Синтез и свойства новых производных 8-азапурина

Адамов, Андрей Владимирович

Синтез и свойства новых производных 8-азапурина тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

Адамов, Андрей Владимирович АВТОР

кандидата химических наук УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ

Москва МЕСТО ЗАЩИТЫ

2004 ГОД ЗАЩИТЫ

02.00.10 КОД ВАК РФ

Диссертация по химии на тему «Синтез и свойства новых производных 8-азапурина»

Автореферат диссертации на тему "Синтез и свойства новых производных 8-азапурина"

На правах рукописи

АДАМОВ Андрей Владимирович

СИНТЕЗ И СВОЙСТВА НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ 8-АЗАПУРИНА

02.00.10 — Биоорганическая химия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Москва 2004

Работа выполнена на кафедре органической химии Московской сельскохозяйственной академии им. КА. Тимирязева.

Научный руководитель: кандидат химических наук О.Г. Родин

Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор Г.В. Авраменко, доктор биологических наук, профессор П.Б. Курапов

Ведущая организация - Институт физиологически активных веществ РАН.

Защита диссертации состоится им» июня 2004 г. в Ю часов на заседании диссертационного совета К 220.043.04 по присуждению ученой степени кандидата химических наук при Московской сельскохозяйственной академии имени К.А. Тимирязева по адресу: 127550, Москва, Тимирязевская ул., 49.

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНБ МСХА.

Автореферат разослан мая 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета МСХА,

кандидат химических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Настоящее исследование связано с поиском и направленным синтезом новых биологически активных веществ, являющихся азааналогами пуринов - важнейшего класса азотистых оснований. Работа посвящена химии 8-азапурина (1,2,3-триазоло[4,5^]пиримидинов), поскольку изоструктурные лекарственные препараты на основе пурина (ацикловир, цитовен) обладают широким спектром биологической активности.

Несмотря на то, что первые синтетические работы появились уже в 50-х годах XX века, химия 8-азапурина получила свое второе рождение лишь в конце 80-х в работах итальянских ученых с открытием принципиально нового подхода к синтезу системы 8-азапурина исходя из 1,2,3-триазолов. Такой подход позволил модифицировать положения 2 и 9, однако периферия описанных в литературе соединений не выходит за рамки тривиальных заместителей. Биологические исследования 8-азапуринов показывают, что наиболее активными являются соединения, содержащие в положении 9 заместитель бензильного типа, что связано с возможностью их ферментативного расщепления в организме с образованием структур, аналогичных по своему химическому строению аденину, гипоксантину и другим азотистым основаниям. Сообщается, однако, что такие соединения достаточно гидрофобны и имеют низкие показатели растворимости в воде (logSw). Сведения о 6-функциональнозамещенных 8-азапуринах крайне отрывочны. Интерес представляет введение в положение 6 8-азапурина различных фармакофорных заместителей, а также синтез 6-С-замещенных 8-азапуринов, пуриновые аналоги которых проявляют противоопухолевую и антивирусную активность. Более того, такие соединения интересны как биологические зонды для установления механизма взаимодействия с ферментами. Особый интерес представляет собой синтез аннелированных трициклических структур на основе 8-азапурина, единичные представители которых проявляют чрезвычайно высокую биологическую активность в качестве ингибиторов A1 и Л2 подтипов аденозиновых рецепторов и обладают противоаллергическими свойствами. Совокупность этих обстоятельств делала актуальной проблему систематического подхода к синтезу разнообразных 8-азапуринов, содержащих в положении 9 заместитель бензильного типа, в положении 2 - заместитель алкильного типа, в положении 6 - связь С(6)-элемент (С, К, О, S), как потенциально активных соединений.

Цель работы. Целью диссертационного исследования является: 1. Создание обширной группы соединений, включающей

- синтез новых производных 8-азапурина, содержащих в положении 9 заместитель бензильного типа, а также имеющих разнообразные фармакофорные заместители в положениях 2 и 6, в том числе повышающие растворимость данного класса веществ,

- синтез новых трициклических систем на основе 8-азапурина.

2. Установление детального строения всех новых веществ.

3. Оценка биологической активности новых 8-азапуринов с помощью виртуального и реального биологического скрининга.

Научная новизна и практическая ценность. Разработан удобный подход к синтезу потенциально биологически активных производных 8-азапурина, содержащих в положении 9 заместитель бензильного типа, в положении 6 - связь С(6) - элемент (С, N, О, S). В качестве исходных веществ использованы простые и доступные бензилгалогениды, цианацетамид и эфиры карбоновых кислот.

Изучены пути распада молекул 8-азапурин-6-онов под действием электронного удара. Установлены общие закономерности распада, на основе которых предсказаны наиболее вероятные пути метаболизма соединений такого типа в живом организме.

Предложен новый способ синтеза трициклических структур на основе 8-азапурина, основанный на взаимодействии арил- и гетарил- тетразолов с 6-хлор-8-азапуринами, и проведено изучение устойчивости таких систем по отношению к различным восстановителям. Показано, что применение диборана в качестве восстановителя приводит к разрушению 8-азапуринового фрагмента и образованию производных 5-амино-1,2,3-триазола, ранее не описанных в литературе.

Проведено всестороннее изучение структуры всех соединений с использованием современных физико-химических методов: ЯМР'Н 2D NOESY, -HMP'H-,5N HSQC, lc/ms; установлено их геометрическое строение. Показано, что 6-оксо и 6-тиозамещенные 8-азапурины находятся в амидной (тиоамидной) форме, 6-карбозамещенные 8-азапурины — в илиденовой.

Проведен виртуальный скрининг всех синтезированных соединений по схеме LBD (Ligand-Based Design) и TBD (Target-Based Design) с помощью лицензионной программы SYBIL 6.9, а также биологические испытания in vitro некоторых 6-аминозамещенных 8-азапуринов. Выявлена потенциальная активность ряда соединений по отношению к различным подтипам аденозиновых, серотониновых и дофаминовых рецепторов, а также по отношению к тирозиновым и серии-

треониновым типам киназ и найдены вещества, обладающие сродством к дофаминовым и серотониновым рецепторам.

Публикации и апробация работы. Результаты диссертационного исследования были представлены на международной конференции . по комбинаторной химии: Second International Conference on Multi Component Reactions, Combinatorial and Related Chemistry (Genova, Italy, 2003).

По материалам диссертации опубликовано 3 статьи и тезисы 1 доклада.

Структура диссертационной работы. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов, списка литературы и приложений.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Синтез 2-алкил-9-бензил-8-азапурин-6-онов

Из литературы известно всего лишь два основных способа синтеза 8-аза-пуринового гетероцикла. Первый, аналогачный получению пуринов из пиримидинов, достаточно трудоемок и ограничен небольшим выбором заместителей в положении 2 гетероцикла. Он, в основном, применим для введения разнообразных заместителей в положение 9. Второй, менее изученный путь, основанный на конденсации 5-амино-4-кароксамидо-1,2,3-триазолов с эфирами карбоновых кислот, дает практически неограниченные возможности модификации положения 2. В литературе имеется немного примеров подобных соединений, как правило, не имеющих заместителей в положении 2, поэтому актуальной задачей являлась разработка новых подходов к синтезу структур, содержащих в этом положении различные фармакофорные заместители.

На первом этапе работы была отработана и оптимизирована методика синтеза 8-азапурин-6-онов по схеме:

X. Я. выход (%): Н, Н, 75 (8); Н, си,, 85 (9); Н, /-С4Н9,36 (10); II, СТ3, 72 (И); 2-С1, Н, 71 (12); 2-С1, СНз, 81 (13); 2-С1, С2Н5, 65 (14); 2-Р, СН3> 70 (15); 2-Р, С2Н3,62 (16);2-Р,6-С1, СН3, 81 (17); 4-СНз, СНз, 80 (18); 4-ОСН3, СН3,77 (19); 4-Р, СН3) 78 (20); 4-Р, С2Н5,65 (21)

Следует отметить, что соединения 8, 9, 12 и 13 уже описаны в литературе, и были получены по этой схеме итальянскими учеными с выходами 20-40%. Нами были найдены условия трехкомпонентной циклизации, в которых целевые продукты были выделены с выходами 60-80%. Для этого конденсацию проводили в присутствие пятикратного избытка натрия в безводном изопропаноле, компоненты брали в эквимолярном соотношении. Соединения 8-21 в дальнейшем были использованы в качестве исходных веществ для модификации положения 6 8-азапурина.

На наш взгляд, особенно интересным было синтезировать 2-метилтиозамещенные 8-азапурин-6-оны, поскольку фрагмент СНг-в-СНг является распространенным линкером в биологически активных соединениях. В частности, проведенный нами поиск в базе МББЯ выявил ряд 2-метилтиозамещенных

пуринов, являющихся агонистами аденозиновых (Аг) рецепторов; а также 2-метилтиопиримидины, обладающие противобактериальными свойствами. Нам удалось применить аналогичную схему для синтеза новых производных 8-азапурина, содержащих СН^- фрагмент в положении 2 гетероцикла:

X. И. выюд С/о): 4-Р, с-С3Н5) 60 (40); 4-Р, 1-адамантил, 54 (41); 4-Р, 4-Г-С6Н,, 75 (42); 4-Р, 2,6-(СНз)2-С6Нз, 82 (43); 4-^ 4-К(СН3)2-С6Н4> 72 (44); 2-С1,2-СН}-СбН4, 29 (45); 2-С1, 4-СН3-С6Ш, 26 (46); 2-С1,2,6-(СНз)2-С6Нз, 34 (47); 2-С1,2-ОСНз-СбН., 30 (48); 2-С1,4-ОСН3-СбН<, 48 (49)

Исходные бензилазиды 1-7 получали из соответствующих бензилгалогенидов кипячением в смеси ацетона и ацетонитрила с избытком азида натрия. Исходные 2-хлорацетамиды 22-30 получали по общей методике ацилирования аминов хлорангидридами из соответствующих аминов и 2-хлорацетилхлорида в дихлорметане, соединения 31-39 - по общей методике алкилирования тиофункции меркаптоэтилацетата 2-хлорацетамидами 22-30 в изопропаноле в присутствие основания (NaOH). Выходы продуктов конденсации 40-49 были значительно ниже таковых для 8-азапурин-6-онов 8-21, что, по-видимому, связано с пространственными затруднениями при введении в реакцию массивного метшггиоацетамидного фрагмента.

Строение 8-азапурин-6-онов 8-21 и 40-49 доказано методами .ЯМР'Н, 21) NOESY, LC/MS, масс-спектрального анализа, ИК-спектроскопии и подтверждено методом элементного анализа. Характерной чертой 8-азапурин-6-онов 40-49 является наличие в ЯМРН спектрах этих соединений сигналов протонов СНг-группы бензильного фрагмента в области 5,6-5,9 м.д. и протона NH- группы в области 12,0-12,5 м.д. Для соединений 40-49 характерно также наличие синглетов в области 3,4-3,6 и 3,7-3,9 м.д. фрагмента СНгЗСНг.

Для прогнозирования свойств 2-метилтиозамещенных 8-азапурин-6-онов на примере соединений 45-49 были рассмотрены процессы их распада под действием

22-30

31-39

электронного удара, что позволило сделать определенные выводы о путях метаболизма 8-азапуринового фрагмента в живом - организме. Показано, что основными направлениями распада являются отрыв 2-хлорбензильного катиона, а также расщепление связи СНг-5 (о-распад). Вопреки нашим ожиданиям, основанным на литературных аналогиях с пуринами, распад 8-азапуринового фрагмента ни для одного из рассматриваемых соединений не являлся преобладающим процессом.

Синтезу 6-замещенных 8-азапуринов посвящено значительно меньшее количество работ, несмотря на то, что замещение гидроксильной группы на галоген с последующим его замещением различными нуклеофилами является распространенным способом введения заместителей в гетероциклическую систему.

Для получения хлорпроизводных 8-азапуринов мы использовали два альтернативных метода, широко применяемых для получения хлорпроизводных гетероциклов. Первый способ заключался в продолжительном нагревании исходных 8-азапурин-6-онов с хлорокисью фосфора в присутствие ^^ диметиланилина в качестве катализатора, второй - в кипячении 8-азапурин-б-онов с хлористым тионилом. Таким образом, все исходные 8-азапурин-6-оны 8-21 были переведены в соответствующие хлорпроизводные 50-63:

X. а выход (%)•. Н, Н, 71 (50); Н, СН3, 81 (51); Н, /-СЛ1,, 48 (52); Н, СР3> 59 (53); 2-С1, Н, 82 (54); 2-С1, СН3, 77 (55); 2-С1, С2Н5,72 (56); 2^, СН3, 66 (57); 2-Р, С2Н5) 56 (58); 2-Р,6-С1, СН3, 75 (59); 4-СНз, СН3,79 (60); 4-ОСН3, СН3,80 (61); 4-Р, СНЬ75 (62); 4-Р, СгН5,54 (63)

Проведение реакции в хлорокиси фосфора имело ряд недостатков. Во-первых, применение столь агрессивного реагента приводило к частичному осмолению продукта, и даже при небольшом перегревании выход понижался до 10-20%. Во-вторых, при нейтрализации остатков хлорокиси фосфора, а именно выливании реакционной смеси на лед с последующей экстракцией

2. Синтез 6-замещенных 2-алкил-9-бензил-8-азапуринов

2.1. Синтез исходных 6-хлор-8-азапуринов

дихлорметаном, уже при низких температурах имел место гидролиз продукта. Использование хлористого тионила в качестве хлорирующего агента позволило увеличить выход продукта до 50-80% одновременно с сокращением времени синтеза. Этот способ позволил избежать контакта хлорпроизводного с водой в процессе выделения, а время реакции (4-6 часов) в большей степени зависело от природы заместителей, влияющей на растворимость исходного соединения в хлористом тиониле. Чистоту полученных соединений контролировали хроматографически, и полупродукты 50-63 сразу использовали в дальнейших превращениях.

2.2. Синтез 6-аминозамещенных 8-азапуринов

Из большого набора коммерчески доступных аминов мы выбрали те, которые наиболее часто присутствуют в лекарственных препаратах в качестве фармакофорных фрагментов (например, морфолин, пиперазин, циклопропиламин и др.). В случае использования бензил- и фенетиламинов наиболее вероятным путем метаболизма замещенных 8-азапуринов является расщепление связи N бензил (фенетил) не только в положении 9, но и в положении 6, что приводит к образованию производных 6-амино-8-азапурина (8-азааденина). В результате просмотра баз данных ACD и Beilstein нами было обнаружено, что замещенные в положении 6 такими аминами 8-азапурины не описаны в литературе. Нами была создана обширная виртуальная база 6-аминозамещенных 8-азапуринов и проведено нуклеофильное замещение галогена в 6-хлор-8-азапуринах аминами по схеме:

Я1

а N /

Я»

N '

50-63

X. И. Я'мг'. выход (%): Н. Н, (СН3)2Ы, 35 (64); Н, Н, 4-С1-СбН4СН2СН2Ш, 88 (65); Н, СН3,2-СООСНз-СбИгШ, 85 (66); Н, 1-С4Н9, НСеС-СН2Ш, 74 (67); Н, СР3, с-С3Н5КН, 55 (68); Н, СР3, фурил-2-СН2Ш, 82 (69); 2-С1, Н, СВД^СНгСНгЩ 28 (70); 2-С), Н, фурил-2-СН2Ш, 80 (71); 2-С1, Н, СбНзСНгСНгЫН, 79 (72); 2-С1, Н, 3-С51Ш-СН2Ш, 51 (73); 2-С1, Н, 4-ОСНз-СбНч-СН2СН2ЫН, 80 (74); 2-С1, СН}, 2-Р-СбН4>1Н, 64 (75); 2-С1, С2Н5, Ш2Ш, 22 (76); 4-СН3 СНз, с-С5Н5Ш, 30 (77); 4-СН3, СН3, 0(СН2СН2)2К 75 (78); 4-СН3> СН3, З-ОСНз-СЛШ, 60 (79); 4-ОСН3, СНз, Ш2, 52 (80); 4-ОСН3, СН3, с-С3Н5МН, 62 (81); 4-ОСН3, СН3> 0(СН2СН2)2Ы, 75 (82); 4-ОСН3, СН3, 4-Р-С6Н^Н, 85 (83); 4^, СН3, е-С3Н5-СН2Ш, 75 (84); 4-^ СНз, Ы-С2Н5-пирролидин-2-ил-СН2>1Н, 31 (85); 4-Р, С2Н3, СН2=СНОСН2СН2Ш, 74 (86).

Нуклеофильное замещение атома хлора в молекуле 8-азапурина в зависимости от природы амина проводили по двум методикам. С различными алифатическими аминами, как первичными, так и вторичными, нуклеофильность которых значительно выше, чем у анилинов, реакция достаточно энергично проходила в этаноле в присутствие триэтиламина в качестве основания, или с избытком»амина уже при комнатной температуре. Использование в качестве растворителя ДМФА и ацетонитрила не повлияло ни на ход реакции, ни на выходы продуктов, которые достигали 40-80%. С анилинами реакцию проводили в диметилформамиде с добавлением при нагревании. Мы исследовали

также возможность нуклеофильного замещения хлора гидразином и аммиаком. В этих случаях конкурентной реакцией являлся гидролиз: выделить индивидуальные соединения 76 и 80 удалось только после двух перекристаллизации из спирта, что отразилось на выходе целевых продуктов (порядка 20%).

Интересным, на наш взгляд, было, синтезировать 6-оксизамещенные 8-азапурины, поскольку поиск в электронной библиотеке ВиМет выявил всего лишь два аналогичных соединения. Это дало нам стимул для синтеза новых производных этого типа на основе алифатических спиртов и фенолов. Получение таких производных осуществляли по схеме:

X. I*. выход (%): 4^, СНз, 70 (87); 4-т, (-с}н7, 64 (88); а-т, СНгССН2) 65 (89); 4-^ 4-ОСН3-СбШ, 82 (90); 4-ОСНз, 2-СНгС6Ш, 32 (91)

Реакцию с алифатическими спиртами проводили непосредственно в среде этих спиртов с избытком натрия. Попытки замещения атома хлора в соединениях 61-62 более объемными спиртами, такими как третбутанол, циклогексанол и бензиловый спирт, не привели к выделению соответствующих 6-оксипроизводных. Замещение хлора фенолами с высокими выходами проводили в апротонных растворителях (ацетонитрил, ДМФА) в присутствие карбоната калия. В случае замещения 2-метилфенолом выход продукта 91 значительно ниже

2.3. Синтез 6-оксизамещенных 8-азапуринов

X 90-91 К=Агу!

1Ч=А1ку1

таковых в ряду соединений 87-90, что, возможно, объясняется стерическими затруднениями.

В синтезе тиозамещенных 8-азапуринов на примере хлорпроизводного 62 мы использовали два основных подхода: получение 8-азапурин-6-тиона 92 с последующим алкилированием и непосредственное нуклеофильное замещение хлора тиолами и тиофенолами:

И. выгод (%): 4-ОСН3-С6Н4,72 (93); 4-Р-СбН4,35 (94); фурил-2-СН2,74 (95); СгН5,85 (96); С2Н5ООССН2,58 (97)

Для получения 8-азапурин-6-тиона 92 нами были применены три метода: синтез из 8-азапурин-6-она 20 с Р2$5 в толуоле, синтез из 6-хлорпроизводного 62 с избытком в этаноле, и из 6-хлорпроизводного 62 с (N112)28 в метаноле с

последующей обработкой изотиурониевой соли водным раствором КаОЫ. Наибольший выход обеспечил метод получения тиона 92 из хлорпроизводного 62 с (60%). Целевые продукты 93-97 также синтезировали несколькими

способами. Соединения 93-95 получали нуклеофильным замещением атома хлора тиолами в изопропаноле. Несмотря на большую нуклеофильность серы, в некоторых случаях идет замещение 8-функции спиртами или ОН ионом. Так, попытка введения низкомолекулярных тиолов по этой методике, а именно этилмеркаптана и 2-меркаптоэтилацетата, не привела к продуктам 96 и 97. В первом случае было выделено соединение 20, во втором - 88. Поэтому для получения веществ 96-97 предложен другой синтетический путь, основанный на

2.4. Синтез 6-тиозамещенных 8-азапуринов

алкилировании 8-азапурин-6-тиона 92 алкилгалогенидами. Тион 92 нагревали в ацетонитриле с избытком алкилгалогенида соответственно) и избытком К2СО3.

Для подтверждения строения соединения 92 в виду возможной КЫ-8Ы таутомерии, его структура изучена методами спектрометрии ЯМР'Н и 2Б КОЕ8У, и четко установлено, что соединение 92 находится в форме тиона. На это указывал отчетливый кросс-пик между протонами СНз- группы в положении 2 и протоном КЫ, удаленными в пространстве примерно на 2,1А. Оптимизацию структуры и расчет межатомных расстояний проводили с использованием программы ЫурегСИеш.

2.5. Синтез 6-карбозамещенных 8-азапуринов

В настоящее время большое внимание уделяется синтезу 6-карбозамещенных пуринов. Известно, что нуклеозиды, построенные на основе 6-С-замещенных пуринов, проявляют противоопухолевую и антивирусную активность. Более того, такие соединения интересны как биологические зонды для установления механизма взаимодействия с ферментами. Синтез аналогичных производных 8-азапурина, а именно содержащих в положении 6 фрагменты ацетамида, ацетонитрила, малонового эфира и пиразолона, не описан в литературе. Нашей задачей являлся направленный синтез 6-С-замещенных 8-азапуринов путем нуклеофильного замещения хлора в молекулах 6-хлор-8-азапуринов. В ходе выполнения эксперимента были реализованы следующие схемы:

И к'. Я*. И3, выход С/о): 2-Р-(6-С1)-СбНз-СН2. СН3, С2Н5ООС, СМ, 38 (98); 2-С1-СбИ,-СН2. СН3, С2Н5ООС, С2Н3ООС, 44 (99); 2-С1-СбН4-СН2, СН3, СН3С(0), С2Н5ООС, 35 (100); 2-Р-(6-С1)-СбН3-СНг.СН3, С(0)Ш2, сы, 45 (101); 2-С1-С6Н,-СИ2, СН3. СбН5. CN> 65 (102); И1, выход (»/.): Н, 33(103); С2Н5,39(104).

Высокая подвижность атома хлора в положении 6 8-азапурина обуславливает возможность его замещения даже относительно слабыми С-нуклеофилами. Для генерирования карбанионов нами апробировано замещение в следующих условиях: гидрид натрия в ДМФА; этилат (изопропилат) натрия в этаноле (изопропаноле); К2СО3 в ДМФА или ацетонитриле; триэтиламин в этаноле, в результате получены вещества 98-104.

Опасаясь возможной переэтерификации сложноэфирных групп, замещение галогена производными малоновой кислоты и ацетоуксусным эфиром проводили в этаноле с этилатом натрия; замещение цианацетамидом проводили в изопропаноле с изопропилатом натрия. Выходы соединений 98-101 при этом составили 35-45%.

Интересным, на наш взгляд, было изучение протекания реакции в случае арилацетонитрилов. Известно, что последние представляют собой менее активные СН-кислоты, поскольку карбанион стабилизирован лишь одной электроноакцепторной группой. Учитывая это, мы заведомо использовали более сильное основание - гидрид натрия в безводном ДМФА. При этом введение в реакцию целого ряда арилацетонитрилов привело к смеси изомеров в самых различных соотношениях. Изомеры имели очень близкую хроматографическую подвижность. Такие способы очистки, как перекристаллизация и переосаждение из горячего раствора, также не позволили выделить какой-либо изомер индивидуально. Лишь в случае фенилацетонитрила после перекристаллизации из этанола с выходом 65% был выделен индивидуальный продукт 102, не имеющий примеси изомера по данным LC/MS.

Реакции с фенилпиразолоном, также являющимся С-нуклеофилом, проводили в диметилформамиде в присутствие гидрида натрия. Процесс протекал гладко, и соединения 103-104 были выделены без каких-либо побочных продуктов с выходами 54% и 39%, соответственно.

На примере соединения 105 нами был предложен способ замещения галогена в соединении 60 карбанионом, не стабилизированным электроноакцепторными группами. Синтез проводили путем взаимодействия хлорпроизводного 60 с бензилмагнийбромидом в диэтиловом эфире при охлаждении (лед-№СТ) в атмосфере аргона, продукт выделяли на колонке.

Особой сложностью при работе с 6-карбозамещенными 8-азапуринами было установление структуры полученных соединений, поскольку наличие сопряженных связей в молекулах последних предполагает возможность их существования как в таутомерных формах, так и в виде структурных изомеров.

Нами был проведен тщательный анализ спектральных характеристик соединений 98-104. В ЯМР1Н спектрах соединений 98-104 не было выявлено сигнала СН-протона. Вместо этого был зафиксирован пик в слабом поле (12-15 м.д.), что доказывало существование этих соединений в илиденовой форме. Сигнал протона в слабом поле обусловлен наличием прочных внутримолекулярных водородных связей (за исключением соединения 102), характерных для илиденовых структур. Наше предположение было дополнительно подтверждено методами спектрометрии ЯМР,3С, НБОС (ЯМР'Н-'5]^) и Ю ШЕБУ. Более того, данные спектров позволили точно определить расположение групп (тип изомерии) относительно илиденовой двойной связи. На основании полученных данных соединениям 98-104 были присвоены следующие структуры:

2.6. Синтез аннелированных трициклических структур на основе 8-азапурнна

В литературе имеются данные о синтезе аннелированных трициклических производных на основе 8-азапурина, однако многостадийность и низкие выходы делают синтез таких соединений малопривлекательным. В тоже время биологические испытания показывают высокую активность таких соединений в качестве ингибиторов аденозиновых рецепторов на уровне наномолярных

концентраций. Получение подобных структур обычно проводят путем термической конденсации гетарилгидразинов с эфирами карбоновых кислот или с ортоэфирами. Другим способом синтеза является ретроконденсация гетарилгидразидов кислот в дифениловом эфире в предельно жестких условиях, однако выходы продуктов циклизации не превышают 30%.

Нами был разработан другой способ получения трициклических структур, основанный на реакции 5-арил и 5-гетарил 1-н-тетразолов с 6-хлор-8-азапуринами. Такой способ получения аннелированных производных на основе 8-азапурина не описан в литературе. Мы поставили задачу исследовать данный

подход систематически в ряду 2-алкил-6-хлор-8-азапуринов 50-63. Ниже приведена схема синтеза и выходы целевых продуктов:

X. И. К1, выюд (%): СН3,4-Р-СбН,.42 (115); 4-Р, СН3,4-ОСН3-С6Н4,56 (116); 4-Р, СН3, 5-СН3-2-фурип, 48 (117); 4-Р, СНз, З-СзШИ, 33 (118); 4-Р, С2Н5, 4С1-С6Н4, 71 (119); 2-Р, СН3) 4-ОСН3-С6Н4, 48 (120); 2-Р, СН3> 4-ОС2Н3-С6Н<, 52 (121); 2-С1, Н, 4-ОСН3-СбН4, 72 (122); 2-С1, СНз, 4-Р-СбН), 66 (123); 2-С1, Н, З.ЧОСНЖ-СбНз, 80 (124); 2-С1, С2Н5, 4-ОСН3-СбШ, 54 (125);

2-С1, С2Н5, 4-Р-С6Н4, 48 (126); Н, СР3< 4-ОСНз-СбШ, 33 (127); Н, СР3, 4-С1-ОН4, 31 (128); 4-ОСНз; СН3, 4-ОСНз-СбШ, 73 (129); 4-ОСН3, СН3, 4-ОСН3-СбН4, 66 (130); 4-ОСН3, СН3, 4-К02-С6Н,, 58 (131); 4-СН3, СН3,5-СН3-2-фурил, 55 (132); 4-СН5, СН3,2-тиенил, 62 (133); 4-СН3, СН3,

3-С5Н4Ы, 68 (134); 4-ОСН3, СН3, 5-СН3-2-фурил, 53 (135); 4-ОСН3, СН3, 2-тиенил, 75 (136); 2-Р, СН3,4-ОС2Н5-СбН4,25 (137); ОСН3> СН3,5-СН3-2-фурил, 15 (138); 2-С1, С2Н5,4-Р-СбШ, 21 (139).

Исходные тетразолы были синтезированы из соответствующих нитрилов кипячением в толуоле с азидом натрия и гидрохлоридом диметиламина в течение 4 часов или в диметилформамиде с двукратным избытком азида натрия в течение 24 часов. Соединения 115-139 мы синтезировали из тетразолов 106-114 и 6-хлор-8-азапуринов 50-63 в ацетонитриле или диметилформамиде с добавлением каталитических количеств пиридина. Все полученные целевые продукты очищали при помощи препаративной колоночной хроматографии. Контроль за прохождением реакции осуществляли при помощи ТСХ. Выделение азота из реакционной смеси наблюдалось уже при слабом нагревании. Сначала появлялось яркое флуоресцирующее пятно, при дальнейшем нагревании (80-120°С) оно исчезало, и появлялось другое, слабо флуоресцирующее пятно вещества с меньшей подвижностью, которое, как было установлено впоследствии, относится к ЭЯ-[1,2>3]триазоло[4,5-е][1,2,4]-триазоло[3,4-с]пиримидинам 115-136. Анализ LC/MS спектров реакционной смеси указывал на наличие изомеров, соотношение которых изменялось в процессе реакции. Проведение реакции в более мягких

* Нумерация согласно номенклатуре IUPAC

Я'СИ

температурных условиях (50°С, ДМФА) позволило выделить индивидуальные продукты 137-139, содержащие в основе новый гетероцикл - 3#-[1,2,3]-триазоло[5,4-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин. Нами было предложено объяснение факта взаимного превращения изомеров в рамках механизма перегруппировки Димрота, являющейся классической для пиримидиновых систем:

В результате изучения устойчивости соединений 115-136 к нагреванию, было замечено, что взаимные превращения изомеров происходят только в растворе (по-видимому, в присутствие следов воды).

На примере соединений 121, 126, 135, 137-139 мы провели сравнение спектрального поведения изомеров. В целом, анализ ЯМРН спектров этих соединений показал, что хим. сдвиги протонов изомеров в целом идентичны, за исключением протонов СН3- группы в положении 5. При сравнении ЯМР'Н спектров изомерных соединений 121 и 137 наблюдалось смещение сигнала СН3-группы в слабое поле (с 2,1 до 3,0 м.д.). При этом изменение химического окружения этой группы не повлияло на хим. сдвиги других протонов. Для изомерных соединений 136 и 138 также наблюдался сдвиг сигнала СН3- группы в слабое поле (с 2,5 до 2,9 м.д.). Опираясь на данные спектрометрии ЯМР'Н 2ъ КОЕ8У, нами достоверно установлены структуры соединений 115-139.

2.7. Восстановление производных 8-азапурина

Известно, что система 8-азапурина устойчива к действию различных восстановителей. Данных о восстановлении трициклических соединений на основе 8-азапурина не найдено в литературе. Таким образом, было интересно изучить устойчивость трициклической системы триазоло пиримидинов в различных условиях восстановления.

Имея в распоряжении достаточно широкий выбор восстановителей, для проведения эксперимента на примере веществ 116, 124 мы ограничились

использованием следующих восстановителей:

ВгН^/ГОР. Соединения 116,124 нагревали в метаноле с большим избыткомКаВН« (50°С, 6 часов), однако в спектре LC/MS не было замечено даже следов восстановленного продукта. Каталитическое восстановление (Нг/Рс1/С; Н2/№(11е)) этих же соединений в более жестких условиях (50°С, 6 часов, 3 атм.) также не привело к каким-либо изменениям исходных соединений. Примечательно, что бензильный фрагмент не был затронут, несмотря на то, что восстановление водородом на палладиевом катализаторе является универсальным способом снятия бензильной защиты. Совершенно иначе протекала реакция с дибораном в ТГФ. При добавлении избытка 1М раствора диборана в ТГФ к суспензии соединений 115-124 в ТГФ уже при комнатной температуре в течение непродолжительного времени (0,5-1 час) наблюдали полное растворение веществ и изменение характера хроматографического поведения реакционной смеси. В результате были выделены продукты 140-146:

Д. И1. Я2, выход С/о): 2-С1-С6Н|-СН;>, Н, 3,4-(ОСН3)2-С6Н3, 55 (140); 2-С1-С6Н4-СН2, Н, 4-ОСНг СбШ, 58 (141); 4-Г-С6Н4-СН2, СН3, 4-Р-СбЩ, 76 (142); 4-Р-СбН4-СН2, С2Н5, 4-С1-СбН4, 75 (143); 4-Р-С6Н4-СН2, С2Н5, 4-ОСН3-СбН«, 65 (144); 2-Р-СбН4-СН2, СН3, 4-ОС2Н5-СбН4, 30 (145); 2-Р-СбИ4-СН2, СН3,4-ОСН3-СбН4,38 (146).

Так как мы имели дело с достаточно сложной гетероциклической системой, предсказать продукты восстановления дибораном оказалось трудной задачей. Вопреки нашим ожиданиям, реакция не ограничивалась восстановлением двойной связи пиримидина, и происходило дальнейшее восстановление по схеме, приведенной выше. Причем, независимо от кратности избытка диборана, проходило восстановление двух связей (пик "М + 4" по LC/MS). Пик "М + 2" в LC/MS спектрах также присутствовал, но его интенсивность составляла не более 10%. Мы предположили, что при расщеплении связи между атомами С-5 - N-6 возможно образование трех изомерных структур (на примере соединения 145), отличающихся положением протона в 1,2,4-триазолъном цикле:

№

115,116,119,120,121,122,124

К1 140-146

Для установления структур соединений 140-146 методом спектрометрии ЯМР'Н 2D NOESY мы изучили соединение 145. Был зафиксирован кросс-пик между протоном NH-группы 1,2,4-триазола и орто- протонами арильного заместителя, а также кросс-пик между NH- протоном и протонами СНг группы этильного заместителя. На основании этого для всех соединений 140-146 мы предположили структуры типа А. Следует иметь в виду, что синтез подобных 5-алкиламино-4#-1,2,4-триазолил-1н-1,2,3-триазолов 140-146 другими способами не описан в литературе.

3. Биологические свойства 8-азапуринов

3.1. Виртуальный биологический скрининг

Важным этапом нашей работы являлся виртуальный скрининг замещенных 8-азапуринов с целью выявления потенциально активных соединений и постановки синтетической задачи. Известные данные биологических испытаний указывают на широкий спектр активности пуринов и 8-азапуринов по отношению к киназам, NO-синтетазам, а также к семейству рецепторов, ассоциированных с G-белком.

В нашей работе было реализовано два подхода к поиску так называемых Drug-like molecules*. Первый метод (Structure-Based Method) основан на моделировании структурного и пространственного соответствия виртуальных соединений активным центрам белка, при этом структура биологической мишени (молекулы белка) была достоверно известна. Второй подход (Ligand-Based Method), основанный на структурном сходстве виртуальных соединений с уже-известными лекарствами или их фармакофорными фрагментами, использовали для предсказания связывания с рецепторами GPCR (рецепторами, ассоциированными с G-белком), структура которых неизвестна.

Было обнаружено, что практически все представленные к рассмотрению соединения гипотетически активны в отношении киназ, а также рецепторов семейства GPCR. Результаты виртуального биологического скрининга некоторых наиболее перспективных соединений приведены в табл.1.

* Совместно с лабораторией компьютерного моделирования компании Asinex

Таблица 1. Гипотетическая способность некоторых 6-аминозамещенных 8-азапуринов к связыванию рецепторов GPCR

NN Сродство к дофаминовым рецепторам Сродство к серотониновым рецепторам Сродство к аденозиновым рецепторам • Сродство к другим типам рецепторов

D, d2 D3 5-HTi 5-HTj At А2 Aj Опиоид-ные Эндо-фелин

64 + +

65 + + + + + + + +

66 + + + + +

67 + +

68 + + +

69 + + + + + +

70 + + + + + +

71 + + + + +

72 4- + + + + +

73 + + + + +

74 + + + + + +

75 + + +

76 + +

77 + + +

78 + + + + + + +

79 + + + +

3.2. Биологические испытания in vitro

Следующим этапом биологических исследований явились тесты некоторых 6-аминозамещенных 8-азапуринов на активность по отношению к киназам, а также к дофаминовым и серотониновым рецепторам на клеточном уровне in vitro, проводимые в научной лаборатории AsinexBioLabs. Для этих целей использовали коммерчески доступный материал, представляющий собой лиофилизированную мембрану клеток с определенным типом рецептора. В качестве стандарта сравнения использовали радиолиганд с тритиевой меткой [3H]-8-OH-DPAT (8-гидрокси-2-(ди-И-пропиламино)тетралин).

Первоначально количественно определяли связывание стандартного литанда с рецептором, а затем смеси исследуемого вещества и стандартного лиганда. Происходило конкурентное ингибирование активного центра рецептора, степень

ингибирования определяли по остаточному содержанию несвязанного [3Н]-8-ОН-DPAT. Таким образом, был вычислен параметр IC50, отражающий концентрацию вещества, обеспечивающую 50%-е связывание исследуемого вещества с субстратом. Данные биологических испытаний tn vitro, проведенных для ряда 6-аминозамещенных 8-азапуринов, сведены в таблицу 2.

Таблица 2. Результаты биологических испытаний некоторых соединений

NN Формула Сродство к дофаминовым рецепторам, ICso (мкМ) Сродство к серотониновым рецепторам,ICso (мкМ)

D, D2 D3 d< 5-НТ, 5-НТг

65 /У" М. 2,70

70 а 70,00 19,00

72 ъЯЬ а 2,76

74 о 22,41

75 f О >200

79 150,00

Полученные нами результаты показали возможность связывания некоторых 8-азапуринов, содержащих в положении 6 фенетиламино группу, с серотониновыми рецепторами на уровне концентраций 2-20 мкМ. Низкие

показатели активности по отношению к серотониновым рецепторам определены для 6-анилинозамещенных 8-азапуринов 75 (IC50 > 200мкМ) и 79 (IC50 150мкМ). В настоящее время на стадии биотестирования находятся все полученные соединения.

Таким образом, синтезированные нами новые 8-азапурины являются перспективными объектами для биологических исследований, в том числе по отношению к аденозиновым, дофаминовым и серотониновым рецепторам.

Выводы

1. Разработана методика получения 8-азапурин-6-онов, содержащих в положении 9 заместитель бензильного типа. Предложен метод синтеза новых производных 8-азапурина, содержащих в положении 2 метилтиоацетамидный фрагмент, а также изучены пути их распада под действием электронного удара.

2. Разработан удобный препаративный метод синтеза новых 6-амино, 6-тио, 6-окси и 6-карбозамещенных 8-азапуринов, основанный на нуклеофильном замещении галогена в 6-хлор-8-азапуринах. Проведено детальное изучение структуры полученных соединений методами и HSQC.

3. Впервые предложен способ синтеза новых трициклических систем - ЪН-[1,2,3]триазоло[4,5-е][1,2,4]-триазоло[3,4-с]пиримидинов и 3Н-[1,2,3]-триа-золо[5,4-е] [ 1,2,4]триазоло[ 1,5-с]пиримидинов, основанный на взаимодействии арил- и гетарил- тетразолов с 6-хлор-8-азапуринами, изучена их устойчивость к действию восстановителей. Показано, что реакция с дибораном приводит к разрушению пиримидинового фрагмента и образованию не известных ранее производных Л-алкил-5-амино-1,2,3-триазола.

4. Впервые синтезирован обширный ряд новых замещенных 8-азапуринов, содержащих в положениях 2,6 и 9 различные фармакофорные заместители. С помощью компьютерных расчетов показано, что большинство соединений удовлетворяют правилам Липински, являющихся критерием отбора лекарственноподобных веществ.

подтипам аденозиновых, серотониновых и дофаминовых рецепторов, а также по отношению к тирозиновым и серин-треониновым типам киназ.

6. Проведено первичное биологическое тестирование in vitro некоторых 6-аминозамещенных 8-азапуринов и найдены вещества, обладающие сродством к дофаминовым и серотониновым рецепторам.

Основное содержание работы изложено в следующих публикациях;

1. К.В. Кулешов, А.В. Адамов, О.Г. Родин, В.П. Перевалов, А.Р. Эльман, Синтез новых 2-замещенных 6-гидрокси-8-азапуринов (8-азагипо-ксантинов), Хим.-фарм. журнал, 2002,36, 44-46.

2. К.В. Кулешов, А.В. Адамов, О.Г. Родин, В.П. Переводов, Синтез комбинаторных библиотек меркаптометилзамещенных 8-азапуринонов как антиметаболитов пуринов, Second International Conference on Multi Component Reactions, Combinatorial and Related Chemistry, Book of abstracts, Genova, Italy, 2003, 139.

3. К.В. Кулешов, А.В. Адамов, А.И. Белоконь, О.Г. Родин, В.П. Перевалов, А.Р. Эльман, Масс-спектры и закономерности распада некоторых 2-замещенных 9-(о-хлорбензил)-8-азагипоксантинов, Биоорганическая химия, 2004,30,1,105-109.

4. А.В. Адамов, Н.Л. Нам, О.Г. Родин, Синтез новых производных 8-азапурина, Известия ТСХА, 2004,1,138-140.

Усл.печл.л. 1,16

Зак 256

Тир. 100 экз.

AHO «Издательство МСХА» 127550, Москва,ул. Тимирязевская, 44

»12782

Содержание диссертации автор исследовательской работы: кандидата химических наук, Адамов, Андрей Владимирович

I. ВВЕДЕНИЕ.

II. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

2.1. Номенклатура 8-азапуринов.

2.2. Методы синтеза 8-азапуринов.

2.2.1. Синтез 8-азапуринов с функциональными заместителями в положении 2 (метод Траубе).

2.2.1.1. Получение 2,4,6-замещенных пиримидинов.

2.2.1.2. Введение аминогруппы в положение 5 пиримидина.

2.2.1.3. Замыкание 8-азапуринового цикла.

2.2.2. Другие методы синтеза 8-азапуринов из пиримидинов.

2.2.3. Синтез 8-азапуринов из 5-амино-1,2,3-триазолов.

2.2.3.1. Получение азидов.

2.2.3.2. Азиды в реакциях диполярного 1,3-циклоприсоединения.

2.2.3.3. Синтез 1,4-замещенных 5-амино-1,2,3-триазолов.

2.2.3.4. Реакционная способность азидов и границы их применения в синтезе 5-амино-1,2,3-триазолов.

2.2.3.5. Перегруппировка Димрота в гетероциклических системах.

2.2.3.6. Способы построения 8-азапуринового гетероцикла исходя из замещенных 5-амино-1,2,3-триазолов.

2.3. Способы модификации гетероцикла.

2.3.1. Нуклеофильное замещение в положении 6 8-азапурина.

2.3.2. Построение трициклических аннелированных гетеросистем на основе 8-азапурина.

2.3.3. Изомерия трициклических соединений на основе 8-азапурина.

2.3.4. Получение других аннелированных гетероциклов на основе 8-азапурина.

2.3.5. Изомерия 6-замещенных 8-азапуринов.

2.4. Биологические свойства 8-азапуринов.

2.4.1. Антивирусная активность 8-азапуринов.

2.4.2. Биологическая активность 8-азапуринов по отношению к рецепторам семейства вРСЯ.

2.4.3. Противоаллергическая активность некоторых 8-азапуринов.

III. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

3.1. Синтетический путь получения 8-азапурин-6-онов.

3.1.1. Оптимизация методики получения исходных 8-азапурин-6-онов (8-азагипоксантинов).

3.1.2. Строение и физико-химические свойства 8-азапуринов-6-онов.

3.1.3. Синтез 2-алкилтиозамещенных 8-азапурин-6-онов.

3.1.4. Закономерности масс-спектрального распада 2-метилтио-замещенных 8-азапурин-6-онов.

3.2. Синтез 6-замещенных 8-азапуринов.

3.2.1. Синтез 6-хлор-8-азапуринов.

3.2.2. Синтез 6-аминозамещенных 8-азапуринов.

3.2.3. Проблема изомерии 6-аминозамещенных 8-азапуринов.

3.2.4. Синтез 6-оксипроизводных 8-азапуринов.

3.2.5. Синтез 6-тиопроизводных 8-азапуринов.

3.2.6. ЫН-8Н таутомерия 8-азапурин-6-тиона.

3.2.7. Синтез 6-карбозамещенных 8-азапуринов.

3.2.8. Установление структуры 6-С-замещенных 8-азапуринов.

3.2.9. Изомерия 6-С-замещенных 8-азапуринов илиденового типа.

3.3. Синтез аннелированных трициклических структур на основе 8-азапурина.

3.3.1. Синтез 5-замещенных 1//-тетразолов.

3.3.2. Синтез ЗН-[ 1,2,3]триазоло[4,5-е][ 1,2,4]триазоло[3,4-с]пирими-динов.

3.3.3. Синтез ЗН-[ 1,2,3]триазоло[5,4-е][ 1,2,4]триазоло[ 1,5-с]пирими-динов.

3.3.4. Восстановление производных 8-азапурина.

3.4. Биологические свойства 8-азапуринов.

3.4.1. Этапы биотестирования соединений. Виртуальный скрининг.

3.4.1.1. Применение методов компьютерного моделирования для виртуального скрининга.

3.4.1.2. Создание виртуальной библиотеки соединений с использованием дескрипторов.

3.4.1.3. 8-Азапурины - потенциальные ингибиторы киназ.

3.4.1.4. Потенциальная биологическая активность 8-азапуринов к рецепторам семейства GPCR.

3.4.2. Биологические испытания in vitro.

IV. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

V. ВЫВОДЫ.

Введение диссертация по химии, на тему "Синтез и свойства новых производных 8-азапурина"

Актуальность работы. Настоящее исследование связано с поиском и направленным синтезом новых биологически активных веществ, являющихся азааналогами пуринов — важнейшего класса азотистых оснований. Работа посвящена химии 8-азапурина (3#-1,2,3-триазоло[4,5-£/]-пиримидина), поскольку изоструктурные лекарственные препараты на основе пурина обладают широким спектром биологической активности.

Несмотря на то, что первые синтетические работы появились уже в 50х годах XX века, химия 8-азапурина получила свое второе рождение лишь в конце 80х в работах итальянских ученых с открытием принципиально нового подхода к синтезу системы 8-азапурина исходя из 1,2,3-триазолов. Такой подход позволил модифицировать положения 2 и 9, однако периферия описанных в литературе соединений не выходила за рамки тривиальных заместителей. Биологические исследования 8-азапуринов показывают, что наиболее активными являются соединения, содержащие в положении 9 заместитель бензильного типа, что связано с возможностью их ферментативного расщепления в организме с образованием структур, аналогичных по своему химическому строению аденину, гипоксантину и другим азотистым основаниям. Сообщается, однако, что такие соединения достаточно гидрофобны и имеют низкие показатели растворимости в воде. Сведения о 6-функциональнозамещенных 8-азапуринах крайне отрывочны. Интерес представляет введение в положение 6 8-азапурина различных фармакофорных заместителей, а также синтез 6-С-замещенных 8-азапуринов, пуриновые аналоги которых проявляют противоопухолевую и противовирусную активность. Более того, такие соединения интересны как биологические зонды для установления механизма взаимодействия с ферментами. Особый интерес представляет собой синтез аннелированных трициклических структур на основе 8-азапурина, единичные представители которых проявляют чрезвычайно высокую биологическую активность в качестве ингибиторов А) и Аг подтипов аденозиновых рецепторов и обладают противоаллергическими свойствами. Совокупность этих обстоятельств делает актуальной проблему систематического подхода к синтезу разнообразных производных 8-азапурина, содержащих в положении 9 заместитель бензильного типа, в положении 2 - заместитель алкильного типа, в положении 6 - связь С(6)-элемент (С, И, О, 8), как потенциально активных соединений.

Цель работы. Целью диссертационного исследования является:

1. Создание обширной группы соединений, включающей:

- синтез новых трицикпических соединений на основе 8-азапурина.

2. Установление детального строения всех новых веществ.

3. Оценка биологической активности новых производных 8-азапурина с помощью виртуального и реального биологического скрининга.

Научная новизна и практическая ценность. Разработан удобный подход к синтезу потенциально биологически активных производных 8-азапурина, содержащих в положении 9 заместитель бензильного типа, в положении 6 — связь С(6)-элемент (С, И, О, Б). В качестве исходных веществ использованы простые и доступные бензилгалогениды, цианацетамид и эфиры карбоновых кислот.

Изучены пути распада молекул 8-азапурин-6-онов под действием электронного удара. Установлены общие закономерности распада, на основе которых предположены наиболее вероятные пути метаболизма соединений такого типа в живом организме.

Предложен новый способ синтеза трициклических структур на основе 8-азапурина, основанный на взаимодействии 5-арил и 5-гетарил 1 //-тетра-золов с 6-хлор-8-азапуринами, и проведено изучение устойчивости таких систем по отношению к различным восстановителям.

Всесторонне изучена структура всех соединений с использованием современных физико-химических методов, установлено их геометрическое строение. Показано, что 6-оксо и 6-тиозамещенные 8-азапурины находятся в амидной (тиоамидной) форме, 6-карбозамещенные 8-азапурины — в илиденовой.

Структура диссертационной работы. Представленная диссертация написана в традиционном ключе и включает следующие разделы: введение, литературный обзор, обсуждение результатов, экспериментальную часть, выводы, список литературы и приложение.

Заключение диссертации по теме "Биоорганическая химия"

V. выводы.

3. Впервые предложен способ синтеза новых трициклических систем - 3Н-[ 1,2,3]триазоло[4,5-е][ 1,2,4]-триазоло[3,4-с]пиримидинов и ЗН-[ 1,2,3]-триа-золо[5,4-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидинов, основанный на взаимодействии арил- и гетарил- тетразолов с 6-хлор-8-азапуринами, изучена их устойчивость к действию восстановителей. Показано, что реакция с дибораном приводит к разрушению пиримидинового фрагмента и образованию не известных ранее производных TV-алкил-5-амино-1,2,3-триазола.

4. Впервые синтезирован обширный ряд новых замещенных 8-азапуринов, содержащих в положениях 2, 6 и 9 различные фармакофорные заместители. С помощью компьютерных расчетов показано, что большинство соединений удовлетворяют правилам Липински, являющихся критерием отбора лекарственноподобных веществ.

5. Проведен виртуальный скрининг всех синтезированных соединений по схеме LBD (Ligand-Based Design) и TBD (Target-Based Design). Выявлена потенциальная активность ряда соединений по отношению к различным подтипам аденозиновых, серотониновых и дофаминовых рецепторов, а также по отношению к тирозиновым и серин-треониновым типам киназ.

Список источников диссертации и автореферата по химии, кандидата химических наук, Адамов, Андрей Владимирович, Москва

1. Dille K.L., Sutherland M.L., Christensen B.E. Purines. V. The preparation of certain 2,9-substituted purines and 8-azapurines. // J. Amer. Chem. Soc. -1954. -V.35. -N.4. -p.l 131-1137.

2. Albert A. i;-Triazolo4,5-i/.pyrimidines (8-azapurines). Part 4. Synthesis of 2-amino- and 2-oxo-derivatives from the corresponding 4-amino-5-cyano--1,2,3-triazoles. // Chem. Soc. Perkin Trans.l. -1972. -p.449-454 .

3. Barili P. L., Biagi G., Livi O., Mucci L., Scartoni V. "One pot" synthesis of 2,9-disubstituted 8-azaadenines (3,5-disubstituted 7-amino-3//- 1,2,3-triazolo-4,5-d. pyrimidines). // J. Heterocyclic Chem. -1987. -V.24. -p.997-1001.

4. Титце Jl., Айхер Т. Препаративная органическая химия. M.: Мир. -1999. -393с.

5. Blank H. U., Wempen I., Fox G. G. Pyrimidines. IX. A new synthesis of 8-azapurines and v-triazolo4,5-i/.pyrimidines. // J. Amer. Chem. Soc. -1970. -V.12. -N.2. -p.451-457.

6. London G.M., Jacob J. The nucleophilic substitution in pyrimidines. New routes of 8-azapurine synthesis. // J. Heterocyclic Chem. -1978. -V.31. -p.l 145-1146.

7. Bolhofer W. A., Sheehan J. C. An improved procedure for the 8-azapurine synthesis//J. Am. Chem. Soc. -1995. -V.56. -p.2786-2789.

8. Henry G.N., Lauren W.A. Some 5-aryldiazo- pyrimidines sulfides. // J. Am. Chem. Soc. -1982. -V.67. -p. 1844-1848.

9. Vita G., Burcher G. A new synthetic route of 4,5-diamino- 2,6-disubstituted pyrimidines cyclization //J. Heterocyclic Chem. -1974. -V.14. -p.585-588.

10. Синтезы гетероциклических соединений. Ереван: Изд-во АН АрмССР. -1979.-T.ll.-c.37.

11. Hutzenlaub W., Pfleiderer W. Liebigs. Ann. Chem. -1979. -p. 1847.

12. Рубцов M.B., Байчиков А.Г. Синтетические химико-фармацевтические препараты. М.: Медицина. -1971. -328 с.

13. Пожарский А.Ф., Анисимова В.А., Цупак Е.Б. Практические работы по химии гетероциклов. Ростов-на-Дону: Изд-во Рост. Ун-та. -1988. -158 с.

14. Parkanyi С., Yuan Н. L. Synthesis of acyclic nucleoside analogs of 6-substituted 2-aminopurines and 2-amino-8-azapurines. // J. Heterocyclic Chem. -1990.-V.27. -p.1409-1413.

15. Marsura A., Chalon C., Merle D., Marzin D. J.Org.Chem. -1991. -V.56. -p.2139-2142.

16. Santana L., Teijeira M., Teran C., Uriarte E., Vina D. Synthesis of 1,2-disubstituted carbocyclic analogs of pyrimidine and purine nucleosides. // Synthesis. -2001. -V.10. -p.1532-1538.

17. Яхонтов JT.H., Глушков Р.Г. Синтетические лекарственные средства. М.: Медицина. -1983. -272 с.

18. Montgomery J. A., Thomas Н. J., Clayton S. J. A convenient synthesis of 8-azaadenosine. // J. Amer. Chem. Soc. -1970. -V.32. -N.l. -p.215-217.

19. Синтезы органических препаратов. M.: Ин. Лит. -1959. -Т.9. -с.74.

20. Baddiley A. et al. J.Chem.Soc. -1944. -р.318-321.

21. Biffin В., Brown М. Tetrahedron Lett. -1968. -p.2503.

22. Christophe D., Promel R., Maek M. Tetrahedron Lett. -1978. -p.4435-4437.

23. Tielemans M., Christophe D., Promel R. Synthesis of 1- and 3-amino-5-/-butil--1H- and 3#-v-triazolo4,5-i/.pyrimidine as hetaryne precursors. // J. Heterocyclic Chem. -1987. -V.24. -p.705-708.

24. Fleet G.W., Fleming J. J. Chem. Soc. (C). -1969. -p.1758-1762.

25. Higashino Т., Katori Т., Yoshida S., Hayashi E. Triazolo4,5-i/.pyrimidines. VI. 3-Phenyl-3#-1,2,3-triazolo[4,5-d]pyrimidine-7-carbonitrile and related compounds. // Chem. Pharm. Bull. -1980. -V.28. -N.l. -p.255-261.

26. Morinaka Y., Nishi H., Watanabe Т., Yuki S. New 8-azapurine derivatives. / Патент США. -1998. -N.4990619.

27. Jilchrist T.L. Heterocyclic chemistry. Third edition. Лондон: Изд-во Addison Wesley Longman Limited. -1997. -p.97.

28. Noritaka O., Murakawa S., Watanabe K., Tsuchimoto D., J.Chem.Soc.Perkin Trans.2. -2000. -V.9. -p.1851-1856.

29. Santana L., Teijeira M., Teran C., Uriarte E., Vina D. Synthesis of 1,2-disubstituted carbocyclic analogs of pyrimidine and purine nucleosides. // Synthesis. -2001. -V.10. -p.1532-1538.

30. Barili P. L., Biagi G., Giorgi I., Livi O., Scartoni V. A method for the synthesis of racemic and optically active 2-substituted 9-(2,3 -dihydroxypropyl)--8-azahypoxanthines and 8-azaadenines. // J. Heterocyclic Chem. -1991. -V.28. -p.1351-1355.

31. Yokoyama M., Nakao E., Sujino K., Watanabe S., Togo H. Synthesis and antiviral activity of 1,2,3-triazole and 8-azapurine derivatives bearing acyclic sugars. //Heterocycles. -1990. -V.31. -N.9. -p. 1669-1685.

32. Реутов О.А., Курц А.Л., Бутин К.П. Органическая химия. Т.2. учебник. М.: Изд-во МГУ. -1999. -627 с.

33. Honzl I., Rudinger I. Coll. Czech. Chem. Comm. -1961. -V.26. -p.2333.

34. Hoover J.R, Day A.R. J. Am. Chem. Soc. -1958. -V.78. -p.5832.

35. Hoover F. M, Stevenson H.B, Rotrock H.S. Reactions of azides with carbonyl compounds. // J. Org. Chem. -1988. -N.7. -p. 1825-1830.

36. Sznaidman M., Beauchamp L. Regioselective synthesis of 9-substituted-8-azaguanines (5-amino-3-substituted-3,6-dihydro-7//-l,2,3-triazolo4,5-£/.-pyrimidin--7-one). //J. Heterocyclic Chem. -1996. -V.33. -p.1605-1610.

37. Органикум. T.2. M.: Мир. -1979. -c.275.

38. Giorgi I, Livi O, Scartoni V, Senatore G, Barili P. L. J. Heterocyclic Chem. -1997. -V.38. -p.412-416.

39. Betty L, Biagi G, Giannaccini G, Giorgi I, Livi O, Lucacchini, Manera C, Scartoni V. Novel 3-Aralkyl-7-(amino-substituted)-l,2,3-triazolo4,5-£/.-pyrimidines with high affinity toward Ai adenosine receptors. // J. Med. Chem. -1998. -V.41. -p.668-673.

40. Cottrell I.F, Hands D, Houghton P.G, Humphrey G.R, Wright H.B, An improved procedure for the preparation of 1-benzyl-1H-1,2,3-triazoles from benzyl azides. // J. Heterocyclic Chem. -1991. -V.28. -p.301.

41. Littlebrough P.H, Norden A.H. New 3#-v-triazolo4,5-£/.pyrimidine derivatives. //J. Amer. Chem. Soc. -1982. -V.30. -N.l. -p. 1544-1550.

42. Da Settimo A., Livi O., Ferrarini P. L., Primofiore G. Synthesis and pharmacological activity of some 9-aryl-8-azapurine derivatives. // Farmaco. -1979. -V.35. -N.4. -p.298-307.

43. Albert A. v-Triazolo4,5-£/.pyrimidines (8-azapurines). Part 24. The 3-alkyl derivatives. // J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1. -1979. -p.2344-2351.

44. Brown D.J. J. Chem. Soc. -1963. -p. 1276.

45. Hassner A., Stummer C. Tetrahedron organic chemistry series. Organic synthesis based on named reactions and unnamed reactions. Изд-во Pergamon. -1994. -V.ll.-p.96.

46. Korbonits D. J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1. -1986. -p.2163.

47. Kaskhediker S.G., Triredi P., Abolare G.T., Gaud R.S. Synthesis and pharmacological activity of some 9-aryl-8-azapurine derivatives. // J. Heterocyclic Chem. -1978. -V.31. -p. 1145-1146.

48. Sznaidman M.L., Beauchamp L.M. Regioselective synthesis of 9-substituted-8-azaguanines. // J. Heterocyclic Chem. -1996. -V.33. -p.1605-1610.

49. Drayer D.E., Slaver B.H., Reidenberg M.M., Bagwell E.E. J.Org.Chem. -1967. -V.32.-p. 1825-1829.

50. Alhede В., Clausen F.P., Juhl-Christensen J., McCluskey K.K., Preikschat H.F. J. Org. Chem. -1991. -V.56. -p.2139.

51. Tailor E.C., Jacobi P.A. J. Am. Chem. Soc. -1976. -V.98. -p.2301.

52. Hedayatullah M., Roger A. Synthèse de pyrimidines et purines adamantylées par alkylation regioselective directe, en catalyse par transfert de phase. // J. Heterocyclic Chem. -1989. -V.26. -p.1093-1096.

53. Джилкрист Т. Химия гетероциклических соединений. M.: Мир. -1996. -с.310.

54. Da Settimo A., Livi О., Ferrarini P. L., Biagi G. Synthesis and pharmacological activity of three 9-aryl-8-azaadenine derivatives. // Farmaco. -1979. -V.35. -N.4. -p.308-323.

55. Albert A., Taguchi H. J. Chem. Soc. Perkin Trans. 2. -1979. -N.19. -p.2037.

56. Higashino Т., Katori Т., Yoshida S. Chem. Pharm. Bull. -1979. -V.27. -N.12. -p.3176.

57. Scheiner P., Arwin S., Eliacin M., Tu J. J.Heterocycl.Chem. -1985. -V.22. -p.1435-1440.

58. Luu-Dac C., Marsura A., Chalon C., Merle D., Marzin D. Farmaco Ed. Sc. -1985. -V.40. -N.4. -p.253-258.

59. Ортоэфиры в органичесом синтезе. Под ред. Гарновского А.Д. // Изд-во Рост, ун-та. -1976. -с.72-76.

60. Reisher D.B., Cordasco M.G. J. Org. Chem.-1958. -V23. -p. 1403.

61. T.L. Chan, J. Miller. Austr. J. Chem. -1967. -V.20. -p.1595.

62. A. Albert. Adv. Heterocycl. Chem. -1986. -V.39. -p.l 17-180.

63. Европейский патент 215759. Chem. Abstr. -1987. -V.107. -N.233661h.

64. D. Sen, A. Dasgupta, P. Sengupta, Indian J. Chem. -1985. -V.24(B). -N.9. -p.952-958.

65. Higashino Т., Katori Т., Kawaraya H., Hayashi E. Triazolo4,5-d.pyrimidines. V. The nucleophilic substitution of 7-chloro- and 7-(p-Tolylsulfonyl)-3-phenyl-3tf-l,2,3-triazolo[4,5-<]pyrimidines. // Chem. Pharm. Bull. -1980. -V.28. -N.l. -p.33 7-343.

66. Gatta F., Del Giudice M., Borioni A., Borea P., Dionisotti S., Ongini E. Eur. J. Med. Chem. -1993. -V.28. -p.569.

67. Gatta F., Del Giudice M., Borioni A., Mustazza C., Fazio C. Synthesis of 2,8-substituted l,2,4-triazolo5,l-i.purines. // J. Heterocyclic Chem. -1994. -V.31. -p.1171-1176.

68. Baraldi P., Cacciari B., Spalluto G., Pineda M., Zocchi C., Ferrara S., Dionisotti S. l,2,3-Triazolo4,5-<^l,2,4-triazolo[l,5-c.pyrimidine derivatives: a new class of A2a adenosine receptor antagonists. // Farmaco. -1996. -V.51. -N.4. -p.297-300.

69. J.E. Francis, D.A. Bennett, J.L. Hyun, S.L. Rovinski, C.A. Amrick, P.S. Loo, D. Murthy, R.F. Neale, D.E. Wilson. J. Med. Chem. -1991. -V.34. -p.2899.

70. Biagi G., Giorgi I., Livi O., Manera C., Scartoni V. New l,2,3-triazolo4,5-e.--l,2,4-triazolo[4,3-c]pyrimidines. // J. Heterocyclic Chem. -1999. -V.36. -p.1195-1198.

71. Ried H., Laoutidis J. Synthese neuartiger triazoloanellierter 8-Azapurine. // Leibigs Ann. Chem. -1988. -p. 1107-1109.

72. Biagi G., Giorgi I., Livi O., Pacchini F., Scartoni V. New l,2,3-triazolo4,5-e.--l,2,4-triazolo[4,3-c]pyrimidine derivatives II. // J. Heterocyclic Chem. -2002. -V.39. -p.885-888.

73. Asano S., Itano K., Yamagata Y., Kohda K. Nucleosides Nucleotides. -1994. -V.13.-N.6. -p.1453-1466.

74. Sambaiah T., Reddy K. K. Synthesis of 2-aryll,2,4.triazolo[l,5-a]pyrazines. // Indian Journal of Chemistry. -1992. -V.31(B). -p.444-445.

75. Shishoo C., Devani M., Ullas G., Ananthan S., Bhadti V. Studies in the synthesis and interconversion of isomeric triazolothienopyrimidines. // J. Heterocyclic Chem. -1980. -V.18. -p.43-46.

76. Kamala K., Rao P. J., Reddy K. K. Synthesis of 2-aryll,2,4.triazolo[l,5-a]-pyrimidines. // Bull. Chem. Soc. Jpn. -1988. -V.61. -p.3791-3793.

77. Konnecke D., Dorre H., Lipman R. Tetrahedron Lett. -1978. -p.2071-2075.

78. Jayaprasad R.P., Kondal R.K. Indian J.Chem.Sect.B; EN; 22; 1983; 117-120.

79. Гапоник П.Н. N-замещенные тетразолы, синтез, свойства, строение и применение. Автореферат на соискание ученой степени доктора химических наук. СПб.: Синтез. -2000. -с.40.

80. Лесникович А.И., Свиридов В.В., Гапоник П.Н., Каравай В.П., Целовальникова Г.М., Дегтярик М.М. Способность соединений с высоким содержанием азота к самораспространяющемуся термолизу. // ДАН БССР. -1986. -Т.29. -N.9. -с.824-827.

81. Suzuki N., Miwa Т., Aibara К., Kanno Н., Takamori Н. Chem. Pharm. Bull. -1992. -V.40. -N.2. -p.357-363.

82. Selected Methods for Synthesis and modification of Heterocycles. ed. by Kartsev V.G. -2003. -V.l. -p.40-41 in press.

83. Engoyan A.P., Peresleni E.M., Sheinker Y.N. Khim. Geterotsikl. Soedin. -1976. -V.8. -p. 1047.

84. LeMay H. E., Hodgson D. J. Antiaalergic 8-azapurines. Structural characterization of 9-diethylcarbamoyl-2-(2-propoxyphenyl)-8-azahypoxanthine. // J.Am.Chem.Soc. -1975. -V.100. -p.6474-6479.

85. Петренко О.П., Лапачев B.B., Коробейничева И.К., Мамаев В.П. Таутомерия производных азинов. //ХГС. -1987. -Т.12. -с.1668-1672.

86. N. Hamamichi, Т. Miyasaka. Synthesis of of-(aminomethylene)--9-(methoxymethyl)-9// -purine-6-acetic acid derivatives. J. Heterocyclic Chem. -1990. -V.27. -p.2011.

87. N. Hamamichi, T. Miyasaka. 6-C-substituted 9-methoxymethylpurine derivatives. // J. Heterocyclic Chem. -1990. -V.27. -p.835.

88. M.L. Stein, F. Manna, C.C. Lombardi. The reaction of 3-hydroxypyridine N-oxide with active hydrogen compounds. // J. Heterocyclic Chem. -1978. -V.15. -p.1411-1414.

89. Maruoka H., Yamagata K., Yamazaki M. Synthesis of 5,6-dihydrothieno (and furo) pyrimidines bearing an active methane group at the 4-position. // J. Heterocyclic Chem. -2001. -V.38. -p.269-274.

90. Петренко О.П., Лапачев B.B., Мамаев В.П. Таутомерия производных азинов. //ЖОХ. -1988. -Т.24. -с.1793-1799.

91. Bozoova A., Rybar A., Basnakova G. Collect. Czech. Chem. Commun. -1992. -V.57. -p. 1314-1352.

92. Tono-oka S., Azuma I. Enzymathic ADP-ribosylation of benzotriazoles and related triazoles. Difference of glycosidation site between triazoles and indazoles. // J. Heterocyclic Chem. -1989. -V.26. -p.339-343.

93. Montgomery J. A., Thomas H. J. Nucleosides of 8-azapurines (u-triazolo-4,5-d.pyrimidines). // J. Med. Chem. -1972. -V.15. -N.3. -p.305-309.

94. Kawana M., Ivanovich G. A., Rousseau R. J., Robins R. K. Azapurine nucleosides. 3. Synthesis of 7-(/?-D-riboforanosyl)imidazo4,5-6d-f-triazin-4-one (2-azainosine) and related derivatives. // J. Med. Chem. -1972. -V.15. -N.8. -p.841-843.

95. Shealy Y., О Dell C., Shannon W., Arnett G. Synthesis and antiviral activityof carbocyclic analogues of 2 -deoxyribofuranosides of 2-amino-6-substituted purines and of 2-amino-6-substituted 8-azapurines. // J. Med. Chem. -1984. -V.27. -p.1416-1421.

96. Kokel M. J., Vince R. Palladium-catalyzed allylic coupling of 1,2,3-triazolo-4,5-d.pyrimidines (8-azapurines). // J. Org. Chem. -1996. -V. -61. -p.6199-6204.

97. Hutzenlaub W., Tolman R. L., Robins R. K. Azapurine nucleosides.

98. Synthesis and antitumor activity of certain 3-P-ribofuranosyl- and 2-deoxy-D--ribofuranosyl-v-triazolo4,5-i/.pyrimidines. // J. Med. Chem. -1978. -V.8. -N.l. -p.204-212.

99. Vince R., Hua M. Synthesis and anti-HIV activity of carbocyclic * * • «2 ,3 -didehydro-2 ,3 -dideoxy 2,6-substituted purine nucleosides. // J. Med. Chem. -1990. -V.33. -p. 17-21.

100. Peterson M. L., Vince R. Synthesis and biological evaluation of carbocyclic analogues of xylofuranosides of 2-amino-6-substituted-purines and 2-amino-6-sub-stituted-8-azapurines. //J. Med. Chem. -1990. -V.33. -p. 1214-1219.

101. Klabunde Т., Hessler G. Drug Design Strategies for targeting G-protein-coupled receptors. // ChemBioChem. -2002. -V.3. -p.928-944.

102. Степанов B.M. Молекулярная биология. Структура и функция белков. М.: Высш. шк. -1996. -с.283-290.

103. Broughton В. J., Chaplen P., Knowles P., Lunt Е., Marshall S. М., Pain D. L., Wooldridge R. Н. Antiallergic activity of 2-phenyl-8-azapurin-6-ones. // J. Med. Chem. -1975. -V. 18. -N. 11. -p. 1117-1120.

104. Cline S., Hodgson D. Antiallergenic 8-azapurines. 2. Structural Characterization of 2-phenyl-7-methyl-8-azahypoxanthine and 2-phenyl-8-methyl-8-azahypoxanthine. //J.Am.Chem.Soc. -1980. -V.102. -p.6285-6288.

105. Дероум Э. Современные методы ЯМР для химических исследований. // М.: Мир.-1992.-с.161.

106. Казицына JI.A., Куплецкая Н.Б. Применение УФ-, ИК- и ЯМР-спектроскопии в органической химии. //М.: Высш. шк. -1971. -с.246.

107. Terashima К., Shimamura H., Kawase A., Tanaka Y., Uenishi K. Chem.Pharm.Bull. -1995. -V.43. -N.l. -p.166-168.

108. Monaghan S.M., Mantell S.J. Adenine derivatives. / Патент США. 0023457. Chem. Abstr. -1997. -N.20000427.

109. Репинская И.Б., Шварцберг M.C. Избранные методы синтеза органических соединений. Новосибирск: Изд-во Новосиб. Ун-та. -2000. -с.284.

110. Агрономов А.Е., Шабаров Ю.С. Лабораторные работы в органическом практикуме. М.: Химия. -1974.

111. Терентьев П.Б. Масс-спектрометрия в органической химии. М.: Высш. шк.-1979.

112. Заикин В.Г., Варламов A.B., Микая А.И., Простаков Н.С. Основы масс--спектрометрии органических соединений. // М.: МАИК. Наука/Интерпериодика. -2001.

113. Карасек Ф. Клемент Р. Введение в хромато-масс-спектрометрию. М.: Мир.-1993.

114. Реутов O.A., Курц А.Л., Бутин К.П. Органическая химия. Т.З. М.: БИНОМ. Лаборатория знаний. -2004. -с.240.

115. Schmitt J., Panouse J.J., Hallot A., Plukket H., Comoy P., Cornu P.J., Bull. Soc. Chim. Fr. -1962. -p. 1846.

116. Zweifel G., Brown H.C. J. Am. Chem. Soc. -1964. -V.86. -p.393.

117. Balakin K.V., Tkachenko S.E., Lang S.A., Okun I., Ivashchenko A.A., Savchuk N.P. Property-based design of GPCR-targeted library. // J. Chem. Inf. Comput. Sei. -2002. -V.42. -p.1332-1342.

118. Balakin K.V., Lang S.A., Skorenko A.V., Tkachenko S.E., Ivashchenko A.A., Savchuk N.P. Structure-based versus property-based approaches in the design of GPCR-targeted libraries. //J. Chem. Inf. Comput. Sei. -2003. -V.43. -p.1553-1562.

119. Schuffenhauer A., Floersheim P., Acklin P., Jacoby E. Similarity metrics for ligands reflecting the similarity of the target proteins. // J. Chem. Inf. Comput. Sci. -2003. -V.43. -p.391-405.

120. Lipinski C.A., Lombardo F., Dominy B.W., Feeney P.J. Experimental and computational approaches to estimate solubility and permeability in drug discovery and development settings. // Adv. Drug. Delivery Rev. -1997. -V.23. -p.3-25.

121. Органикум. T.l. M.: Мир. -1979. -c.453.