylpyrrolido-ne as test antiacne Tor the detection of benzidine in human eerum.- Biomedical ocicuce, 1991, i.=4, p.420-424. 5. Кропачев B.A., Соловский M.B., Акулов Г.П. Синтез меченных

тритием сополимеров /V -вишшшрролидона.- Высокомолек.соед., 1978, т.20(Б), Js 9, с.715-717.

6. Ануфриева Е.Б., Панарин Е.О., Паутов В.Д., Соловский М.В. Изучение межмолекулярных взаимодействий в водных растворах полимеров и поверхностно-активных веществ катионного типа методом поляризованной лшинесцинции.- Высокомолек.соед., 1981, т.23(А), iS 6, c.I222-I228.

7. Соловский I.I.B., Назарова О.В., Зубко П.В., Панарин Е.Ф. Синтез п-нитрофениловых эфиров непредельных феноксиуксуоных кислот. - Изв.All СССР, сер.хим., 1983, В 3, с.685-687.

8. Зашеина H.A., Соловский М.В., Соколова И.Г. Изучение действия антисептика мертиолата и его производных на грибы, вызывающие повреждения материалов,- Биологические науки, 1985,

JЬ 6, с.92-96.

9. Соловский М.В., Ушакова В.Н., Панарин Е.Ф., Боймирзаев A.C., Нестеров В.В., Персинен A.A., Михальчешсо Г.А. Радиационная сополимеризация А/ -винилпирролидока с кротоновой кислотой. -Химия высоких энергий, 1987, 1s 2, с.143-147.

10. Краковяк М.Г., Лущик В.Б., Ананьева Т.Д., Панарин Е.Ф., Соловский I.I.B., Горбунова О.П., Гаврилова И.И., Кирш Ю.Э., Паутов В.Д., Рамазанова И.Р., Ануфриева Е.В. Синтез полимеров и сополимеров на основе //-виниллактамов с люминесцирую-цими группами антраценовой структуры.- Высокомолек.соед., 1987, т.29(А), i's 3, с.598-603.

11. Паутов В.Д., Ануфриева Е.В., Кирпач A.B., Панарин Е.Ф., Гаврилова И.И., Кочеткова U.C., Лущик В.Б., Соловский М.В., Ушакова В.Н. Определение констант диссоциации комплексов полиэлектролитов с конами поверхностно-активных веществ методом поляризованной люминесценции.- Высокомол.соед., 1988, т.ЗО(А), И 10, c.22I9-2Ü24.

12. Соловский Кочеткова U.C., Д;,хшатлиева М.З. Синтез и фунгистатическая активность галогенидов алкилдиметилбензил-аммония.- Изв.Вузов. Химия и химическая технология, 1990, т.33, вып.12, c.II6-II8.

13. Заикина H.A., Соловский М.В., Кочеткова И.С., Разукран-

това Н.В. Активность катионных поверхностно-активных веществ и их полимерных производных в отношении грибов, разрушающих материалы.- Микология и фитопатология, 1990, т.24, вып.6, с.548-551.

14. Коростелева Т.А., Мовсесян К.С., Соловский IvI.B., Паиарин E.w., Назарова О.В., Кочеткова П.С. Противоопухолевое к иммуностимулирующее действие никоторых со(тер)полимеров Д/-винилпирролидона на мышей линии СЗНА с генатомой 22а.- Экспериментальная онкология, 1990, Jj 3, с.53-55.

•15. Соловский W.ü., Афиногенов Т.Е., Панарин Е.Ф., Ыпанчинце-ва Е.В., Петухова H.A. Полимерные комплексы антисептика ка-тамина АБ и их биологическая активность.- Химкко-ч^м.курн., 1991, 4, с.40-43.

16. Соловский М.В., Гудаитис A.A., Панарин Е.Ф., Нестеров В.В., Боймирзаев A.C., Беленький Б.Г. Об эффективности радиацион-но-химического синтеза сополимеров N-винилпирролидона с аллиловым спиртом,- Химия высоких энергий, 1991, Л 4, с.375--377.

17. Немцова H.H., Шварцман М.Н., Кашкин А.П., Соловский 1,1.В., Назарова О.В., Панарин Е.Ф., Ушакова В.Н. Исследование им-муногенных свойств конъюгатов антибиотика неомицина с ма-кромолекулярныт.ш носителями.- Антибиотики и химиотерапия, 1991, & 9, с.27-29.

18. Соловский U.B., Петухова H.A. Синтез тройных сополимеров

А/-винилпирролидон-непредельная кислота-п-нитрофениловый эфир непредельной кислоты,- Высокомолек.соед., 1992, т.34(Б), J5 8, с.30-34.

19. Соловский М.В., Назарова О.В., Панарин Е.Ф. Синтез сополимеров /У-винилпирролидона с непредельными феноксиуксусными кислотами,- Нурн.прикл.химии, 1992, вып.9, с.2103-2107.

20. Соловский М.В., Денисов В.М., Панарин Е.О., Петухова H.A., Белохвостова А.Т., Потапенкова Л.С. Синтез и иммуногенность ^-нафтиламин-полнмерпого антигена.- Химико-фарм.журн. ,1993,

& II, с.10-14.

21. Соловский М.В., Улбрих К., Копечек И., Панарин Е.Ф., Афшюгенов Т.Е., Доморад A.A. Синтез и исследование полимерных производных антибиотика грамицидина С.- Нурн.пршш. химии, 1994, вып.5, с.047-853.

22. Зашеина H.A., Ягодкина М.В., Соловский М.В. Антибактериаль-

ное действие полимерного антисептика катапол.- Антибиотики и химиотерапия, 1994, И 4, с.40-51.

23. Соловсклй I.I.B. Исследование амлнолиза тройных сополимеров fj-влнллпирроллдон-но предельная кислота-п-нитрофекнловый эфир непредельной кислоты.- Нурн.пршсл.химии, 1994, вып.10, с.1670-1674.

24. Зашеина H.A., Разин А .П., Соловский I.I.B. Исследование фунги-статической активности полимерного антисептика катапол,-Мшсология и фитопатология, 1994, вкп.6, с.32-34.

25. Паутов В.Д., Соловский М.В., Богомольный В.Я., Панарин Е.Ф., Кочеткова И.С., Ануфриева Ё.В., Краковяк М.Г., Лущшс В.Б. Исследование процесса выделения полимерных комплексов диме-тилбензилалкиламмония из гидрофильных поливинилепиртовых

пленок.- Нурн.прикл.хим.1994, вып.12, с.2023-2026.

26. Соловский М.В., Панарин Е.Ф., Горбунова О.П. Исследование межмолекулярных ковалентных взашлодействий в системе полимерный п-нитрофениловый эфир - полимерный первичный амин,-Нурн.присл.хш., 1995, вып.II, с.1872-1876.

27. Соловский И.В., Денисов В.!,!., Панарин Е.Ф., Иетухова H.A., Пуркина A.B. Синтез полимерных производных дофамина.-Нурн.прикл.хил., 1596, вып.2, с.295-298.

28. Соловский М.В., Панарин E.tf., Заикина H.A. Синтез и биологическая активность полиэлектролитов на основе аминоалкило-вых эфиров метакриловой кислоты.- В сб."Водорастворимые полимеры и их применение". Л., 1976, с.55-59.

29. Афиногенов Г.Е., Панарин Е.Ф., Соловский М.В. Антимикробные свойства антиоептикоп катионного типа и их полимерных производных.- В сб. "Профилактика и лечение осложнений инфекционных травм". Л., 1977, с.ПЗ-Ш.

30. Заикина H.A., Соловский М.В., Еяинов П.П., Голованенко Г.Г. Некоторые антисептики и их полимерные производные как перспективные средства защиты материалов от микроорганизмов.-

В сб. "Биологические повреждения материалов". Вильнюс, 1979, с.33-36.

31. Даровская E.H., Молдавер ПЛ., Панарин Е.Ф., Кочеткова И.С., Соловский М.В, Изучение реологических, осмотических и про-тивомикробных свойств мази па гидрофильной основе, содержащей поверхностно-активное вещество катионного типа.-

В сб. "Патогенез, клиника и лечение раневой инфекции." Л.. 1985, с.9.

32. Перс.шон A.A., Соловский Li.В., Ушакова j.ü., Гуд^лтлс A.A., Михальченко Г.А. Радиационная сополиыеризация /V-випп'шир-ролпдона с этилоипм эфиром кротоновой кислоты. В cö. "Исследования в области радиационного материаловедения",

Л.. 1987, с.114-117.

33. Мамонова И.В., иелышкоаа Е.П., Сол опекай М.В., Панарпн Б.О., Заикипа H.A., Громов В.13. Катанол- новый биоцлднык полимер

в реставрации.- В сб."Исследование, консервация и реставрация этнографических предметов. Рига, 1987, с.54-55.

34. Solovskij U.V., Iíazarova O.V. , Ueuisov V.U., l'anarin L.F., Korost eleva H.A., Belolchvostova A.T., iV.ovsesyan K.S. Synthesis and inmunocenisity of conjugates of carcinogenic agents with ternary phenolcontaininc copolymer of IJ-vinylpyrrolidone.-Second Soviet Union - Italy polymer Meeting.L.1991, p.SO.

35. Афиногенов Г.Е., Панаркя i¡.<¿., Соловский If.В. Исследование свойств полимерных комплексов дпметидбензилалшша.ммония. -Пол Всесоюзный симпозиум по физиологически активным синтетически;.! и другим полимерам медицинского назначения. Тезисы докл., Л., 1975, с.46-47.

36. Зашеина H.A., Соловский М.В., Блинов H.H. Фунгицидная активность некоторых поверхностно-активных и других соединении. 1ая Всесоюзная конференция по биоповреадениям. Тезисы докл., M., 1978, с.23.

37. Зашеина H.A., Соловский .'.I.B., Блинов И.П., 1'оловапенко Г.Г. Полимерные производные некоторых антисептиков как средства защити от биоповрездении.- Пая Всесоюзная конференция по биологическим повреждениям. Тезисы докл., Горький, 1981,

с.272-273.

38. Паутов В.Д., Ануфриева Б.В..Афиногенов Г.Б., Панарин Б.Ф., Соловский M.В. Структурообразование в водных растворах сополимеров /V -винилпирролидона с иокогепными группами и поверхностно-активных веществ.- П3^1 Всесоюзная конференция "Водорастворимые полимерн и их применение". Тезисы докл., Иркутск, 1982, с.120.

39. Соловский 1.1.В., Иаутоь В.Д., Панауин Б.v., Кочеткова U.C., Афиногенов Г.Е. Полимерные комплексы диметилбензилалкил- " аммоний хлоридов и их биологическая активность,- XXa я научная конференция ЛВС РАН, Тезисы докл., Л., 1983, г;.84-Н5.

40. Соловский М.В., Назарова О.В., Улбр:1х К., Кспечек il.Сополимеры (\/ -(2-гидрокс:шроп;1л);летакрпламнда, содержащие л-ни-трофепилыше сложиоэфирные группы, как модификаторы антибактериальных вещсств.- Пои Всесоюзный симпозиум "Синтетические полимеры медицинского назначения", Тезисы докл.,

Алма-Ата, 1083, с. 69-72.

41. Богомольный В.Н., Даурова Т.Т., Афиногенов Г.Е., Мейя Н.З., Соловскпн LI.В., Войтко H.H., Филиппова И.Б., Розенберг М.З. Антимикробные плеш<и на основе поливинилового спирта. -У10Й Всесоюзный симпозиум "Синтетические полимеры медицинского назначения", Тезисы докл., Алма-Ата, 1983, c.III-НЗ.

42. Панарин Е.Ф., Соловский U.B., Копейкпн В.В., Заш<ина H.A. Исследование специальных полимеров, действующих на плазматические мембраны бактерий. "Полимеры-83". УШ0И национальный симпозиум с международным участием, Тезисл докл., Варна, 1983, с.56.

43. Панарин Е.Ф., Соловский И.В., Ушакова В.Н., Паутов В.Д. Радикальная сополимеризация винилпирролидока под дойствием

^-излучения как способ получения полимеров-носителей биологически активных веществ.- Уы" Международный микросимпозиум "Радикальная полимеризация", Тезисы докл. Уфа,1984,с.53.

44. Ушакова В.II., Соловский 1,1.В., Денисов М.В., Панарин Е.Ф., Персинен A.A. Радиационная сополимеризация f7-винилпирролидока с некоторыми ненасыщенными алифатическими кислотами.-Всесоюзная конференция по теоретической и прикладной радиационной химии. Тезисы докл., Обнинск, 1984, с.365.

45. Богомольный В,Я, Войтко II.П., Позднякова Ф.О., Мейя Н.В., Соловский M.U., Панарин Е.Ф., Кочеткова U.C., Ануфриева Е.В., Краковяк М.Г., Паутов В.Д., Афиногенов Г.Е. Исследование -процесса выделения полимерных комплексов катионных поверхностно-активных веществ из гидрофильных пленок. УП0Й Всесоюзный симпозиум "Синтетические полимеры медицинского назначения", Тезисы докл., Минск, 1985, с.81-82.

46. Паутов В.Д., Кирпач А.Б., Соловский 1.1.В., Ушакова В.Н. Влияние химического строения сополимеров на основе f^-ви-нилпирролидона на внутримолекулярное структурообразование и динамику полшлерных цепей в водных растворах.- Шья Всесоюзная конференция "Водорастворимые полимеры и их применение". Тезисы докл., Иркутск, 1987, с.131.

47. Кранов K.M., Алисов II.Г., Ьадиков В.Д., Кочеткова И.С., Соловский М.В. Применение катаполз в хирургической практике.- У1]ол Всесоюзный симпозиум "Синтетические полшлеры медицинского назначения". Тезисы докл., Киев, 1989, с.65-66.

48. Соловский i.l.'J., Назарова 0.1!,, Денисов ii.il., Панарин Е.Ф., Коростелева Т.А., Белохвостова А.Т. Тройные фенодсодержащие сополимеры N -винилпирролидона как реагенты в иммунодиагностике экзогенных канцерогенных веществ,- Всесоюзный симпозиум "Фундаментальные проблемы современной науки о полимерах". Тезисы докл., Л., 1990, с.92.

49. Соловский М.В., Панарин Е.Ф., Кочеткова И.С., Ануфриева Е.В., Паутов В.Д., Афиногенов Г.Е., Заикина H.A. Полимерные комплексы диметилбензилалкиламмония как антисептические средства местного применения.- IXй® Всесоюзный симпозиум по целенаправленному изысканию лекарственных веществ. Тезисы докл., Юрмала, 1991, с.98.

50. Богомольный В.Я., Розенберг М.Э., Бодунова Е.Л., Тверских О.И, Панарин Е.Ф., Соловский М.В., Кочеткова И.С., Афиногенов Г.Е., Егорова Л.Л., Андреев С.Д., Блинова Л.А. Полифункциональные антисептические пленки для лечения ожогов и ран.- 1ХЫ® Всесоюзный симпозиум по целенаправленному изысканию лекарственных веществ. Тезисы докл., Юрмала, 1991, с.27.

51. Назарова О.В., Соловский М.В., Немцова H.H., Шварцман М.Я., Кашкин А.П. Синтез и иммуногенная активность полимерных производных антибиотика неомицина.- 1Хий Всесоюзный симпозиум "Синтетические полимеры медицинского назначения". Тезисы докл., Звенигород, 1991, с.43.

52. Соловский М.В., Панарин Е.Ф., Афиногенов Г.Е. Способ получения водорастворимых физиологически активных полимерных солей,- Авт.свид.СССР ü 518953.

53. Соловский М.В., Акулов Г.П., Трубятчинская В.Н., Персинен A.A. Кропачез В.А. Способ получения тритийсодержащих полимеров винилового ряда,- Авт.свид. СССР Ii 780464.

54. Соловский М.В., Заикина H.A., Ковтун Г.И., Денисова Г.В., Горбунова О.П. Водорастворимые тройные сополимеры Д/-винилпирролидона, содержащие ртутьорганическую кислоту, в качестве антисептического материала и способ получения водорастворимого тройного сополимера.- Авт.свид.СССР й 938581.

55. Анциферова Н.Г., Александров А.Д., Мороз А.Ф., Афиногенов Г.Е., Панарин Е.Ф., Соловский М.В., Ушакова В.Н. Имму-ногеноактивная композиция и способ получения иммуногено-активной композиции,- Авт.свид.СССР Я 1040769.

56. Богомольный В.Я., Афиногенов Г.Е., Соловский М.В., ВойткоНП., Филиппова Н.Б., Мейя Н.В., Панарин Е.Ф., Розенберг М.Э., Даурова Т.Т. Антимикробный плёночный материал.- Патент Российской Федерации Л 1080447.

57. Зуйкова Л.П., Изшова Э.И., Конокотин Г.С., Панарин Е.Ф., Петропавловский Г.А., Плиско Е.А., Соколова Л.Е., Соловский М.В., Воробьева В.А., Шевченко В.Ф. Полимерный состав для покрытия мороженой рыбы и рыбопродуктов.- Авт.свид.СССР Я III3075.

58. Соловский М.В., Зашеина H.A., Соколова И.Г., Кочеткова И.С., Денисов В.М., Котовский Б.К., Разукрантова Н.В. Водорастворимые сополимеры аминоалкилметакрилатов, содержащие этял-ртутьтиосалициловую кислоту, в качестве фунгицидного материала.- Авт.свид.ОССР Л I123275.

59. Селезнев Д.Г., Бриль A.C., Калистратова Г.В., Панарин Е.Ф., Соловский М.В., Кочеткова И.С., Афиногенов Г.Е. Способ получения водорастворимых физиологически активных полимерных комплексов.- Патент Российской Федерации Я 1358355.

60. Зуйкова Л.П., Изшова Э.И., Боброва И.П., Панарин Е.Ф., Соловский М.В., Кочеткова И.С., Лихачева В.В., Воробьева В.А., Шеревера М.П., Борзых Ю.А. Способ санитарной обработки пищевого оборудования,- Авт.свид.СССР Я I424I7I.

61. Панарин Е.Ф., Ушакова В.Н., Соловский М.В., Персинен A.A., Кузина З.А. Способ получения (со)полимеров, содержащих радиоуглеродную метку.- Авт.свид.СССР Я I5I03I7.

62. Соловский М.В., Панарин Е.Ф., Кочеткова И.С., Ануфриева Е.В., Паутов В.Д., Афиногенов Г.Е., Копылова Т.В., Иванцова Т.М., Видении В.Н., Макарьин A.C. Антисептическое средство.-Патент Российской Федерации Я I5I7I73.

63. Паутов В.Д., Ануфриева Е.В., Краковяк М.Г., Лущик В.Б., Соловский М.В., Панарин Е.Ф., Кочеткова И.О., Богомольный В Л., Белугина Е.Е., Афиногенов Г.Е., Мамонтов В.Д. Плёночная антимикробная композиция.- Патент Российской Федерация Я 1674552.

64. Мельникова Е.П., Мамонова И.В., Успенская З.Р., Соловский Ю., Панарин Е.Ф., Кочеткова И.С., Громов Б.В. Состав для реставрации мраморной скульптуры.- Патент Российской Федерации

й I7026I3.

65. Коростелева Т.А., Панарин Е.Ф., Соловский М.В., Назарова О.Б., Белохвостова А.Т., Потапенкова JI.C. Сополимеры /V -винил-пирролидона, кротоновой кислоты и п-кротоноиламинофенола в качестве полимерной основы синтетического антигена; синтетический антиген на основе сополимеров N-винилпирролидона, кротоновой кислоты и п-кротоноиламинофенола, содержащий ко-валентно присоединенный бензидин в качестве гаптена, и способ получения этого антигена.- Авт.свид.СССР Ji I8I2I83.

ПСТО'ВУРГКОМСТЛТ злк. л> V/i

тираж