Строение и состав продуктов экстракции и модификации биологически активных соединений в среде субкритической воды

Борисенко, Сергей Николаевич

Строение и состав продуктов экстракции и модификации биологически активных соединений в среде субкритической воды тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.04 ВАК РФ

Борисенко, Сергей Николаевич АВТОР

кандидата химических наук УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ

Ростов-на-Дону МЕСТО ЗАЩИТЫ

2009 ГОД ЗАЩИТЫ

02.00.04 КОД ВАК РФ

Диссертация по химии на тему «Строение и состав продуктов экстракции и модификации биологически активных соединений в среде субкритической воды»

Автореферат диссертации на тему "Строение и состав продуктов экстракции и модификации биологически активных соединений в среде субкритической воды"

На правах рукописи

Борисенко Сергей Николаевич

СТРОЕНИЕ И СОСТАВ ПРОДУКТОВ ЭКСТРАКЦИИ И МОДИФИКАЦИИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ В СРЕДЕ СУБКРИТИЧЕСКОЙ ВОДЫ

02.00.04 — физическая химия

автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Ростов-на-Дону 2009

003481718

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте физической и органической химии Южного федерального университета

Научный руководитель:

доктор химических наук, профессор

Харабаев Николай Николаевич

Официальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор

Капабин Геннадий Александрович

доктор технических наук, профессор

Кужаров Александр Сергеевич

Ведущая организация: Международный Томографический Центр СО РАН

Защита диссертации состоится 13 ноября 2009 года в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 212.208.14 при Южном федеральном университете по адресу: 344090, г. Ростов-на-Дону, пр. Стачки 194/2, НИИ ФОХ ЮФУ конференц-зал.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Южного федерального университета по адресу: 344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Пушкинская 148).

Автореферат разослан 12 октября 2009 года

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор химических наук

А.С.Морковник

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Поиск экологически безопасных методов экстракции и химической модификации фармацевтически значимых соединений растительного происхождения является одним из приоритетных направлений современной химии. Замена токсичных органических растворителей экологически чистыми суб- и суперкритическими флюидами, такими как С02 и вода, является наиболее перспективным подходом к решению поставленных задач. В последнее десятилетие, для экстракции и химической модификации биологически активных соединений предложено использовать субкритическую воду (перегретая вода под давлением при температурах от 100°С до 374°С). Для России, с ее богатейшими растительными ресурсами, возможность использования субкритической воды в технологических процессах является чрезвычайно актуальной и имеет огромное практическое значение, особенно с учетом экологической чистоты, доступности и дешевизны воды (по сравнению с традиционными токсичными и дорогостоящими органическими растворителями). Поэтому, исследования, нацеленные на разработку экологически чистых методик экстракции и химической модификации биологически активных соединений в среде субкритической воды, являются актуальными и имеют значительный инновационный потенциал.

Цель работы: разработка экологически чистых методик экстракции и химической модификации биологически активных соединений в среде субкритической воды и установление состава полученных продуктов с использованием масс-спектрометрии с ионизацией электроспреем и спектроскопии ЯМР.

В задачи исследований входило:

1) Разработка экологически чистых методик (без использования органических растворителей) экстракции и химической модификации в среде субкритической воды биологически активных соединений растительного происхождения, имеющих значительный фармацевтический потенциал.

2) Установление строения и состава полученных продуктов с использованием физико-химических методов: спектроскопии ЯМР и масс-спектрометрии с ионизацией электроспреем.

3) Сравнение эффективности методик с использованием субкритической воды для получения биологически активных биофлавоноидов и тритерпеновых гликозидов с результатами традиционных методов экстракции, основанных на применении органических растворителей в качестве экстрагента.

4) Изучение изомеризации изохинолинового алкалоида глауцина в фенантреновый природный алкалоид дес-глауцин.

5) Синтез в среде субкритической воды одного из интенсивно изучаемых макроциклов - циклотривератрилена.

Научная новизна. Впервые среда субкритической воды использована для экстракции биофлавоноидов кверцетина и дигидрокверцетина, а также для извлечения смеси аралозидов из аралии манчжурской - биологически активных соединений растительного происхождения, имеющих значительный фармацевтический потенциал, как в РФ, так и за рубежом. Осуществлена изомеризация природного алкалоида апорфинового ряда глауцина в фенантреновый алкалоид дес-глауцин в среде субкритической воды с выходом, в три раза превышающим лучший из описанных ранее в литературе результатов. Впервые в среде субкритической воды осуществлён синтез макроциклических соединений циклотривератрилена и

циклотетравератрилена.

Практическая ценность работы. Продемонстрированы принципиальные преимущества использования субкритической воды (горячей воды под давлением) для извлечения биологически активных соединений класса биофлавоноидов и тритерпеновых гликозидов по сравнению с традиционными методами. Разработаны методы изучения строения продуктов и анализа состава смесей, полученных как в результате экстракции из природных объектов, так и в ходе химических реакций в среде субкритической воды, с использованием жидкостной хроматомасс-спектрометрии с ионизацией электроспреем.

Предложены экологически безопасные методики получения биологически активных биофлавоноидов в среде субкритической воды, обладающих широким спектром терапевтического действия (антиоксидантное, капилляроукрепляющее действие и др.), присущего как индивидуальным веществам из группы флавоноидов, так и их смесям, что позволяет создавать на их основе большое число лекарственных форм. Предлагаемые методики экстракции и синтеза в среде субкритической воды, как правило, более эффективны и экологически безопасны по сравнению с традиционными подходами, основанными на использовании дорогостоящих и токсичных органических растворителей. Предлагаемые подходы открывают возможности получения перспективных с фармакологической точки зрения соединений в экологически чистых реакционных средах. По материалам работы подано 4 заявки на изобретения.

Апробация работы. Основные результаты работы представлены на III Международной научно-практической конференции "Сверхкритические флюидные технологии: инновационный потенциал России", (Ростов-на-Дону; 11-12 октября 2006); IX Международном Семинаре по магнитному резонансу (спектроскопия, томография, экология) 15-20 сентября 2008 год; V Международной научно-технической конференции "Актуальные вопросы теоретической и прикладной биофизики, физики и химии. БФФХ-2009", (Севастополь, 21-25 апреля 2009); IV, V Международной конференции по новым технологиям и приложениям современных физико-химических методов (Ростов-на-Дону, 18-22 сентября 2007, 1 - 5 июня 2009), V Международной

научно-практической конференции «Сверхкритические флюиды: фундаментальные основы, технологии, инновации» (Суздаль, 15-18 сентября 2009); V Ежегодной научной конференции студентов и аспирантов базовых кафедр Южного научного центра РАН, (г. Ростов-на-Дону, 2009), III Всероссийской конференции «Аналитика России» (г. Краснодар, 27 сентября -2 октября 2009 г.)

Работа выполнена при поддержке грантов Министерства образования и науки РФ (РНП 2.2.2.23915 и 2.1.1.4939), президента РФ по поддержке ведущих научных школ (НШ-363.2008.03) и Американского фонда гражданских исследований и развития (США) по Российско-американской программе "Фундаментальные исследования и высшее образование" (гранты CRDF ВРЗС04, ВР4М04).

Частично полученные в работе результаты использовались для реализации проекта по программе Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере СТАРТ-06 (г/к 4366р/6813).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 16 работ, включая 5 статей в журналах, рекомендуемых ВАК, и 11 работ в материалах и тезисах докладов Международных и Всероссийских конференций и семинаров.

Объем и структура диссертации.

Диссертация состоит из введения, 3 глав, выводов, списка цитируемой литературы (209 наименований)

Работа изложена на 108 страницах, содержит 44 рисунков и 9 таблиц.

Во введении обосновывается актуальность диссертационной работы, сформулированы цели и задачи исследования.

Глава I диссертации содержит обзор литературы, где рассмотрены основные теоретические и экспериментальные данные по применению суб- и суперкритических флюидных сред для экстракции и модификации различных соединений. Отмечено, что вода, находящаяся в жидком субкритическом состоянии (при температурах выше 100 °С и ниже 374 °С и давлении, обеспечивающим нахождение воды в жидкой фазе), является весьма эффективным и экологически чистым инструментом экстракции и химической модификации биологически активных соединений, за счет возможности изменения ее физико-химических свойств (диэлектрической проницаемости, ионного произведения, диффузионных свойств и плотности) при увеличении давления и температуры.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Экстракция биофлаваноидов

Экстракцию субкритической водой в проточном режиме проводили с помощью специально разработанной и изготовленной оригинальной установки (рис. 1).

Рис. 1 Блок - схема и фотография установки для экстракции биофлавоноидов субкритической водой: 1. Емкость для воды; 2. Насос; 3. Термостат; 4. Контур предварительного нагрева; 5. Картридж; 6. Рестриктор (ограничитель давления); 7. Емкость для сбора экстракта

С использованием разработанной установки изучена возможность экологически чистого способа выделения флавоноидов из растительного сырья на примере естественного антиоксиданта — кверцетина.

Кверцетин I Дигидрокверцетин II

В качестве сырья использовали горец перечный (Polygonum hydropiper L., спорыш). Экстракцию проводили перегретой водой (субкритической водой) при температуре до 250 С и давлении 120 атм в течение 30 минут. Соответствующая хроматограмма смеси представлена на рис 2.

Рис. 2 Хроматограмма экстракта, полученного в среде субкритической воды из травы горца перечного(Ро^опит Ьус1гор1рег Ь.)

Для оценки эффективности предложенной экстракции в среде субкритической воды проведено сравнение с результатами экстракции, полученных традиционным метанольным методом извлечения флавоноидов. Результаты представлены в таблице № 1.

Таблица №1 Содержание флавоноидов и кверцетина в экстрактах горца перечного, полученных различными способами.

Способ экстракции Сумма флавоноидов по площадям пиков, мВ*108 Количество кверцетина I, мкг/г Относительная доля извлечения кверцетина

Метанол 5,8 43,1 1,0

Субкритическая вода 4,8 328,0 7,6

Установлено, что экстракция субкритической водой позволяет извлечь кверцетина в 7,6 раз больше по сравнению с традиционным способом. В то же время, общая сумма флавоноидов, регистрируемая в экстракте, полученном в субкритической воде, меньше, чем при традиционной метанольной экстракции. Для изучения причин такого поведения, экстракция в среде субкритической воды была осуществлена в нескольких температурных интервалах. Результаты исследований показали, что при температурах ниже 100 С кверцетина извлекается столько же, сколько извлекается традиционной метанольной экстракцией (44,0 мкг/г),. При нагревании воды от 100 С - до 150 С извлекается 61,3 мкг/г , а в интервале от 150 С до 250°С извлекается дополнительно еще 222,7 мкг/г (рис. 3).

мкг/г

В Метанол

а Субкритическая вода, температура до 100 °С

Ш Субкритическая вода, температура от 100°С до 150 °С

И Субкритическая вода,температура от 150 °С до

250°С

Рис. 3 Зависимость содержания кверцетина в смесях экстрактов горца перечного (Polygonum hydropiper L.), полученных различными способами

Следует предположить, что повышение температуры воды способствует высвобождению кверцетина, связанного в растительной матрице. В частности, это может быть результат реакции гидролиза присутствующих в растительной матрице гликозидов биофлаваноидов, таких, например, как рутин или его (кверцетина) другие гликозиды. Это косвенно подтверждается наблюдаемым в эксперименте уменьшением площадей хроматографических пиков флавоноидов при сравнении с результатами традиционной экстракции (Табл.1). Разработанная установка была использована для изучения процесса гидролиза рутина III (дигликозида образованного кверцетином и восстанавливающими сахарами глюкозой VI и рамнозой V) до кверцетина I в среде субкритической воды. Схема реакции представлена на рисунке 4.

но

о он

Рис. 4 Схема получения кверцетина I из рутина Ш в субкритической воде

Результаты хроматографии стандартного раствора рутина и экстракта, полученного на установке через 30 мин. приведены на рис. 5а и 56 соответственно.

1 [-.-.

2 00 4.00 в.00 В.00 10.00^12.00 14.00 10.00 16.00

а)

Рис. 5 а) Хроматограмма рутина; б) хроматограмма смеси, полученной из рутина в среде субкритической воды

В отличие от хроматограммы стандартного раствора рутина, которая содержала один пик с временем выхода 7.7 мин. (Рис. 5), в смеси, полученной из рутина в среде субкритической воды, наблюдаются хроматографические пики с временами выхода от 6.18 до 7.75 и 9.32 мин, что может соответствовать смеси из двух и более соединений (пик 6.18 - 7.75 мин уширен). Для определения качественного состава смеси, с использованием масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением были исследованы компонентаые составы соответствующих хроматографических пиков. Для пика (6.18 - 7.75 мин) при регистрации положительных ионов обнаружены ионы с m/z 303.2 (протонированный молекулярный ион кверцетина); 465.3

(протонированный молекулярный ион фрагментации рутина); 611.4 (протонированный молекулярный ион рутина) (рис.6). Аналогично, в масс-спектре отрицательно заряженных ионов наблюдается пик с m/z 609,3 (депротонированный молекулярный ион рутина), соответствующий рутину.

; 100

149.1

.1, jiM-2221.0,

303.2.(Mj+ВД.,

611.4 ]М1Ц+Н|

[«».iMti 44)1 \мл i 335ее

7*4.1 833 0 675 7 »15 8 864.4

С' , .у", ""Ь',.и1'.

бил ¡мш-»Г

' 'И» ' 875.3 »201 И1.71И.1.

100 150 200 250 300 350 400 450 500 S50 600 _650 700 750 600 ' 850 900 850 1000

Рис. 6 Масс-спектры положительных (а) и отрицательных ионов (б), полученные для пика с временем выхода 7,22 мин

Для хроматографического пика 9,32 мин, при регистрации отрицательных ионов в масс-спектре наблюдаются только ионы с m/z 301.2 (депротонированный молекулярный ион кверцетина), соответствующие кверцетину. Что доказывает эффективность процессов гидролиза рутина в условия субкритической воды с образованием кверцетина, без применения кислотного катализатора, обычно используемого в этих случаях. Данный механизм может осуществляться и при экстракции кверцетина из растительного материала, что, вероятно, является причиной увеличения его выхода по сравнению с традиционной методикой. При этом масс-спектрометрия с ионизацией электроспреем позволяет установить наличие кверцетина в продукте. Необходимо отметить, что интервал температур 230 -270 °С в области до критической точки соответствует максимальному ионному произведению воды, который выше на три порядка по сравнению с обычными условиями (температура 25°С и давление 1 атм). Субкритическая вода при таких температурах демонстрирует свойства кислотного катализатора (A.A. Галкин, В.В Лунин// Успехи химии. - 2005. - 74. - С.24-40). Вероятно, поэтому,

в большинстве изученных далее нами процессов экстракции и модификации оптимальным оказалось использование воды при температуре 250°С.

Дальнейшее развитие предложенная экспериментальная процедура и установка получили при извлечении дигидрокверцетина из отходов древесины. Дигидрокверцетин (ДКВ) 3,3',4',5,7 - пентагидроксифлаванон (II) обладает широким спектром биологической активности: антиоксидантными, капилляропротекторными свойствами в сочетании с противовоспалительным, гастро- и гепатопротекторным, гиполипидемическим и диуретическим действием. ДКВ - действующее вещество препарата «Капилар»),

В настоящее время известно множество различных способов извлечения дигидрокверцетина из растительного сырья, основанных на извлечении ДКВ с помощью полярных органических растворителей (водно-ацетоновый раствор, метилтретбутиловый эфир, водно-спиртовый раствор, этилацетат) с последующей очисткой на сорбентах и перекристаллизацией. На этом этапе работы выполнена экстракция дигидрокверцетина субкритической водой в проточном режиме (рис.1). По окончании процесса полученный водный экстракт подвергали анализу на содержания ДКВ. Хроматограмма извлечения из древесины лиственницы субкритической водой в проточном режиме представлена на рисунке 7.

ii 1 Дигидр пкагрпстл а

1 5 i » 1 n \ \ 1 \ \

fb S - \ \ \ -

г" 4 в....... в ю -г и ~ Гв «Г

Рис. 7 Хроматограмма экстракции из древесины лиственницы субкритической водой в динамическом режиме (ДКВ - пик со временем удерживания 10,79 мин)

Для извлечения ДКВ субкритической водой в проточном режиме были подобраны оптимальные условия . Из полученных данных следует, что при температуре ниже 150 °С, а также свыше 190 °С выход дигидрокверцетина уменьшается в несколько раз. Это может быть объяснено тем, что при более низкой температуре вода слабее проявляет экстракционные свойства, а при более высокой происходит разрушение дигидрокверцетина. В результате

исследований установлены оптимальные условия извлечения дигидрокверцетина в среде субкритической воды: температура 160-180°С и давление 80,5-87,5 атм (выделение 2,73 г ДКВ из 1кг опилок). Для сравнения эффективности различных методов экстракции ДКВ представлены в таблице 2 (доля эффективности извлечения традиционным методом извлечения принята за 1).

Таблица 2. Эффективность различных методов экстракции ДКВ.

Способ экстракции Условия Количество ДКВ, мкг/г* Доля извлечения

1. Традиционная экстракция ацетоном ацетон, 40°С 30 мин. 1916 1

2. Экстракция сверхкритическим СОг 350 атм, 70°С, 1 час < 1 < 0,001

3. Экстракция субкритической водой в герметичном реакторе 150°С, 1 час 1045 0,55

4. Экстракция субкритической водой в проточных условиях 160-180°С, 78-85 атм. 5 мин. 2731 1,4

* Количество параллельных определений п = 2-5

В результате исследований установлено, что экстракция субкритической водой в непрерывном режиме позволяет извлечь в 1,4 раза больше дигидрокверцетина, чем традиционным методом. Скорость процессов в закрытых системах всегда меньше в сравнении с проточными, поэтому извлечение в герметичном реакторе составило всего 56% от традиционной экстракции. В силу того, что суперкритический углекислый газ является неполярным растворителем, а дигидрокверцетин имеет в своем составе 5 полярных гидроксильных группировок, экстракция сверхкритическим С02 оказалась, малоэффективна.

2. Экстракция тритерпеновых гликозидов - аралозидов в среде субкритической воды

Другим классом биологически активных соединений растительного происхождения, к которому был применен метод экстракции в среде субкритической воды, стали аралозиды, использованные в качестве модельных тритерпеновых гликозидов. Тритерпеновые гликозиды остаются классическими объектами исследования благодаря широкому спектру их биологической активности. В качестве модельного объекта в работе выбраны типичные представители гликозидов - биологически активные вещества из

корней аралии маньчжурской ЛгаНа тапскИипса аралозиды А, В и С (на рис. 8 представлены гликозиды олеаноловой кислоты).

Рис. 8 Структурные формулы аралозидов А (Л] = Ь-арабиноза, Я2= Н), В (Л] = Ь-арабиноза, Я2 = Ь-арабиноза) и С (Я) = О-галактоза, Я2 = Б-ксилоза)

Смеси этих аралозидов являются действующими веществами лекарственных средств «Настойка аралии» и «Сапарал», применяемых в качестве тонизирующего и иммунномодулирующего средства и близких по лечебному действию к препаратам женьшеня. Исходным продуктом для лекарственных средств из аралии является концентрат «Сапарал» (ФС 42-192482), представляющий собой аморфный порошок кремового цвета без запаха с содержанием смеси аралозидов А, В и С не менее 80 %. Агликон аралозидов -олеаноловая кислота является мощным антиоксидантом и проявляет противоопухолевую активность. Классическая схема экстракции для получения смеси аралозидов включает применение в качестве экстрагентов метанола, этилацетата, н-бутанола, активированного угля, соляной кислоты и гидроксида аммония, что приводит к необходимости регенерации и утилизации значительного количества растворителей и адсорбентов. В данной части работы задача состояла в разработке экологически чистой методики экстракции смесей аралозидов, в среде субкритической воды и эффективных методик установления состава полученных продуктов с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием.

Экстракция аралозидов из корней аралии в среде субкритической воды проведена в статическом режиме. В герметичный реактор емкостью 10 см3 из нержавеющей стали помещали навеску сухого средне измельченного корня аралии и добавляли выбранный объем воды; герметично закрытый реактор помещали в термостат при температуре 140±2 °С на 1 ч. Затем реактор охлаждали, осадок вместе с остатками корней отфильтровывали, водный фильтрат пропускали через хроматографическую колонку с оксидом алюминия для хроматографии. После упаривания с применением роторного испарителя получали сыпучий порошок коричневого цвета без запаха. Наличие и концентрация аралозидов А, В и С в полученных экстрактах определены методом высокоэффективной жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии (ВЭЖХ/МС) с ионизацией электроспреем. Классический

экстракт аралозидов, используемый для сравнения, получен по литературной методике экстракцией метанолом. Так как выделение аралозидов проведено в форме солей аммония, то хроматограмма экстракта аралозидов содержит характерные изохронные группы пиков однозарядных катионов: М+Н+, M+NH/ , M+Na+ и М+К+, т.е. [М+1]+, [М+18]+, [М+23]+ и [М+39]+. Соединения с катионами, имеющими m/z 927, 944, и 949 идентифицированы как аралозид А (молекулярная масса (ММ) = 926), с m/z 1059 и 1097 - как аралозид В (ММ = 1058), с m/z 1089, 1106 и 1111 - как аралозид С (ММ = 1088) (Рис. 9). Относительное содержание аралозидов А, В и С определено методом нормировки и составило: А: В :С = 57 : 27 :16.

ь к»

812* »18.6 110.9

|мПА+нг

"\ut.j

Ni i

[MVM+NHJ'

.. 830.8____ Ш И1Д

) 95S.S SST B 8« 1 «1 Т 5 867 А

816 820

«30 836

055 В60

Рис.9 Масс-спектр положительных ионов аралозида VIA.

С использованием разработанных методик идентификации хроматографических пиков процесс экстракции аралозидов из корня аралии маньчжурской в среде субкритической воды был изучен и оптимизирован. В качестве параметров, влияющих на эффективность предложенного метода получения смеси аралозидов, были изучены влияние добавок аммиака, температуры, продолжительности экстракции и соотношения количеств сырья и экстрагента.

Таблица № 3 Сравнение результатов экстракции аралозидов из корня аралии маньчжурской (п = 6) различными методами (п = 6).

Метод экстракции Экпрагснг Время, мин. Температура, °С Выход аралозидов из 1 г сырья Эффективность извлечения**

мг/г* %*

Традиционный Метанол 180 65 23,6±2,6 2,4 1

Субкритическая вода Вода 60 140 30,1±4,5 2,9 1,3

Субкритическая вода + аммиак 1%-ный водный раствор аммиака 60 140 43,4±3,4 4,4 1,9

♦Относительно сухого корня аралии; ** относительно традиционного метода экстракции

Показано (Табл. 3), что экстракция субкритической водой с добавлением следов аммиака в статическом режиме позволяет извлечь в 1.9 раза больше аралозидов А, В и С, чем традиционно используемый метод экстракции метанолом. Этот результат можно объяснить тем, что в субкритических условиях происходит как более эффективное проникновение растворителя вглубь мицеллы, так и частичное разрушение клеток растения, способствующее извлечению аралозидов. Добавление небольшого количества аммиака позволило перевести смесь различных солей аралозидов в водорастворимую аммонийную соль. При этом следует отметить, что и чистая вода без примеси аммиака в субкритических условиях позволяет извлечь большее количество аралозидов по сравнению с традиционным методом. Кроме преимуществ в доле извлечения, в субкритических условиях процесс экстракции аралозидов идет в 3 раза быстрее, к тому же с использованием экологически безопасного растворителя-воды.

3. Изомеризация апорфинового алкалоида глауцина в фенантреновый алкалоид дес-глауции в среде субкритической воды

Изучена изомеризация нерацемической смеси энантиомеров природного апорфинового алкалоида глауцина в фенантреновый алкалоид дес-глауцин в среде субкритической воды при температуре 200-300°С в герметических условиях. В результате исследования был получен дес-глауцин (в англоязычной литературе зесо-§1аисте) с выходом 53%.

Глауцин Дес-глауцин

VII VIII

Природный апорфиновый алкалоид (+)-глауцин ((8)-Ы-метил-1',2',7,8-тетраметоксидибензо[с1е^]октагидрохинолин), выделяемый из мачка желтого (Glaucinum flavum), является противокашлевым препаратом центрального действия. Входит в состав целого ряда импортных противокашлевых препаратов. В растениях глауцин присутствует в двух формах: (+)-глауцин-основной алкалоид и (-)-глауцин-минорный. Наличие у глауцина побочного действия (гипотензивного эффекта) связывают с присутствием именно (-)-гла-уцина. При расщеплении связи C-N между хиральным атомом углерода и атомом азота глауцин превращается в дес-глауцин, представляющий собой

производное фенантрена. Целевое производное глауцина - дес-глауцин, также обладает выраженным противокашлевым действием. При этом у дес-глауцина не обнаружено побочного гипотензивного эффекта и дес-глауцин в 1,5 раза менее токсичен, чем глауцин (1Л}50=82,5). Кроме того, эти производные глауцина не являются хиральными соединениями, поэтому оба энантиомера глауцина в условиях нашей реакции дают один и тот же продукт, как следствие, увеличивая выход целевого продукта. Распространение дес-глауцина в качестве лекарственного препарата, ограничивается, прежде всего, экономическими соображениями из-за отсутствия эффективных методов его получения из самого глауцина. Таким образом, поиск эффективных способов получения дес-глауцина и его производных представляется перспективным направлением. Показано, что в среде субкритической воды при температуре 200-300°С происходит изомеризация нерацемической смеси (+)- и (-)-глауцина в дес-глауцин, что доказано данными ЯМР - и масс-спектрометрии.

л V • v \ л \ /\ ^ \ »

1 \ * \ \ \ \ \ 1 \ \

У \ \

г 1 /V/ 11,1 /

\ """*-------------------------

I..... - Обм** амяиЯ 1а»

- У» »

^ 1.0

325.Ж 35Ы47|М„„+иГ

378.320 1м>п1+х»г

376 Э2й/

к. д и

300 350 400 450 500 590

650 700 750 т*

Рис. 10 Масс-спектр дес-глауцина VIII

При прямом вводе раствора препаративно выделенного из субкритической воды дес-глауцина в масс-спектрах положительных ионов обнаружены ионы с однотипными значениями ионов m/z, которые были приписаны аддуктам дес-глауцина VIII с молекулярной массой 355 с катионом Н+, Na+ (m/z 356 и 378, соответственно) (Рис.10). Спектр ЯМР 'Н (CDC13, 5, м.д.): 2,53 (т, ЗН, СН3), 3,22 (м, 2Н, СН2), 3,50 (м, 2Н, СН2), 3,90-4,10 (4с, 12Н, 60СН3), 7,22 (с, 1Н, ар.), 7,40 (с, 1Н, ар.), 7,60 (д, 1Н, ар.), 7,85 (д, 1Н, ар.), 9,45 (ушир.м., 2Н, NH2).

Использование предлагаемой методики получения дес-глауцина открывает полезную перспективу. Экстракция алкалоида или суммы алкалоидов перегретой водой из мачка желтого обеспечивает получение дес-глауцина в одну стадию с хорошим выходом и создает возможность его дальнейшей модификации в субкритических условиях, как по фенантреновому ядру, так и по вторичной аминогруппе. Наличие у дес-глауцина желтой люминесценции может сделать его перспективным недорогим материалом для использования в синтезе соединений для молекулярной электроники (в том числе, полимерных).

Наряду с поиском эффективных методик модификации БАС в последней части работы была изучена возможность получения макроциклических соединений со свойствами молекулы «хозяина» в супрамолекулярных комплексах типа «гость» - «хозяин». В качестве целевого модельного соединения был выбран циклотривератрилен и, соответственно, в этой части работы было изучено взаимодействие вератрола и параформа в среде субкритической воды. В последнее десятилетие разнообразные производные циклотривератрилена стали объектом многопланового исследования в связи с развитием супрамолекулярной химии (Supramolecular Chemistry, 2nd edition J. W. Steed and J. L. Atwood, 2009). В литературе ранее уже сообщалось о нескольких успешных примерах электрофильного ароматического замещения в субкритической воде в отсутствие катализаторов Льюиса (A A. Kruse, Е. Dinjus, J. Supercritical Fluid, 39(3), 362-380,2007). Исходя из этих посылок, при взаимодействии вератрола IX с параформом в среде субкритической воды можно было ожидать образования макроцикла циклотривератрилена ЦТВ XI.

При взаимодействии вератрола и параформа в субкритической воде без добавления катализатора, в нашей работе впервые получена смесь продуктов, из которой хроматографически (методом ТСХ) был выделен ЦТВ XI с выходом 11%. По всем характеристикам выделенный в работе макроцикл полностью совпадает (по данным ЯМР - и масс-спектрометрии ) с аналогом полученным в классических условиях.

Масс-спектрометрический анализ, соответствующей

хроматографической (ТСХ) фракции, показал, что она на 94% состоит из ЦТВ XI и на 6% из циклотетравератрилена XII.

МеО^.

CHjO

МеО

МеО МеО

OII

МеО

ОМе

Циклотривератрилен XI

МеО ОМе

циклотетравератрилен XII

В масс-спектрах регистрируются положительно заряженные ионы с однотипными значениями m/z, которые приписаны аддуктам ЦТВ XI с катионами NH4+, Na+, К+ в соотношении 1:1 (m/z 468,473 и 489), 2:1 (m/z 918, 923 и 939) и 3:1 (m/z 1368, 1375 и 1389), соответственно (Рис.11).

4 0,8-

s 0,6 Н

6 -S 0,4 -

I °'2 '

I о,о-

461.1596

I | I I I 450

456,2049

[MXI+NH4

473

468,

1576

[MX(+Na]

[MXI+K]

XI 489 1322

I I i ' 485

ч 455

1 М 1 460

1 I 1 I 465

470

475

480

490

495 m/t

Рис. 11 Масс-спектр положительно заряженных ионов со значениями m/z от 448 до 497

Масс-спектрометрия с электроспрей ионизацией, в отличие от метода ЯМР 'н, кроме макроцикла ЦТВ XI показала наличие в полученном образце макроцикла циклотетравератрилена XII с молекулярной массой 600. Последний регистрируется в масс-спектрах положительных ионов в виде аддуктов циклотетравератрилена XII с катионами NH4+, Na+ К+ в соотношении 1:1 (m/z 618, 623 и 639), соответственно. Масс-спектрометрия

регистрирует также образование смешанных аддуктов вида тример: катион NH4+: тетрамер с m/z 1068, 1073 и 1089, соответственно (рис. 12).

Рис. 12 Масс-спектр положительно заряженных ионов со значениями m/z от 1058 до 1095

Двузаряженных ионов в масс-спектрах не обнаружено. Соотношение тример XI /тетрамер XII для полученного в субкритической воде образца определено с учетом площади пиков m/z методом внутреннего нормирования и составило 94% для триммера и 6% для тетрамера. В таблице 5, суммированы данные масс-спектрометрии при детектировании положительно заряженных ионов продуктов реакции выделенных ТСХ.

Таблица № 5 Данные масс-спектрометрии электроспрей ионизации при детектировании положительно заряженных ионов продуктов синтеза

m/z, Да S/N I Катион N

468,2032 1 615,1 39 452 nh4+ 3-циклотривератрилен

473,1587 808,8 20 180 Na+ 3

489,1320 4 422,5 117 643 К+ 3

618,2633 163,4 4 475 nh4+ 4- циклотетравератрилен

623,2187 739,4 20 002 Na+ 4

639,1913 428,6 11224 К+ 4

918,3830 279,:3 9 769 NH4+ 3+3

923,3410 6 003,6 211 956 Na+ 3+3

939,3116 1 462,2 51 933 K+ 3+3

1073,3984 420,4 10 157 Na+ 3+4

1373,5181 5 291,5 93 666 Na+ 3+3+3

Поскольку было обнаружено, что водный раствор имеет кислую реакцию, то наиболее вероятно, что в среде субкрнтической воды происходит

необратимое диспропорционирование формальдегида (реакционная среда в холостом опыте имеет рН = 3,5):

СН20 -~ НСООН + СН3ОН

Образующаяся муравьиная кислота катализирует реакцию Блана между вератролом и оставшимся формальдегидом, приводящую к образованию 3,4-диметоксибензилового спирта и последующих продуктов его конденсации. Остальные продукты реакции пока не выделены и, соответственно, не идентифицированы. Среди них содержатся несколько веществ, люминесцирующих в УФ-свете.

Выводы

1. Разработана и изготовлена установка для проведения экстракции и гидролиза биофлаваноидов в субкритической воде. Разработана экологически чистая методика экстракции кверцетина с использованием субкритической воды. Показано, что экстракция в среде субкритической воды позволяет извлекать кверцетин из горца перечного в 7,6 раз больше, по сравнению с традиционным методом.

2. Методом масс-спектрометрии с электроспрей распылением показано, что в среде перегретой воды гидролиз рутина идет без использования кислотных катализаторов, требуемых при традиционных методиках.

3. Разработана экологически дружественная методика экстракции дигидрокверцетина в среде субкритической воды. Показано, что экстракция субкритической водой в проточном режиме превосходит по эффективности традиционные методики выделения дигидрокверцетина из растительного сырья в 1,4 раза. При экстракции субкритической водой в статическом режиме наблюдается выход ДКВ, соизмеримый с традиционными методиками.

4. Продемонстрированы возможности использования масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением для установления состава экстрактов, полученных в среде субкритической воды, из корня аралии маньчжурской. Наличие и концентрация аралозидов А, В и С в полученных экстрактах определены методом ВЭЖХ/МС с ионизацией электрораспылением.

5. Разработана экологически чистая методика изомеризации глауцина до дес-глауцина в среде субкритической воды с выходом 53%. Предложенный подход позволяет развить методики получения широкого спектра фармацевтически приемлемых солей (хлоридов, бромидов, фосфатов, цитратов и др.) дес-глауцина с использованием недорогого, экологически чистого растворителя - субкритической воды.

циклотеравератрилена, широко используемые в супрамолекулярной химии в качестве молекулы «хозяина» при разработке супрамолекулярных комплексов типа «гость» - «хозяин».

Основное содержание диссертации опубликовано в следующих

работах:

1. Борисенко С. Н., Бичеров А. В., Павлюк О.В., Харабаев H.H., Борисенко Н. И., Ветрова Е. В., Минкин В. И., Борисенко Р. Н., Лекарь A.B. Разработка метода получения дес-глауцина в среде субкритической воды. Журнал «Сверхкритические Флюиды: Теория и Практика». - 2009. - Т. 4. - № 3. - С. 36

2. Борисенко С.Н., Руднев М. И., Бичеров A.B., Рябцова О.В., Борисенко Н.И., Ветрова Е.В., Минкин В.И., Лекарь A.B. Продукты взаимодействия вератрола и параформа в среде субкритической воды. Журнал «Сверхкритические Флюиды: Теория и Практика». - 2009. - Т. 4. - № 2. - 2009 С. 65-70.

3. Борисенко С. Н., Руднев М. И., Борисенко Р. Н., Тихомирова К. С., Борисенко Н. И., Ветрова Е. В., Зимаков Д. В. Масс-спектрометрия аралозидов, извлеченных в среде субкритической воды из корня аралии маньчжурской. - 2009 - Журнал «Масс-спектрометрия». - 2009. - Т. 6. - № 3. -С. 187-190.

4. Лекарь A.B., Борисенко С.Н., Максименко Е.В, Борисенко Р.Н., Ветрова Е.В., Н.И.Борисенко, Минкин В.И. Извлечение биофлавоноида - кверцетина из растительного сырья в среде субкритической воды // Журнал «Сверхкритические Флюиды: Теория и Практика». - 2008. - Т. 3. - № 2. - С. 33-36.

5. Филонова О.В., Борисенко С.Н., Максименко Е.В., Борисенко Р.Н , Лекарь A.B. Борисенко Н.И., Минкин В.И. Разработка методики экстракции дигидрокверцетина из древесины лиственницы в среде субкритической воды И Журнал «Сверхкритические Флюиды: Теория и Практика». - 2008. - Т. 3. - № 2. - С. 37-42.

6. Борисенко С.Н., Тихомирова К.С., Руднев М.И., Борисенко Н.И., Рыбаченко В.И., Г. Шредер Масс-спектрометрия и ЯМР-спектроскопия экстрактов корня аралии маньчжурской, полученного в среде субкритической воды. // Материалы V Международной конференции по новым технологиям и приложениям современных физико-химических методов. - Ростов-на-Дону. -1-5 июня. - 2009 г. - С. 104

7. Борисенко С.Н., Тихомирова К.С., Руднев М.И., Борисенко Н.И., Рыбаченко В.И. Разработка методов определения аралозидов в экстракте корня аралии маньчжурской, полученного в среде субкритической воды -// Материалы V Международной научно-практической конференции «Сверхкритические флюиды: фундаментальные основы, технологии, инновации»,- Суздаль. 15-18 сентября 2009 г. - С.62

8. Борисенко С.Н., Тихомирова К.С., Г. Шредер, Филонова О.В., Максименко Е.В., Ветрова Е.В., Борисенко Н.И., Рыбаченко В.И., Борисенко Р.Н., Руднев М.И. Исследование экстрактов корня аралии полученных в среде субкритической воды // III Всероссийской конференции «Аналитика России». -Краснодар, 27 сентября - 2 октября 2009 г. - С.379

9. Борисенко С.Н., Тихомирова К.С., Шредер Г. Исследование экстрактов корня аралии полученных в среде субкритической воды // Материалы V Международной научно-технической конференции "Актуальные вопросы теоретической и прикладной биофизики, физики и химии. БФФХ - 2009". -Севастополь. - 21 - 25 апреля. - 2009 г. - С. 212

10. Борисенко С.Н. Изомеризация глауцина в дез-глауцин в субкритической воде // Тезисы докладов V Ежегодной научной конференции студентов и аспирантов базовых кафедр Южного Научного Центра РАН. - Ростов-на-Дону. - 8-27 апреля 2009. - С.64

11. Борисенко С.Н., Бичеров A.B. Разработка методов экстракции и модификации изохинолиновых алкалоидов в среде субкритической воды и суперкритического С02. // Материалы IX Международного Семинара по магнитному резонансу. - Ростов-на-Дону. -15 - 20 сентября. - 2008. - С. 77

12. Борисенко С.Н., Бичеров A.B., Павлюк О.В., Борисенко Н.И., Ветрова Е.В., Минкин В.И. Синтез дес-глауцина в субкритической воде. // Материалы IX Международного Семинара по магнитному резонансу. - Ростов-на-Дону. -15-20 сентября. - 2008. - С. 83

13. Борисенко С.Н., Рябцова О.В., Бичеров A.B., Руднев М.И., Борисенко Н.И., Ветрова Е.В., Блохина В.Г., Минкин В.И., Синтез циклотривератрилена в субкритической воде. // Материалы IX Международного Семинара по магнитному резонансу. - Ростов-на-Дону. - 15 - 20 сентября. - 2008. - С. 84

14. Борисенко Н.И. Немазанная H.A., Рябцова О.В., Бичеров A.B., Борисенко С.Н., Блохина В.Г., Борисенко Р.Н., Шредер Г., Рыбаченко В.И. Изучение взаимодействия вератрола с параформом в среде субкритической воды // Материалы IV Международной Конференция по новым технологиям и приложениям современных физико-химических методов. - г. Ростов-на-Дону. 18-22 сентября. - 2007. С. 167

15. Борисенко С.Н., Максименко Е.В., Борисенко Н.И., Шредер Г., Рыбаченко В.И., Борисенко Р.Н. Получение кверцетина гидролизом рутина в субкритической воде. // Тезисы докладов III Международной научно-практической конференции "Сверхкритические флюидные технологии: инновационный потенциал России". - Ростов-на-Дону - 11-12 октября. - 2006. -С. 9

16. Борисенко Н.И., Минкин В.И., Шредер Г., Борисенко Р.Н., Щукина С.Н., Лекарь A.B., Борисенко С.Н. Использование субкритической воды для экстракции биологически активных соединений из растительного сырья. // Тезисы докладов III Международной научно-практической конференции "Сверхкритические флюидные технологии: инновационный потенциал России",- Ростов-на-Дону-2006. - 11-12 октября. С. 10

Печать цифровая. Бумага офсетная. Гарнитура «Тайме». Формат 60x84/16. Объем 1,0 уч,-изд.-л. Заказ № 1420. Тираж 100 экз. Отпечатано в КМЦ «КОПИЦЕНТР» 344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Суворова, 19, тел. 247-34-88

Содержание диссертации автор исследовательской работы: кандидата химических наук, Борисенко, Сергей Николаевич

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1 Теоретические и экспериментальные основы применения суб- и сперкритических флюидных сред для экстракции и модификации биологически активных соединений.

1.1 Основные этапы развития химии и физики сверхкритических сред.

1.2 Суб^ и суперкритические флюиды как среда для экстракции и модификации биологически активных соединений.

1.2.1 Экологически чистые процессы экстракции, основанные на свойствах суперкритических флюидов и среды субкритической воды.

1.2.2 Экологически чистые процессы экстракции биологически активных соединений, основанные на свойствах субкритической воды.

1.2.2.1 Свойства субкритической воды.

1.2.2.2 Извлечение биологически активных соединений из растений с использованием субкритической водной экстракции.

1.2.3 Основные направления использования субкритической воды как среды и реагента для органических реакций.

Глава 2 Строение и состав продуктов экстракции модельных биологически активных соединений в среде субкритической воды.

2.1 Извлечение биофлавоноида кверцетина из растительного сырья в среде субкритической воды.

2.2 Разработка методики экстракции дигидрокверцетина из древесины лиственницы в среде субкритической воды.

2.2.1 Экстракция дигидрокверцетина традиционным методом.

2.2.2 Экстракция дигидрокверцетина методом экстракции сверхкритическим СО

2.2.3 Экстракция субкритической водой в статическом режиме.

2.2.4 Экстракция субкритической водой в в динамическом режиме.

2.3 Разработка метода экстракции аралозидов из корня аралии маньчжурской в среде субкритической воды.

2.3.1 Общая характеристика аралозидов.

2.3.2 Строение и состав аралозидов, полученных из корней аралии маньчжурской в среде субкритической воды.

Глава 3 Разработка методов химической модификации в среде субкритической воды.

3.1 Разработка метода получения дес-глауцина в среде субкритической воды.

3.2. Изучение продуктов взаимодействия вератрола и параформа в среде субкритической воды.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертация по химии, на тему "Строение и состав продуктов экстракции и модификации биологически активных соединений в среде субкритической воды"

Поиск экологически безопасных методов экстракции и химической модификации фармацевтически значимых соединений растительного происхождения является одним из приоритетных направлений современной химии. Наиболее перспективным подходом решения таких задач в последние годы оказалась замена токсичных органических растворителей экологически чистыми суб- и суперкритическими флюидами, такими как СОг и вода. По мнению академика РАН В.В.Лунина, «.в конце 20-го и начале этого века химия жидкостей в суб- и суперкритических состояниях - одна из самых бурно развивающихся областей химической науки» [1]. Особое место среди исследований последнего десятилетия занимают работы, основанные на использовании свойств субкритической воды для процессов экстракции и химической модификации, в которых вода выступает и как среда реакции, и/или как катализатор и/или как реагент. Это обусловлено такими уникальными свойствами субкритической воды как зависимость величин диэлектрической проницаемости и ионного произведения от температуры и давления. Поэтому разработка методик экстракции и химической модификации биологически активных соединений в среде субкритической воды является весьма актуальной, особенно с учетом экологичности, доступности и дешевизны воды.

Настоящая работа нацелена на разработку экологически чистых методик экстракции и химической модификации модельных биологически активных соединений (БАС) растительного происхождения в среде субкритической воды. В качестве модельных соединений для экстракции выбраны кверцетин, дигидрокверцетин и аралозиды из корня аралии маньчжурской {Aralia mandshurica Rupr. et Maxim.), как биологически активные соединений, имеющих значительный фармацевтический потенциал как в РФ, так и за рубежом. Для установления строения и состава, полученных в среде субкритической воды, продуктов использованы методы жидкостной хроматомасс-спектрометрии с ионизацией электроспреем и спектроскопия ЯМР. Проведено сравнение эффективности разработанных методик с использованием субкритической воды для получения биологически активных биофлавонидов и тритерпеновых гликозидов с результатами 4 традиционных экстракций, основанных на применении органических растворителей.В качестве моделей для химической модификации в среде субкритической воды изучены реакция изомеризации изохинолинового алкалоида глауцина в фенантреновый природный алкалоид дес-глауцин, а также взаимодействие вератрола с параформом для получения макроциклов.

Работа выполнена при поддержке грантов Министерства образования и науки РФ (РНП.2.1.1.4939, по программе "Развитие научного потенциала высшей школы") и Американского фонда гражданских исследований и развития (США) по Российско-американской программе "Фундаментальные исследования и высшее образование" (гранты СКОБ МинОбрНауки РФ ВРЗС04, ВР4М04). Частично результаты полученные в работе использованы для реализации проекта по программе Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере СТАРТ-06 (г/к 4366р/6813).

Заключение диссертации по теме "Физическая химия"

выводы

6. Методами масс-спектрометрии изучены продукты взаимодействия вератрола и параформа в среде субкритической воды. Впервые в среде субкритической воды получены макроциклы циклотривератрилена и циклотеравератрилена, широко используемые в супрамолекулярной химии в качестве молекулы «хозяина» при разработке супрамолекулярных комплексов типа «гость» - «хозяин».

Список источников диссертации и автореферата по химии, кандидата химических наук, Борисенко, Сергей Николаевич, Ростов-на-Дону

1. А. А. Галкин, В. В. Лунин Вода в суб- и сверхкритическом состояниях -универсальная среда для осуществления химических реакций // Успехи химии. 2005. - Т. 74. - N 1. - С. 24-40.

2. Cagniard de la Tour С. // Ann. chim. phys. 1822. - P. 21, 127, 178

3. Andrews T. // Trans. Roy. Soc. London. - 1869. - P. 159, 547

4. Hannay J. В., Hogarth J. // Proc. Roy. Soc. London. - 1879. - 29. - P 324

5. Poynting J. H. // Phil. Mag. 1881. - 12. - P. 32

6. Van der Waals, J. D. Die Continuität des gasförmigen und flüssigen Zustandes Johann Ambrosius Barth. Leipzig. -1881.

7. Sage В. H., Webster D. C., Lacey W. N. // Ind. Engng. Chem. 1936. - vol. 28 -P. 1045.

8. Niggli P. // Z. Anorg. Allgem. Chem. -1912. Vol. 75. -P. 161

9. Katz D. L., Kurata F. // Ind. Engng. Chem. 1940. - Vol. 32. - P. 817

10. Kennedy G. C. // Econ. Geol.- 1950. Vol. 45. - P. 629

11. Fujiwara K., Nakamura S., Noguchi M. Critical parameters and vapor pressure measurements for 1,1,1-Trifluoroethane (R-143a) // J. Chem. Eng. Data. 1998. -Vol. 43.-P. 55-59.

12. Loren С. Wilson, W. Vincent Wilding, Howard L., Wilson, Grant M. Wilson Critical point measurements by a new flow method and a traditional static method // J. Chem. Eng. Data. 1995. - Vol. 40. - P. 765-768.

13. Daniel J. Rosenthal, Michael T. Gude, Amyn S. Teja, Janette Mendez-Santiago The critical properties of alkanoic acids using a low residence time flow method // Fluid Phase Equilibria. 1997. - Vol. 135. - 89-95.

14. Smith R.L., Teja Jr, A.S., Kay W.B. Measurement of critical temperature of thermally unstable n-alkanes // AlChe J. 1987. - Vol. 33 (2). - P. 232-238.

15. Nikitin E.D., Pavlov P.A., Skipov P.V. Measurement of the critical properties of thermally unstable substances and mixtures by the pulse-heating method // J. Chem. Thermodynamics. 1993. - Vol. 25. - P. 869-880.

16. Heng-Joo Ng, Donald B. Robinson Equilibrium phase properties of the toluene-carbon dioxide system // J. Chem. Eng. Data. 1978. - Vol. 23 (4). - P. 325327.

17. Kordikowski A., Robertson D.G., Aguiar-Ricardo A. I., Popov V.K., Howdle S.M., Poliakoff M. Probing vaponliquid equilibria of near-critical binary gas mixtures by acoustic measurements // J. Phys. Chem. 1996. - Vol. 100. - P. 9522-9526.

18. Hicks C.P., Young C.L. The gas-liquid critical properties of binary mixtures // Chem. Rev. 1975. - Vol. 75 (2). - P. 119-175.

19. Gauter K., Peters C.J. Experimental results on the fluid multiphase behavior of various ternary systems of nearcritical carbon dioxide, certain 1-alknaols and o-nitrophenol // Fluid Phase Equilibria. 1998. - P. 150-151.

20. Kordikowski A., Robertson D. G., Poliakoff M. Acoustic determination of the critical surfaces in the ternary systems CO2-CH2F2-CF3CH2F and CO-C2H4-ch3chch2 and in their binary subsystems // J. Phys. Chem. 1997. - Vol. 101. -P. 5853-5862.

21. Paulaitis M.E., Gilbert M.L., Nash C.A. Separation of ethanol-water mixtures with supercritical fluids // in the 2nd World Congress of Chemical Engineers. -Montreal. Canada. - 1981. - October.

22. Lemert R.M., Johnston K.P. Solid-liquid-gas equilibria in multicomponent supercritical fluid systems // Fluid Phase Equilibria. 1989. - Vol. 45. - P. 265286.

23. Фишер M. Природа критического состояния, пер. с англ. М.1968 .

24. Темперли Г., Роулинсон Дж., Рашбрук Дж. Физика простых жидкостей. Экспериментальные исследования. М.: Мир, 1973. 400 с.

25. M. Andrews // J. Phil. Trans. Roy. Soc. London. - 1869. Vol. 159. P. 575.

26. Анисимов M.A. Критические явления в жидкостях и жидких кристаллах. М.: Наука. 1987. - 272 с.

27. Cohen Z., Vonshak A. Fatty acid composition of Spirulina and Spirulina-like cyanobacteria in relation to their chemotaxonomy // Phytochemistry. 1991. -Vol. 30. P. 205-206.

28. Mahajan G., Kamat M. c-Linoleic acid production from Spirulina platensis // Applied Microbiology and Biotechnology. 1995. - Vol. 43. - P. 466^469.

29. Bhat V. В., Madyastha K. M. C-Phycocyanin: a potent peroxyl radical scavenger in vivo and in vitro // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2000.-Vol. 275.-P. 20-25.

30. Borowitzka M. A., Borowitzka L. // J. Micro-algal biotechnology. Cambridge, UK: Cambridge University Press. - 1988. - P. 96-100.

31. Otles S., Pire R. Fatty acid composition of Chlorella and Spirulina microalgae species // J. of AOAC International. 2001. - Vol. 84. - P. 1708-1714.

32. Xue C., Hu Y., Saito H., Zhang Z., Li Z., Cai Y., et al. Molecular species composition of glycolipids from Spirulina platensis // Food Chemistry. 2002. -Vol. 77. - P. 9-13.

33. Pinero-Estrada J. E., Bermejo Bascors P., Villar del Fresno A. M. Antioxidant activity of different fractions of Spirulina platensis protean extract // II Farmaco. 2001. - Vol. 56. - P. 497-500.

34. King, J. W. Advances in critical fluid technology for food processing // Food Science and Technology Today.-2000.-Vol. 14.-P. 186-191.

35. Anklam, E., Berg, H., Mathiasson, L., Sharman, M., Ulberth, F. Supercritical fluid extraction (SFE) in food analysis: a review // Food Additives and Contaminants. 1998. - Vol. 15. - P. 729-750.

36. Del Valle J. M., Aguilera J. M. 1999. Review: high pressure C02 extraction. Fundamentals and applications in the food industry. // Food Science and Technology International. 1998. - Vol. 5. - P. 1-24.

37. Raventors M., Duarte S., Alarcofn R. Application and possibilities of supercritical CO2 extraction in food processing industry: an overview // Food Science and Technology International. 2002. - Vol. 8. - P. 269-284.

38. Hildebrand J. H., Scott R. L. The solubility of nonelectrolytes. New York: Reinhold. 1958.

39. Valcarrcel M., Tena M. T. Applications of supercritical fluid extraction in food analysis // Fresenius Journal of Analytical Chemistry. 1997. - Vol. 358, P. 561-573.

40. Rozzi N. L., Singh R. K. Supercritical fluids and the food industry // Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety. 2002. Vol. 1. — P. 33-44.43. http://go5 .isiknowledge.com/portal.cgi

41. Tsuda T., Mizuno K., Ohshima K., Kawakishi S., Osawa, T. Supercritical carbon dioxide extraction of antioxidative component from tamarind (Tamarindus indica L.) seed coat // Journal of Agriculture and Food Chemistry. 1995. - Vol. 43. -P. 2803-2806.

42. Luegthanaphol S., Mongkholkhajornsilp D., Douglas S., Douglas P. L., Pengsopa L., Pongamphai S. Extraction of antioxidants from sweet Thai tamarind seed coatpreliminary experiments // Journal of Food Engineering. — 2004. Vol. 63. - P. 247-252

43. Yerpez B., Espinosa M., Lorpez S., Bolanos G. Producing antioxidant fractions from herbaceaus matrices by supercritical fluid extraction // Fluid Phase Equilibria. 2002. - Vol. 197. - P. 879-884;

44. Esquirvel M. M., Ribeiro M. A., Bernardo-Gil M. G. Supercritical extraction of savory oil: study of antioxidant activity and extract characterization // Journal of Supercritical Fluids. 1999. - Vol. 14. - P. 129-138.

45. Ribeiro M. A., Bernardo-Gil M. G., Esquirvel M. M. Melissa officinalis L.: study of antioxidant activity in supercritical residues // Journal of Supercritical Fluids. 2001. - Vol. 21. - P. 51-60.

46. Leal P.F., Braga M.E. M., Sato D.N., Carvalho J.E., Marques. M.O.M., Meireles M. A. A. Functional properties of spice extracts obtained via supercriticalextraction // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2003. - Vol. 51. - P. 2520-2525.

47. Mendes R. L., Coelho J. P., Fernandes H. L., Marrucho I. J., Cabral J. M. S., Novais, J. M., et al. Applications of supercritical CO2 Extraction to microalgae and plants // Journal of Chemistry Technology and Biotechnology. 1995. -Vol. 62.-P. 53-59.

48. Quirin K. W. SFE of natural antioxidants from rosemary and sage // Innovations in Food Technology.-2003.-Vol. 18.-P. 186-191.

49. Gerard D., Quirin K. W., Schwarz E. C02 extracts from rosemary and sage // Food Marketing and Technology. 1995. - Vol. 9. - P. 46-55.

50. Tena M. T., Varcafrcel M. Supercritical fluid extraction of natural antioxidants from rosemary: comparison with liquid solvent sonication // Analytical Chemistry. 1997. - Vol. 69. - P. 521-526.

51. Bauman D., Hadolin M., Rizner-Hras A., Cnes Z. Supercritical fluid extraction of rosemary and sage antioxidants // Acta Alimentaria. — 1999. Vol. 28. — P. 15-28.

52. Ibarnez E., Oca A., Murga G., Lorpez-Sebastiarn A., Tabera J., Reglero G. Supercritical fluid extraction and fractionation of different preprocessed rosemary plants // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1999. — Vol. 47.-P. 1400-1404.

53. Senorafns F. J., Ibatnez E., Cavero S., Tabera J., Reglero G. Liquid chromatographic-mass spectrometric analysis of supercritical fluid extracts of rosemary plants // Journal of Chromatography. 2000. - Vol. 870. - P. 491^99;

54. Hadolin M., Skerget M., Knez Z., Bauman D. High pressure extraction of vitamin E-rich oil from Silybum marianum // Food Chemistry. 2001. - Vol. 74. - P. 355-364.

55. Saito M., Yamauchi Y. Isolation of tocopherols from wheat-germ oil by recycle semipreparative supercritical fluid chromatography // Journal of Chromatography. 1990. - Vol. 505. - P. 257-271.

56. Gomez A. M., de la Ossa E. M. Quality of wheat germ oil extracted by liquid and supercritical carbon dioxide // Journal of the American Oil Chemists Society. 2000. - Vol. 77. - P. 969-974

57. Panfili G., Cinquanta L., Fratianni A., Cubadda R. Extraction of wheat germ oil by supercritical CO2: oil and defatted cake characterization // Journal of the American Oil Chemists Society. 2003. - Vol. 80. - P. 157-161.

58. Ge Y., Ni Y., Chen Y., Cai T. Optimization of the supercritical fluid extraction of natural vitamin E from wheat germ using response surface methodology // Journal of Agricultural and Food Science. 2002a . - Vol. 67. - P. 239-243.

59. Ge Y., Yang H., Hui B., Ni Y., Wang S., Cai T. Extraction of natural vitamin E from wheat germ by supercritical carbon dioxide // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2002b. - Vol. 50. - P. 685-689.

60. King J. W., Favati F., Taylor S. L. Production of tocopherol concentrates by supercritical fluid extraction and chromatography // Separation Science and Technology. 1996.-Vol. 31.-P. 1843-1857.

61. Baysal T., Ersus S., Starmans D. A. J. Supercritical C02 extraction of b-carotene and lycopene from tomato paste waste // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2000. - Vol. 48. - P. 5507-5511.

62. Rozzi N. L., Singh R. K., Vierling R. A., Watkins B. A. Supercritical fluid extraction of lycopene from tomato processing by-products // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2002. - Vol. - 50. P. 2638-2643;

63. Palma M., Taylor L. T. Extraction of polyphenolic compounds from grape seeds with near critical carbon dioxide // Journal of Chromatography. 1999. - Vol. 89.-P. 117-124.

64. Murga R., RuizR., Beltran S., Cabezas J. L. Extraction of natural complex phenols and tannins from grape seeds by using supercritical mixtures of carbon dioxide and alcohol // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2000. Vol. 48.-P. 3408-3412.

65. Louli V., Ragoussis N., Magoulas K. Recovery of phenolic antioxidats from wine industry by-products // Bioresource Technology. 2004. - Vol. 92. - 201 -208.

66. Ibanez E., Palacios J., Senorans F. J., Santa-Maria G., Tabera J., Reglero G. Isolation and separation of tocopherols from olive by-products with supercritical. 2000b.-Vol. 77.-P. 187-190.

67. Cadoni E., De Giorgi M. R., Medda E., Poma G. Supercritical C02 extraction of lycopene and b-carotene from ripe tomatoes // Dyes and Pigments. 2000. -Vol. 44.-P. 27-32.

68. Ollanketo M., Hartonen K., Riekkola M. L., Holm Y., Hiltunen R. Supercritical carbon dioxide extraction of lycopene in tomato skins // European Food Research and Technology. 2001. - Vol. 212. - P. 561-565.

69. Subra P., Boissinot P. Supercritical fluid extraction from a brown alga by stagewise pressure increase // Journal of Chromatography. 1991. - Vol. 543. -P. 413-424.

70. Cheung P. C. K. Temperature and pressure effects on supercritical carbon dioxide extraction of n-3 fatty acids from red seaweed // Food Chemistry. -1999.-Vol. 65. P. 399-403.

71. Mendes R. L., Coelho J. P., Fernandes H. L., Marrucho I. J., Cabral J. M. S., Novais J. M., et al. Applications of supercritical C02 Extraction to microalgae and plants // Journal of Chemistry Technology and Biotechnology. 1995a. -Vol. 62.-P. 53-59.

72. Mendes R. L., Fernandes H. L., Coelho J. P., Reis E. C., Cabral J.M. S., Novais J. M., et al. Supercritical CO2 extraction of carotenoids and other lipids from Chlorella vulgaris // Food Chemistry. 1995. - Vol. 53. - P. 99-103.

73. Mendes R. L., Nobre B. P., Cardoso M. T., Pereira A. P., Palabra A. F. Supercritical carbon dioxide extraction of compounds with pharmaceutical importance from microalgae // Inorganica Chimica Acta. 2003. - Vol. 356. - P. 328-334.

74. Qiuhui H. Supercritical carbon dioxide extraction of Spirulina platensis component and removing the stench // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1999. - Vol. 47. - P. 2705-2706.

75. Mendiola J. A., Herrero M., Cifuentes A., Ibanez E. Use of compressed fluids for sample preparation: Food applications // Journal of Chromatography A. -2007. Vol. 1152(1-2). - P. 234-246.

76. Yang Y., Kayan B., Bozer N., Pate Bryan, Baker C., Gizir A. M. Terpene degradation and extraction from basil and oregano leaves using subcritical water // Journal of Chromatography A. 2007. - Vol. 1152. - P. 262-267.

77. Uematsu M., Franck E.U. Static Dielectric constsnt of water and steam // J.Phys.Chem.Ref.Data. 1980. - Vol .9. - P. 1291.

78. Marshall W.L., Franck E.U. //J.Phys.Chem.Ref.Data. -1981. V. 10. P.295

79. Щербаков, B.B. Барботина, H.H. // Исследовано в России. 2001. - 159. - С. 1809-1815.

80. Вукалович М.П., Ривкин С.Л., Александров А.А. Таблицы теплофизических свойств воды и водяного пара. Изд-во стандартов. -М. 1969.

81. Steven В. Hawthorne, Yu Yang, David J. Miller Extraction of Organic Pollutants from Environmental Solids with Sub- and supercritical Water // Analytical Chemistry. 1994. - Vol. 66(18). - P. 2912-2920.

82. Yu Yang, Soren Bowadt, Steven B. Hawthorne, David J. Miller Subcritical Water Extraction of Poly chlorinated Biphenyls from Soil and Sediment // Analytical Chemistiy. 1995. - Vol. 67. - P. 4571-4576.

83. A. Basile, M.M. Jimenez-Carmona, A.A. Clifford Extraction of Rosemary by Superheated Water // J. Agric. Food Chem. Vol. 46 (12). - P. 5205-5209.

84. Y. Gan, Y. Yang, in: A. Gopalan, C. Wai, H. Jacobs (Eds.), Supercritical Carbon Dioxide, Separations and Processes // American Chemical Society. -Washington DC. -2003 145.

85. Kubatova A., Lagadec A.J., Miller D.J., Hawthorne S.B. Selective extraction of oxygenates from savory and peppermint using subcritical water // Flavour Frag J. -2001.-Vol. 16.-P. 64-73.

86. S. Rovio, K. Hartonen,Y. Holm, R. Hiltunen, M.-L. Riekkola Extraction of clove using pressurized hot water // Flavour Frag J. 1999. - Vol. 14. - P.399-404.

87. A. Basile, M.M. Jimenez-Carmona, A.A. Clifford Extraction of Rosemary by Superheated Water // J. Agric. Food Chem. 1998. - Vol. 46. - P. 5205- 5209.

88. R.S. Ayala, M.D. Luque de Castro, Food Chem. 75 (2001) 109.1011. Rodr'iguez-Meizoso, F.R. Marin, M. Herrero, F.J. Se~norans, G. Reglero, Cifuentes, E. Ibanez, J. Pharmaceutical and Biomedical Analysis 41 (2006) 1560.

89. M.S.S. Curren, J.W. King, J. Agric. Food Chem. 49 (2001) 2175.

90. DJ. Miller, S.B. Hawthorne, A.A. Clifford, J. Chem. Eng. Data 43 (1998) 1043.

91. J. Mathis, A.M. Gizir, Y. Yang, J. Chemical & Engineering Data 49 (2004) 1269.

92. P.J. Gemperline, Y. Yang, Z. Bian, Anal. Chim. Acta 485 (2003) 73.

93. A. Kubatova, A.J. Lagadec, S.B. Hawthorne, Environ. Sci. & Technol. 36 (2002) 1337.

94. Y. Yang, F. Hildebrand, Anal. Chim. Acta 555 (2006) 364

95. Luque de Castro M. D., Jimenez-Carmona M. M., Fernandez-Perez V. Towards more rational techniques for the isolation of valuable essential oils from plants // Trends in Analytical Chemistry. 1999. - Vol. 19. - P. 708-716.

96. Miller D. J., Hawthorne S. B. Solubility of liquid organic flavor and fragance compounds in subcritical (hot/liquid) water from 298 to 473 K // Journal of Chemical Engineering Data. 2000. - Vol. 45. P. 315-318;

97. Li B., Yang Y., Gan Y., Eaton C. D., He P., Jones A. D. On-line coupling of subcritical water extraction with high-performance liquid chromatography via solid-phase trapping // Journal of Chromatography. 2000. - Vol. 873. - P. 175-184.

98. Ibanez E., Kuvatova A., Senorans F. J., Cavero S., Reglero G., Hawthorne S. B. Subcritical water extraction of antioxidant compounds from rosemary plants // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2003. - Vol. 51. - P. 375-382.

99. Basile A., Jimenez-Carmona M. M., Clifford A. A. Extraction of rosemary by superheated water // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1998. - Vol. 46.-P. 5205-5209.

100. Kuvatova A., Lagadec A. J. M., Miller D. J., Hawthorne S. B. Selective extraction of oxygenates from savory and peppermint using subcritical water // Flavour and Fragrance Journal. 2001a. -Vol. 16. - 64-73.

101. Clifford A. A., Basile A., Al-Saidi S. H. A comparison of the extraction of clove buds with supercritical carbon dioxide and superheated water // Fresenius Journal of Analytical Chemistry. 1999. - Vol. 364. - P. 635-637.

102. Lee K. G., Shibamoto T. Antioxidant property of aroma extract isolated from clove buds (Syzygium aromaticum L. Merret Perry) // Food Chemistry. 2001. -Vol. 74.-P. 443-448.

103. Fernandez-Perez V., Jimenez-Carmona M. M., Luque de Castro M. D. An approach to the static-dynamic subcritical water extraction of laurel essential oil: comparison with conventional techniques // Analyst. 2000. - Vol. 125. - P. 481—485.

104. Gamiz-Garcia L., Luque de Castro M. D. Continuous subcritical water extraction of medicinal plant essential oil: comparison with conventional techniques // Talanta. 2000. - Vol. 51. - P. 1179-1185.

105. Soto Ayala R., Luque de Castro M. D. Continuous subcritical water extraction as a useful tool for isolation of edible essential oils // Food chemistry. 2001. — Vol. 75.- 109-113.

106. Denery J. R., Dragull K., Tang C. S., Li Q. X. Pressurized fluid extraction of carotenoids from Haematococcus pluvialis and Dunaliella salina and kavalactones from Piper methysticum // Analytica Chimica Acta. 2004. — Vol. 501.-P. 175-181.

107. Thompson, L. U. (2003). Flaxseed, lignans, and cancer. In S. C. Cunnane, & L. U. Thompson (Eds.), Flaxseed in human nutrition (pp. 195-222). Champaign, Illinois: AOCS Press.

108. Thompson L. U., Rickard S., Orcheson L., Seidl M. Flaxseed and its lignan and oil components reduce mammary tumor growth at a late stage of carcinogenesis // Carcinogenesis. 1996. - Vol. 17. - P. 1373-1376.

109. Mazur, W. Phytoestrogen content in foods. In H. Adlercreutz (Ed.), Phytoestrogens (pp. 729-742). London: Bailliere Tindall

110. Westcott, N. D., Muir, A. D. Process for extracting lignans from flaxseed. US Patent# 5,705,618.- 1998.

111. Choi M. P. K., Chan K. K. C., Leung H. W., Huie, C. W. Pressurized liquid extraction of active ingredients (ginsenosides) from medicinal plants using non-ionic surfactant solutions // Journal of Chromatography. 2003. - Vol. 983. — P. 153-162.

112. Ju Z. Y., Howard L. R. Subcritical water and sulphured water extraction of anthocyanins and other phenolics from dried red grape skin // Journal of Food Science. 2005. - Vol. 70. - P. 270-276.

113. Eller F. J., Taylor, S. L. Pressurized fluids for extraction of cedarwood oil from Juniperus virginianna // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2004. -Vol. 52.-P. 2335-2338.

114. Colin H.L. Ho, Juan E. Cacace, Mazza G. Extraction of lignans, proteins and carbohydrates from flaxseed meal with pressurized low polarity water LWT // Food Science and Technology. 2007. - Vol. 40. - P. 1637-1647.

115. O. Pourali, F. S. Asghari, H. Yoshida Simultaneous rice bran oil stabilization and extraction using sub-critical water medium // Journal of Food Engineering. -2009. Vol. 95. -P.510-516.

116. Hassas-Roudsari M., Chang P.R., Pegg R.B., Tyler R. T. Antioxidant capacity of bioactives extracted from canola meal by subcritical water, ethanolic and hot water extraction // Food Chemistry. 2009. - Vol. 114. - P. 717-726.

117. Amashukeli X., Pelletier C. C., Kirby J. P., Grunthaner F. J. Subcritical water extraction of amino acids from Atacama Desert soils // J. Geophys. Res. Biogeosciences. 2007. - Vol. 112

118. Amashukeli X., Grunthaner F.J., Patrick S. B., To Yung P. Subcritical Water Extractor for Mars Analog Soil Analysis Astrobiology. 2008. - Vol. 8(3). P. 597-604.

119. Savage P.E. Organic chemical reactions in supercritical water. // Chemical Reviews. 1999. - Vol. 99. - P. 603-621.

120. Anastas P.T., Warner J.C., 1998. Green Chemistry: Theory and Practice, Oxford University Press, Oxford.

121. Bezdek, R.H., 1999. State of the industry: jobs and sales created by environmental protection. New England's Environment 8.

122. Brown J.S., Glaser R., Liotta C.L., Eckert C.A. Acylation of activated aromatics without added acid catalyst // Chemical Communications. 2000. 1295-1296.

123. Mitsutani A., Future possibilities of recently commercialized acid/base-catalyzed chemical processes // Catalysis Today. 2002. - Vol. 73. - P. 57-63.

124. Savage Phillip E. Organic Chemical Reactions in Supercritical Water // Chem. Rev. 1999. - Vol. 99 (2). - P. 603-622.

125. Naoko Akiya, Savage Phillip E. Roles of Water for Chemical Reactions in High-Temperature Water // Chem. Rev. 2002. - Vol. 102 (8). - P. 2725-2750.

126. Michael Siskin, Alan R. Katritzky Reactivity of Organic Compounds in Superheated Water: General Background // Chem. Rev. 2001. - Vol. 101 (4). -P. 825-836.

127. A. Kruse, E. Dinjus Hot compressed water as reaction medium and reactant Properties and synthesis reactions // J. of Supercritical Fluids. 2007. - Vol. 39. -P. 362-380.

128. Chandler K.; Deng F.; Dillow A. K.; Liotta C. L.; Eckert C. A. Alkylation Reactions in Near-Critical Water in the Absence of Acid Catalysts // Ind. Eng. Chem. Res. 1997. - Vol. 36. -P. 5175-5179.

129. Shawn E. Hunter, Phillip E. Savage Acid-Catalyzed Reactions in Carbon Dioxide-Enriched High-Temperature Liquid Water // Ind. Eng. Chem. Res. -2003.-Vol. 42.-P. 290-294

130. Hunter S.E., Savage P.E. Recent advances in acid- and base-catalyzed organic synthesis in high-temperature liquidwater // Chem. Eng. Sci. 2004. - Vol. 22/23.-P. 4903^909.

131. Xiuyang Lu, Zhun Li, and Fei Gao Base-Catalyzed Reactions in NH3-Enriched Near-Critical Water // Ind. Eng. Chem. Res. 2006. - Vol. 45. - P. 4145-4149

132. Craig M. Comisar, Shawn E. Hunter, Ashley Walton, and Phillip E. Savage Effect of pH on Ether, Ester, and Carbonate Hydrolysis in High-Temperature Water // Ind. Eng. Chem. Res. 2008. - Vol. 47. - P. 577-584.

133. Akiya N.; Savage P. E. Kinetics and Mechanism of Cyclohexanol Dehydration in High-Temperature Water // Ind. Eng. Chem. Res. 2001. - Vol. 40. - P. 1822-1831.

134. Hunter S.E., Savage P.E. Kinetics and mechanism of pisopropenylphenol synthesis via hydrothermal cleavage of bisphenol A // Journal of Organic Chemistry. 2004. - Vol. 69. - P. 4724^731.

135. Alemon P.A., Boix C., Poliakoff M. Hydrolysis and saponification of methyl benzoates // Green Chemistry. 1999. - Vol. 1. - P. 65-68.

136. Hunter S.E., Savage P.E. Acid-catalyzed reactions in carbon dioxide-enriched high-temperature liquid water // Industrial & Engineering Chemistry Research. -2003. Vol. 42. - P. 290-294.

137. Richter T., Vogel H. The dehydration of 1,4-butanediol to tetrahydrofuran in supercritical water // Chemical Engineering & Technology. 2001. - Vol. 24. -P. 340-343.

138. Anikeev V.I., Ermakova A., Manion D., High R. Reaction kinetics of 2-propanol dehydration in supercritical water // Kinetics and Catalysis. 2002. - Vol. 43. -P. 189-194.

139. Goto M., Umeda M., Kodama A., Hirose Т., Nagaoka S., Matsuda S., Masuhara, S., Hiraki J. Synthesis of 2-amino-s-caprolactam by cyclodehydration of lysine in subcritical water // Journal of Chemical Engineering of Japan. 2004. - Vol. 37.-P. 353-356.

140. Блажей А., Шутый JI. / Фенольные соединения растительного происхождения. / Перевод со словацкого к.х.н. Сергеева А.П. Изд. «Мир» М., 1977г.

141. Notar М, Leskovsek Н.; Fresenius J. Analytical Chemistry 1997, 358, 623-629

142. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии. / Пер. с англ. Под ред. А. Хеншен и др. М.: «Мир», 1988. 634 с.

143. Джумырко С.Ф. / Химия природных соединений, 1985. №4. с. 565.

144. Закирова Б.М., Омуркамзинова В.Б., Ержанова М.С. / Химия природных соединений, 1982.- №6. с. 781-782.

145. Хушбактова З.А., Файзиева С.Х., Сыров В.Н., Юлдашев М.П., Батеров Э.Х., Мамонхонов А.У. / Химико-фармацевтический журнал, т.35 №3, 2001, с. 35-38.

146. D.C Leaves, F. Nessa, Z. Ismail, N. Mohamed, M.R. Hakim Mas Maris/ J. Food Chemistry., v.88, p. 243-252, 2004.

147. Патент RU 2090205 №37 (1996).

148. Патент RU 2114631 №27(1997).

149. Патент RU 2201750 № 14(2002).

150. Патент RU 2034559 № 20 (1993).

151. High Contents of Nonextractable Polyphenols in Fruits Suggest That Polyphenol Contents of Plant Foods Have Been Underestimated», появившейся в 2009 году в журнале Американского химического общества J. Agric. Food Chem. 2009, 57, 7298-7303

152. С.З. Иванова, Т.Е. Федорова, JI.A. Остроухова*, С.В. Федоров, Н.А. Онучина, В. А. Бабкин «Полимер дигидрокверцетина из древесины лиственницы»□ Химия растительного сырья. 2001. №4. С. 21-24

153. Савватеев А. М. «Оценка качества и стандартизация композиций на базе диквертина» автореферат дис. кандидата фармацевтических наук, Москва -2007,26 С.

154. Jie Fu, Phillip Е. Savage, Xiuyang Lu, Hydrothermal Decarboxylation of Pentafluorobenzoic Acid and Quinolinic Acid Ind. Eng. Chem. Res. (в печати) 10.1021/ie901182y

155. Под ред. Блиновой К.Ф. и Яковлева Г.П. Ботанико-фармакологический словарь. М.:Высшая школа, 1990. 166 с.

156. Smith, L. Текст. / Smith, L , Muller, W.H. I I J.Org.Chem. 1958. - 23, 960.S

157. Мальчуковский, Л.Б. Определение тритерпеновых сапонинов в порошке и таблетках «Сапарал» Текст. / Л.Б. Мальчуковский, Н.И. Либизов // Фармация. 1971. - №2. - С. 68-71

158. Rastrelli, L., De Simone, F., Scheltino, O., Dini, А Текст. / Rastrelli, L., De Simone, F., Scheltino, O., Dini, A // J. Agric. Food: Ghem. 1996. - v. 44. - C. 3528-3533.

159. Химическая энциклопедия Текст.: в 5-ти т. М.: Советская энциклопедия, 1998 .-Т.-1.

160. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М: Медицина, Изд. 10. Т. 1., 1985. 141 с.

161. Минина С.А., Каухова И.Е. Химия и технология фитопрепаратов. М.: i Издательский дом ГЭОТАР-МЕД, 2004. 460-464 с.

162. Walton R. Subcritical solvothermal synthesis of condensed inorganic materials // Chem. Soc. Rev. 2002. v. 31. p. 230-238.

163. Государственная фармакопея XI, том 2, статья 65 «Корни аралии маньчжурской

164. Список принятых сокращений, русских и английских терминов // Масс-спектрометрия. 2004. т. 1, № 1, С. 77-78!

165. Мальчуковский Л.Б., Либизов Н.И. Определение тритерпеновых сапонинов в порошке ^таблетках "Сапарал " // Фармация. 1971. №2, С. 68-71

166. Смит.?А. Прикладная^ИК спектроскопия. Основы, техника, аналитическое применение. М.: Мир, 1982, с. 217-222, 300-318 с.

167. Сильверстейн Р., Басслер Г., Морил Т. Спектрометрическая идентификация органических соединений. М.:Мир, 1977, 422-427 с.

168. L. Rastrelli, F. De Simone, O. Scheltino, A. Dini. Constituents of Chenopodium s pallidicaule (Canihua) Seeds: Isolation and Characterization of New Triterpene

169. Saponins // J. Agric. Food. Chem., v. 44. p. 3528-3533.

170. Kai Xiao, Yang-Hua Vi, Zhong-Zhuang Wang, Hai-Feng Tang, Yi-Qing Li, Hou-Wen Lin; A Cytotoxic Triterpene Saponin: from the Root; Bark of Aralia dasyphylla // J. Nat. Prod. 1999. v. 62. p. 1030-1032.

171. J.L.Castro et ah, J.Org.Chem., 1987, 52, 3579-3584,194;Компанцева E.B., Толкачев O.H., Ботезат-Белый Ю.К. и др. Химико-фармацевтический журнал, т. 23(9). С. 1116-1120, 1989.

172. Патент США№ 5 594 033, С07С 213/02, 1997 г.196: Заявка на выдачу патента РФ 2008149899 приоритет от 18.12.2008

173. Supramolecular Chemistry, 2nd edition J. W. Steed and J. L. Atwood, 2009198; A A. Kruse, E. Dinjus, J. Supercritical Fluid, 39(3), 362-380, 2007

174. J. Org. Chem, v. 52, p. 2505-2511, 1997.

175. J.D. White, B.D. Gesner. J.Terahedron, v. 30, p. 2273-2277, 1974.

176. Robinson, G. M., J.Chem.Soc.,1915, 102, 266.

177. Lehn, J.-M. Supramolecular chemistry:. Concepts; and perspectives. VCH Weinheim, 1995

178. Steed; J;W., Atwood. J.L. Supramolecular Chemistry John Wiley & Sons Ltd:, West Sussex, England; 2000 '

179. J. W. Steed, P;C. Junk, and J: L. Atwood', J. Am. Chem. Soc., 1994,116, 1034610347

180. К. T. Holman, M. M Halihan, J. W. Steed; S. S. Jurisson, Jerry L. Atwood, J. Am. Chem. Soc:, 1995,117, 7848-7849

181. Steed; J. W.; Junk, P. C.; Atwood, J. L.; Barnes, M. J.; Raston, C. L.; Burkhalter, R. S.J. Am. Chem. Soc. 1994, 116, 10346

182. Минина С.А., Каухова И.Е. Химия и технология фитопрепаратов. М.: Издательский дом ГЭОТАР-МЕД, 2004.460-464 с.

183. Walton R: Subcritical solvothermal synthesis of condensed inorganic materials // Chem. Soc. Rev. 2002. v. 31. p. 230-238.

184. Steed, J. W.; Junk, P. C.; Atwood, J. L.; Barnes, M. J.; Raston, C. L.; Burkhalter, R. S.J. Am. Chem. Soc. 1994, 116, 10346