Стероидные гликозиды нолины мелкоплодной (Nolina Microcarpa) тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ДРУЙБЫ НАРОДОВ АКДЦЕЖЯ НАУК УКРАИНУ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ им. A.B. БОГАТСКОГО

На правах рукописи

ШЕВЧУК Галина Васильевна

УДК 547.918.

СТЕРОИДНЫЕ гликозиды НОЖНЫ МЕЛКОПЛОДНОЙ

(NOIiIHA MICROCARPA) .

02.00.10 - Биоорганическая химия, химия природных и физиологически активных веществ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Одесса - 1991

вллолнона на ка'редре органической и аналитической :<;:••".:'/ '-'-о;польского госунивврсит-зга им. М.Б. л'р.унзе и в л'^о;, лолл;; г;!:.:;::! глилеяидои Ордена Трудового Красного Знаме-,>;; Иис.штутч химия рл.стительнь'х оецеста.АН Узбекистана.

КаучняЗ руководитель - доктор химических наук,

профессор Ь.Я. ЧЯРВД.

Научкуй консультант - кандидат химических наук,

ст.н.сотр. Ю.С. ЧОЛЛЕРНЕР

ОЬщиальние оппоненты - доктор химических наук,

вед.н.сотр. Л.В.. БАКИНОВСКИй

Ведущая организация - Киевский ордена Ленина Государствен-

на заседании специализированного Совета Д.016.58.02 по химическим наукам в Физико-химическом институте им. A.B. Еогатско-го АН У по адресу: 270080, г. Одесса, Черноморская дорога, 86.

Физико-химического института -.•«. A.B. Еогатского АН У.

доктор химических наук, профессор Ю.Л. КЕРЕБИН

ный университет им. Т.Г. Шевченко

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке

tt

Ученый секретарь специализированного Совета кандидат химических наук

Л.А. ЛИТВИНОВА

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРЛСТ1 IrtA РАБОТ':!.

Актуальность темы. Попе:': псрслсктпаньгх v криологи*;^.";: •• них веществ растительного к животного проас-.о - однч v,j

главных задач химии природных соединс-н:!й, т.к. большинство иг. них менее токсичны, чем синтетические и к?гут успе:::;э иркшип-.ь ся в медицине. К такого рода расти?с-зы<1м .че?а«олигтг еггзс.:?-ся стероиды ряда спиростана и фуростана. Jbc изучен.'.* пс;;ется г нескольких направлениях: это поиск новых спиростанолсч-у. с-П'-.г'.~ нинов как исходных веществ для синтеза гормональных прела.'.-атс; и других лекарственных средств, с другой сторон«, стерандннз гликозицы, обладающие протигоопухслевоЯ, аятк:.5:чроСиой, 1улг.:~ цидной, антивирусно;!, ангиокслдаитноЯ активность:?, предстгг ют интерес как биологически активный .материал.

Работа выполнена по плану НЛР СГУ по теме 2.29.4.2,."Химическое изучение природного сырья для изыскания би©логически активных веществ", номер государственной регистрации 01 .SG. С С 091 У..

Цель работы: изучение стероидов ряда спиростана и *урсстана листьев Wolina nlcrocarpa S, ffats растения сенс-Яства Srcca-епасеас разработка рационального способа получения индив/пу-альннх соединений, доказательство строения новея в-зщсстз.

Основная задача диссертации - структурное исследование прн-родных соединений..с использованием современтшт спектральн;:-: методов и химических превращений.

Научная новизна и практическая значимость. Показано, что IT. nicrocarpa является источником стероидные гликозидов. Из листьев этого растения изолировано восемь но si« натившя гли-козидов: из них I спиростанйловьЛ гликозид - ноллноспироэиц С, 5 фуростанолозых. глихозидов - нолино£урозидн А, В, С, р> 2 сульфата псевдофурэстаноловкх гликозидов - нолкно^уролидн а

и Н, причеа, и сульфаты стероидов,и псевдофуростаноловые гли-козиды представляет собой сравнительно немногочисленные группы природных соединения, а эфира серной кислоты псевдофуроста-яоловыг глшеозидов из растительных: источников выделены впервые. В результате химических и ферментативных превращений нативных фуростаноловых тликозидов получили пять ранее неизвестных веществ - нолиногенин, 2 гликоэида ряда спиростана - нолиноегш-розиды В и зз и 2 псевдофуростаноловьзс гликоэида ~ продукты десульфатирования нолинофурозидов С и Н. Следует отметить, что нолиногенин, нолиноспирэзид В и нолинофурозид В являются ¿-стероидами. 3,5-Циклопроизводные спиростана и фуроетана из растительного объекта-выделены впервые. Для всех ранее неизвестных веществ установлено химическое строение.

Работа представляет интерес в плане применения современных физико-химических методов для доказательства строения стероидов производных спиростана и фуроетана. Кроме того, показано, что некоторые вещества проявляют антимикробную и противовоспа-яитвяьную активность. Это определяет практическую .ценность исследования.

На защиту выносится доказательство строения I нового стероидного генина и 12 гликозидов - производных спиростана и фуроетана иг листьев ножны мелкоплодной.

Публикации и апробация работы. Основные результаты диссер-«5® изложены в 4 статьях и "доложены на итоговых конференциях профессорско-преподавательского состава СПГ им. И.В. Фрунзе (1990-1991 г.)......• - ^

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 134 страницах машинописного текста и состоит из обзора литературы (глава I), обсуждения результатов {глава 2), экспериментальной части (глава 3), шводов и списка литературы, включащего 137

источников. Работа иллюстрирована 21 таблицей, 10 схемами, 8 рисунками.

Автор выражает благодарность д.х.н., вед.н.с. ИОХ АН СССР А.С. Шагакову за съемку спектров ЯМР помощь, оказанную при их интерпретации и д.х.н^, вед.н.с. ИХРВ АН УэССР М;Б. Горо-вицу. за консультации при обсуждении' полученных результатов.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ;

I. Стероиды ряде отироствна и фуростана Molina microcarpa. Из спиртового экстракта листьев N. microcarpa методами

препаративной хроматографии на силикагеле изолировано 9 соединений: (25 3)-рускогенин, нолиноспирозид С, нолинофуроэиды А, В, С, D, F, G, н. За исключением (25 S )-рускогенина все соединения являются новыми.

Таблица I.

Стероиды ряда спиросгана и фуростана, выделенные из, líolina niicrocarpa.

№ ! Название ! .

Состав

! Т. пл. ! (°С)

! Ulf ! Выход ! !(град)! % !

1 '25 S)-рускогенин

2 нолиноспирозид С

3 нолинофурозид А

4 нолинофурозид В

5 нолинофурозид С

6 нолинофурозид D

7 нолинофурозидF 22-, О-метиловыЙ эфир

8 нолинофурозид в

9 нолинофурозид Н

С27Н42°4 188-190

СЗЗН52°8 " 209-210

С33Н54°Ю

С40Н6б°14

С39Н64°14

С39Н64°15

С4бН7б°18 C33H5I°9's03Iía ~ C39%r0l3'S03Iía -

-95,4 0,004

-98,2 0,003

-56,0 0,006

-44,2 0,003

-33,0 0,177

-60,2 0,004

-54,6 0,023

-38,4 0,066

-42,2 С,033

- б -

Путем химических и ферментативных превращений из нативных фуростаноловых гликозидов получили 7 веществ, структура 5 из которых установлена впервые. Их название, состав и константы представлены в таблице 2.

При разделении суммы экстрактивных веществ, наряду с выше перечисленными производными спиростана и фуростана выделеш 4 соединения нестероидной природы, идентифицированы с известными веществами (таблица 3).

Таблица 2.

Продукты превращений фуростаноловых гликозидов.

№ ! Название !

! Состав ! Т. пл. ! [ос]* ' ,_ , С°С) ,(град)

-21,7 193-200 -48,0 I99-202 -86,2 227-228- -99,0

110-112 -17,0

125-128 -25,2

10 нолиногенин ^28^44^4

11 нолиноспирозид В ^34%4%

12 нолиноспирозид I) ^33%2°9

13 нолиноспирозид Е ^39%2®12

14 нолиноспирозид Р <^39%2®12

15 продукт десульфатирова-

ния нолинофурозида в ^33^52^9

16 продукт десульфатирова-

ния нолинофурозида Н ^39^62^13

х Удельное вращение веществ определяли в пиридине.

Таблица 3.

Метаболиты нестероидной природы. № ! Название ! Состав ! Т. пл.! Выход

(

! (°С) ! (град)! •• % !

17 (+)-сирингарезинол -А,4-диглюкозид

С34Н46°18 2б2~264 -16,0а 0,003

18 (+)-сирингарезинол

-4-МОНОГТОКОЗИД

С28Н36°12 96-98 _24'ба °'002

19 2-дезоксиаденозин С10Н131Т 503 191-192 -25,0б 0,001

20 2-метил-З-бутен-2-ил-р-О -глюко-

пиранозид сПН20°б 135-136 -21,5а 0,0П

* Удельное вращение определяли а) в пиридине, б) в воде.

Строение нолиноспирозида С (Щ (Схема I). Характерное желтое окрашивание с ванилин-фосфорной кислотой и данные ИК-спек-тра позволили отнести соединение П к ряду (25з )-спиростана. В результате анализа продуктов метанолиза гликозида П методом ГНХ в присутствии С-гжкозы в качестве внутреннего стандарта обнаружено, что "углеводная часть представлена остатком козы. В осадке поело метанолиза,с помощью ТСХ обнаружили (253 ) -рускогеиин, который был выделен и з результате кисло''иого гидролиза нолиноспирозида С.

Схема I,

* Строение нолиноспирозида 'С (П).

и К, =

Значение КССВ (константа спин-спинового взаимодействия) аномерного протона д-фукозы в ПМР-спектре гликозида П (; =8,0Гц) свидетельствует о р-конфигурации гликозицной связи и пираноэ-ной форме окисного цйкла моносахаридного остатка. Сравнение величин химических сдвигов атомов углерода агликона I и монози-да П указывает на присоединение остатка в -фукозы к С-1 атому (25 Б )~рускогенина дС-2=-5,83 й.д.).

Следовательно; нолиноспирозид С имеет структуру 1-0-^-в-фукопираноэил-(25 3 )-спиро'ст-5-ён-1р,3^-диола.

Строение • (Схема 2). Нолинофу-

розида А й С; выДе^ённке в биде смесей 22-ОН-производных и 22-О-метиловьЬс эфйро^ на осНййаййи качественных реакций (ТСХ) были отнесены к клаБ'су ^уростШоловых гликозидов; В результате их кислотного ги^фолйзй ё каждом случае получили (258 )-рускогенин. Метанолйэ с поЬяё&одий айализом Сахаров методом Г1Х показали, что в состав йъййо^роаидй А входит остаток Ь -глюкозы, а нолинофуройййй С - ¿-рлйкоЗа и Б-ф^соэа в соотношении 1:1;

Схема 2;.

V- ...... , - . , - 1 I ' 11 ' í

Строение А (Ш) й С (IX);

№ IV, - » —г---

IX и^-Р-^р Vм

7 Я^'^-Ь-РуСр

Продукт ферментативного гидролиза Ш идентичен (25s )-руско-генину. В результате ферментолиза соединения IX получили спи-ростаноловый гликозид, по константам и спектральным характеристикам не отличающийся от заведомого образца нолиноспирози-да С (П).

Результаты ферментативного гидролиза, данные спектров ЯМР, а также эксперименты с ядерным эффектом Оверхаузера (ЯЭО) с предоблучением аномерных протонов сахарных остатков свидетельствуют о присоединении D-глюкозы к С-26 агликона в нолинофуро-зидах А и С и D-фукозы к С-1 в молекуле последнего.

Таким образом, монозид Ш является 26-0- fi - D-глюкопиранозил -(25S )-фурост-5-ен-1^,Зр,22'^2б-тетраолом, а биозид IX имеет строение 1—0—,р> -D -фукопиранозш1-(25э )-фурост-5-ен-1р,3^,22^, 26-тетраол-26-0-^ - D-глюкопиранозида.

Строение нолино фурозида В (У1 (Схема 3). Нолинофурозид В (У) был получен нагреванием смеси гликозида У и его 22-0-мети-лового эфира У1 з вода. В результате анализа продуктов метано-лиза соединения У методом ГЖХ показано, что в состав молекулы нолииофурозида В входят остатки D-глюкозы и D-фукозы в соотношении 1:1,. что следует также из спектров ЯМР. С помощью ферментативного гидролиза биоэида П получили спиростаноловый гликозид - нолиноепирозид В (УП) и агликон, названию"! нолиногени-ном (УШ). Вещества УП и УШ даят качественные реакции, характерные для стероидов ряда спиростана. В их ИК-спектрах присутствуют полосы поглощения (25S.)-спирокетальной группировки.

Характер масс-спектрометрической фрагментации агликона УШ и элементный состав фрагментарных ионов указывает на то, что нолиногении является диодом, в состав молекулы которого входит метокеильная группа.

Схема масс-спектрометрического распада нолиногенина (УШ).

__СИ2

f m/z • 301

m/z 412

к>

g ш/з 139

Схема 3.

Строение нолинофурозица В (У).

у), а^р-^-'-^р

Я

1 Я, 3/-Р-РчСр : и

Наличие в сильном поле ПМР-спектра генина УШ сигналов у-этиленовых протонов при 0,66 и 1,73 м.д. с ге.минальной КС35 4,СГц убедительно свидетельствует о присутствии в молекуле"спирсста-на УШ циклопропанового кольца. Кроме того, а ПМР-спехтре имеются два сигнала с химическими сдвигами 4,21 и 2,73 м.д., отвечающие резонанеш.! протонов геминальных к кислородсодержащим заместителям, В результате наблюдения ЯЭО установлено, что отмеченные протоны пространственно сближены с протона;,« ангуляр-ной метильной группы при С—ГО (СНд-19). Предоблученне протонов метоксильной группы (сингле? при 3,33 м.д.) ведет к изменения интенсивности сигналов с ХС 2,73 и 1,95 м.д. Кроме того, пред-облучение циклопропанозого протона с ХС 0,65 м.д. ведет к появлению в разностном спектре ЯЭО енгната прогона метоксильной группы и сигнала с ХС 2,73 м.д., что доказызает пространственную сближенность протонов цнклопропанозого кольца и метоксиль-ной группы. Мультиплетность сигнала с ХС 2,73 м.д. (триплет) с константами 3 Гц свидетельствует о том, что он имэе? спин-спиновое взаимодействие только с дву:^я протонами и имеет зква-

ториальную ориентацию, что возможно только в случае локализации аксиальной метоксильной группы у С-6. Следовательно, цик-лопропановое кольцо образовано атомами С-3, С-4 и С-5.

При предоблучении прогона с ХС 4,21 м.д. геминального к гидроксильной группе наблюдали увеличение интенсивности сигналов протонов с ХС 2,37, 2,00, 1,54, 0,77 м.д., отнесенных с помощью двумерной гомоядерной и гетороядерной спектроскопии к Н-2, Н-2 , Н-11е, Н-9, соответственно. Это является доказательством локализации гидроксильной группы у С-1 агликона и ее .^-ориентации в цикле.

то

Сопоставляя данные ^С-ЯМР спектров нолиногенина СУШ) с литературными данными для 3,5-цикло-б-метокси-эргостана, наблюдали удовлетворительное совпадение химических сдвигов С-3, С-4, С-5, С-6 и сигнала атома углерода метоксигруппы.

Таким образом, установлено строение нолиногенина (УШ), как 3^,5-цикло-(25 Б)-спиростан-1/},б^ -диол-б-О-метилового эфира.

Значения КССВ аномерных протонов остатков глюкозы и фукозы в спектрах ПМР глико;:лдов У и УП свидетельствуют о />-конфигурациях соответствующих гликозидных связей и пиранозной форме окисных циклов моносахаридов. Сравнение величин химических сдвигов атомов углерода С агликона УШ и спиростанолозого гликозида УП указывает на присоединение п-фукозы к С-1 атому нолиногенина (Дд_£=+б,93, Д^_2=-3,63 м.д.). Следовательно, нолиноспирозид В является 1-0-/ -В -фукопиранозил-3 />,5-цикло-(253 )-спиростан-1^,6^ -диол-б-О-метиловым эфиром.

Результаты ферментативного гидролиза нолинофурозида В, а также сравнительный анализ спектральных характеристик соединений У, УП, УШ подтверждают, что в гликозиде У л-глюкоза связана с С-25, а В-фукоза с С-1 .агликона. Креме того, наблюдением ЯЭО доказана .пространственная сближенность Н-1 ос-

- 13 -

татка О-глвкоян и 2Н-26 агликона.

Таким образом, нолинофурозид В имеет отроение I—0— — в — фуколиранозил-3р ,5-цикло-'25 Э Муростан-Гр ,&р ,22/\26-тетраол-б-ОСНд-26-О-^ - т> -глюкошгранозида.

Строение ноличо^урозидоз Д 'ХР, Е 'XI Л, ? '>711). 'Схема 4!. Нолино'урозиды Ь 'ХР, £ 'Х1У ^ и ? 'Х7ГР ввиду -к близкой хроматографической подвижности выделили в виде смеси. Аглнкон, образовавшийся при кислотном гидролиз? смеси,идентифицирован с .'25Э ^-рускогеннном. При ферментативном расцеплении смеси, после хроыатографнческого разделения получил:; но-линослнрозиды I) 'Х1!П, Е 'ХУП, т 'XIX'!, Следовательно, исходная смесь фуростаноловкх гликоэидов также состоит из трех пар веществ (Х1-ХП, Х1У-ХУ, ХУП-ШП.

Схема 4.

Строение нэлинофуроэидов В 'лР, Е 'Х1Л, р 'ХУГП.

Я, =[г-1> ,1л~-СЙ-Ь

ДА' А^Л-ь-й/.^/'-Л-Л^

•«У ч

Г ¿гЛ^'

хТц С, Аи'р /'V Л,

Анализ продуктов метанолиза гликозидов ХШ, ХУ1, XIX методом ГЖ в виде триметилсилильных эфиров метилгликозидов показал, что соединение ХШ содержит один остаток С-галактозы, а в состав веществ ХУ1 и XIX входят 3)-ф>укоза и 1-рамноза в соотношении 1:1. По константам и спектральным характеристикам биозиды ХУ1 и XIX идентифицированы с известными веществами 1-0-¿-Ъ -рамнопиранозил-С1—2)-0-/-1) -фукопиранозил-(25з )-спирост-5-ен-1р ,3р -диолом и 1-0-—б -фукопиранозил, 3-0-Ь -рачнопиранозил-(25г )-спирост-5-ен-1 р ,3/> -диолом, соответственно .

Нолиноспирозид О (ХШ) ранее не описан. Сравнительный ана-13

лиз данных спектров С-ЯМР агликона I и монозида ХШ указывает на место присоединения ©-галактозы к С-1 атому (25Б )-рускоге~ нина ( -Л с_£=+5,61, Л^_2=-5,9б м.д.). Из данных спектра ПМР следует ^-конфигурация гликозидного центра и пиранозная форма углеводного цикла. Следовательно, нолиноспирозид и имеет строение 1—0—^ -О -галактопиранойил-(25Б )-спирост-5-ен-1 р> ,ЗуЗ-дио-ла. Методом ТСХ показали, что нолиноспирозиды О, Е, Р присутствуют в суше экстрактивных веществ в следовых количествах._ Многократной рехроматографией на обычных и октадецилсилильном силикагелях удалось выделить свободные от посторонних компонентов смеси веществ Х1-ХП, ХУП-ХУШ.

Нолинофурозид И (XI) получали нагреванием суммы гликозидов XI-ХП в воде, 22-О-метиловкй зфир нолинофурозида Г (ХУШ) -суммы ХУП-ХУШ в мзганоле. Полнота переходов следует из данных спектров ЯМР. А именно, в спектре ПМР гликозида XI отсутствует сигнал протонов, а в спектре 13С-ЯМ? - атома углерода меток-сильной группы. В спектрах 13С-ЯМР веществ XI и ХУШ 0,-22. резонирует при 110,8 и 112,8 м.д., соответственно.

Методом ГЖХ продуктов метанолиза соединений XI и ХУШ опре-

делили, что углеводная составляющая гликозида XI состоит из в-глюкозы и Б-галактозы в соотношении 1:1, а в состав трио-зица ХУШ входит В-глюкоза, В-фукоза Ь-рацноза .

Сравнительный анализ величин химических сдвигов атомов углерода соединений I, XI, ХШ, ХУШ, XIX позволяет утверждать, что в биозиде XI центрами гликозилирования являются С-1 и С-26. Триозид ХУШ представляет собой трисдесмозид и имеет углеводные остатки при С-1, С-3 и С-26. Результаты ферментолиза однозначно определяют локализацию Е-глюкоэы у С-26 агликона. Места присоединения В -фукозы и Ь -рамнозы следуют из строения продукта ферментативного гидролиза XIX и подтверждены наблюдением ядерных эффектов Оверхаузера. Предоблучение Н-1 В-фукозы вызывает усиление интенсивности Н-1 агликона. Тем же методом показана пространственная сближенность Н-1 Ь-рамнозы и Н-3 агликона. Величины КССВ Н-1 свидетельствуют о ^-конфигурации гликозидных центров остатков I) -глюкозы, В -галактозы и В-фу-

козы (г I 2=7»5-8,0

На основании вышеизложенного нолинофурозид В (XI) имеет строение. 1-0--В -галактопираноэил-(253 >-фурост-5-ен-1 р ,3/ , 22оС,26-тетраол-26-0-/)-В -глюкрпиранозида; нолинофурозид Р является 1-0-у1 -Г» -фукопиранозил, 3-0- ы. -Ь -рамнопиранозил-'25 Э )-фурост-5-ен-1 р ,. ,22о£ ,25-тетраол~26-0-/3-В -глвко-пиранозидом. Нам не удалось выделить индивидуальный нолинофурозид Е (Х1У), однако из строения продукта его ферментолиза -нолиноспирозида Е следует, что этот глчкозид имеет строение 1_0_о<Г_ь -рамнопиранозил-(1—2)-0-у?-И -фукопиранозил-'25 Э фурост-5-ен-1уЗ ,3р ,22 Ы ,26-тетраол-2б-0-/> - В -глюкопирзнознда.

Строение нолино*урозидов 5 (XXI и Н 'ХХШ 'Схема 53. Нолинофурозицы в и Н после хроматографического.разделения получены в виде индивидуальных соединений в отличил от зсе:г

вязе описанных фуростаноловых гликозидов, которые в результате хроматографии в метанолсодерхащих системах были выделены в виде смесей 22-оксипроиэводных и 22-0-мотиловых зфиров.

В спектрах 13С-ЯлР соединений XX, ХХП отсутствует сигнал в области I09-112 м.д., отвечающий С-22 стероидов ряда фуроста на,,а имеются сигналы при 152,5 и 103,7 м.д., обусловленные резонансом четвертичных атомов углерода в соответствии с APT [ attached proton tost). В спектрах ГЕДР гликозидов XX и ХХП протоны четырех метальных групп резонируют в виде трех синг-летов и одного дублета, в то время как в фуростаноловых гли-козидах две метальные группы являются третичными и две вторичными. Такие спектральные характеристики присущи производным псездофуростана ( д -фуростана).

Среди продуктов метанолиза и кислотного гидролиза нолинофу-розидов G и PI идентифицировали (25S)-рускогенин. Методом. ГдХ определили, что в состав гликозида XX входит остаток d -глюкозы, а всостав соединения ХХП - d -глюкоза и d -фукоза в соотношении 1:1. Значительно более высокая полярность моно-зида XX и биозида ХХП по сравнению с нолинофурозидами А и С, имещпми такой ке углеводный состав, монет объясняться присутствием в молекулах нолинофурозидов G и Н полярных остатков.

Б ИК-спектрах этих соединений имеется интенсивная широкая полоса при 1200-1300 см~^, которая может быть обусловлена колебаниями 5=0 связи. В масс-спектрах электронного удара присутствует пик иона си]% 54, отвечающий отрыву so2 з спектрах lsius - пики ионов, соответствующие отрыву UaHSO^ .:?и добавлении раствора BaCIg в гидролизаты соединений XX, ХХП образуется осадок. В золе, полученной после сжигания ве~ цэстб обнаружили натрий, Следовательно, нолинофурозиды g и Л я'ляйтся натриевыми солями сульфатов псевдофуростаноловых

ГЛИГ.СЗИЦОЗ.

Строение нолинафурозидов о:

XJC яi-sOjÁb

XX//Hrfl~b-Fu£r .11,'SC^a

m - н

Ú R, -р-Ъ-FuCp

(хх),,н (ххт.

Схема 5.

-р-Ъ-с-и

л/1 Ч, = н

■СI I

- 1С) -

Нагревание водных растворов соединений XX и ХХП привело

20^22)

к десульфатированию и гидратации Л -связей, в результате

чего образовались гликозиды, идентичные нолинофурозидам А и С. Отот факт, подтвержденный спектрами Я.'.й3 однозначно определяет место присоединения £>-глвкозы к С-26 агликона в соединениях

:<Х и ХУЛ и Е—фукоэы к С-1 в гликозиде ХХП.

20'22)

Для того чтобы избегать гидратацию д ^ -связей,, десуль-фатирование нолинофурозидов о и Н проводили в среде безводного пиридина с диоксаном. Положение этерифицирующих групп установили в результате сравнения спектров ЯДР гликозидов XX, ХХП и продуктов их десульфатирования XXI, ХХШ, соответственно. При переходе от продукта десульфатирования XXI к сульфату XX существенные изменения наблюдаются только для химических сдвигов С-1 и С-2 стероидной части молекулы ( Л £_]-=+б,73, -4,32 ц.п,.), в спектре ПМР гликозида XX сигнал Н-1 агликона сдвигается в слабое поле на 0,97 м.д,, что свидетельствует о местоположении сульфатной группы у С-1 агликона. Следовательно, нолинофурозиц о (XX) представляет собой натриевую соль 1-суль-фата-(25Э )-фурост~5,20(22)-циен-1^ ,3 ^ ,26-триол-26-0-^-П -глюкоп'лраноэида.

При сопоставлении данных спектров соединений ХХП и

ХХШ, на основании значений эффектов этерификации ( Д . +7,05, Л2_2=-6,41, установлено, что суль-

фатная группа присоединена к 0-3 атому агликона. Величина ¿¡С-2 обусловлена аддитивное-/.-;:) ^-эффектов гликозилирования и этерификации.

Таким образом, нолинофурозид Н (ХХП) является натриевой солью 3-сульфата, 1-0-/,-В -фзукопиранозил-(253 )-чфурост-5,20 (22)-диен-1уз , 3р ,26-триол-2б-0-у^ - О -глюкопиранозида.

-тэ-

ги Биологическая активность некоторых гликозидов, выделенных из Holina nicrocarpa.

Антимикробная активность стероидных глякозидов'изучолась в отделе микробиологии АН республики Молдова к.б.н., ст.н.сотр. Бурцевой С,А. Вещестза испытывала в концентрациях ICOO, 5С0, 100, 10 мкг/мл. Отмечено, что большинство гликозидов фуроста-нолового типа подавляют рост золотибтого стафилокоха, зоны подавления роста составили от 14 до 28 мм. Для спорообразую-щих бактерий B^oillua subtilia и в отдельных случаях В. aeseníerlcua наблюдается стимуляция их роста. Поцазлекие роста дрожаеподобного гриба Candida albicans отмечено для нолинофурозидов С и продукты десульфатирования нолинофуро-'зидов G и Н (зоны подавления роста достигли от 10-до 20 мм^. Наличие сульфатной группы отрицательно сказывается на активности против .дрожжей и дрокжеподобных грибов рода Candida

Представляет практический интерес стимулирующее действие нолиноспирозида D и нолинофурозидов С и F на рост каротнн»-образуюцих бактерий.

Действие стероидных гликозидов на фитопатогенныз бактерии изучали на четырех культурах: Corynetacteriua nichiganenge, вызывающих бактериальный рак томатов, Xantoaonae canrpestris -сосудистый бактериоз капусты, Pseudoscnaa 2аолгуяапз ' бактериоз огурцов, Corynebacteriira insidiоsun -бактериоз люцерны. Бактерицидная активность стероидная гликозидов исследовалась в концентрациях 1000, 4С0, ICO, 40, 10, 4 нкг/мл» Нолиноспирозид D и десульфатированные псевдсфуро-станы подавляют рост всех культур в концентрациях до 4 мкг/мл. Гликозиды ряда фуростана и сульфаты псевдофуростанов активны в концентрациях 1000, 400, 100 мкг/мл.

Высокая активность веществ против фитопатогенных бактерий позволяет считать стероидные гликозиды ряда спиростана и.псев-дофуростана. перспективными для борьбы с заболеваниями сельскохозяйственных культур.

В лаборатории. фармакологии Института химии; растительных веществ АН Узбекистана, к.б.н. Сыровым В.Н. была изучена противовоспалительная активность нолинофурозидов-С и у Установлено, что названные вещества.по противовоспалительной активности, приближаются к лекарственному средству преднизон-ацетату. Противовоспалительный.эффект в $ составил:для нолинофурозида С - 52,6, нолинофурозида. Р- 69,2 (гфеднизон-ацетат - 66,7 %).

ЭЫ.ВОДЫ

I. Показано, ЧТО Но11аа т!огосагра. (сем. Бгасаепасеае) • является источником стероидов ряда спиростана и фуростана. Из надземной части растения выделено. 8 новых гликозидов: из них I спиростаноловый гликозид - нолиноспироэид С, 5 фуростаноловых гликозидов - нолинофурозида А., В, С, за, г, 2 сульфата псевдофуростаноловых гликозидов - нолинофурози-ды 8 иЙ,

2. В результате химических и ферментативных превращений дативных фуростаноловых гликозидов получили 5 ранее неизвестных веществ: нолиногенин, 2 гжчкозида ряда, спиростана - нолино-спирозяды В и I) и 2 псевдофуростаноловых гликозида - продукты десульфатирования нолинофурозидов а н Н.-

3. Доказано строение нолиноспирозида С как 1-0—уз — к-фукопи-ранозил-(25 3)-спирост-5-ен-1^ -диола. Установлено, что нолинофурозиды А и С являются (25 з)-фурост-5-ен-Г^, Зуз, 22./,26-тетраоя-26-0-у*>~ В-глпкопираноэидом и

1-0-/" - р -фукопираноэил-(25 )-фуросг-5~ен~1уЗ , Зуо ,22 , 26-теграол-26-0~/< - в -глхжолиранозидои, соответственно.

4. Показано, что нолинофурозид В имеет строение 1-0--фукопиранозил-3 р ,5-цикло-(25 3 ^-фуростан-1р , 6/, ,22/ , . 25-татраол- б-0-СНд-2б-0-р -2 -глахопкранознца, а нолино-генин и нолиноспирозид В являются Ър ,5-цикло-(25 5)-спи-ростан-1 р, ,6/ь -диол-б-О-метидовым эф/ром и 1-0-Л - а-|у-копкранозил-Зу, ,5-цикло~(25 3>-спиростан-1 р ,6р -д;«ол-

б—0—метиловым эфиром, соответственно.

5. Доказано строение нолинофурозида в ,как 1-0-^ - и-галакто-Шфанозил-(25 э )-$урост-5-ен-1/) ,3/ ,22-л ,26-тетраол-25-0-р - о-глюкопиранозида и нолиноспирозида в , как 1-0-/? -з галакгогофанозил-(25 э )-спирост-5-ен-1/1 ,3 л -диода.

6. Установлено строение нолинофурозида Е на основании структуры продукта ферментативного гидролиза, как 1-0-.¿- ь-ра\шогг.фанозид-(1-*-2)-0-/>-0 -*фукопираноэил-(25з )-фурост-5-ен-1/1 ,22 ,25-тетраоя-2о-0-р - в-глюкопиранозида.

7. Показано, что нолинофурозид ? имеет строение 1-0-/>-и -фукопиранозил-3-0 -/-ь -рамнопиранозил-(25з )-фурост-5-ен-I ,3р ,22 ,2б-тетраол-26-0-/, -в -глюкопиранозида,

8. Доказано, что нолинофурозид о представляет собой натриевую соль 1-сульфата-(25з )-фурост-5,20(22)-диен-1 ,5 ,3/ , 26-триол-2б-0-/> -в -глюкопиранозида, а нолинофурозид Н -натриевую соль З-сульфата-1-0-^-в -фукопиранозил-(25з )-фурост-5,20(22»-диен-1^ ,3/ ,26-трнол-2б-0-^-в -глвкопи-ранозида.

9. Установлено строение продуктов десульфатярования нолннсфу-розидов с и Н, как (253 )-фурост-5,20(22>-диен-1 з ,3л, 2б-тряол-2о-0-/ -I) -глюкоп'.гранозида и 1-0-р -В -фукопира-

H03Hä-(25s )~фурост-5,20(22)-диен-Iji> ,3 p ,26-триол~26-0~ pj) -глпкопиранозида, соответственно.

10. Показано, что ферментативный гидролиз псевдофуростанов протекает с образованием смеси нормального спиростана и цикло псевдоформы.

11. Из экстракта Nolina tnicrocarpa выделены и идентифицированы 4 вещества нестероидной природы: (н-)-сирингарсзннол-4',4"-диглюкозид, (+)-скрингарезинол-4' -моноглахозид, 2'-дезоксиадеиозин и 2-метил-3-бутен-2-ил~ f> -d -глюкопи-ракозид.

12. Для нолкноспирозида D и продуктов десульфатирования ноли-нофурозидов G и Н показана высокая антимикробная активность по отношению к фитапатогенным бактериям, а для ноли-нофурозидов С и У -противовоспалительная активность.

Основное содержание диссертации изложено в следующих публикациях:

1. Шевчук Г.В., Воллернер Ю.С., Шашков A.C., Чирва В.Я. Стероиды ряда спиростана и фуростана Holina raicrocarpa I. Строе!гие нолиноспирознда С, нолинофурозидов А и С./ Химия природ, соединений. - 1991. - Р5. - С. 672-678.

2. Шевчук Г.В., Воллернер Ю.С., Шашков A.C., Чирва В.Я. Стероиды ряда спиростана и фуростана Uolina raicrocarpa П. Строение нолиноспирозида D, нолннофурозидов D, Е, т Химия природ, соединений. -1991. - №5. - С. 678-685.

Ы ■

1