Сравнительное изучение свойств различных форм ангиотензин-превращающего фермента на моделях биомембран тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.15 ВАК РФ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

ГЛАВА I. СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ 9 МЕМБРАННЫХ БЕЛКОВ.

1.1. Структура и функции биомембран.

1.2. Способы связывания мембранных белков с мембраной.

1.3. Особенности функционирования мембранных ферментов.

1.3.1. Биологическое значение мембранной организации ферментов.

1.3.2. Влияние мембранного окружения на активность ферментов.

1.4. Модельные мембранные системы, используемые для реконструкции 25 ферментов.

1.5. Особенности поведения мембранных ферментов в тройных системах 31 ПАВ-вода-органический растворитель.

ГЛАВА II. АНГИОТЕНЗИН-ПРЕВРАЩАЮЩИЙ ФЕРМЕНТ.

2.1. Структурные особенности различных форм фермента.

2.2. Мембранная организация ангиотензин-превращающего фермента.

2.3. Процесс отщепления трансмембранного якоря фермента.

2.4. Локализация и функции фермента в организме.

2.5. Каталитические свойства и регуляция активности ангиотензин- 51 превращающего фермента.

2.6. Влияние мембранной организации на свойства фермента. 55 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Материалы.

3.2. Методы исследования.

3.2.1. Выделение и очистка соматического ангиотензин- 61 превращающего фермента.

3.2.2. Выделение и очистка тестикулярного ангиотензин- 64 превращающего фермента.

3.2.3. Определение концентрации и чистоты выделенных 65 препаратов фермента.

3.2.4. Фазовое разделение различных форм ангиотензин- 65 превращающего фермента в растворе тритона Х-114.

3.2.5. Кинетические измерения в водных растворах.

3.2.6. Кинетические измерения в системе гидратированных обращенных мицелл АОТ в октане.

3.2.7. Седиментационный анализ соматического ангиотензин-превращающего фермента, включенного в систему обращенных мицелл АОТ в октане.

3.2.8. Влияние углеводов на образование олигомеров ангиотензин-превращающего фермента в системе обращенных мицелл.

3.2.9. Изучение способности олигомеров соматического фермента к 77 диссоциации в системе обращенных мицелл.

3.2.10.Кинетические измерения при фазовом переходе «обращенные 78 мицеллы - ламеллы» тройной системы АОТ-вода-октан.

3.2.11.Кинетические измерения в ламеллярных структурах тройной системы АОТ-вода-октан.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

ГЛАВА IV. ВЫДЕЛЕНИЕ И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА 80 РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ АНГИОТЕНЗИН-ПРЕВРАЩАЮ1ЦЕГО ФЕРМЕНТА.

4.1. Выделение растворимой и мембранной форм соматического 80 фермента.

4.2. Характеристика полученных форм соматического фермента.

4.3. Выделение растворимой и мембранной форм тестикулярного 91 фермента.

4.4. Характеристика полученных форм тестикулярного фермента.

ГЛАВА V. КАТАЛИТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ АНГИОТЕНЗИН-ПРЕВРАЩАЮЩЕГО ФЕРМЕНТА В ВОДНОМ РАСТВОРЕ.

6.4. Характеристика процессов образования-диссоциации различных олигимерных структур растворимой и мембранной форм фермента.

ГЛАВА VI. СВОЙСТВА СОМАТИЧЕСКОГО АНГИОТЕНЗИН-ПРЕВРАЩАЮЩЕГО ФЕРМЕНТА В СИСТЕМЕ ОБРАЩЕННЫХ МИЦЕЛЛ Ш6 АОТ В ОКТАНЕ.

6.1. Зависимость каталитической активности растворимой и мембранной форм фермента от степени гидратации.

6.2. Структурная организация мембранной и растворимой форм соматического фермента.

6.3. Стабильность растворимой и мембранной форм соматического фермента в системе обращенных мицелл.

6.5. Влияние свойств среды на активность соматического фермента.

6.5.1. Влияние анионов на активность растворимой и мембранной форм фермента в системе обращенных мицелл.

6.5.2. Влияние рН и молярности буфера, используемого в качестве водной фазы, на активность растворимой и мембранной форм ^д фермента в системе обращенных мицелл.

6.6. Кинетические параметры гидролиза субстрата РА-РЬе-01у-01у под действием различных структурных форм соматического ангиотензин-превращающего фермента в системе обращенных мицелл при различных концентрациях АОТ.

ГЛАВА VII. ФУНКЦИОНИРОВАНИЕ АНГИОТЕНЗИН-ПРЕВРАЩАЮЩЕГО ФЕРМЕНТА В ЛАМЕЛЛЯРНЫХ СТРУКТУРАХ ТРОЙНОЙ СИСТЕМЫ АОТ-ВОДА-ОКТАН.

ГЛАВА VIII. СВОЙСТВА ТЕСТИКУЛЯРНОГО АНГИОТЕНЗИН-ПРЕВРАЩАЮЩЕГО ФЕРМЕНТА В СИСТЕМЕ ОБРАЩЕННЫХ МИЦЕЛЛ АОТ В ОКТАНЕ.

8.1. Стабильность растворимой и мембранной форм тестикулярного фермента в системе обращенных мицелл.

8.3. Влияние свойств среды на активность мембранного тестикулярного фермента в системе обращенных мицелл.

8.3.1. Влияние хлорид-анионов на активность фермента.

8.3.2. Влияние рН и молярности буфера, используемого в качестве водной фазы, на активность тестикулярного фермента.

8.5. Сравнение предельных каталитических констант гидролиза субстрата FA-Phe-Gly-Gly под действием различных структурных форм тестикулярного и соматического ангиотензин-превращающих ферментов быка.

Изучение свойств ангиотензин-превращающего фермента (АПФ пептидил-дипептидаза А, КФ 3.4.15.1) важно как с практической, так и с фундаментальной точек зрения. Безусловная значимость АПФ в регуляции кровяного давления и водно-солевого обмена, в сердечно-сосудистых патологиях предопределяют интерес к этому ферменту со стороны медиков [13]. С другой стороны, АПФ характеризуется двудоменной структурой с двумя активными центрами, высоким содержанием углеводов, специфической активацией анионами и рядом других свойств, что делает этот фермент сложным, и поэтому очень интересным и перспективным объектом биохимических исследований [4].

АПФ функционирует в организме высших животных в соматической (двудоменной) и тестикулярной (однодоменной) изоформах, каждая из которых представляет собой интегральный мембранный гликопротеин, обладающий С-концевым пептидным трансмембранным якорем. При протеолитическом отщеплении якоря АПФ переходит в растворимую форму. В последние годы показано, что основные функции в организме осуществляет только мембраносвязанная форма фермента [5]. Однако, до настоящего момента внимание биохимиков уделялось изучению физико-химических и кинетических свойств АПФ в основном в водных растворах, в которых отличий в каталитических свойствах мембранного и растворимого ферментов не было выявлено [6]. В то же время, мембранный АПФ может функционировать в составе мембран в виде сложных белковых или липид-белковых ансамблей, причем в зависимости от микроокружения его свойства могут значительно изменяться.

Изучение влияния мембранного окружения на свойства ферментов в основном проводят с использованием модельных мембранных систем: включение белков в липосомы, агрегаты липидов различной структуры и др. Ни один из таких приемов в полной мере не воспроизводит реальные условия, однако каждый из них дает возможность обнаруживать некоторые новые 8 свойства ферментной системы, ускользавшие при работе с ферментом в растворе.

Целью настоящей работы явилось исследование влияния мембранной организации на структуру и каталитические характеристики АПФ. Для этого проведено сравнительное изучение свойств растворимой и мембранной форм как соматического, так и тестикулярного АПФ в водных растворах и в условиях, моделирующих мембранное окружение фермента, с использованием хорошо изученной системы АОТ-вода-октан.

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР ГЛАВА I.

СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ МЕМБРАННЫХ

БЕЛКОВ.

ВЫВОДЫ.

1. Разработан метод получения в индивидуальном виде мембранной формы (с якорем) и растворимой формы (без якоря) как соматического, так и тестикулярного ангиотензин-превращающего фермента. Показано сходство каталитических свойств растворимой и мембранной форм каждого изофермента в водном растворе.

2. Использование обращенных мицелл АОТ в октане позволило установить, что молекула соматического АПФ имеет несферическую структуру, а молекула тестикулярного фермента - сферическую. Мембранная организация существенно влияет на четвертичную структуру обоих изоферментов. Растворимый соматический АПФ способен функционировать в мицеллярной среде в виде мономера, компактного димера и тетрамера, а мембранный - в виде трех димеров различной формы и тетрамера. Растворимый тестикулярный фермент функционирует только в виде мономера, а мембранный в виде мономера и компактного димера. Показано, что образование димеров соматического АПФ происходит за счет присутствия в молекуле фермента углевод-распознающего центра, в то время как в образовании тетрамера соматического и димера тестикулярного АПФ углевод-распознающий центр не участвует.

3. Наличие якоря в молекуле каждого изофермента АПФ обеспечивает его способность к взаимодействию с мембранной матрицей, что проявляется в резком изменении активности при фазовом переходе «обращенные мицеллы-ламеллы» и в зависимости ферментативной активности в системе обращенных мицелл от концентрации АОТ.

4. Выявлены существенные отличия в величинах предельных каталитических констант р- и м-форм как соматического, так и тестикулярного АПФ в системе обращенных мицелл. Способность АПФ к взаимодействию с мембраной приводит к значительному повышению его активности, причем и двудоменный соматический и однодоменный тестикулярный ферменты в мембраносвязанном

165 состоянии эффективнее функционируют в составе высокоорганизованных гомокомплексов. Наиболее высокий каталитический потенциал реализует мембранный тестикулярный фермент.

5. Показаны новые пути регуляции активности АПФ, функционирующего в мембраносвязанном состоянии, структурой матрицы, составом среды и изменением олигомерного состояния фермента.

1. Greenwald, L., and Becker, R.C. Expanding the paradigm of the renin-angiotensin system and angiotensin-converting enzyme. (1994) Am. Heart J., 28, 997-1009.

2. Gibbons, G.H. Vasculoprotective and cardioprotective mechanism of angiotensin-converting enzyme inhibition: the homeostatic balance between angiotensin II and nitric oxide. (1997) Clin. Cardiol., 20, 18-25.

3. Yosipiv, I.V., and El-Dahr,,S.S. Developmental biology of angiotensin-converting enzyme. (1998) Pediatr. Nephrol., 12, 72-79.

4. Corvol, P., Williams, T.A., and Soubrier, F. Peptidyl dipeptidase A: angiotensin I-converting enzyme. (1995) Methods Enzymol, 248, 283-305.

5. Esther, C. R., Marino, E. M., Howard, Т. E., Michaud, A., and Corvol, P. The critical role of tissue angiotensin-converting enzyme as revealed by gene targeting in mice. (1997) J. Clin. Invest., 99, 2375-2385.

6. Lanzillo, J.J., Stevens, J., Dasarathy, Y., Yotsumoto, H., and Fanburg, B.L. Angiotensin-converting enzyme from human tissues. (1985) J. Biol. Chem., 260, 14938-14944.у

7. Геннис P. (1997) Биомембраны: молекулярная структура и функции, Мир, Москва.

8. Болдырев А.А., Котелевцев С.В., Ланио М., Альварес К., Перес П. (1990) Введение в биомембранологию, Изд-во МГУ, Москва.

9. Gil, Т., Ipsen, J.H., Mouritsen O.G., Sabra, М.С., Sperotto M.M., and Zuckermann, MJ. Theoretical analysis of protein organization in lipid membranes. (1998) Biochim. Biophys. Acta., 1376, 245-266.

10. Singer, S.L., and Nicolson, G.L. The fluid mosaic model of the structure of cell membranes. (1972) Science, 175, 720-731.11. de Kruiff, B. Lipid polymorphism and biomembrane function. (1997) Curr. Opin. Chem. Biol., 1, 564-569.

11. Epand, R.M. Lipid polymorphism and protein-lipid interactions. (1998) Biochim. Biophys. Acta., 1376, 353-368.

12. Mouritsen, O.G., and Jorgensen, K. Small-scale lipid-membrane structure: simulation versus experiment. (1997) Curr. Opin. Struct. Biol., 1, 518-527.

13. Cheifetz, S., Boggs, J.M., and Moscarello, M.A. Increase in vesicle permeability mediated by myelin basic protein. (1985) Biochemistry, 24, 5170-5175.

14. Maksymiw, R., Sui, S., Gaub, H., and Sackmann, E. Electrostatic coupling of spectrin dimers to phosphatidylserine containing lipid lamellae. (1987) Biochemistry, 26, 2983-2990.

15. Newton, A.C., and Johnson, J.E. Protein kinase C: paradigm for regulation of protein function by two membrane-targeting modules. (1998) Biochim. Biophys. Acta., 1376, 155-172.

16. Van den Bosh, H. Intracellular phospholipases A. (1980) Biochim. Biophys. Acta., 604, 191-246.

17. Курганов Б.И. Адсорбция периферических ферментов олигомерными «якорными» белками. (1984) Биол. Мембраны, 1, 363-371.

18. Elgavish, S., and Shaanan, В. Lectin-carbohydrate interactions: different folds, common recognition principles. (1997) TIBS, 22, 462-467.

19. Pedersen, P.L., and Carafoli, E. Ion motive ATPases. Uniquity, properties, and significance to cell function. (1987) TIBS, 12, 146-150.

20. Tomita, M., and Marchesi, V.T. Amino-acid sequence and oligosaccharide attachment sites of human erytrocyte glycophorin. (1975) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 72, 2964-2968.

21. Dunn, R.J., Hackett H.R., McCoy, J.M., Chao B.H., Kimura, K., and Khorana, H.G. Structure-function studies on bacteriorhodopsin. (1987) J. Biol. Chem., 262, 9246-9254.

22. Липкин B.M., Обухов A.H. Структура и механизмы функционирования белков зрительной сиситемы. 1. Родопсин (1999) Биол. мембраны, 16, 135158.

23. Hooper, N.M. Glycosyl-phosphatidylinositol anchored membrane enzymes. (1997) Clin. Chim. Acta., 266, 3-12.

24. Hooper, N.M., Karran, E.H., and Turner, A.J. Membrane protein secretases. (1997) Biochem. J., 321, 265-279.

25. Massague, J., and Atanasio, P. Membrane-anchored growth factors. (1993) Annu. Rev. Biochem., 62, 515-541.

26. Pandiella, A., Bosenberg, M.W., Huang, E.J., Besmer, P., and Massague, J. Cleavage of membrane-anchored growth factors involves distinct protease activities regulated through common mechanisms. (1992) J. Biol. Chem., 267, 24028-24033.

27. Локшина, Л.А. Протеиназы плазматической мембраны клеток и ихубиологические функции. (1998) Биоорг. химия, 24, 323-331

28. Van Hoof, V.O., Deng, J.T., and De Broe, M.E. How do plasma membranes reach the circulation? (1997) Clin. Chim. Acta., 266, 23-31.

29. Nairn, N. Y. Secretion of human intestinal angiotensin-converting enzyme and its association with the differentiation state of intestinal cells. (1996) Biochem. J 316, 259-264.

30. Фридрих П. (1986) Ферменты: четвертичная структура и надмолекулярные комплексы, Мир, Москва.

31. Huang, E.J., Nocka, К.Н., Buck, J., and Besmer, P. Differential expression and processing of two cell associated forms of the kit-ligand: KL-1 and KL-2. (1992) Mol. Biol. Cell, 3, 349-362.

32. Grabau, C., and Cronan, J.E. In vivo function of Escherichia coli pyruvate oxidase specifically requires a functional lipid binding site. (1986) Biochemistry, 25, 37483751.

33. Ott, P. Membrane acetylcholinesterases: purification, molecular properties and interactions with amphiphilic environments. (1985) Biochim. Biophys. Acta., 822, 375-392.

34. Уголев A.M. (1972) Мембранное пищеварение. Полисубстратные процессы, организация и регуляция, Наука, Ленинград.

35. Burack, W.R., and Biltonen, R.L. Lipid bilayer heterogeneities and modulation of phospholipase A2 activity. (1994) Chem. Phys. Lipids., 73, 209-222.

36. Gelles, J., Blair, D.F., and Chan, S.I. The proton-pumping site of cytochrome с oxidase: a model of its structure and mechanism. (1987) Biochim. Biophys. Acta., 853, 205-236.

37. Brewis, I.A., Turner, A.J., and Hooper, N.M. Activation of the glycosyl-phosphatidylinositol-anchored membrane dipeptidase upon release from pig kidney membranes by phospholipase C. (1994) Biochem. J., 303, 633-638.

38. Lehto, M.T., and Sharom, F.J. Release of the glycosylphosphatidylinositol-anchored enzyme ecto-5 '-nucleotidase by phospholipase C: catalytic activation and modulation by the lipid bilayer. (1998) Biochem. J., 332, 101-109.

39. Roberg, В., Torgner, I.A., and Kvamme, E. Soluble and membrane-bound forms of phosphate-activated glutaminase with different kinetic characteristics in pig and rat kidney mitochondria. (1997) Contrib. Nephrol., 121, 11-19.

40. Дергунов А.Д., Капрельянц A.C., Островский Д.Н. Белок-липидные взаимодействия и функционирование мембранных ферментов. (1984) Усп.г1. Биол. Хим., 25, 89-110.

41. Wetzel, P., and Gros, G. Inhibition and kinetic properties of membrane-bound carbonic anhydrases in rabbit skeletal muscles. (1998) Arch. Biochem. Biophys., 356, 151-158.

42. Broadway, N.M., and Saggerson, E.D. Effect of membrane environment on the activity and inhibitability by malonyl-CoA of the carnitine acyltransferase of hepatic microsomal membranes. (1997) Biochem. J., 322, 435-440.

43. Bodovitz, S., and Klein, W.L. Cholesterol modulates alpha-secretase cleavage of amyloid precursor protein. (1996) J. Biol. Chem., 271, 4436-4440.

44. Wojtzak, L. and Nalecz, M.J. Surface charge of biological membranes as a possible regulator of membrane-bound enzymes. (1979) Eur. J. Biochem., 94, 99107.

45. Zakim, D., and Edmontson, D.E. The role of the membrane in the regulation of activity of microsomal glucose-6-phosphatase. (1982) J. Biol. Chem., 257, 11451148.

46. Parkin, E.T., Turner,'A. J., and Hooper, N.M. Isolation and characterization of two distinct low-density, Triton-insoluble, complexes from porcine lung membranes (1996) Biochem. J., 319, 887-896.

47. Meech, R., and Mackenzie, P.I. Structure and function of uridine diphosphate glucuronosyltransferases. (1997) Clin. Exp. Pharmacol. Physiol., 24, 907-915.

48. Lichko, L., Kulakovskaya, T., and Kulaev, I. Membrane-bound and soluble polyphosphatases of mitochondria of Saccharomyces cerevisiae: identification and comparative characterization. (1998) Biochim. Biophys. Acta., 1372, 153-162.

49. Heyse, S., Stora, T., Schmid, E., Lakey, J.H., and Vogel, H. Emerging techniques for investigating molecular interactions at lipid membranes. (1998) Biochim. Biophys. Acta., 1376, 319-338.

50. Yun, C.H., Ahn, Т., and Guengerich, F.P. Conformational change and activation of cytochrome P450 2B1 induced by salt and phospholipid. (1998) Arch. Biochem. Biophys., 356, 229-238.

51. Navarro, J., Toivito-Kinnucan, M., and Racker, E. Effect of lipid composition on the calcium/adenosine 5'-triphosphate coupling ratio of the Ca2+-ATFase of sarcoplasmic reticulum. (1984) Biochemistry, 23, 130-135.

52. Dawson, R.M.C. Phospholipid structure as a modulator of intracellular turnover. (1982) J. Am. Oil. Chem. Soc., 52, 401-406.

53. Hui, S.W., Stewart, T.P., Yeagle, P.L., and Albert, A.D. Bilayer to non-bilayer transitions in mixtures of PE, PC: implications for membrane properties. (1981) Arch. Biochem. Biophys., 207, 227-240.

54. Jensen, J.W., and Schutzbach, V. Activation of mannosyltransferase II by nonb¿layerphospholipids. (1984) Biochemistry, 23, 1115-1119.

55. Tamamushi, В., and Watanabe, N. The formation of molecular aggregation structures in ternary system: Aerosol OT/water/isooctane. (1980) Colloid. Polymer. Sci., 258, 174-178.

56. Levashov, A.V. Microheterogeneous surfactant-based systems as media for enzymatic reactions. (1993) Ind. J. Chem., 32, 167-169.

57. Martinek, К., Levashov, A.V., Klyachko, N.L., Khmelnitsky, Y.L., and Beresin, I.V. Micellar enzymology. (1986) Eur. J. Biochem., 155, 453-468.

58. Zulauf, M., and Eicke, H.-F. Inverted micelles and microemulsions in the ternary system H2()-AOT-octane as studied by photon correlation spectroscopy. (1979) J. Phys. Chem., 83, 480-486.

59. Левашов A.B. (1988) Катализ ферментами в системах обращенных мицелл. Дисс. докт. хим. наук, МГУ, Москва.

60. Kabanov, A.V., Nametkin, S.N., Klyachko, N.L., and Levashov, A.V. Regulation of the catalytic activity and oligomeric composition of enzymes in reversed micelles of surfactants in organic solvents. (1991) FEBS Lett., 278, 143-146.

61. Kurganov, B.I., Burlakova, A.A., Chebotareva, N.A., and Debabov, V.G. Behavior of uridine phosphorylase from Escherichia coli K-12 in hydrated reversed micelles of surfactant in organic solvent. (1997) Biochem. Mol. Biol. Int., 41, 547-554.

62. Левашов А.В., Пантин В.И., Мартинек К., Березин И.В. Кинетическая теория реакций, катализируемых ферментами, солюбилизированными в органических растворителях с помощью поверхностно-активных веществ. (1980) Докл. АН СССР, 252, 133-136.

63. Клячко Н.Л., Левашов А.В., Мартинек К. Катализ ферментами,увключенными в обращенные мицеллы поверхностно-активных веществ в органических растворителях. Пероксидаза в системе Аэрозоль ОТ-вода-октан. (1984) Мол. Виол., 18, 1019-1031.

64. Клячко H.JI., Пшежецкий A.B., Кабанов A.B., Вакула С.В., Мартинек К., Левашов А.В. Катализ ферментами в агрегатах поверхностно-активных веществ: оптимальная конструкция матрицы ПАВ. (1990) Биол. мембраны, 7, 467-472.

65. Клячко Н.И., Меркер Ш., Вакула С.В., Иванов М.В., Березин И.В., Мартинек К., Левашов А.В. Регуляция каталитической активности олигомерных ферментов в системах обращенных мицелл ПАВ. Лактатдегидрогеназа. (1988) Докл. АН СССР, 298, 1479-1481.

66. Williams, Т.A., Soubrier, F., and Corvol, P. (1996) in Zinc Metalloproteases in Health and Disease. (Hooper N.M. ed.), Taylor and Francis, London, pp. 83-104.

67. Елисеева Ю.Е. Структурно-функциональные особенности ангиотензин-превращающего фермента. (1998) Биоорг. химия, 24, 262-270.

68. Soubrier, F., Alhenc-Gelas, F., Hubert, С., Allegrini, J., John, M., Tregear, G., and Corvol, P. Two putative active centers in human angiotensin I-converting enzyme revealed by molecular cloning. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85, 9386-9390.

69. Sibony, M., Segretain, D., and Gasc, J.M. Angiotensin-converting enzyme in murine testis: step-specific expression of the germinal isoform during spermiogenesis. (1994) Biol. Reprod., 50, 1015-1026.

70. Beldent, V., Michaud, A., Bonnefoy, C., Chauvet, M.-T., and Corvol, P. Cell surface localization of proteolysis of human angiotensin I-converting enzyme. (1995) J. Biol. Chem., 270, 28962-28969.

71. Ehlers, M.R.W., Chen, Y.-N.P., and Riordan, J.F. Spontaneous solubilization of membrane-bound human testis angiotensin-converting enzyme expressed in Chinese hamster ovary cells. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, 1009-1013.

72. Deddish, P.A., Wang, J., Michel, B., Morris, P.W., Davidson, N.O., Skidgel, R.A., and Erdos, E.G. Naturally occurring active N-domain of human angiotensin Iconverting enzyme. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91, 7007-7811.t

73. Mins, G., Vishwanatha, J.K., and Rubinstein, I. Regulation of angiotensin I-converting enzyme in cultured bovine bronchial epithelial cells. (1993) J. Cell. Biochem., 53, 352-359.

74. Cornell, M.J., Williams, T.A., Lamango, N.S., Coates, D., and Corvol, P. Cloning and expression of an evolutionary conserved single-domain angiotensin converting enzyme from Drosophila melanogaster. (1995) J. Biol. Chem., 270, 13613-13619.

75. Hooper, N.M. Family of zinc metalloproteases. (1994) FEBS Lett., 354, 1-6.

76. Ehlers, M.R.W., Chen, Y.-N.P., and Riordan, J.F. The unique N-terminal sequence of testis angiotens in-converting enzyme is heavily O-glycosylated and unessential for activity or stability. (1992) Biochem. Biophys. Res. Commun., 183, 199-205.

77. Sen, G.C., Thekkumkara, T.F., and Kumar, R.S. Angiotensin-converting enzyme: structural relationship of the testicular and the pulmonary forms. (1990) J. Cardiovasc■ Pharmacol., 16, S14-S18.

78. Das, M., Hartley, J.L., an<J Soffer, R.L. Serum angiotensin-converting enzyme. Isolation and relationship to the pulmonary enzyme. (1977) J. Biol. Chem., 252, 1316-1319.

79. Kasturi, S., Jabbar, M.A., Sen, G.C., and Sen, I. Role of glycosylation in the biosynthesis and activity of rabbit testicular angiotensin-converting enzyme. (1994) Biochemistry", 33, 6228-6234.

80. Lanzillo, J.J., Stevens, J., Tumas, J., and Fanburg, B.L. Spontaneous change of human plasma angiotensin I-converting enzyme isoelectric point. (1983) Arch. Biochem. Biophys., 227, 434-439.

81. Baudin, B., Alves, N., Pilon, A., Beneteau-Burnat, B., and Giboudeau, J. Structural and biological roles of glycosylation in pulmonary angiotensin I-converting enzyme. (1997) Glycobiology, 7, 565-570.

82. Sturrock, E.D., Christopher, X.Y., Biemann, K., and Riordan, J.F. Assignment of free and disulfide-bonded cysteine residues in testis angiotens in-converting enzyme: functional implications. (1996) Biochemistry, 35, 9560-9566.

83. Soffer, R.L., and El-Dorry, H.A. Angiotensin-converting enzyme: immunologic, structural, and developmental aspects. (1983) Fed. Proc., 12, 2735-2739.

84. Danilov, S., Jaspard, E., Churakova, T., Towbin, H., Sovoie, F., Wei, Z., and

85. Alhenc-Gelas, F. Structure-function analysis of angiotensin I-converting enzymetusing monoclonal antibodies. Selective inhibition of the amino-terminal active site. (1994) J. Biol. Chem., 269, 26806-26814.

86. Shai, S.Y., Fishel, R.S., Martin, B.M., Berk, B.C., and Bernstein, K.B. Bovine angiotensin converting enzyme cDNA cloning and regulation. (1992) Circ. Res., 70,1274-1281.

87. Beldent, V., Michaud, A., Wei, L., Chauvet, M.-T., and Corvol, P. Proteolytic release of human angiotensin-converting enzyme. (1993) J. Biol. Chem., 268, 26428-26434.

88. Oppong, S:Y., Turner, A.J., and Hooper, N.M. Characterization of the soluble and membrane-bound forms of porcine angiotensin-converting enzyme. (1993) Biochem. Soc. Trans-., 21, 251.

89. Oppong, S.Y., and Hooper, N.M. Characterization of a secretase activity which releases angiotensin-converting enzyme from membrane. (1993) Biochem. J., 292, 597-603.

90. Ehlers, M.R.W., Schwager, S.L., Chubb, A.J., Scholle, R.R., Brandt, W.F., and Riordan, J.F. Proteolytic release of membrane proteins: studies on a membraneprotein solubilizing activity in CHO cells. (1997) Immunopharmacology, 36, 271278.

91. Ehlers, M.R.W., Schwager, S.L., Scholle, R.R., Manji, G.A., Brandt, W.F., and Riordan, J.F. Proteolytic release of membrane-bound angiotensin-converting enzyme: role of the juxtamembrane stalk sequence. (1996) Biochemistry, 35, 95499559.

92. Sadhukhan, R., Santhamma, K.R., Reddy, P., Peschon, J.J., Black, R.A., and Sen,

93. Unaltered cleavage and secretion of angiotensin-converting enzyme in tumorfnecrosis factor-alpha-converting enzyme-deficient mice. (1999) J. Biol. Chem., 274,10511-10516. *

94. Sadhukhan, R., Sen, G.C., Ramchandran, R., and Sen, I. The distal ectodomain of angiotensin-converting enzyme regulates its cleavage-secretion from the cell surface. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95, 138-143.

95. Jagadeesh, G. Angiotensin II receptors-antagonists, molecular biology, and signal transduction. (1998) Indian J. Exp. Biol., 36, 1171 -1194.

96. Chrysant, S.G. Vascular remodeling: the role of angiotensin-converting enzyme inhibitors. (1998) Am. Heart J., 135, S21-S30.

97. Parving, H.H., Tarnow, L/, and Rossing, P. Renal protection in diabetes an emerging role for calcium antagonists.{1991) Cardiology, 88, 56-62.

98. Ruschityka, F.T., Noll, G., and Luscher, T.F. The endothelium in coronary artery diseases. (1997) Cardiology, 88, 3-19.

99. Sun, Y., Ratajska, A-., Zhou, G., and Weber, K.T. Angiotensin-Converting enzyme and myocardial fibrosis in the rat receiving angiotensin II or aldosterone. (1993) J. Lab. Clin. Med., 122, 395-403.

100. Diet, F., Pratt, R.E., Berry, G.J., Momose, N., Gibbons, G.H., and Dzau, V.J. Increased accumulation of tissue ACE in human atherosclerotic coronary artery disease. (1996) Circulation, 94, 2756-2767.

101. Krassnigg, F., Niederhauser, H., Fink, E., Frick, J., and Schill, W.-B. Angiotensinconverting enzyme in human seminal plasma is synthesized by the testis, epididymis and prostate. (1989) Int. J. Andrology, 12, 22-28.

102. El-Dorry, H.A., MacGregor, J.S., and Soffer, R.L. Dipeptidyl carboxypeptidase from seminal fluid resembles the pulmonary rather than the testicular isoensyme. (1983) Biochem. Biophys. Res. Commun., 115, 1096-1100.

103. El-Dorry, H.A., Bull, H.G., Iwata, K„ Thornberry, N.A., Cordes, E.H., and Soffer, R.L. Molecular and catalytic properties of rabbit testicular dipeptidyl carboxypeptidase. (1982) J. Biol. Chem., 257, 14128-14133.

104. Hagaman, J.R., Moyer, J.S., Bachman, E.S., Sibony, M., Magyar, P.L., Welch, J.E., Smithies, O., Krege, J.H., and O'Brien, D.A. Angiotensin-converting enzyme and male fertility. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95, 2552-2557.

105. Krege, J.H., John, • S.W., Langenbach, L.L., Hodgin, J.B., Hagaman, J.R., Bachman, E.S., Jennette, J.C., O'Brien, D.A., and Smithies, O. Male-female differences in fertility and blood pressure in ACE-deficient mice. (1995) Nature, 375, 146-148.

106. Tatei, K., Cai, H., Ip, Y.T.,,and Levine, M. Race: a Drosophila homologue of the angiotensin converting enzyme. (1995) Mech. Dev., 51, 157-168.

107. Brunner, H.R., Turini, G.A., Waeber, B., Nussberger, J., and Biollaz, J. The clinical application of angiotensin-converting enzyme inhibitors. (1983) Clin. Exper. Hyper., A5, 1355-1366.

108. Fennessy, P.A., Campbell, J.H., Mendelsohn, F.A., and Campbell, G.R. Angiotensin-converting enzyme inhibitors and atherosclerosis: relevance of animal models to human disease. (1996) Clin. Exp. Pharmacol. Physiol., 23, S30-S32.

109. Costerousse, O., Allergini, J., Clozel, J.P., Menard, J., and Alhenc-Gelas, F.f

110. Angiotensin I-converting enzyme inhibition but not angiotensin II suppression alters angiotensin I- converting enzyme gene expression in vessels and epithelia. (1998) J. Pharmacol. Exp. Ther., 284, 1180-1187.

111. Ehlers, M.R.W., Chen, Y-N.P., and Riordan, J.F. Purification and characterization of human testis angiotensin-converting enzyme exspressed in Chinese hamster ovary cells. (1991) Protein Expres. Pur if, 2, 1-9.

112. Ehlers, M.R.W., and Riordan, J.F. Angiotensin-converting enzyme: zinc- and inhibitor-binding stoichiometrics of the somatic and testis isozymes. (1991) Biochemistry, 30, 7118-7126.

113. Wei, L., Alhenc-Gelas, F., Corvol, P., and Clauser, E. The two homologous domains of human angiotensin I-converting enzyme are both catalytically active. (1991) J. Biol. Chem., 266, 9002-9G08.

114. Jaspard, E., Wei, L., and'Alhenc-Gelas, F. Differences in the properties and enzymatic specijities of the two active sites of angiotensin-converting enzyme (kininase II). (1993) J. Biol. Chem., 268, 9496-9503.

115. Cheung, H.S., Wang, F.L., Ondetti, M.A., Sabo, E.F., and Cushman, D.W. Binding of peptide substrates and inhibitors on angiotensin-converting enzyme. (1980) J. Biol. Chem., 255, 401-407.у

116. Sen, I., Kasturi, S., Jabbar, M.A., and Sen, G.C. Mutations in two specific residues of testicular angiotensin-converting enzyme change its catalytic properties. (1993) J. Biol. Chem., 268, 25748-25754.

117. Wei, L., Clauser, E., Alhenc-Gelas, F., and Corvol, P. The two homologous domains of human angiotensin-converting enzyme interact differently with competitive inhibitors. (1992) J. Biol. Chem., 267, 13398-13405.

118. Jaspard, E., and Alhenc-Gelas, F. Catalytic properties of the two active sites of the angiotensin-converting enzyme on the cell surface. (1995) Biochem. Biophys. Res. Commun., 211, 528-534.

119. Кост O.A., Орт T.A., Никольская И.И., Наметкин C.H., Левашов А.В. Ангиотензин-превращающий фермент в системе обращенных мицелл: взаимодействие с матрицей. (1995) Биоорг. Химия, 21, 403-407.

120. Nakajima, Т., Oshima, G., Yen, H.S.J., Igic, R, and Erdos, E.G. Purification of the angiotensin I-converting enzyme of the lung. (1973) Biochim. Biophys. Acta., 315,430-438.

121. Ламзина Н.А., Кост О.А., Пиотух К.В., Казанская Н.Ф., Ларионова Н.И. Функционирование ангиотензин-превращающего фермента на матрицах. (1990) Биохимия, 55, 1882-1889.

122. Nairn, N.Y. Angio tens in-converting enzyme of the human small intestine. (1992) Biochem. J., 286, 451-457.

123. Кост O.A., Орт T.A., Никольская И.И., Наметкин C.H., Левашов А.В. Регуляция каталитической активности и надмолекулярной структуры ангиотензин-превращающего фермента в системе обращенных мицелл. (1994) Биохимия, 59, 1746-1755.

124. Oshima, G., Geese, A., and Erdos, E.G. Angiotensin I-converting enzyme of the kidney cortex. (1974) Biochim. Biophys. Acta., 350, 26-37.

125. Das, M., and Soffer, R.L. Pulmonary angiotensin-converting enzyme. Structural and catalytic properties. (1975) J. Biol. Chem., 250, 6762-6768.

126. Nishimura, K., Yoshida, N., Hiwada, K., Ueda, E., and Kokubu, T. Purification of angiotensin-converting enzyme from human lung. (1977) Biochim. Biophys. Acta., 483, 398-408.

127. Кугаевская E.B., Павлихина Л.В., Елисеева Ю.Е. Участие сериновой протеиназы в превращении высокомолекулярной (600 кДа) формы ангиотензин I-превращающего фермента в низкомолекулярную (190 кДа). (1994) Вопр. Мед. Химии, 40, 9-11.

128. Ryan, U.S., Ryan, O.W., Whitaker, С., and Chiu, A. Localization of angiotensin I-converting enzyme (kininase II). (1976) Tissue Cell, 8, 125-145.

129. Ripka, J.E., Ryan, J.W., Valido, F.A., Chang, A.Y.K., Peterson, C.M., and Urry, R.L. N-Glycosylation of forms of angiotensin-converting enzyme from four mammalian species. (1993) Biochem. Biophys. Res. Commun., 196, 503-508.

130. Mizuno, K.M.D., Fukuchi, S.M.D., and Kimura, A.M.D. Partial characterization of angiotensin I-converting enzyme of the aorta in rats. (1984) Japan. Heart J., 25, 387-396.

131. Bull, H.G., Thornberry, A., and Cordes, E.H. Purification of angiotensin-converting enzyme from rabbit lung and human plasma by affinity chromatography. (1985) J. Biol. Chem., 260, 2963-2972.

132. Кост О.А., Ламзина Н.А., Шарафутдинов Т.З., Цупрун В.Л., Казанская Н.Ф. Физико-химические характеристики ангиотензин-превращающего фермента из легких быка. (1990) Биохимия, 55, 974-998.

133. Кочетов Г.А. (1980) Практическое руководство по энзимологии, Высшая школа, Москва.

134. Pantoliano, M.W., Holmquist, В., and Riordan, J.F. Affinity chromatographic purification of angiotensin converting enzyme. (1984) Biochemistry, 23, 10371042.

135. Laemmli, U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. (1970) Nature, 227, 668-672.

136. Bordier, C. Phase separation of integral membrane proteins in Triton X-114 solution. (1981) J. Biol. Chem., 256, 1604-1607.

137. Holmquist, В., Bunning, P., and Riordan, J.F. A continuous spectrophotometric assay for angiotens in-converting enzyme. (1979) Anal. Biochem., 95, 540-548.

138. Елисеева Ю.А., Орехович B.H., Павлихина Л.В. Выделение и свойства карбоксикатепсина (пептидил-дипептидазы) из ткани легких быка. (1976) Биохимия, 41, 506-512.

139. Bieth, J.-G. Theoretical and practical aspects of proteinase inhibition kinetics. (1995) Methods Enzymol., 248, 59-84.

140. Fendler, J.H. Interactions and reactions in reversed micellar systems. (1976) Accounts Chem. Res., 98, 2391-2397.

141. Zinsli, P.E. Inhomogeneous interior of Aerosol ОТ emulsion, probed by fluorescence and polarization decay. (1979) J. Phys. Chem., 33, 3223-3231.

142. Черняк В.Я. (1978) Физико-химические методы в молекулярной биологии, Изд-во МГУ, Москва.

143. Kost, O.A., Orth, T.A., Nikolskaya, I.I., Nametkin, S.N., and Levashov, A.V. Carbohydrates regulate the dimerization of angiotensin-converting enzyme. (1998) Biochem. Mol. Biol. Int., 44, 535-542.

144. Orth, T.A., Voronov, S.V., Saenger, W., and Kost, O.A. Glycosylation modulates catalytic activity of angiotensin-converting enzyme. (1998) FEBS Letters, 431, 255-258.

145. Robinson, N.C., and Talbert, L. Triton X-100 induced dissociation of beef heart cytochrome c oxidase into monomers. (1986) Biochemistry, 25, 2328-2335.

146. Komori, Y., Chiang, K.T., ¡and Fukuto, J.M. The effect of nonionic detergents on the activity and/or stability of rat brain nitric oxide synthase. (1993) Arch. Biochem. Biophys., 307, 311-315.

147. Carlsson, S.R. Isolation and characterization of glycoproteins. (1993) in Glycobiology. A practical approach. (Fukura, M. ed.), Oxford University Press., pp.1-25.

148. Yotsumoto, H.W.D., Sato, S.P.D., and Shibuya, M.M.D. Localization of angiotensin converting enzyme (dipeptidyl carboxypeptidase) in swine sperm by immunofluorescence. (1984) L//e Sci., 35, 1257-1261.

149. Sen, I., Samanta, H., Livingston, W., and Sen, G.C. Establishment of transfectedjcell lines producting testicular angiotensin-converting enzyme, structural relationship between its secreted and cellular forms. (1991) J. Biol. Chem., 266, 21985-21990.

150. Eicke, H.-F., and Rehak, J. On the formation of water-oil microemulsions. (1976) Helv. Chim. Acta., 59, 2883-2891.

151. Baudin, B., Timmins, P.A., Drouet, L., and Baumann, F.Ch. Molecular weight and shape of angiotensin-converting enzyme. A neutron scattering study. (1988) Biochem. Biophys. Res. Commun., 154, 1144-1150.

152. Hussain, M.M., Tranum-Jensen, J., Noren, O., Sjotstrom, H., and Christiansen, K. Reconstitution of purified amphiphilic pig intestinal microvillus aminopeptidase. Mode of membrane insertion and morphology. (1981) Biochem. J., 199, 179-186.

153. Sarcar, S., Jain, Т.К., and Maitra, A.N. Activity and stability of yeast alcohol dehydrogenase (YADH) entrapped in Aerosol ОТ reverse micelles. (1991) Biotechnol. Bioeng, 39, 474-478.

154. Khmelnitsky, Y.L., Hilhorst, R., Visser, A.J., and Veeger, C. Enzyme inactivation and protection during entrapment in reversed micelles. (1993) Eur. J. Biochem., 211, 73-77.

155. Клячко Н.Л., Дулькис Ю.К., Сухорученко T.A., Левашов А.В. Стабильность иустабилизация рекомбинантной пероксидазы хрена в системе обращенных мицелл. (1997) Биохимия, 62, 394-399.

156. Орт Т.А. (1998) Роль углеводов в функционировании и структурной организации ангиотензин-превращающего фермента. Дисс. канд. хим. наук, МГУ, Москва.

157. Ramirez-Silva, L., Gomez-Puyou, M.T., and Gomez-Puyou, A. Water induced transitions in the 1С requirements for the activity of pyruvate kinase entrapped in reverse micelles. (1993) Biochemistry, 32, 5332-5338.

158. Chattopadhyay, S.K., Toews, K.A., Butt, S., Barlett, R., and Brown, H.D. Reversemicelle model: pH, electromagnetic field and inhibitor enzyme interaction. (1997) Cancer. Biochem. Biophys., 15, 245-255.

159. Rahaman, R.S., and Hatton, T.A. Structural characterisation of a-chymotrypsin-containing AOTreverse micelles (1991) J. Phys. Chem., 1991, 1799-1811.

160. Пшежецкий А.В. (1987) Ферменты в агрегатах поверхностно-активных веществ: регуляция каталитической активности структурой матрицы. Дисс. канд. хим. наук, МГУ, Москва.