Инверсионная вольтамперометрия азитромицина дигидрата

Пучковская, Евгения Сергеевна

Инверсионная вольтамперометрия азитромицина дигидрата тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ

Пучковская, Евгения Сергеевна АВТОР

кандидата химических наук УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ

Томск МЕСТО ЗАЩИТЫ

2006 ГОД ЗАЩИТЫ

02.00.02 КОД ВАК РФ

Диссертация по химии на тему «Инверсионная вольтамперометрия азитромицина дигидрата»

Автореферат диссертации на тему "Инверсионная вольтамперометрия азитромицина дигидрата"

На правах рукописи

ПУЧКОВСКАЯ Евгения Сергеевна

ИНВЕРСИОННАЯ ВОЛЬТАМ ПЕРОМЕТРИЯ АЗИТРОМИЦИНА

ДИГИДРАТА

02.00.02 — аналитическая химия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Томск - 2006

Работа выполнена на кафедре физической и аналитической химии Томского политехнического университета

Научный руководитель:

доктор химически^ наук, профессор Карбаинов Юрий Александрович

Официальные оппоненты:

доктор химических каук, профессор МаЙстренко Валерией Николаевич

кандидат химических наух, с.н.с. Мордвинова Нина ^ихайловна

Ведущая организация: Российский государственный университет

; нефти и газа имени И.Ц, Губкина (г. Москва)

Защита состоится « 15 » ноября 2006 г. в 14 часов 30 мин. на заседании диссертационного совета Д 212.269.04 при Томском политехническом университете (634050, г. Томск, пр. Ленива, 30)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Томскрр политехнического университета по адресу: ул. Белинского, 53.

Автореферат разослан « /¿С » октября 2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат химических наук, доцент

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Определение таких лекарственных форм как антибиотики, чрезвычайно важно для оценки фармакологического действия и эффективности антибактериальной терапии, идентификации действующих веществ в лекарственных формах, а также его метаболитов в биологических матрицах. В последнее время много внимания уделяется синтезу новых форм антибиотиков. Таким примером служит азитромицин дигидрат, который является представителем антибиотиков макролидного ряда, однако, относится к отдельной подгруппе азалидов, за счет; отличия в строении молекулы. Азитромицин относится к полу-синтетнческим антибиотикам второго поколения и обладает высокой микробиологической и клинической эффективностью в лечении ряда тяжелых инфекций дыхательных путей, кожи и мягких тканей, некоторых урогенитальных инфекций.

Еще одной проблемой, которая требует разработки новых, более чувствительных и селективных методов анализа, и, в частности, электрохимических методов, остается проблема фальсификации лекарственных препаратов. По различным данным доля поддельных медикаментов достигает в среднем 10-15% от общего оборота лекарственных средств.

Фальсифицированные продукты могут включать препараты с неточным составом, неправильными ингредиентами, без содержания или с недостаточным содержанием действующих веществ, или с поддельной упаковкой. По оценкам различных исследований, в настоящее время фальсификация идет в основном по пути уменьшения содержания действующего вещества в препарате.

Дня выхода из сложившейся ситуации в последние 2 года были созданы нормативно-правовые базы для урегулирования контроля выпуска лекарственных средств. В связи с этим повышаются требования к методам контроля фармпрепаратов. Учитывая вышеперечисленное, необходим эффективный контроль за качеством выпускаемых препаратов, в состав которых входят антибиотики.

Это в свою очередь предъявляет повышенные требования к контролю за качеством лекарственных средств и совершенствованию методов количественного определения антибиотиков, в том числе группы макролидов.

Перед химиками-аналитиками ставится задача разработка новых, более совершенных методик анализа, позволяющих с высокой точностью и селективностью определять лекарственные вещества в более широких интервалах определяемых содержаний с небольшими материальными затратами.

При выборе инструментального метода контроля лекарственных средств учитываются ряЦ требований: возможность* определения следов органических веществ, находящихся в пробе с минимальной погрешностью, достаточная селективность, отсутствие сложной процедуры пробоподготовки, возможность автоматизации методики, шнимально возможное время исследования, достаточная универсальность (возможность многоэлементного анализа), минимальная массогабаритность оборудования.

В данной работе рассматриваются возможности вольтамперометрического определения антибиотиков макролиднот ряда в различных объектах, на примере азшро мицина дигидрата, Проводимые исследования направлены ^а увеличение чувствительности, серийности и экспрессности проводимых анализов. '

Цели н эядачк исследования. Целью данной работь! является разработка методики количественного определения азитромицина дигидрата в биологических средах и фармпрепаратах, а также проведение теоретических в экспериментальных исследований его вольтамперометрического поведения. .

Указанная цель обусловила постановку и решение следующих задач:

■ исследовать электрохимическое поведение азитромицина дигидрата методом вольтамперометрии на стеклоуглеродном и ртутном пленочном электродах;

• исследовать рабочий условия вольтамперометрического поведения азитромицина дигидрата, а именно: оценить влияние различных факторов

рН, природы растворителя, природы фонового электролита) на потенциал и величину тока окисления я восстановления азитромицина;

• с целью уточнения механизма, протекающего на электродах, провести кван-тово-химические расчеты структуры молекулы азитромицина, и сделать заключение о электрохимической активности наиболее реакциовноспособной группы молекулы антибиотика в целом;

• определить некоторые физико-химические параметры электродной реакции (рп,А,,п); ,

• для уточнения рабочих условий вольтамперометрического определения азитромицина дигидрата провести исследования оценки адсорбционной способности антибиотика как на ртутно-пленочном, так й на стеклоуглеродном электроде в широком интервале изменения его концентрации. Рассмотреть

' возможности метода ИВА в исследовании адсорбционных процессов на твердых электродах;

• разработать и метрологически аттестовать методику количественного определения азитромицина дигидрата в фармацевтических препаратах и биологических объектах.

Научная новизна: ■

— Впервые показана способность антибиотика-макроЛида азитромицина дигидрата окисляться на стеклоуглеродном электроде!, а так же его способность к восстановлению на ртутно-пленочном электроде. Установлены рабочие условия его вольтамперометрического определения. Рассчитаны некоторые кинетические параметры данных реакций фп. к„ п).

— Впервые выполнены квантово-химические расчеты; для молекулы азитромицина и его радикальных форм с целью определения наиболее реакцион-носпособиой группы.

— Решена краевая задача для процесса электроокисления азитромицина на стеклоуглеродном электроде в анодной вольтамперометрии. Рассмотрены способы оценки кинетических параметров этого процесса.

— Теоретически и экспериментально исследован процесс адсорбции азитромицина на ртутно-пленочиом и стеклоуглеродном электродах различными методами.

- Разработан алгоритм подготовки проб биологических объектов (сыворотка - и плазма крови) для последующего определения следовых количеств азитромицина вольтамперометрическим методом.

— Впервые разработаны методики количественного химического анализа проб лекарственных препаратов (таблетки, капсулы) и биообъектов на содержание азитромицина дигидрата методом инверсионной вольтамперометрии на стеклоуглеродном электроде.

Практическая значимость работы определяется тем, что: Разработана! и метрологически аттестована методика количественного химического определения азитромицина дигидрата в лекарственных препаратах методом инверсионной вольтамперометрии. Способ количественного определения азитромицина дигидрата методом инверсионной вольтамперометрии защищен патентом РФ.

Методика количественного анализа азитромицина в биологических объектах (сыворотка крови, моча, ткани) нашла практическое применение в лаборатории молекулярной фармакологии НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН г. Томска, ветеринарных слу!жбах г. Кемерова, г. Томска, а также контролирующих лаборатория^ ЦСМ (г. Томска, г. Кемерова, г. Новосибирска).

На защиту выносятся следующие научные положения н выводы:

1. Рабочие условия вольтамперометрического определения азитромицина дигидрата на стеклоуглеродном и ртутно-пленочком элеюродах.

2. Возможный механизм электрохимической реакции азитромицина дигидрата, протекающей на электроде с учетом молекулярного строения, реакционной способности и материала электрода.

3. Параметры электродной реакции с участием антибиотика и его адсорбционная способность.

4. В ольтамперометрический способ оценки некоторых параметров адсорбции на примере азитромицина дигидрата.

5. Алгоритм методик количественного химического анализа лекарственных препаратов и биологических жидкостей (сыворотка и плазма крови) на содержание азитромицина методом инверсионной вольтамперометрии.

Апробация результатов исследования. Диссертация подготоалена на кафедре физической и аналитической химии Томского политехнического университета, где и проводилось ее обсуждение. Материалы отдельных разделов диссертационной работы и некоторые полученные результаты освещались на: VII конференции «Аналитика Сибири и Дальнего Востока-2004» (Новосибирск, 2004); П1 Всероссийской научной конференции «Химия и химическая технология на рубеже тысячелетий»(Томск, 2004); VI Всероссийской конференции по электрохимическим методам анализа с международным участием «Э|ЛА-2004» (Уфа, 2004); 8th Korea-Russia International Symposium on Science and Technology (Tomsk, 2004); Всероссийской научной конференции с международным ¡участием «Электроана-литнка-2005» (Екатеринбург, 200S); П-ой школе-семинареГ«Кватново-химические расчеты: структура и реакционная способность органических молекул» (Иваново, 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликовано II работ, в том числе 3 статьи в рецензируемых научных журналах, 7 тезисов докладов, получен 1 патент на изобретение РФ.

Структура работы. Работа объемом 126 страниц компьютерного текста, включая 31 рисунок и 12 таблиц, состоит из введения, пяти глав, выводов и приложения. Список литературы содержит 107 библиографических источников отечественных и зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во Введении обосновывается актуальность темы [исследования, указываются его цели и задачи, определяется состояние научно^ разработки проблемы, раскрываются научная новизна, формулируются основные положения, выносимые на защиту, аргументируется практическое значение работы, приводятся сведения об апробации результатов проведенных исследований.

Глава 1. представляет литературный обзор, в котором даны характеристики антибиотиков ряда макролндов и в частности азмромицина дигидрата. Приведена их классификация, рассмотрены особенности строения. Проведен анализ химических и физико-химических методов определения антибиотиков данной группы. Рассмотрены данные по полярографическому и вольтамиерометрическому определению азитромицнна дигидрата. ■ Показано, что в последнее время различные варианты вольтамперометрии являются одними и перспективных методов анализа аитибиотиков-макролндов. Они позволяют проводить анализ различных по составу и сложности объектов (в т.ч. биологические объекты: кровь, моча). В заключении обзора сформулированы задачи исследования.

В Главе 2. ¡цана характеристика используемой аппаратуры, типов электродов, программного обеспечения. Изложена техника проведения эксперимента.

Глава 3. посвящена описанию выбора рабочих условий вольтамперометрн-ческого определения азитромицина дигидрата.

В работе впервые показана возможность использования стеклоугяеродных (СУ) и ртутно-лленочных,, (РП) электродов для количественного определения азитромицина.

Использование СУ электродов обусловлено высокой химической и электрохимической устойчивостью графита, широкой областью рабочих потенциалов, как в водных, так и в неводных средах, а также простотой механического обновления поверхности и требованиями техники безопасности.

На рисунке 1. представлена типичная вольтамперограмма окисления азитромицина на СУ электроде, снятая в дифференциально-импульсном режиме развертки потенциала.

Рис.1. Вольтамперограмма окисления азитромицина дигидрата на СУ электроде 1 - фон ОД М Ыа2НР04;

2 -САг=1,99*107 моль/л;

3 - 0^=2,98-107 моль/л. тз= 30с; иг =30 мВ/с; Еэ=0,2 В.

Результаты! исследования различных фоновых электролитов показали, что, относительное стандартное отклонение (Эг) не превышает 0,20 и 0,25 при регистрации анодных пиков соответственно на фонах 0,2 М ЫагНР04 и раствора буфера Бритгона-Робинсона рН 8,0+9,0 для диапазона концентраций 2,2* 10 +3,0-10"9 моль/л и Бг равно 0,13 для диапазона концентрации 1 • 1О"6^-1 • 10'7 моль/л. При этом более высокие значения тока окисления фиксировались на фоне гидрофосфата натрия (рис. 2.), что позволяет увеличить чувствительность метода.

Рис. 2 Зависимость величины тока окисления азитромицина на СУЭ от концентрации на различных фоновых электролитах, ¡т, = 30 с. Л-О^Л^агНРОд! ■ > 2 — буфер Бриттона-Рсбинсона 3-0,1 МНаНСОз, '

4 -0,2 М ИазОйг,

5 - 0,05 М ШОН.

Анализ литературных данных и наши исследования показали, что азитро-мицин очень чувствителен к изменению рН среды. Увеличение рН раствора буфера Бриттона-Робинсона от 8,0 до 9,0 смещает потенциал пика окисления азитромицина в более положительную область потенциалов от 0,774 до 0,850 В (рис.

3).

Рис. 3 Поляризационные кривые окисления на СУ электроде азитромицина при | различных рН, рН 7,4(1): рН 7,75 (2); рН 8,45(3); рН 9,35 (4); рН 9,55 (5); \У=30 мВ/с, т,=20с, Еэ*0,2В,

моль/л;

Ш. V

Кроме того, при рН больше 9,0 может регистрироваться дополнительный пик с Ея=0,90 В, что снижает разрешающую способность способа. При рН меньше 8,0 молекула азитромицина находится в ионизированном состоянии и поэтому окисляется при менее положительном потенциале. Значения рН 8,0*9,0 являются оптимальными для количественного химического определения азитромицина. В кислой среде при рН меньше б пик окисления не регистрируется, по-видимому, происходит распад молекул макршшдов.

Азитромицин также восстанавливается на РП электроде. Вольтами ерограм-ма восстановления азитромицина дигидрата на РП электроде представлена на рисунке 4.

Е -

Рис.4 Вольтамперограмма восстановления азитромишша дигидрата на РП электроде 1 - фон 0,1 М МазС^;

2 - См=9,95-10"* моль/л;

3 - С^иЭв-Ю"7 моль/л.

т, = 30с; V/ =50мВ/с;Е~1,2 В.

■е, а

I ' г—■ I 1.4 1.8 1.8

В качестве возможных фонов были рассмотрены преимущественно водные фоновые электролиты такие как: гидроксиды натрия и калия, натрий фосфорнокислый, буферные растворы Бриттона-Робинсона, ацетатный буфер, цитрат натрия и другие растворы рН которых имеет слабощелочной показатель. Однако, не все вышеперечисленные электролиты дают возможность получения прямой гра-дуировочной зависимости в достаточно широком диапазоне концентраций азит-ромицина. Линейная зависимость градуировочного графика, представленных на рисунке 5, сохраняется в достаточно широком диапазоне концентраций 3,4 • Ю"10 ■4,0 ■ 10"8 моль/л только на фоне цитрата натрия. В связи, с чем он был выбран в качестве рабочего | электролита.

Относительное стандартное отклонение для указанного диапазона концентраций изменяется от 0,28 до 0,10.

м-1 1.103 тЛ

Рис 5. Зависимость высоты катодного тока азитромицнна от его концентрации на различных фонах:

1-0,1 МЫа,Сйг,

2-0,01 МШОН;

3-0,1 М ЫагНР04;

4-0,05МКа2В40, т, = 60 с.

Для улучшения метрологических характеристик аналитического сигнала были проведены исследования зависимостей предельного тока азитромицнна от потенциала электролиза, времени электролиза, а также скорости изменения потенциала развертки.

Результаты исследований по выбору рабочих условий ВА определения азитромицина представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Параметры измерений Значения параметров

1 Электроды ртутно -пленочный стеклоугл сродный

Используемая система 2-ух электродная 3-х электродная (вспомогательный электрод - СУ)

Фоновый электролит 0,1М Ыа3а(г (рН 6,0 + 7,0) , 0,2 М Ма2НР04 (рН 8,0+9,0)

Потенциал электроконцентрирования -1ЛВ 0,2 В

Диапазон развертки потенциалов от — 1,2£до-2г0 В от 0,2 В до 1,8В

Время электролиза 30+120 с 30+60 с

Скорость развертки потенциала 50 + 60 мВ/с 20+30 мВ/с.

Потенциал пика -(1,55*1,75)В 0,65+0,75 В

В Главе 4. рассмотрены вопросы теории процессов разряда ионизации азитромицина дигидрата на различных типах электродов, а также сделана их опытная проверка.

В первой части главы были проведены вольтами ерометрические исследования процессов разряда ионизации. Изучение обратимости Процессов электроокисления азитромицина проводили по экспериментальным данным, для расчета которых использовали известные в литературе критерии и метод циклической вольтамперометрии.

Установлено, что процесс электроокисления антибиотика протекает необратимо, что подтверждает вид кривое представленной на рисунке б.

Рис. б Циклические вольтам-перограммы азитромицина дигидрата на фоне 0,2 М Ш^НРОд

1-Си=1,00'10"1 моль/л;

2-0^1,99*10"' моль/л; 3 - С.^2,98-10"1 моль/л;

\у=30 мВ/с] т,=20с; Е,=0,2 В; СУЭ дисковый диаметр 5 мм. . ■■ <1: . - ,

• -1-•-1---1-•-:—I

» • < ьа >я

Е.В

Здесь, при катодной развертке мы наблюдаем четко выраженный сигнал, а при анодной развертке пик выражен не четко. Основным параметром обратимо-

сти процесса является разница потенциалов между катодным и анодным пиком. В случае электроокисления азитромицнна на СУ электроде эта разница составляет более 30 мВ, что так же говорит в пользу необратимого процесса.

Для изучения кинетических параметров процесса окисления азитромицнна на стеклоуглеродиом электроде был применен как «традиционный» метод (анализ полулогарифмических зависимостей), так и метод инверсионной вольтамперо-метрии.

Эффективные коэффициенты переноса (jfà) электродного процесса были рассчитаны, как из полулогарифмических зависимостей (£~/1п

так и по

зависимости потенциала максимума тока окисления азитромицнна от логарифма скорости изменения потенциала (Е—/1пи0

Расчет /?п по этим зависимостям дает вполне согласующиеся друг с другом результаты:

j8n из графика Е

0,19

fin из графика E-/lnw

0,2

По полученным и описанным нами ранее результатам, мы сделали вывод, что реакция электроокисления азитромицнна является электрофильной. Роль злекгрофильиош реагента с электрофилышм дефицитом выполняет анод, а роль субстрата - молекула азитромицнна, структурная формула которой приведена на рисунке 7.

Рис. 7 Азитромицин дигидрат

(СлНтгНгОцНгО): 9-Deoxo-9 a-aza-9a-methyl-9a-homoerythromycin A dehydrate (Ia-15-членное лактонное кольцо; Ib-дезозамин; 1с-кладиноза)

Во второй части данной главы, предложен вероятный механизм процесса, протекающего на СУ электроде. Предположения основываются на данных кван— тово-химическнх расчетов, проведенных по полуэмпирическому методу РМЗ (программа НурегСЬеш 6.0). Анализируя значения теплот образования субстрата, его катион- и анион — радикалов, а также значения энергии ионизации (Евзмо, эВ) и энергии сродства к электрону (Ецвмо> эВ) (табл. 2) мы делаем вывод что, у имея

небольшие значения Бнвмо азитромицин относительно легко должен принимать на эти орбитали электроны, образуя анион — радикалы. Об этом же свидетельствуют и данные по изменению теплоты образования анион — радикала по сравнению с катион радикалом, а также сравнительные результаты значений энергий Енвмо и Евзмо- Энергия ВЗМО, отображая потенциал ионизации, соответствует достаточно высокой энергетической области (-8,86, эВ). Изложенное выше, позволяет судить в целом о большой устойчивости анион — радикала по сравнению с катион — радикалом азитромицина.

Для определения наиболее электрохимически активной группы в структуре антибиотика, которая вероятнее всего будет вступать в реакцию, был проведен анализ полученных результатов по распределению зарядов на соответствующих атомах. Соответствующие данные представлены в диссертации.

Таблица 2.

Значения теплоты образования, энергии ионизации, энергии срод-

Соединение Теплота образования, ДН, кДж/моль Изменение теплоты образования, А(ДН), кДж/моль Энергия ионизации, ' Еюко, эВ Энергия сродства к электрону, ^нии эВ

Азитромицнн -2298.9 - -3.87 1.20

Катион-радикал азитромицина -1522.2 776.6 - -

Анион-радикал азитромицина -2358.9 -60.1 ■

Третья часть теоретического раздела диссертационной работы представляет описание математической модели процесса окисления азитромицина дишората на СУ электроде. На основании квантово-химических расчетов структуры молекулы антибиотика можно предположить следующую схему электроокисления азитромицина дигидрата в слабощелочной среде:

-2 е-

СН:

¿Нз

Проанализировав закономерности изменения исходного продукта в условиях нестационарной диффузии и необратимого электродного процесса, а так же используя полулогарифмические зависимости, были проведены расчеты коэффициента переноса (Р), а также средних значений констант скоростей (табл.3.)

Таблица 3.

Кинетические параметры процесса окисления азитромицина на СУ электроде

Кинетические параметры Способы расчета кинетических параметров

По данным полулогарифмических зависимостей По данным метода ИВА

0,19 0,17

кц, дм*/с 1,8410-* 2,14,Ю"10

Заниженные значения константы скорости, полученные по данным метода ИВА (в нашем случае на два порядка) (табл. 3.) можно объяснить следующим образом. Во-первых, следует учитывать возможность адсорбции посторонних веществ на поверхности электрода и, как следствие, блокировку части его поверхности; и, во-вторых, неполным растворением вещества, полученного в ходе электрохимических превращений, за время съемки ВА кривых.

Изучению процесса адсорбции посвящен четвертый раздел Главы 4. Здесь исследована адсорбционная способность азитромицина дигидрата как на РПЭ, так и на СУЭ. В последнем случае, т.е. иа СУ электроде, такая оценка такая оценка сделана только методом инверсионной вольтамперометрии. Что же касается РП электрода, то адсорбция азитромицина изучена тремя различными способами: методом двойного обратного интегрирования, по методу, предложенному СТ. Майрановским, а также, используя, метод ИВА.

Опытные данные, полученные по методу двойного обратного интегрирования, свидетельствуют о том, что в щелочных растворах имеет место анионный тип адсорбции азитромицина. Потенциал десорбции антибиотика находится на отрицательной ветви электрокапиллярной кривой (рис. 8).

Рис. 8 Зависимость изменения вели» » чины поверхностного натяжения от потенциала РП электрода на фоне 0,1 М ЫаОН:

1 -фон ОД М№ОН;

2 - С^-Ю.ОЫО"6 моль/л;

, 3-Сл=0,03-10"в моль/л;

\ 4 -Сл=0,05-Ю"4 моль/л;

\ 5 - 0^=0,08-1 О*6 моль/л;

^ 6-0^=0, МО^моль/л;

7 - С^=0,5-10"6 моль/л.

В таблице 4 приведены результаты расчетов параметров адсорбции, величина которых показывает вклад адсорбционной составляющей в величину предельно тока восстановления азитромицина дигидрата с РП электрода.

. . . . Таблица 4.

Параметры процесса адсорбции азитромицина дигидрата на РП электроде (метод двойного обратного интегрирования)

Фон Потенциал, В к, дм3/моль Г®, моль/м1 ДСгл, кДж/моль

ОД М ЫаОН -0,3 2,39-10' 1,10-10"" 1,2-104

0,1 МИа^Од -0,2 0,20-10' 6,25-10"* 4,6-104

0,1 МКН4С1 -0,3 6,53-Ю1' 3,93-10"" 6,02-10*

Дня расчета величин адсорбции была применена изотерма Ленгмюра на том основании, что экспериментальные данные были получены при достаточно низких концентрациях, при которых возможно не учитывать действие специфической адсорбции, а также взаимодействие ПАОВ по Фрумкину.

Метод, предложенный Майрановским, был применен для случая, когда раствор содержит достаточно большие концентрации ПАОВ. Содержание азитромицина в растворе составляло (0,5+2,0)-1 О*1 моль/л. Расчеты по данному методы,

</ Ьз С

сводились к построению зависимости ——/(©) (рис. 9), которая дает представав

ление об изотерме, описывающей адсорбционные процессы, протекающие с учетом взаимодействия между адсорбированными частицами (изотерма Фрумкина, Хилла де Бура или Парсонса).

3,5 -[ 3 • 2.5 -2 1,5 -1

0,5 ■

0 -I

Рис. 9 Данная зависимость есть уточняющий экспериментальный критерий (в зависимости от того какому значению 0 соответствует минимум кривой) показывает, каким уравнением описывается процесс адсорбции (Фрумкина, Парсонса, Хилла де Бура),

0,5

В данном случае процесс описывается изотермой Фрумкина. Что согласуется с теоретическими данными о наличии специфической адсорбции при больших концентрациях ПАОВ.

Предложенный способ исследования процесса адсорбции методом ИВА, в достаточной степени может применяться как для обратимых, так и необратимых процессов, которые возможны как на «жидких» (РПЭ), так и на «твердых» (СУЭ) электродах.

Сущность предложенной модели для вольтамперометрического исследования адсорбции ПАОВ (на примере азитромицина днгидрата) сводится к следующему:

Согласно механизму реакции (1), модель включает предшествующую ста* дию адсорбции ПАОВ на поверхности электрода, которая, являясь более электрохимически активной, вступает в реакцию с образованием продукта В.

В данном методе рассматривается и решается краевая задача для скорости образования адсорбционного слоя, когда лимитирующей стадией процесса образования является диффузия ПАОВ в поверхностный слой электрода (2).

■ (2), о***«-. -

а а*1

При $ = о, (3);

СА(^,0-*С°л (4)

Кроме того ЭСЛл, г),

А, ^ 1.,= * " ОДО • Г, (5)

(6)

Выражение для тока пика на электроде при постоянном потенциале электролиза имеет вид:

(7)

преобразуя это уравнения получаем: ^ = ^л^вщ (8)

В уравнении (8) константа скорости необратимой реакции в катодном процессе записывается: кх=к>а • пф[-ог*КЕ/Л7'] (9).

№ опыте из площади под катодным пиком оценивается величина концентрации, св(0,

Зная эту величину, из (8) оценивается величина константы скорости, ки, а из (10) находят концентрацию Р, и константу скорости к , в отдельности.

■ЧЖчВНМ'оо)

Далее из опытных данных оценивается Гг = /(С^). После этого строят график в координатах: обрабатывая который, находят другие

параметры адсорбции

В данной схеме величину Гт предлагается оценивать из площади под вольтамперной кривой 1=/ (Е^, полученной методами катодной вольтамперомет-рии с накоплением (КВАН) или анодной инверсионной вольтамперометрии (ИВА). Единственное условие, которое при этом должно быть выполненным, это краевое условие (5).

Полученные данные по количественной оценки параметров адсорбции методов ИВА на стеклоуглеродном электроде представлены в таблице 5.

Таблица 5.

Параметры процесса адсорбции азитромицнна 1 метод ИВА)

Электрод к, дм1/моль Гоо, моль/см2 Д Сл,Дж/мояъ

СУЭ 4,79-10<> 6,47-10-8 2,4-ЮЗ

Глава 5. посвящена возможностям метода инверсионной вольтамперо-метрии для определения азитромицнна дигидрата в лекарственных препаратах и биологических объектах. В этой части диссертационной работы дана оценка мешающего влияния на аналитический сигнал азитромнцина сопутствующих компонентов матрицы.

Как показывают литературные данные и проведенные нами исследования органические вещества, такие как: соединения Водорастворимых витаминов Вь В г, аскорбиновой, никотиновой кислоты, фпавоноидов не оказывают значимого влияния на характер вольтамперограмм и на величину тока окисления или восстановления антибиотика в установленных рабочих условиях проведения электродного процесса, а так же избыточные концентрации таких галоген-ионов, как Г , СГ, Вг, Г.

Основное мешающее влияние оказывают катионы Са2*, ¡Со1*, Си1+, Ке3+, Ре3+... в связи с тем, что происходит образование комплексных соединений когда их соотношение в растворе достигает соотношения (2:1) и белковая составляющая при анализе биологических объектов (моча, кровь).

Определенные сложности для анализа антибиотика в крови создается связыванием азитромицнна с белками плазмы, степень которой зависит от его концентрации в крови и может варьировать от 37 до 50%,

Дня устранения этого влияния, перед анализом, проводили пробоподготов-ку, которая заключалась в удалении белковой части матрицы (путем денатурации) и дальнейшей экстракции антибиотика этанолом.

Для определения максимально допустимого объема подготовленной сыворотки для анализа азитромицнна изучена зависимость тока антибиотика от объема сыворотки в фоновом электролите, определена нижняя граница определяемых со-

держаний антибиотика на фоне, содержащем максимально допустимый объем сыворотки.

В работе представлены методики определения азитромицина в лекарственных препаратах (таблетки «Сумамед») и в сыворотке крови. Правильность предложенных методик определялась по методу введено-найдено.

Таблица б

Результаты вольтамперометрического определения азитромицина дигидрата в сыворотке крови (Р =0,95)

Определяемое вещество № пробы Введено Найдено 5г

п с, моль/л (С ± Д), моль/л

Аэитромнцин дигидрат 1 4 2-Ю"5 (2,03 ± 0,24)-Ю"5 0,074

2 4 5'10"7 (3,90 +0,76)-Ю'7 0,12

3 6 МО7 (0,94 ±0,24) -10"7 0,25

ВЫВОДЫ

1. Установлены рабочие условия количественного определения азитромицина дигидрата методом вольтамперометрии с использованием стеклоуглеродного и ртутно-нленочного электрода. Сделана оценка предела обнаружения и нижней границы определяемых содержаний на стеклоуглеродном и ртутно-пленочном электроде. Значения С,*^ и С„ составляют соответственно 1,84-10*10и 2,19-10" 10 моль/л для СУ электрода для РП электрода эти значения составляют 3,38 10" 10 и1,17-10"® моль/л соответственно.

2. Выполнены квантово-химические расчеты структуры молекулы азитромицина, которые позволили предложить наиболее вероятный механизм электрохимического превращения азитромицина дигидрата на стеклоуглеродном электроде.

3. Впервые была проведена оценка адсорбционной способности азитромицина дигидрата как на РП электроде, так и на СУ электроде. Оценка проводилась тремя различными способами: методом двойного обратного интегрирования, с помощью изотерм Ленгмюра и Фрумкнна по способу, предложенному С.Г. МаЙрановским н используя метод ИВА. Найдены значения параметров адсорбции азитромицина.

4. Методами циклической вольтамперометрии установлено, что процесс электроокисления азитромицина на стеклоуглеродном электроде осложнен побочными процессами: как адсорбционными явлениями, так и предшествующими реакциями с участием органического вещества.

5. На основании полулогарифмических зависимостей, а также используя математическую модель, предложенную по результатам квантово-химических расче-

тоъ, были получены основные кинетические параметры процесса окисления азитромицина: рп = 0,19 + 0,20, А, = 1,84-10"* л/моль с (данные полулогарифмических зависимостей); Рп = 0,17, к,= 2,14-10"'"л/мол ь-с (метод ИВА).

6. Дака оценка мешающего влияния сопутствующих неорганических анионов, катионов, органических веществ (витаминов, флавоноидов и других соединений) на величину тока окисления и восстановления азитромицина дигидрата,

' Установлены условия устранения мешающего влияния белков сыворотки и плазмы крови на аналитический сигнал антибиотика.

7. Разработана методика количественного химического анализа методом вольтамперометрии проб лекарственных препаратов (таблетки, капсулы). Проведена метрологическая аттестация вольтамперометрического Определения азитромицина в биологических объектах в диапазоне концентраций 5,0-№10 1,0*10"9 моль/л.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Анисимова JI.C. Слепченко (Пучковская) Е.С., Слепченко Г.Б. Способ количественного определения азитромицина дигидрата методом инверсионной вольтамперометрии/ Патент РФ Na 2241985; Приоритет 27.03.2003.; Регистрация в Госреестре 10.12.2004.

2. Слепченко Е.С., Карбаинов Ю.А., Слепченко Г.Б., Анисимова Л.С. Вольтам-перометрнческое исследование электрохимической активности азитромицина дигидрата. // Известия высших учебных заведений «Химия и химическая технология». - 2004. - Т.47, №9. - С.6-9.

3. Карбаинов Ю.А.Анисимова Л.С. Слепченко Е.С К вопросу о вольтамперо-метрическом поведении некоторых макролидов7/Материалы VII конференции «Аналитика Сибири и Дальнего Востока-2004» г. Новосибирск С. 10.

4. Пучковская Е.С. Вольтамперометрический контроль азитромицина дигидрата в фармпрепаратах // Материалы Ш Всерос. научной конференции «Химия и химическая технология на рубеже тысячелетий». Томск. Из-во ПТУ. 2004. С. 219220.

5. Карбаинов Ю.А., Анисимова Л.С., Слепченко Е.С., Слепченко Г.Б. Изучение физико-химических закономерностей определения азитромицина методом вольтамперометрии // VI Всерос. конференция по электрохимическим методам анализа С международным участием «ЭМА-2004». Уфа. 2004. С. 139-140.

6. Slepchenko G. В., Anisimova L, S., Fedorchuk V. A., Slechenko Е. S. Voltammetric determination of drugs in complicated multicomponent systems. // 8th Korea-Russia International Symposium on Science and Technology. Korus 2004. - Tomsk, 2004. -V. l.-P. 84-S8.

7. В. А. Федорчук, В. Ф. Слипченко, Е. С. Пучковская, Я С. Анисимова, Ю. А. Акенеев, Г. А. Шабала Количественное определение антибиотиков в

пищевых продуктах, фармпрепаратах я биологических объектах // Всерос. Научная конференция с международным участием «Электроаналитика-2005». Екатеринбург. 2005. С.137,

8. Федорчук В.А., Пучковская Б.С., Анисимова J1.C. Слепченко Г.Б. Применение вольтамперометрии в анализе антибиотиков стрептомицина и азитромицина. // Изд-во РАН. Журнал аналитической химии.-2005.- Т.60, № б. - С. 586-591.

9. Пучковская Е.С., Карбаинов Ю-А. механизм электроокисления макролидных антибиотиков на твердых электродах// И-ая шкала-семинар «Кватново-химнческие расчеты: структура и реакционная способность органических молекул» (доклад) Иваново. 2005 С.25-28.

10.ЮА. Карбаинов, Е.С. Пучковская, СЛ. Карбаинова, Г.Б. Слепченко Вольтам-перометрический способ исследования процесса адсорбции ПАОВ, // Известия ТПУ. - 2006. -Т.309, № 3.- С.118 - 119.

Подписано к печати 9.10.2006. Формат 60x84/16. Бумага "Классика". Печать RISO. Усл. печ. л. t ,11. Уч.-иэд. л. 1. Заказ 1090. Тираж 100 экз.

юитшствоф'тпу. 634050, г. Томск, пр. Ленина, Эр. .

Содержание диссертации автор исследовательской работы: кандидата химических наук, Пучковская, Евгения Сергеевна

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Характеристика антибиотиков макролидов.

1.2 Основные свойства азитромицина дигидрата.

1.3 Физико-химические методы количественного определения макролидных антибиотиков.

1.4 Исследование электрохимических процессов азитромицина дигидрата методом вольтамперометрии.

1.5 Формулировка задач исследования.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 2 Аппаратура и методика проведения эксперимента

2.1 Приборы, электроды, ячейки.

2.2 Приготовление растворов, посуды.

2.3 Методика проведения эксперимента.

Глава 3 Выбор рабочих условий для вольтамперометрического определения азитромицина дигидрата

3.1 Рабочие условия определения азитромицина на стеклоуглеродном электроде методом дифференциальной вольтамперометрии.

3.2 Выбор рабочих условий определения азитромицина дигидрата на ртутпо-пленочном электроде.

3.3 Оценка предела обнаружения.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ

Глава 4 Вопросы теории процессов разряда-ионизации азитромицнна дигидрата на различных тинах электродов и их опытная проверка

4.1 Вольтамперометрическое исследование процессов разряда-ионизации азитромицина.

4.2 Квантово-химическая оценка структуры и реакционной способности азитромицина.

4.3 Математическая модель процесса окисления азитромицина дигидрата на СУ электроде.

4.4 Изучение процесса адсорбции азитромицина дигидрата.

Глава 5 Вольтамперометрическое определение азитромицина дигидрата в лекарственных препаратах и биологических объектах

5.1 Изучение мешающего влияния органических соединений и неорганических ионов на аналитический сигнал азитромицина.

5.2 Методика определения азитромицина дигидрата в лекарственных препаратах и биологических объектах.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертация по химии, на тему "Инверсионная вольтамперометрия азитромицина дигидрата"

Актуальность проблемы. Определение таких лекарственных форм как антибиотики, чрезвычайно важно для оценки фармакологического действия и эффективности антибактериальной терапии, идентификации действующих веществ в лекарственных формах, а также его метаболитов в биологических матрицах. В последнее время много внимания уделяется синтезу новых форм антибиотиков. Таким примером служит азитромицин дигидрат, который является представителем антибиотиков макролидного ряда, однако, относится к отдельной подгруппе азалидов, за счет отличия в строении молекулы. Азитромицин относится к полусинтетическим антибиотикам второго поколения и обладает высокой микробиологической и клинической эффективностью в лечении ряда тяжелых инфекций дыхательных путей, кожи и мягких тканей, некоторых урогенитальных инфекций.

Для выхода из сложившейся ситуации в последние 2 года были созданы нормативно-правовые базы для урегулирования контроля выпуска лекарственных средств. В связи с этим повышаются требования к методам контроля фармпрепаратов. Учитывая вышеперечисленное, необходим эффективный контроль за качеством выпускаемых препаратов, в состав которых входят антибиотики.

При выборе инструментального метода контроля лекарственных средств учитываются ряд требований: возможность определения следов органических веществ, находящихся в пробе с минимальной погрешностью, достаточная селективность, отсутствие сложной процедуры пробоподготовки, возможность автоматизации методики, минимально возможное время исследования, достаточная универсальность (возможность многоэлементного анализа), минимальная массогабаритность оборудования.

В данной работе рассматриваются возможности вольтамперометрического определения антибиотиков макролидного ряда в различных объектах, на примере азитромицина дигидрата. Проводимые исследования направлены на увеличение чувствительности, серийности и экспрессности проводимых анализов.

Цель работы. Целью данной работы является разработка методики количественного определения азитромицина дигидрата в биологических средах и фармпрепаратах, а также проведение теоретических и экспериментальных исследований его вольтамперометрического поведения.

Научная новизна:

- Впервые показана способность антибиотика-макролида азитромицина дигидрата окисляться на стеклоуглеродном электроде, а так же его способность к восстановлению на ртутно-пленочном электроде. Установлены рабочие условия его вольтамперометрического определения. Рассчитаны некоторые кинетические параметры данных реакций (|3n, kR).

- Впервые выполнены квантово-химические расчеты для молекулы азитромицина и его радикальных форм с целью определения наиболее реакционноспособной группы.

- Решена краевая задача для процесса электроокисления азитромицина на стеклоуглеродном электроде в анодной вольтамперометрии. Рассмотрены способы оценки кинетических параметров этого процесса.

- Теоретически и экспериментально исследован процесс адсорбции азитромицина на ртутно-пленочном и стеклоуглеродном электродах различными методами.

- Разработан алгоритм подготовки проб биологических объектов (сыворотка и плазма крови) для последующего определения следовых количеств азитромицина вольтамперометрическим методом.

- Впервые разработаны методики количественного химического анализа проб лекарственных препаратов (таблетки, капсулы) и биообъектов на содержание азитромицина дигидрата методом инверсионной вольтамперометрии на стеклоуглеродном электроде.

Практическая значимость работы.

Разработана и метрологически аттестована методика количественного химического определения азитромицина дигидрата в лекарственных препаратах методом инверсионной вольтамперометрии. Способ количественного определения азитромицина дигидрата методом инверсионной вольтамперометрии защищен патентом РФ.

Методика количественного анализа азитромицина в биологических объектах (сыворотка крови, моча, ткани) нашла практическое применение в лаборатории молекулярной фармакологии НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН г. Томска, ветеринарных службах г. Кемерова, г. Томска, а также контролирующих лабораториях ЦСМ (г. Томска, г. Кемерова, г. Новосибирска).

На защиту выносятся следующие положения:

1. Рабочие условия вольтамперометрического определения азитромицина дигидрата на стеклоуглеродном и ртутно-пленочном электродах.

3. Параметры электродной реакции с участием антибиотика и его адсорбционная способность.

4. Вольтамперометрический способ оценки некоторых параметров адсорбции на примере азитромицина дигидрата.

5. Алгоритм методик количественного химического анализа ^ лекарственных препаратов и биологических жидкостей (сыворотка и плазма крови) на содержание азитромицина методом инверсионной вольтамперометрии.

Апробация работы. По теме диссертации опубликовано 11 работ, в том числе 3 статьи в рецензируемых научных журналах, 7 тезисов докладов, получен 1 патент на изобретение РФ. Материалы отдельных разделов диссертационной работы и некоторые полученные результаты освещались на: VII конференции «Аналитика Сибири и Дальнего Востока-2004» (Новосибирск, 2004); III Всероссийской научной конференции «Химия и химическая технология на рубеже тысячелетий» (Томск, 2004); VI Всероссийской конференции по электрохимическим методам анализа с международным участием «ЭМА-2004» (Уфа, 2004); 8th Korea-Russia International Symposium on Science and Technology (Tomsk, 2004); Всероссийской научной конференции с международным участием «Электроаналитика-2005» (Екатеринбург, 2005); П-ой школе-семинаре «Кватново-химические расчеты: структура и реакционная способность органических молекул» (Иваново, 2005).

Структура диссертации.

Работа объемом 126 страниц компьютерного текста, включая 31 рисунок и 12 таблиц, состоит из введения, пяти глав, выводов и приложения. Список литературы содержит 107 библиографических источников отечественных и зарубежных авторов.

В первой главе представлен литературный обзор по аналитическим методам анализа макролидных антибиотиков и физико-химическим способам исследования процессов и механизмов, протекающих на электродах. На основании обзора сформулированы задачи исследования. В главе 2 произведено описание используемой аппаратуры, типов электродов, методики проведения эксперимента. Третья глава посвящена установлению рабочих условий вольтамперометрического определения азитромицина дигидрата. В четвертой главе приведены данные по вольтамперометрическому исследованию электрохимической активности азитромицина. Рассмотрен механизм реакции, протекающей на электроде, путем квантово-химических расчетов, а так же методом циклической вольтамперометрии и путем использования вращающегося дискового электрода. Показаны возможности вольтамперометрии в изучении процессов адсорбции на поверхности стеклоуглеродного и ртутно-пленочного электродов. Приведены данные по некоторым физико-химическим параметрам, представляющие теоретический и практический интерес в описании электродного процесса. В пятой главе диссертации приведены разработанные методики количественного химического анализа азитромицина дигидрата в лекарственных препаратах и биологических объектах (сыворотка и плазма крови). Анализ полученных экспериментальных данных приведен в обсуждении результатов. В заключении сделаны выводы. В приложении представлены свидетельства, программа метрологической аттестации и акты о внедрении результатов работы. и

Заключение диссертации по теме "Аналитическая химия"

ВЫВОДЫ

1. Установлены рабочие условия количественного определения азитромицина дигидрата методом вольтамперометрии с использованием стеклоуглеродного и ртутно-пленочного электрода. Сделана оценка предела обнаружения и нижней границы определяемых содержаний на стеклоуглеродном и ртутно-пленочном электроде. Значения Cminp и Сн составляют соответственно 1,84-10'10 и 2,19-10"10 моль/л для СУ электрода для РП электрода эти значения составляют 3,38-Ю'10 и 1,17-Ю"9 моль/л соответственно.

3. Впервые была проведена оценка адсорбционной способности азитромицина дигидрата как на РП электроде, так и на СУ электроде. Оценка проводилась тремя различными способами: методом двойного обратного интегрирования, с помощью изотерм Ленгмюра и Фрумкина по способу, предложенному С.Г. Майрановским и используя метод ИВА. Найдены значения параметров адсорбции азитромицина.

5. На основании полулогарифмических зависимостей, а также используя математическую модель, предложенную по результатам квантово-химических расчетов, были получены основные кинетические параметры процесса окисления азитромицина: (Зп = 0,19-^0,20, kR= 1,84-Ю-8 см/с данные полулогарифмических зависимостей); Рп = 0,17, kR = 2,14-10"10 см/с (метод ИВА).

6. Дана оценка мешающего влияния сопутствующих неорганических анионов, катионов, органических веществ (витаминов, флавоноидов и других соединений) на величину тока окисления и восстановления азитромицина дигидрата. Установлены условия устранения мешающего влияния белков сыворотки и плазмы крови на аналитический сигнал антибиотика.

7. Разработана методика количественного химического анализа методом вольтамперометрии проб лекарственных препаратов (таблетки, капсулы). Проведена метрологическая аттестация вольтамперометрического определения азитромицина в биологических объектах в диапазоне концентрации 5,0-10'10 + 1,0-10"9 моль/л.

105

Список источников диссертации и автореферата по химии, кандидата химических наук, Пучковская, Евгения Сергеевна, Томск

1. Страчунский J1.C., Козлов С.Н. Макролиды в современной клинической практике. - Смоленск: «Русич», 1998. - С. 166-197.

2. Krichhoff R. М., Laufen Н., Schacke G., Kirchhoff G., Gallo E. Determination of azithromycin in gastric biopsy samples. // Int. J. Clin Parmacol Ther. 1999. - V. 37, № 7 - P. 361 - 365.

3. Машковский М.Д. Лекарственные средства. M.: Медицина, 1993. ч.2. -688 с.

4. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках. М.: Изд-во МГУ, 1994. -512с.

5. Шемякин М. М. и др. Химия антибиотиков. М.: Изд-во АН СССР, 1961.-Т. 1.-774 е.

6. Сазыкин Ю. О. Антибиотики как ингибиторы биохимических процессов, М.: Наука, 1968. 447с.

7. Механизм действия антибиотиков, Сборник статей./перевод с английского, М.: 1969.

8. Biogenesis of antibiotic substances, Prague, 1965.

9. Bryskier A, Agouridans C, Gasc J-C. Classification of macrolide antibiotic. In Bryskier AJ, Butzler J-P, Neu HC, Tulkens PM, eds. Macrolides, Chemistry. Pharmacology and Clinic Uses. Paris: Arnette-Blackwell 1993, P. 5-66.

10. Djokic S., Kobrehel G., Lazarevski G. Antibacterial in vitro evaluation of 10-dihydro-10-deoxo-l 1-azaerythromycin A: synthesis and structure activity relationship of its acyl derivatives. // J. Antibiot. 1987. - V. 40. - P 10061015.

11. Карпов О, И„ Зайцев AJT. Риск применения лекарственных препаратов при беременности и лактации. С-Пб., 2003. - 452 с.

12. Stubbs С., Haigh J.M., Kanfer L. // J. Pharm. Sci. 1985. V. 74. - P. 1126.

13. Lalak N.J., Morris D.L. Azithromycin clinical pharmacokinetics. // Clin. Pharmacokinet. 1993. - V.25. - P. 370-374.

14. Фармакопейная статья 42-2961-97.

15. Мелентьева Г.А. Фармацевтическая химия.- М.: «Медицина», 1976.-828с.

16. Dokic S., Vajtner Z., Lopotar N. et al. Complexes of azithromycin with some divalent metal ions // Croat. Chem. Acta 1995. - V. 68, № 2. - P. 375-381.

17. Фармакопейная статья 42-1205-97 на препарат капсулы «Сумамед» .

18. Wang, Huaisheng; Zhang, Aimei; Cui, Hui; Liu, Daojie; Liu, Renmin Adsorptive stripping voltammetric determination of erythromycin at a pretreated glassy carbon electrode.// J. Microchem. 1999 - V. 64, № 1. -P. 67-71.

19. Szunyog J, Adams E, Liekens K, Roets E, Hoogmartens J Analysis of a formulation containing lincomycin and spectinomycin by liquid chromatography with pulsed electrochemical detection. // J Pharm. Biomed. Anal. 2002 - V.29, № 1 -2. - P. 213-233.

20. Draisci R, delli Quadri F, Achene L, Volpe G, Palleschi L, Palleschi G A new electrochemical enzyme-linked immunosorbent assay for the screening of macrolide antibiotic residues in bovine meat.// Analyst 2001. - V. 126, № 11.-P. 1942- 1948.

21. Kanazawa S, Ohkubo T, Sugawara К The effects of grapefruit juice on the pharmacokinetics of erythromycin.// Eur. J. Clin. Pharmacol. 2001. - V. 56,№ 11.-P. 799-803.

22. Dreassi E, Corti P, Bezzini F, Furlanetto S High-performance liquid chromatographic assay of erythromycin from biological matrix using electrochemical or ultraviolet detection.// Analyst 2000. - V. 125, № 6. -P. 1077-1081.

23. Niopas I, Daftsios AC Determination of clarithromycin in human plasma by HPLC with electrochemical detection: validation and application in pharmacokinetic study. // Biomed Chromatogr. 2001. - V. 15, № 8. - P. 507- 508.

24. Kees F, Spangler S, Wellenhofer M Determination of macrolides in biological matrices by high-performance liquid chromatography with electrochemical detection.// J Chromatogr. A 1998. - V. 812, № 1-2. - P. 287-293.

25. Toreson H, Eriksson BM Determination of erythromycin in gastric juice and blood plasma by liquid chromatography and electrochemical detection.// J. Chromatogr. В., Biomed. Appl. 1995. - V. 673, № 1. - P. 81 - 89.

26. Croteau D, Vallee F, Bergeron MG, LeBel M High-performance liquid chromatographic assay of erythromycin and its esters using electrochemical detection.// J. Chromatogr. 1987. - V.419, № 7. - P. 205 - 212.

27. S. Pleasance, J. Kelly, M.D. LeBlanc, M.A. Quilliam, R.K. Boyd, D.D. Kitts, K. McErlane // Biol. Mass Spectrom. 1992. - V. 21. - P. 675.

28. P. Sanders, B. Delepine // Biol. Mass Spectrom. 1994. - V. 23. - P. 989.

29. B. Delepine, D. Hurtaud, P. Sanders //Analyst- 1994. -P. 119(1994)

30. D.E. Kiehl, A.S. Kennington // Rapid Commun. Mass Spec. 1989. - V. 11. -P. 983.

31. Carmen Leal, Rosa Codony, Ramon Compano, Merce Granados and M. Dolors Prat Determination of macrolide antibiotics by liquid chromatography // Journal of Chromatography A. 2001. - V. 910, № 2. -P. 285-290.

32. Kim, Yong-Hak; Pothuluri, Jairaj V.; Cerniglia, Carl E Voltammetric investigation of macrolides by an HPLC-coulometric assay // Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2005. - V. 38, № 3. - P. 390 -396.

33. Komorsky-Lovric, Sebojka; Nigovic, Biljana Identification of 5-aminosalicylic acid, ciprofloxacin, and azithromycin by abrasive stripping voltammetry // Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2004. - V. 36, № 1 - P. 81 - 89.

34. Wu, Yunhua; Ji, Xiaobo; Hu, Shengshui Studies on electrochemical oxidation of azithromycin and its interaction with bovine serum albumin // Bioelectrochemistry. 2004 - V. 64, № 1. - P. 91 - 97.

35. Nigovic, Biljana Adsorptive stripping voltammetric determination of azithromycin at a glassy carbon electrode modified by electrochemical oxidation // Analytical Sciences. 2004. - V. 20, № 4. - P. 639 - 643.

36. Farghaly, Othman Abd El-Moaty; Mohamed, Niveen Abdel Latif Voltammetric determination of azithromycin at the carbon paste electrode // Talanta 2004. - V. 62, № 3. - P. 531 - 538.

37. Wang J., Mahmoud J.S. Determination of traces stripping voltammetry.// Anal. Chim. Acta,1986, 186,31-38.

38. Hunter R.P., Lynch M.J., Ericson J.F., Millas W.J., Fletcher A.M. Pharmacokinetics, oral bioavailability and tissue distribution of azithromycin in cats //J. Vet. Pharmacol. Ther. (England) 1995. - V. 18, № l.-P. 38-46.

39. Raines DA, Yusuf A., Jabak MH., Ahmed WS., Simultaneous high-performance chromatography analysis of azithromycin and two of its meyabolites in human tears and plasms //Ther. Drug. Monit. (United States). 1998. - V. 20, № 6. - P. 680 - 684.

40. Mandic Z., Weitner Z., Ilijas M. Electrochemical oxidation of azithromycin and its derivatives // Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis (2003), 33(4), 647-654.

41. Nigovic, Biljana, Simonic Branimir Voltammetric assay of azithromycin in pharmaceutical dosage forms// Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis (2003), 32(1), 197-202.

42. Zhang G., Wang X., Liu Z., Zhuang Q. Voltammetric behavior of azithromycin// Fenxi Huaxue. 2000. - V. 28, № 1. - P. 22 - 25.

43. Girard A.E., Girard D., English A.R. et al. // Antimicrob. Agents Chemother. 1987. - V. 31. - P. 1948.

44. Zubata P., Cresole R., Rosasco M.A., et al.//J. Pharm. Biomed. Anal. -2002.-V. 27.-P. 833.

45. Smith R.V., Harris R.G., Sanchez E. et al. // J. Microchem. 1977. - V. 22. -P. 168- 175.

46. Широкова JI.M., Чарыков A.K. // Жури, аналит. химии. 1981. - Т. 36. -С. 547-551.

47. Tortolani G., Mazza М. //J. Chromatogr. 1973. - V. 86. - P. 139 - 144.

48. R. Ortiz and J. Araujo Study of the Electrochemical Oxidation of Azitromycin // Anal. Lett. 2001. - V. 24, № 12. - P. 2171-2186.

49. Girard A.E., Girard D., Retsema J.A. // J. Antimicrob. Chemother. 1990. -V. 25.-P. 61.

50. Retsema J.A., Girard A.E., Girard D., Milisen W.B. // J. Antimicrob. Chemother. 1990. - V. 25. - P. 83.

51. Brier A.R., Garsia C.V., Oppe T.P. et al.// J. Pharm. Biomed. Anal. 2002. -V. 29.-P. 957.

52. Tserngkou-Yi, Wagner J. // Anal. Chem. 1978. - V. 48. - P. 348 - 353.

53. Turcinov Т., Pepeljnajak S. // J. Pharm. Biomed. Anal. 1998. - V. 17. - P. 903.

54. Gandhi R., Kaul L.C., Panchagnula R. Validate HPLC method for in-vitro analysis of azithromycin using electrochemical detection // J. Pharm. Biomed. Anal. 2000. - V. 23. - P. 1073.

55. Shepard R.M., Duthu G.S., Ferraina R.A., Mullins M.A. High-performance liquid chromatographic assay with electrochemical detection for azithromycin in seum and tissues. // J. Chromatogr. 1991. - V. 565, № 1-2. -P. 321 -337.

56. Байерман К. Определение следовых количеств органических веществ. -М.: Мир, 1987.-429 с.

57. Будников Г. К., Улахович Н. А., Медянцева Э. П. Основы электроаналитической химии. -Казань: Изд. Казанского ун-та, 1986. — 288 с.

58. Anderson J. L. Dynamic electrochemistry: methodology and application. // Analytical Chemistry. -1998. V.70, № 12. - P. 519R- 589R.

59. Kaldova R. Review of adsorptive stripping voltammetry assessment and prospects. // Analytical Chemistry. - 1994. - V.349. - P. 565 - 570.

60. Shawabkeh R.A., Tutunji M.F. Mathematical modeling of electrode process of azithromycin using cyclic voltammetry at hanging mercury drop electrode. // Sensors 2002 - № 2. - P. 436 - 446.

61. Боблева Ю. В. Дис. .канд. хим. наук. Томск: ТПУ, 2000. - 158 с.

62. Awan A., Brennan R. J., Regan А.С., Barber J. The conformation of the macrolid antibiotics erithrimycin A, azithromycin and clarithromycin in aqueous solution: a H NMR study// J. Chem. Soc. 2000. -№ 2. - P. 1645 -1652.

63. Инструментальные методы анализа функциональных групп органических соединений /под ред. Сиггиа С. М.: Мир, 1974. - 464 с.

64. Томилов А.П., Майрановский С.Г., Фиошин М.Я., Электрохимия органических соединений. М.: Химия, 1968 - с.314.

65. Электрохимия органических соединений / Под ред. Томилова А.П., Феоктистова Л.Г. М.: Мир, 1976. - с.20.

66. Дамаскин Б.Б., Петрий О.А., Батраков В.В. Адсорбция органических соединений на электродах. М.: Наука, 1968 - с.ЗЗЗ.

67. Майрановкий С.Г., Филонова Краснова А.Д. // Изв. АН СССР. Сер. Хим. - 1967.-№. 8.-с. 1973- 1679.

68. Карбаинов Ю.А., Карбаинова С.Н., Мамаева В.А., Бирюков М.С., Ивановская Е.А., Боблева Ю.В. // Электрохимия. 2002. - Т. 38, № 12. -с. 1498- 1500.

69. Михеева Е. В. Дис. канд. хим. наук Томск: ТПУ, 2005 - 163 с.

70. Parsons R., Symons P.//Trans. Faradey Soc. 1968. - V. 64. - P. 1077.

71. Брайнина X. 3. Инверсионная вольтамперометрия твердых фаз. М.: Химия, 1972.- 192 с.

72. Мискиджьян С.П., Кравченюк Л.П. Полярография лекарственных препаратов. изд. «Вища школа», 1976. - 232 с

73. Майрановский С.Г., Страдынь Я.П., Безуглый В.Д. Полярография в органической химии. JL: Химия, 1975. - 352 с.

74. Нейман Е.Я., Каплан Б.Я. Рекомендации по метрологической оценке результатов определений. // Ж. аналит. химия. 1978. - Т. 33, № 3. - с. 607-609.

75. Бланк А.Б. О нижней границе определяемых содержаний и пределе обнаружения.// Ж. аналит. химия. 1979. - Т. 34, № 1. - с. 5 - 9.

76. Гринзайд ЕЛ., Зильберштейн Х.И., Надежина JI.C., Юфа Б.Я. О термине и способах оценки предела обнаружения в различных методах. // Ж. аналит. химия. 1977. - Т. 32, № 11. - с. 2106 - 2112.

77. Брайнина X. 3. Нейман Е. Я. Твердофазные реакции в электроаналитической химии. М.: Химия, 1982. - 264 с.

78. Скуг Д., Уэст Д., Основы аналитической химии М.: Мир, 1979. - Т. 1 -480 с.

79. Плесков Ю. В., Филиновский В. Ю. Вращающийся дисковый электрод. М.: Наука, 1972. - 344 с.

80. Левин В.Г.//Ж. физич. Химия.- 1944.-№ 18.-с. 335.

81. Практикум по электрохимии /под ред. Б. Б. Дамаскина. М.: Высш. шк., 1991.-288 с.

82. Фридрихсберг Д.А. Курс коллоидной химии. Химия, 1974. - с. 350.

83. Steigbigel N.H. Macrolides and clindamycin. In: Princeples and Practice of Infectious Diseases. // 4th ed. Mandell G.L., Bennett J.E., Dolin R. (Eds.). New York, etc. 1995 - P. 334 - 346.

84. Хигаси К., Баба X, Рембаум А. Квантовая органическая химия. М.: Мир, 1967.-379 с.

85. Кушманова О. Л., Ивченко Г. М. Руководство к практическим занятиям по биологической химии. М: Медицина, 1983. - 272 с.

86. Yun-Xiang Ci, Huai-Na Li, Jun Feng Electrochemical method for determination of erythrocytes and leukocytes // Electroanalysis. 1998 - V. 10,№ 13.-P. 921 -925.

87. Foulds G., Shepard R.M., Johnson R.B. The pharmacokinetics of azithromycin in human serum and tissues. // J. Antimicrob. Chemother. -1990. -V. 25-P. 73-82.

88. Wildfeuer A., Laufen H., L:eitold M., et al. Comparison of pharmacokinetics of three-day and five-day regimens azithromycin in plasma and urine. // J. Antimicrob. Chemother. 1993. -V. 31. P. 51 -56.

89. Каплин А. А., Кубрак В. А., Рубан А. И. Непараметрическая оценка предела обнаружения в методе инверсионной вольтамперометрии. // Ж. аналит. химии. 1978. - 33, № 12. - С. 2298 - 2303.

90. Кучеренко Н. Е., Бабенюк Ю. Д., Васильев А. Н. Биохимия: Практикум. -Киев: Выща школа, 1988,- 128 с.

91. Алейникова Т. Л., Рубцова Г. В. Руководство к практическим занятиям по биохимии. М: Высшая школа, 1988.-239 с.

92. БерезовТ. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. -М.: Медицина, 1983.-750 с.

93. Электродные процессы в растворах органических соединений /под ред. Б. Б. Дамаскина. М.: Изд. МГУ, 1985. - 312 с.

94. Майрановский С.Г. Каталитические и кинетические волны в полярографии М: Изд. Наука, 1966. - 288 с.

95. Майрановский С.Г. сб. Успехи электрохимии органических соединений -М: Изд. Наука, 1966.-С. 115.

96. Корыта И., Дворжак И., Богачкова В. Электрохимия. М.: Мир, 1977. -с. 470.

97. Song Z. Wang C. Ultrasensitive assay of azithromycin in medicine and bio-fluids based on its enhanced luminal-H202 chemilunescence reaction using flow injection technique // Bioorganic and Medicinal Chemistry. 2003 -V. 24, № 11.- P. 5375 -5380.

98. Прохорова Г. В., Иванов В. М., Бондарь Д. А. Адсорбционная инверсионная вольтамперометрия: анализ природных и биологических объектов. // Вестн. Моск. Ун-та. Сер. 2. Химия. 1998. - Т. 39, № 4. -С. 219-223.

99. Ericsson Н.М., Sherris J.C. Antibiotic Sensitivity Testing. Report of an International Collaborative Study II Acta Pathol. Microbiol. Scand. 1971 -V. 217 (suppl. B).-P. 1-90.