Исследование синтеза фосфорсодержащих соединений на основе частично защищенного дигидрокверцетина тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.03 ВАК РФ

На правах рукописи

ЗАХАРОВА Ирина Сергеевна

ИССЛЕДОВАНИЕ СИНТЕЗА ФОСФОРСОДЕРЖАЩИХ СОЕДИНЕНИЙ НА ОСНОВЕ ЧАСТИЧНО ЗАЩИЩЕННОГО ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА

Специальность 02.00.03 - органическая химия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Москва - 2004

Работа выполнена на кафедре органической химии химического факультета Московского педагогического государственного университета

Научные руководители:

доктор химических наук, профессор КОРОТЕЕВ МИХАИЛ ПЕТРОВИЧ кандидат химических наук, профессор КАЗИЕВ ГАРРИ ЗАХАРОВИЧ

Официальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор

ЗЫКНИКОЛАЙ ВАСИЛЬЕВИЧ доктор химических наук, профессор ОФИЦЕРОВ ЕВГЕНИЙ НИКОЛАЕВИЧ

Ведущая организация - Российский Университет Дружбы Народов

Защита состоится «19» апреля 2004 г. в 1530 часов на заседании Диссертационного Совета К.212.154.04 при Московском педагогическом государственном университете по адресу: 119021, г. Москва, Несвижский пер., д. 3,3 этаж, зал.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского педагогического государственного университета по адресу: 119992, г. Москва, ул. Малая Пироговская, д. 1.

Автореферат разослан

Ученый секретарь Диссертационного Совета ПУГАШОВА Н.М.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность работы. Флавоноиды (бензопираны) составляют большой класс сложных гетероциклических соединений, широко распространенных в растительном мире. Целый ряд флавоноидов обладает ярко выраженной биологической активностью, свойственной классическим витаминам. Они частично снимают остроту авитаминоза С, уменьшают проницаемость и ломкость капиллярных кровеносных сосудов. По этой причине флавоноидные соединения также стали относить к витаминам называть витамином Р (от англ. permeability - проницаемость). Типичными представителями веществ с этой активностью являются катехин, кверцетин, и его гликозид рутин. Сегодня они широко используются при лечении многих заболеваний кровеносных сосудов, гипертонии, кори, скарлатины, сыпного тифа, лучевой болезни и т.д.

В середине прошлого столетия был выделен из коры дугласовой пихты и охарактеризован дигидрокверцетин (таксифолин) - аналог кверцетина, гидрированный в положения 2 и 3. Он обладает особенно высокой Р-витаминозной активностью, и еще целым рядом других важных и полезных свойств, отсутствующих у большинства биофлафоноидов. Это соединение проявляет особенно высокую антиоксидантную активность, тормозит развитие некоторых опухолевых клеток, запуская механизм их апоптоза, устойчив к автоокислению, является малотоксичным веществом. В отличии от кверцетина, он не обладает мутагенным свойством. Дешевым возобновляемым сырьем для получения дигидрокверцетина является комлевая часть древесины лиственницы сибирской (Larix sibirica L.) и даурской (Larix dahurica Т.). Возможности выделения его показаны в ряде патентов. Все сказанное выше позволяет рассматривать дигидрокверцетин в качестве доступного и перспективного природного биорегулятора.

Необходимо отметить, что дигидрокверцетин обладает и рядом особенностей, затрудняющих его широкое использование в практических целях, в частности, обладает плохой водорастворимостью. С учетом сказанного возникла необходимость изучения его химических трансформаций, в том числе связанных с приданием молекуле флавоноида большей полярности. Одним из направлений превращений таксифолина может стать его фосфорилирование. Известно, что многие фосфорилированные продукты обладают высокой физиологической активностью. В качестве фосфорилирующих реагентов представляются особенно перспективными амиды фосфористой кислоты.

Цель работы. Целью настоящей работы является поиск общих закономерностей

фосфорилирования частично защищенного трифункциональными производными фосфористой

В задачи исследования входили:

С.Птр OS

исследование фосфорилирования метиловых и бензиловых эфиров дигидрокверцетина по свободной алифатической гидроксильной группе; изучение фосфорилирования ацетилированных производных дигидрокверцетина по ароматической гидроксильной группе;

изучение фосфорилирования одновременно по двум функциональным группам дигидрокверцетина, гидроксильной и карбонильной;

исследование некоторых химических свойств фосфорилированных производных дигидрокверцетина;

оценка физиологической активности синтезированных в работе Р (^-производных дигидрокверцетина в качестве ингибиторов деления злокачественных клеток. Научная новизна. Найдены общие закономерности фосфорилирования частично защищенного дигидровкерцетина амидами фосфористой кислоты как по свободным алифатической и ароматической гидроксильным группам, так и по карбонильной группе. Исследованы окислительные реакции полученных Р (Ш)-производных до соответствующих Р (^-производных дигидрокверцетина. Показано, что в результате синхронного фосфорилирования гидроксильной и карбонильной функций дигидрокверцетина в молекуле происходит образование четырехчленного фостонового фрагмента.

Практическая значимость. Разработана методология получения неизвестных ранее фосфорилированных производных дигидрокверцетина. Синтезированы новые Р (III)- и Р (У)-содержащие соединения, включающие ациклические и циклические фосфорсодержащие фрагменты. В ряду Р (У)-содержащих производных дигидрокверцетина найдены соединения обладающие высокой физиологической активностью.

Апробация работы. Результаты работы были представлены и обсуждались на XV Международной конференции по химии фосфора (Сендай, Япония, 2001 г.), 13-ой Международной конференции по химии соединений фосфора (Санкт-Петербург, 2002 г.), III Молодежной школы-конференции по органическому синтезу YSCOS-3 (Санкт-Петербург, 2002 г.), Ш-национальной кристаллохимичекой конференции (Черноголовка 2003 г.).

Диссертационное исследование выполнено на кафедре органической химии химического факультета МПГУ. С 2002-2003 работа выполнена в соответствии проектом федеральной целевой научно-технической программы: «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники» (шифр 02. 42.12).

Публикации. По материалам диссертации имеется шесть публикаций.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на страницах

машинописного текста, содержит <£(£ таблиц, ¿У схем и ¿Г рисунков. Список цитируемой литературы включает "¿О наименований. Работа состоит из введения, литературного обзора, посвященного биологическому значению и химическим свойствам дигидрокверцетина и его аналогов, обсуждению результатов собственных исследований, экспериментальной части, выводов и списка литературы.

Основное содержание работы.

1. Синтез и изучение строения частично защищенных производных дигидрокверцетина.

Несмотря на практическую значимость и полифукциональность молекулы, химические свойства дигидрокверцетина исследованы недостаточно, реакции образования простых и сложных эфиров, замещения в бензольном ядре, а также, отдельные превращения по карбонильной группе. До момента начала настоящих исследований в литературе не отмечены данные о получении производных трех- и пятивалентного фосфора рассматриваемого флавоноида. На нашей кафедре эта задача стала развиваться в течение пяти последних лет в направлении исследования фосфорилирования свободного и частично защищенного дигидрокверцетина.

В качестве объектов для целенаправленного фосфорилирования по оставшимся свободными гидроксильным группам были выбраны тетраалкил- и тетраацилпроизводные дигидрокверцетина.

1 Р?=РГ=Ме Р'=Н

2 Р=И"=Вп РГ=Н

3 И'-Н

Строение полученных эфиров дигидрокверцетина 1-3 было подтверждено методом ЯМР - спектроскопии на ядрах 'Н и |3С. Найденные спектральные параметры соответствовали литературным данным.

Пространственная организация эфира 1 впервые изучена методом РСА. На рис. 1 приведен общий вид молекулы 1 и сравнение его с молекулой исходного полиатомного фенола.

а) б)

Рисунок 1. Общий вид молекулы эфира 1 (а), сравнение геометрии молекул 1 и дигидрокверцетина (б).

Из данных рентгеноструктурного анализа следует, что геометрические характеристики молекулы также изменяются мало, за исключением угла поворота кольца

«В». В исходном дигидрокверцетине торсионный угол.......вокруг связи С(2)-С(9) (см

рис. 1) составлял 68,0° в эфире 1 - 47.9° . Впрочем, в различных флавоноидных соединениях этот угол варьируется в широких пределах: от 0 до 90°. Это может быть связано с низким барьером вращения кольца В вокруг ординарной связи С(2)-С(9), а также с различным окружением молекул в кристалле. В кристалле тетраметилата молекулы связаны в цепочки, в отличие от дигидрокверцетина, кристаллическая структура которого образует слоистые «стопки» (рис. 2).

а) б)

Рисунок 2. а) Кристаллические структуры: а) дигидрокверцетина, б) эфира 1.

2. Взаимодействие производных дигидрокверцетина с фосфорилирующими реагентами.

Следующий этап работы заключался в фосфорилировании полученных производных дигидрокверцетина 1-3 моно-, ди-, и трифункциональными фосфорилирующими реагентами. Фосфиты эфиров 1-3 были нами получены по общей методике при взаимодействии эквимольных количеств производных дигидрокверцетина 1-3 и амидов фосфористой кислоты. Выбор фосфорилирующих реагентов определялся их активностью и доступностью для синтеза.

Все реакции были проведены в среде абсолютного бензола, при нагревании реакционной смеси до 70-80 °С, в интервале времени от 15-20 минут до восьми часов.

Контроль за ходом реакций осуществляли методом ТСХ и ЯМР-спектроскопии на ядрах 31Р.

2.2. Фосфорилирование тетраалкилированных производных

дигидрокверцетина.

Первым направлением в работе явилось изучение фосфорилирования 3',4',5,7-тетраметилдигидрокверцетина 1 амидофосфитным методом. В качестве фосфорилирующих реагентов использовали 5,5-диметил-2-хлор-1,3,2-диоксифосфориан диметиламидонеопентиленфосфит), тетраэтилдиамидоэтилфосфит и

гексаэтилтриамид фосфористой кислоты. Процессы протекает в присутствии гидрохлорида диэтиламина, выступающего в качестве катализатора реакции алкоголиза амидов:

СЖ

■р К

О—'

уМе

4

оя

Р'Р(ЫЕЩг

5 !}= Ме, Я' = ОЕ1,

6 Р}= Ме, № = N£12,

7 Вп, = Ш2,

5-7

По окончанию фосфорилирования, в фосфорных спектрах реакционных смесей отсутствуют синглетные сигналы с химическими сдвигами 146 м.д., 134 м.д. и 117 м.д., характерными для исходных фосфорилирующих реагентов и появляются:

- синглетный сигнал с химическим сдвигом 5 3|Р 120 м.д., что соответствует значению этого параметра для циклического среднего фосфита 4;

- два равных по интенсивности синглетных сигнала с химическими сдвигами 151 и 152 м.д., которые характерные для диастереоизомеров диэфирофосфита 5;

- синглетные сигналы с химическим сдвигом 5 31Р 139 м.д. соответствующие открыто-цепным диамидофосфитам 6,7.

Фосфиты 4-7 были переведены в соответствующие фосфаты при использовании таких окисляющих реагентов, как сера, кислород и селен и выделены с выходом 75-80%. Все фосфаты 8-14 охарактеризованы физико-химическими методами и структура полученных соединений доказана при использовании метода ЯМР на ядрах 'Н И 13С. Для полученных фосфатов (8-14) дублетные сигналы от атома углерода в третьем положении находятся в области 70-80 м.д. и характеризуются константами спин-спинового взаимодействия В спектрах ПМР имеются сигналы от всех атомов водорода,

входящих в состав молекулы, с необходимой мультиплетностью.

Кроме того, было исследовано взаимодействие фосфита 4 с некоторыми производными переходных металлов, перспективное с целью получения металлокомплексных соединений, представляющих особый интерес в качестве биологически активных субстанций. Синтезированный нами фосфит 4 ввели в реакции комплексообразования с однобромистой медью и циклооктадиенилплатинадихлоридом. Были получены металлокомплексы с химическими сдвигами 5 Р ^'Р 66.13 и 64.66 м.д. с ^ре 5940.95 и 5904.79 Гц дублетного сигнала для цис-платинового комплекса 3-неопентиленфосфит 3',4',5,7-тетраметилдигидрокверцетина 15 и металлокомплекс с

характерным уширенным сигналом с химическим сдвигом 5р 103,65 м.д. для модною комплекса 3-неопентиленфосфит 3',4',5,7-тетраметилцигидрокверцетина 16 Металлокомплексы 15, 16 были выделены и охарактеризованы современнымифизико-химическими методами.

В настоящей работе показано, что при взаимодействии соединений 1 и 2 с триамидами фосфористой кислоты, в рассмотренных временных условиях (до 1-1,5 часов), наблюдается следующая стадия процесса - внутримолекулярное взаимодействие второй амидофосфитной функции с карбонильным атомом углерода, с образованием фосфоциклических соединений 17-20. Эти соединения в спектрах 3|Р ЯМР характеризуются химическими сдвигами 5 31Р 26-30 м.д., что свидетельствует о наличии в их молекулах фосфонатной связи. Выход соединений 17-20 составлял 60-70%.

В спектрах ЯМР на ядрах для соединений 17-20 в дейтерированном имеются хорошо разрешенные сигналы от всех углеродных атомов. В слабом поле известного диапазона уже больше не наблюдаются сигналы от карбонильных атомов углерода, а появляются сигналы дублетного характера в более сильном поле с химическими сдвигами 78 м.д. с КССВ прямой связи С-Р Jc-p ПО Гц для четвертого углеродного атома и 80 м.д. с КССВ J2c-P 21 Гц для третьего углеродного атома (в среднем для всех соединений). В спектрах ПМР имеются сигналы от всех атомов водорода представленных в молекуле с соответствующими химическими сдвигами и необходимой мультиплетностью.

На основании этих данных было предположено, что мы получили системы, в молекулах которых скелет дигидрокверцетина сконденсирован с фосфорсодержащим четырехчленным циклом. Эти соединения можно отнести к классу фостонов, а их синтез выглядит таким образом:

17 Я=Ме К'=ММе2 18 Я=Ме

18 И=Ме №=N£12 20 Я=Вп

Таблица 1. Параметры спектров ЯМР 13 С: химические сдвиги (в м.д.) и КССВ ,1с.р (в Гц, приведены в скобках) для соединений 17-19.

№ соед. С-2 С-3 С-4 С-5 С-6 С-7 С-8 С-9 С-10 С-1' С-2' С-3'

17 84.8 (3.5) 80.2 (20.9) 78.7 (112) 163.9 94.2 166.7 93.3 162.9 104.2 128.5 112.2 149.3

18 84.8 (3.1) 80.4 (21-2) 78.9 (113) 160.4 95.6 161.3 95.7 160.1 (6.7) 106.6 (4.8) 131.2 112.3 150.2

19 84.9 (4.1) 80.2 (20.9) 79.3 (108) 160.7 95.7 161.3 95.9 160.5 (4.5) 104.3 (2.5) 131.4 112.4 150.2

№ соед. С-4' С-5' С-6' -ОСНз <П) С-П С-12 С-13 С-14 С-15 С-16 Растворитель

17 150.3 118.8 121.3 56.5 (4) 41.6 (9.8) 36.5 (4.7) - - - - с6о6

18 150.3 110.8 119.2 55.5 (4) 46.1 (Ю.2) 15.4 41.1 (3.9) 15.5 - - С606

19 150.3 110.9 118.8 55.6 (4) 45.4 25.8 (3.7) 24.4 46.9 26.3 25.1 с6о6

Таблица 2. Параметры спектров ЯМР 13 С: химические сдвиги (в м.д.) и КССВ 1с-р (в Гц, приведены в скобках) соединения 20.

№ соед. С-2 С-3 С-4 С-5 С-6 С-7 С-8 С-9 С-Ю С-Г С-21 ^ С-11

20 82.8 (3.1) 80.4 (21.2) 78.9 (ИЗ) 163.4 94.6 164.3 94.7 160.1 (6-7) 105.6 (4-8) 139.2 114.3 149.2

Лг2 соед. С-4' С-5' С-6' -ОСН2-(») С-11 С-12 С-13 С-14 -СН2-РЬ(п) Растворитель

20 149.3 113.8 121.2 70 (4) 46.1 (10.2) 15.4 41.1 (3-9) 15.5 128 (4) с6о6

Отнесение сигналов в спектрах ЯМР 13С сделано с учетом ранее опубликованных данных, полученных для метиловых эфиров дигидрокверцетина.

Наше предположение было подтверждено данными рентгеноструктурного анализа. Пространственная организация для соединения 19 установлена методом РСА (рис. 5).

я -

т>

Р/-

иса

г^-^Л." — ____'

1

.-Г -.

{'г

I

\

а)

б)

Рисунок 3. а) Молекулярная структура соединения 19; б) кристаллическая структура соединения 19 в ячейке.

Из данных рентгеноструктурного анализа следует, что геометрические характеристики бензопиранового фрагмента молекулы изменяются незначительно. По сравнению с исходной молекулой 1 несколько увеличивается угол поворота кольца «В». В молекуле фостона 19 торсионный угол вокруг связи С(2)-С(1') составляет 58,1° Гетероциклическое кольцо флавоноидного фрагмента имеет конформацию несимметричного полукресла. Атом углерода СЗ (см рис.3 а) выходит из плоскости атомов ОЗ-С1-С2-С4-С5 на 0,70 А. Отклонение этого параметра в исходном дигидрокверцетине составляет 0,65 А. Угол отклонения между плоскостью гетероатомного цикла флавоноида (С1-С5-С4-ОЗ) и плоскостью фостонового цикла (С1-С2-О2-Р1) составляет 129,4°. Фосфонатный цикл представляет собой искаженный прямоугольник, со средним отклонением от плоскости на 0,08 Плоскости Р1-О2-С2 и Р1-С1-С2 расположены под двугранным углом 16,7°.

Углы в четырехчленном цикле имеют следующие значения: С2-О2-Р1 93,58° С2-С1-Р1 83,79°

О2-С2-С1 97,50° С1-Р1-О2 83,42°

Сумма валентных углов (358,3°) близка к таковой для четырехчленных фосфотанов (356,0°-357,0°)

Расстояние между атомами цикла составляет: 02-Р1 1 А 6 1 2 Р 1 - С 1 1,835 А О2-С2 1,485 А С2-С1 1,540 А

Сопоставление длин связей С-С (1,54 А) и Р-С (1,83 А) с подобными для фосфэтанов

(1,52 А И 1,80 А), соответственно, указывает на увеличение расстояния между атомами. Это удлинение связей обусловлено структурной напряженностью фостонового цикла.

В кристалле фостона тетраметилового эфира 19 молекулы расположены слоями (рис. 3 б).

Механизм осуществленной нами реакции на сегодняшний день не установлен. Вероятно, электрофильный атом фосфора в диамидофосфитах атакует электронодефицитный атом углерода карбонильной группы флавоноида, что приводит к завязыванию четырехчленного фостонового цикла, далее происходит перенос амидогруппы от атома фосфора к атому углерода пиранового кольца. Одновременно протекает образование фосфорильного фрагмента, по-видимому, через промежуточное квазифосфониевое соединение или бициклический фосфоран по предполагаемой схеме:

еж сж

Очевидно, такому пути протекания реакции способствует сближение одной фосфамидной функции с карбонильной группой, которая жестко ориентирована в плоскости бензопиранового скелета.

Суммируя изложенный в настоящем разделе материал, можно сделать вывод о том, что реакции гетероциклизации весьма характерны для систем, содержащих в своем составе группировки С=О и '"Р-Ы. Внутримолекулярные реакции между указанными активными фрагментами могут иметь препаративное значение для получения различных гетероциклических ФОС. В тоже время, ввиду многообразия последовательных и

параллельных, обратимых и необратимых процессов во время реакций амидов кислот фосфора (III) с карбонильными соединениями для успешного получения циклических продуктов необходим тщательный анализ тонкой структуры используемых синтонов и реагентов, наличие оптимального содержания примесей кислотного характера Полученные фостоны представляются очень интересными и перспективными в химическом и биологическом плане производными дигидрокверцетина.

На следующем этапе работы было запланировано изучение реакций сопровождающиеся раскрытием фостонового цикла. Реакции гидролиза, алкоголиза и аминолиза четырехчленного фосфорсодержащего цикла не наблюдали, даже после продолжительного нагревания реакционной смеси до температуры

щелочного гидролиза протекала в течение 2 часов при небольшом нагревании с образованием двух продуктов ожидаемого амидофосфоната и производного фосфоновой кислоты, не содержащей фосфамидной группы:

Соединения 23, 24 выделены в индивидуальном состоянии и их строение подтверждено методами ЯМР-спектроскопии на ядрах 'Н И 13С.

Таким образом, нами показано, что четырехчленные фостоновые циклы, несмотря на высокое структурное напряжение, оказались чрезвычайно стабильными в реакциях с цуклеофильными реагентами.

23. Фосфорилирование ацетилированных производных дигидрокверцетина. Параллельно с

фосфорилирование3',4',3,7-тетраацетата дигидрокверцетина (3) по ароматическому гидроксилу находящемся при атоме углерода в пятом положении. Было показано, что при взаимодействии тетраацетата 3 с амидами фосфористой кислоты с хорошим выходом образуются не 5-фосфиты, как предполагалось, а 7-фосфиты 3\4',3- триацетилдигидрокверцетина (25-27):

Полученные соединения были переведены в тионфосфаты 32-34. Они охарактеризованы физико-химическими методами и структура полученных соединений доказана при использовании метода ЯМ? на ядрах 'Н и "С. Дублетные сигналы от атома углерода в седьмом положении полученных соединений, с константами спин-спинового взаимодействия ^с-Р 6,0-7,0 Гц, находятся в области 167 м.д. В спектрах ПМР соединений 32-34 имеются сигналы от всех атомов водорода представленных в молекуле с соответствующими химическими сдвигами и необходимой мультиплетностью.

Очевидно, из-за наличия прочной внутримолекулярной связи между атомом водорода гидроксильной группы в С-5 положении молекулы и атомом кислорода карбонильной группы, процесс фосфорилирования по формально свободной гидроксильной группе не протекает, а происходит предварительное удаление протекторной ацетильной функции с последующей атакой фосфамидов по гидроксильному остатку при атоме углерода в 7 положении. Первый акт реакции осуществляется по известной в органической химии схеме - деацитилирования в присутствии вторичных аминов.

В результате этого ацетильный остаток удаляется в виде ацетамида. Указанное направление реакции фосфорилирования связано с тем, что атом

кислорода сложноэфирной группы в положении 7 более нуклеофилен. чем дрмис аналогичные реакционные центры молекулы ацетилированного флавоноида.

В том случае, если первичный тетраэтилдиамидофосфит 27 нагревать еще в течение получаса, то наблюдается межмолекулярное взаимодействие 2-х молекул тетраэтилдиамидофосфита тетраацетата дигидрокверцетина.

28

По-видимому, образование такой молекулярной системы происходит не синхронно, а в два этапа и характеризуется реакцией дисмутации. Полученный фосфит 31 был введен в реакцию сульфуризации. Соединение 32 было выделено и охарактеризовано физико-химическими методами.

бензоле наблюдаются сигналы от атомов углерода и водорода одной этиламидной группы, что следует из анализа интегральной интенсивности.

В ракурсе этого направления работы было исследовано взаимодействие пентаацетата дигидрокверцетина с гексаэтилтриамидом фосфористой кислоты. Пентаацетат 29 получали по стандартной методике при взаимодействии дигидрокверцетина с избытком уксусного ангидрида при нагревании и в присутствии ацетата натрия.

При взаимодействии нентаацетата дигидрокверцетина 29 с гексаэтилтриамидом фосфористой кислоты через 15 минут нагревания образуется открытоцепной диамидофосфит 3,3',4',5 тетра-О-ацетилового эфира дигидрокверцетина 30 с химическим

[ 5 "Р 131 м.д.

ОАс

29

Р(МЕ12)з

^ОАс

Соединение 30, в виду его большой лабильности, без выделения из реакционной массы ввели во взаимодействие с серой. Тионфосфат 36 был выделен и охарактеризован физико-химическими методами.

В этом случае, подобно как и для ранее изученного тетраацетилового эфира дигидрокверцетина, наблюдается фосфорилирование по гидроксильному остатку в 7-положении. Аналогично, происходит удаление наиболее лабильной ацетильной группы под действием примесей щелочного характера, содержащихся в амидофосфитах (диэтиламина) и далее процесс фосфорилирования протекает по открывшемуся фенольному гидроксилу.

Также, если первичный амидофосфит 30 нагревать еще в течение получаса, то наблюдает— —»—

ОАс

2 (30)

+ Р(Ш2)з

31

Полученный диэфирофосфит 31 был введен в реакцию сульфуризации. Соединение 37 было выделено и охарактеризовано физико-химическими методами.

Таким образом, в данном случае фосфорилирование протекет аналогично описанному выше варианту взаимодействия амидофосфитов с тетраацетиловым эфиром дигидрокверцетипа.

3. Удаление протекторных группировок.

С целью повышения водорастворимости (гидрофилыюсти) амидофосфатов дигидрокверцетина, бьла предпринята попытка селективного удаления ацетильных защитных группировок.

Для этого 3,3',4'-триацетил тиофосфорное производное 34 обрабатывали вторичными аминами или гидоазингшгоатом.

ОАс

Было показано, что добавление избытка диэтиламина(при 20 *С) приводит ТОН.ко к частичному деацетилированию соединения 34 в положении 4' с образованием диацетата -38; при использовании гидрата гидразина наблюдается удаление ацетильной группы в 3-положении с образованием соединения 39, что следует из анализа спектров ПМР и спектров ЯМР 13С, где наблюдаются сигналы от всех атомов углерода, в том числе и двух оставшихся ацетильных фрагментов молекул 38 и 39.

Попытки полного удаления протекторных ацетильных аммиака или алкоголята натрия приводили к деструкции флавоноидной системы.

4. Исследование цитотоксической активности.

Изучена цитотоксическая активность следующих производных дигидрокверцетина: 1, 3, 8-13, 15, 17-19. Исследование цитотоксического эффекта соединений проводили относительно опухолевых клеток человека Т-лимфомы линии Jukart.

Цитотоксический эффект производных дигидрокверцетина в концентрации 100 мкМ относительно клеток линии Jukart составил:

№ соединения Ингибирование роста клеток, %

1 0

3 0

8 163

9 163

10 32,2

11 11.4

12 11.4

13 48,8

15 18.5

17 10,4

18 33,4

19 40,9

Исходный дигидрокверцетин при максимальной концентрации 100 мкМ не оказывал влияния на рост клеток Т-лимфомы линии Jukart.

Анализ результатов биологических испытаний показал, что три синтезированные нами соединения тионфосфат дигидрокверцетина 13, соединения нового фостонового типа 18 и 19 проявляют пограничную активность в качестве ингибиторов деления злокачественных клеток.. Указанные производные дигидрокверцетина были рекомендованы для дальнейших исследований в качестве противоопухолевых препаратов для испытания на теплокровных животных.

ВЫВОДЫ:.

1. Впервые изучено фосфорилирование алкшшрованных и ацетилиронных производных дигидрокверцетина моно-, ди- и триамидами фосфористой килоты и установлены важные закономерности исследуемого процесса

2. Показано, что метиловые и бензиловые эфиры дигидроквсрисмии ь определенных условиях эффективно фосфорилируются амидофосфитами по алифатической гидроксогруппе в третьем положении с образованием соответствующих Р(Ш)-производных.

3. Установлено, что в процессе фосфорилирования тетра- и пентаацетатов дигидрокверцетина происходит удаление ацетильной группы в седьмом положении флавоноида с последующей атакой Р(Ш)-фосфамидов по открывшемуся седьмому гидроксильному остатку.

4. Исследовано фосфорилирование частично защищенных производных дигидрокверцетина по а-гидроксикарбонильному фрагменту, которое протекает с образованием оригинальных четырехчленных гетероциклов фостонового типа. Структура соединений доказана методом РСА.

5. Исследованы некоторые химические превращения синтезированных в работе фосфоридлированных производных дигидрокверцетина и показано, что они в основном протекают по классическим канонам фосфорорганической химии.

6. Изучена цитотоксическая активность ряда полученных в работе P-(V)-производных дигидрокверцетина. Показано, что они обладают ингибирующим действием на процесс деления злокачественных клеток.

Результаты работы изложены в следующих публикациях:

1. Нифантьев Э.Е., Коротеев М.П., Казиев Г.З., Коротеев A.M., Васянина Л.К., Захарова И.С. / Фосфорилирование 3,4,5',7'-тетраметилдигидрокверцетина //Ж. общ. хим., 2003, Т. 73, вып. 11, С 1782-1786,0.3 п.л. (авторских 50%)

2. Е.Е. Nifant*ev, M.P. Koroteev, G.Z. Kaziev, I.S. Zakharova, K.A. Lyssenko, L.N. Kuleshova, M. Yu. Antipin / Sterically controlled cyclization 3,4,5',7'-tetrarnethildigidroquercetin amidophosphites. New Synthesis of phostones // Tetrahedron Letters, 2003, Vol. 44, P. 6327-6329,0.18 п.л. (авторских 50%)

3. Eduard Nifantyev, Mikhail Koroteev, Garry Kaziev, Tat^ana Kukhareva, Zaina Dzgoeva, Irina Zakharova / Phosphorylation of dihydroquercetin and its derivatives by trivalent phosphorus agent. // XVth international conference on phosphorus chemistry, Sendai, Japan, July

23-August 3, 2001. P. 164.0,06 п.л. (авторских 30%)

4. Э.Е. Нифантьев, М.П. Коротеев, Т.С. Кухарева, Г.З. Казиев, З.М. Дзгоева, И.С. Захарова. / Исследование фосфорилирования кверцетина и дигидрокверцетина. // 4-й Международный симпозиум по химии и применению фосфор-, серо- и кремнийорганических соединений «Петербургские встречи» (1SMP-IV): 13-я Международная конференция по химии соединений фосфора (ТССР-XIII). Санкт-Петербург, 2002. С. 62. 0,06 п.л. (авторских 30%)

5. И.С. Захарова, Н.С. Васильева, С.А. Васильев, Э.Е. Нифантьев / Исследование фосфорилирования частичнозащищенных производных дигидрокверцетина // III молодежной школы-конференции по органическому синтезу YSCOS-3. Санкт-Петербург.

24-27 июня 2002. С 228-229.0,12 п.л. (авторских 70%)

6. И.С. Захарова, М.П. Коротеев, Г.З. Казиев, A.M. Коротеев, Э.Е. Нифантьев, М.Ю.Антипин, Л.Н. Кулешова, К.А. Лысенко / Синтез и рентгеноструктурное исследование нового типа фостонов с четырехкоординированным атомом фосфора. // III-я Национальная кристаллохимичекая конференция. Черноголовка. 19-23 мая 2003. С. 84, 0,06 п.л. (авторских 50%).

* - 5471

Подл. к печ. 10.03:2004 Объем 1.0 п.л. Заказ № 84 Тир. 100 Типография МПГУ

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. БИОЛОГИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ И ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА И ЕГО АНАЛОГОВ. литературный обзор)

2.1. Классификация и структура флавоноидных соединений.

2.2. Антиоксидантные свойства флавоноидов.

2.3. Биологическое действие флавоноидов.

2.4. Флавоноиды как лекарственные препараты и биологически активные добавки к пище.

2.5. Дигидрокверцетин — нахождение в природе и способы выделения.

2.6. Физико-химические и химические свойства дигидрокверцетина.

2.6.1. Строение и свойства дигидрокверцетина.

2.6.2. Реакции по гидроксильным группам

2.6.2.1. Метильные производные дигидрокверцетина.

2.6.2.2. Бензильные производные дигидрокверцетина.

2.6.2.3. Ацильные производные дигидрокверцетина.

2.6.2.4. Фосфорилированные производные дигидрокверцетина.

2.6.3. Смешанные эфиры дигидрокверцетина.

2.6.4. Реакции с участием карбонильной группы

2.6.4.1. Оксимпроизводное дигидрокверцетина.

2.6.4.2. Реакции восстановления карбонильной группы.

2.6.5. Реакции замещения в ароматическом кольце.

2.6.6. Комплексообразующая способность с ионами переходных металлов.

3. ИССЛЕДОВАНИЕ СИНТЕЗА ФОСФОРСОДЕРЖАЩИХ СОЕДИНЕНИЙ НА ОСНОВЕ ЧАСТИЧНО ЗАЩИЩЕННОГО ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА (обсуждение результатов)

3.1. Синтез и изучение строения частично защищенных производных дигидрокверцетина.

3.2. Взаимодействие производных дигидрокверцетина с фосфорилирующими реагентами.

3.3. Химические свойства Рш производных алкилированных эфиров дигидрокверцетина.

3.4. Образование нового вида циклофосфонатных систем.

3.5. Изучение химических свойств фостонов.

3.6. Фосфорилирование ацетилированных эфиров дигидрокверцетина.

3.7. Химические свойства РП| производных ацетилированных эфиров дигидрокверцетина.

3.8. Удаление протекторных группировок.

3.9. Исследование цитотоксической активности.

4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

5. ВЫВОДЫ.

Флавоноиды (бензопираны) составляют большой класс сложных гетероциклических соединений, широко распространенных в растительном мире [1, 2]. В 1936 году А. Сент-Дьёрди и группа немецких учёных показали [3], что целый ряд флавоноидов обладает ярко выраженной биологической активностью, свойственной классическим витаминам. Они частично снимают остроту авитаминоза С, уменьшают проницаемость и ломкость капиллярных кровеносных сосудов. По этой причине флавоноидные соединения также стали относить к витаминам и называть витамином Р (от англ. permeability -проницаемость). Типичными представителями веществ с этой активностью являются катехин, кверцетин, и его гликозид рутин. Сегодня они широко используются при лечении многих заболеваний кровеносных сосудов, гипертонии, кори, скарлатины, сыпного тифа, лучевой болезни и т.д.

В 40-50-х годах прошлого столетия был выделен из коры дугласовой пихты и охарактеризован дигидрокверцетин (таксифолин) - аналог кверцетина, гидрированный в положения 2 и 3 [4, 5]. О выделении дигидрокверцетина из древесины лиственницы даурской было сообщено в 1968 г [6]. Этот продукт обладает особенно высокой Р-витаминозной активностью, и еще целым рядом других важных и полезных свойств, отсутствующих у большинства биофлавоноидов. Он проявляет высокую антиоксидантную активность, устойчив к автоокислению, является малотоксичным веществом [7]. Дешевым возобновляемым сырьем для промышленного получения дигидрокверцетина является комлевая часть древесины лиственниц сибирской (Larix sibirica L.) и даурской (Larix dahurica Т.) возможности выделения его показаны в ряде патентов [8, 9, 10]. Все сказанное выше позволяет рассматривать дигидрокверцетин в качестве перспективного, природного биорегулятора.

Необходимо отметить, что дигидрокверцетин обладает и рядом особенностей, затрудняющих его широкое использование в практических целях, в частности, имеет плохую водорастворимость. С учетом сказанного возникла необходимость изучения его химических трансформаций, в том числе связанных с приданием молекуле флавоноида большей полярности. Одним из направлений превращений дигидрокверцетина может стать его фосфорилирование. Известно, что многие фосфорилированные продукты обладают физиологической активностью. В качестве фосфорилирующих реагентов представляются особенно перспективными амиды фосфористой кислоты. Между тем эта область химии дигидрокверцетина ещё не получила развития: в литературе отсутствуют данные о получении производных трехи пятивалентного фосфора рассматриваемых производных флавоноида.

Целью настоящей работы явилось изучение фосфорилирования частично защищенных производных дигидрокверцетина доступными реагентами трехвалентного фосфора, а также исследование химических особенностей полученных соединений. Эта задача была сопряжена со стремлением создать новые лекарственные средства. Поэтому синтезированные соединения послужили объектами совместного исследования авторов работы и сотрудников РОНЦ им. Н.Н. Блохина, при этом были получены перспективные результаты.

Диссертационная работа по традиции состоит из введения, литературного обзора, обсуждения результатов и экспериментальной части. Литературный обзор посвящен вопросам биологического значения и химических свойств дигидрокверцетина и его аналогов. Как нам кажется, его чтение поможет лучшему пониманию полученных нами результатов.

5. ВЫВОДЫ:

1. Впервые изучено фосфорилирование алкилированных и ацетилированных производных дигидрокверцетина моно-, ди- и триамидами фосфористой кислоты и установлены важные закономерности исследуемого процесса.

2. Показано, что метиловые и бензиловые эфиры дигидрокверцетина в определенных условиях эффективно фосфорилируются амидофосфитами по алифатической гидроксогруппе в третьем положении с образованием соответствующих Р(Ш)-производных.

3. Установлено, что в процессе фосфорилирования тетра- и пентаацетатов дигидрокверцетина происходит удаление ацетильной группы в седьмом положении флавоноида с последующей атакой Р(Ш)-фосфамидов по открывшемуся седьмому гидроксильному остатку.

4. Исследовано фосфорилирование частично защищенных производных дигидрокверцетина по а-гидроксикарбонильному фрагменту, которое протекает с образованием оригинальных четырехчленных гетероциклов фостонового типа. Впервые структура подобных соединений доказана методом РСА.

5. Исследованы некоторые химические превращения синтезированных в работе фосфорилированных производных дигидрокверцетина и показано, что они в основном протекают по классическим канонам фосфорорганической химии.

6. Изучена цитотоксическая активность ряда полученных в работе Р-(У)-производных дигидрокверцетина. Показано, что они обладают ингибирующим действием на процесс деления злокачественных клеток.

1. Запрометов М.Н. Фенольные соединения и их роль в жизни растения: 56-е Тимирязевское чтение. М.гНаука, 1996. С. 45.

2. Запрометов М.Н. Фенольные соединения: распространение метаболизм и функции в растениях. М.:Наука, 1993. С. 272.

3. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия. М.: Просвещение, 1987. С. 691.

4. Rew J.С. / А flavonone from Douglas-Fir heartwood I I J. Am. Chem.Soc. 1948. Vol. 70. N 9. P. 3031-3034.

5. Kurth E.F., Chan F.L. / Extraction of tannin and dihydroquercetin from Douglas-fir bark // J. Amer. Leather Chem. Assoc. 1953 Vol. 48. N l.P. 2032.

6. Тюкавкина H.A., Лаптева К.И., Модонова Л.Д. / Исследование экстрактивных веществ древесины даурской лиственницы // Сб. «Фенольные соединения и их биологические функции». М.: Наука. 1968. С. 72-78.

7. Захарова Н.А., Богданов Г.Н., Запрометов М.Н., Тюкавкина Н.А., Круглякова К.Е., Эммануэль Н.М. / Антирадикальная эффективность некоторых природных фенольных соединений // Журн. орган. Химии. 1972. T.42.N6. С. 1414-1420.

8. Тюкавкина Н.А., Хуторянский В.А., Сабойталов М.Ю., Баженов Б.Н. патент RU № 2088255 Способ выделения дигидрокверцетина 22.07.1997

9. Шачнев Ю.Д., Шпилъко АД. патент RU № 2154967 Биологически активная добавка «Биоскан-С» и способ ее получения. 27.01.1999

10. Нифантьев Э.Е., Коротеев М.П., Казиев Г.З., Уминский А.А. патент RU № 2180566 Способ выделения дигидрокверцетина 20.03 2002

11. W.Barton D. Comprehensive Natural Products Chemistry. Pergamon. 1999. Vol. l.P. 714.

12. Лукнер М. Вторичный метаболизм у микроорганизмов, растений и животных М.: Мир. 1979. С. 548.

13. Харборн Д. Введение в экологическую биохимию. М.: Мир. 1985. С. 311.

14. Промышленная технология лекарств / Под ред. В.И. Чуешова, X.: МТК-Книга; Издательство НФАУ. 2002. а С. 156. б С 71.

15. Семенов A.A. Очерк химии природных соединений. Новосибирск: Наука. 2000. С. 365.

16. Запрометов М.Н. Фенольные соединения: распространение метаболизм и функции в растениях. М.:Наука. 1993. С. 272.

17. Бродский А.В., Дорожко A.M., Афанасьев КБ. Изучение механизма антиоксидантного действия рутина // Кислородные радикалы в химии, биологии и медицине: Сб. науч. статей. Рига. 1998. С. 25-28.

18. Афанасьев КБ. Свободно-радикальные ингибиторы и промоторы в биологических процессах // Кислородные радикалы в химии, биологии и медицине: Сб. науч. статей. Рига. 1998. С. 9-25.

19. Sichel G., Corsaro С., Scalia М., Di Billo A.J., Вопото R.P. / In vitro scavenger activity of some flavonoids and melanins against O2* // Free Radic. Biol. Med. 1991. Vol. 11. P. 1-8.

20. Кльюченок Т.Ю., Хомченко А.К., Фригидова JI.M. / Фармакологические и радиозащитные свойства некоторых производных гамма-пирона (флаваноны и флаванолы). // Фармакология и токсикология. 1975. Т. 38. N5. С. 607-611.

21. Jurado J., Alejandre-Duran E., Alonso-Moraga A., Pueyo C. / Study on the mutagenic activity of 13 bioflavonoids with the Salmonella Ara test // Mutagenesis. 1991. Vol. 6. N 4. P. 289-295.

22. Nagao M., Morita N., Yahagi Т., Shimizu M, Kuroyanagi M., Yoshihira K., Natori S., Fujino Т., Sugimura T. / Mutagenicities of 61 flavonoids and 11 related compounds. I I Environ Mutagen. 1981. V. 3. N 4. P. 401-419.

23. Solimani R. / Quercetin and DNA in solution: analysis of the dynamics of their interaction with a linear dichroism study. // Int. J. Biol. Macromol. 1996. Vol. 18. N 4. P 287-295.

24. Bjeldanes L.F., Chang G. W. / Mutagenic activity of quercetin and related compounds. // Science 1977. N 5. P. 577-579.

25. Ни J.P., Calomme M., Lasure A., De Bruyne Т., Pieters L., Vlitinck A., Vanden-Berghe D.A. / Structure-activity relationship of flavonoids with superoxide scavenging activity // Biol. Trans. Elem. Res. 1995. Vol. 47. P. 327-331.

26. Negre-Salvayre A., Salvayere R. / Quercetin prevents the cytotoxicity of oxidized LDL on lympoid cell lines // Free Radic. Biol. Med. 1992. Vol. 12. N2. P. 101-106.

27. Katyal M., Prakash S. / Analytical reactions of hydroxyflavones. // Talanta. Pergamon Press. 1977. V. 24. P. 367-375.31 .Невская E.M., Назаренко B.A. / Оксифлавоны как аналитические реагенты // Журн. аналит. химии. 1972. Т. 27. N 9. С. 1699-1715.

28. Барабой В.А. Биологическое действие растительных фенольных соединений. Киев: Наукова Думка, 1976. С. 260.

29. Барабой В.А. Растительные фенолы и здоровье человека. М.: Наука, 1984. С. 160.

30. Запрометов М.Н. / О способности к расщеплению бензольного кольца у высших растений // Докл. АН СССР. 1959. Т. 125. С. 45

31. Жанаева Т.А., Минаева В.Г. Запрометов М.Н. / Флюороглюцинкарбоновая кислота как промежуточный продукт расщепления флавонолов в бесклеточных экстрактах из листьев володушки //Докл. АН СССР. 1978. Т. 239. С. 479.

32. Кефели В.И. Природные ингибиторы роста и фитогормоны М.: Наука, 1974. С. 254.

33. Минаева В.Г. Флавоноиды в онтогенезе растений и их практическое использование. Новосибирск: Наука, 1978. С. 255.

34. Ylstra В., Touraev A., Moreno R.M.B., Stoger Е., van Tunen Arjen J., Vicente O., Mol Joseph N.M., Heberle-Bors E. / Flavonols stimulate development, germination and tube growth of tobacco pollen. // Plant. Physiol. 1992. Vol. 100. N 2. P. 902-907.

35. Middeleton E., Kandaswami C. / Effects of flavonoids on immune and inflammatory function // Biochem. Pharmacol. 1992. Vol. 43. P. 1167-1179.

36. Колхир В.К., Тюкавкина Н.А., Быков В.А. / Диквертин — новое антиоксидантное и капилляропротекторное средство. // Хим.-фарм. журнал. 1995. N 9. С. 61-65.

37. Соколов С.Я., Тюкавкина Н.А., Колхир В.К., Колесник Ю.А., Арзамасцев А.П., Глазова Н.Г., Зюзин В.А., Бабкин В.А., Остроухова Л. А. патент RU №2014841 "Антиоксидантное,капилляропротекторное, противовоспалительное и антигистаминное средсво 23.06.1992

38. Теселкин Ю.О., Жамбалова Б.А., Бабенкова КВ., Клебанов Г.И., Тюкавкина Н.А. / Антиоксидантные свойства дигидрокверцетина. // Биофизика. 1996. Т. 41. N 3. С. 620-624.

39. Surico G., Varvaro L., Solfrizzo M. / Analysis of the herbicide diuron in chips // J. Agric. Food Chem. 1987. Vol. 35. P. 406-409.

40. Schwartz A., Middleton E. Jr. / Comparison of the effects of quercetin with those of other flavonoids on the generation and effector function of cytotoxic T-limphocytes. // Immunopharmacology. 1984. Vol. 7. N 2. P. 115-126.

41. Bronner C., Landry Y. / Kinetics of the inhibitory effect of flavonoids on histamine secretion from mast cells. // Agents Actions. 1985. Vol. 16. N 3-4. P. 147-151.

42. Сараф A.C., Оганесян Э.Е. / Флавоноиды как потенциальные противоаллергические соединения // Хим.-фарм. журн. 1991. N 2. С. 48.

43. Tsuchiya Y., Shimiza М., Hiyama К, Itoh К., Hashimoto Y., Nagayama M., Horie Т., Mjrita M. / Antiviral activity of natural occurring flavonoids in vitro // Chem. Pharm. Bull. 1985. Vol. 33. P. 3881-3883.

44. Biziagos E., Crance J. M., Passagot J., Deloince R. / Effect of antiviral substances on hepatitis A virus replication in vitro. // J. Med. Virol. 1987. Vol. 22. N 1. P. 56-59.

45. Avila M.A., Velasko J.A., Cansado J., Notario V. / Quercetin mediates the down-regulation of mutant p53 in the human breast cancer cell line MDA-MB468 // Cancer Res. 1994. V. 54. P. 2424-2428.

46. Chu S.C., Hsieh Y.S., LinJ.Y. / Inhibitory effects of flavanoids on Moloney murine leukemia virus reverse transcriptase activity. // J. Nat. prod. 1992. Vol. 55. N2. P. 179-183.

47. Максютина Н.П., Пилипчук Л.Б. / Растительные антиоксиданты и пектины в лечении и профилактике лучевых поражений и детоксикации организма // Фармац. журн. 1996. N 2. С. 35-41.

48. Nanayakkara N.P., Hussain R.A., Pezzuto J.M., Soejarto D.D., Kinghorn A.D. / An intensely sweet dihydroflavonol derivative based on a natural product lead compound. // J. med. Chem. 1988. Vol. 31. N 6. P. 1250-1253.

49. Baker M.E.; Medlock K.L., Sheehan D.M. / Flavonoids inhibit estrogen binding to rat alpha-fetoprotein // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1998. Vol. 217, N3. P. 317-321.

50. Но C.T., Chen Q., Shi. H., Zhang. K.Q., Rosen R.T. / Antioxidative effect of polyphenol extract prepared from varios Chinese teas // Prev. Med. 1992. Vol. 21. P. 520-525.

51. Ratty A.K., Sunamoto J., Das N.P. / Interaction of flavonoids with 1,1-diphenil-2-picrylhydrazil free radical, liposomal membranes and soybean lipoxygenase-1. // Biochem. Pharmacol. 1988. Vol. 6. P. 989-995.

52. Elliot A.J., Scheiber S.A., Thomas C., Pardini R.S. / Inhibition of glutathione reductase by flavonoids. A structur-activity studi // Biochem. Pharmacol. 1992. Vol. 44. P. 1603-1608.

53. Rastelli G., Costantino L., Albasini A. / From natural to synthetic flafones-Cu"-substituted flavones as polent inhibitors of xantine oxidase // 18th International Conference on Polyphenols, Bordeaux (France), July, 15-18, 1996. Vol. 2. P. 469-470.

54. Pathak D., PathakK., Singla A.K. / Flavonoids as medicinal agents. // Fitotherapia. 1991. Vol. LXII. N 5. P. 371-389.

55. Ahmed M.S., Ainly K., Parish J.H., Hadi S.M. / Free radical-indused fragmentation of proteins by quercetin // Carcinogenesis. 1994. Vol. 15. N 8. P. 1627-1630.

56. Лекарственные средства, применяемые в медицинской практике в СССР. / Под ред. A.M. Клюева. М.: Медицина, 1990. С. 512

57. Пересадин Н.А., Фролов В.М., Пинский JI.JI. / Коррекция антиоксидантами цитогенетических нарушений при вирусном гепатите // Врач. дело. 1995. T.l. N 2. С 76-79.

58. Тюкавкина Н.А. патент № 2097977 Способ производства массы для сахаристых кондитерских изделий на жировой основе. 19.11.96

59. Staeb F., Schoenrock U., Schreiner V., Max H. Cosmetic and dermatological combinations of carnitine or acylcarnitines with antioxidants. (BeiersdorfA.-G., Germany). Patent DE 19806890 A1 19990826(1999)

60. Scheel O., Gers-Barlag H. Use of flavones and flavonoids to stabilize dibenzoylmethanes against UV-induced decomposition. (Beiersdorf A.-G., Germany). Patent DE 19755504 A1 19990617

61. Staeb F., Keyhani R., Schoenrock U., Max, H., Bleck O. Use of flavones and flavonoids for skin lightening or for elimination of age spots formed by oxidative protein aggregation (Beiersdorf A.-G., Germany). Patent DE 19742025 A1 19990325, 1999

62. Kawaii S. Tomono Y., Katase E., Ogawa K., Yano M. / Quantitation of Flavonoid Constituents in Citrus Fruits. //J. Agric. Food Chem. 1999. Vol. 47. N9. P. 3565-3571.

63. Conde E., Cadahia E., Garcia-Vallejo M.C., Tomas-Barberan F. / Low molecular weight polyphenols in wood and bark of Eucalyptus globulus. // Wood Fiber Sci. 1995. Vol. 27. N 4. P. 379-383.

64. Conde E., Cadahia E., Garcia-Vallejo M. C. / HPLC analysis of flavonoids and phenolic acids and aldehydes in Eucalyptus spp. // Chromatographia 1995. Vol. 41 N 11/12. P. 657-660.

65. Treutter D„ Schmid P. / Separation of polyphenols from the phloem of cherry grafts (Prunus avium L. and P. cerasus L.) with reversed phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC). // Angew. Bot. 1982. Vol. 56. N5-6. S. 413-420

66. Szember E. / Flavonoids in dormant and developing sour cherry buds. // Fruit Sci. Rep. 1980. Vol. 7. N 4. P. 155-159.

67. Bankova V. S., Popov S. S., Marekov N. L. / High-performance liquid chromatographic analysis of flavonoids from propolis. // Bulg. J. Chromatogr. 1982. Vol. 242. N 1. P. 135-143.

68. Alcubilla-Martin M. / Extraction, chromatographic separation, and isolation of fungistatic substances from the inner bark of Norway spruce. // Ger. Z. Pflanzenernaehr. Bodenk. 1970. Vol. 127. N 1. S. 64-74.

69. Levy Elie C., Ishaaya Isaac, Gurevitz Eliahu. / Isolation and identification of host compounds eliciting attraction and bite stimuli in the fruit tree bark beetle, Scolytus mediterraneus.// J. Agr. Food Chem. 1974. Vol. 22. N 3. P. 376-379.

70. Harper K.A., Morton A. D., Rolfe E. / Phenolic compounds of blackcurrant juice and their protective effect on ascorbic acid. III. Mechanism of ascorbic acid oxidation and its inhibition by flavonoids. // J. Food Technol. 1969. Vol. 4. N3. P. 255-267.

71. Тюкавкина Н.А., Лаптева К.И., Пентегова В.А. / Флавоноиды Larix dahurica I // Химия природ, соед. -1967. -N 4. -С. 278-279

72. Тюкавкина Н.А., Лаптева К.И., Ларина В.А., Девятко Н.Г. / Экстрактивные вещества Larix dahurica. II. Количественное содержание кверцетина и дигидрокверцетина. // Химия природ, соед. 1967. N 5. С. 298-301.

73. Чамбалов Т. К.; Пашина Л.Т. I Флавоноиды коры сибирской лиственницы (Larix sibirica). // Химия природ, соед. 1970. N 6. С. 763764.

74. Тюкавкина Н.А., Лаптева К.И., Девятко Н.Г. / Количество флавоноидов в древесине Сибирской лиственницы. // Химия древесины. 1972. N 11. С. 137-146.

75. Бабкин В.А., Остроухова Л.А., Малков Ю.А., Бабкин Д.В., Онучина Н.А., Иванова С.З. / Выделение биологически активных компонентов из древесины лиственницы. // Eur. Workshop Lignocellul. Pulp, 5th 1998. P. 253-254.

76. Луцкий В.Я., Громова A.S., Тюкавкина H.A. / Полифенолные компоненты из коры Pinus sibirica и Pinus silvestris. II Химия природ, соед. 1970. N3. Р. 367-371.

77. Доягоддорова С.Я., Черняева Г.Н., Перушкина Г.И., Запрометов М.Н. / Фенольный состав коры сибирской сосны {Pinus sibirica). II Химия природ, соед. 1971. N 1. С. 15-17.

78. Долгодворова С.Я., Перушкина Г.И., Голиков А.А., Черняева Г.Н. / Хроматографический анализ некоторых полифенолов коры сибирской сосны (Pinus sibirica). // Химия древесины. 1974. N 2. С. 103-106.

79. Громова А.С., Луцкий В.Л., Ганенко Т.В., Тюкавкина Н.А. / Флавониды из коры ели и сосны. // Химия древесины. 1978. N 4. С. 103-105.

80. Markham К. R.; Porter L. J. / Extractives of Pinus radiata bark. 1. Phenolic components. //J. Sci. 1973. Vol. 16. N 4. P. 751-761.

81. Тюкавкина Н.А., Антонова Г.Ф. патент SU №351847 Способ выделения дигидрокверцетина 04.01.1970

82. Литвиненко А.А. патент RU №1133720 Способ получения настоек и экстрактов 07.01.1980

83. Драник В.Д. патент SU №1534792 Способ получения экстракта ромашки, обогащенного флавоноидами. 17.03.1988

84. Тюкавкина Н.А. патент RU № 2000797 Способ выделения дигидрокверцетина 26.05.1992

85. Тюкавкина Н.А. патент RU № 2034559 Способ выделения дигидрокверцетина 17.11.1993

86. Тюкавкина Н.А. патент RU № 2038094 Способ выделения дигидрокверцетина 08.02.1994

87. Бабкин В.А., Остроухова Л.А., Глазырин В.В., Святкин Ю.К., Бабкин Д.В., Воробьёв В.Г., Селиванов Н.П. патент RU № 2082425 Способ получения дигидрокверцетина 16.05.1995

88. Хуторянский В.А., Тюкавкина Н.А., Сабойталов М.Ю., Баженов Б.Н. патент RU № 2091076 Способ получения дигидрокверцетина1306.1996

89. Тюкавкина Н.А., Хуторянский В.А., Сабойталов М.Ю., Баженов Б.Н. патент RU № 2114631 Способ выделения дигидрокверцетина2207.1997

90. Бабкин В.А. патент RU № 2130911 Способ изготовления араболита 18.07.1997

91. ООО «ПлУГ» патент RU № 2135510 Способ переработки древесины лиственницы и установка для его осуществления 21.12.1998

92. Архипова М.Н. патент RU № 2152794 Способ получения суммы флавоноидов, обладающей радиозащитным действием 03.03.1999

93. Бабкин В.А., Остроухова Л.А., Бабкин Д.В., Малков Ю.А. патент RU № 2158598 Способ получения кверцетина 21.04.1998

94. St. V. Kostanecki / Uber das Chiysin // Ber. 1893. Vol. 26. N 3. S. 2901-2905.

95. Looker J.H., Hanneman W.W. / Physical and chemical properties of ** hydroxyflavones. I. Infrared absorption spectra of monohydroxyflavonesand their o-methyl and o-acetyl derivatives. // J. Org. Chem. 1962. Vol. 27. P. 381-389.

96. Tomas F., Mataix J. J., Carpena O. Infrared spectrophotometry of flavonoids. An. Quim. 1 F.M. Dean 'Naturally Occurring Oxygen Ring Compounds' Butterworths, London, 1963. P. 286-287.

97. Tomas F., Carpena O., Mataix J. / Ultraviolet structures analysis of flavonoids. II. Alkaline reagents. // An. Quim. 1972. Vol. 68. N 2. P. 1231 129.

98. Clark-Lewis John W. / Flavan derivatives. XXV. Mass spectra of 3-hydroxyflavanones, flavan-3-ols, and flavan-3,4-diols. // Aust. J. Chem. 1968. Vol. 21. N 12. P. 3025-3054.

99. Madhusudanan K. P., Sachdev Kusum, Harrison D. A., Kulshreshtha D. K. / Negative ion mass spectra of flavonoids. // J. Nat. Prod. 1985. Vol. 48. N2. P. 319-322.

100. Hedin P. A.; Phillips V. A. / Electron impact mass spectral analysis of flavonoids. //J. Agric. Food Chem. 1992. Vol. 40. N 4. P. 607-611.

101. Benefenati E., Frassanito R., Di Того N., Fanelli R., Brandt A., Di Rella M, Cecchetelli L. / Mass spectrometric studies of flavonoids. // Nat. Prod. Lett. 1994. Vol. 4. N 4. P. 247-264.

102. Grouiller A. / Application de la re'sonance magne'tique nucle'aire a la de'termination de structures des compose's flavoniques. // Bull. Soc. chim.

103. France. 1966. P. 2405-2411.

104. Waiss A.C. Jr., Lundin R.E., Stern D.J. / NMR study of trimethylsily 1 ethers of flavonoid compounds. // Tetrahedron Lett. 1964. P. 513-518.

105. Kingsbury C.A., Looker J.H. / Carbon-13 spectra of methoxyflavones. //J. Org. Chem. 1975 Vol. 40. N 8. P. 1120-1124.

106. Breitmair E., Voelter W. Carbon-13 NMR Spectroscopy. Weinheim; New York, 1987. P. 454-454.

107. Markham K. R., Ternai B. / Carbon-13 NMR of flavonoids. II. Flavonoids other than flavone and flavonol aglycons. // Tetrahedron. 1976. Vol. 2. N21. P. 2607-2619.

108. Селиванова И.А., Тюкавкина H.A., Колесник Ю.А., Нестерова В.Н., Кулешова Л.Н., Хуторянский В.А., Баженов Б.Н., Саботайлов М.Ю. / Исследование кристаллической структуры дигидрокверцетина // Хим. фарм. Журнал. Т. 33. N 4. С. 51-53.

109. Slabbert N.P.I Ionisation of some flavanols and dihydroflavonols // Tetrahedron. 1976. Vol. 33. P. 821 824.

110. Георгиевский В.П. / Кислотные свойства флавоноидов и выбор растворителя для потенциометрического анализа. // Химия природ, соед. 1980. N2. С. 180-186.

111. Hergert H.L., Coad P., Logan A.V. / The methylation of Dihydroquercetin//J. Org. Chem. 1956. Vol. 21. P. 304-310.

112. Clark-Lewis J. W., Jackman L.M., Spotswood T.M. I Nuclear magnetic resonance spectra, stereochemistry, and conformation of flavan derivatives. //Aust. J. Chem. 1964 Vol. 17. N 5-6. P. 632-648.

113. Hergert H.L., Kurth I.F. / The isolation and properties of catechol from white fir bark. // J. Org. Chem. 1953. Vol. 18, N 5-8. P. 521-529.

114. Clark-Lewis J.W., Jemison R.W., Nair V. / Flavan Derivatives XXIV. Cis- and trans-3-methoxyflavanones // Aust. J. Chem. 1968. Vol. 21. P. 3015-3024.

115. Seshadri T.R. / Regent Developments in the chemistry of flavanoids // Tetrahedron. 1959. Vol. 6. P. 169-200.

116. Simpson Т.Н., Beton T.R. / Antoxanthins. Part I. Selective Methylation. //Chem. Soc. 1954. P. 4065-4069.

117. Simpson Т.Н., Beton T.R. / Antoxanthins. Part II. Selective Demethylation. // Chem. Soc. 1954. P. 4069-4072.

118. Freudenberg К., Weinges К. / Leuco and pseudo compounds of the anthocyanidins. //Ann. 1958. N 613. P. 61-75.

119. Aft H. / Chemistry of dihydroquercetin. I. Acetate derivatives // J. Org. Chem. 1961. Vol. 26. P. 1958-1963.

120. Weinges T. / Carbon-13 NMR of flavonoids. // Phytochemistry 1971. N10. P. 829-832.

121. Kiehlmann E., Biradha K., Domasevitch К. V., Zaworotko M.J. / Crystal structures of dihydroquercetin 3-acetate and dihydroquercetin 3,3',4',7-tetraacetate: hydrogen bonding in 5-hydroxyflavanones. // Can. J. Chem. 1999. Vol. 77. N 8. P. 1436-1443.

122. Нифантъев Э.Е., Кухарева Т.С., Коротеев М.П., Дзгоева З.М., Казиев Г.З., Васянина JI.K. / Первые представители фосфорилированных флаванонов. // Биоорг. Химия. 2001. N 27. Р. 319321.

123. Nifant*ev Е.Е., Kukhareva T.S., Dzgoeva Z.M., Vasyanina L.K., Koroteev M.P., Kaziev G.Z. // Heteroatom chemistry. 2003. Vol. 4. P. 399403.

124. Laumas K.R., Seshadri T.R. / Leucoanthocyanidin(flav-3-en-3-ol)acetates. // Proc. Indian. Acad. Sci. 1959. Vol. 49A. P. 47-53.

125. Bergot B.J., Jurd L. / Anthocyanins and related compounds-V. Formation of bisflavenylidenes from flavones by reductive dimerization // Tetrahedron. 1965. Vol. 21. P. 657- 661.

126. Krishnamurty H.G., Krishnamoorthy V., Seshardi T.R. / Preparation of anthocyanidins and their glycosides from related flavonoids // Phytochemistry. 1963. N 2. P. 47-60.

127. Mehta P.P., Whalley W.B. / The stereochemistry of some catechin derivatives. //J. Chem. Soc. 1963. N 11 (241). P. 5327-5332.

128. Bognar R., Rakosi M. / Stereochemistry of flavan-3,4-diols // Tetrahedron. 1963. Vol. 19. P. 391-394.

129. Bokadia M.M., Brown B.R., Kolker P.L., Love C.W., Newbould J., Somerfield G.A., Wood P.M. / Polimerisation of flavans. Part V. The stereochemistry of 2,3-trans-flavan-3,4-diols//J. Chem. Soc. 1961. N 10. P. 4663-4669.

130. Aft H. / Chemistry of Dihydroquercetin. II. Reaction of Parttially Acetylated Polyhidroxyflavanones with N-Halosuccinimides. // J. Org. Chem. 1965. Vol. 30. P. 897-901.

131. Жамбалова Б. А. Антиоксидантные свойства дигидрокверцетина и ликопина. / Автореф. дис. канд. биол. наук. М,. 1997. 10 с.

132. Porter L. J., Markham К. R. / Aluminum complexes of hydroflavones in absolute methanol. III. Aluminum complexes of flavanones and dihydroflavonols. // Phytochemistry. 1972. Vol. 11. N 4. P. 1477-1478.

133. Katyal M., Jain P., Khanna R. N., Singh R. P. / Metal complexes with flavanones.//Acta Cienc. Indica, Ser. Chem. 1979. Vol. 5. N 1. P. 7-9.

134. Иоффе И.Д. Взаимодействие дигидрокверцетина с ионами металлов в различных средах. / Автореф. дис. канд. хим. наук. Н. Новгород. 2002. 5 с.

135. Нифантьев Э.Е., Завалишина А.И. Химия элементорганических соединений. -М.: МГПИ им. Ленина, 1980, а) С.58, б) 54, в) 52.

136. Нифантьев Э.Е., Васянина JI.K. Спектроскопия ЯМР 3,Р. -М.: МГПИ им. Ленина, 1986, а) С. 31, б) С. 35, в) С. 37.

137. Мухаметов Ф.С. / Синтез и гетероциклизация кетоалкоксильных производных кислот трехкоординированного фосфора. // ЖОХ. 1991. Т. 61. Вып. 1.С. 10-41.

138. Наумов В. А., Вилков JI.B. Молекулярные структуры фосфорорганических соединений. М.: Наука. 1986. С. 150-163.

139. Kawashima Т., Kato К., Okazaki R. / Novel synthetic route to isolable pentacoordinate 1,2-oxaphosphetanes and mechanism of their thermolysis, the second step of the Wittig reaction. // J. Am. Chem. Soc. 1992. Vol. 114. P. 4008-4010.

140. Kawashima Т., Takami H., Okazaki R. / Synthesis, structure, and thermolysis of a l,5-dioxa-4A,5-phosphaspiro3,3.heptan: a novel pentacoordinate 1,2-oxaphosphetane. // J. Am. Chem. Soc. 1994. Vol. 116. P. 4509-4510.

141. Dieckbreder U., Lork E., Roeschenthaler G.-V., Kolomeitsev A.A. / First P-trifluoromethylated ylides. // Heteroat. Chem. 1996. Vol. 7. N 4. P. 281-284.

142. Reichwein J.F., Pagenkopf B.L. / A New Horner-Wadsworth-Emmons Type Coupling Reaction between Nonstabilized /^-Hydroxy Phosphonates and Aldehydes or Ketones // J. Am. Chem. Soc. 2003. Vol. 125, P. 18211824.

143. Kawashima Т., Takami H., Okazaki R. / Synthesis and thermolysis of tetracoordinate 1,2-oxaphosphetanes stabilized by steric protection. // Chem. Lett. 1994. P. 1487-1490.tr

144. Henning H-G., Morr M. / Uber die Reaction von Phophrigsaure-triathylester mit P-Chlor-athanolen. // Chem. Ber. 1968. Vol. 101. S. 39633968.

145. Нифантъев Э.Е., Иванова Н.И., Гудкова И.П., Шилов И.В. / Кислый катализ в реакциях амидов кислот трехвалентного фосфора с меркаптанами и карбонильными соединениями. // ЖОХ. 1970. Т. 60. N 6. С. 1420-1421.

146. Э.Е. Нифантьев Химия фосфорорганических соединений. М.: Издательство Московского Университета. 1971. С. 96.

147. Nifantiev Е.Е., Gratchev М.К., Burmistrov S. Yu. / Amides of trivalent phosphorus acids as phosphorylating reagents for proton-donating nucleophiles. // Chem. Rev. 2000. V. 100. N. 10. P. 3755-3795.

148. Кочетков H.K., Бочков А.Ф., Дмитриев Б.А., Усов А.И., Чижов О.С., Шибаев В.Н. Химия углеводов. М.: Химия. 1967. С. 136-137.

149. Nifantyev Е.Е., Rasadkina E.N., Slitikov P.V., Vasyanina L.K. / Dismutation of diamidoarylphosphites. // Phosphorus, sulfur, silicon. 2003. Vol. 178. N11. P. 2465-2477.