Гликосфинголипиды печени и асцитной гепатомы 22а мышей тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

I. Гликосфинголипиды печени крыс и мышей

II. Гликосфинголипиды солидных гепатом. II

III. Гликосфингожпида асцитных гепатом.

1У. Биосинтез гликосфинголипидов в печени и гепатомах крыс.

У. "Сбрасывание" компонентов поверхности опухолевых клеток.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

I. Ганглиозиды печени и асцитной гепатомы 22а мышей.

1. Выделение ганглиоз задов л> . '.

2. Установление структуры ганглиозидов

3. Соотношение компонентов смеси ганглиозидов гепатомы 22а и печени мышей

II. Нейтральные глико сфинго липиды печени и гепатомы 22а.

1. Выделение нейтральных глжолипидов из липидного экстракта.

2. Исследование структуры нейтральных глико-липидов.

3. Соотношение компонентов смеси нейтральных глико сфинго липидов.

III. Выделение в среду ганглиозидов клетками асцитнои гепатомы 22а.

ЗУ. Влияние ганглиозидов, выделяемых клетками асцитнои гепатомы 22а мышей, на интенсивность белкового синтеза и чувствительность этих клеток к цитотоксическому производному индола.

У. Обсуждение результатов.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ВЫВОДЫ.

В В Е Д Е Н И Е Важная биологическая роль ганглиозидов во многом определяется их локализацией на поверхности клеток. Такие процессы "социального" поведения клеток, как клеточное узнавание и клеточная адгезия, способность к контактному торможению протекают при участии ганглиозидов клеточных мембран. Процесс опухолевого роста характеризуется изменением некоторых свойств клеточной поверхности, в частности, потерей контактного ингибирования и последующим неконтролируемым клеточным делением. В настоящей работе с целью выяснения различий между ганглио3идами нормальных и злокачественных клеток проведено сравнительное исследование ганглиозидного состава асцитной гепатомы 22а и печени мышей, В ходе проведенного исследования были обнаружены существенные изменения в качественном и количественном составе ганглиозидов клеток гепатомы 22а по сравнению с печенью. Выявленные изменения подчиняются общей закономерности изменений ганглиозидного состава гепатом, которое проявляется в утрате ими трисиалоганглиозндов. Известно, что опухолевые клетки характеризуются способностью сбрасывать в среду фрагменты плазматической мембраны и что рост опухоли сопровождается накоплением этих мембранных структур как в асцитной жидкости, так и в инкубационных средах. Существует мнение, что активное сбрасывание мембранных фрагментов опухолевыми клетками обеспечивает защиту опухоли материалом, который обладает более высокой антигенностью, чем сама клетка. В сброшенных фрагментах плазматической мембраны происходит концентрирование антигенов и это способствует более эффективно! их взаимодействию с иммунной системой, что обеспечивает выход опухоли из под контроля иммунитета. Поскольку некоторые опухолевые антигены являются ганглиозидами, представляется возможным, что секретируемые опухолевыми клетками ганглиозиды участвуют в борьбе опухоли с цитотокоическими факторами иммунитета. Однако, до начала нашей работы ничего не было известно ни о количестве и составе секретнруемых галглиозидов, ни о факторах, влияющих на процесс секреции. В настоящей работе проведено изучение секреции ганглиозндов клетками асцитной гепатомы 22а и показана зависимость секреции ганглиозидов от плотности клеточной популяции. Результаты исследования показали, что клетки гепатомы 22а интенсивно секретнруют ганглиозиды. Снижение плотности клеточной популяции приводит к усилению секреции ганглиозидного материала. Ганглиозиды, вероятно, могут участвовать и в осуществлении внутриклеточных регуляторных функций биогенных моноаминов, в частности, серотонина. Данные о существовании таких функций были ранее получены на эмбриональных и опухолевых клетках и было показано, что многие структурные аналоги моноаминов, действуя на внутриклеточном уровне, специфически тормозят клеточное деление и биосинтез белков. Внесение в среду ганглиозидов приводило к ослаблению или исчезновению этих эффектов. Представлялось важным исследовать соответствующие эффекты и на опухолевых клетках, способных секретировать ганглиозиды в среду. Нами было изучено влияние ганглиозидов, выделяемых в ереду клеткавш гепатомы 22а, на интенсивность белкового синтеза в этих клетках и на их чувствительность к цитотоксическому аналогу серотонина индокарбу. Результаты обнаружили способность внеклеточных ганглиозидов выполнять защитную роль в отношении цитотоксического действия фармакологических антагонистов серотонина.

ВЫВОДЫ

1. Изучен ганглиозидный состав печени мышей. Показано, что основным компонентом ганглиозидов печени мышей (гибридов СВАхС^у/ б Fj ) является л/-ацетилгалактозаминил-( N-гликолилнейраминозил) -галактоз илглюкозилцерамнд (NeuGc-Gyg ).

2. При изучении состава ганглиозидов асцитной гепатомы 22а найдено, что основными компонентами являются Neu.Gc-G^ , G-j)ja и G-j)jB ; ганглиозид в гепатоме отсутствует.

3. Выявлены существенные различия в качественном и количественном содержании нейтральных гликосфинголипидов в печени и гепатоме 22а. Показано, что по сравнению с печенью в гепатоме содержание глюкозилцерамида заметно снижено и резко возрастает содержание лак-тозилцерамида, асиало- и асиало- %[

4. Обнаружен процесс интенсивного выделения ганглиозидов клетками гепатомы 22а в инкубационную среду; показано, что снижение плотности клеточной популяции приводит к усилению секреции ганглиозидов.

5. Установлено, что ганглиозидный состав асцитной жидкости и внеклеточных мембранных компонентов в качественном отношении идентичны, а в количественном отношении близок ганглиозидному составу клеток.

6. Установлено, что экзогенные ганглиозиды стимулируют белковый синтез клетками гепатомы и защищают эти клетки от цитотоксического действия антагониста серотонина - индокарба.

1. Могге D.J» э Klappei т.м., Merrit W.D., Keenan T.W. Glyco-lipids as indicators of the tumorigenic transformation. -J. Supramol. Struct., 1978, Suppl. 2, p. 125.

2. Siddiqui B., Hakomori S.-I. Change of glycolipid pattern in Morris hepatomas 5123 and 7800. Cancer Res., 1970, v. 30, p. 2930-2936.

3. Dyatlovitskaya E.V., Novikov A.M., Gorkova N.P., Bergelson L.D. Gangliosides of hepatoma 27, normal and regenerating rat liver. Eur. J. Biochem., 1976, v. 63, № , p. 357364.

4. Cheema P., Yogeeswaren G., Morris H.P., Murray H.K. Ganglio-side patterns of three Morris minimal deviation hepatomas.- FEBS Let., 1970, v. 11, № 3, P. 181-184.

5. Taki Т., Hirabayashi Y., Suzuki Y., Matsumoto M., KoQima K. Comparative study of glycolipid compositions of plasma membranes among two types of rat ascites hepatoma and normal rat liver. J. Biochem. (Tokyo), 1978, v. 83, N2 5, p. 15171520.

6. Yasue s., Handa s., Miyagawa s., inoue J., Hasegawa A., Yamakawa T. Difference in form of sialic acid in red blood cell glycolipid of different breed of dogs. J. Biochem. (Tokyo) 1978, v. 83, p. 1101-1107.

7. Yu R.K., Ledeen R.W. Gas-liquid chromatographic assay of lipid-bound sialic acid: measurement of gangliosides in brain of several species. J. Lipid Res., 1970, v. 11,m 6, p. 506-516.

8. Brady E.O., Borek C., Bradley E.M. Composition and synthesis of gangliosides in rat hepatocyte and hepatoma cell lines, -J. Biol. Chem., 1969, v. 244, № 23, p. 6552-6554.

9. Dod B.J., Gray G.M. The lipid composition of rat liver plasma membranes. Biochim. Biophys. Acta, 1968, v. 150, N2 3, p. 397-404.

10. Dnistrian A.M., Skipski V.P., Barclay M., Stock C.C. Alterations in glycosphingolipids of plasma membranes from Morris hepatoma,5-123 1С. Cancer Ees., 1977, v. 37, № 7, 2182-2187.

11. Sena A., Eebel G., Bieth E., Hubert P., Waksman A. Lipid composition in liver and brain of genetically obese (ob/ob), heterozygote (ob/+) and normal C+/+) mice. Biochim. Biophys. Acta, 1982, v. 710, ш 3, p. 290-296.

12. Van Hoeven E.P., Emmelot p. Plasma membrane lipids of normal and neoplastic tissues. In: Tumor Lipids: Biochemistry and Metabolism. /Ed. Wood E. Illinois: Am. Oil Chem. Soc. Press Champaign, 1973, P. 126-138.

13. Dnistrian A.M., Skipski V.P., Barclay M., Stock C.C. Glycosphingolipids of subcellular fractions from normal liver and hepatoma. Fed. Proc., 1978, v. 37, N§ 6, p. 1767.

14. Skipski V.P., Katopodis N., Prendergast J.S., Stock C.C. Gangliosides in blood serum of normal rats and Morris hepatoma 5123 TC Bearing rats. - Biochim. Biophys. Ees. Commun.,19751 V. 67, N23, p. 1122-1127.

15. Dnistrian A.M., Skipski V.P., Barclay M., Essner E.S., Stock C.C. Gangliosides of plasma membranes from normal rat liver and Morris hepatoma. Biochim. Biophys. Res. Commun., 1975» v. 64, 11, p. 367-375.

16. Hakomori S.-I. Structures and organizations of cell surface glycolipids dependency on cell growth and malignant transformation. Biochim. Biophys. Acta, 1975, v. 417, № 1,1. P. 55-89.

17. Critchley D.E., Macpturson I. cell density-dependent glyco-lipids in NIL2 hamster cells derived from malignant and transformed cell lines. Biochim. Biophys. Acta, 1973,v. 246, p. 145-159.

18. Stellner K., Hakomori S.-I., Warner G. Enzymic conversion og of "iLj-glycolipid" to A- or B-glycolipid and deficiency of these enzyme activities in adenocarcinoma. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1973, v. 55, p. 439-445.

19. Дятловицкая Э.В., Новиков A.M., Бергельсон Д.Д. Ганглиозиды гепатомы 27 и печени крыс. Вестн. Акад. мед. наук СССР, 1977, № 3, с. 46-50.

20. Kojima к., Mackawa A. Difference in electrokinetic charge of cell between two cell types of ascites hepatoma after removal of sialic acid. Cancer Res., 1970, v. 30, К 12, p. 2858-2862.

21. Matsumoto M., Taki T., Kojima K. Study on sialic acid-containing glycolipid in rat ascites hepatoma cells. Jap. J. Exp. Med., 1976, v. 46, m 2, p. 135-138.

22. Hirabayashi Г., Taki Т., Matsumoto M., Kojima K. Comparative study on glycolipid composition between two cell typesof rat ascites hepatoma cells. Biochim. Biophys. Acta, 1978, v. 529, Ш 1, p. 96-105.

23. Matsumoto M., Taki I. Blood group H active glycolipid from rat ascites hepatoma AH 7974 F* Biochim. Biophys. Res. Commun., 1976, v. 71, KS 2, p. 472-476.

24. Baumann H., Doyle D. Turnover of plasma membrane glycoproteins and glycolipids of hepatoma tissue culture cells. -J. Biol. Chem., 1978, v. 253, N2 12, 4408-4418.

25. Baumann H., Hakomori S.-I. Neutral fucolipids and fucogang-liosides of hepatoma cells. Proc. Am. Assoc. Cancer Kes., 1978, v. 19, p. 227.

26. Chidoni E., Sonnino S., Chigorno V., venerando в., Tetta-manti G. Differences in liver ganglioside patterns in various inbred strains of mice. Biochem. J., 1983, v. 209,p. 885-888.

27. Taki Т., Hirabayashi Y., Kanki Y., Matsumoto M., Kojima K. Comparative study of glycolipid metabolism in two types of rat ascites hepatoma cells. Jap. J. Exp. Med., 1977, v. 47. № 5, p. 429-433.

28. Matsumoto M., Taki Т., Samuelsson В., Pascher 1., Hirabayashi Y., Li S.-C., Li Y.-i. Father characterization of the structure of GMlb ganglioside from rat ascites hepatoma. -J. Biol. Chem., 1981, v. 256, № 18, p. 9737-9741.

29. Hirabayashi Y., Taki T., Matsumoto м. Tumor ganglioside-na-tural occurence of GMlb. FEBS Let., 1979, v. 100, № 2,p. 253-257.

30. Itoh Т., Li Y.-T., Li S.-C., Yu E.K. Isolation and characterization of a novel monosialosylpentahexosyl ceramidefrom Tay-Sachs brain. J. Biol. Chem., 1981, v. 256, Ш 1, P. I65-I69.

31. Morre D.J., Merrit W.D., Eichardson C.L., Kloppel T.M., Keenan T.W. A glycolipid cascade in experimental liver tu-mori-genesis. Fed. Proc., 1978, v. 37, N5 6, p. 1767.

32. Merrit W.D., Keenan T.w., Morre D.J. Gangliosides and other lipids of hyperplastic liver nodules induced cy N-2-fluore-nylacetamide. cancer Biochem. Biophys., 1976, v. 1, Nl 4, p. 179-185.

33. Merrit W.D., Morre D.J., Keenan T.W. Gangliosides of liver tumor induced by N-2-fluorenylacetamide. II. Alterations in biosynthetic enzymes. J. Natl. Cancer Inst., 1978, v. 60, P. 1329-1337.

34. Merrit W.D., Eichardson C.L., Keenan T.W., Morre D.J. Gangliosides of liver tumors induced by N-2-fluorenylacetamide. I. Ganglioside alterations in liver tumorigenesis and normal development. J. Natl. Cancer Inst., 1978, v. 60, № 6,1313-1327.

35. Keenen T.W., Morre D.J., Basu s. Ganglioside biosynthesis. Concentration of glyсоsphingolipid glyсosyltransferases in Golgi apparatus. J. Biol. Chem., 1974, v. 249, № 1, p. 310315.

36. Meichers F., Andersson J. Synthesis, surface deposition and secretion of immunoglobulin M in bone marrow-derived lymphocytes before and after mitogenic stimulation. Transplant. Kev., 1973, v. 14, p. 76-130.

37. Merrit W.D., Morre D.J. A glycosyl transferase of high specific activity in secretory vesicles from isolated Golgi apparatus of rat liver. Biochim. Biophys. Acta, 1973,v. 304, m , p. 397-407.

38. Eiordan J.E., Mitranic M., Slavik M., Morcarello M.A. The14incorporation of L- С fucose into glycoprotein fractions of liver plasma membranes. FEBS Lett., 1974, v. 47, № , 248-251.

39. Sturgess J.M., Minaker E., Mitranic М.Ы., Moscarello M.A. The incorporation of L-fucose into glycoproteins in the Golgi apparatus of rat liver and in serum. Biochim. Biophys. Acta, 1973, v. 320, Ш 1, p. 123-132.

40. Takahashi K., ikehara Y., Kato к. Remarkable decrease of sialy1transferase in rat hepatoma and its relationship to changes in plasma membranes. Proc. Jap. Cancer Association. The 36th Annual meeting held at Tokyo, Japan, October, 1977 (p. 171).

41. Taki Т., Hirabayashi Y., Ishiwata Y., Matsumoto M., Kojima K. Biosynthesis of different gangliosides in two types of rat ascites hepatoma cells with different degrees of cell adhesiveness. Biochim. Biophys. Acta, 1979, "V". 572, Ш 1, p. 113-120.

42. Taki Т., Hirabayshi Y., Matsumoto M., Kojima K. Enzymic synthesis of a new type of fucose-containing glycolipid withfuсоsyltransferase of rat ascites hepatoma cell, AH 7974 F.-Biochim. Biophys. Acta, 1979, v. 572, Ш 1, p. 105-112.

43. Harris J.R., Price M.R., Baldwin R.W. The purification of membrane-associated tumor antigens by preparative poiyacry-lamide gel electrophoresis. Biochim. Biophys. Acta, 1973, v. 311, p. 600-614.

44. Bloom B.R., Bennett В., Oettgen H.F., Mc Lean E.P., Old L.J. Demonstration of delayed hypersensitivity to soluble antigens of chemically induced tumor by inhibition of macrophage migration. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1969,v. 64, 1176-1180.

45. Singer S.J., Nicolson G.L. The fluid mosaic model of the structure of cell membranes. Science, 1972, v. 175, p. 720-731.

46. Bobbins J.С., Hieolson G.L. Surface of normal and transformed cells. in: F.F.Becker (Ed.), Cancer: a comprehensive treatise. Plenum, New York, v. 4, p. 3-54.

47. Burger M.M. Surface changes in trahsformed cell detected by lectins. Fed. Proc., 1973, v. 32, № , 91-101.

48. Poste G., v/eiss L. Some considerations on cell surface alterations in malignancy. Ins L.Weiss (Ed.), Fundamental aspects of metastasis. North-Holland, Amsterdam, 1976,p. 25-47.

49. Baldwin R.W., Harris J.R., Price M.R. Fractionation of plasma membrane-associated tumour-specific antigen from an ami-noazo dye-induced rat hepatoma. Int. J. Cancer, 1973,v. 11, № , 385-397.

50. Vitteta E.S., Uhr J.N. immunoglobulins and alloantigens on the surface of lymphoid cells. Biochim. Biophys. Acta, 1975, v. 415, P. 253-277.

51. Lengle E.E., Krishnarajj E., Kemp E.G. Inhibition of the lectin-induced mitogenic response of thymocytes by glyco-lipids. Cancer Ees., 1979» v. 39, ' Ш , p. 817-822.

52. Dvorak H.F., Quay S.C., Orenstein N.S., Dvorak A.M., Halem P., Bitzer A.M., carvalho A.C. Tunor shedding and coagulation. Science, 198I1». v. 212, 923-924.

53. Nowotny A., Grohsman J., Abdernoor A., Eote N., Yang C., Waltersdorff E. Escape of ТАЗ tumor from allogeneic immune rejection: theory and experiments. Eur. J. Immunol., 1974, v. 4, p. 73-78.

54. Trams E.G., Lauter C.J., Salem N., Heine U. Exfoliation of membrane ecto-enzymes in the form of micro vesicles. -Biochim. Biophys. Acta, 1981, v. 645, p. 63-70.

55. Petitou M., Tuy F., Eosenfeid C., Mishal Z., Paintrand м., lasnin C., Mathe G. Decreased microviscosity of membrane lipids in leukemic cells: two possible mechanisms. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1978, v. 75, № 5, p. 2306-23Ю.

56. Koch G.L.E., Smith M.J. An association between actin and the major histocompatibility antigen H-2. Nature, 1978, v. 273, P. 274-278.

57. Howard S.C., Sturblom A.P., Higgins J.W., Carraway C.C.A., Carraway K.L. Shedding of the major plasma membrane sialo-glyсоргоtein from the surface of 13762 rat ascites mammary adenocarcinoma cells. Arch. Biochim. Biophys., 1981,v. 207, Ш 1, P. 40-50.

58. Ladish S., Gillard В., Wong C., Ulsh L. Shedding and immuno-regulatory activity of YAC-1 lymphoma cell gangliosides. -Cancer Res., 1983, v. 43, p. 38O8-38I3.

59. Lengle E.E. Increased levels of lipid-bound sialic acid in thymic lymphocytes and plasma from leukemic AKR/J mice. -J. Natl, cancer Inst., 1979, v. 62, p. 1565-1567.

60. Dyatlovitskaya E.V., Sinitsyna E.V., Jung K., Azizov Y.M., Bergelson L.D. Shedding of gangliosides from calf thymocytes. Eur. J. Biochem., 1983, v. 131, p. 601-605.

61. Ladisch S., Wong С., Ulsh L., Delay A.-M. Suppression of antigen-specific lymphocyte blastogenic responses by tumor cell-derived gangliosides. Clin. Res., 1981, v. 29, p. 528A.

62. Daatlovitskaja E.V. Hematoside (monosyalyl-lactosylceramide GMj). Isolation from rat liver. In: Lipid biochemical preparation (Ed. Bergelson L.D. Elsevier North-Holland Biomedical Press, 1980, p. 244.

63. Svennerholm L., Fredman P. A procedure for the quantitative isolation of brain gangliosides. Biochim. Biophys. Acta, 1980, v. 617, N2 1, p. 97-109.

64. Kanfer J.N. On the loss of gangliosides vy dialysis. J. Neurochem., 1973» v. 20, № 3, p. 1483-1485.

65. Ledeen R., salsman к. structure of the Tay-Sachs ganglioside. Biochemistry, 1965, v. 4, №10, p. 2225-2233.

66. Jates A.J.i Thompson D. An improved assay of gangliosides separated by thin-layer chromatography. J. Lipid Res., 1977, v. 18, m 5, p. 660-663.

67. Дятловицкая Э.В., Голованова H.K., Волгин Ю.Я., Азизов Ю.М., Иткин Б.З., Бергельсон Л.Д. Нейтральные гликолипиды тимуса теленка и лимфоцитов крупного рогатого скота в норме и при лимфолейкозе. Биохимия, 198I, т. 46, Ш , 2004-2010.

68. Saito Т., Hakomori S.-I. Quantitative isolation of total glycosphingolipids from animal cells. J. Lipid Res., 1971, v. 12, p. 257-259.

69. Ferber E., Schmidt В., Weltzien H.U. Spontaneous and detergent-induced vesisulation of thymocyte plasma membranes. -Biochim. Biophys. Acta, 1980, v. 595, p. 244-256.

70. Маркова Л.Н., Бузников Г.А. О чувствительности клеток асцитной карциномы Эрлиха к нейрофмармакологическим препаратам. -Ж. общ, биол., 1876, т. 37, Ш 2, с. 298-303.

71. Вейнберг А.Я., Манухин Б.Н., Решеникова H.A., Чуприянова Н.Е., Самохвалова Г.И. О роли ганглиозидов в рецепции серо-тонина. Вопр. мед. химии, 1972, т. 18, с. 477-482.

72. Пидевич И.М. Влияние производных индола на серотонино-реак-тивные структуры ганглиев. В кн.: Фармакология серотонино-реактивных структур. М.: Медицина, 1977, с. 98.

73. Та! Т., Paulson J.С., Cahan L.D., Irie В.P. Ganglioside

74. GM2 as a human tumor antigen (OP A-I-1). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1983, v. 80, p. 5392-5396.

75. Cahan L.D., Irie R.F., Singh R., Cassidenti A., Paulson J. Identification of a human neuroelectrodermal tumor antigen (OFA-I-2) as ganglioside GD2. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, v. 79, p. 7629-7633.

76. Вейнберг А.Я., Чуприянова H.E., Родионов Ю.В., Самохвалов Г.И. Некоторые особенности взаимодействия ганглиозидов с серотонином. Биофизика, 1975, т. 20, № 3, с. 388-393.

77. Юрьев ю.К. Практические работы по органической химии, М.: МГУ, 1957, вып. 2.

78. ЮЗ. Вайсбергер А., Проскауэр Э., Фиддик Д., Тупс Э. Органические растворители, М.: ИЛ, 1958.

79. Беленький Б.Г., Ганкина Э.С., Прянишникова С.А., Эрастов

80. Д.П. Микротонкослойная хроматография динитрофенильных и фенил тиогидантс иновых производных аминокислот. - Молекуляр. биология, 1967, т. I, № 2, с. 184-189.

81. Svennerholm L. Sialic acids and derivatives. Estimation by ion-exchange method. Ins Methods in Enzymology /Eds. Colowick S.P., Kaplan N.O. New York and London: Academic Press, 1963, v. 6, p. 459-462.

82. Morris D.L. Quantitative determination of carbohydrate with Dreywoods anthrone reagent. Science, 1949, v. 107, ш 2775, P. 254-255.

83. Хроматография в тонких слоях. Ред. Шталь Э. М.: Мир, 1965, с. 487.

84. Ю8. Хроматография в тонких слоях. Ред. Шталь Э.М.: Мир, 1965, с. 488.

85. Ю9. Гельштейн В.И. Прогрессия перевиваемых мышиных гепатом. -Цитология, 1971, т. 13, № I, с. 3-13.

86. Suzuki К. A simple and accurate micromethod for quantitative determination of ganglioside patterns. Life Sci., 1964, v. 3, ш 11, p. 1227-1233.

87. GarlachE., Deuticke B. Eine einfache Methode zur Micro-bestimmung von Phosphat in der Papierchromatographie. -Biochem. Z., 1963, v. 337, p. 477-479.

88. Lowxy О.Н., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J. Biol. Chem., 1951, v. 193, № 1, p. 265-275.

89. Sweeley C.C., Tao R.V.P. Gas chromatographic estimation of carbohydrates in glucosphingolipids. In: Methods in Carbohydrate Chemistry /Eds. Whistler R.L., Bemiller J.N. New York and London: Academic Press, 1972, v. 6, p. 8-I3.

90. Oulevey J., BoddenE., Thiele O.W. Quantitative determination of glycosphingolipids illustrated by using erythrocyte membranes of various mammalian species. Eur. J. Biochem., 1977, v. 79, № 1, p. 265-267.

91. Hotta K., Hamazaki H., Kurokawa M. isolation and properties of a new type of sialopolysaccharide-protein complex from the jelly coat of sea urchin eggs. J. Biol. Chem., 1970, v. 245, Ш 20, p. 5434-5440.

92. Balasubramanian A.S. Comparative study of gangiiosides, sialomucopolysaccharides and fibrinogen as substrates for vibrio cholerae sialidase. Indian J. Biochem. and Biophys., 1971, v. 8, Ш 2, p. 77-82.

93. Hakomori S.-I. A rapid permethylation of glycolipid and polysaccharide, catalyzed by methylsulfinyl carbanion in dimethyl sulfoxide. J. Biochem., 1964, v. 55, NI 2, p. 205208.

94. Stoffel w., Hanfland P. Analysis of amino-containing glyco-sphingolipids by combined gas-liquid chromatography and mass spectrometry. Hoppe Seyler's z. Physiol. Chem.,1973, B. 354$ H. 1, s. 21-31.