Новые антагонисты 5-НТ6 рецепторов, содержащие арилсульфонильный фрагмент: взаимосвязь структура-биологическая активность тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

005053179

На правах рукописи <0-

ГОЛОВИНА ЕЛЕНА СЕРГЕЕВНА

НОВЫЕ АНТАГОНИСТЫ 5-НТ6 РЕЦЕПТОРОВ, СОДЕРЖАЩИЕ АРИЛСУЛЬФОНИЛЬНЫЙ ФРАГМЕНТ: ВЗАИМОСВЯЗЬ СТРУКТУРА -БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ

02.00.10 - Биоорганическая химия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

1 1 ОКТ 2012

Москва-2012

005053179

Работа выполнена в ЗАО «Исследовательский Институт Химического Разнообразия» (ЗАО «ИИХР»), г. Химки.

Научный руководитель: доктор химических наук, профессор, лауреат Государственной премии СССР и премии Совета Министров СССР, заслуженный изобретатель России

Иващенко Александр Васильевич

Официальные оппоненты: доктор химических наук, заведующий лабораторией клеточной биологии рецепторов Института

биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

доктор химических наук, ведущий научный сотрудник Института органической химии им. Н.Д. Зелинского РАН

Петренко Александр Георгиевич

Самет Александр Викторович

Ведущая организация: Институт физиологически активных

веществ РАН (г. Черноголовка)

Защита диссертации состоится 8 октября 2012 года в 16 часов 30 минут на заседании Диссертационного Совета Д 212.120.01 при Московском государственном университете тонких химических технологий им. М.В. Ломоносова по адресу: 119571, Москва, пр. Вернадского, д. 86.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МИТХТ им. М.ВЛомоносова по адресу: г. Москва, пр. Вернадского, д.86.

Автореферат разослан 5"сентября 2012 г.

Ученый секретарь

Диссертационного Совета Д 212.120.01 кандидат химических наук, старший научный сотрудник

ЛютикА-и-

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы. Серотонин (5-гидрокситриптамин — 5-НТ) — один из важнейших нейромедиаторов, его физиологические функции очень разнообразны. В частности, он участвует в поддержании когнитивных процессов. На сегодняшний день известно 14 подтипов серотониновых рецепторов, объединенных в семь типов (5-НТ] - 5-НТ7). Все они, за исключением 5-НТ3 рецепторов, являются метаботропными. Например, 5-НТ6 рецептор связан с 08-белком и активирует аденилатциклазу. Этот фермент катализирует циклизацию аденозинтрифосфата (АТФ) в циклический аденозинмонофосфат (цАМФ), известного вторичного посредника. 5-НТб рецепторы (5-НТ6Р) локализованы почти исключительно в центральной нервной системе (ЦНС), причем наиболее высокая их концентрация наблюдается в областях, играющих существенную роль в когнитивных процессах. Авторадиография, проведенная на препаратах мозга крыс, показала высокий уровень специфического связывания меченых лигандов 5-НТбР внутри полосатого тела, прилежащего ядра, островках Калеха и ольфакторного бугорка. Эти результаты, в целом, согласуются с выводами иммунологических исследований.

Установлено, что 5-НТ6Р влияют на несколько нейромедиаторных путей, включая холинергические, норадренергические, глутаматергические и допаминергические системы. Это позволяет рассматривать данный тип рецепторов как особенно привлекательную мишень для разработки новых лекарственных средств для лечения различных заболеваний ЦНС, в частности шизофрении, болезни Альцгеймера и других нейродегенеративных заболеваний и когнитивных расстройств. Еще одним привлекательным свойством антагонистов 5-НТ6Р является их способность подавлять аппетит, что может привести к созданию на их основе принципиально новых средств для снижения избыточного веса и ожирения. Этот вывод подтверждается и существенным увеличением за последние годы количества опубликованных статей и патентов на тему 5-НТ6Р, что отражает повышенный интерес к обсуждаемому направлению.

В связи с этим поиск новых селективных антагонистов серотониновых 5-НТ6Р является актуальным и представляется перспективным подходом к созданию новых лекарственных средств для лечения широкого круга заболеваний центральной нервной системы.

Цель работы. Цель работы состояла в поиске новых антагонистов 5-НТ6 рецепторов.

Для достижения этой цели были сформулированы следующие задачи:

1) разработка новой фокусированной библиотеки гетероциклических соединений для поиска новых хемотипов антагонистов 5-НТ6 рецепторов; 2) разработка методики скрининга соединений на антагонистическую активность по отношению к 5-НТ6 рецепторам. 3) скрининг фокусированной библиотеки соединений на антагонистическую активность по отношению к 5-НТ6 рецепторам; 4) изучение связи структура - биологическая активность для новых хемотипов антагонистов 5-НТ6Р, обнаруженных в результате скрининга.

Научная новизна работы:

Разработан дизайн новой фокусированной библиотеки потенциальных лигандов 5-НТбР, не соответствующих классической фармакофорной модели, для изучения взаимосвязи между структурой гетероциклических соединений, содержащих сульфонильную группировку, и их антагонистической активностью по отношению к 5-НТвР.

Обнаружены новые перспективные хемотипы лигандов 5-НТбР, содержащие в вицинальном положении к сульфонильному фрагменту лигандов электронодонорные заместители (ЕО), в том числе лиганды, содержащие в качестве ЕЭ первичную или вторичную аминогруппу, стабилизированные внутримолекулярными водородными связями (ВВС), образованными метиламиногруппой и кислородом сульфонильной группы.

Впервые проведен анализ связи структура - 5-НТ6Р антагонистическая активность для серии замещённых (3-фенилсульфонил-5,7-диметилпиразоло[1,5-а]пиримидин-2-ил)-аминов и (4-фенилсульфонилоксазол-5-ил)-аминов. Показано, что наличие в этих лигандах в вицинальном положении к сульфонильной группе метиламиногруппы, радикально повышает их антагонистическую активность по отношению к 5-НТ6Р. Введение в это положение диметиламиногруппы или аминогрупп, замещенных объемными заместителями, приводят к резкому снижению или исчезновению 5-НТ6Р активности.

Практическая значимость.

Разработана методика высокопроизводительного скрининга веществ на антагонистическую 5-НТ6Р активность, позволяющая испытывать до 1000 соединений в день.

В результате скрининга фокусированной библиотеки обнаружена серия новых хемотипов антагонистов 5-НТ6 рецепторов. Получены оптимизационные комбинаторные библиотеки 3-фенилсульфонил-тиено[2,3-е][1,2,3]триазоло[1,5-а]пиримидинов, 3-фенилсульфонил-[ 1,2,3]триазоло[ 1,5-а]хиназолинов, (4-фенилсульфонилоксазол-5-ил)-аминов и (3-фенилсульфонил-5,7-диметил-пиразоло[1,5-а]пиримидинов, в которых обнаружены лидирующие соединения перспективные в качестве высокоэффективных антагонистов 5-НТ6 рецепторов.

Найдены селективные и высокоактивные антагонисты 5-НТ6 рецепторов в ряду 3-фенилсульфонил-5,7-диметил-пиразоло[1,5-а]пиримидинов, один из которых успешно прошёл фазы I и II клинических испытаний и в настоящее время находится в фазе III клинических испытаний в качестве лекарственного препарата для лечения шизофрении.

Апробация работы. Основные результаты работы были представлены на III Международной конференции «Химия гетероциклических соединений», посвященной 95-летию со дня рождения профессора Алексея Николаевича Коста (Москва, Россия, 2010), на XLV Всероссийской конференции по проблемам математики, информатики, физики и химии (Москва, Россия, 2009), на VIII всероссийской конференции "Химия и медицина" (Уфа, Россия, 2010), на XIII Международной научно-технической конференции «Наукоемкие химические технологии-2010» (Иваново, Россия, 2010), на всероссийской научной конференции с международным участием, посвященной Международному году химии в Российском Университете Дружбы Народов (Москва, Россия, 2011), на II международной научной конференции "Новые направления в химии гетероциклических соединений" (Железноводск, Россия, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 статей и 10 тезисов докладов на конференциях.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 103-ёх страницах машинописного текста и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, обсуждение результатов, экспериментальную часть, выводы и список литературы (107 ссылок). Материал иллюстрирован 30-ю рисунками и 3-мя таблицами.

Данная диссертационная работа является частью разработки лекарственного препарата, который в настоящий момент проходит клинические испытания, поддержанные МинПромТоргом в рамках госконтракта № 11411.1008700.13.095

"Организация и проведение клинических исследований лекарственного препарата для лечения шизофрении и являющегося ингибитором серотониновых рецепторов".

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

1. Дизайн библиотеки гетероциклических соединений, фокусированной на разработку новых селективных 5-НТб антагонистов.

Анализ литературных и патентных данных показывает, что среди активных 5-НТбР лигандов доминирующее положение занимают

арилсульфонилгетероциклические соединения или их сульфонамидные аналоги, в том числе Ко-65-7674, 8В-271046 и БВ-742457 (рис. 1), которые в условиях конкурентного радиолигандного связывания показали наномолярную или субпикомолярную активность (К;).

Ro-65-7674: К = 0,85 nM SB-271046: 1,26 nM SB-742457: Кр 0,23 пМ (Roche) (GlaxoSmithKline) (GlaxoSmit'hKline)

Рис. 1. Структурные формулы некоторых 5-НТ6Р лигандов - доклинических (Ro-65-7674) и клинических (SB-271046 и SB-742457) лекарственных кандидатов — эффективных антагонистов 5-HT(,R.

Для этого типа 5-НТ6Р лигандов была предложена гипотетическая [Holenz et al., 2005], а затем и трёхмерная фармакофорная [Lopez-Rodriguez et al., 2005] модели. Они долгое время рассматривались медицинскими химиками, как классические, и использовались при конструировании новых 5-НТ6Р лигандов. В соответствии с этими моделями, молекула 5-НТ6Р лиганда должна включать два гидрофобных фрагмента HYDi и HYD2 (обычно ароматические или гетероциклические) соединенных линкером, представляющим собой акцептор водородных связей НВА (обычно сульфонильная или сульфамидная группа) и основный атом азота PI, способный протонироваться при физиологических рН. Эту фармакофорную модель можно представить в виде схемы, изображённой на рис. 2 [Holenz J. et. al., 2005].

нва

ФМ1

Рис. 2. Фармакофорная модель 5-НТбЯ лигандов (ФМ1), представлена упрощенно, без

До настоящего времени работы по систематическому исследованию связи 5-НТ6 антагонистической активности и структуры сульфонилсодержащих гетероциклов отсуствовали. В связи с этим на основе коллекции ИИХР (более 1 200 ООО веществ) мы разработали фокусированную библиотеку (ФБ) сульфонил содержащих гетероциклов, включающую 2827 соединений, с коэффициентом разнообразия 0,909, который был рассчитан с использованием программы СЬешоБой. ФБ включала 168 уникальных гетероциклических систем и состояла из 80 комбинаторных библиотек (КБ). КБ были подобраны таким образом, чтобы обеспечить максимальное структурное разнообразие, причем, лишь часть КБ полностью соответствовала ФМ1. Кроме того, варьировались виды гидрофобных групп НУО, наличие (отсутствие) и природа ионизируемых основных групп Р1, а также расстояния между указанными элементами. Часть гетероциклов содержала дополнительные акцепторы (НВА) и/или доноры водородной связи (НВБ).

Для оптимизации ряда первичных хитов, найденных в результате скрининга ФБ, были синтезированы 4 оптимизационных КБ с использованием жидкофазного паралельного синтеза.

Оптимизационных КБ (ОКБ1), состоящая из 25 (4-арилсульфонилоксазол-5-ил)-аминов, была получена с использованием известных реакций исходя из амидов ароматических кислот и трихлорацетальдегида. В качестве исходных реагентов - билдинг блоков (ББ) использовались А/-[2,2-дихлор-1-(арилсульфонил)-винил]-ациламиды (ББ1) и первичными или вторичными амины (ББ2)

= Н, алкил, На1; Яг = Н, апкил; Яз = Н, алкил; = пирролидин-1-ил, 4-метилпиперазин-

1-ил; 1^4 = алкил, арил, 2-фурил, 2-тиенил.

учета расстояний, векторов и трёхмерного расположения.

2. Синтез оптимизационных КБ.

ОКБ2, состоящая из 466 3-фенилсульфонил-тиено[2,3-е][1,2,3]триазоло[1,5-а]пиримидинов, и ОКБЗ, состоящая из 776 3-фенилсульфонил-[1,2,3]триазоло[1,5-а]хиназолинов, были получены жидкофазным параллельным синтезом с использованием в качестве основных строительных блоков 9 3-фенилсульфонил-5-хлор-тиено[2,3-е] [ 1,2,3 ]триазоло[ 1,5-а]пиримидинов (ББЗ), 14 3-фенилсульфонил-5-хлор[1,2,3]триазоло[1,5-а]хиназолинов (ББ4) и 90 аминов (90 ББ2 для ОКБ2 и 60 ББ2 для ОКБЗ) по приведенной ниже схеме:

он

ББЗ, ББ4 ОКБ2, ОКБЗ

ОКБ2: V/ = О ОКБЗ: = О

ОКБ2, ОКБЗ: И.' = Н, 4-Ме, 4-Е1, 4-/-Рг, 3-С1, 4-С1, 4-Вг, 2,5-ди-Ме, 3,4-ди-Ме. Я2 и Я3 = одинаковые или разные водород, апкил, замещенный алкил, циклоалкил, арил, гетероциклил.

= необязательно замещенные пиррол-1-ил, пиперидин-1-ил, морфолин-4-ил, пиперазин-1-ил

ОКБ4, состоящая из 13 3-фенилсульфонил-5,7-диметил-пиразоло[1,5-а]пиримидинов, была получена циклоконденсацией (4-фенилсульфонилпиразол-3-ил)-аминов ББ5 с ацетилацетоном, и последующим превращением спирта ББ6 в диметиламин ОКБ4(12) и деблокированием Бок-пиперазинового производного ББ7 в 2-пиперазин-1-ил-3-фенилсульфонил-5,7-диметил-пиразоло[1,5-а]пиримидин ОКБ4(13).

ОКБ4 ББ6 ОКЫп)

ББ5, ОКБ4: Я=Н, Ме, Ме8, Е18, Н0СН2СН20, Ме2КСН2СН20, МеЫН, Ме2Ы, МезЫСНгСЩМН, Ме2КСН2СН2НМе, МсзК'СНгСНгСИгНИ, пиперазин-1-ил, 1-Бок-пиперазин-4-ил.

3. Скрининг 5-НТв антагонистической активности фокусированной

библиотеки.

3.1. Выбор метода анализа взаимодействия соединений с 5-НТ6Р.

5-НТ6Р относится к семейству рецепторов, связанных с G белками (GPCR). Посредством G белка Gs 5-НТб рецептор положительно связан с аденилатциклазой, ферментом катализирующим синтез циклического аденозин монофосфата (цАМФ) из АТФ. Для определения взаимодействия соединений с 5-НТ6Р был выбран функциональный метод - определение активности рецептора по количеству образовавшегося цАМФ.

Количество образовавшегося цАМФ определяли с помощью технологии LANCE (Perkin Elmer), которая основана на резонансном переносе энергии (TR-FRET). Это конкурентный метод, поэтому при увеличении содержания цАМФ в образце, флуоресцентный сигнал уменьшается. Основным преимуществом данного метода является отсутствие стадий отмывки от избытка несвязавшихся реагентов, что очень важно при большом количестве тестируемых образцов. Метод обладает высокой чувствительностью, что позволяет определять наномолярные концентрации цАМФ в образцах.

Тестирование антагонистической активности соединений проводили в системе T-REx™ (Invitrogen, США). В этой системе в клетках млекопитающих используются регуляторные элементы тетрациклинового оперона Е. coli, при добавлении тетрациклина индуцируется экспрессия встроенного гена. Эксперименты проводили на клетках линии НЕК-293 (Human Embryonic Kidney), в которые был встроен ген 5-НТ6 рецептора человека (Etogen Scientific, США). Перед проведением тестирования были оптимизированы условия эксперимента и количество клеток в пробе. Для скрининга соединений была выбрана концентрация серотонина 10 наномоль (~90% от максимальной стимуляции). В качестве стандартов (соединений сравнения) использовали описанную в литературе высокоактивную молекулу SB-742457 (рис. 1).

3.2. Скрининг 5-НТ6Р антагонистической активности ФБ.

Скрининг 5-НТ6Р антагонистической активности ФБ проводили при концентрации испытуемых соединений 10 микромоль в двух повторах. Соединения смешивались с серотонином и полученная смесь добавлялась к клеткам 5-HT6/T-REx. Эксперименты проводили в 384-луночных планшетах.

Каждый планшет содержал 320 тестируемых соединений и следующие контроли:

1. клетки без серотонина и без веществ (при расчётах - 100% ингибирования);

2. клетки без веществ + 10 пМ серотонина (при расчётах - 0% ингибирования);

3. клетки с серотонином в диапазоне концентраций от 0,1 пМ до 100 пМ (для контроля чувствительности клеток к серотонину);

4. стандарт цАМФ в диапазоне концентраций от 1 пМ до 1000 пМ (без клеток).

Скрининг ФБ проводили с помощью лабораторных автоматических рабочих станций Biomek2000 и BiomekFX.

Анализ результатов первичного скрининга ФБ привел к обнаружению «первичных хитов» («primary hits» — соединения, показавшие изменение TR-FRET сигнала на > 50% от положительного контроля; в общем случае, хит — соединение с подтвержденной целевой активностью). В некоторых случаях были зарегистрированы TR-FRET сигналы, превышающие сигнал от клеток без серотонина, что свидетельствует о возможном неспецифическом взаимодействии этих соединений с системой тестирования, не связанном с их влиянием на 5-НТ6Р. Все первичные хиты тестировались на ложный положительный сигнал, для возникновения которого рассматривались две возможные причины: 1) автофлуоресценция соединений; и 2) непосредственное ингибирование аденилатциклазы, приводящее к уменьшению содержания сАМР.

Для проверки автофлуоресценции, флуоресцентный сигнал соединений был измерен в режиме TR-FRET при концентрации, использованной для скрининга (10 мкМ), в реакционном буфере, но без клеток. Наличие существенной автофлуоресценции показали 35 соединений, эти соединения были исключены из дальнейших исследований.

Для проверки соединений на ингибирование аденилатциклазы эксперимент проводили на неиндуцированных тетрациклином клетках (без экспрессии 5-НТ6 рецептора). Для стимуляции клеток вместо серотонина использовали активатор аденилатциклазы форсколин. В этом тесте только одно соединение показало ингибирование флуоресцентного сигнала более чем на 50%, это соединение также было исключено из дальнейших исследований.

Для остальных первичных хитов была подтверждена их 5-HT6R активность и получены кривые ингибирования (концентрация соединения в логарифмических координатах - % ингибирования накопления цАМФ), по которым были определены значения IC50 (концентрация полумаксимального ингибирования) при концентрации серотонина 10 наноМоль. Затем по уравнению Ченга-Прусоффа для конкурентного ингибирования рассчитали константы ингибирования K¡:

Ki = IC50(cpd) / (1 + [Ser] / EC50 (Ser)) где K¡ - константа ингибирования, IC50 - концентрация полумаксимального ингибирования для испытуемого соединения (cpd), [Ser]— концентрация серотонина в эксперименте (10 наноМоль), EC5o(ser) - концентрация серотонина, при которой его активность равна 50% от максимальной.

3.3. Результаты скрининга 5-НТ6Р антагонистической активности ФБ.

Первая часть ФБ включала 9 КБ — всего 155 соединений с общей формулой I, содержащих сульфонильные заместители, находящиеся на различных расстояниях от гетероциклического остова.

I: п = 0, 1, 2; m = 0, 1, 2; X = СН2, S; R| = алкил, замещенный апкил, бензил, замещенный бензил, циклоалкил, арил, гетарил; Het = арил, гетарил.

По результатам скрининга для соединений общей формулы I, ингибирование функционального ответа клеток не превышало 50%, и лишь соединения IIa и 116 проявили незначительную 5-НТ6Р антагонистическую активность, с 1С50 = 16,7 цМ и 18,1 jiM, соответственно.

"-Оч, оСО^-С^'

О

На Мб

Вторую часть ФБ составили 18 КБ, включающих 1084 гетероциклических соединения, содержащие эндоциклическую сульфонильную группу III, в том числе, соединения, включающие гидрированные тиофен-1,1-диоксидные (IV-

VI), 2#-[1,4]тиазин-1,1-диоксидные (VII) либо [1,4]тиазепин-1,1-диоксидные (VIII, IX) циклы.

III IV V VI VII VIII IX

Установлено, что в ряду соединений Ш-1Х также практически отсутствуют активные 5-НТ6Р антагонисты. Исключение составили лишь 4-бензилсульфонил-1-( 1,1 -диоксотетрагидротиофен-3-ил)-1,5,6,7-тетрагидроциклопентапиримидин-2-оны 1Уа-ж, ингибирующие 5-НТ6 рецепторы на 79-100%.

к, 1 Уа: Я, = Н, |С,П = 24,3 цМ. Я, - 2-р, |С„ = 7,3 цМ.

1Уб: Я, = 2-Ме, |С!0- 13,1 цМ. 1Уе: И, = 2-С1,1С!0= 3,7 цМ. 1Уа: Я, -З-Ме, |СМ- 10,6 цМ. IV»: К, = 3-С1,1СМ= 12,2 цМ. 1Уг: Я, = 4-Ме, 1СИ - 18,9 цМ.

В ряду гетероциклов 1Уа-ж наибольшую 5-НТ6Р активность проявляют соединения 1Уд (1С50 = 7,30 цМ) и 1Уе (1С50 = 3,70 цМ), а наименьшую — соединение 1Уа, с 1С50 = 24,30 цМ. Среди метилзамещенных соединений ТУб-г обнаружена лишь незначительная 5-НТбР активность, практически не зависящая от положения метильной группы: 2-метил- (1Уб), 3-метил- (1Ув) и 4-метил-(1Уг) производные имеют значения 1С50 = 13,10 цМ, 10,60 цМ и 18,90 цМ, соответственно.

Третью часть ФБ составляют 33 КБ, содержащие 838 алкилсульфонилгетероциклических соединений общей формулы X:

о

о

X: И] = алкил, замещенный алкил, бензил, замещенный бензил; Не! = гетарил.

Эта часть ФБ, как и предыдущая, не содержала перспективных соединений. Слабую 5-НТ6Р антагонистическую активность проявили лишь А'-[3-(6-метилсульфонил-пиридазин-3-ил)-фенил]-арилсульфонамиды Х1а-и. В обсуждаемом ряду соединений Х1а-и наибольшую активность продемонстрировали 2,4,5-триметил-7У-[3-(6-метансульфонилпиридазин-3-ил)фенил] фенилсульфонамид (Х1д, 1С50 = 8,27 цМ) и 2-этокси-5-шо-пропил-Ы-[3-(6-метан-сульфонилпиридазин-3-ил)фенил] фенилсульфонамид Х1в (1С50 = 1,92 цМ).

XI з, и

В четвертой части ФБ состоящей из 7 КБ, включающих 162 арилсульфонилазола общей формулы XII, в том числе, КБ ХШ-ХУ, XVIII, XIX, эффективными оказались 36 соединений. Особенно перспективными явились КБ ХШ-ХУ: 33,3%, 37,1% и 28,9%, активных соединений соответственно.

xii xiii xiv xv

XIII: Ri = Н, апкил, бензил, замещенный бензил; R2 = алкил; R3 = Н, Hal, Me, MeO. XIV: R| = H, алкил, Hal; R2 = алкил; R3 = 2-фурил, 2-тиенил. XV: R, = Н, алкил, Hal; R2 = Н, алкил; R3 = Н, алкил; R2R3N = азагетероциклил; R4 = алкил, арил, 2-фурил, 2-тиенил.

Скрининг КБ XIII, включающей 15 соединений, выявил, что максимальную 5-НТ6Р активность в КБ XIII (1С50 = 1,21 цМ) продемонстрировал 5-метилсульфанил-4-(«-толуол-сульфонил)-2-этил-2Я-пиразол-3-иламин XHIa, а минимальную — 2-(4-метилбензил)-5-метилсульфанил-4-(и-толуол-4-сульфонил)-2Я-пиразол-3-иламин ХШб (1С50 = 15,2 цМ).

В КБ XIV, состоящей из 35 5-алкилсульфанил-2-фуран-2-ил- и 5-метилсульфанил-4-тиофен-2-ил-4-арилсульфонилоксазолов, обнаружено 13 5-НТб антагонистов, причем, наиболее активным оказался 5-метилсульфанил-4-фенилсульфонил-2-фуран-2-ил-оксазол XIVa (1С50 = 1,81 цМ). Нами отмечено, что увеличение размеров алкильной группы в 5-алкилсульфанильном заместителе либо его разветвление приводят к сильному снижению активности. Так, в ряду 5-алкилсульфанил-4-(4-бромфенилсульфонил)-2-фуран-2-илоксазолов XIV(6-r), переход от 5-метил- XIV6 к 5-этил- XIVb и к 5-пропилсульфанил-4-фенилсульфонил-2-фуран-2-ил-оксазолу XIVb

сопровождался снижением активности — с IC50 = 7,67 (iM, до IC50 = 12,17 цМ и до 32,42 цМ, соответственно.

Переход от фенилсульфонильного производного XlVa (R1=H, IC50 = 1,81 цМ) к 4-фторфенил (Х1Уд, R'=4-F), 4-хлорфенил (Х1Уж, R'=4-C1) и 4-бромфенил производному (XIV3, Rl=4-Br) сопровождается понижением

активности последних — до 1С50 = 7,17 цМ, 7,46 цМ и 7,67 цМ, соответственно. Снижение активности примерно в 2 - 3,5 раза наблюдается также при переходе от этих же 2-фуран-2-ил-замещенных антагонистов Х1У(а,д,ж): Я3=2-фурил) к соответствующим 2-тиофен-2-ил-производным (Х1Уи-л), для которых 1С50 = 4,27 цМ, 7,80 цМ и 25,25 цМ, соответственно.

Высокий процент 5-НТ6Р активных соединений (11 из 38 соединений, т.е. 29%) был обнаружен также в КБ (4-арилсульфонилоксазол-5-ил)-аминов XV. Синтез ОКБ1 этого ряда соединений, представленный в разделе 2, позволил нам расширить спектр наномолярных лигандов (Табл. 1) и установить ряд зависимостей их активности от структуры.

Таблица 1. 5-НТ6Я антагонистическая активность ОКБ1 (4-арилсульфонилоксазол-5-ил)-аминов XV.

XV

XV И, Из 1*3 я. Кь пМ

а СН3 СН3 Н н 7,34

б СН3 СН3 СН3 н 3565,5

в фенил СН3СН2 Н н 0,92

г фенил СН3ОСН2СН2 Н н 33,24

д фенил СНЗСН2СН2СН2 Н н 47,12

е фенил (СНз)2СНСН2 н н 280,32

ж фенил СНзОСН2СН2СН2 н н 76,31

3 фенил (СН3)2ЫСН2СН2СН2 н н 1947,4

и фенил 4-метилбензил н н 165,1

к фенил СбН5СН2СН2 н н 60,03

л фенил пирролидин-1 -ил н 1099,2

м фенил 4-метилпиперазин-1 -ил н 428,6

н 2-фторфенил 3-имидазол-1 -илпропил н н 3126,1

О тиен-2-ил СН3 н н 0,44

п тиен-2-ил СН3 н 4-С1 2,18

Р тиен-2-ил С2Н5 н 4-С1 2,62

с тиен-2-ил МеОСН2СН2 H H 44,4

т тиен-2-ил циклопропил H H 57,4

У тиен-2-ил тетрагидрофуран-2-илметил H H 188,5

Ф тиен-2-ил пирролидин-1-ил H 794,9

X тиен-2-ил пирролидин-1-ил 4-C1 7286,6

Ц тиен-2-ил 4-метилпиперазин-1-ил 4-C1 1928,6

ч фуран-2-ил СН2=СНСН2 H H 1,35

ш фуран-2-ил тетрагидрофуран-2-илметил H H 234,8

Щ фуран-2-ил тетрагидрофуран-2-илметил H 4-C1 587,5

В частности установлено, что переход от вторичных аминов к третичным сопровождается радикальным снижением активности. Например, переход от метил-(2-метил-4-фенилсульфонилоксазол-5-ил)-амина XVa(&'j = 7,34 пМ), содержащего в своей структуре метиламиногруппу в вицинальном положении к сульфонильной группе, к диметил-(2-метил-4-фенилсульфонилоксазол-5-ил)-амину XV6 (К\ = 3565,5 пМ) сопровождается 486 кратным снижением активности. В этом ряду лигандов обнаружен субпикомолярный 5-НТ6 антагонист XVo с К\ = 0,44 пМ, который более чем в 4000 раз активнее своего аналога XV» (К-, = 1928,6 пМ).

Также установлено, что увеличение объема заместителя в лигандах, представляющих собой вторичные амины, сопровождается сильным снижением активности, например, метиламин XVo имеет К| = 0,44 пМ, 2-метоксиметиламин XVc - К; = 44,4 пМ, а тетрагидрофуран-2-илметиламин XVy - К, = 188,5 пМ. Заметное снижение активности (от К| = 0,44 пМ до К; = 4,3 пМ) наблюдается при переходе от метиламина XVo к метилмеркаптану XVI, а 5-метилсульфонил-4-фенилсульфонил-2-тиофен-2-илоксазол XVII вообще не обладает 5-НТ6Р активностью.

xvi xvii

Полученные нами результаты свидетельствуют о том, что введение в молекулу соединения метиламиногруппы, расположенной в вицинальном к сульфонильной группе положении, способствует сильному повышению его 5-НТ6Р антагонистической активности. По всей видимости, данный факт можно объяснить усилением лиганд-рецепторного взаимодействия, за счет электронного и стерического влияния метиламиногруппы, в том числе стабилизации лигандов внутримолекулярной водородной связью (ВВС).

Оптимизация трёхмерных структур арилсульфонилоксазолов методом молекулярной механики и конформационные расчеты дают основания предположить, что большое влияние на рассматриваемый вид фармакологического действия оказывают топологические особенности молекул. Так, молекулы вторичных аминов в газовой фазе принимают две близкие по энергии конформации, отличающиеся лишь характером ВВС между атомом водорода вторичной аминогруппы и одним из двух атомов кислорода сульфонильной группы, причем, расстояние между ними минимально (2,90 — 2,92 А) и намного меньше (3,23 - 3,64 А), чем таковое для третичных аминов, не образующих ВВС.

В КБ XVIII, содержащей 13 замещенных 5-арилсульфонил-ЗЯ-[1,2,3]триазол-4-иламинов, не было обнаружено перспективных соединений, а в КБ XIX (34 соединения), относительно высокую 5-НТ6 антагонистическую активность проявил лишь — [4-(4-хлорфенилсульфонил)-2-этилсульфонилтиазол-5-ил](тетрагидрофуран-2-ил-метил)амин, с 1С50 = 27,6 цМ.

XIX: Ri = Н, алкил, Hal; Ri = алкил, арил; R3, R4 = Н, апкил, замещенный алкил, NR3R4 = насыщенный азагетероцикл.

Общим структурным признаком пятой части ФБ, включающей 7 КБ XX-XXVI, является наличие в их молекулах экзоциклической (КБ XX, XXVI) либо эндоциклической (КБ XXI—XXV) карбонильной группы, расположенной в непосредственной близости от сульфонильной группы (КБ XXI, XXII, XXIV-XXVI) либо достаточно удаленной от нее (КБ XX, XXIII).

о

xviii

xix

XX-XXVI: * — место присоединения арилсульфонильного фрагмента. Аг — фенил, замещенный фенил. XX, XXI: Rb R2 = Н, алкил, арил. XXII: R[ = фенил, замещенный фенил. XXIII, XXV: R, = Н, алкил, арил. XXIV: R, = Н, алкил, Hal, MeO. XXVI: n = 1, 2; R, = Н, алкил, Hal, MeO; X = СН2, О, S.

В результате скрининга КБ XX-XXIII было обнаружено по одному активному соединению, в КБ XXIV — два, а в КБ XXV эффективные антагонисты отсутствовали. При этом данные соединения являются достаточно слабыми 5-НТ6 антагонистами (1С50 > 10 цМ), исключение составил лишь 3-(толуол-4-сульфонил)-1-я-толил-1#-циннолин-4-он XXIIa с 1С50 = 0,68 цМ.

ХХПа

Скрининг КБ XXVI, включающей 44 4-арилсульфонилхинолин-З-карбоксамида, обнаружил 12 перспективных соединений, активность которых изменяется в интервале значений 1С50 = 1,32-147,8 цМ. Наиболее активными оказались 4-(3,5-диметилфенилсульфонил)производные ХХУ1а-е (1С50 = 1,32 -6,49 |хМ), среди которых максимально активен [6-хлор-4-(3,5-диметилбензолсульфонил)-хинолин-3-ил]пирролидин-1 -ил-метанон ХХУ16, с 1С50 = 1,32 цМ.

XXVIa-e

XXVIa: n = 1, R, = Н, X = CH2, IC!0 = 2,45 цМ. XXVI6: n = 1, R, = CI, X = CH2, IC50 = 1,32 цМ. XXVIb: n = 2, R, = H, X = CH2, IC!0 = 1,62 цМ. XXVIr: n = 2, R, = CI, X = CH2, ICi0 = 2,74 цМ. ХХУГд: п = 2, R, = H, X = S, IC50 = 6,49 цМ. XXVIe: n = 2, R, = CI, X = O, IC50 = 3,79 цМ.

Шестая часть ФБ содержит 3 КБ, включающая в себя замещенные 6-арилсульфонилпиридазин-3-ил-амины (XXVII), 5-арилсульфонилпиримидин-З-ил-амины (XXVIII) и З-арилсульфонилхинолин-4-ил-амины (XXIX).

О

О \ А

ххун-ххк ххун ххуш xxix

XXVII: Аг = фенил, 4-хлорфенил, 3,4-диметилфенил, замещенный фенил, тиофен-2-ил; Я] = Н, Яг = циклопропил, 2-пирролидин-1-ил, фуран-2-илметил, бензо[1,3]диоксол-5-илметил; Я]+Я2 = пиперидин-1-ил, 1-бензо[1,3]диоксол-5-илметилпиперазин-4-ил. XXVIII: Аг = фенил, тиофен-2-ил; Я, = Н, РИ^Н, 4-СНзСбН4-МН, 4-[?С6Н4-ЫН; К2 = ИНг, морфолин-4-ил, пиррол идин-1-ил, пиперидин-1-ил, 5СН2С(0)ЫНВи, 8С112С(0)М 1СН2СН2С11(СН3)2, 5СН2С(0)ЫНСН2(фуран-2-ил). XXIX: Аг = фенил, 4-хлорфенил; Л, = Н; Я2 = 2,3-дигидро-бензо[1,4]диоксин-6-ил; Я|Я2Н = 2-метилпиперидин-1-ил, З-метилпиперидин-1-ил, пирролидин-1-ил, морфолин-4-ил, 4-метилпиперазин-1-ил; пиридил; Я3 = Н, МеО, ди-МеО, -0(СН2)2-

Скрининг КБ XXVII, содержащей 76 замещенных 6-арилсульфонилпиридазин-3-иламинов, выявил 7 умеренно активных соединений, активность которых зависит от природы заместителей 3-аминогруппы. Наибольшую активность проявил 3-(4-бензо[1,3]диоксол-5-илметилпиперазин-1 -ил)-6-(3,4-ди-метилфенилсульфонил)пиридазин ХХУПа с Ю50 = 1,42 цМ; Ю50 же остальных соединений изменялась в пределах 5,3-33,7 цМ.

Среди 28 5-арилсульфонилпиримидин-2,4-диаминов, составивших КБ XXVIII, обнаружено 12 5-НТ6 антагонистов, в том числе, 5-(тиофен-2-илсульфонил)пиримидин-2,4-диамины и 5-фенилсульфонилпиримидин-2,4,6-триамины. Выявлено, что 5-НТб антагонистическая активность 5-тиофен-2-илсульфонилпиримидинов XXVIII в значительной мере обусловлена природой заместителя Я2. Так, более высокая активность характерна для соединений XXVIII (Аг = тиофен-2-ил, Я) = Н), содержащих морфолин-4-ил, пиррол-1-ил и пиперидин-1-ил заместители в положении 2 пиримидинового цикла, причем, наибольшую активность продемонстрировал 2-пиперидин-1-ил-5-(тиенил-2-илсульфонил)пиримидин-4-ил-амин ХХУШа, с Ю50 = 0,95 рМ, а наименьшую — 2-[4-амино-5-(тиофен-2-илсульфонил)-пиримидин-2-илсульфанил]-Лг-(3-метилбутил)ацетамид ХХУШб (1С50 = 16,6 цМ).

В ряду соединений XXVIII 5-арилсульфонилпиримидины уступают по активности 5-(тиенил-2-ил-сульфонил)пиримидинам, причем, 5-НТв

антагонистические свойства наиболее ярко выражены у 5-фенилсульфонил-4-(4-фторфениламино)-пиримидин-2-ил-амина ХХУШв (1С50 = 2,01 цМ), а у 5-(4-хлорфенилсульфонил)-4-(3-метилфениламино)-пиримидин-2-ил-амина ХХУШг активность падает до 25,2 цМ.

Соединения КБ XXIX, состоящей из 55 замещенных 3-арилсульфонилхинолин-4-ил-аминов, проявили незначительную 5-НТ6 антагонистическую активность. Так, наиболее активным антагонистом является 6,7-диметокси-4-(4-метилпиперазин-1-ил)-3-фенилсульфонил-хинолин ХХ1Ха (1С50 = 1,70 цМ). Нами обнаружено, что природа заместителей в хинолин-4-ил-аминном фрагменте существенно влияет на их активность, что приводит к изменению последней более чем в 30 раз. Следует обратить внимание и на тот факт, что наиболее перспективный в этом ряду 5-НТ6 антагонист ХХ1Ха в 1500 раз уступает по 5-НТ6 антагонистической активности своему структурному аналогу 8В-742457, и в ~170 раз - соединениям ХХХ(а,б).

Скрининг ОКБ2 3-фенилсульфонил-тиено[2,3-е][1,2,3]триазоло[1,5-а]пиримидинов XXXI (активность была предсказана с помощью виртуального скрининга [Kim H.J. et. al., 2008]) и ОКБЗ 3-фенилсульфонил-[1,2,3]триазоло[1,5-а]хиназолинов XXXII, синтезированных как описано в разделе 2, позволил выявить ряд наномолярных 5-НТ6 антагонистов XXXI(a-r) и ХХХН(а,б), перспективных для дальнейших исследований.

н

XXIXa: ICM=1700nM SB-742457: IC„-l,lnM ХХХа: 1С„-10пМ ХХХб: 1Ся1-10,5пМ

XXXIr: К -U пМ

хххна: к :.') пм

В результате скрининга ФБ также было обнаружено высокоактивное соединение, представляющее собой 2-метилсульфанил-3-фенилсульфонил-5,7-диметил-пиразоло[1,5-а]пиримидин ХХХШа с К; = 1,2 пМ, которое было единственным представителем 3-арилсульфонил-пиразоло[1,5-а]пиримидинов. Синтез ОКБ4 3-фенилсульфонил-5,7-диметил-пиразоло[ 1,5-а]пиримидинов ХХХШ(а-и) по схемам представленным в разделе 2, позволил получить более активный метил-(3-фенилсульфонил-5,7-диметил-пиразоло[1,5-а]пиримидин-2-ил)амин ХХХШе с К| = 0,26 пМ и установить некоторые закономерности взаимосвязи структуры этого ряда лигандов XXXIII с их активностью (Табл. 2).

Таблица 2. 5-НТ6Р антагонистическая активность 3-фенилсульфонил-5,7-диметил-пиразоло[1,5-а] пиримидинов XXXIII.

xxxiii

XXXIII R functional Ki binding

nM

а MeS 1,2 2

б MeS(O) 2960

в EtS 1,91 17

г Н 561 237

д Me 88,8 68,4

е MeNH 0,26 0,2

ж носн2сн2о 283 222,2

3 Me2NCH2CH20 2200

и Me2NCH2CH2NMe 489

к Me2NCH2CH2CH2NH 764

л Me2NCH2CH2NH 2600

м Me2N 14,5

н Piperazil-l-yl 1380

Как видно из таблицы 2, в зависимости от природы заместителя в положении 2 пиразоло[1,5-а]пиримидинового фрагмента активность лигандов XXXIII изменяется более чем в 10000 раз: от К| = 0,26 nM (XXXIIIe) до К; = 2960 nM (XXXIII6). Как и в случае с (4-арилсульфонилоксазол-5-ил)-аминами XV, максимальной активностью обладает метиламин XXXIIIe, стабилизированный ВВС. Введение более объемных заместителей (лиганды ХХХШ(и,к,л)) вместо метила (лиганд XXXIIIe), как и переход к третичным аминам (лиганды ХХХШм, ХХХШн) приводит к сильному или радикальному снижению их 5-НТ6Р активности.

Проведенные исследования позволили нам предложить новые эффективные фармакофорные модели ФМ2 и ФМЗ высокоактивных 5-НТ6Р антагонистов (Рис. 3). Основное отличие этих моделей от классической модели ФМ1(Рис. 2) заключается в том, что они не содержат основную группу (PI) с атомом азота, способным протонироваться при физиологических значениях рН. По литературным данным эта группа обеспечивает взаимодействие с активным центром 5-НТ6Р (Asp 106 третьего трансмембранного домена) за счет положительно ионизированного атома азота. С другой стороны новые модели содержат электронодонорный заместитель ED, например, метилмеркаптогруппу (ФМ2) или донор водородной связи (HBD), предпочтительно метиламиногруппу (ФМЗ), расположенную в вицинальном положении к НВА.

ФМ2 ФМЗ

Рис. 3. Новые гипотетические фармакофорные модели 5-НТ6Р лигандов (показана упрощенно, без учета расстояний, векторов и пространственного расположения). HYD -гидрофобные фрагменты (ароматические или гетероциклические фрагменты), НВА - акцептор водородных связей (предпочтительно сульфонильная группа), ED - электронодонорный заместитель (предпочтительно метилмеркапто или метоксигруппа), HBD - донор водородной связи (предпочтительно метиламиногруппа, расположенная в вицинальном положении к НВА).

Селективность двух наиболее активных антагонистов 5,7-диметил-2-метилсульфанил-3-фенилсульфонил-пиразоло[ 1,5-а]пиримидина (AVN-211) XXXIIIa с Ki binding = 2,0 nM и (5,7-диметил-3-фенилсульфонил-пиразоло[1,5-а]пиримидин-2-ил)-метил-амина (AVN-216) XXXIIIe с Kj ьмпЕ= 0,2 пМ была протестирована в условиях конкурентного радиолигандного связывания на

панели, включающей 67 других рецепторов, ферментов и ионных каналов. Эти исследования показали соответственно более чем 50000 и 5000 кратную селективность ко всем исследованным мишеням, за исключением только 5НТ2цК. Однако в функциональном клеточном тесте эти соединения показали слабую 5НТ2вЯ антагонистическую активность с 1С50 > 10 цМ.

Далее были проведены доклинические исследования соединений А ¥N-211 и АУ1ч[-216. По их результатам А ¥N-211 было выбрано для дальнейших клинических исследований. Это соединение успешно прошло фазы I и II клинических испытаний и в настоящее время проходит фазу III клинических испытаний в качестве препарата для лечения шизофрении.

Выводы.

1. Разработан дизайн и создана новая ФБ гетероциклических соединений, содержащих сульфонильную группировку и не соответствующих классической фармакофорной модели 5-НТбР антагонистов.

2. Разработана методика скрининга больших библиотек соединений на 5-НТ6Р антагонистическую активность и изучена взаимосвязь 5-НТ(Д антагонистическая активность - структура гетероциклических соединений, содержащих сульфонильную группировку и не соответствующих классической фармакофорной модели 5-НТ6Р антагонистов.

3. Показана бесперспективность поиска эффективных антагонистов 5-НТ6 рецепторов среди гетероциклических соединений, содержащих алкилсульфонильные заместители или эндоциклическую сульфонильную группу.

4. В результате скрининга фокусированной библиотеки обнаружена серия хемотипов, перспективных для дальнейшей оптимизации их структуры и получения высокоэффективных 5-НТ6Р антагонистов, в том числе: 3-фенилсульфонил-тиено[2,3-е][1,2,3]триазоло[1,5-а]пиримидины, 3-фенилсульфонил-[ 1,2,3 ]триазоло[ 1,5-а]хиназолины, 4-арилсулфонил-оксазол-5-ил)-метиламины, и 3-арилсулфонил-пиразоло[1,5-а]пиримидины.

5. На примере замещённых (4-фенилсульфонил-оксазол-5-ил)-метиламинов и 3-фенилсульфонил-5,7-диметил-пиразоло[1,5-а]пиримидинов показано, что введение в молекулы лигандов электронодонорных заместителей приводит к повышению их активности.

6. Обнаружено, что введение метиламиногруппы в вицинальное положение к сульфонильной группе молекулы 5-НТ6Р лигандов приводит к радикальному повышению их активности.

7. Показано, что замена N-метила в (4-арилсулфонил-оксазол-5-ил)-метиламинах и 3-арилсулфонил-пиразоло[1,5-а]пиримидин-2-ил)-метиламинах на более объемный заместитель, как и переход последних к соответствующим третичным аминам, приводит к радикальному снижению 5-НТ6Р активности.

8. Предложены новые гипотетические фармакофорные модели ФМ2 и ФМЗ высокоактивных 5-НТ6Р лигандов, которые в отличие от классической ФМ1 не содержат основного фрагмента (PI) с атомом азота, способного протонироваться при физиологических pH, но содержат дополнительно электронодонорный заместитель (ED), например, метилмеркапто или аминогруппу (ФМ2) или донор внутримолекулярной водородной связи (HBD), предпочтительно метиламиногруппу, расположенную в вицинальном положении к НВА (ФМЗ).

9. Обнаружены высокоактивные 5-НТ6Р антагонисты AVN-211 и AVN-216, показавшие в условиях конкурентного радиолигандного связывания на панели, включающей 67 рецепторов, ферментов и ионных каналов, хорошую селективность по отношению к 5-НТ6Р (соответственно, более чем 5000 и 50000 кратную).

10. Найден лекарственный кандидат AVN-211 для лечения шизофрении с антагонистическим 5-НТ6Р механизмом действия, который успешно прошёл фазы I и II клинических испытаний.

Публикации по теме диссертации:

1. Ivachtchenko A.V., Golovina E.S., Kadieva M.G., Koryakova A.G., Mitkin O.D., Tkachenko S.E., Kysil V.M., Okun I. 2-Substituted 5,7-dimethyl-3-phenylsulfonyl-pyrazolo[l,5-a]pyrimidines: new series of highly potent and specific serotonin 5-HT6 receptor antagonists. // Eur. J. Med. Chem. 2011,46(4), pp. 1189-97.

2. Ivachtchenko A.V., Golovina E.S., Kadieva M.G., Kysil V.M., Mitkin O.D., Tkachenko S.E., Okun I. Synthesis and SAR of 3-arylsulfonyl-pyrazolo[l,5-ajpyrimidines as potent serotonin 5-HT(6) receptor antagonists. // Bioorg Med Chem. 2011, 19(4), pp. 1482-91.

3. Иващенко A.B., Головина E.C., Кадиева M.Г., Митькин О.Д., Ткаченко С.Е., Окунь И.М. Антагонисты 5-НТ6 рецепторов. I. Скрининг выборки структурно-разнородных гетероциклических соединений, содержащих сульфонильный фрагмент. // Хим. Фарм. Ж. 2012, 46 (5), стр. 14-24.

4. Ivachtchenko A.V.,Golovina E.S., Kadieva M.G., Koryakova A.G., Kovalenko

S.M., Mitkin O.D., Okun I.M., Ravnyeyko I.M., Tkachenko S.E., Zaremba O.V. Synthesis and biological study of 3-(phenylsulfonyl)thieno[2,3-e][l,2,3]triazolo[l,5-ajpyrimidines as potent and selective serotonin 5-HT(6) receptor antagonists.// Bioorg. Med. Chem., 2010, 18(14), pp. 5282-90.

5. Ivachtchenko A.V.,Golovina E.S., Kadieva M.G., Koryakova A.G., Kovalenko S.M., Mitkin O.D., Okun I.M., Ravnyeyko I.M., Tkachenko S.E., Zaremba O.V. Solution phase parallel synthesis of substituted 3-phenylsulfonyl-[l,2,3]triazolo[l,5-a]quinazolines - selective serotonin 5-HT6 receptor antagonists. // J. Comb. Chem., 2010, 12(4), pp. 445-52.

6. Головина E.C., Иващенко A.B., Кадиева М.Г., Корякова А.Г., Кузнецова И. В., Митькин О.Д. Синтез и взаимосвязь структура - серотониновая 5-НТ6 активность замещённых 3-(арилсульфонил)пиразоло[1,5-а]пиримидинов. // Сборник тезисов III Международной конференции "Химия гетероциклических соединений", посвящённая 95-летию со дня рождения профессора Алексея Николаевича Коста. Москва, 2010, стр. 119.

7. Иващенко A.B., Кадиева М.Г., Головина Е.С., Корякова А.Г., Митькин О.Д. Синтез и активность антагонистов 5-НТ6 рецепторов, включающих 3-фенилсульфонил-[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиримидиновый фрагмент. // Сборник тезисов III Международной конференции "Химия гетероциклических соединений", посвящённая 95-летию со дня рождения профессора Алексея Николаевича Коста. Москва, 2010, стр. 92.

8. Иващенко A.B., Митькин О.Д., Головина Е.С., Кадиева М.Г., Корякова А.Г., Ткаченко С.Е., Окунь И.М. Скрининг антагонистической активности фокусированной библиотеки гетероциклических соединений, содержащих сульфонильный фрагмент, к серотониновым 5-НТ6 рецепторам. // Материалы VIII всероссийской конференции "Химия и медицина". Россия, Уфа, 2010, стр. 187-188.

9. Иващенко A.B., Кадиева М.Г., Головина Е.С., Корякова А.Г., Митькин О.Д. Синтез и биологическая активность 3-фенилсульфонил[1,2,3]триазоло[1,5-а]хиназолинов. // Материалы VIII всероссийской конференции "Химия и медицина". Россия, Уфа, 2010, стр. 189.

10. Иващенко A.B., Кадиева М.Г., Головина Е.С., Корякова А.Г., Кузнецова И.В., Митькин О.Д. Синтез и взаимосвязь структура-серотониновая 5-НТ6 активность 2,6-дизамещённых 5,7-диметил-З-фенил-сульфонилпиразоло[1,5-а]пиримидинов. // Материалы VIII всероссийской конференции "Химия и медицина". Россия, Уфа, 2010, стр. 215.

И. Иващенко A.B., Кадиева М.Г., Головина Е.С., Корякова А.Г., Кузнецова И.В., Митькин О.Д. 3-Арилсульфонил)пиразоло[1,5-а]пиримидины как антагонисты серотониновых 5-НТ6 рецепторов. // Материалы VIII всероссийской конференции "Химия и медицина". Россия, Уфа, 2010, стр. 216217.

12. Иващенко A.B., Кузнецова И.В., Головина Е.С., Корякова А.Г., Митькин О.Д. Синтез и биологическая активность 3-фенилсульфонилтиено[2,3-е][1,2,3]триазоло[1,5-а]пиримидинов. // Материалы XIII Международной научно-технической конференции «Наукоемкие химические технологии-2010».

ГОУВПО Иван. гос. хим.-технол. ун-т, Иваново, 2010, стр. 211.

13. Иващенко A.B., Головина Е.С., Кисиль В.М., Корякова А.Г., Кузнецова И.В., Митькин О.Д. Синтез, серотониновая 5-НТ6 активность и селективность замещенных 5,7-диметил-3-фенилсульфонилпиразоло[1,5-а]пиримидинов. // Материалы XIII Международной научно-технической конференции «Наукоемкие химические технологии-2010». ГОУВПО Иван. гос. хим.-технол. ун-т, Иваново, 2010, стр. 218.

14. Иващенко A.B., Головина Е.С., Кадиева М.Г., Митькин О.Д. Изучение взаимосвязи структура-активность в ряду производных (4-фенилсульфонил-оксазол-5-ил)-амина. // Новые направления в химии гетероциклических соединений. Вторая Международная научная конференция. Россия, Железноводск, 2011, стр. 15.

Автор выражает благодарность сотрудникам химического и биологического отделов ИИХР к.х.н. Кадиевой М.Г., к.х.н. Митькину О.Д., к.х.11. Карапетяну Р.Н., к.х.н. Коряковой А.Г. к.х.н. Кудан Е.В. и к.б.н. Казею В.И., а также вице-президенту компании КемДив (США) д-ру Окуню И.М. за постоянное внимание и помощь в выполнении данной работы.

Подписано в печать 04.09.12 Усл.п.л. - 1,5 Заказ № 60 Тираж 100 экз. Типография ООО "Генезис" 119571, г. Москва, пр-т Вернадского, 86 www. copy centr. su 8 (495) 434-83-55

Список условных обозначений.

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Серотонин и серотониновые рецепторы.

1.2. Общие сведения о серотониновых рецепторах шестого типа.

1.3. Распределение 5-НТ6 рецепторов в центральной нервной системе.

1.4. Определение функций 5-НТ6 рецепторов in vivo.

1.5. Первые селективные лиганды 5-НТ6 рецепторов.

1.6. Фармакофорные модели и QSAR исследования антагонистов 5-НТ6 рецепторов.

1.7. Моделирование комплексов 5-НТ6 рецепторов с лигандами, содержащими ядро индола.

1.8. Обзор лигандов 5-НТ6 рецепторов.

Серотониновые рецепторы шестого типа (5-НТ6 рецепторы) открыты относительно недавно, в 1993 году. Установлено, что эти рецепторы влияют на холинергические, норадренергические, глутаматергические и допаминергические нейромедиаторные пути. Это позволяет рассматривать данный тип рецепторов как привлекательную мишень для разработки новых лекарственных средств для лечения различных заболеваний ЦНС, в частности шизофрении, болезни Альцгеймера и других нейродегенеративных заболеваний и когнитивных расстройств [1], [2], [3]. Еще одним привлекательным свойством антагонистов 5-НТ6Р является их способность подавлять аппетит, что может привести к созданию на их основе принципиально новых средств для снижения избыточного веса и ожирения

4].

5-НТ6 рецепторы локализованы почти исключительно в центральной нервной системе, причём наиболее высокая концентрация 5-НТ6 рецепторов наблюдается в областях, играющих существенную роль в когнитивных процессах [5]. Такая локализация 5-НТ6 рецепторов позволяет предположить, что лекарственные средства, селективно действующие на эти рецепторы, будут иметь мало побочных эффектов.

В настоящее время активно разрабатываются новые антагонисты 5-НТ6 рецепторов. В этих разработках участвуют как известнейшие фармацевтические компании, такие как Roche и GlaxoSmithKline, так и научные лаборатории в разных странах [6], [7]. Некоторые антагонисты 5-НТ6 рецепторов находятся на различных стадиях клинических испытаний, но зарегистрированных препаратов с 5-НТ6 антагонистическим действием пока нет.

Данная работа посвящена поиску новых антагонистов серотониновых рецепторов шестого типа. В ходе работы был проведено тестирование фокусированной библиотеки соединений, содержащих сульфонильную группу, найдены новые антагонисты 5-НТ6 рецепторов и разработаны новые фармакофорные модели антагонистов этих рецепторов.

1. Обзор литературы.

Выводы.

1. Разработан дизайн и создана новая фокусированная библиотека гетероциклических соединений, содержащих сульфонильную группировку и не соответствующих классической фармакофорной модели антагонистов 5-НТ6 рецепторов.

2. Разработана методика скрининга больших библиотек соединений на 5-НТ6Р антагонистическую активность и изучена взаимосвязь 5-НТ6К антагонистическая активность - структура гетероциклических соединений, содержащих сульфонильную группировку и не соответствующих классической фармакофорной модели 5-НТ6Р антагонистов.

3. Показана бесперспективность поиска эффективных антагонистов 5-НТ6 рецепторов среди гетероциклических соединений, содержащих алкилсульфонильные заместители или эндоциклическую сульфонильную группу.

4. В результате скрининга фокусированной библиотеки обнаружена серия хемотипов, перспективных для дальнейшей оптимизации их структуры и получения высокоэффективных 5-НТ6Р антагонистов, в том числе: 3-фенилсульфонил-тиено[2,3-е] [ 1,2,3]триазоло[ 1,5-а]пиримидины, 3-фенилсульфонил-[1,2,3]триазоло[1,5-а]хиназолины, 4-арилсулфонил-оксазол-5-ил)-метиламины и 3-арилсулфонил-пиразоло[1,5-а]пиримидины.

5. На примере замещённых (4-арилсулфонил-оксазол-5-ил)-метиламинов и 3-фенилсульфонил-5,7-диметил-пиразоло[1,5-а]пиримидинов показано, что введение в молекулы лигандов электронодонорных заместителей приводит к повышению их антагонистической активности.

6. Обнаружено, что введение метиламиногруппы в вицинальное положение к сульфонильной группе молекулы 5-НТ6Р лигандов приводит к радикальному повышению их 5-НТ6Р антагонистической активности.

7. Показано, что замена ]Ч-метила в (4-арилсулфонил-оксазол-5-ил)-метиламинах и 3-арилсулфонил-пиразоло[1,5-а]пиримидин-2-ил)-метиламинах на более объемный заместитель, как и переход последних к

88 соответствующим третичным аминам, приводит к радикальному снижению 5-НТ6Р активности.

8. Предложены новые гипотетические фармакофорные модели ФМ2 и ФМЗ высокоактивных 5-НТ6Р лигандов, которые в отличие от классической ФМ1 не содержат основного фрагмента (РІ) с атомом азота, способным протонироваться при физиологических значениях рН, но содержат дополнительно электронодонорный заместитель (ЕБ), например, метилмеркаптогруппу (ФМ2) или донор внутримолекулярной водородной связи (НЕЮ), предпочтительно метиламиногруппу, расположенную в вицинальном положении к НВА (ФМЗ).

9. Обнаружены высокоактивные 5-НТ6Р антагонисты АУ1Ч-211 и АУИ-216, показавшие в условиях конкурентного радиолигандного связывания на панели, включающей 67 рецепторов, ферментов и ионных каналов, хорошую селективность по отношению к 5-НТ6Р (соответственно, более чем 5000 и 50000 кратную).

10. Найден лекарственный кандидат АУ1Ч-211 для лечения шизофрении с антагонистическим 5-НТбР механизмом действия, который успешно прошёл фазы I и II клинических испытаний.

1. Geldenhuys W.J., Van der Schyf C.J. Serotonin 5-HT6 receptor antagonists for the treatment of Alzheimer's disease. // Curr Top Med Chem.-2008.-t.8, №12.-p.1035-1048.

2. Mitchell E.S., Neumaier J.F. 5-HT6 receptors: a novel target for cognitive enhancement. //Pharmacol Ther.-2005.-t. 108, №3.-p. 320-333.

3. Geldenhuys W.J., Van der Schyf C.J. The serotonin 5-HT6 receptor: a viable drug target for treating cognitive deficits in Alzheimer's disease. // Expert Rev Neurother.-2009.-t.9, №7.-p.l073-1085.

4. Branchek T.A., Blackburn T.P. 5-ht6 receptors as emerging targets for drug discovery. // Annu Rev Pharmacol Toxicol.-2000.-t.40.-p.319-334.

5. Ivachtchenko A.V., Ivanenkov Y.A., Tkachenko S.E. 5-hydroxytryptamine subtype 6 receptor modulators: a patent survey. // Expert Opin Ther Pat.-2010.-t.20,№9.-p.l 171-1196.

6. Ivachtchenko A.V., Ivanenkov Y.A. 5HT(6) receptor antagonists: a patent update. Part 1. Sulfonyl derivatives. // Expert Opin Ther Pat.-2012.-t.22, № 8.-p.917-964.

7. Filip M., Bader M. Overview on 5-HT receptors and their role in physiology and pathology of the central nervous system. // Pharmacol Rep.-2009.-t.61, №5.-p.761-777.

8. Barnes N.M., Sharp T. A rewiew of central 5-HT receptors and their function. //Neuropharmacology.-1999.-t.38, №8.-p.l083-l 152.

9. Hannon J., Hoyer D. Molecular biology of 5-HT receptors. // Behav. Brain.

10. Res.-2008.-t.195, №1.-p. 198-213.

11. Hoyer D., Harmon J.P., Martin G.R. Molecular, pharmacological and functional diversity of 5-HT receptors. // Pharmacol. Biochem. Behav.-2002.-t.71, №4.-p.533-554.

12. Johnson C.N., Ahmed M., Miller N.D. 5-HT6 receptor antagonists: prospects for the treatment of cognitive disorders including dementia. // Curr. Opin. Drug. Discov. Devel.-2008.-t.ll, №5.-p.642-654.

13. Monsma F.J., Shen Y., Ward R.P., Hamblin M.W., Sibley D.R. Cloning and expression of a novel serotonin receptor with high affinity for tricyclic psychotropic drugs. // Mol. Pharmacol.-1993.-t.43.-p.320-327.

14. Unsworth C.D., Molinoff P.B. Characterization of a 5-hydroxytryptamine receptor in mouse neuroblastoma N18TG2 cells. // J Pharmacol Exp Ther.-1994.-t.269, №1.-p.246-255.

15. Wooley M.L., Marsden C.A., Fone K.C. 5-ht6 receptors. // Curr. Drug. Targets CNS and Neurological Disorders.-2004.-t.3.-p. 59-79.

16. Setola V., Roth B.L. Why mice are neither miniature humans nor small rats: a cautionary tale involving 5-hydroxytryptamine-6 serotonin receptor species variants. // Mol Pharmacol.-2003.-t.64, №6.-p. 1277-1278.

17. Sebben M., Ansanay H., Bockaert J., Dumuis A. 5-HT6 receptors positively coupled to adenylyl cyclase in striatal neurones in culture. // Neuroreport.1994.-t.5, №18.-p. 2553-2557.

18. Max S.I., Monsma F.J. Jr., Sibley D.R. // Agonist-induced desensitization of 5-HT6 serotonin receptor-coupled adenylyl cyclase in stably transfected HEK-293 cells. // J Serotonin Res.-1995.-t.2.-p.l01-l 16.

19. Olsen MA, Nawoschik S.P., Schurman B.R., Schmitt H.L., Burno M., Smith D.L., Schechter L.E. Identification of a human 5-HT6 receptor variant produced by alternative splicing. // Brain Res Mol Brain Res.-1999.-t.64, №l.-p.255-263.

20. Boess F.G., Monsma F.J. Jr, Meyer V., Zwingelstein C., Sleight A.J. Interaction of tryptamine and ergoline compounds with threonine 196 in the ligand binding site of the 5-hydroxytryptamine6 receptor. // Mol Pharmacol.-1997.-t.52,№3.-p.515-523.

21. Boess F.G., Monsma F.J. Jr, Sleight A.J. Identification of residues in transmembrane regions III and VI that contribute to the ligand binding site of the serotonin 5-HT6 receptor. // J Neurochem.-1998.-t.71, №5.-p. 21692177.

22. Tsai S.J., Liu H.C., Liu T.Y., Wang Y.C., Hong C.J. Association analysis of the 5-HT6 receptor polymorphism C267T in Alzheimer's disease. // Neurosci Lett.-1999.-t.276.-p. 138-139.

23. Liu H.C., Hong C.J., Liu C.Y., Lin K.N., Tsai S.J., Liu T.Y., Chi C.W., Wang P.N. Association analysis of the 5-HT6 receptor polymorphism C267T with depression in patients with Alzheimer's disease. // Psychiatry Clin Neurosci.-2001.-t.55.-p. 427-429.

24. Yu Y.W., Tsai S.J., Lin C.H., Hsu C.P., Yang K.H., Hong C.J. Serotonin-6 receptor variant (C267T) and clinical response to clozapine. // Neuroreport. -1999.-t.10, №6.-p. 1231-1233.

25. Bourson A., Boess F.G., Bos M., Sleight A.J. Involvement of 5-HT6 receptors in nigro-striatal function in rodents. // Br J Pharmacol.-1998.-t.125, №7.-p. 1562-1566.

26. Ward R.P., Hamblin M.W., Lachowicz J.E., Hoffman B.J., Sibley D.R, Dorsa D.M. Localization of serotonin subtype 6 receptor messenger RNA in the rat brain by in situ hybridization histochemistry. // Neuroscience.-1995.-t.64, №4.-p. 1105-1111.

27. Stefulj J., Jernej B., Cicin-Sain L., Rinner I., Schauenstein K. mRNA expression of serotonin receptors in cells of the immune tissues of the rat. // Brain Behav Immun.-2000.-t.14, №3.-p. 219-224.

28. Pierce P.A., Xie G.X., Levine J.D., Peroutka S.J. 5-Hydroxytryptamine receptor subtype messenger RNAs in rat peripheral sensory and sympathetic ganglia: a polymerase chain reaction study. // Neuroscience.-1996.-t.70, №2.-p. 553-559.

29. Gérard C., Martres M.P., Lefévre K., Miquel M.C., Vergé D., Lanfumey L., Doucet E., Hamon M., el Mestikawy S. Immuno-localization of serotonin 5-HT6 receptor-like material in the rat central nervous system. // Brain Res.-1997.-t.746, №1-2.-p. 207-219.

30. East S.Z., Burnet P.W., Leslie R.A., Roberts J.C., Harrison P.J. 5-HT6 receptor binding sites in schizophrenia and following antipsychotic drug administration: autoradiographic studies with 125I]SB-258585. // Synapse.-2002.-t.45, №3.-p. 191-199.

31. Fink K.B., Gothert M. «5-HT receptor regulation of neurotransmitter release. // Pharmacol Rev.-2007.-t.59, №4.-p. 360-417.

32. Jorgensen H.S. Studies on the neuroendocrine role of serotonin. Dan Med Bu11.-2007.-t.54, №4.-p. 266-288.

33. Tecott L.H., Brennan T.J. Serotonin 5-HT6 receptor knockout mouse. // US patent 6060642.-2000.

34. Bourson A., Borroni E., Austin R.H., Monsma F.J. Jr, Sleight A.J. Determination of the role of the 5-ht6 receptor in the rat brain: a study using antisense oligonucleotides. // J Pharmacol Exp Ther.-1995.-t.274, №l.-p. 173-180.

35. Yoshioka M., Matsumoto M., Togashi H., Mori K., Saito H. Central distribution and function of 5-HT6 receptor subtype in the rat brain. // Life Sci.-1998.-t.62, №17-18.-p. 1473-1477.

36. Perez-Garcia G., Meneses A. Oral administration of the 5-HT6 receptor antagonists SB-357134 and SB-399885 improves memory formation in an autoshaping learning task. // Pharmacol Biochem Behav.-2005.-T.81, №3.-p. 673-682.

37. Woolley M.L., Bentley J.C., Sleight A.J., Marsden C.A., Fone K.C. A role for 5-ht6 receptors in retention of spatial learning in the Morris water maze. //Neuropharmacology.-2001.-T.41, №2.-p. 210-219.

38. Hatcher P.D., Brown V.J., Tait D.S., Bate S., Overend P., Hagan J.J., Jones D.N. 5-HT6 receptor antagonists improve performance in an attentional set shifting task in rats. // Psychopharmacology (Berl).-2005.-T.181, №2.-p. 253259.

39. Liu K.G., Robichaud A.J. 5-HT6 medicinal chemistry. // Int Rev Neurobiol.-2010.-T.94.-p. 1-34.

40. Sleight A.J., Boess F.G., Bos M., Levet-Trafit B., Riemer C., Bourson A. Characterization of Ro 04-6790 and Ro 63-0563: potent and selective antagonists at human and rat 5-HT6 receptors. // Br J Pharmacol.-1998.t.124, №3.-p. 556-562.

41. Bos M., Sleight A.J., Godel T., Martin J.R., Riemer C., Stadler H. 5-HT(6) receptor antagonists: lead optimisation and biological evaluation of N-aryl and N-heteroaryl 4-amino-benzene sulfonamides. // Eur J Med Chem.-2001.-t.36, №2.-p. 165-178.

42. Bentley J.C., Bourson A., Boess F.G., Fone K.C., Marsden C.A., Petit N. Sleight A.J. Investigation of stretching behaviour induced by the selective 5-HT6 receptor antagonist, Ro 04-6790, in rats. // Br J Pharmacol.-1999.-t. 126, №7.-p. 1537-1542.

43. Tsai Y., Dukat M., Slassi A., MacLean N., Demchyshyn L., Savage J.E., Roth B.L., Hufesein S., Lee M., Glennon R.A. N1-(Benzenesulfonyl)tryptamines as novel 5-HT6 antagonists. // Bioorg Med Chem Lett.-2000.-t.10, №20.-p. 2295-2299.

44. Glennon R.A. Higher-end serotonin receptors: 5-HT(5), 5-HT(6), and 5-HT(7). // J Med Chem.-2003.-t.46, №14.-p. 2795-2812.

45. Glennon R.A., Lee M., Rangisetty J.B., Dukat M., Roth B.L., Savage J.E., McBride A., Rauser L., Hufeisen S., Lee D.K. 2-Substituted tryptamines: agents with selectivity for 5-HT(6) serotonin receptors. // J Med Chem.-2000.-t.43, №5.-p. 1011-1018.

46. Gunner M.R, Mao J., Song Y., Kim J. Factors influencing the energetics of electron and proton transfers in proteins. What can be learned from calculations. // Biochim Biophys Acta.-2006.-t.1757, №8.-p. 942-968.

47. Bojarski A.J. Pharmacophore models for metabotropic 5-HT receptor ligands. // Curr Top Med Chem.-2006.-t.6, №18.-p. 2005-2026.

48. Holenz J., Mercé R., Díaz J.L., Guitart X., Codony X., Dordal A., Romero

49. Holenz J., Pauwels P.J., Díaz J.L., Mercé R., Codony X., Buschmann H. Medicinal chemistry strategies to 5-HT(6) receptor ligands as potential cognitive enhancers and antiobesity agents. // Drug Discov Today.-2006.-t.ll,№7-8.-p. 283-299.

50. Kolanos R., Siripurapu U., Pullagurla M., Riaz M., Setola V., Roth B.L., Dukat M., Glennon R.A. Binding of isotryptamines and indenes at h5-HT6 serotonin receptors. // Bioorg Med Chem Lett.-2005.-t.15, №8.-p. 19871991.

51. López-Rodríguez M.L., Benhamú B., de la Fuente T., Sanz A., Pardo L., Campillo M. A three-dimensional pharmacophore model for 5-hydroxytryptamine6 (5-HT6) receptor antagonists. // J Med Chem.-2005.-t.48, №13.-p. 4216-4219.

52. Doddareddy M.R., Cho Y.S., Koh H.Y., Pae A.N. CoMFA and CoMSIA 3D QSAR analysis on Nl-arylsulfonylindóle compounds as 5-HT6 antagonists. // Bioorg Med Chem.-2004.-t.12, №15.-p. 3977-3985.

53. Russell M.G., Baker R.J., Barden L., Beer M.S., Bristow L., Broughton

54. H.B., Knowles M., McAllister G., Patel S., Castro J.L. N-Arylsulfonylindole derivatives as serotonin 5-HT(6) receptor ligands. // J Med Chem.-2001.-t.44, №23.-p. 3881-389.

55. Doddareddy M.R., Lee Y.J., Cho Y.S., Choi K.I., Koh H.Y., Pae A.N. Hologram quantitative structure activity relationship studies on 5-HT6 antagonists. // Bioorg Med Chem.-2004.-t.12, №14.-p. 3815-3824.

56. Kim H.J., Doddareddy M.R., Choo H., Cho Y.S., No K.T., Park W.K., Pae A.N. New serotonin 5-HT(6) ligands from common feature pharmacophorehypotheses. // J Chem InfModel.-2008.-t.48, №l.-p. 197-206.

57. Pullagurla M.R., Westkaemper R.B., Glennon R.A. Possible differences in modes of agonist and antagonist binding at human 5-HT6 receptors. // Bioorg Med Chem Lett.-2004.-t.14, №17.-p. 4569-4573.

58. Boess F.G., Monsma F.J. Jr, Bourson A., Zwingelstein C., Sleight A.J. Residues in transmembrane regions III and VI contribute to the 5-ht6 receptor ligand binding site. // Ann N Y Acad Sci.-1998.-t.861.-p. 242-243.

59. Dukat M., Mosier P.D., Kolanos R., Roth B.L., Glennon R.A. Binding of serotonin and Nl-benzenesulfonyltryptamine-related analogs at human 5-HT6 serotonin receptors: receptor modeling studies. // J Med Chem.-2008.-t.51, №3.-p. 603-611.

60. Glennon R.A., Siripurapu U., Roth B.L., Kolanos R., Bondarev M.L., Sikazwe D., Lee M., Dukat M. The medicinal chemistry of 5-HT6 receptor ligands with a focus on arylsulfonyltryptamine analogs. // Curr Top Med Chem.-2010.-t.10, №5.-p. 579-595.

61. Pullagurla M., Siripurapu U., Kolanos R., Bondarev M.L., Dukat M., Setola V., Roth B.L., Glennon R.A. Binding of amine-substituted N1-benzenesulfonylindoles at human 5-HT6 serotonin receptors. // Bioorg Med Chem Lett.-2005.-t.15, №23.-p. 5298-5302.

62. HT(6) receptor agonist. // J Med Chem.-2007.-t.50, №23.-p. 5535-5538.

63. Svenningsson P, Tzavara E.T., Qi H., Carruthers R., Witkin J.M., Nomikos G.G., Greengard P. Biochemical and behavioral evidence for antidepressant-like effects of 5-HT6 receptor stimulation. // J Neurosci.-2007.-t.27, №15.-p. 4201-4209.

64. Carr G.V., Schechter L.E., Lucki I. Antidepressant and anxiolytic effects of selective 5-HT6 receptor agonists in rats. // Psychopharmacology (Berl). 2011.-t.213, №2-3.-p. 499-507.

65. Slassi A., Isaac M., O'Brien A. Recent progress in 5-HT6 receptor antagonists for the treatment of CNS diseases // Expert Opin. Ther. Pat.-2002.-t. 12, №4.-p. 513-527.

66. Zhou P, Yan Y, Bernotas R, Harrison B.L., Huryn D., Robichaud A.J., Zhang G.M., Smith D.L., Schechter L.E. 4-(2-Aminoethoxy)-N-(phenylsulfonyl)indoles as novel 5-HT6 receptor ligands. // Bioorg Med Chem Lett.-2005.-t.15, №5.-p. 1393-1396.

67. Liu K.G., Lo J.R., Comery T.A., Zhang G.M., Zhang J.Y., Kowal D.M.,

68. Smith D.L., Di L., Kerns E.H., Schechter L.E., Robichaud A.J. Identification of a series of benzoxazoles as potent 5-HT6 ligands. // Bioorg Med Chem Lett.-2009.-t.19, №4.-p. 1115-117.

69. Liu K.G., Lo J.R., Comery T.A., Zhang G.M., Zhang J.Y., Kowal D.M., Smith D.L., Di L., Kerns E.H., Schechter L.E., Robichaud A.J. 1-Sulfonylindazoles as potent and selective 5-HT6 ligands. // Bioorg Med Chem Lett.-2009.-t.19, №9.-p. 2413-2415.

70. Johnson C. N., Stemp G., Thompson M., Witty D. R 3-(Arylsulfonyl)quinolines as 5HT6 receptor antagonists for the treatment of CNS disorders, and their preparation, pharmaceutical compositions, and use. // WO Patent 2005030724.-2005.

71. Upton N., Chuang T.T., Hunter A.J., Virley D.J. 5-HT6 receptor antagonists as novel cognitive enhancing agents for Alzheimer's disease. // Neurotherapeutics.-2008.-t.5, №3.-p. 458-469.

72. Maher-Edwards G., Dixon R., Hunter J., Gold M., Hopton G., Jacobs G., Hunter J., Williams P. SB-742457 and donepezil in Alzheimer disease: a randomized, placebo-controlled study. // Int J Geriatr Psychiatry.-2011.-t.26, №5.-p. 536-544.

73. Gee A.D., Martarello L., Johnson C.N., Witty D.R. Preparation of isotopomeric piperazine-containing ligands labeling and diagnostic imaging of 5-HT6 receptors // WO Patent 2006053785.-2006.

74. Johansson G., Jenmalm-Jensen A., Beierlein K. Preparation of pyridino-fused heterocycles useful for the treatment of obesity, type II diabetes and CNS disorders. // WO Patent 2004000828.-2003.

75. Tenbrink R.E., Kortum S.W. Preparation of arylsulfones as 5-HT6 receptor modulators // WO Patent 2003072558.-2003.

76. Arnt J., Bang-Andersen B., Grayson B., Bymaster F.P., Cohen M.P., DeLapp N.W., Giethlen B., Kreilgaard M., McKinzie D.L., Neill J.C., Nelson D.L., Nielsen S.M., Poulsen M.N., Schaus J.M., Witten L.M. Lu AE58054, a 5

77. HT6 antagonist, reverses cognitive impairment induced by subchronic phencyclidine in a novel object recognition test in rats. // Int J Neuropsychopharmacol.-2010.-t.13, №8.-p. 1021-1033.

78. Cole D. C., Bernotas R.C. Preparation of arylsulfonyldihydrobenzimidazolones as serotonin 5-HT6 receptor ligands // US Patent 2005020575.-2005.

79. Seong C.M., Park W.K., Park C.M., Kong J.Y., Park N.S. Discovery of 3-aryl-3-methyl-lH-quinoline-2,4-diones as a new class of selective 5-HT6 receptor antagonists. // Bioorg Med Chem Lett.-2008.-t.18, №2.-p. 738-743.