Синтез иммуноактивных фрагментов белка Asp f 2 из грибка Aspergillus fumigatus и конструирование вирусоподобных частиц для специфической иммунотерапии аллергии тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

Список используемых сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1. Клинико-иммунологические особенности аллергического ответа на Aspergillus fumigatus.

1.1. Плесневый грибок Aspergillus fumigatus.

1.2. Экзогенный аллергический альвеолит.

1.3. Аллергический бронхолёгочный аспергиллёз.

1.4. Другие аллергические заболевания, вызываемые грибком Aspergillus fumigatus.

1.5. Генетический контроль и факторы, определяющие развитие аллергии.

1.6. Мышиная модель аллергии на Aspergillus fumigatus.

2. Процессинг и презентация антигена.

2.1. Презентация пептидов молекулами ГКГС I класса.

2.2. Презентация антигенных пептидов молекулами ГКГС II класса.

2.3. Профессиональные антиген-представляющие клетки.

2.4. Структура молекул ГКГС.

2.5. Полиморфизм ГКГС.

2.6. Распознавание антигена Т-клетками и их активация.

2.7. Дифференцировка Т-хелперов.

2.8. Эффекторные механизмы антигенспецифичного иммунного ответа.

2.8.1. Ответ на внеклеточный патоген и растворимые белки.

2.8.2. Ответ на патогены, персиститующие в цитоплазме клеток-хозяина.

2.8.3. Ответ на патогены, персистирующие в эндосомах фагоцитирующих клеток.

3. Теоретические методы поиска антигенных детерминант для белков с известной первичной структурой.

3.1. Локализация Т-клеточных эпитопов.

3.2. Локализация В-клеточных эпитопов.

4. Модуляция аллергического иммунного ответа.

4.1. Специфическая иммунотерапии аллергических заболеваний.

4.2. Пептидная иммунотерапия.

Глава 2. Материалы и методы.

1. Животные.

2. Антигены.

3. Выбор пептидов.

4. Синтез пептидов.

5. Вирусоподобные частицы на основе дрожжевого белка pi.

6. Электрофорез в ПААГ.

7. Питательная среда.

8. Получение Т-клеточных гибридом.

9. Локализация Т-клеточных эпитопов.

10. Оценка продукции ИЛ-2.

11. Радиоизотопный метод.

12. Получение дендритных клеток.

13. Связывание синтетических пептидов с молекулами ГКГС Н-2А и Н-2Е.

14. Модуляция иммунного ответа памяти на пептиды из белка Asp f 2, экспрессированные в составе вирусоподобных частиц.

15. Получение клеточных суспензий.

16. Культивирование клеток.

17. Твердофазный иммуноферментный анализ.

18. Определение пероксидазы в эозинофилах.

19. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. Результаты.

1. Определение Т- и В-клеточных эпитопов белка Asp f 2.

1.1. Характеристика белка Asp f 2.

1.2. Выбор пептидов из последовательности Asp f 2 для анализа Т- и В-клеточных эпитопов белка.

1.3. Синтез пептидов.

1.4. Анализ Т-клеточных эпитопов белка Asp f 2.

1.5. Рестрикция молекулами ГКГС класса II иммунного ответа памяти на белок Asp f 2.

1.6. Анализ В-клеточных эпитопов белка Asp f 2.

2. Оценка антигенных свойств доминантных Т- и В-клеточных эпитопов белка Asp f 2, встроенных в вирусоподобные частицы (ВПЧ).

Список используемых сокращений

АБЛА - аллергический бронхолёгочный аспергиллёз АПК - антиген-представляющая клетка БСА - бычий сывороточный альбумин ВПЧ - вирусоподобные частицы

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография ГКГС - главный комплекс гистосовместимости

ГМ-КСФ - гранулоцитарно-макрофатальный колониестимулирующий фактор

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИЛ - интерлейкин

ИС - индекс стимуляции

ИФА - иммуноферментный анализ

ИФН - интерферон

НАФ - неполный адъювант Фрейнда

ПААГ - полиакриламидный гель

ПИТ - пептидная иммунотерапия

ОП - оптическая плотность

СИТ - специфическая иммунотерапия

СО - стандартное отклонение

СОЭ - фактор осаждения эритроцитов

ТКР - Т-клеточный рецептор

Тх - Т-хелпер

ФИТЦ - флуоресцеинтиоизоцианат ФИО - фактор некроза опухоли ФЭ - фикоэритрин

ЭАА - экзогенный аллергический альвеолит Аса - в-аминокапроновая кислота APL - изменённые пептидные лиганды Вое - язреот-бутилоксикарбонил Bul - трет-бутил

CLIP - фрагмент инвариантной цепи, связанный с молекулой ГКГС класса II DIC - диизопропилкарбодиимид

Fmoc - фруоренилметилоксикарбонил HAT - гипоксантин, аминоптерин, тимидин Hel - лизоцим

HOBt - N-гидроксибензотриазол НТ - гипоксантин, тимидин Ig - иммуноглобулин Ii - инвариантная цепь

MALDI-TOF - времяпролётная масс-спектрометрия с использованием ионизации в процессе лазерной десорбции, облегчаемой матрицей Mtr - 4-метокси-2,3,6-триметилбензол-сульфонил Ova - овальбумин

РАМ - 4-гидроксиметилфенилацетамидометил

РАМР - связанные с патогеном молекулярные структуры

Pbf- 2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил

PBS - физиологический фосфатный буфер

ТАР - транспортёр, связанный с процессингом антигена

TBTU - 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония тетрафторборат

Trt - тритил

Актуальность проблемы. Аллергические заболевания являются результатом хронической активации иммунной системы, индуцированной белками, проникающими через мембранный барьер эпителия и слизистых оболочек. Эти в большинстве случаев безвредные белки представляются антиген-представляющими клетками (АПК) CD4+ Т-лимфоцитам, которые индуцируют гуморальный иммунный ответ, приводящий в конечном итоге к продукции IgE у генетически предрасположенных индивидуумов. Повторный контакт с антигеном ведёт к распознаванию дополнительных белков из комплексных аллергенов, таких как повсеместно распространённый грибок Aspergillus fumigatus, и заболевание постепенно прогрессирует, приводя к развитию бронхиальной астмы, аллергическому пневмониту и аллергическому бронхолёгочному аспергиллёзу (АБЛА).

Успешные подходы к лечению аллергии включают хорошо известную специфическую иммунотерапию (СИТ) экстрактами аллергенов и её современный вариант - пептидную иммунотерапию (ПИТ) с использованием доминатных фрагментов основных белков аллергенов. Считается, что указанные терапевтические методы снижают специфический иммунный ответ путём индукции периферической толерантности у CD4+ Т-клеток. СИТ включает серию подкожных инъекций с постепенно увеличивающимися дозами аллергенов до достижения дозы, обеспечивающей эффективный результат. Недостатками СИТ являются её низкая эффективность, длительный период лечения и побочные эффекты - местные и общие аллергические реакции вплоть до анафилактического шока. ПИТ в этом смысле более безопасна, поскольку используемые для лечения короткие линейные пептиды из аллергенов представляют собой Т-эпитопы белков и, как правило, не вызывают анафилаксии. Было показано, что ПИТ эффективна при лечении аллергии к пчелиному яду, пыльце берёзы и шерсти кошек. Для лечения аллергических заболеваний, вызванных сенсибилизацией на белки грибка Aspergillus fumigatus, СИТ никогда не применялась, что связано как с отсутствием стандартизованных экстрактов, так и с потенциально высокой опасностью для жизни побочных эффектов при лечении астмы и бронхолегочного аспергиллеза. Получение рекомбинантных белков, являющихся основными аллергенами Aspergillus fumigatus, или иммуногенных конструкций на основе их доминантных Т- и В-клеточных эпитопов позволит получить стандартизованные препараты для СИТ этих заболеваний и провести детальные исследования

Цели и задачи работы. Настоящая работа посвящена выявлению с помощью синтетических пептидов Т- и В-клеточных эпитопов белка Asp f 2, входящего в состав аллергического комплекса грибка Aspergillus fumigatus, с целью создания иммуногенных конструкций для безопасной иммунотерапии аллергических заболеваний, вызываемых данным патогеном. При этом были поставлены следующие задачи:

1. Предсказать на основе теоретических методов анализа потенциальные Т- и В-клеточные эпитопы белка Asp f 2 и синтезировать соответствующие им пептиды.

2. С использованием синтетических пептидов определить доминантные Т-клеточные эпитопы белка Asp f 2, рестрицированные молекулами ГКГС II класса.

3. С использованием синтетических пептидов выявить линейные В-клеточные эпитопы белка Asp f 2.

4. Определить, распознаются ли пептиды, представляющие доминантные Т-клеточные эпитопы белка Asp f 2 и экспрессированные в составе вирусоподобных частиц (ВПЧ), Т- и В-клетками мышей, иммунизированных белком Asp f 2.

5. Изучить возможность модуляции аллергического иммунного ответа на грибок Aspergillus fumigatus доминантными Т-эпитопами белка Asp f 2, встроенными в ВПЧ.

Научная новизна и практическая значимость работы. В настоящей работе впервые определены пептиды, соответствующие В- и Т-клеточным эпитопам белка Asp f 2 из плесневого грибка Aspergillus fumigatus. На мышиной модели с использованием линии BALB/c (гаплотип H-2d) установлена молекула ГКГС II класса, представляющая доминантные Т-эпитопы белка Asp f 2 CD4+ Т-лимфоцитам. Показана возможность использования конструкций на основе вирусоподобных частиц из дрожжевого белка pi со встроенными доминантными Т-эпитопами белка Asp f 2 для снижения иммунного ответа к аллергену Aspergillus fumigatus. Полученные данные являются основой для дальнейшей работы по определению Т-клеточных эпитопов из белков аллергенного комплекса Aspergillus fumigatus в популяции людей, страдающих гиперчувствительностью к данному грибку, и созданию препаратов для безопасной иммунотерапии аллергических заболеваний.

1. Синтезировано 12 пептидных фрагментов белка Asp f 2, выбранных на основе теоретических методов предсказания Т- и В-клеточных эпитопов белка.2. С помощью синтетических пептидов проведено Т-эпитопное картирование белка Asp f 2. Установлено, что пептид Asp f 2 235-249 содержит доминантный Т-клеточный эпигон, а пептиды 47-58 и 60-71 -

субдоминантные Т-клеточные эпитопы; иммунный ответ на эти пептиды рестрицирован Н-2А''-молекулой ГКГС II класса.3. С помощью синтетических пептидов проведено В-эпитопное картирование белка Asp f 2. Установлено, что пептиды 140-154 и 254-268 содержат линейные В-эпитопы белка Asp f 2.4. На основе выявленных доминантных Т- и В-клеточных эпитопов белка Asp f 2 получены вирусоподобные частицы. Показано, что пептиды 60-71 и 235-

249, экспрессированные в составе вирусоподобной частицы, распознаются специфичными к Asp f 2 Т-клетками, но не IgG и IgE антителами.5. Показано, что рекомбинантные пептиды 60-71 и 235-249, представляющие Т-клеточные эпитопы белка Asp f 2 и встроенные в вирусоподобные частицы, оказывают антиаллергическое действие, снижая активацию Т клеток и продукцию IgE антител к аллергену Aspergillus fumigatus.

1. Авдеева О.А., Авдеев С.Н., Чучалин А.Г., Экзогенный аллергический альвеолит, Российский медицинский журнал. Спец. выпуск: Пульмонология, 1997,5, 17, 1121-1129

2. Кулешов А.В., Чучалин А.Г., Аллергический бронхолёгочный аспергиллёз, Российский медицинский журнал, Спец. выпуск: Пульмонология, 1997, 5, 17, 1131-1135

3. Kurup V.P., Kumar A., Immunodiagnosis of aspergillosis, Clin. Microbiol. Rev., 1991, 4, 439-456

4. Greenberger P.A., Allergic bronchopulmonary aspergillosis and fungoses, Clin. Chest Med., 1988, 9, 599-609

5. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д., Иммунология, Москва, «Мир», 2000

6. Huang S., Zwollo P., March D.G., Class II major histocompatibility complex restriction of human T-cell responses to short ragweed allergen, Amb a V, Eur. J. Immunol., 1991,21, 1469-1473

7. Holt P.G., Sly P.D., Bjorksten В., Atopic versus infectious diseases in childhood: a question of balance?, Pediatr. Allergy Immunol., 1997, 8, 2, 53-8

8. Parronchi P., Brugnolo F., Sampognaro S., Maggi E., Genetic and environmental factors contributing to the onset of allergic disorders, Int. Arch. Allergy Immunol., 2000, 121, 2-9

9. Kurup V.P., Choi H., Murali P.S., Coffman R.L., IgE and eosinophil regulation in a murine model of allergic aspergillosis, J. Leukoc. Biol, 1994, 56, 593-598

10. Kurup V.P., Mauze S., Choi H., Seymour B.V.P., Coffman R.L., A murine model of allergic bronchopulmonary aspergillosis with elevated eosinophils and IgE, J. Immunol., 1992, 148, 12, 3783-3788

11. Murali P.S., Kumar A., Choi H., Bansal N.K., Fink J.N., Kurup V.P., Aspergillus fumigatus antigen induced eosiniphilia in mice is abrogated by anti-IL-5 antibodies, J. Leukoc. Biol., 1993, 53, 264-267

12. Murali P.S., Kurup Y.P., Guo J., Fink J.N., Development of bone marrow eosiniphilia in mice induced by Aspergillus fumigatus antigen, Clin. Immunol. Immunopathol., 1997, 84, 2, 216-220

13. Murali P.S., Bamrah B.S., Choi H., Fink J.N., Kurup V.P., Hyperimmune serum modulates allergic response to spores in a murine model of allergic aspergillosis, J. Leukoc. Biol., 1994, 55, 29-34

14. Coux О., Tanaka K., Goldberg A.L., Structure and functions of the 20S and 26S proteasomes, Annu. Rev. Biochem, 1996, 65, 801-847

15. Djaballah H., Antigen processing by proteasomes: insights into the molecular basis of cripticity, Mol. Biol. Rep., 1997, 24, 63-67

16. Momburg F., Neefjes J.J., Hammerling G.J., Peptide selection by MHC-encoded Tap transporters, Curr. Opin. Immunol., 1994, 6, 32-37

17. Srivastava P.K., Udono H., Blachere N.E., Li Z.H., Heat-shock proteins transfer peptides during antigen-processing and CTL priming, Immunogenetics, 1994, 39, 93-98

18. Maier R., Falk K., Rotzschke O., Maier В., Gnau V., Stevanovic S., Jung G., Rammensee H.-G., Meyerhans A., Peptide motifs of HLA-A3, -A24, and -B7 molecules as determined by pool sequencing, Immunogenetics, 1994, 40, 306-308

19. Momburg F., Roelse J., Howard J.C., Butcher G.W., Hammerling G.J., Neefjes J.J., Selectivity of MHC-encoded peptide transporters from human, mouse and rat, Nature, 1994, 367, 648-51

20. Suh W.K., Cohendoyle M.F., Friih K., Wang K., Peterson P.A., Williams D.B., Interaction of MHC class I molecules with the transporter associated with antigen processing, Science, 1994, 264, 1322-1326

21. Jackson M.R., Cohendoyle M.F., Petrson P.A., Williams D.B., Regulation of MHC class I transport by the molecular chaperone, calnexin (P88, IP90), Science, 1994, 263,384-387

22. Wu S., Gorski J., The MHC class Il-associated invariant chain-derived peptide clip binds to the peptide-binding groove of class II molecules, Mol. Immunol., 1996,33,4-5,371-377

23. Mosyak L., Zaller D.M., Wiley D.C., The structure of HLA-DM, the peptide exchange catalyst that loads antigen onto class II MHC molecules during antigen presentation, Immunity, 1998, 9, 377-383

24. Harding C., Class II antigen processing: analysis of compartments and functions, Crit. Rev. Immunol., 1996, 16, 13-29

25. Castellino F., Germain R.N., Extensive trafficking of MHC class II-invariant chain complexes in the endocytic pathway and appearance of peptide-loaded class II in multiple compartments, Immunity, 1995, 2, 73-88

26. McCoy K.L., Page M.S., Merkel B.J., Inman J.K., Stutzman R., Differences among various lineages of antigen-presenting cells in processing exogenousantigen internalized through transferrin receptors, J. Immunol., 1993, 151, 67576768

27. Griffin J.P., Chu R., Harding C.V., Early endosomes and a late endocytic compartment generate different peptide-class II MHC complexes via distinct processing mechanisms, J. Immunol., 1997, 158, 1523-1532

28. Mouritsen S., Meldal M., Werdelin O., Hansen A.S., Buus S., MHC molecules protect T cell epitopes against proteolytic destruction, J. Immunol., 1992, 149, 1987-1993

29. Sercarz E.E., Lehmann P.V., Ametani A., Benichou G., Miller A., Moudgil K., Dominance and crypticity of T cell antigenic determinants, Annu. Rev. Immunol., 1993, 11, 729-766

30. Pinet V., Malnati M.S., Long E.O., Two processing pathways for the MHC class II-restricted presentation of exogenous influenza virus antigen, J. Immunol., 1994, 152, 4852-4860

31. Rock K.L., Rothstein L., Gamble S., Fleischacker C., Characterization of antigen-presenting cells that present exogenous antigens in association with class I MHC molecules, J. Immunol., 1993, 150, 438-446

32. Brodsky F.M., Guagliardi L., The cell biology of antigen processing and presentation, Annu. Rev. Immunol., 1991, 9, 707-44

33. Vidard L., Rock K.L., Benacerraf В., Heterogeneity in antigen processing by different types of antigen-presenting cells. Effect of cell culture on antigen processing ability, J. Immunol., 1992, 149, 1905-1911

34. Barbey C., Watts C., Corradin G., Antigen-processing organelles from DRBP1101 and DRB1*1104 В cell lines display a differential degradation activity, Eur. J. Immunol., 1995,25,30-36

35. Siegrist C.A., Martinez-Soria E., Kern I., Mach В., A novel antigen-processing-defective phenotype in major histocompatibility complex class Il-positive CIITA transfectants is corrected by interferon-gamma, J. Exp. Med., 1995, 182, 17931799

36. Watts C., Capture and processing of exogenous antigens for presentation on MHC molecules, Annu. Rev. Immunol., 1997, 15, 821-850

37. Stern L.J., Wiley D.C., Antigenic peptide binding by class I and class II histocompatibility proteins, Structure, 1994, 2, 245-251

38. Stern L.J., Brown J.H., Jardetzky T.S., Gorga J.C., Urban R.G., Strominger J.L., Wiley D.C., Crystal structure of the human class II MHC protein HLA-DR1 complexed with an influenza virus peptide, Nature, 1994, 368, 215-221

39. Brown J.H., Jardetzky T.S., Gorga J.C., Stern L.J., Urban R.G., Strominger J.L., Wiley D.C., Three-dimensional structure of the human class II histocompatibility antigen HLA-DR1, Nature, 1993, 364, 33-39 .

40. Rammensee H.-G., Friede Т., Stevanovic S., MHC ligands and peptide motifs: first listing, Immunogenetics, 1995, 41, 178-228

41. Grewal I.S., Flavell R.A., CD40 and CD 154 in cell-mediated immunity, Annu. Rev. Immunol., 1998, 16, 111-135

42. Dong C., Juedes A.E., Temann U.A., Shresta S., Allison J.P., Ruddle N.H., Flavell R.A., ICOS co-stimulatory receptor is essential for T-cell activation and function, Nature, 2001, 409, 97-101

43. Abbas A.K., Murphy K.M., Sher A., Functional diversity of helper T lymphocytes, Nature, 1996, 383, 787-793

44. Nakamura Т., Lee R„ Nam S., Podack E., Bottomly K., Flavell R., Roles of IL-4 and IFN-gamma in stabilizing the T helper cell type 1 and 2 phenotype, J. Immunol., 1997, 158, 6, 2648-53.

45. Annunziato F., Galli G., Cosmi L., Romagnani P., Manetti R., Heusser C., Maggi E., Romagnani S., Molecules associated with human Thl and Th2 cells, Eur. Cytokine Netw., 1998, 9 (3 Suppl), 12-6

46. Liew F., Millott S., Schmidt J., A repetitive peptide of Leishmania can activate T helper type 2 cells and enhance disease progression, J. Exp. Med., 1990, 172, 1359-1365

47. Murray J., Ferrandis-Edwards D., Wolfe C., Schount Т., Major histocompatibility complex regulation of T helper functions mapped to a peptide С terminus that controls ligand density, Eur. J. Immunol., 1994, 24, 2337-2344

48. Pffeifer C., Stein J., Southwood S., Ketelaar H., Sette A., Bottomly K., Altered peptide ligands can control CD4 T lymphocyte differentiation in vivo, J. Exp. Med., 1995,181, 1569-1574

49. Sloan-Lancaster J., Allen P., Altered peptide ligand-induced partial T-cell activation: molecular mechanisms and role in T-cell biology, Annu. Rev. Immunol., 1996, 14, 1-27

50. Brunner M., Larsen S., Sette A., Mitchison A., Altered Thl/Th2 balance associated with the immunosuppressive/protective effect of the H-2Ab allele on the response to allo-4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase, Eur. J. Immunol., 1995, 25, 3285-3289

51. Milich D., Peterson D., Schodel F., Jones J., Hughes J., Preferential recognition of hepatitis В nucleocapsid antigens by Thl and Th2 cells is epitope and major histocompatibility complex dependent, J. Virol., 1995, 69, 5, 2776-2785

52. Herhandez-Pando R., Pavon L., Arriaga K., Orozco H., Madrid-Marina V., Rook G., Pathogenesis of tuberculosis in mice exposed to low and high doses of anenvironmental mycobacterial saprophyte before infection, Infect. Immun., 1997, 65,3317-3327

53. Lagrange P., Mackaness G., Miller Т., Influence of dose and route of antigen injections on the immunological induction of T cells, J. Exp. Med., 1974, 139, 528-542

54. Rook G.A., Hernandez-Pando R., Lightman S.L., Hormones, peripherally activated prohormones and regulation of the Thl/Th2 balance, Immunol. Today, 1994,15,7,301-3

55. Trinchieri G., Interleukin-12 and its role in the generation of ThI cells, Immunol. Today, 1993, 14,335-338

56. DeLisi C., Berzofsky J., T-cell antigenic sites tend to be amphipathic structures, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A, 1985, 82, 7048-7052

57. Berzovsky J.A., Features of T-cell recognition and antigen structure useful in the desing of vaccines to elicit T-cell immunity, Vaccine, 1988, 6, 89-93

58. Margalit H., Spouge J.L., Cornette J.L., Cease K.B., DeLisi C., Berzofsky J.A., Prediction of immunodominant helper T cell antigenic sites from the primary sequence, J. Immunol., 1987,138,2213-2229

59. Rothbard J.B., Taylor W.R., A sequence pattern common to T cell epitopes, EMBO J, 1988, 7, 93-100

60. Fremont D.H., Matsamura M., Stura.E.A., Peterson P.A., Wilson I.A., Crystal structures of two viral peptides in complex with murine MHC class I H-2Kb, Science, 1992,257,919-927

61. Rammensee H.G., Bachmann J., Emmerich N.P.N., Bachor O.A., Stevanovic S., SYFPEITHI: database for MHC ligands and peptide motifs, Immunogenetics, 1999, 50,213-219

62. Roberts C.G.P., Meister G.E., Jesdale B.M., Lieberman J., Berzofsky J.A., De Groot A.S., Prediction of HIV peptide epitopes by a novel algorithm, AIDS Res. Hum. Retroviruses, 1996, 12, 593-610

63. Parker K.C., Bednarek M.A., Coligan J.E., Scheme for ranking potential HLA-A2 binding peptides based on independent binding peptide side-chains, J. Immunol., 1994, 152, 163-175

64. Davenport M.P., Ho Shon I.A.P., Hill A.V.S., An empirical method for the prediction of T-cell epitopes, Immunogenetics, 1995, 42, 392-397

65. Devereux J., Haeberli P., Smithies O.A., A comprehensive set of sequence analysis programs for the VAX, Nucleic acids Res., 1984, 12, 387-395

66. Hammer G.E., Bono E., Gallazzi F., Belunis C., Nagy Z., Sinigaglia F., Precise prediction of major histocompatibility complex class Ii-peptide interaction based on peptide side chain scanning, J. Exp. Med., 1994, 180, 2353, 23-58

67. Rotzschke O., Falk K., Origin, structure and motifs of naturally processed MHC class II ligands, Curr. Opin. Immunol., 1994, 6, 45-51

68. Gulukota K., Sidney J., Sette A., DeLisi C., Two complementary methods for predicting peptides binding major histocompatibility complex molecules, J. Mol. Biol., 1997,267, 1258-1267

69. Brusic V., Rudy G., Honeyman M., Hammer J., Harrison 1., Prediction of MHC class Il-binding peptides using an evolutionary algorithm and artificial neural network, Bioinformatics, 1998, 14, 2, 121-130

70. Adams H.P., Koziol J.A., Prediction of binding to MHC class I molecules, J. Immunol. Methods, 1995, 185, 181-190

71. SelaM., Antigenicity: some molecular aspects, Science, 1969, 166, 1365-1374

72. Lerner R., Tapping the immunological repertoire to produce antibodies of predetermined specificity, Nature, 1982, 299, 593-596

73. Щулыд Г., Ширмер P., Принципы структурной организации белков, Москва, «Мир», 1982

74. Норр Т., Woods К., Prediction of protein antigenic determinants from amino acid sequences, Proc. Natl. Acad. Sci.U.S.A. 1981, 78, 3824-3828

75. Welling G., Weijer W., Zee R., Welling-Wester S., Prediction of sequential antigenic regions in proteins, FEBS Lett., 1985, 188, 215-218

76. Karplus P., Schulz G., Naturwissenscaften, 1985, 72, 212-213

77. Janin J., Wodak S., Levitt M., Maigret В., Conformation of amino acid side-chains in proteins, J. Mol. Biol., 1978, 125, 357-386

78. Норр Т., Prediction of protein surfaces and interaction sites from amino acid sequences, Synthetic Peptides in Biology and Medicine, Eds K.Alitalo, P.Partanen, A.Vaheri, Amsterdam, Elsevier Science Publishers, 1985, 3-11

79. Noon J., Prophilactic inoculation for hay fever, Lancet, 1911, 1, 1572-1573

80. Mailing H.L., Weeke В., Position paper: immunotherapy, Allergy, 1993, 14, Suppl., 9-35

81. Committee on safety on medicines. CSM update: desensitising vaccines, Brit. Med. J., 1986, 293,948

82. Secrist H., Chelen C.J., Wen Y., Marshall J.D., Umetsu D.T., Allergen immunotherapy decreases interleukin 4 production in CD4+ T-cells from allergic individuals, J. Exp. Med., 1993, 178,2123-30

83. Jutel M., Pichler W.J., Skrbic D., Urwyler A., Dahinden C., Miiller U.R., Bee venom immunotherapy results in decrease of IL-4 and IL-5 and increase of IFN-y secretion in specific allergen-stimulated T cell cultures, J. Immunol., 1995, 154, 4187-4194

84. Carballido J.M., Faith A., Carballido-Perrig N., Blaser K., The intensity of T cell receptor engagement determines the cytokine pattern of human allergen-specific T helper cells, Eur. J. Immunol., 1997, 27, 515-521

85. Chen Y., Inobe J.I., Marks R., Gonella P., Kuchroo V.K., Weiner H.L., Peripheral deletion of antigen-reactive T cells in oral tolerance, Nature, 1995, 376, 177-180

86. Beverly В., Kang S.-M., Lenardo M.J., Schwartz R.H., Reversal of in vitro T cell clonal anergy by IL-2 stimulation, Int. Immunol., 1992, 4, 661-671

87. Akdis C.A., Blesken Т., Akdis M., Wuthrich В., Blaser K., Role of interleukin 10 in specific immunotherapy, J. Clin. Invest., 1998, 102, 98-106

88. Lowrey J.L., Savage N.D., Palliser D., Corsin-Jimenez M., Forsyth L.M., Hall G., Lindey S., Stewart G.A., Tan K.A., Hoyne G.F., Lamb J.R., Induction of tolerance via the respiratory mucosa, Int. Arch. Allergy immunol., 1998, 116, 93102

89. Hoyne G.F., Dallman M.J, Lamb J.R., Linked suppression in periferal T cell tolerance to the house dust mite derived allergen Der p 1, Int. Arch. Allergy immunol., 1999, 118, 122-124

90. Zeiler Т., Taivainen A., Rytkonen M., Rautiainen J., Karjalainen H., Mantyjarvi R., Tuomisto L., Virtanen Т., Recombinant allergen fragments as candidate preparations for allergen immunotherapy, J. Allergy Clin. Immunol., 1997, 100, 721-727

91. Chapman M.D., Smith A.M., Vailes L.D., Arruda L.K., Recombinant mite allergens. New technologies for the managment of patiens with asthma, Allergy, 1997,52,374-379

92. Gushchin I.S., Babakhin A.A., Andreev S.M., Wheeler A.W., Stockinger В., Nolte H., Dissociation of histamine releasing activity and T -cell reactivity of allergen conjugated with synthetic polymer, Inflamm. Res., 1997, 46, Suppl. 1, S67-8

93. Saint-Remy J.M.R., Machiels J.J., Allergen-antibody complexes in the treatment of Dermatophagoides pteronyssinus hypersensitivity diseases, Clin. Exp. Allergy, 1994, 124, 1091-1093

94. Holt P.G., A potential vaccine strategy for asthma and allied atopic diseases during early childhood, Lancet, 1994, 344,456-458

95. Hsu C.-H., Chua K.-Y., Tao M.-H, Lai Y.L., Wu H.D., Huang S.K., Hsieh K.H., Immunoprophylaxis of aller'gen- induced immunoglobulin E synthesis and airway hyperresponsiveness in vivo by genetic immunization, Nature Med., 1996, 2, 540-544

96. Haselden B.M., Kay А.В., Larche M., Immunoglobulin-independent major histocompatibility complex-restricted T cell peptide epitope-induced late asthmatic reactions, J. Exp. Med., 1999,189,1885-1894

97. Texier C., Pouvelle-Moratille S., Busson M., Charron D., Menez A., Maillere В., Complementarity and redundancy of the binding specificity of HLA-DRB1, -DRB3, -DRB4 and -DRB5 molecules, Eur. J. Immunol., 2001, 31, 6, 1837-46

98. Ohman J.L., Kendall S., Lowell F.C., IgE antibody to cat allergens in an allergic population, J. Allergy Clin. Immunol., 1977, 60, 317-319

99. Maguire P., Nicodemus N., Robinson D., Aaronson D., Umetsu D.T., The safety and efficacy of ALLERYAX CAT in cat allergic patients, Clin. Immunol., 1999,33,222-231

100. Marcotte G.V., Braun C.M., Norman P.C., Nicodemus C.F., Kagey-Sobotka A., Lichtenstein L.M., Essayan D.M., Effects of peptide therapy on ex vivo T-cell responses, J. Allergy Clin. Immunol., 1998, 101, 506-513

101. Simons F.E., Imada M., Li Y., Watson W.T, Hay-Glass K.T., Fed d 1 peptides: effects on skin tests and cytokine synthesis in cat-allergic human subjects, Int. Immunol., 1996, 8, 1937-1945

102. Oldfield W.L.G., Shirley K.E., Haselden B.M., Larche M., Kay A.B., Attenuation of late cutaneous reactions and asthmatic reactions following administration of short allergen-derived T cell peptide epitopes, J. Allergy Clin. Immunol., 2000, 104, All 11

103. Oldfield W.L.G., Larche M., Kay A.B., Effect of T-cell peptides derived from Fed d 1 on allergic reactions and cytokine production in patients sensitive to cats: a randomised controlled trial, Lancet, 2002, 360, 47-53

104. Tsitoura D.C., Verhoef A., Gelder G.M., O'Herih R.E., Lamb J.R., Altered T cell ligands derived from a major house dust mite. allergen enhance IFN-y production by human CD4+ T cells, J. Immunol., 1996, 157, 2160-2165

105. Menendez-Arias L., Rodriguez R., A BASIC microcomputer program for prediction of В and T cell epitopes in proteins, Comput. Appl. Biosci., 1990, 6, 2, 101-105

106. Rammensee H.-G., Antigen presentation recent developments, Int. Arch. Allergy Immunol., 1996, 110, 299-307

107. Perrin D.D., Purification Of Laboratory Chemicals, N.Y., Pergamon Press, 1980, 1-563

108. Sarin V.K., Kent S.B.H., Tam J.P., Merrifield R.B., Quantitative monitoring of solid-phase peptide synthesis by the ninhydrin reaction, Anal. Biochem., 1981,117, 147-157

109. Kaiser E., Bossinger C.D., Colescott R.L., Olsen D.B., Color test for terminal prolyl residues in the solid-phase synthesis of peptides, Anal. Chim. Acta, 1980,118, 149-151

110. Steward J.M., Young J.D., Solid phase peptide synthesis, Pierce Chemical Company, Rockford, IL, 1984

111. Sherman F., Fink G.R., Hicks J.B., Methods in yeast genetics. A laboratory manual, NY, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1983

112. Maniatis Т., Fritsch E.F., Sambrook J., Molecular cloning. A laboratory manual, NY, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1982

113. Cryer D.R., Eccleshall R., Marmur J., Isolation of yeast DNA, D.M.Presckott Methods in Cell Biology, 1975, Y. 12, 39-44

114. Kim J.M., Vanguri S., Boeke J.D., Gabriel A., Voytas D.F., Transposable elements and genome organization: a comprehensive survey of retrotransposonsrevealed by the complete Saccharomyces cerevisiae genome sequence, Genome Research, 1998,8,464-478

115. Burms N.R., Gilmour J.E., Kingsman S.M., Kingsman A.J., Adams S.E., Production and purification of hybrid Ty-VLPs, Mol. Biotechnol., 1994, 1, 2, 137145

116. Current protocol in immunology, Ed. J.E.Coligan, A.M.Kruisbeek, D.H.Margulies, E.M.Shevach and W.Strober, 1998, John Wiley & Sons, Inc., 435 Ninth Street, Brooklyn, N-Y, 11215-4101

117. Udenfriend S., Meienhofer J., The Peptides. Analisys, Synthesis, Biology, London, Acad. Press, 1987, 9, 27-30

118. Dimarchi R.D., Tam J.P., Kent S.B., Merrifield R.B., Weak acid-catalyzed pyrrolidone carboxylic acid formation from glutamine during solid phase peptide synthesis. Minimization by rapid coupling, Int. J. Pept. Protein Res., 1982, 19, 1, 88-93

119. Sette A., Buus S., Colon S.M., Smith J.A., Miles C., Grey H.M., Structural characteristics of an antigen required for its interaction with la and recognition by T cells, Nature, 1987, 328, 395-399

120. Sette A., Adorini L., Appella E., Colon S.M., Miles C., Tanaka S., Ehrhardt C., Doria D., Nagy Z.A., Buus S., Grey H.M., Structural reguirements for the interaction between peptide antigens and I-Ed molecules, J. Immunol., 1989, 143, 3289-3294

121. Faster S., Aversa G., Terr A., Thestrup-Pedersen K., Vries J.E., Yssel H., Peptide-induced anergy in allergen-specific human Th2 cells results in lack of cytokine production and B-cell help for IgE synthesis, J. Immunol., 1995, 155, 4199-4206

122. Gudmundsdottir H., Turka L.A., T cell costimulatory blockade: new therapies for transplantant rejection, J. Am. Soc. Nephrol., 1999, 10, 6, 1356-1365

123. Vrtala S., Akdis C.A., Budak f., Akdis M., Blaser K., Kraft D., Valenta R„ T cell epitope-containing hypoallergenic recombinant fragments of the major birch pollen allergen, Bet v 1, induce blocking antibodies, J. Immunol., 2000, 165, 11, 6653-6659

124. Ball Т., Sperr W.R., Valent P., Lidholm J., Spitzauer S., Ebner C., Kraft D., Valenta R., Induction of antibody responses to new В cell epitopes indicates vaccination character of allergen immunotherapy, Eur. J. Immunol., 1999, 29, 2026-20-36

125. Hoyne G.F., O'Hehir R.E., Wraith D.C., Thomas W.R., Lamb J.R., Inhibition of T-cell and antibody responses to house dust mite allergen by inhalation of the dominant T-cell epitope in naive and sensitized mice, J. Exp. Med., 1993, 178, 5, 1783-1788

126. Spiegelberg H.L., Beck L., Stevenson D.D., Recognition of T-cell epitopes and lymphokine secretion by Rye Crass allergen Lotiurn perenne I specific human T-cell clones, J. Immunol., 1994, 152,4706-4711

127. Carballido J.M., Carballido-Perrig N., Kagi M.K., Meloen R.H., Wuthrich В., Heusser C.H., Blaser K., T-cell epitope specificity in human allergic and nonallergic subjects to bee venom phospholipase A2, J. Immunol., 1993, 150, 8, 1, 3582-3591

128. O'Brien R.M., Thomas W.R., Tait B.D., An immunogenetic analysis of T-cell reactive regions on the major allergen from the house dust mite, Dep p I, with recombinant truncated fragments, J. Allergy Clin. Immunol., 1994, 93, 3, 628-634

129. Perez M., Ishioka G.Y., Walker L.E., Chesnut R.W., cDNA cloning and immunological characterization of the Rye Grass allergen Lol p 1, J. Biol. Chem., 1990, 265, 16210-16215

130. Zhang L., Yang M., Chong P., Moharatra S.S., Multiple B- and T-cell epitopes on a major allergen of Kentucky Bluegrass pollen,. Immunology, 1996, 87, 2, 283290

131. Katsuki Т., Shimojo N., Honma K., Tsunoo H., Kohno Y., Niimi H., Establishment and characterization of ovalbumin-specific T-cell lines from patiens with egg allergy, Int. Arch. Allergy Immunol., 1996, 109, 4, 344-351

132. Wierenga E.A., Snoek M., Bos J.D., Jansen H.M., Kapsenberg M.L., Comparison of diversity and function of house dust mite-specific T-lymphocyte clones from atopic and non-atopic donors, Eur. J. Immunol., 1990, 20, 7, 15191526

133. O'Hehir R.E., Eckels D.D., Frew A.J., Kay A.B., Lamb J.R., MHC class II restriction specificity of cloned human T-lymphocytes reactive with Dermatophagoides farinae (house dust mite), Immunology, 1988, 64, 627-631

134. Kumar A., Reddy L.V., Sochanik A., Kurup V.P., Isolation and characterization of a recombinant heat shock protein of Aspergillus fumigatus, J. Allergy Clin. Immunol., 1993, 95,1,1024-1030

135. Kurup V.P., Xia J.Q., Crameri R., Rickaby D.A., Choi H.Y., Fluckiger S„ Blaser K., Dawson C.A., Kelly K.J., Purified recombinant A. fumigatus allergens induce different responses in mice, Clin. Immunol., 2001, 98, 3, 327-36.

136. Kurup V.P., Shen H.D., Banerjee В., Respiratory fungal allergy, Microbes Infect., 2000, 2, 9, 1101-10

137. Kurup Y.P., Banerjee В., Hemmann S., Greenberger P.A., Blaser K., Crameri R., Selected recombinant Aspergillus fumigatus allergens bind specifically to IgE in ABPA, Clin. Exp. Allergy, 2000, 30, 7, 988-993

138. Purkayastha S., Madan Т., Shah A., Krishnamurthy H.G., Sarma P.U., Multifunctional antigens of A. fumigatus and specific antibodies, Appl. Biochem. Biotechnol., 2000, 83, 1-3, 271-283

139. Kapsenberg M.L., Hilkens C.M.U., Wieringa E.A., Kalinski P., The role of the antigen-presenting cells in the regulation of allergen-specific T cell responses, Curr. Opin. Immunol., 1998, 10, 607

140. Nelson H.S., The use of standardized extracts in allergen immunotherapy, J. Allergy Clin. Immunol., 2000,106, 1, Pt. 1, 41-45

141. Park H.S., Nahm D.H., Kim H.Y., Suh Y.J., Cho J.W., Kim S.S., Lee S.K., Jung K.S., Clinical and immunologic changes after allergen immunotherapy with Hop Japanese pollen, Ann. Allergy Asthma Immunol., 2001, 86, 4, 444-448

142. Bahceciler N.N., Isik U., Barlan I.В., Basaran M.M., Efficacy of sublingual immunotherapy in children with asthma and rhinitis: a double-blind, placebo-controlled study, Pediatr. Pulmonol., 2001, 32, 1, 49-55

143. Pajno G.B., Barberio G., De Luca F., Morabito L., Parmiani S., Prevention of new sensitizations in asthmatic children mono sensitized to house dust mite by specific immunotherapy. A six-year follow-up study, Clin. Exp. Allergy, 2001, 31, (9):1392-1397

144. Moverare R., Elfman L., Bjornsson E., Stalenheim G., Cytokine production by peripheral blood mononuclear cells following birch-pollen immunotherapy, Immunol. Lett., 2000, 73, 1, 51-6

145. Keskin G., Inal A., Ali Sari R., Sengul A., Sahin M., Turgay M., Kinikli G., Serum IFN-gamma and IL-10 levels before and after specific immunotherapy in patients with allergic rhinitis, Allergol. Immunopathol. (Madr), 1999, 27, 5, 261-4

146. Latge J.P., Aspergillus fumigatus and aspergillosis,' Clin. Microbiol. Rev., 1999,12,2,310-50