Синтез носителей иммунореагентов на основе полиметилметакрилата и его сополимеров методами радикальной дисперсионной полимеризации тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.06 ВАК РФ

Введение

Глава I. Обзор литературы

1.1. Требования к латексам для биотехнологии

1.2. Основные характеристики латексов как коллоидных дисперсных систем

1.3. Эмульсионная полимеризация как метод получения полимерных микросфер 16 1.3.1 Механизм эмульсионной полимеризации

1.3.2. Безэмульгаторная эмульсионная полимеризация неполярных мономеров

1.3.3. Особенности безэмульгаторной полимеризации полярных мономеров

1.4. Монодисперсные микросферы с поверхностными функциональными группами для связывания биолигандов

1.4.1 Виды поверхностных функциональных групп

1.4.2 Микросферы с карбоксилированной поверхностью

1.4.2.1. Методы синтеза

1.4.2.2. Методы активации карбоксильных групп

1.4.3. Монодисперсные полимерные частицы с альдегидными группами на поверхности

1.5. Полимерные частицы с поверхностью, покрытой полисахаридами

1.6. Применение монодисперсных микросфер в биотехнологии

I.7. Постановка цели исследования

Глава II Объекты и методы исследования

II. 1 Исходные реагенты

II. 1.1. Мономеры

II. 1.2. Прочие реагенты

II.2. Методики синтезов

11.2.1. Получение производных декстрана

11.2.2. Получение микросфер ПММА методом безэмульгаторной эмульсионной полимеризации

11.2.3. Получение микросфер на основе сополимера Поли(ММА/акролеина) методом безэмульгаторной эмульсионной сополимеризации

11.2.4. Очистка латексов от непрореагировавших мономеров

II.3 Методы изучения процесса полимеризации и характеристик образуемых частиц

11.3.1. Изучение кинетики (со)полимеризации методом газовой хроматографии

11.3.2. Определение поверхностного натяжения

11.3.3. Определение молекулярной массы полимеров

11.3.4. Определение размеров микросфер методом электронной микроскопии

11.3.5. Определение содержания сухого вещества в 60 латексе

И.3.6. Определение содержания гель — фракций в сополимерах П(ММА/акролеин)

II.3.7. Определение функциональных групп методом кондуктометрического титрования

11.3.7.1. Кондуктометрическое титрование карбоксильных групп

11.3.7.2. Определение поверхностной концентрации альдегидных групп

11.3.8. Фотоколориметрический метод определения количества альдегидных групп

11.3.9. Анализ полученных полимеров методом 63 тонкослойной хроматографии

11.3.10. Применение метода ИК-спектроскопии для анализа сополимерной структуры микросфер, полученных на основе ММА и акролеина

И.3.11. Изучение электрофоретической подвижности микросфер методом микроэлектрофореза

11.3.12. Методика связывания белка на поверхности частиц карбоксилированных латексов ПММА

11.3.13. Химическое связывание белка с поверхностными альдегидными группами

11.3.14. Определение концентрации белка методом высокоэффективной монолитной хроматографии

Глава III Результаты и их обсуждение

III. 1 Безэмульгаторная эмульсионная полимеризация метилметакрилата под действием карбоксилсодержащего инициатора

111.1.1. Влияние рН реакционной смеси на механизм формирования микросфер ПММА

III. 1.2. Синтез микросфер ПММА в присутствии буферных солей

111.2. Эмульсионная полимеризация метилметакрилата под действием карбоксилсодержащего инициатора в присутствии стерических стабилизаторов на основе декстрана

111.2.1. Синтез микросфер ПММА в присутствии декстрана

111.2.2. Синтез микросфер ПММА в присутствии карбоксилированных производных декстрана

111.2.3. Синтез микросфер ПММА в присутствии полиальдегида декстрана

111.3. Безэмульгаторная эмульсионная сополимеризация метилметакрилата и акролеина

111.4. Исследование электрофоретической подвижности частиц ПММА и ПММААК

111.5. Влияние структуры поверхности микросфер ПММА на физическую адсорбцию и химическое связывание бычьего сывороточного альбумина

111.6. Влияние связанного белка на элетроповерхностные свойства микросфер ПММА и ПММААК

111.7. Практическое использование полученных микросфер

111.7.1. Использование микросфер в качестве адъюванта при иммунизации

111.7.2. Применение микросфер в иммунодиагностике 144 Выводы 146 Список литературы 148 Приложения

Монодисперсные полимерные микросферы, получаемые методами дисперсионной полимеризации, широко применяются во многих областях науки и техники как калибровочные эталоны в электронной и оптической микроскопии, светорассеянии, при счете аэрозольных частиц и определении размера пор фильтров или биологических мембран, в качестве модельных коллоидов при изучении их реологического поведения и агрегативной устойчивости. В последние годы монодисперсные полимерные частицы нашли широкое применение в иммунологии как носители биологически активных веществ (БАВ). По сравнению с биологическими носителями (эритроциты, глобулярные белки) полимерные частицы обладают высокой стабильностью, и доступны практически в неограниченных количествах. При использовании частиц на основе полимеров, которые не вызывают токсического действия, возможно введение их внутрь организма. Такие полимеры могут служить носителями лекарственных препаратов и вакцин, обеспечивая пролонгированное действие препарата, или стимулировать клеточное продуцирование антител к биолиганду, связанному с поверхностью частиц. Разнообразие химического строения и степени гидрофобности БАВ, областей применения полимерных частиц - носителей в биотехнологии и задач иммунологических исследований определяет необходимость создания широкого спектра носителей иммунореагентов на основе полимерных микросфер. В полимерной химии уже разработано значительное количество методов получения микросфер на основе различных полимеров. Однако специальные требования к микросферам, применяемым для целей биотехнологии, обусловливают необходимость дальнейшего изучения процессов их синтеза с целью обеспечения заданных свойств. Одним из таких методов является синтез микросфер на основе мономеров, обладающих заметной растворимостью в воде, каким является метилметакрилат (ММА). Этот полярный мономер позволяет получать менее гидрофобные частицы, чем широко применяемые в иммуноанализе частицы на основе полистирола. Это должно способствовать уменьшению неспецифического взаимодействия БАВ с их поверхностью. Однако образование монодисперсных частиц при полимеризации ММА, как правило, осложнено процессами флокуляции растущих частиц, причем их коалесценция ограничена из-за неполной растворимости полимера в мономере, что обычно приводит к образованию частиц с малинообразной структурой и отклонениями от сферической формы. Поэтому актуальным является поиск методов получения монодисперсных полимерных частиц на основе полиметилметакрилата (ПММА). Кроме того, актуально и изучение методов введения в процессе синтеза микросфер ПММА в их поверхностный слой реакционно-способных функциональных групп, которые могут обеспечить прочное ковал ентное связывание БАВ. Для повышения агрегативной устойчивости формируемых частиц ПММА в процессе синтеза целесообразно использование полимерных стабилизаторов на основе полисахаридов, поскольку покрытие ими поверхности микросфер может также способствовать повышению биосовместимости получаемых носителей иммунореагентов.

Цель работы - исследование процессов образования монодисперсных латексных частиц с поверхностными реакционно-способными группами такими, как карбоксильные или альдегидные, при полимеризации ММА или сополимеризации его с акролеином. Выявление особенностей механизма этих процессов и возможности регулирования размера образуемых микросфер и их поверхностной структуры в зависимости от условий синтеза. Определение оптимальных условий связывания БАВ поверхностью микросфер также входит в задачу исследования.

Для достижения намеченной цели было запланировано: 1. Исследование методов безэмульгаторной эмульсионной полимеризации метилметакрилата под действием карбоксилсодержащего азоинициатора. 8

2. Исследование безэмульгаторной эмульсионной сополимеризации метилметакрилата и акролеина, инициированной персульфатом калия.

3. Изучение влияния полимерных стабилизаторов на основе декстрана и его производных с функциональными группами на механизм полимеризации ММА, инициированной карбоксилсодержащим азоинициатором.

4. Исследование связывания БАВ микросферами на основе ПММА, полученными в различных условиях, в зависимости от структуры и функциональности их поверхности.

Выводы

1. Исследованы процессы безэмульгаторной эмульсионной полимеризации метилметакрилата и сополимеризации его с акролеином под действием различных инициаторов (4,4'-азо-бис-4-(цианизовалериановая кислота) и персульфат калия) как в бессолевых условиях, так и при введении в реакционную смесь буферных солей, а также полимерных стабилизаторов дисперсных систем на основе декстрана.

2. Показано, что частичный гидролиз метилметакрилата до метакриловой кислоты в щелочной среде осложняет процесс его безэмульгаторной эмульсионной полимеризации под действием (4,4'-азо-бис-4-(цианизовалериановой кислоты), приводя к уменьшению размера формируемых частиц полиметилметакрилата и поверхностной концентрации карбоксильных групп, а также к уширению распределения частиц по размерам. Введение в реакционную смесь буферных солей ограничивает процесс гидролиза и повышает размер и степень поверхностного карбоксилирования частиц, формируемых в щелочных условиях.

3. Впервые определены соотношения сомономеров при безэмульгаторной эмульсионной сополимеризации метилметакрилата с акролеином под действием персульфата калия, которые обеспечивают высокую поверхностную концентрацию функциональных групп и наличие гель-фракции в сополимере, что способствует образованию частиц со стабильной структурой поверхностного слоя.

4. Предложен метод плавной регулировки размера частиц, образующихся в процессе эмульсионной полимеризации метилметакрилата под действием (4,4'-азо-бмс-4-(цианизовалериановой кислоты), при варьировании концентрации буферной соли в присутствие декстрана.

5. Впервые в качестве полимерного стабилизатора формируемых частиц использованы карбоксилированные производные декстрана или его полиальдегид, что позволяет включать в поверхностный слой частиц реакционно-способные группы через спейсерные полисахаридные цепи. Эти стабилизаторы существенно ускоряют процесс полимеризации и могут образовывать привитые сополимеры с полиметилметакрилатом.

6. Определены особенности использованных методов радикальной дисперсионной полимеризации и факторы (рН реакционной смеси, природа и концентрация буферной соли или полимерных стабилизаторов, соотношение сомономеров), варьирование которых позволяет формировать монодисперсные микросферы на основе полиметилметакрилата и его сополимеров с акролеином, направленно регулируя их размер и поверхностную концентрацию функциональных групп. Показано, что изучение электроповерхностных свойств полученных частиц позволяет оценить влияние условий полимеризации на структуру их поверхностного слоя.

7. Установлено, что полученные микросферы полиметилметакрилата могут служить носителями белка, причем присутствие декстрана или его карбоксилированных производных в поверхностном слое частиц повышает предельные значения адсорбции и хемосорбции. Обнаружено, что частицы сополимеров метилметакрилата с акролеином эффективно связывают белок с образованием оснований Шиффа, тогда как предельные значения хемосорбции на частицах полиметилметакрилата, полученных в присутствии полиальдегида декстрана, существенно ниже. Полученные частицы успешно использованы в качестве носителей иммунореагентов как в иммуноанализе, так и в процессе иммунизации.

1. Bangs L.B. The Latex Course. // Bangs Laboratories Inc. Carmel. Indianapolis. USA,- 1996.-V. 4.-P. 1-15.

2. Kawaguchi H. Functional polymer microspheres // Prog. Polym. Sci. -2000. -V. 25. -P. 1171 1210.

3. Прокопов Н.И., Грицкова И.А., Черкасов B.P., Чалых А.Е. Синтез монодисперсных функциональных полимерных микросфер для иммунодиагностических исследований // Успехи химии. -1996. -Т. 65. -N9 2.-С. 178-192.

4. Medcalf Е.А., Newman D.J., Gilboa A., Gorman E.G., Price C.P. A rapid and robust particle-enhanced turbodimetric immunoassay for serum B2-microglobulin // J. Immunol. Methods. -1990. -V. 129. P. 97-103.

5. Medcalf E.A., Newman D.J., Gorman E.G., Price C.P. Rapid, robust method for measuring low concentration of albumin in urine // Clin. Chem. -1990. —V. 36. -№. 3. -P. 446-449.

6. Amiral J., Migaud M. Development and application of a new photometric method for fast and sensitive immunoassays // Eur. Clin. Lab. -1991. -V. 10. -P. 28.

7. Нейман Р.Э. Очерки коллоидной химии синтетических латексов. -Воронеж: Издательство Воронежского университета, 1980.-335с.

8. Елисеева В.И. Полимерные дисперсии. М.: Химия, 1980. -296 с.

9. Фролов Ю.Г. Курс коллоидной химии. Поверхностные явления и дисперсные системы. М.: Химия, 1982. -400 с.

10. Ю.Практикум по коллоидной химии. Коллоидная химия латексов и поверхностно-активных веществ. / Под ред. Неймана Р.Э. М.: Высшая школа, 1972.-175 с.

11. П.Григоров О.Н., Карпова И.Ф., Козьмина З.П., Тихомолова К.П., Фридрихсберг Д.А., Чернобережский Ю.М. Руководство к практическим работам по коллоидной химии. 2-е изд. - М. М.: Химия, 1964. - 332 с.

12. Лабораторные работы и задачи по коллоидной химии. / Под ред. Ю.Г. Фролова и А.С. Горского. М.: Химия, 1986. - 216 с.

13. Hidalgo-Alvarez R., Martin-Rodriguez A., Fernandez A., Bastos D., Martinez F., de las Nieves F.J. Electrokinetic properties, colloidal stability and agregation kinetics of polymer colloids // Adv. Colloid Interface Sci. -1996. -V.67. P. 1118.

14. Шубин B.E., Исакова И.В., Сидорова М.П., Меньшикова А.Ю., Евсеева Т.Г. Электроповерхностные свойства карбоксильного латекса и их анализ на основе моделей ионных пар. // Коллоид, журн. 1990. - Т. 52. — № 5. -С. 935-941.

15. Shubin, V.E., Hunter, RJ. and О Brien, R.W. Electroacoustic and dielectric study of surface conduction // J. Colloid Interface Sci. 1993. - V. 159. - P. 174-179.

16. Dittgen M., Zozel B. Influence of valence and concentration of electrolytes on the £ potential of polyacrylic lattices // Colloid Polym. Sci. - 1991. - V. 269. -P. 259-263.

17. Peula-Garcia J.M., Hidalgo-Alvarez R., de las Nieves F.J. Colloid stability and electrokinetic characterization of polymer colloids prepared by different methods // Colloid and Surface. A: Physicochern. and Engineer. Aspects.1997.-V. 127.-P. 19-24.

18. Rusmusson M., Wall S. Surface electrical properties of polystyrene latex // Colloid Interface Sci. -1999. -Y.209. P. 312-326.

19. Norde W. Driving forces for protein adsorption at solid surfaces // Macromol. Symp. -1996. -V. 103. -P. 5-18.

20. Nunc Bulletin. Principles in adsorption to polysterene. 1988. - № 6. - P. 1-8.

21. Galisteo-Gonzalez F., Puig J., Martin-Rodriguez A., Serra-Domenech J., Hidalgo-Alvarez R. Influence of electrostatic forces on IgG adsorption onto polystyrene beads // Colloids Surface B: 1994. V. 2. - P. 435-441.

22. Serra J., Puig J., Martin A., Galisteo- F., Galvez MaJ., Hidalgo-Alvarez R. On the adsorption of IgG onto polystyrene particles: electrophoretic mobility and critical coagulation concentration // Colloid Polym. Sci. -1992. V. 270. - P. 574-583.

23. Peula-Garcia J.M., Hidalgo-Alvarez R., de las Nieves F.J. Protein co-adsorption on different polysteren latexes: electrokinetic characterization of polymer colloid stability // Colloid Polym. Sci. -1997. V. 275. - P. 198-202.

24. Shirahama H., Suzawa T. Adsorption of Bovine Serum Albumin onto Styrene/2-Hydroxyethyl Methacrylate copolymer latex I I J. Colloid Interface Sci. -1985. -V.104. № 2. - P. 416-421.

25. Suzawa Т., Shirahama H. Adsorption of plasma proteins onto polymer latices II Adv. Colloid Interface Sci. -1991. -V.35. P. 139-172.

26. Yong B.R., Pitt W.G., Cooper S.L. Protein adsorption on Polymeric biomaterials // J. Colloid Interface Sci. -1988. -V.124. № 1. - P. 28-43.

27. Arai Т., Norde W. The behavior of some model proteins at solid-liquid interfaces // Colloids and Surfaces. 1990. - V. 51. - P. 1 -15.

28. Polymer latexes. Preparation, characterization, and applications./ Ed. Daniela E.S., Sudol E.D., El-Aasser M.S. Washington, DC.: ACS Symposium series 492.-1992.-462 p.

29. Buijs J.A.G. Immunoglobulins and their fragments on solid surfaces. 1995. -126 p.

30. Альбумин сыворотки крови в клинической медицине./ Под ред. Грызунова Ю.А., Добрецова Г.Е. М.: Ириус, 1994. - Т.1, 2.

31. Okubo М., Hattori Н. Competitive adsorption of fibrinogen and albumin onto polymer microspheres having hydrophilic/hydrophobic heterogeneous surface structures // Colloid Polymer Sci. 1993. - V. 271. № 12. -P. 1157-1164.

32. Большой энциклопедический словарь «Химия» / Гл. ред. Кнунянц И.Л. М.: Большая Российская Энциклопедия, 1998.

33. Сивергин Ю.М., Киреева С.М., Гришина И.Н. Перекиси и гидроперекиси как инициаторы полимеризации мономеров // Пластич. массы. 2002. - № 5.-С. 27-32.

34. Arshady R. Suspension, emulsion, and dispersion polymerization: A methodological survey // Colloid Polym. Sci. 1992. - V. 270. - № 8. - P. 717 -732.

35. Goodwin J.W., Hearn J., Но C.C., Ottewill R.H. The preparation and characterization of polymer latices formed in the absence of active agents // Brit. Polym. J. -1973. -№ 5. -P. 347-362.

36. Хомиковский П.М. Элементарные реакции эмульсионной полимеризации // Успехи химии. 1959. - Т.28. - № 5. - С. 566-575.

37. Елисеева В.И., Иванчев С.С., Кучанов С.И., Лебедев А.В. Эмульсионная полимеризация и ее применение в промышленности. М.: Химия,1976. -240 с.

38. Павлюченко В.Н., Иванчев С.С. Эмульсионная полимеризация неполярных мономеров (развитие представлений о кинетике и топохимии) // Успехи химии. 1981. - Т. 50. № 4. - С. 715-745.

39. Оудиан Дж. Основы химии полимеров. Перевод с англ. Выгодского Я.С., Фрунзе Т.М. / Под ред. Коршака В.В. М.: Мир, 1974. - 616 с.

40. Smith W., Ewart R. Kinetics of emulsion polimerization // J. Chem. Phys. -1948. V. 16. - № 6.- P. 592-601.

41. Friis N., Hamielec A.E. Notes. Kinetics of styrene emulsion polymerization // J. Polym. Sci., Polym. Chem. Ed. 1973. - V. 11. -№ 12. - P. 3321-3325.

42. Ivancev S.S., Pavljucenko V.N. Emulsions polymerisation von styren bei lokalisierung der radikaibildung im bereich der adsorptionsschichten des emulgators // Acta Polymeries. 1981. - B. 32. -№. 7. - S. 407-412.

43. Павлюченко B.H., Иванчев C.C., Бырдина H.A., Алексеева З.М., Лесникова Н.Н. Особенности эмульсионной полимеризации стирола при локализации актов радикалообразования в адсорбционных слоях эмульгатора// ДАН СССР. 1981. - Т. 259. - № 3. - С. 641-645.

44. Иванчев С.С. // Радикальная полимеризация. М.: Химия. 1985. С.280.

45. Реакции в полимерных системах / Под ред. Иванчева С.С. Ленинград: Химия, 1987. - 304 с.5 i. Fitch R.M. The homogeneous nucleation of polymer colloids // Brit. Polym. J. 1973.-V. 5.-№6.-P. 467-483.

46. Елисеева В.И., Асламазова T.P. Эмульсионная полимеризация в отсутствие эмульгатора и латексы на ее основе //Успехи химии. -1991. -Т. 60. Вып.2. - С.398-429.

47. Лишанский И.С., Меньшикова А.Ю., Евсеева Т.Г. Комаровская Э.Э., Шубин В.Е., Сахарова Н.А. Особенности синтеза безэмульгаторных латексов полистирола в присутствии карбоксилсодержащего инициатора // Высокомолек. соед. 1991. Т. 33 Б. № 6. С. 413-416.

48. Goodwin J.W., Ottewill R.H., Pelton R. Studies on the preparation and characterization of monodisperse polystyrene latices // Colloid Polym. Sci. -1979.-V. 257.-P.61-69.

49. Goodwin J.W., Ottewill R.H., Pelton R., Vuanello G., Yates D.E. Control of particle size in the formation of polymer latices // Brit. Polym. J. -1978. -V. 10. -№ 9.-P. 173-180.

50. Goodwin В.J.W., Heam J., Но C.C., Ottewill R.H. Studies on the preparation and characterization of monodisperse polystyrene latices // Colloid Polym. Sci. -1974. -V.252. № 6. P. 464-471.

51. Богданова C.B., Соловьев Ю.В., Елисеева В.И., Зуйков А.В. // К механизму образования частиц при безэмульгаторной полимеризации. / Коллоидный журнал. 1985. № 4. Т. 47. С 781 -782.

52. Arai М., AraiK., SailoS. Polymer particle formation in soapless emulsion polymerization // J. Polym. Sci.: Polym. Chem. Ed. -1976. -V.17. -№ 11. -P. 3655-3665.

53. Coen E.M., Lyons R.A., Gilbert R.G. Effects of poly(acrylic acid) electrosteric stabilizer on entry and exit in emulsion polymerization // Macromolecules. -1996. V. 29. - № 15. - P. 5128-5135.

54. Асламазова T.P., Борейко JI.B., Елисеева В.И. К механизму безэмульгаторной латексной полимеризации // Высокомолек. соед. 1987. - Т. 29. - Б. - № 6. - С. 434-437.

55. Arai M., Arai К., Sailo S. On the rate of soapless emulsion polymerization of Methyl Methacrylate // J. Polym. Sci.: Polym. Chem. Ed. -1980. -V. 18. -№ 9. -P. 2813-2821.

56. Arai M., Arai K., Iwasaki S. et al. Agitation effect on the rate of soapless emulsion polymerization of Methyl Methacrylate // J. Polym. Sci.: Polym. Chem. Ed. -1981. V.19. - № 5. - P. 1205-1215.

57. Меньшикова А.Ю., Дмитриева И.Б., Кучук В.И., Скуркис Ю.О., и др. Электроповерхностные свойства латексов сополимеров стирола и акролеина с поверхностью, модифицированной белком. // Коллоид, журн. 1999. - Т. 61. -№ 6. - С. 799-808.

58. Грицкова И.А., Крашенинникова И.Г., Аль-Хаварин Д.И., Нусс П.В., Дорохова Е.А., Гжива-Никсиньска И. Устойчивые полистиролметакриловые суспензии с узким распределением частиц по размерам // Коллоид, журн. 1995. Т. 57. № 2. С.182-185.

59. Vijayendran B.R. Effect of carboxylic monomers on acid distribution in carboxylated polystyrene latices // J. Appl. Polym. Sci. 1979. - V. 23. - № 3. -P. 893-901.

60. Kondo A., Kawano Т., Itoh F., Higashtani K. Immunological agglutination kinetics of latex particles with physically adsorbed antigen // J. Immunol. Methods. 1990. - V. 135.-P. 111-119.

61. Овчинников ЮА. // Биоорганическая химия. M.: Просвещение, 1987. -450 с.

62. Schlund В., Pith Т., Lambla М. Syntheses et caracteristiques structurelles de latex peactifs // Macromol. Chem. Suppl. 1985. - № 10/11. - P. 419-433.

63. Margel S., Wiesel E. Acrolein polymerization: monodisperse, hono, and hybrido microspheres, synthesis, mechanism, and reactions // J. Polym. Sci.: Polym. Chem. Ed. -1984. -V. 22. P. 145-156.

64. Margel S. Polyaldehyde microspheres as probes for cell membranes// Ind. Eng. Chem. Res. 1982. V. 21. P. 343-348.

65. Rembaum A., Chang M., Richrads M. Structure and immunological properties of polyacrolein formed by means of ionizing radiation and base catalysis // J. Polym. Sci.: Polym. Chem. Ed. 1984. - Y. 22. - № 3. - P. 609-621.

66. Лукин Ю.В., Бахарев В.И. Заиченко А.С., Воронов С.А., Зубов В.П., Грицкова И.А., Праведников А.Н. Полиакролеиновые латексы: синтез, введение наполнителей и механизм формирования // Докл. АН СССР. -1985. -Т. 285.-С. 159-161.

67. Лукин Ю.В., Трифонов В.Д., Туркин С.И., Зубов В.П. Полиакролеиновые латексы в качестве иммунореагентов // Труды МХТИ. -1985.-Т. 135.-С. 137-141.

68. Yan С., Zanhg X., Sun Z. Poly(styrene-co-Acrolein) latex particles: copolymerization and characteristics // J. Appl. Polym. Sci. -1990. V. 40. - P. 89-98.

69. Lovell P.A.// Degradation and grafting of Hydroxyethylcellulose during emulsion polymerization. Abstract Oral Presentation in conference " Polymer colloids: Preparation and properties of aqueous polymer dispersion". July 1419, 2002. P.26

70. Иманиси Ю. Биополимеры: Пер. с японского / Под ред. Коршака В.В и Ямского И.А. М.: Мир, 1988. - 544 с.

71. Наппер Д. Стабилизация коллоидных дисперсий полимерами: Пер. с англ. / Привалко В.П., Липатов Ю.С. М.: Мир, 1986. - 448 с.

72. Бакеева И.В., Бородина И.А., Грицкова И.А. Синтез полимерных суспензий в присутствии декстранов разной молекулярной массы // Высокомолек. соед. Б. - 1997. - Т. 39. - № 5. - С. 868 - 871.

73. Chern C.S., Lee С.К., Tsai Y.J. Dextran stabilized poly(methylmethacrylate) latex particles and their potential application for affinity purification of lectins // Colloid Polym. Sci. 1997. - V. 275. - №. 9. - P. 841 - 849.

74. Воютский C.C. Курс коллоидной химии. M.: Химия, 1976. 320 с.

75. De Witt J.A. Van De Ven N.G.M. The effect of neutral polymers and electrolyte on the stability of aqueous polystyrene latex // Adv. Colloid Interface Sci. 1992. V. 42. P. 41-64.

76. Chern C.S., Liou Y.C., Tsai Y.J. Emulsion polymerization of acrylic monomers stabilized by Poly(Ethylen Oxide) // J. Macromol. Sci. Pure Appl. Chem. 1996. - V. A 33. - № 8. - P. 1063-1075.

77. Yen S.P.S., Rembaum A., Molday R.W., Dreyer W. // Emulsion Polymerization: Am. Chem. Soc. Symp. Ser. Washington: Am. Chem. Soc.1976. P. 236-244

78. Иммунологическая диагностика вирусных инфекций / Под ред. Перадзе Т.В., Халонена П. М.: Медицина, 1985. - 144 с.

79. Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля. М.: Медицина, 1987. -255 с.

80. Tomas М. Agglutinatiom methods for rapid analysis // Nature. 1986. - V. 320.-№20.-P. 289-290.

81. Новые методы иммуноанализа / Под ред. Коллинза У.П. М.: Мир, 1991. - 240 с.

82. Чайка Н.А. Применение реакции агглютинации латекса для диагностики паразитарных болезней // Мед. Паразитология. 1982. - Т. 51. - № 2. - С. 65-72.

83. Santos R.M., Forcada J. Acetal-functionalized polymer particles useful for immunoassays. Ill: Preparation of latex-protein complexes and their applications // J. Materials Sci.: Materials in Medicine. 2001. - V. 12. - № 2. -P. 173-180.

84. Brown D.F J., Walpole E. Evaluation of the Mastalex latex agglutination test for methicillin resistance in Staphylococcus aureus grown on different screening media // J. Antimicrobial Chemotherapy. 2001. - V. 47. - № 2. - P. 187-189.

85. Oksanen A.; Sipponen P.; Miettinen A.; Sarna S.; Rautelin H. Evaluation of Blood Tests to Predict Normal Gastric Mucosa // Scandinavian Journal of Gastroenterology. 2000. - V. 35. - № 8. - P. 791-795.

86. Kristensen В., Hojbjerg Т., Schonheyder H.C. Rapid immunodiagnosis of streptococci and enterococci in blood cultures // Apmis. 2001. — V. 109. - № 4. - P. 284-288.

87. Aizawa H., Kurosawa S., Tanaka M., Yoshimoto M., Miyake J., Tanaka H. Rapid diagnosis of Treponema pallidum in serum using latex piezoelectric immunoassay // Analytica Chemica Acta. 2001. - V. 437. - № 2. - P. 167169.

88. Kohno H., Akihara S., Nishio O., Ushihima H. Development of a simple and rapid latex test for rotavirus in stool samples // Pediatrics International. 2000. -V. 42.-№4.-P. 395-400.

89. ИЗ. Мертвецов Н.П., Беклемишев А.Б., Савич И.М. Современные подходы к конструированию молекулярных вакцин. Новосибирск: Наука, 1987. -210 с.

90. Сабецкий В.А. Полимерные микросферы в разработке вакцин нового поколения // Спид и родственные инфекции. 1998. - С. 44-46.

91. Kreuter J., Berg U., Liehl E., Soliva V., Speiser P.P. In fluence of the particle size on the adjuvant effect of particulate polymeric adjuvants // Vaccine. 1986. - V. 4. - № 2. - P. 125 - 129.

92. Zhao Z. // J. Pharm. Sci. 1996. V. 85. № 12. P. 1261 1270

93. Kreuter J. Nanoparticles and microparticles for drug and vaccin delivery // J. Anat. 1996. - V. 189. - Pt. 3. - P. 503 - 505.

94. Kreuter J., Speiser P.P. New adjuvants on a polymethylmethacrylate base // Infect. Immun. 1976. - V.l 3. - № 1. - P. 204-210.

95. Kreuter J., Liehl E. Protection induced by inactivated influenza virus vaccines with polymethylmethacrylate adjuvants // Med. Microbiol. Immunol. -1978.-V. 165.-№2.-P. 111-117.

96. Brandrup J., Immergut E.H. Polymer handbook.-3 rd / ed. John Wiley and Sons. 1989. Sec. II. 397 P.

97. Иозеп A.A., Бессонова H.K., Пассет Б.В. Синтез карбоксиэтилдекстрана // ЖПХ. 1998. Т. 71. Вып. 2. С. 320 323.

98. Иозеп А.А., Бессонова Н.К., Строкач Д.А., Пассет Б.В. Исследование реакции полисахаридов с акриламидом // Жури, прикладной химии. -1997. Т. 70. - № 5. - С. 824 - 828.

99. Столяров Б.В., Савинов И.М., Витенберг А.Г. Руководство к практическим работам по газовой хроматографии. -Ленинград: Химия, 1978.- 243 с.

100. Крам Д., Хэммонд. Органическая Химия. М.: Мир, 1964.

101. Иозеп A.A., Суворова О.Б., Иозеп Л.И., Пассет Б.В. Спектрометрические методы анализа водорастворимых полисахаридальдегидов // Журн. прикладной химии. 1998. - Т. 71. - № 7. -С. 1202-1205.

102. Кирнер Ю. // Тонкослойная хроматография. М: Мир, 1981. -Т. 1, 2.161

103. Tennikova Т., Freitag R. An introduction to monolithic disks as stationary phases for high performance biochromatography // J. High Res. Chromatogr. -2000.-V. 23.-№ 1.-P. 27-38.

104. Меньшикова А.Ю., Евсеева Т.Г., Чекина H.A., Иванчев С.С. Монодисперсные микросферы на основе сополимеров акролеина. // Журн. прикладной химии. -2001. -Т. 72. -№ 10. -С. 1677-1683.

105. Хэм Д. Сополимеризация. М.:Химия, 1971. 615 с.

106. Dambinova S.A., Izykenova G.A., Grigorenko E.V., Gromov S.A. The presence of autoantibodies to AMPA-binding proteins in the blood serum of patients with brain paroxysmal activity and epilepsy. // J. Neurological Sci. -1997.-V. 158.-P. 37-45.