Высокоэффективная жидкостная хроматография природных и синтетических фенольных соединений тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.04 ВАК РФ

ВВЕДЕНИЕ

1. ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ ФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. Механизмы удерживания в жидкостной адсорбционной хроматографии

1.2. Фенольные соединения как биологически активные вещества

1.3. Высокоэффективная жидкостная хроматография в анализе растительных фенольных соединений

2. МЕТОДИКА ЭКСПЕРИМЕНТА

2.1. Объекты исследования

2.2. Подготовка подвижной фазы

2.3. Методика хроматографического эксперимента при проведении физико-химических исследований

2.4. Методика пробоподготовки и хроматографического анализа экстракта коры ивы корзиночной

2.5. Методика пробоподготовки и анализа экстракта плодов расторопши пятнистой

2.6. Методика пробоподготовки и хроматографического анализа экстракта надземной части полыни эстрагон

2.7. Оценка погрешностей эксперимента и расчета констант уравнений линейных регрессий

3. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ РАСЧЕТА КОНСТАНТ АДСОРБЦИИ И РАСПРЕДЕЛЕНИЯ ИЗ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИХ ДАННЫХ

3.1. Расчет константы гиббсовской адсорбции из хроматографических данных с учетом внеколоночных объемов

3.2. Расчет константы распределения между адсорбционным (двухмерным) и объемным растворами из хроматографических данных

4. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ЗАКОНОМЕРНОСТИ УДЕРЖИВАНИЯ ФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ В НОРМАЛЬНО-ФАЗОВОЙ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

4.1. Влияние природы фенольных соединений на хроматографическое удерживание в системах Сепарон SGX- пропанол-2 — гексан и Сепарон SGX— бутанол-1 — гексан

4.2. Влияние состава подвижной фазы пропанол-2 - гексан на хроматографическое удерживание фенольных соединений

4.3. Влияние состава подвижной фазы бутанол-1 - гексан на удерживание фенольных соединений в нормально-фазовой ВЭЖХ. Влияние природы модификатора на удерживание

5. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ЗАКОНОМЕРНОСТИ УДЕРЖИВАНИЯ ФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ В ОБРАЩЕННО-ФАЗОВОЙ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

5.1. Влияние природы фенольных соединений на хроматографическое удерживание в системе Сепарон SGX C¡g — ацетонитрил — вода

5.2. Влияние состава подвижной фазы ацетонитрил - вода на хроматографическое удерживание фенольных соединений

6. ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ В АНАЛИЗЕ ЭКСТРАКТОВ РАСТЕНИЙ, СОДЕРЖАЩИХ ФЕНОЛЬНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ

6.1. Определение триандрина и салицина в Salix viminalis L. методом об-ращенно-фазовой ВЭЖХ

6.2. Анализ флавоноидов в плодах расторопши пятнистой Silybum marianum (L.) Gaern.

6.3. Определение флавоноидов травы полыни эстрагон Artemisia dracunculus L.

ВЫВОДЫ

Актуальность работы. Химия фенольных соединений, из которых наиболее интересными являются растительные фенолы, привлекает к себе повышенное внимание исследователей, что обусловлено уникальной структурой, физико-химическими свойствами и широкими возможностями их практического применения (прежде всего, в качестве лекарственных средств). В связи с этим возникает проблема разработки надежных и эффективных методов разделения и идентификации фенольных соединений, в том числе в сложных природных объектах. Эта проблема может быть решена с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), основанной на адсорбции из многокомпонентных растворов. Теории адсорбции из жидких растворов и жидкостной адсорбционной хроматографии разработаны недостаточно. Это объясняется многообразием и сложностью межмолекулярных взаимодействий между компонентами системы. В настоящее время особое внимание уделяется исследованиям различных хрома-тографических систем, на основе которых, используя теорию адсорбции из растворов, можно будет развивать теорию хроматографического удерживания и селективности. Моделирование хроматографического процесса удерживания веществ в ВЭЖХ на основе изучения его механизма является одним из наиболее перспективных подходов, который позволяет прогнозировать свойства хромато-графической системы, оптимизировать ее состав и условия разделения.

Один из важнейших и наиболее распространенных способов оптимизации хроматографического процесса в ВЭЖХ связан с изменением природы и состава подвижной фазы. Поскольку выбор способов оптимизации хроматографиче-ской системы, в том числе и для разделения фенольных соединений, достаточно обширен и представляет сложную задачу, необходимо детальное изучение зависимости удерживания и селективности разделения этих веществ от природы адсорбента, элюента и модифицирующих добавок, вводимых в элюент.

Работа выполнялась при финансовой поддержке Федеральной целевой программы «Интеграция» (проекты № КО 357 и № ИО 588). 5

Цель работы - изучение механизма адсорбции и закономерностей удерживания фенольных соединений в нормально-фазовом (НФ) и обращенно-фазовом (ОФ) вариантах ВЭЖХ, а также влияния содержания модификаторов в подвижной фазе на удерживание и межмолекулярные взаимодействия компонентов в подвижной фазе, оптимизация разделения природных фенолов в экстрактах растений ива корзиночная Salix viminalis L., полынь эстрагон Artemisia dracunculus L., расторопша пятнистая Silybum marianum L. В соответствии с поставленной целью основными задачами работы являлись:

1. Изучение влияния строения молекул фенольных соединений на особенности их хроматографического поведения в условиях НФ и ОФ ВЭЖХ.

2. Исследование влияния природы и состава подвижной фазы на удерживание фенольных соединений в системах гидроксилированный силикагель - н-гексан — полярный модификатор (пропанол-2, бутанол-1) и октадецилиро-еанный силикагель — ацетонитрш — вода.

3. Расчет термодинамических характеристик адсорбции и межмолекулярной ассоциации фенольных соединений в изученных системах.

4. Определение вкладов функциональных групп в молекулах природных фенолов в величину энергии Гиббса адсорбции для предсказания удерживания этих соединений при различных составах подвижной фазы в ОФ ВЭЖХ.

5. Оптимизация условий хроматографического разделения, идентификация и количественное определение природных фенольных соединений - фенил-пропаноидов, фенольных гликозидов, флавоноидов - в экстрактах растений.

Научная новизна. В широком интервале составов подвижной фазы экспериментально изучено хроматографическое поведение 24 синтетических и природных фенольных соединений, определены константы уравнений Снайде-ра-Сочевинского и Скотта-Кучеры, позволяющие предсказать удерживание и селективность их разделения в НФ и ОФ вариантах ВЭЖХ. Рассчитаны термодинамические характеристики избыточной и «полной» адсорбции изученных соединений на гидроксилированном силикагеле из бинарных элюентов пропанол-2 - гексан и бутанол-1 - гексан, а также на октадецилированном силикаге6 ле из бинарного элюента ацетонитрил - вода. Рассмотрены особенности механизма адсорбции фенольных соединений, в том числе с учетом межмолекулярной ассоциации в трехкомпонентном объемном растворе. Для оценки удерживания в ОФ ВЭЖХ предложено использовать его корреляцию с величиной гид-рофильно-липофильного баланса (.ГЛБ) молекулы адсорбата. Впервые разработаны методики хроматографического анализа природных фенольных соединений в экстрактах коры ивы корзиночной, плодов расторопши пятнистой и травы полыни эстрагон с использованием подвижной фазы ацетонитрил - вода.

Основными новыми научными результатами и положениями, которые автор выносит на защиту являются:

1. Результаты исследования хроматографического удерживания и селективности разделения 24 фенольных соединений в НФ и ОФ ВЭЖХ в широком интервале концентраций модификаторов подвижной фазы.

2. Обоснование методологии расчета термодинамических характеристик адсорбции на границе твердая фаза - жидкий раствор с использованием экспериментальных величин фактора удерживания и внеколоночных объемов в хроматографической системе.

3. Анализ влияния электронного и пространственного строения молекул фенольных соединений, а также природы и состава подвижной фазы на параметры удерживания, термодинамические характеристики адсорбции и ассоциации в подвижной фазе.

4. Особенности механизма адсорбции фенольных соединений в жидкостно-адсорбционной хроматографии.

5. Методики и результаты хроматографического анализа природных фенолов в коре ивы корзиночной, траве полыни эстрагон, плодах расторопши пятнистой.

Практическая значимость работы. Полученные экспериментальные данные по параметрам удерживания фенольных соединений и установленные зависимости их удерживания от природы и состава компонентов хроматографической системы позволяют прогнозировать хроматографическое поведение и оп7 тимизировать условия их разделения, осуществлять их идентификацию в объектах окружающей среды, растительном сырье и фармацевтических препаратах.

Разработанные методики хроматографического анализа экстрактов растений используются в Самарском государственном медицинском университете при разработке новых лекарственных препаратов. Результаты исследований включены в проект Фармакопейной статьи предприятия на новое лекарственное средство «Расторопши настойка», которое проходит государственную регистрацию в Фармакопейном и Фармакологическом государственном комитете Министерства здравоохранения Российской Федерации. 8

ВЫВОДЫ

1. Исследовано хроматографическое поведение 24 фенольных соединений в различных вариантах высокоэффективной жидкостной хроматографии. Впервые в широком интервале составов подвижной фазы определены факторы удерживания 12 соединений в НФ варианте (подвижные фазы пропанол-2 - гексан и бутанол-1 - гексан, содержание спирта 1ч-15 об.%) и 24 соединений в ОФ варианте ВЭЖХ (подвижная фаза ацетонитрил - вода, содержание ацетонитрила 10-г70 об.%).

2. Впервые найдена корреляционная зависимость хроматографического удерживания в ОФ варианте ВЭЖХ от гидрофильно-липофильного баланса молекул адсорбатов. С ростом гидрофобности молекул (понижением числа ГЛБ) удерживание фенольных соединений возрастает. В случае НФ ВЭЖХ удерживание фенолов коррелирует с величиной дипольного момента их молекул при малом содержании полярных модификаторов в подвижной фазе и отсутствии внутримолекулярных взаимодействий полярных групп.

3. Показана применимость уравнения Снайдера-Сочевинского ^к = а + п Хт для описания зависимости удерживания от мольной доли модификатора в подвижной фазе для исследованных концентрационных интервалов. Рассчитаны константы этого уравнения для фенольных соединений в системах Сепарон БОХ - пропанол-2 - гексан (0.02 < Хт < 0.23), Сепа-рон 80Х - бутанол-1 - гексан (0.01 <Хт <0.20) и Сепарон 8СХ С¡$ -ацетонитрил - вода (0.04 < Хт < 0.45). Установлено, что лучшие линейные корреляции ^к от ^Хт наблюдаются в системе Сепарон БСХ- пропанол-2 ~гексан {г = 0.999±1.000).

4. Методом жидкостно-адсорбционной хроматографии определены термодинамические характеристики гиббсовской адсорбции - константы Генри КГ с и стандартные дифференциальные энергии Гиббса процесса адсорбции АаО 0 для исследованных соединений. Показано, что при постоянном составе подвижной фазы величины КГ с и АаС° зависят от числа полярных и неполярных заместителей, их природы и положения в молекуле фенольного соединения. С ростом содержания модификаторов в подвижной фазе вели

186 чины Кгс и абсолютные значения величин ЛаС° уменьшаются, что свидетельствует о снижении адсорбционной активности соединения, наиболее сильно выраженном при наличии в подвижной фазе межмолекулярных ассоциатов адсорбат-модификатор.

5. С использованием модели адсорбированного (в области Генри) раствора как мономолекулярного слоя постоянной толщины и величин факторов удерживания рассчитаны значения констант распределения Кх фенольных соединений между поверхностным («полная» адсорбция) и объемным растворами. В зависимости от природы соединения, подвижной фазы и ее состава значения Кх изменялись от 1.2 до 100. Увеличение концентрации модификатора в объемном растворе приводит к уменьшению значений Кх.

6. Для описания зависимости константы распределения Кх фенольных соединений от состава бинарного элюента применена модель Эльтекова вытес-нительной адсорбции. Показано, что эта модель хорошо описывает поведение фенольных соединений в системе Сепарон ЗСХ - пропанол-2 - гексан и простых фенолов в системе Сепарон БОХ С¡8 - ацетонитрил - вода. Рассчитаны константы тип уравнения Эльтекова, на основании которых сделан вывод о механизме вытеснения при конкурентной адсорбции в этих системах.

7. С использованием квазихимической модели адсорбции Ланина-Никитина проанализировано влияние межмолекулярной ассоциации в подвижной фазе на удерживание фенольных соединений в НФ ВЭЖХ. Путем решения уравнения Ланина-Никитина и определения его констант показано, что в системе Сепарон 8СХ - пропанол-2 - гексан ассоциаты типа модификатор-модификатор и адсорбат-модификатор в подвижной фазе не образуются (соответствующие константы ассоциации Кмм = 0, К8М = (9). В системе Сепарон 8СХ- бутанол-1 - гексан для всех соединений, кроме пирогаллола, Кмм - 0 и К8М> 1, что свидетельствует о заметном влиянии межмолекулярной ассоциации типа адсорбат-модификатор на удерживание фенолов в этой системе. Константы «чистой» адсорбции К $ (в отсутствие модификатора) увеличиваются с ростом числа гидро

187 ксильных групп и возможности осуществления их специфического взаимодействия с силанольными группами поверхности силикагеля. Величины К8М возрастают с ростом вероятности образования направленной водородной связи между молекулами фенольного соединения и бутанола-1 в объемном растворе.

8. Установлено, что в НФ ВЭЖХ при небольшом содержании модификаторов (спиртов) в гексане (< 1 об. %) элюирующая сила бинарной подвижной фазы пропанол-2 - гексан выше, чем подвижной фазы бутанол-1 - гексан, что связано с большей полярностью молекул пропанола-2 (¿и - 1.78В) по сравнению с бутанолом-1 (¿и= 1.62В). С ростом концентрации модификаторов наблюдается обратная закономерность, которая обусловлена образованием межмолекулярных ассоциатов адсорбат-модификатор в бинарном растворителе бутанол-1 — гексан, отсутствующих в растворителе пропанол-2 - гексан.

9. Изучено влияние межмолекулярной ассоциации в подвижной фазе аце-тонитрил - вода на удерживание фенольных соединений на октадецилиро-ванном силикагеле Сепарон £САГ С;§. С использованием уравнения Ланина-Никитина оценены константы адсорбции соединений К8 и константы межмолекулярной ассоциации модификатор-модификатор Кмм и адсорбат-модификатор К8М. Установлено, что константы К8 и К8М возрастают с ростом гидрофобности исследованных соединений. Для одноатомных фенолов К8М > Кмм, тогда как для двухатомных фенолов и природных фенольных соединений К8М <КММ, так как увеличение полярности и гидрофиль-ности молекул приводит к усилению специфических межмолекулярных взаимодействий фенольных соединений с молекулами воды.

10. В условиях ОФ варианта ВЭЖХ рассчитаны вклады различных функциональных групп в молекулах природных фенольных соединений в их удерживание. На основании полученных физико-химических закономерностей удерживания определены оптимальные условия разделения экстрактов растений, содержащих природные фенольные соединения и проведена их идентификация.

188

1. Киселев А.В., Яшин Я.И. Адсорбционная газовая и жидкостная хроматография. М.: Химия, 1979. 288с.

2. Киселев А.В., Пошкус Д.П., Яшин Я.И. Молекулярные основы адсорбционной хроматографии. М.: Химия, 1986. 272 с.

3. Kiselev A.V., Aratskova А.А., Gvosdovitch T.N., Yashin Ya.I. Retention behaviour of o-, m- and /?-isomers of benzene derivatives on a silica gel hydroxylated surface in liquid chromatography // J. Chromatogr. 1980. V.195. №2. P.205-210.

4. Snyder L.R. // High-Performance Liquid Chromatography, Advances and Perspectives / Ed.by S.Horvath. New York: Academic Press, 1980. V.l. P.208-315.

5. Агеев A.H., Киселев A.B., Яшин Я.И. Закономерности удерживания в жидкостной хроматографии метилзамещенных бензолов на гидроксилированном силикагеле // Докл. АН СССР. 1979. Т.249. С.377-380.

6. Kiselev A.V., Tarasova L.V., Yashin Ya.I. Influence of Intermolecular Interaction with the Liquid Chromatography // Chromatographia. 1980. V.13. P.599-602.

7. Ermoshkin A.E., Makarenko N.P., Sakodynskii K.I. High-performance liquid chromatography of organometallic compounds // J. Chromatogr. 1984. V.290. P.377-391.

8. Рудаков О.Б., Алексюк М.П., Коновалов B.B. Микроколоночная высокоэффективная жидкостная хроматография орто-замещенных гидрофобных производных бензола // Журн. аналит. химии. 2001. Т.56. №4. С.398-406.

9. Dzido Т.Н., Kossowski Т.Е., Matosiuk D. Comparison of retention of aromatic hydrocarbons with polar groups in binary reversed-phase high-performance liquid chromatography systems // J. Chromatogr. A. 2002. V.947. P.167-183.189

10. Bolliet D., Poole C.F., Roses M. Conjoint prediction of the retention of neutral and ionic compounds (phenols) in reversed-phase liquid chromatography using the solvation parameter model // Analytica Chimica Acta. 1998. V.368. P. 129-140.

11. Baldwin D.A., Debowski J.K. Determination of Phenols by HPLC down to PPT Levels. // Chromatographia. 1988. V. 26. P. 186-190.

12. Ланин C.H., Ланина H.A., Никитин Ю.С. Влияние ассоциации молекул сорбата и модификатора в подвижной фазе на удерживание в высокоэффективной жидкостной хроматографии // Журн. физ. химии. 1995. Т.69. №11. С.2045-2051.

13. Bebris N.K., Kiselev A.V., Nikitin Yu.S., Frolov I.I., Tarasova L.V., Yashin Ya.I. Liquid Chromatography on Carbosilochrom and Carbosilica Gel Silica Adsorbents with a Modified Carbon Surface // Chromatographia. 1978. V.l 1. №11. P.206-211.

14. Knox J.H., Unger K.K., Mueller H. Prospects for carbon as packing material in highperformance liquid chromatography //J. Liquid Chromatogr. 1983. V.6. №1. P. 1-36.

15. Snyder L.R. Principles of adsorption chromatography. New York: Marcel Dekker, 1968. 413 p.

16. Snyder L.R., Kirkland J.J. Introduction of modern liquid chromatography. New York: Wiley Interscience, 1979. 863 p.

17. Snyder L.R., Poppe H. Mechanism of solute retention in liquid-solid chromatography and the role of the mobile phase in affecting separation. Competition versus «sorption» //J. Chromatogr. 1980. V.184. №4. P.363-413.

18. Snyder L.R., Glajch J.L., Kirkland J.J. Theoretical basis for systematic optimization of mobile-phase selectivity in liquid-solid chromatography. Solvent-solute localization effects // J. Chromatogr. 1981. V.218. №1. P.299-326.

19. Snyder L.R., Glajch J.L. Solvent strength of multicomponent mobile-phases in liquid-solid chromatography. Further study of different mobile phases and silica as adsorbent // J. Chromatogr. 1982. V.248. №2. P.165-182.

20. Snyder L.R. Mobile phase effects in liquid-solid chromatography. Importance of adsorption-site geometry, adsorbate derealization and hydrogen bonding // J. Chromatogr. 1983. V.255. №1. P.3-26.190

21. Snyder L.R., Quarry M.A., Glajch J.L. Solvent-Strength Selectivity in Reversed-Phase HPLC. // Chromatographia. 1987. V. 24. P.33-44.

22. Soczewinski E. Solvent composition effects in thin-layer chromatography systems of the type silica gel-electron donor solvent // Anal. Chem. 1969. Y.41. №1. P.179-182.

23. Soczewinski E., Golkiewicz W. Simple molecular model for adsorption chromatography. VII. Relationship between the type (cyclohexane + polar solvent) / silica // Chromatographia. 1973. V.6. №6. P.269-272.

24. Шатц В.Д., Сахартова О.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография: Основы теории. Методология. Применение в лекарственной химии. Рига: Зинатне, 1988. 390 с.

25. Ланин С.Н., Леденкова М.Ю., Никитин Ю.С. Закономерности удерживания производных бензола на аминопропильной фазе в высокоэффективной жидкостной хроматографии // Изв. АН. Сер. хим. 1997. №5. С.987-991.

26. Бэ Ен Ил, Ланин С.Н., Никитин Ю.С. Удерживание ароматических углеводородов на силикагеле, модифицированном цианодецильными группами // Журн. физ. химии. 1997. Т.21. №4. С.713-717.

27. Сахартова О.В., Шатц В.Д. Выбор условий элюирования в обращенно-фазовой хроматографии. Приближенная априорная оценка удерживания полифункциональных кислородсодержащих соединений // Журн. аналит. химии. 1984. Т.39. №8. С.1496-1503.

28. Эльтеков Ю.А. Зависимость коэффициента емкости от состава бинарного элюента // Журн. физ. химии. 1991. Т.65. №9. С.2573-2575.191

29. Эльтекова Н.А., Эльтеков Ю.А. Коэффициенты распределения бензола, ди-фенила и 4,4'-дипиридила между подвижной водно-ацетонитрильной и неподвижными нитрильной и углеродной фазами // Журн. физ. химии. 2002. Т.76. №5. С.915-920.

30. ЗЗ.Эльтекова Н.А., Эльтеков Ю.А. Зависимость удерживания пуриновых оснований модифицированными кремнеземами от состава бинарного элюента // Журн. физ. химии. 2000. Т.74. №8. С. 1468-1473.

31. Киселев А.В. Межмолекулярные взаимодействия в адсорбции и хроматографии. М.: Высшая школа, 1986. С.306-324.

32. Киселев А.В., Эльтеков Ю.А. Адсорбция бензола из растворов в гептане на си-ликагелях разной структуры//Докл. АН СССР. 1955. Т. 100. №1. С. 107-110.

33. Эльтекова Н.А., Эльтеков Ю.А. Изучение адсорбционных свойств углеродных сорбентов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии // Журн. физ. химии. 1992. Т.66. №6. С. 1542-1548.

34. Boehm R.E., Martire D.E. A unified theory of retention and selectivity in liquid chromatography. I. Liquid-solid (adsorption) chromatography // J. Phys. Chem. 1980. V.84. №26. P.3620-3630.

35. Ларионов О.Г., Курбанбеков Э. К вопросу об уравнении изотермы адсорбции из растворов // Физическая адсорбция из многокомпонентных фаз. М.: Наука, 1972. С.85-95.

36. Scott R.P.W. The role of molecular interactions in chromatography // J. Chroma-togr. 1976. V.122. №1. P.35-53.

37. Scott R.P.W. The silica gel surface and its interactions with solvent and solute in liquid chromatography // J. Chromatogr. Sci. 1980. Y.18. №7. P.297-306.192

38. Scott R.P.W., Kucera P. Solute interactions with the mobile and stationary phases in liquid-solid chromatography // J. Chromatogr. 1975. V.l 12. №1. P.425-442.

39. Scott R.P.W., Kucera P. Examination of five commercially available liquid chromatographic reversed phases (including the nature of the solute-solvent-stationary phase interactions associated with them) // J. Chromatogr. 1977. V.142. №1. P.213-232.

40. Scott R.P.W., Kucera P. Solute-solvent interactions on the surface of silica gel // J. Chromatogr. 1978. V.149. №1.P.93-110.

41. Scott R.P.W., Kucera P. Solute-solvent interactions on the surface of silica gel, II //J. Chromatogr. 1979. V.171. №1. P.37-48.

42. Jaroniec M., Martire D.E. A general model of liquid-solid chromatography with mixed mobile phases involving concurrent adsorption and partition effects // J. Chromatogr. 1986. V.351. №1. P. 1-16.

43. Jaroniec M., Jaroniec J.A. Theoretical description of association effects in liquid adsorption chromatography with a mixed mobile phase // J. Chromatogr. 1984. V.295. №2. P.377-386.

44. Ланин C.H., Никитин Ю.С. Прогнозирование удерживания в ВЭЖХ. Вытес-нительная модель // Журн. аналит. химии. 1991. Т.46. №8. С. 1493-1502.

45. Ланин С.Н., Никитин Ю.С. Прогнозирование удерживания в высокоэффективной жидкостной хроматографии. Межмолекулярные взаимодействия в подвижной фазе // Журн. аналит. химии. 1991. Т.46. №10. С.1971-1980.193

46. Ланин С.Н., Лялюнина Э.М., Никитин Ю.С., Шония Н.К. Влияние ассоциации молекул модификатора в подвижной фазе на удерживание в высокоэффективной жидкостной хроматографии // Журн. физ. химии. 1993. Т.67. №1. С.146-150.

47. Lanin S.N., Ledenkova M.Yu., Nikitin Yu.S. Influence of the concentration of adsórbate and modifier in the mobile phase on retention in high-performance liquid chromatography // J. Chromatogr. 1998. V.797. P.3-9.

48. Rehak V., Smolokova E. Chemically bonded stationary phases for gas and high performance liquid chromatography // Chromatographia. 1976. Y.9. №5. P.219-229.

49. Rehak V., Smolokova E. Comparison of linear and branched non-polar chemically bonded stationary phases in high-performance liquid chromatography // J. Chromatogr. 1980. V.191. P.71-79.

50. Horvath Cs., Melander W., Molnar J. Solvophobic interactions in liquid chromatography with nonpolar stationary phases // J. Chromatogr. 1976. V. 125. № 1. P. 129-156.

51. Horvath Cs., Melander W. Liquid chromatography with hydrocarbonaceous bonded phases; theory and practice of reversed-phase chromatography // J. Chromatogr. Sci. 1977. V.15. №9. P.393-404.

52. Horvath Cs., Melander W., Molnar J. Liquid chromatography of ionogenic substances with nonpolar stationary phases // Anal. Chem. 1977. V.49. №1. P. 142-154.

53. Sinanoglu O. Molecular associations in biologie. New York: Acad. Press, 1968. P.427-445.

54. Sinanoglu.O., Abdulnur S. Effect of water and other solvents on the structure of biopolymers // Fed. Proc. 1965. V.24. №2. P. 12-23.

55. Schoenmakers P.J., Billiet H.A.H., Tijssen R., de Galan L. Gradient selection in reversed-phase liquid chromatogarphy // J. Chromatogr. 1978. V.149. P.519-537.194

56. Jaroniec M., Suprynowicz-Slenko D. Depedence of selectivity and resolution upon composition of the binary mobile phase in LSC // J. High Resolut. Chroma-togr. and Chromatogr. Commun. 1983. V.6. №1. P.27-30.

57. Colin H., Guiochon G., Jandera P. Interaction indexes and solvent effects in re-versed-phase liquid chromatography // Anal. Chem. 1983. V.55. №3. P.442-446.

58. Jaroniec M., Jaroniec J.A., Rozylo J.K. Determination of solvation effects in liquid adsorption chromatography with a mixed mobile phase // J. Liquid Chromatogr. 1984. V.7. P.1289-1300.

59. Jaroniec M., Jaroniec J.A. Theoretical description of association effects in liqud adsorption chromatography with a mixed mobile phase // J. Chromatogr. 1984. V.295. №2. P.377-386.

60. Nikitas P., Pappa-Louisi A., Agrafiotou P. Effect of the organic modifier concentration on the retention in reversed-phase liquid chromatography. II. Tests using various simplified models // J. Chromatogr. A. 2002. V.946. P.33-45.

61. Биохимия фенольных соединений / Под ред. Дж. Харборна. М.: Мир, 1968. 452с.73.3апрометов М.Н. Основы биохимии фенольных соединений. М.: Высшаяшкола, 1974. 214с.

62. Барабой В.А. Биологическое действие растительных фенольных соединений. Киев: Наукова Думка, 1976. 260с.75.3апрометов М.Н. Фенольные соединения: Распространение, метаболизм и функции в растениях. М.: Наука, 1993. 272с.

63. Thieme Н. Die Phenolglykoside der Salicaceen // Pharmazie. 1965. Bd. 20. S.570-574.195

64. Куркин В.А., Запесочная Г.Г., Мыцык A.B., Куркина A.B., Пименов К.С., Марьина М.С. Флавоноиды надземной части Artemisia dracimculus L., культивируемой в Самарской области // Раст. ресурсы. 1996. Вып. 1-2. С.88-91.

65. Karrer W. Konstitution und Vorkommen der organischen Pflanzenstoffe. Basel und Stuttgard: Birkhauser Verlag, 1958. S.650.

66. Куркин В.А., Запесочная Г.Г. Флаволигнаны и другие природные лигноиды. Проблемы структурного анализа // Химия природн. соед. 1987. №1. С. 11-34.

67. Janiak В., Hansel R. Phytochemisch-pharmakognostische Untersuchungen über fructus Cardui mariae // Planta medica. 1960. V. 8. №1. C.71-84.

68. Георгиевский В.П., Комиссаренко Н.Ф., Дмитрук С.Е. Биологически активные вещества лекарственных растений. Новосибирск: Наука. Сиб. отделение, 1990. 333с.

69. Барнаулов О.Д., Лимаренко А.Ю., Куркин В.А. и др. Сравнительная оценка биологической активности соединений, выделенных из видов Rhodiola L. // Хим.-фармац. журн. 1986. Т.20. №9. С.1107-1112.

70. Соколов С.Я., Ивашин В.М., Запесочная Г.Г. Исследование нейротропной активности новых веществ, выделенных из родиолы розовой // Хим.-фармац. журн. 1985. Т. 19. №11. С.1367-1371.

71. Беспалов В.Г., Александров В.А., Яременко К.В. Тормозящее влияние экстракта элеутерококка колючего на развитие экспериментально индуцированных опухолей нервной системы, шейки матки и влагалища // Хим.-фармац. журнал. 1993. Т.27. №5. С.63-65.

72. Галушкина Л.Р., Джумаев М.А., Кудрин А.Н. Влияние суммы элеутерози-дов, фенольной и полисахаридной фракции элеутерококка на адаптацию и196резистентность центральной нервной системы при ишемии // Фармация. 1990. Т.39. №2. С.59-63.

73. Дардымов И.В. Женьшень, элеутерококк (к механизму биологического действия). М.: Наука, 1976. 184с.

74. Куркин В.А., Запесочная Г.Г., Гриненко Н.А., Золотарев Б.М. Фенольные соединения коры Syringa vulgaris П Химия природн. соед. 1989. №4. С.581-582.

75. Соколов С .Я., Бойко В.П., Куркин В.А. и др. Сравнительное исследование стимулирующих свойств некоторых фенилпропаноидов // Хим.-фармац. журн. 1990. Т.24. №10. С.66-68.

76. Hikino Н., Kiso Y., Wagner Н. Antihepatotoxic actions of flavonolignans from Silybum marianum fruits // Planta medica. 1984. V.50. №3. P.248-250.

77. Leng-Peschlov E., Strenge-Hesse A. Die Mariendistel (Silybum marianum) und Silymarin als Lebertherapeuticum //Z. Phytotherapie. 1991. V.l 1. №2. P.50-58.

78. Лебедев А.А., Симерзина Л.В., Лебедев П.А. Средство, обладающее раноза-живляющим и гепатопротекторным действием Пат. РФ № 2014840, А61К 35/78. 30.06.94. Бюл. №12.

79. Харборн Д.Б. Фенольные соединения // Хроматография: Практическое приложение метода. В 2-х ч. 4.2. / Под ред. Э.Хефтмана. М.: Мир, 1986. С.242-276.

80. Wulf .L.W., Nagel C.W. Analysis of phenolic acids and flavonoids by high-pressure liquid chromatography // J. Chromatogr. 1976. V.l 16. №2. P.271-279.197

81. Куркин В.А., Гриненко Н.А., Запесочная Г.Г., Дубичев А.Г., Воронцов Е.Д. ТСХ-и ВЭЖХ-анализ сирингина в Syringa vulgaris II Химия природн. соед. 1992. №1. С.45-49.

82. Куркин В.А., Гриненко Н.А., Запесочная Г.Г. Лигнаны коры Syringa vulgaris 11 Химия природн. соед. 1992. №6. С.768-771.

83. Дубичев А.Г., Куркин В .А., Запесочная Г.Г., Воронцов Е.Д. Изучение химического состава корневищ Rhodiola rosea методом ВЭЖХ // Химия природн. соед. 1991. №2. С.188-193.

84. Куркин В.А., Запесочная Г.Г., Дубичев А.Г., Воронцов Е.Д., Александрова И.В., Панова Р.В. Фенилпропаноиды каллусной культуры Rhodiola rosea II Химия природн. соед. 1991. №4. С.481-489.

85. Сенцов М.Ф., Браславский В.Б., Куркин В.А., Запесочная Г.Г., Исследование химического состава почек Populus laurifolia Ledeb И Раст. ресурсы. 1996. Т.32. Вып. 1-2. С. 100-105.

86. Сенцов М.Ф., Браславский В.Б., Куркин В.А., Запесочная Г.Г., Бакулин В.Т., Правдивцева О.Е. Сравнительное исследование компонентного состава почек некоторых видов Populus L. методом ВЭЖХ // Раст. ресурсы. 1997. Т.ЗЗ. Вып.2. С.51-55.

87. Куркин В.А., Браславский В.Б., Запесочная Г.Г. Исследование экстрактов прополиса и почек тополя бальзамического методом высокоэффективной жидкостной хроматографии // Журн. физ. химии. 1994. Т.68. №10. С.1816-1818.

88. Не X.-G. On-line identification of phytochemical constituents in botanical extracts by combined high-performance liquid chromatographic-diode array detection-mass spectrometric techniques// J. Chromatogr. 2000. V.880. P.203-232.

89. Mouly P., Gaydou E.M., Auffray A. Simultaneous separation of flavanone glycosides and polymethoxylated flavones in citrus juices using liquid chromatography//;. Chromatogr. 1998. V.800. P.171-179.

90. He X.-g., Lin L.-z., Lian L.-z. Analysis of flavonoids from red clover by liquid chromatography-electrospray mass spectrometry // J. Chromatogr. 1996. V.755. P.127-132.198

91. Markham K.R., Mitchell K.A., Wilkins A.L., Daldy J.A., Lu Y. HPLC and GC-MS identification of the major organic constituents in New Zealand propolis // Phytochemistry. V.42. №1. P.205-211.

92. Crozier A., Jensen E., Lean M.E.J., McDonald M.S. Quantitative analysis of flavonoids by reversed-phase high-performance liquid chromatography // J. Chromatogr. 1997. V.761. P.315-321.

93. Hollman P.C.H., Trijp J.M.P., Buysman M.N.C.P. Fluorescence detection of flavonols in hplc by postcolumn chelation with aluminium // Anal. Chem. 1996. V.68.№19. P.3511-3515.

94. Monde T., Kamiusuki T., Kuroda T., Mikumo K., Ohkawa T., Fukube H. High-performance liquid chromatographic separation of phenols on a fluorcarbon-bonded silica gel column // J. Chromatogr. 1996. V.722. P.273-280.

95. Herrera J.C., Rosas Romero A.J., Crescence O.E., Acosta M., Pekerar S. Analysis of 5-hydroxy-7-methoxyflavones by normal-phase high-performance liquid chromatography // J. Chromatogr. 1996. V.740. P.201-206.

96. Syles B.A., Halsall H.B., Dorsey J.G. Retention and selectivity of flavanones on homopolypeptidebonded stationary phases in both normal- and reversed phase liquid chromatography // J. Chromatogr. 1995. V.704. P.289-305.

97. Tittel G., Wagner H. Hochleistungsflüssigchromatographische Trennung von Silymarinen und deren Bestimmung im Rohextrakt von Silybum marianum Gaertn. //J. Chromatogr. 1977. V.135. P.499-501.

98. Tittel G., Wagner H. Hochleistungsflüssigchromatographie von Silymarinen. II. Quantitative Bestimmung von Silymarin aus Silybum marianum durch Hochleistungsflüssigchromatographie // J. Chromatogr. 1978. V.153. P.227-232.199

99. Widen C.J., Pyysalo H., Salovaara P. Separation of naturally occurring acylphloroglucinols by high-performance liquid chromatography // J. Chromatogr. 1980. V.188. №1. P.213-220.

100. Wilkinson M., Sweeny J.G., Jacobucci G.A. High-pressure liquid chromatography of anthocyanidins //J. Chromatogr. 1977. V.132. №2. P.349-351.

101. Rittich В., Krcka M. Separation of quinines and their derivatives by highperformance liquid chromatography // J. Chromatogr. 1977. V.130. P.189-194.

102. Vanhaelen M., Vanhaelen-Fastre R. High-performance liquid, gas-liquid and thin layer chromatography of naturally occurring flavonoids, phenolic and related compounds // J. Chromatogr. 1980. V.187. №1. P.255-260.

103. Becker H., Wilking G., Hostettman K. Separation of isomeric glycoflavones by high-pressure liquid chromatography //J. Chromatogr. 1977. V.136. №1. P.174-175.

104. Nagels L., Van Dongen W., De Brucker J., De Pooter H. High-performance liquid chromatographic separation of naturally occurring esters of phenolic acids // J. Chromatogr. 1980. V.187. №1. P. 181-187.

105. Carlson R.E., Dolphin D. High-performance liquid chromatographic method for the analysis of isoflavones // J. Chromatogr. 1980. V.198. №2. P.193-197.

106. Bianchini J.P., Gaydon E.M. Separation of polymethoxylated flavones by straight-phase high-performance liquid chromatography // J. Chromatogr. 1980. V.190. №1. P.233-236.

107. Hartley R.D., Buchan H. High-performance liquid chromatography of phenolic acids and aldehydes derived from plants or from the decomposition of organic matter in soil//J. Chromatogr. 1979. V.180. №1. P.139-143.

108. Lea A.G.H. Reversed-phase gradient high-performance liquid chromatography of procyanidins and their oxidation products in ciders and wines, optimized by Snyder's procedures // J. Chromatogr. 1980. V.194. №1. P.62-68.

109. Hostettman K., Jacot-Guillarmod A. Application de la chromatographic de masse а Г identification de xanthones // J. Chromatogr. 1976. V.124. P.381-387.

110. Симонова Г.В. Исследования по созданию нового гепатопротекторного лекарственного средства «Силибохол». Автореф. канд. дисс. Москва. 2000. 24с.

111. Гордон А., Форд Р. Спутник химика. М.: Мир, 1976. 543с.

112. Номенклатура в хроматографии. Основные понятия. Терминология. Термодинамические характеристики сорбционного процесса. Самара: Самарский университет, 1999. 36с.

113. Garcia Dominguez J.A., Diez-Masa J.C. Retention parameters in chromatography. Part. A. Hold-up volume concept in column chromatography // Pure Appl. Chem. 2001. V.73. №6.P. 969-992.

114. Эльтекова H.A., Эльтеков Ю.А. Об определении мертвого объема колонки в жидкостной хроматографии // Журн. физ. химии. 1996. Т.70. №10. С. 1884-1887.

115. Боровиков В.П., Боровиков И.П. STATISTICA статистический анализ и обработка данных в среде Windows. М.: Издательский дом «Филинъ». 1997. 608с.

116. Ларионов О.Г. Адсорбция индивидуальных паров и растворов неэлектролитов. Дисс. . докт. хим. наук. М.: ИФХ АН СССР, 1975. 366с.

117. Ларионов О.Г., Якубов Э.С. Физико-химические характеристики смеси бензол-циклогексан, адсорбированной цеолитами NaX // Журн. физ. химии. 1995. Т.69. №11. С. 1998-2002.

118. Ларионов О.Г., Якубов Э.С. Приближенный способ оценки индивидуальной изотермы полного содержания по избыточной адсорбции бинарного раствора на микропористом адсорбенте // Журн. физ. химии. 1995. Т.69. №7. С. 1327-1329.

119. Коллоидная химия: Учеб. для университетов и хим.-техн. вузов / Е.Д. Щукин, А.В. Перцов, Е.А. Амелина. М.: Высшая школа, 1992. 414с.

120. Толмачев A.M., Рахлевская М.Н., Рябухова Т.О. Избыточные и полные величины адсорбции флюидов из многокомпонентных растворов // Журн. физ. химии. 1994. Т.68. №1. С. 190-192.

121. Осипов O.A., Минкин В.И., Гарновский А.Д. Справочник по дипольным моментам. М.: Высшая школа, 1971. 416с.

122. Современное состояние жидкостной хроматографии. Под ред. Дж.Киркленда. М.: Мир. 1974. С. 105-110.

123. Snyder L.R. Classification of the solvent properties of common liquids // J. Chromatogr. 1974. V.92. №2. P.223-230.

124. Рудаков О.Б., Селеменев В.Ф., Спитченко O.H., Коновалов В.В. Обра-щенно-фазовая микроколоночная высокоэффективная жидкостная хроматография фенолов //Журн. физ. химии. 2002. Т.76. №5. С.932-936.

125. Рудаков О.Б., Соколов М.И., Селеменев В.Ф. Вязкость бинарных подвижных фаз для высокоэффективной жидкостной хроматографии // Журн. физ. химии. 1999. Т.73. №9. С.1641-1644.

126. Крестов Г.А., Афанасьев В.Н., Ефремова Л.С. Физико-химические свойства бинарных растворителей. Справ, изд. Л.: Химия, 1988. 688с.

127. Шахпаронов М.И. Введение в современную теорию растворов. М.: Высшая школа, 1976. С.86-87.

128. Адамсон А. Физическая химия поверхностей. М.: Мир, 1979. 568с.

129. Эмульсии / Под.ред. Ф.Шермана. Л.: Химия, 1972. С.135.

130. Онучак Л.А., Минахметов P.A., Куркин В.А. Физико-химические закономерности удерживания фенольных соединений в обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии // Журн. физ. химии. 2002. Т.76. №9. С.1677-1682.

131. Химический анализ лекарственных растений: Учебное пособие для фарм. вузов / Под ред. Н.И Гринкевич., Л.Н. Сафронич. М.: Высшая школа, 1983. 176с.

132. Wagner Н., Heuer Y.H., Obermeier А. et al. Die DC- und HPLC-Analysis der Eleutherococcus Droge // Planta medica. 1982. V.44. №2. P.193-198.

133. Куркин B.A., Браславский В.Б., Запесочная Г.Г. Исследования экстрактов прополиса и почек тополя бальзамического методом высокоэффективной жидкостной хроматографии//Журн. физ. химии. 1994. Т.68. №10. С.1816-1818.

134. Krause J., Strack D. High-performance liquid chromatography Separation of glucose esters and quinic acid esters of hydroxycinnamic acids // J. Chromatogr. 1979. V.176. №3. P.465-469.

135. Becker Н., Hsich W.Ch. Chicoree saure und deren Derivative aus Echinacea - Arten // Z. Naturforschung. 1985. V.40. №7/8. P.585-587.

136. Diaz P.P., Ramos B.C., Matta G.E., New Сб-Сз and C6-Ci Compounds from Piper lenticellosus // J. Nat. Prod. 1986. V.49. №4. P.690-691.

137. Минахметов P.A., Онучак JI.A., Куркин В.А., Авдеева Е.В., Волоцуева A.B. Анализ флавоноидов в плодах Silybum marianum методом высокоэффективной жидкостной хроматографии // Химия природн. соед. 2001. Т.37. №4. С.318-321.

138. Kurkin V.A., Onuchak L.A., Minakhmetov R.A., Kurkina A.V., Avdeeva E.V. HPLC-analysis of Artemisia dracunculus L. flavonoids // 2nd International Symposium on Chromatography of Natural Products. Abstracts. Lublin Kazimierz Dolny (Poland). 2000. P.25.

139. Онучак JI.A., Куркин В.А., Минахметов P.A., Куркина A.B. Высокоэффективная жидкостная хроматография в анализе экстрактов Artemisia dracunculus // Химия природн. соед. 2000. Т.36. №2. С.115-117.

140. Растительные ресурсы СССР. Цветковые растения, их химический состав, использование: Семейства Paeoniaceae -Thymeliaceae. Л.: Наука, 1985. 336с.

141. Wagner H. The antihepatotoxic principle of Silybum marianum Gaertn. // In: Recent Flavonoids Research. Budapest. Akademiai Kiado, 1973. P. 51-68.