Строение и некоторые свойства вторичных метаболитов из дальневосточной популяции бурой водоросли Dictyota dichotoma тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

На правах рукописи

Колесникова Софья Александровна

Строение и некоторые свойства вторичных метаболитов из дальневосточной популяции бурой водоросли йШгоШпа

02.00.10 - биоорганическая химия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой кандидата химических нау]

□□3457688

Владивосток - 2008

003457688

Работа выполнена в Тихоокеанском институте биоорганической химии Дальневосточного отделения РАН

Научный руководитель доктор химических наук,

академик РАН Стоник В.А.

Официальные оппоненты: доктор химических наук,

член-кор. РАН Кучин A.B.

кандидат химических наук, старший научный сотрудник Уткина Н.К.

Ведущая организация: Институт биологии моря

им. A.B. Жирмунского ДВО РАН

Защита состоится «23» декабря 2008 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д. 005.005.01 в Тихоокеанском институте биоорганической химии ДВО РАН по адресу: 690022, г. Владивосток, проспект 100 лет Владивостоку, 159, ТИБОХ ДВО РАН. Факс: (4232) 314-050, e-mail: scienceiapiboc.dvo.ru

С диссертацией можно ознакомиться в филиале Центральной научной библиотеки ДВО РАН (г. Владивосток, проспект 100 лет Владивостоку, 159, ТИБОХ ДВО РАН). Текст автореферата размещен на сайте совета http://www.piboc.dvo.ni

Автореферат разослан «//» ноября 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор химических наук, старший научный сотрудник

'UM

Авилов С.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Бурые водоросли (отдел РЬаеорЬута) широко распространены в Мировом океане, многие из них доступны и представляют интерес как источники полисахаридов и низкомолекулярных вторичных метаболитов. Последние могут быть использованы для исследования их биологической роли и свойств, включая физиологическую активность, и с целью создания новых лекарственных препаратов. Структурное изучение этих соединении расширяет знания о биохимическом разнообразии в морских низших растениях. С другой стороны, некоторые виды бурых водорослей известны тем, что они содержат большое количество разнообразных вторичных метаболитов и, собранные в различных зонах Мирового океана, могут различаться по химическому составу этих веществ. Особенно это касается широко распространенных сложных в таксономическом отношении родов и видов, возможно, представляющих собой на самом деле серию трудно отличимых друг от друга таксономических единиц.

Бурые водоросли, принадлежащие к семейству В1йуо1асеа, являются хорошо известными источниками низкомолекулярных соединений, в том числе физиологически активных. До сих пор исследования этих водорослей нередко приводят к выделению новых природных веществ.

Одним из двух видов этого семейства, обитающих в российских дальневосточных водах, является 0'Шу<Ха сИскоШш. Несмотря на то, что род Ви-лусЯа — один из наиболее изученных в отношении содержания вторичных метаболитов, до последнего времени отсутствовали какие-либо данные о природных соединениях, выделенных из российских популяций водорослей этого рода, в том числе из В. сНско1ота. Поэтому изучение химического состава водорослей В1с1уо1а зрр., произрастающих на Дальнем Востоке России, является актуальным.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлось выделение и установление строения вторичных метаболитов из дальневосточной бурой водоросли ВЩюга йкЪоШта (класс Сус1о$рогорЬусеае, порядок Б^оШ^, семейство' Ою1уо1асеае).

К задачам исследования относились: 1) выделение индивидуальных природных соединений из различных сборов водоросли О. сИсИоШпа] 2) структурная

идентификация известных ранее вторичных метаболитов, найденных в изучаемых водорослях; 3) поиск и установление строения новых метаболитов; 4) сравнение состава вторичных метаболитов в образцах £>. ШсИоЮта, собранных в одном и том же месте, но в разные годы; 5) изучение цитотоксической активности выделенных соединений.

Для достижения цели и решения задач работы были выполнены следующие исследования: 1) из водоросли П. сНсЪмота 2004 и 2006 годов сбора с помощью хроматографических методов выделены серии индивидуальных природных соединений; 2) проанализированы ЯМР и масс-спектральные данные и определены физические константы выделенных веществ; 3) идентифицированы известные ранее вторичные метаболиты, в том числе и те, которые впервые были обнаружены в экстрактах водорослей этого вида; 4) установлены структуры новых выделенных соединений, включая абсолютную стереохимию для некоторых из них; 5) изучены цитотоксические свойства серии выделенных из О. сИс1го1ота веществ в отношении нескольких клеточных линий.

Положения, выносимые на защиту:

1) Бурая водоросль Д сИскоШпа, произрастающая в российских дальневосточных водах, является богатым источником низкомолекулярных вторичных метаболитов, главным образом дитерпеноидов.

2) Из бурой водоросли О. сИсИо1ота выделены новые дитерпеновые углеводороды, энга-эрогоргиаен и 1,5-цикло-5,8,9,10-тетрагидроэрогоргиаен, имеющие, соответственно, 1Л,45,117? и 1Л*,45*,55* ,95*, 105*, Щ конфигурации асимметрических центров. 1,5-Цикло-5,8,9,10-тетрагидроэрогоргиаен представляет новый тип дитерпеновой скелетной системы.

3) Новые дитерпеноиды, диктиогидропероксид и гидропероксиацетоксикренулид, являются первыми природными гидропероксидами, выделенными из водорослей рода ОкЦо1а, и имеют 1Д*,45*,55*,6Л*,75*,11Л*,145* и 35,4Л,6Я,75,95,1 ОН, 12-транс конфигурации, соответственно.

4) Вторичные метаболиты из Б. {ИсИо^та проявляют цитотоксическую активность по отношению к нескольким культурам опухолевых клеток, а также нормальным мышиным эпителиальным клеткам.

Научная новизна и практическая ценность работы. Из двух сборов бурой водоросли В. сИс!ю1ота были выделены 20 низкомолекулярных вторичных метаболитов. Спектральными методами и химическими трансформациями определено строение 4 новых соединений, а именно: 2 дитерпеновых углеводородов и 2 гидропероксидитерпеноидов, и структурно идентифицировано 16 ранее известных веществ. Показано, что химический состав дальневосточной водоросли £>. сИс!ю1ота мало зависит от времени сбора. Практическое значение данного исследования состоит в развитии методов выделения и установления строения новых природных низкомолекулярных вторичных метаболитов из водорослей. Установлена умеренная цитотоксическая активность ряда выделенных веществ, что открывает путь к их химическим модификациям с целью получения из них более активных производных.

Апробация работы. Материалы работы были представлены на X Международной школе-конференции по актуальным проблемам химии и биологии, 2006, МЭС ТИБОХ ДВО РАН; на IV Всероссийской научной конференции «Химия и технология растительных веществ», Сыктывкар, 2006; на V Всероссийской научной конференции «Химия и технология растительных веществ», Уфа, 2008; на 1-вом Дальневосточном международном симпозиуме по наукам о жизни, Владивосток, 2008.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 2 статьи и 5 тезисов докладов.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, посвященного вторичным метаболитам бурых водорослей рода Б1С1уо1а, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов, списка литературы, включающего 137 цитируемых работ, и 12 приложений. Работа изложена на 126 страницах, содержит 7 таблиц, 9 схем и 8 рисунков.

Автор выражает глубокую признательность своему научному руководителю академику Стонику В.А. Автор благодарит также чл.-корр. РАН Васьковского В.Е., привлекшего наш интерес к изучению водорослей и оказавшего помощь в сборе биологического материала, д.х.н. Калиновского А.И. - за получение и в ряде случаев интерпретацию ЯМР спектральных данных, к.х.н. Дмитренка П.С. и Моисеенко О.П. - за получение масс-спектров, к.б.н. Сергееву О.С. - за определение видовой принадлежности исследованных водорослей, к.б.н. Сибирцева Ю.Т.,

к.б.н. Мензорову Н.И., к.х.н. Федорова С.Н. и студента ДВГУ Дышлового С.А. - за проведение испытаний биологической активности полученных веществ.

Некоторые используемые сокращения: ВЭЖХ - высоко эффективная жидкостная хроматография; ТСХ - тонкослойная хроматография на пластинках с закрепленным слоем; ГЖХ - газо-жидкостная хроматография; HR EI-MS - масс-спектрометрия с ионизацией электронным ударом высокого разрешения; LSI-MS -масс-спекрометрия с жидкостной вторично-ионной ионизацией; HR ESI-MS - масс-спетрометрия высокого разрешения с электро-распылительной ионизацией; 'Н и 13С ЯМР - спектроскопия ядерного магнитного резонанса на протонах и ядрах углерода; с - синглет; д - дублет; т - триплет; кв - квартет; м - мультиплет; уш - уширенный; COSY — корреляционная спектроскопия; DEPT - неискаженное усиление переносом поляризации; НМВС - гетероядерная многополосная корреляция; HSQC -гетероядерная одноквантовая корреляция; NOE - ядерный эффект Оверхаузера; NOESY - спектроскопия ядерного эффекта Оверхаузера и обмена; УФ -спектроскопия в УФ области электромагнитного спектра; ИК - спектроскопия в инфракрасных лучах.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Изучение вторичных метаболитов из D. dichotoma 2004 года сбора

Выделение вторичных метаболитов из образца водоросли D. dichotoma, собранной в бухте Троица на МЭС ТИБОХ ДВО РАН в августе 2004 года, проводилось сочетанием методов экстракции, колоночной хроматографии и ВЭЖХ. В результате были выделены 10 соединений, включая два новых дитерпеновых углеводорода. Ранее известные соединения были идентифицированы сравнением их ЯМР и масс-спектров и физических констант с литературными как природный углеводород пентадекан (1), сесквитерпеновый спирт аксенол (2) и дитерпеноиды изопахидиктиол А (3), пахидиктиол А (4), 18-гидрокси-3,7-долабелладиен (5), диктиолактон (6), дилофолид (7) и диктиотин В (8). Соединения 1 и 7 из водоросли рода Dictyota выделены впервые.

Структуры и стереохимия двух новых выделенных веществ 9 и 10 были определены методами одно- и двумерной ЯМР спектроскопии, масс-спектрометрии, а также сравнением полученных данных с приведенными в литературе.

9 10

Соединение 9 на основании данных 13С (БЕРТ) ЯМР спектров и НП Е1-М8

имеет состав С2оН30. В его 13С ЯМР спектре присутствовали сигналы двадцати углеродных атомов (пяти СН3, четырех СН2, семи СН и четырех С). Анализ 'Н и 13С ЯМР спектров соединения 9 показал наличие в его структуре 1,2,4-трехзамещенного бензольного кольца [§н 7,16 м.д. (1Н, д, 7=7,9); 6,95 м.д. (1Н, д, /=7,9); 7,10 м.д. (1Н, с); 8С 126,9 м.д. (СН); 126,6 м.д. (СН); 128,5 м.д. (СН); 134,9 м.д. (С); 140,0 м.д. (С);

140,6 м.д. (С)], трехзамещенной двойной связи [§н 5,28 м.д. (1Н, уш. т, /=7,2); 5с 125,5 м.д. (СН); 131,0 м.д. (С)], метальной группы, соединенной с ароматическим ядром

[8Н 2,20 м.д. (ЗН, с); 8С 21,3 м.д. (СН3)], двух олефиновых [5Н 1,72 м.д. и 1,60 м.д. (каждый ЗН, с); 5С 18,0 м.д. и 25,9 м.д. ( каждый СН3)] и двух вторичных метальных

групп [8Н 1,22 м.д. (ЗН, д, /=6,9) и 0,72 м.д. (ЗН, д, /=6,6); 5С 22,1 м.д. и 14,7 м.д. (каждый СН3)]. Полученные данные показали, что соединение 9 является бнциклическим дитерпеноидом, содержащим бензольное кольцо. COSY-45-HSQC эксперименты выявили наличие в структуре молекулы фрагмента (СН3)СН-(СН2)2-СН-СН(СН,)-(СН2)2-СН=С(СНз)2. Корреляции в НМВС спектре соединения 9 (Рис. 1) позволили связать полученный фрагмент структуры с бензольным кольцом и определить положение ароматического метила в молекуле. Таким образом, было установлено, что структура соединения 9 идентична структуре серрулатанового дитерпеноида эрогоргиаена, ранее выделенного из западно-индийской горгонарии Pseudopterogorgia еШаЬеЛае и обладающего значительной противотуберкулезной активностью. Это подтвердилось также совпадением молекулярных масс в спектрах высокого разрешения НЛ ЕТ-МБ этих соединений.

Относительная стереохимия асимметрических центров в соединении 9 была установлена КОЕБУ экспериментом (Рис. 1) и *Н ЯМР декаплингом. В ЖШБУ спектре соединения 9 наблюдались корреляции протонов Н-1/На-3 и Н-4/Нр-2. При подавлении сигнала протона Н-1 [8Н 2,66 м.д. (м)] в 'Н ЯМР спектре наблюдалось вырожденение триплета дублетов дублетов сигнала протона Нр-2 [5Н 1,27 м.д. (/=11,7; 9,7; 3,1)] в триплет дублетов (/=11,8; 3,1). Большая константа спин-спинового взаимодействия протонов Н-1 и Нр-2 показала, что данные протоны являются псевдоаксиальными и, следовательно, протоны Н-4 и На-3 также псевдоаксиальны, а заместители при С-1 и С-4 углеродных атомах, в свою очередь, псевдоэкваториальны.

Интенсивная NOE корреляция протонов СН3-18/На-3 указывала на то, что преобладающей конформацией соединения 9 является та, при которой наблюдается гош-взаимодействие группы СН3-18 и углеродного атома С-3. Это предположение подтверждалось также достаточно интенсивной NOE корреляцией протонов Н-5/Н-1 i. Таким образом, была установлена пространственная близость протонов Нр-2 и Н-4 на одной стороне, а группы СН3-18 и протонов Н-1, На-3 на другой стороне молекулы.

Полученные данные соответствовали двум возможным энантиомерным конфигурациям соединения 9. 15,4/^,115 абсолютная конфигурация эрогоргиаена была доказана его энантиоселективными синтезами. Соединение 9 показало оптическое вращение [ct]D20 -28,0° близкое по значению, но противоположное по знаку оптическому вращению эрогоргиаена [a]D25 +24,4°. Следовательно, оно имеет абсолютную конфигурацию и является новым энш-эрогоргиаеном или (-)эрогоргиаеном.

Таким образом, было показано, что дитерпеноид 9 структурно близок к метаболитам псевдоптеразиновой серии из горгонарий Pseudopterogorgia spp. Эти природные вещества известны своими противовоспалительными и анальгетическими свойствами. Ранее в литературе были описаны случаи биохимического параллелизма в биосинтезе терпеноидов между бурыми водорослями и кишечнополостными, что, возможно, объясняется участием микроводорослевых симбионтов горгонарий в биосинтезе дитерпеноидов. Несмотря на то, что уже описаны случаи биосинтеза энантиомерных вторичных метаболитов морскими беспозвоночными, относящимися к одному роду или даже виду, случаи их обнаружения в морских организмах, принадлежащих к столь различным таксонам, как кишечнополостные и бурые водоросли, являются довольно редкими.

Дитерпеноид 10 на основании данных UC (DEPT) ЯМР спектров и HR EI-MS имеет состав С2оН32. В его 13С ЯМР спектре присутствовали сигналы двадцати углеродных атомов (пять СН3, пять СН2, семь СН и три С). Анализ 'Н и ПС ЯМР спектров соединения 10 показал наличие в его структуре двух трехзамещенных двойных связей [5Н5,09 м.д. (1Н, уш. т, 7=7,0), 8С 125,1 м.д. (СН); 131,0 м.д. (С) и 5Н 5,19 м.д. (1Н, уш. с), 5С 116,0 м.д. (СН); 143,9 м.д. (С)], трех олефиновых [8Н 1,68 м.д. (ЗН, с), 8С 25,7 м.д. (СН3); SH 1,66 м.д. (ЗН, кв, J=2,0), 5С 23,1 м.д. (СН3) и 8И 1,60 м.д. (ЗН, уш. с), 8С 17,6 м.д. (СН3)], одной вторичной [8Н 0,88 м.д. (ЗН, д, ./=7,0), 8С 15,5 м.д.

(СН3)] и одной третичной [8Н0,78 м.д. (ЗН, с), 6С 19,2 м.д. (СН3)] метальных групп. На основе полученных данных было предположено, что соединение 10 является трицпклическим дитерпеноидом. Анализ данных С08У-45-Н8(2С и НМВС (Рис. 2) спектров показал наличие в структуре 10 фрагментов СН-С(СНз)=СН-СН2 и СН-СН(СНз)-(СН2)2-СН=С(СНз)2. Полная структура и относительная стереохимия 1,5-цикло-5,8,9,10-тетрагадроэрогоргиаена (10) были установлены при помощи НМВС и ЫОЕЗУ (Рис. 2) экспериментов.

Рис. 2. 'Н-'Н COSY и ключевые НМВС и NOE корреляции для соединения 10.

В НМВС спектре соединения 10 наблюдались корреляции протона Н-10 с сигналами четвертичных углеродов С-6 и С-1, метиленовым углеродом С-8 и двумя метановыми углеродами С-11 и С-5. Вместе с другими НМВС корреляциями, такими как Нз-20/C-l, С-2, С-5, Н-9/С-5, С-7 и Н-5/С-9, они указывали на присутствие в структуре соединения циклобутановой системы. В ЯМР спектрах соединения 10 практически не наблюдалось взаимодействий протона Н-10 и соседних с ним протонов Н-4, Н-5 и Н-9, что указывало на то, что диэдральные углы между этими протонами близки к 90°. Подобное же отсутствие расщепления сигналов протонов отмечалось в 'Н ЯМР спектре лемналола - сесквитерпеноида, содержащего такую же мостиковую циклобутановую систему. Кроме того, в 'Н ЯМР спектре соединения 10 были обнаружены и другие особенности, известные из спектров природных сесквитерпеноидов, содержащих мостиковую циклобутановую систему. Так, сигнал протонов олефиновой метальной группы СН3-19 в спектре проявлялся в виде квартета, что обусловлено влиянием метиленовых протонов Нар-8, разделенных с протонами метила пятью связями. Спин-спиновое взаимодействие протонов через

четыре связи с константой около 6 Гц наблюдалось также между протонами Н-9 и Н-5. Эти особенности характерны и для 'Н ЯМР спектра а-пинена. Трициклический фрагмент структуры соединения 10 идентичен фрагменту структуры а-копаена -компонента некоторых растительных масел.

Кросс-пики Н^р-Ш-гО, Нр-8/Н3-20, Н-9/Н3-18, Н-10/Н3-18, наблюдавшиеся в МОЕБУ спектре соединения 10, показали, что протоны Н-9, Н-10 и углеродный атом С-11 находятся по одну сторону от плоскости молекулы. На основе этих данных и результатов НМВС эксперимента была установлена 1Л*,4$'*,5>$*,95'*,10,$'*,Щ относительная стереохимия соединения 10.

Соединение 10 представляет новый тип трициклической дитерпеновой скелетной системы и относится к группе так называемых «продолженных или пренилированных сесквитерпеноидов» бурых водорослей.

2. Структурное изучение соединений из ¿>. Шс1го1ота 2006 года сбора

Образец водоросли Д сИсИоШпа 2006 года сбора был последовательно экстрагирован этанолом и гексаном. Сочетанием хроматографических методов из полученных экстрактов были выделены 17 соединений, включая два новых дитерпеновых гидропероксида. Идентификация известных соединений проводилась сравнением их ЯМР и масс-спектральных данных и физических констант с литературными значениями. Семь выделенных вторичных метаболитов были идентифицированы с ранее обнаруженными в сборе 2004 года соединениями 1-5, 9 и 10. Кроме того, были идентифицированы дитерпеноиды 18-гидрокси-2,7-долабелладиен (11), 10-ацетокси-18-гидрокси-2,7-долабелладиен (12), диктион (13), диктиол I (14) и ацетоксикренулид (15), стерины фукостерин (16) и сарингостерин (17) и ациклический тритерпеноид сквален (18). Присутствие и сравнительно высокое содержание сквалена (18) (0,003% от сухого веса водоросли) в бурых водорослях семейства Ою1уо1асеае отмечены впервые.

{«.Н о утк--гн ОН

/ но / но /

АсО 12 13 / 14

Структуры и стереохимия двух новых соединений 19 и 20 были установлены методами одно- и двумерной ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии при помощи химической трансформации и сравнения полученных данных с литературными.

19 20

Новое соединение, названное дикгиогидропероксидом (19), было выделено из этанольного экстракта водоросли D. dichotoma. Согласно двадцати сигналам в 13С ЯМР спектре и масс-спектрам HR (-)ESI-MS его структура соответствовала брутто-формуле С20Н33СЮ4. Крайне редкое для вторичных метаболитов из водорослей рода Dictyota присутствие атома хлора в структуре соединения подтверждалось также характеристическим соотношением пиков с m/'z 373 [М+Н]+, 374 [М+1+Н]+ и 375 [М+2+Н]+ (7/2/3) в (+)LSI-MS спектре соединения 19. Кроме того, фрагментарные пики с m/z 339/340/341 [M+H-HOOHf и m/z 321/322/323 [М+Н-Н00Н-Н20]+ в (+)LSI-MS спектре указывали на присутствие в изучаемом соединении гидропероксидной функциональной группы. Это было подтверждено также качественной реакцией соединения 19 с раствором соли KI.

ЯМР спектры 19 были сходны со спектрами ранее известного и также выделенного из исследуемого образца D. dichotoma хлор-содержащего дитерпеноида диктиола J (14). Так, они содержали сигналы, отнесенные к атомам двух метальных

групп (SH 1,56 м.д., Me-16; 1,61 м.д., Me-20; каждый ЗН, с), связанных с четвертичным углеродом при хлоре (5с 75,9 мл., С-15), вторичному метилу [8Н 1,01 м.д. (д, J=6,5), Ме-19], а также экзометиленовой группе [5Н 4,63 м.д. и 4,71 м.д. (каждый 1Н, уш. е.), СН2-18] и двум гидроксилированным метиновьм группам [5нЗ,62 м.д. (дд), СН-14 и 4,25 м.д. (дц), СН-6]. В то же время в отличие от ЯМР спектров 14 в спектрах 19 присутствовали сигналы атомов дизамещенной двойной связи [8Н 5,69 м.д. (1Н, дц, J= 2,0; 5,8); ос 134,4 м.д. и 5Н5,86 м.д. (1Н, дц, /=1,9; 5,8); 5С 134,2 м.д.], а сигналы метальной группы [8Н 1,43 м.д. (ЗН, с); Sc 19,2 м.д.. Ме-17] при четвертичном атоме углерода характеризовались другими химическими сдвигами. Рассмотренные ЯМР данные, а также отсутствие характеристического для масс-спектров гидроазуленовых дитерпеноидов пика фрагментарного иона с т/г 159 позволили предположить, что 19 является бициклическим дитерпеноидом, структурно сходным с диктиолом J, а основные структурные различия этих соединений сосредоточены в пятичленном цикле бициклического кора соединений. На основании приведенных спектральных данных было установлено, что Ме-17 в структуре 19 связан с четвертичным углеродным атомом (8С 97,3 м.д., отсутствует в DEPT спектре), к которому присоединена также гидропероксидная функция. Полная структура соединения была установлена при помощи данных 'Н-'Н COSY, HSQC и НМВС экспериментов.

Рис, 3. Ключевые Ж)Е корреляции для диктиогидропероксида (19).

Ш* ,6Н*,75* относительные конфигурации асимметрических центров в

соединении 19 были определены на основании кросс-пиков Н-1/Н-6, Н-7, На-9; Н-6/Нз-17; Н-7/ На-9 и Н-5/Нр-8 в ЫОЕБУ спектре (Рис. 3).

19

Принимая во внимание структурное сходство соединения 19 и диктиола J (14), а также то, что эти соединения на настоящий момент являются единственными хлор-содержащими дитерпеноидами, выделенными из водорослей семейства Dictyotaceae, было предположено, что 19 является окисленным производным 14. Для проверки этого предположения и определения стереохимии С-11 и С-14 асимметрических центров в структуре 19 была проведена реакция окисления диктиола J кислородом воздуха. В качестве продуктов реакции была выделена смесь (2:1) соединения 19 и его эпимера 19а, отличающихся друг от друга только конфигурацией С-4 углеродного атома. 'Н ЯМР спектр 19а был близок к спектру 19, однако сигналы протонов группы СНз-17 [5н 1,44 м.д. (с)] и протонов Н-2 [5Н5,84 м.д. (дц, /= 1,9; 5,8)] и Н-3 [8„5,70 м.д. (дд, /= 2,0; 5,8)] были смещены относительно аналогичных сигналов в спектре 19. Полученный результат подтвердил предположение о происхождении вещества 19 и позволил установить 11Й* и 145* относительную стереохимию асимметрических центров в диктиогидропероксиде (19). R* конфигурация углеродного атома С-11 хорошо согласовывалась также с наблюдавшимися корреляциями протонов Н-6/На-12 и На р-8/Н3-19 в NOESY спектре соединения 19.

19а ^ = сн3, Иг = ООН

Еще одним продуктом, выделенным из реакционной смеси, было соединение 196. 'Н ЯМР спектр 196 содержал сигналы протонов экзометиленовой группы [5Н4,73 мл. (1Н, уш. с); 4,65 м.д. (1Н, д, /=1,5)], двух протонов при гидроксилах [8Н4,35 м.д. (1Н, дд, /=7,5; 3,5); 3,62 (1Н, дд, /=11,0; 3,0)] и протонов трех метальных групп [6н 1,61 м.д. (ЗН, с), 1,55 м.д. (ЗН, с), 0,97 м.д. (ЗН, д, /=6,5)], близкие по значениям соответствующим сигналам в спектре исходного 14. Сигнал еще одной метальной группы в спектре 196 [1,54 м.д. (ЗН, с)] был смещен в область сильного поля относительно сигнала соответствующей группы в спектре диктиола 1. Кроме того, в спектре 196 не был обнаружен сигнал протона тризамещенной двойной связи,

находящейся в пятичленном цикле диктиола J, но присутствовали сигналы в области 3,3 м.д., характерные для спектров эпоксид-содержащих соединений. Обнаруженные синглетные сигналы при 3,37 м.д. и 3,31 м.д. (1:4), соответствующие одному протону, и все описанные выше сигналы позволили предположить, что продукт 196 является смесью (1:4) двух стереоизомеров окисленного 14, содержащих эпокси-группу в положении 3(4). Предложенная структура подтверждалась также наличием пиков фрагментарных ионов с m/z 341 [М-СН3]+ (следовые количества), m/z 320 [М-НС1]+, m/z 302 [М-НС1-Н20]+ и m/z 284 [М-НС!-2Н20]+ в ГЖХ-МС спектре 196. Кроме того, в масс-спектре в качестве основных присутствовали пики фрагментарных ионов с m/z 193 [M-CgH16OCl]+, m/z 175 [М-С8Н160С1-Н20]+ и m/z 157 [M-CSH160C1-2H20]+, характеризующие последовательное отщепление боковой цепи, а также двух молекул воды от бициклического фрагмента структуры продукта 196.

На основании того, что в результате проведенной реакции была получена сложная смесь окисленных продуктов, из которых только соединение 19 было обнаружено в исследуемом экстракте, было предположено природное происхождение диктиогидропероксида (19).

Новое соединение, названное гидропероксиацетоксикренулидом (20), является наиболее полярным в ряду вторичных метаболитов, выделенных из образца D. dichotoma 2006 года сбора. Полученные HR ESI-MS и ЯМР спектральные данные позволили вычислить для него брутто-формулу СггНзгОб Поглощение в ИК спектре при 1737 см'1 и сигнал при 2,04 м.д. (ЗН, с) в ]Н ЯМР спектре соединения были обусловлены присутствием ацетатной группы в структуре 20. Еще один сигнал в ИК спектре при 1752 см"1 вместе с максимумом поглощения в УФ спектре при 226 нм указали на присутствие в веществе ненасыщенного у-лакгона. Анализ 'Н и 13С ЯМР спектров выявил сходство его структуры со структурой известного дитерпеноида ацетоксикренулида (15), также выделенного из данного образца D. dichotoma. Так в спектрах обоих веществ наблюдались сигналы атомов дизамещенного циклопропанового кольца [5н 0,36 м.д. (кв, .7=5,4); 1,05 м.д. (м); 1,48 м.д. (м); 0,94 м.д. (м); 5С 8,2 м.д.; 10,2 м.д.; 26,0 м.д.], двух метальных групп при третичных атомах углерода [6н 0,98 м.д. (д, .7=6,9); 1,0 м.д. (д, .7=6,7); 5С23,4 м.д.; 17,0 м.д.] и метилена, связанного с кислородом [5н4,74 м.д. (дд, .7=2,9; 17,1); 4,85 м.д. (дд, J=2,6; 17,1); Sc 71,4 м.д.]. Сигналы при 8С 128,9 м.д. и 166,8 м.д. в 13С ЯМР спектре 20 были

отнесены к атомам полностью замещенной двойной связи, находящейся в месте сочленения пяти- и восьмичленного циклов в обеих структурах. В то же время, спектральные данные указывали на присутствие еще одной дизамещенной двойной связи [8Н 5,58 м.д. (2Н, м); 5С 127,8 м.д.; 136,8 м.д.] в структуре соединения 20, вместо трехзамещенной связи в 15. 12(13)-Положение этой связи следовало из СНз-15/ С-13, С-14, С-16 и СН3-16/С-13, С-14, С-15 корреляций в НМВС спектре, а ее тракс-конфигурация была установлена на основе величины константы спин-спинового взаимодействия (7=15,8) протонов Н-12/Н-13 в 'Н Ж1Р спектре, записанном в C6D6.

Присутствие гидропероксидной группы в дитерпеноиде 20 было предположено на основании брутто-формулы и подтверждено реакцией этого вещества с раствором KI, а также ЯМР и масс-спектральными данными. В (+)ESI-MS спектре соединения 20 присутствовал пик псевдомолекулярного иона при /я/г 415 [M+Na]+ и пик фрагментарного иона при m 'z 383 [M+Na-02]+, характерного для распада перекисных соединений. На основании величин химических сдвигов атомов углерода С-14 (5С 81,9 м.д.) и метальных групп Ме-15 [6Н 1,32 м.д.(с)], Ме-16 [8Н 1,32 м.д. (с)] было установлено С-14 положение гидропероксидной группы в выделенном соединении 20. Аналогичные величины химических сдвигов наблюдались для £-дактилогидропероксида А с подобной боковой цепью, выделенного из красной водоросли Laurencia sp. Структура соединения 20 была подтверждена детальным анализом данных НМВС, NOESY и COSY спектров.

Корреляции протонов На-5/Н-3, Н3-20, a также Н-З/Н-4, На-5, Н-9 и Нр-8/ Н-6, Н3-20 в NOESY спектре 20 (Рис. 4) и положительная величина его оптического вращения [a]D29 +28,0° показали, что выделенный нами дитерпеноид имеет такие же 3S,4R,6R,7S,9S абсолютные конфигурации асимметрических центров, как и (+)-ацетоксикренулид (15). Учитывая, что оба эти структурно близкие соединения были выделены из одного объекта, можно предположить, что 15 является природным предшественником дитерпенового гидропероксида 20 (Схема 1). На основании этой биогенетической связи С-10 асимметрическому центру в структуре нового дитерпеноида 20 была приписана R абсолютная конфигурация.

Рис. 4. Ключевые КОЕ корреляции для гидропероксиацетоксикренулвда (20).

Исследованные дитериены 19 и 20 являются первыми представителями гидропероксидитерпеноидов, выделенных из бурых водорослей рода О1с(уо(а.

Схема 1. Предполагаемый путь биосинтеза гидропероксидитерпеноидов 19 и 20.

Известно, что пероксиды неоднократно выделялись в качестве метаболитов высших и низших растений, морских беспозвоночных и грибов. Среди этих соединений встречаются как природные соединения, так и артефактные продукты. Многие из них биосинтезируются из предшественников в результате прямого энантиоселективного введения кислорода в олефины ферментами пероксидазами. Вероятнее всего, гидропероксиды 19 и 20 являются природными соединениями. Действительно, при окислении диктиола I кислородом воздуха была выделена трудноразделимая смесь эпимеров 19 и 19а, а также продукт 196, в то время как в экстракте £>. (ИсИоижа было обнаружено только соединение 19. Этот факт подтверждает стереоселективность биосинтеза диктиогидропероксида (19).

3. Сведения о биологической активности некоторых выделенных вторичных метаболитов и их содержании в различных популяциях водоросли О. (Ис1юШпа

В 2006 году на Морской экспериментальной станции ТИБОХ ДВО РАН методами ТСХ и биотестирования была выполнена сравнительная качественная оценка присутствия физиологически активных низкомолекулярных природных соединений в этанольных экстрактах 17 видов морских водорослей, собранных в акватории бухты Троица (Залив Петра Великого, Японское море). Было показано, что этанольный экстракт О. сИско1ота является одним из наиболее перспективных объектов для выделения и изучения биологически активных веществ, и его водный раствор ингибирует на 50% подвижность сперматозоидов морского ежа Я^оп^осеШгоШ ШегтесНю в минимальной концентрации ИК50 = 25 мкг/мл.

В дальнейшем была показана и проанализирована циготоксическая активность 12 соединений, выделенных из образцов Б. сИско1ота 2004 и 2006 годов сбора, по отношению к культурам клеточных линий 1В6 С141 и НеЬа (Таблица 1).

Таблица 1.

Цитотоксичность некоторых метаболитов водоросли D. dichotoma по отношению к опухолевым (HeLa) и мышиным эпителиальным (JB6 С141) клеточным культурам.

Соединение ИК50, мМ

HeLa JB6 С141

Аксенол (2) 182 237

Изопахидихтиол А (3) 162 129

Пахидикгиол А (4) 98 110

18-Гидрокси-3,7-долабелладиен (5) 74 85

Диктиолакгон (6) 497 321

Дикгаотин В (8) 73 70

18-Гвдрокси-2,7-долабелладиен (11) 146 124

10-Ацетокси-18-гидрокси-2,7-долабелладиен(12) 59 94

Диктион (13) 108 115

Диктиол } (14) 246 147

Ацетоксикренулид (15) 388 157

Диктиогидропероксид (19) 71 68

Полученные результаты показали, что все протестированные соединения проявляют умеренную цитотоксическую активность по отношению к опухолевым и нормальным клеточным линиям. Некоторые из исследованных соединений (2, 4, 5, 12, 13) показали более высокую цитотоксичность к опухолевым клеткам, нежели к нормальным мышиным эпителиальным клеткам.

При этом ксеникановые дитерпеноиды 15 и 6 наоборот оказались более токсичными по отношению к клеткам линии JB6 Cl 41, чем к раковым клеткам.

В ряду долабеллановых дитерпеноидов уменьшение циготоксичности в отношении обеих клеточных культур при переходе от 5 к 11 связано, очевидно, с перемещением двойной связи из положения 3 в положение 2. Напротив, появление в структуре 11 ацетатной группы в положении 10 приводит к значительному увеличению активности соответствующего соединения 12 по сравнению с исходным 11. Более того, в случае ацетилированного производного 12 величина токсического эффекта по отношению к опухолевым клеткам заметно выше, чем к нормальным.

Для серии гидроазуленовых дитерпеноидов также была проанализирована зависимость цитотоксической активности от структуры. Сравнение активностей веществ 3 и 4 показало, что наличие экзометиленовой группы в положении 10 для этого ряда соединений приводит к увеличению активности по сравнению с веществами, содержащими 9-эндо-двойную связь. Замена 14(15)-двойной связи боковой цепи соединения 4 на кето-группу в положении 14 в диктионе (13) мало повлияла на активность. В то же время восстановление этой кето-группы до гидроксильной настолько сильно снизило активность, что даже одновременное введение в боковую цепь атома хлора в структуре вещества 14 не привело к увеличению его циготоксичности до исходных значений активности соединения 4. Только дополнительное введение в молекулу такой реакционно-способной группы, как пероксидная в структуре диктиогвдропероксида (19), привело к увеличению активности, в результате чего соединение 19 оказалось наиболее активным в ряду исследованных гидроазуленовых дитерпеноидов.

Кроме того, для соединений 2 и 4 была показана цитотоксическая активность по отношению к клеткам моноцитной лейкемии ТНР-1 (ИК50 (2) = 155 цМ; ИК50(4) = 74 цМ) и рака кишечника SNU С-4 (ИК50(2) = 185 цМ; ИК50(4) = 99 рМ).

Для хлор-содержащих дитерпеноидов, известного диктиола I (14) и нового диктиогидропероксида (19), впервые бьша измерена цитотоксическая активность в отношении клеток промиелоцигаой лейкемии НЬ-60 (ИК50(14) = 70 цМ; ИК50 (19) = 59 цМ) и рака молочной железы МБА-МВ-231 (ИК50 (14) = 223 цМ; ИК50(19) =201 цМ).

Проведенное химическое исследование двух образцов дальневосточной водоросли £>. ШсШота показало, что состав основных компонентов фракций низкомолекулярных вторичных метаболитов у водорослей 2004 и 2006 годов сбора практически совпадает. В заключении изучения дальневосточной популяции Д сНсЬЫота был проведен сравнительный литературный анализ содержания некоторых выделенных в ходе данной работы и уже известных ранее соединений в водорослях этого вида, собранных в разные годы в различных местах обитания. В результате выяснено, что дальневосточные образцы Б. ШсИоЮта по составу выделенных из них соединений не совпадают полностью ни с одним из ранее изучавшихся сборов этой водоросли. В то же время они более близки по химическому составу к японской (Япония) и средиземноморской (Испания, Италия, Греция) популяциям, чем к водорослям, собранным у побережий Австралии и Англии. Кроме того, в литературе описаны исследования нескольких индийских сборов £>. сИсИо1ота. Образцы водорослей этой популяции (Индия, Пакистан) характеризуются биосинтезом долабеллановых, доластановых и секодоластановых дитерпеноидов и не содержат ни одного из выделенных в настоящей работе соединений.

Полученные сведения подтверждают, что химический состав водоросли вида £>. сИскоШта в той или иной степени зависит от места ее произрастания. Кроме того, явное отличие в составе вторичных метаболитов у индийской популяции данной водоросли говорит в пользу ранее высказанного предположения о том, что таксон Д Шс1юЮта в настоящее время представляет собой смесь нескольких видов водорослей. Таким образом, показана необходимость проведения новых таксономических исследований различных популяций водорослей этого вида с привлечением данных о химическом составе вторичных метаболитов в водорослях, в зависимости от времени сбора и места их произрастания.

ВЫВОДЫ

1. Изучены вторичные метаболиты из двух сборов бурой водоросли Дс^'о/д сИсНоЮта, произрастающей в бухте Троица залива Петра Великого. Выделено двадцать соединений, в том числе четыре новых. Известные соединения были структурно идентифицированы как пентадекан, изопахидиктиол А, пахидиктиол А, аксенол, диктиолактон, дилофолид, диктиотин В, диктион, диктиол .Г, ацетоксикренулид, 18-гидрокси-3,7-долабелладиен, 18-гидрокси-2,7-долабелладиен, 10-ацетокси-18-гидрокси-2,7-долабелладиен, фукостерин, сарингостерин и сквален. Дилофолид, пентадекан и сквален из данного вида водоросли выделены впервые.

2. Анализом спектральных данных установлено строение двух новых дитерпеновых углеводородов, (1Л*,45*,55*,95*,105*,11£)-1,5-цикло-5,8,9Д0-тетрагидроэрогоргиаена и (1Д,45,11й)-энт-эрогоргиаена. 1,5-Цикло-5,8,9,10-тетрагидроэрогоргиаен представляет новый тип трициклической дитерпеновой скелетной системы и относится к группе так называемых «продолженных или пренилированных сесквитерпеноидов» бурых водорослей.

3. Структуры двух новых дитерпеновых гидропероксидов были определены как (1Д*,4,5*,55*,6Л*,75*11Л*,145*)-дикгиогидропероксид и (35,4Я,6/г,75,95,10Я)-12-трамс-гидропероксиацетоксикренулид при помощи методов одно- и двумерной ЯМР спектроскопии и масс-спектрометрии, а также с использованием биогенетических представлений и химической трансформации. Гидролероксидитерпеноиды из бурых водорослей рода В1с1уо1а выделены впервые.

4. Показана умеренная цитотоксическая активность двенадцати выделенных вторичных метаболитов водоросли Д сИскоЮта, включая новый диктиогидропероксид, по отношению к нескольким культурам опухолевых клеток, а также нормальным мышиным эпителиальным клеткам.

Основные публикации по теме диссертации

1. Kolesnikova S.A., Kalinovsky A.I., Fedorov S.N., Shubina L.K., Stonik V.A. Diterpenes from the Far-eastern brown alga Dictyota dichotoma II Phytochemistry. 2006. V. 67, N 19. P. 2115-2119.

2. Колесникова С.А., Калиновский А.И., Стоник В.А. Малополярные вторичные метаболиты из дальневосточной бурой водоросли Dictyota dichotoma П Химия природ, соедин. 2007. № 6. С. 622-623.

3. Колесникова С.А., Калиновский А.И., Фёдоров С.Н., Стоник В.А. Новые дитерпеноиды из бурой водоросли Dictyota dichotoma II IV Всероссийская научная конференция «Химия и технология растительных веществ», Сыктывкар, 25-30 июня. 2006: Тез. докл. - Сыктывкар, 2006. - С. 95.

4. Колесникова С.А., Калиновский А.И., Фёдоров С.Н., Шубина Л.К., Стоник В.А. Новые дитерпеноиды из бурой водоросли Dictyota dichotoma Н X Международная молодежная школа-конференция по актуальным проблемам химии и биологии, МЭС ТИБОХ, 12-19 сент. 2006: Тез. докл. - Владивосток, 2006.-С. 24.

5. Колесникова С.А., Калиновский А.И., Стоник В.А. Малополярные вторичные метаболиты дальневосточной бурой водоросли Dictyota dichotoma II V Всероссийская научная конференция «Химия и технология растительных веществ», Уфа, 8-12 июня. 2008: Тез. докл. - Сыктывкар-Уфа, 2008. - С. 156.

6. Kolesnikova S„ Lyakhova Е., Kalinovsky A., Dmitrenok P., Dyshlovoy S., Stonik V. Halogenated diterpenes from the brown alga Dictyota dichotoma И 1st Far-Eastern International Symposium on Life Sciences, 2-7 сент. 2008: Тез. докл. - Владивосток, 2008.-С. 41.

7. Kolesnikova S., Dyshlovoy S., Lyakhova E., Fedorov S. Bioactive diterpenes from the brown alga Dictyota dichotoma I I 1st Far-Eastern International Symposium on Life Sciences, 2-7 сент. 2008: Тез. докл. - Владивосток, 2008. - С. 40.

Соискатель

Колесникова С. А.

Колесникова Софья Александровна

Строение и некоторые свойства вторичных метаболитов из дальневосточной популяции бурой водоросли Dictyota dichotoma

АВТОРЕФЕРАТ

Подписано в печать 14.11.2008 г. Формат 60x90/16. 1 уч.-изд. л. Тираж 100 экз. Заказ № 104. Отпечатано в типографии издательского центра ФГУП «ТИНРО-Центр» г. Владивосток, ул. Западная, 10

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

2.1. Разнообразие вторичных метаболитов бурых водорослей рода Dictyota.

2.2. Дитерпеноиды.

2.2.1.«Пренилированные сесквитерпеноиды».

2.2.2. Долабелланы и биогенетически родственные им дитерпеноиды.

2.2.3. Ксениканы и биогенетически родственные им серии дитер пеноидов.

2.2.4. Другие дитерпеноиды.

2.3. Некоторые заключения.

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

3.1. Изучение вторичных метаболитов из D. dichotoma 2004 года сбора.

3.1.1. Идентификация известных вторичных метаболитов из водоросли

D. dichotoma 2004 года сбора.

3.1.2. Установление строения новых дитерпеноидов из водоросли

D. dichotoma 2004 года сбора.

3.2. Выделение и структурное изучение природных соединений из D. dichotoma 2006 года сбора.

3.2.1. Идентификация известных природных соединений из D. dichotoma 2006 года сбора.

3.2.2. Установление структур и стереохимии новых соединений из D. dichotoma 2006 года сбора.

3.3. Биологическая активность некоторых вторичных метаболитов бурой водоросли D. dichotoma.

3.4. Сравнительный анализ содержания некоторых вторичных метаболитов в водорослях D. dichotoma.

4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

4.1. Приборы и материалы.

4.2. Биологический материал.

4.3. Экстракция и выделение соединений из D. dichotoma 2004 года сбора.

4.4. Экстракция и выделение соединений из D. dichotoma 2006 года сбора.

4.5. Ацетилирование фукостерина.

4.6. Окисление диктиола J.

4.7. Определение спермиотоксичности водорослевых экстрактов.

4.8. Определение цитотоксической активности.

5. ВЫВОДЫ.

Актуальность проблемы. Бурые водоросли (отдел Phaeophyta) широко распространены в Мировом океане, многие из них доступны и представляют интерес как источники полисахаридов и низкомолекулярных вторичных метаболитов. Последние могут быть использованы для исследования их биологической роли и свойств, включая физиологическую активность, и с целью создания новых лекарственных препаратов. Структурное изучение этих соединений расширяет знания о биохимическом разнообразии в морских низших растениях. С другой стороны, некоторые виды бурых водорослей известны тем, что они содержат большое количество разнообразных вторичных метаболитов и, собранные в различных зонах Мирового океана, могут различаться по химическому составу этих веществ. Особенно это касается широко распространенных сложных в таксономическом отношении родов и видов, возможно, представляющих собой на самом деле серию трудно отличимых друг от друга таксономических единиц.

Бурые водоросли, принадлежащие к семейству Dictyotacea, являются хорошо известными источниками низкомолекулярных соединений, в том числе физиологически активных. До сих пор исследования этих водорослей нередко приводят к выделению новых природных веществ.

Одним из двух видов этого семейства, обитающих в российских дальневосточных водах, является Dictyota dichotoma. Несмотря на то, что род Dictyota — один из наиболее изученных в отношении содержания вторичных метаболитов, до последнего времени отсутствовали какие-либо данные о природных соединениях, выделенных из российских популяций водорослей этого рода, в том числе из D. dichotoma. Поэтому изучение химического состава водорослей Dictyota spp., произрастающих на Дальнем Востоке России, является актуальным.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлось выделение и установление строения вторичных метаболитов из дальневосточной бурой водоросли Dictyota dichotoma (класс Cyclosporophyceae, порядок Dictyotales, семейство Dictyotaceae).

К задачам исследования относились: 1) выделение индивидуальных природных соединений из различных сборов водоросли D. dichotoma; 2) структурная идентификация известных ранее вторичных метаболитов, найденных в изучаемых водорослях; 3) поиск и установление строения новых метаболитов; 4) сравнение состава вторичных метаболитов в образцах D. dichotoma, собранных в одном и том же месте, но в разные годы; 5) изучение цитотоксической активности выделенных соединений.

Для достижения цели и решения задач работы были выполнены следующие исследования: 1) из водоросли D. dichotoma 2004 и 2006 годов сбора с помощью хроматографических методов выделены серии индивидуальных природных соединений; 2) проанализированы ЯМР и масс-спектральные данные и определены физические константы выделенных веществ; 3) идентифицированы известные ранее вторичные метаболиты, в том числе и те, которые впервые были обнаружены в экстрактах водорослей этого вида; 4) установлены структуры новых выделенных соединений, включая абсолютную стереохимию для некоторых из них; 5) изучены цитотоксические свойства серии выделенных из D. dichotoma веществ в отношении нескольких клеточных линий.

Научная новизна и практическая ценность работы. Из двух сборов бурой водоросли D. dichotoma были выделены 20 низкомолекулярных вторичных метаболитов. Спектральными методами и химическими трансформациями определено строение 4 новых соединений, а именно: 2 дитерпеновых углеводородов и 2 гидропероксидитерпеноидов, и структурно идентифицировано 16 ранее известных веществ. Показано, что химический состав дальневосточной водоросли D. dichotoma мало зависит от времени сбора. Практическое значение данного исследования состоит в развитии методов выделения и установления строения новых природных низкомолекулярных вторичных метаболитов из водорослей. Установлена умеренная цитотоксическая активность ряда выделенных веществ, что открывает путь к их химическим модификациям с целью получения из них более активных производных.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, посвященного вторичным метаболитам бурых водорослей рода Dictyota, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов, списка

5. ВЫВОДЫ

1. Впервые изучены вторичные метаболиты из двух сборов бурой водоросли Dictyota dichotoma, произрастающей в бухте Троица залива Петра Великого. Выделено двадцать соединений, в том числе четыре новых. Известные соединения были структурно идентифицированы как пентадекан, изопахидиктиол А, пахидиктиол А, аксенол, диктиолактон, дилофолид, диктиотин В, диктион, диктиол J, ацетоксикренулид, 18-гидрокси-3,7-долабелладиен, 18-гидрокси-2,7-долабелладиен, 10-ацетокси-18-гидрокси-2,7-долабелладиен, фукостерин, сарингостерин и сквален. Дилофолид, пентадекан и сквален из данного вида водоросли выделены впервые.

2. Анализом спектральных данных установлено строение двух новых дитерпеновых углеводородов, (li?*,45*,55'*595*5105*,l 14)-1,5-цикло-5,8,9,10-тетрагидроэрогоргиаена и (li?,45,l 1/?)-энт-эрогоргиаена. 1,5-Цикло-5,8,9,10-тетрагидроэрогоргиаен представляет новый тип трициклической дитерпеновой скелетной системы и относится к группе так называемых «продолженных или пренилированных сесквитерпеноидов» бурых водорослей.

3. Структуры двух новых дитерпеновых гидропероксидов были определены как (1Д*,45*,55*,6Д*,75*,11Я*,145*)-диктиогидропероксид и (35,AR,6R,1S,9S, 10/?)-12-т/?анс-гидропероксиацетоксикренулид при помощи методов одно- и двумерной ЯМР спектроскопии и масс-спектрометрии, а также с использованием биогенетических представлений и химической трансформации. Гидропероксидитерпеноиды из бурых водорослей рода

Dictyota выделены впервые.

4. Показана умеренная цитотоксическая активность двенадцати выделенных вторичных метаболитов водоросли D. dichotoma, включая новый диктиогидропероксид, по отношению к нескольким культурам опухолевых клеток, а также нормальным мышиным эпителиальным клеткам.

1. Siamopoulou P., Bimplakis A., Iliopoulou D., Vagias С., Cos P., Berghe D.V., Roussis V. Diterpenes from the brown algae Dictyota dichotoma and Dictyota linearis // Phytochemistry 2004. V. 65, N 14. P. 2025-2030.

2. Blunt J. W., Copp B. R., Hu W.-P., Munro M. H. G., Northcote P. Т., Prinsep M. R. Marine natural products //Nat. Prod. Rep. 2008. V. 25. P. 35-94.

3. Rao С. В., Pullaiah К. C., Surapaneni R. K., Sullivan B. W., Albizati K. F., Faulkner D. J., Cun-heng H., Clardy J. The diterpenes of Dictyota dichotoma from the Indian ocean // J. Org. Chem. 1986. V. 51, N 14. P. 2736-2742.

4. Перестенко Л. П. Водоросли залива Петра Великого. Л.: Наука, 1980. 232 с.

5. Miiller D. G., Gassmann G., Boland W., Marner F., Jaenicke L. Dictyota dichotoma (Phaeophyceae): identification of the sperm attractant // Science. 1981. V. 212, N 4498. P. 1040-1041.

6. Faulkner D J. Marine natural products: metabolites of marine algae and herbivorous marine mollusks // Nat. Prod. Rep. 1984. V. 1. P. 251-280.

7. Patterson G. W. The distribution of sterols in algae // Lipids. 1971. V. 6, N 3. P. 120127.

8. Еляков Г. Б., Стоник В. А. Терпеноиды морских организмов. М.: Наука, 1986. -270 с.

9. De Paula J. С., Bueno L. В, De Palmer Paixao Frugulhetti I. C., Yoneshigue-Valentin Y., Teixeira V. L. Dictyota dolabellana sp. nov. (Dictyotaceae, Phaeophyceae) based on morphological and chemical data // Bot. Mar. 2007. V. 50, N5-6. P. 288-293.

10. Enoki N., Tsuzuki K., Omura S., Ishida R., Matsumoto T. New antimicrobial diterpenes, dictyol F and epidictyol F, from the brown alga Dictyota dichotoma II Chem. Lett. 1983. V. 12, N 10. P. 1627-1630.

11. Finer J., Clardy J., Fenical W., Minale L., Riccio R., Battaile J., Kirkup M., Moore R. E. Structures of dictyodial and dictyolactone, unusual marine diterpenoids // J. Org. Chem. 1979. V. 44, N 12. P. 2044-2047.

12. Duran R., Garrido L., Ortega M. J., Rueda A., Salva J., Zubia E. Bioactive natural compounds of alga and invertebrates from the littoral of Cadiz // Bol. Inst. Esp. Oceanogr. 1999. V. 15, N 1-4. P. 357-361.

13. Jongaramruong J., Kongkam N. Novel diterpenes with cytotoxic, anti-malarial and anti-tuberculosis activities from a brown alga Dictyota sp. // J. Asian Nat. Prod. Res.2007. V. 9, N 8. P.743-751.

14. Vallim M. A., De Paula J. C., Pereira R. C., Teixeira V. L. The diterpenes from Dictyotacean marine brown algae in the tropical Atlantic American region // Biochem. Syst. Ecol. 2005. V. 33, N 1. P. 1-16.

15. Vallim M. A., Teixeira V. L., Pereira R. C. Feeding-deterrent properties of diterpenes of Dictyota mertensii (Phaeophyceae, Dictyotales) 11 Brazilian Journal of Oceanography. 2007. V. 55, N 3. P. 223-229.

16. Barbosa J. P., Teixeira V. L., Pereira R. C. A dolabellane diterpene from the brown alga Dictyotapraffi as chemical defense against herbivores // Bot. Mar. 2004. V. 47, N2. P. 147-151.

17. Piattelli M., Tringali С. Stereochemistry and conformation of dolabellane diterpenes: an NMR and molecular mechanics study // J. Nat. Prod. 1995. V. 58, N 5. P. 697-704.

18. Fenical W., Sleeper II. L., Paul V. J., Stallard M. O., Sun H. H. Defensive chemistry of Navanax and related opisthobranch mollusks // Pure & Appl. Chem. 1979. V. 51. P. 1865-1874.

19. Teixeira V. L., Kelecom A. A chemotaxonomic study of diterpenes from marine brown algae of the genus Dictyota II Sci. Total Environ. 1988. V. 75, N 2/3. P. 271283.

20. Fattorusso E., Magno S., Mayol L., Santacroce C., Sica D., Amico V., Oriente G., Piattelli M., Tringali C. Dictyol A and B, two novel diterpene alcohols from the brown alga Dictyota dichotoma II J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1976. N 14. P. 575-576.

21. Danise В., Minale L., Riccio R., Amico V., Oriente G., Piattelli M., Tringali C., Fattorusso E., Magno S., Mayol L. Futher perhydroazulene diterpenes from marine organisms // Experientia. 1977. V. 33, N 4. P. 413-415.

22. Enoki N., Ishida R., Urano S., Ochi M., Tokoroyama Т., Matsumoto T. New hydroazulenoid diterpenes from the marine alga Dictyota dichotoma II Chem. Lett. 1982. V. 11, N 11. P. 1837-1840.

23. Niang L. L., Hung X. Studies on the biologically active compounds of the algae from the Yellow Sea//Hydrobiologia. 1984. V. 116/117, N 1. P. 168-171.

24. Kusumi Т., Nkongolo D. M., Ishitsuka M., Inouye Y., Kakisawa H. Structure and absolute configuration of isodictytriol, a new diterpene from the brown alga Dictyota dichotoma II Chem. Lett. 1986. V. 15, N 7. P. 1241-1242.

25. Faulkner D. J., Ravi B. N., Finer J., Clardy J. Diterpenes from Dictyota dichotoma II Phytochemistry. 1977. V. 16, N 7. P. 991-993.

26. Vazquez J. Т., Chang M., Nakanishi K. Structure of hydroazulenoid diterpenes from a marine alga and their absolute configuration based on circular dichroism // J. Org. Chem. 1988. V. 53, N 20. P. 4797-4800.

27. Arroyo P., Norte M., Vazquez J. Absolute configuration of hydroazulenoid diterpenes based on circular dichroism // J. Org. Chem. 1991. V. 56, N 8. P. 26712675.

28. Pathirana C., Andersen R. J. Diterpenoids from the brown alga Dictyota binghamiae II Can. J. Chem. 1984. V. 62. P. 1666-1671.

29. Wright A. D., Konig G. M., Sticher O. New and highly oxidised hydroazulenoid diterpenes from the tropical marine brown alga Dictyota volubilis II Tetrahedron. 1993. V. 49, N3. P. 571-580.

30. Alvarado А. В., Gerwick W. H. Dictyol H, a new tricyclic diterpenoid from the brown seaweed Dictyota dentata II J. Nat. Prod. 1985. V. 48, N 1. P. 132-134.

31. Gedara S. R., Abdel-Halim О. В., El-Sharkawy S. H., Salama О. M., Shier T. W., Halim A. F. Cytotoxic hydroazulene diterpenes from the brown alga Dictyota dichotoma IIZ. Naturforsch. 2003. V. 58 C, N 1/2. P. 17-22.

32. Hardt I. H., Fenical W., Cronin G., Hay M. E. Acutilols, potent herbivore feeding deterrents from the tropical brown alga, Dictyota acutiloba II Phytochemistry. 1996. V. 43, N 1. P. 71-73.

33. Amico V., Oriente G., Piattelli M., Tringali C. Dilophol, a new ten-membered-ring diterpene alcohol from the brown alga Dilophus ligulatus II J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1976. N 24. P. 1024-1025.

34. Blount J. F., Dunlop R. W., Erickson K. L., Wells R. J. Two diterpenes with new carbocyclic ring systems from an Australian collection of the brown alga Dictyota dichotoma //Aust. J. Chem. 1982. V. 35, N 1. P. 145-163.

35. Sun H. H., Fenical W. Hydroxydilophol, a new monocyclic diterpenoid from the brown alga Dictyota masoniill J. Org. Chem. 1979. V. 44, N 8. P. 1354-1356.

36. Gonzales A. G., Manta E., Martin J. D., Perez C. Isolation and structure of pachytriol // J. Nat. Prod. 1987. V. 50, N 3. P. 500-502.

37. Konig G. M., Wright A. D., Sticher O. Diterpenes from the brown alga Dictyota divaricata //Phytochemistry. 1991. V. 30, N 11. P. 3679-3682.

38. Sun H. H., Waraszkiewicz S. M., Erickson K. L., Finer J., Clardy J. Dictyoxepin and dictyolene, two new diterpenes from the marine alga Dictyota acutiloba II J Am. Chem. Soc. 1977. V. 99, N 10. P. 3516-3517.

39. Suzuki M., Yamada H., Kurata K. Dictyterpenoids A and B, two novel diterpenoids with feeding-deterrent activity from the brown alga Dilophus okamurae II J. Nat. Prod. 2002. V. 65, N 2. P. 121-125.

40. K6nig G. M., Wright A. D. New dolabellanes from the marine alga Dictyota pardalis f. psendohamata II Tetrahedron. 1994. V. 50, N 27. P. 8011-8018.

41. Wright A. D., Konig G. M., Sticher O. Two new dolabellane derivatives from the brown alga Dictyota pardalis II Tetrahedron. 1990. V. 46, N 11. P. 3851-3858.

42. Wright A. D., Konig G. M., Sticher O., Lubini P., Hofmann P., Dobler M. New dolabellane derivatives from the brown alga Dictyota pardalis II Helv. Chim. Acta. 1991. V. 74, N8. P. 1801-1807.

43. Tringali C., Piattelli M., Nicolosi G. Structure and conformation of new diterpenes based on the dolabellane skeleton from a Dictyota species I I Tetrahedron. 1984. V. 40, N4. P. 799-803.

44. Tringali C., Oriente G., Piattelli M., Nicolosi G. Structure and conformation of two new dolabellane-based diterpenes from Dictyota sp. 11 J. Nat. Prod. 1984. V. 47, N 4. P. 615-619.

45. Amico V., Oriente G., Piattelli M., Tringali C., Fattorusso E., Magno S., Mayol L. Diterpenes based on the dolabellane skeleton from Dictyota dichotoma II Tetrahedron. 1980. V. 36, N 10. P. 1409-1414.

46. Barbosa J. P., Pereira R. C., Abrantes J. L., Santos С. С. C., Rebello M. A., Frugulhetti I. C. P. P., Teixeira V. L. In vitro antiviral diterpenes from the Brasilian brown alga Dictyotapraffii II Planta Med. 2004. V. 70, N 9. P. 856-860.

47. Ireland C., Faulkner D. J. Diterpenes from Dolabella californica I I J. Org. Chem. 1977. V. 42, N 19. P. 3157-3162.

48. Dunlop R. W., Ghisalberti E. L., Jefferies P. R„ Skelton B. W., White A. H. Structure of a new dolastane diterpene from Dictyota furcellata II Aust. J. Chem. 1989. V. 42, N2. P. 315-319.

49. Ahmad V. U., Parveen S., Bano S., Shaikh W., Shameel M. Dolastane diterpenoids from the brown alga Dictyota indica II Phytochemistry. 1991. V. 30, N 3. P. 10151018.

50. AH M. S., Pervez M. K., Saleem M., Ahmed F. Dichotenone-A and -B: two new enones from the marine brown alga Dictyota dichotoma (Hudson) Lamour. // Nat. Prod. Res. 2003. V. 17, N 5. P. 301-306.

51. AH M. S., Pervez M. K. Ring-A hydroxylated dolastanes from the marine brown alga Dictyota dichotoma (Huds.) Lamour // Nat. Prod. Res. 2003. V. 17, N 4. P. 281-286.

52. Gonzales A. G., Martin J. D., Norte M., Rivera P., Perales A., Fayos J. Structure and absolute configurations of Dictyota sp. diterpenes // Tetrahedron. 1983. V. 39, N 20. P. 3355-3357.

53. Rao С. В., Trimurtulu G., Sreedhara C., Rao D. V., Bobzin S. C., Faulkner D. J. Diterpenes from the brown alga Dictyota bartayresiana II Phytochemistry. 1994. V. 37,N2. P. 509-513.

54. K6nig G. M., Wright A. D. Extensive ID and 2D NMR and X-ray studies of diterpenes isolated from the marine alga Dictyota pardalis f. pseudohamata II J. Nat. Prod. 1994. V. 57, N11. P. 1529-1538.

55. Rao С. H., Trimurtulu G., Rao D. V., Bobzin S. C., Kushlan D. M., Faulkner D. J. Diterpenes from the brown alga Dictyota divaricata of the Indian ocean // Phytochemistry. 1991. V. 30, N 6. P. 1971-1976.

56. Ochi M., Miura I., Tokoroyama T. Structure of linearol, a novel diterpenoid from the brown seaweed Dictyota linearis II J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1981. N 3. P. 100.

57. Teixeira V. L., Tomassini Т., Fleury B. G., Kelecom A. Dolastane and secodolastane diterpenes from the marine brown alga Dictyota cervicornis II J. Nat. Prod. 1986. V. 49, N 4. P. 570-575.

58. Bano S., Parveen S., Ahmad V. U. Marine natural products, XIV. Secodolastane diterpenoids of Dictyota indica from the Arabian sea // J. Nat. Prod. 1990. V. 53, N 2. P. 492-495.

59. Ali M. S., Pervez M. K., Ahmed F., Saleem M. Dichotenol-A, В and С: the C-16 oxidized seco-dolastanes from the marine brown alga Dictyota dichotoma (Huds.) Lamour. // Nat. Prod. Res. 2004. V. 18, N 6. P. 543-549.

60. Ali M. S., Pervez M. K. seco-Dolastanes from the marine brown alga Dictyota dichotoma (Huds.) Lamour 11Z. Naturforsch. 2003. V. 58 B, N 5. P. 438-442.

61. Enoki N., Furusaki A., Suehiro K., Ishida R., Matsumoto T. Epoxydictymene, a new diterpene from the brown alga Dictyota dichotoma II Tetrahedron Lett. 1983. V. 24, N40. P. 4341-4342.

62. Jamison T. F., Shambayati S., Crowe W. E., Schreiber S. L. Tandem use of cobalt-mediated reactions to synthesize (+)-epoxydictymene, a diterpene containing a Jrara-fosed 5-5 ring system // J. Am. Chem. Soc. 1997. V. 119, N 19. P. 4353-4363.

63. Segawa M., Enoki N., Ikura M., Hikichi K., Ishida R., Shirahama H., Matsumoto T. Dictymal, a new seco-fusicoccin type diterpene from the brown alga Dictyota dichotoma II Tetrahedron Lett. 1987. V. 28, N 32. P. 3703-3704.

64. Clardy J., Duyne G. V., Gonzales A. G., Manta E., Martin J. D., Perez C., Ravelo J. L., Schulte G. K. A new tricarbocyclic diterpene with a novel carbon skeleton from a marine alga // J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1987. N 10. P. 767-768.

65. Trimurtulu G., Kushlan D., Faulkner D. J., Rao С. B. Divarinone, a novel diterpene from the brown alga Dictyota divaricata of the Indian ocean // Tetrahedron Lett. 1992. V. 33, N6. P. 729-732.

66. Ravi B. N., Wells R. J. New nine-membered ring diterpenes from the brown alga Dictyotaprolificans II Aust. J. Chem. 1982. V. 35, N 1. P. 121-128.

67. Enoki N., Ishida R., Matsumoto T. Structures and conformations of new nine-membered ring diterpenoids from the marine alga Dictyota dichotoma И Chem. Lett. 1982. V. 11, N 11. P. 1749-1752.

68. Enoki N., Shirahama H., Osawa E., Urano S., Ishida R., Matsumoto T. Structure and conformation of furanocyclononene diterpenoids from the seaweed Dictyota dichotoma II Chem. Lett. 1983. V. 12, N 9. P. 1399-1402.

69. Norte M., Gonzales A. G., Arroyo P., Zarraga M., Perez C., Rodriguez M. L., Ruiz-Perez C., Dorta L. New xenicane diterpenes from the brown algae of Dictyotaceae // Tetrahedron. 1990. V. 46, N 17. P. 6125-6132.

70. Guella G., N'Diaye I., Chiasera G., Pietra F. Joalin, the first nitrogen-containing xenicane diterpene isolated from a brown seaweed collected off the Senegalese coast// J. Chem. Soc. Perkin. Trans. 1. 1993. N 14. P. 1545-1546.

71. Tanaka J., Higa T. Hydroxydictyodial, a new antifeedant diterpene from the brown alga Dictyota spinulosa II Chem. Lett. 1984. V. 13, N 2. P. 231-232.

72. Sun H. H., McEnroe F. J., Fenical W. Acetoxicrenulide, a new bicyclic cyclopropane-containing diterpenoid from the brown seaweed Dictyota crenulata И J. Org. Chem. 1983. V. 48,N11.P. 1903-1906.

73. Midland S. L., Wing R. M., Sims J. J. New crenulides from the sea hare Aplysia vaccaria II J. Org. Chem. 1983. V. 48, N 11. P. 1906-1909.

74. Wang T.-Z., Pinard E., Paquette L. A. Asymmetric synthesis of the diterpenoid marine toxin (+)-acetoxycrenulide // J. Am. Chem. Soc. 1996. V. 118, N 6. P. 13091318.

75. Paquette L. A., Wang T.-Z., Pinard E. Total synthesis of natural (+)-acetoxycrenulide // J. Am. Chem. Soc. 1995. V. 117, N 4. P. 1455-1456.

76. Kusumi Т., Muanza-Nkongolo D., Goya M., Ishitsuka M., Iwashita Т., Kakisawa H. Structures of crenulacetals А, В, C, and D. The new diterpenoids from the brown algae of Dictyotaceae // J. Org. Chem. 1986. V. 51, N 3. P. 384-387.

77. Konig G. M., Wright A. D., Sticher O. New xenicane and hydroazulenoid diterpenes from an Australian collection of Dictyota divaricata II Tetrahedron. 1991. V. 47, N8. P. 1399-1410.

78. Guella G., Pietra F. Photochemical conversion of xenicane into the crenulatane skeleton with diterpenoids of the brown seaweed Dictyota sp. from the coasts of Senegal // J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1993. N 20. P. 1539.

79. Teixeira V. L., Cavalcanti D. N., Pereira R. C. Chemotaxonomic study of the diterpenes from the brown alga Dictyota menstrualis II Biochem. Syst. Ecol. 2001. V. 29, N3. P. 313-316.

80. Pereira R. C., Cavalcanti D. N., Teixeira V. L. Effects of secondary metabolites from the tropical Brazilian brown alga Dictyota menstrualis on the amphipod Parhyale hawaiensis II Mar. Ecol. Prog. Ser. 2000. V. 205. P. 95-100.

81. Enoki N., Ishida R., Urano S., Matsumoto T. New tricarbocyclic cyclopropanoid diterpenes from the brown alga Dictyota dichotoma II Tetrahedron Lett. 1985. V. 26, N 14. P. 1731-1734.

82. Kirkup M. P., Moore R. E. Identity of sanadaol with beta-crenulal, a diterpene from the brown alga Dictyota crenulata II Phytochemistry. 1983. V. 22, N 11. P. 2527-2529.

83. Dematte В., Guerriero A., Pietra F. Dictyotetraene, a new diterpenoid from a Dictyota sp. (Chlorophycota, Dictyotaceae) of the North Brittany Sea // J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1985. N 7. P. 391-393.

84. Gonzales A. G., Martin J. D., Gonzales В., Ravelo J. L., Perez C., Rafii S., Clardy J. A new diterpene with a novel carbon skeleton from a marine alga // J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1984. N 10. P. 669-670.

85. Clardy J., Duyne G., Gallarbo A., Manta E., Martin J. D., Perez C., Perez R., Ravelo J. L., Rodriguez M. L., Schalte G. K. A new diterpene with two polimorphicmodifications from a marine alga // Tetrahedron Lett. 1987. V. 28, N 52. P. 66996700.

86. Kazlauskas R, Murphy P. T, Wells R. J. A series of novel bicyclic diterpenes from Dilophus prolificans (brown alga, Dictyotaceae) // Tetrahedron Lett. 1978. V. 19, N43. P. 4155-4158.

87. Kamenarska Z, Dimitrova-Konaklieva S, Stefanov K, Najdenski H, Tzvetkova I, Popov S. Comparative study of the volatile compounds from some Black sea brown algae // Botanica Marina. 2002. V. 45, N 6. P. 502-509.

88. Minale L, Riccio R. Constituents of the digestive gland of the molluscs of the genus Aplysia -1. Novel diterpenes from Aplysia depilans II Tetrahedron Lett. 1976. V. 17, N31, P. 2711-2714.

89. De Rosa S, De Giulio A, Iodice C, Zavodink N. Sesquiterpenes from the brown alga Taonia atomaria II Phytochemistry. 1994. V. 37, N 5. 1327-1330.

90. Oesterreich K, Klein I, Spitzner D. "One-pot" reactions: total synthesis of the spirocyclic marine sesquiterpene, (+)-axenol // Synlett. 2002. N 10. P. 1712-1714.

91. Barrow C. J, Blunt J. W, Munro M. H. G. Sesquiterpenes from a New Zealand sponge of the genus Eurypon II Aust. J. Chem. 1988. V. 41. N 11. P. 1755-1761.

92. Amico V, Currenti R, Oriente G, Piattelli M, Tringali C. 18-Hydroxy-3,7-dolabelladiene from the brown alga, Dictyota dichotoma II Phytochemistry. 1981. V. 20, N 4. P. 848-849.

93. Колесникова С. А, Калиновский А. И, Стоник В. А. Малополярные вторичные метаболиты из дальневосточной бурой водоросли Dictyota dichotoma II Химия природ, соедин. 2007. № 6. С. 622-623.

94. Bouaicha N, Pesando D, Puel D. Cytotoxic diterpenoids from the brown alga Dilophus ligidatus II J. Nat. Prod. 1993. V. 56, N 10. P. 1747-1752.

95. Kolesnikova S.A, Kalinovsky A.I, Fedorov S.N, Shubina L.K, Stonik V.A. Diterpenes from the Far-eastern brown alga Dictyota dichotoma II Phytochemistry. 2006. V. 67, N 19. P. 2115-2119.

96. Rodriguez A. D, Ramirez C. Serrulatane diterpenes with antimycobacterial activity isolated from the West Indian sea whip Pseudopterogorgia elisabethae II J. Nat. Prod. 2001. V. 64, N 1. P. 100-102.

97. Cesati R. R, De Armas J, Hoveyda A. H. Enantioselective total synthesis of erogorgiaene: applications of asymmetric Cu-catalyzed conjugate additions of alkilzincs to acyclic enones // J. Am. Chem. Soc. 2004. V. 126, N 1. P. 96-101.

98. Davies H. M. L., Walji A. M. Direct synthesis of (+)-erogorgiaene through a kinetic enantiodifferentiating step // Angew. Chem. Int. Ed. 2005. V. 44, N 11. P. 1733-1735.

99. Braekman J. C., Daloze D., Schulbrt R. Chemical studies of marine invertebrates. XXVIII, Diterpenes from Clavularia inflate (Coelenterata, Octocorallia, Stolonifera)//Tetrahedron. 1978. V. 34, N 10. P. 1551-1556.

100. Boehnlein J. M., Santiago-Vazquez L. Z., Kerr R. G. Diterpene biosynthesis by the dinoflagellate symbiont of the Caribbean gorgonian Pseudopterogorgia bipinnata // Mar. Ecol. Progr. Ser. 2005. V. 303. P. 105-111.

101. Makarieva T. N., Stonik V. A., Alcolado P., Elyakov G. B. Comparative study of the halogenated tyrosine derivatives from Demospongiae (Porifera) // Сотр. Biochem. Physiol. 1981. V. 68, N 3. B. P. 481-484.

102. Kikuchi H., Tsukitani Y., Yamada Y., Iguchi K„ Drexler S. A., Clardy J. Lemnalol, a new sesquiterpenoid from the soft coral Lemnalia tenuis Verseveldt // Tetrahedron Lett. 1982. V. 23. N 10. P. 1063-1066.

103. Bates R. В., Thalacker V. P. Nuclear magnetic resonance spectral parameters in bicyclo3.1 ,l.heptanes. a-Pinene, myrtenal, and verbenone // J. Org. Chem. 1968. V. 33. N5, P. 1730-1732.

104. De Mayo P., Williams R. E., Buchi G., Feairheller S. H. The absolute stereostructure of copaene // Tetrahedron. 1965. V. 21, N 2. P. 619-627.

105. Kapadia V. H., Nagasampagi B. A., Naik V. G., Dev S. Studies in sesquiterpenes. XXII. Structure of mustakone and copaene // Tetrahedron. 1965. V. 21, N 2. P. 607618.

106. Ayyad S.-E. N., Abdel-Halim О. В., Shier W. Т., Hoye T. R. Cytotoxic hydroazulene diterpenes from the brown alga Cystoseira myrica II Z. Naturforsch. 2003.V. 58C,Nl/2. P. 33-38.

107. Ponomarenko L. P., Makarieva T. N., Stonik V. A., Dmitrenok A. S., Dmitrenok P. S. Sterol composition of Linneus torquatus (Nemertini) Anopla // Сотр. Biochem. Physiol. 1995. V. 111 B, N 4. P. 575-577.

108. Ikekawa N., Tsuda K., Morisaki N. Saringosterol: a new sterol from brown algae // Chem. Ind. 1966. N27. P. 1179-1180.

109. Ibata K., Mizuno M., Takigawa Т., Tanaka Y. Long-chain betulaprenol-type polyprenols from the leaves of Ginkgo biloba // Biochem. J. 1983. V. 213, P. 305311.

110. Nicholaides N., Laves F. The stereochemistry of squalene: a new method for the determination of си-Ггаш-isomerism // J. Am. Chem. Soc. 1954. V. 76, N 9. P. 2596-2597.

111. Fernandez J. J., Souto M. L., Gil L. V., Norte M. Isolation of naturally occurring dactylomelane metabolites as Laurencia constituents // Tetrahedron. 2005. V. 61, N 37. P.8910-8915.

112. Dembitsky V. M. Bioactive peroxides as potential therapeutic agents // Eur. J. Med. Chem. 2008. V. 43, N 2. P. 223-251.

113. Kolesnikova S., Dyshlovoy S., Lyakhova E., Fedorov S. Bioactive diterpenes from the brown alga Dictyota dichotoma И 1st Far-Eastern International Symposium on Life Sciences, 2-7 сент. 2008: Тез. докл. Владивосток, 2008. - С. 40.

114. Левина Э. В., Калиновский А. И., Андриященко П. В., Мензорова Н. И., Дмитренок П. С. Трофозиды А, В и другие цитоетатичеекие стероидные соединения из дальневосточной морской звезды Trofodiscus iiber И Биоорган, химия. 2007. Т. 33, № 3. С. 357-364.