Определение состава экстрактов "расторопши пятнистой" хроматографическими методами

Никитченко, Наталья Викторовна

Определение состава экстрактов "расторопши пятнистой" хроматографическими методами тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ

Никитченко, Наталья Викторовна АВТОР

кандидата химических наук УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ

Самара МЕСТО ЗАЩИТЫ

2012 ГОД ЗАЩИТЫ

02.00.02 КОД ВАК РФ

Диссертация по химии на тему «Определение состава экстрактов "расторопши пятнистой" хроматографическими методами»

Автореферат диссертации на тему "Определение состава экстрактов "расторопши пятнистой" хроматографическими методами"

На правах рукйпис^

0050552/^

НИКИТЧЕНКО НАТАЛЬЯ ВИКТОРОВНА

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОСТАВА ЭКСТРАКТОВ

«РАСТОРОПШИ ПЯТНИСТОЙ» ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ

02.00.02- аналитическая химия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

1 5 НОЯ 2012

Воронеж-2012

005055223

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Самарский государственный университет»

доктор технических наук, доцент Платонов Игорь Артемьевич

Шапошник Владимир Алексеевич,

доктор химических наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный университет», профессор кафедры аналитической химии

Дейнека Виктор Иванович,

доктор химических наук, профессор, ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», профессор кафедры общей химии

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный университет им. Н.Г. Чернышевского»

Защита состоится «23» ноября 2012 г. в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д. 212.038.19 при Воронежском государственном университете, расположенном по адресу: 394006, г. Воронеж, Университетская пл., 1, ауд. 439.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Воронежского государственного университета.

Автореферат разослан «19» октября 2012 г.

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор химических наук, профессор

Крысин М.Ю.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. В последнее время особое внимание учёных уделяется исследованию фенольных и полифенольных соединений растительного происхождения. Данные соединения обладают широким спектром биологической активности: антиоксидантной, противовирусной, капилляроукрепляющей, гепатопротекторной и др. Поэтому важной задачей является выбор метода и условий извлечения данных соединений из анализируемых объектов. Традиционные методы извлечения фенольных и полифенольных соединений из лекарственных растений, как правило, связаны с использованием токсичных органических растворителей, а также требуют больших затрат времени. Альтернативным подходом может служить использование экологически безопасных растворителей, таких как вода и диоксид углерода, находящихся в суб- и сверхкритических состояниях.

Индивидуальная и групповая идентификация компонентов сложных объектов, в том числе и объектов растительного происхождения, является актуальной задачей аналитической химии. Кроме того, руководствуясь совокупностью характеристических физико-химических признаков, полученных во время хроматографического анализа, можно проводить распознавание образа сложного объекта по так называемым хроматографическим «отпечаткам пальцев» (хроматографическим профилям, фингерпринтам). Особую актуальность данный подход находит при анализе лекарственных растений, поскольку в большинстве случаев их идентификация проводится визуальным способом, а содержание компонентов, определяющих их качество — полуколичественными методами.

Работа выполнена при поддержке Федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 гг.

(проект №02.740.11.0650).

Целью данной диссертационной работы являлась разработка экспрессных и эффективных способов и методик анализа «расторопши пятнистой» экстракционно-хроматографическими методами.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Разработать способ экспрессной идентификации лекарственного растения «расторопша пятнистая» и препаратов на его основе по совокупности интерполяционных величин удерживания при газохроматографическом (ГХ) анализе равновесной газовой фазы.

2. Изучить возможность применения сверхсшитых полистирольных сорбентов для концентрирования летучих органических соединений (ЛОС) из паровой фазы лекарственного растения «расторопша пятнистая» методом твердофазной микроэкстракции (ТФМЭ) с последующей термодесорбцией.

3. Применить хромато-распределительный метод, основанный на комплексной ГХ информации для определения молекулярной массы и температуры кипения неизвестных ЛОС лекарственного растения «расторопша пятнистая».

4. Экспериментально изучить возможность использования диоксида углерода, находящегося в неидеальном состоянии, для экстракции биологически активных веществ (БАВ) из «расторопши пятнистой» при различных температурах и давлениях.

5. Провести экспериментальные исследования по извлечению БАВ из «расторопши пятнистой» этанолом, субкритической водой и водно-этанольными

смесями в статических и динамических режимах при различных температурах и давлениях.

6. Разработать методику количественного определения БАВ из «расторопши пятнистой», включающую извлечение БАВ жидкостной экстракцией под давлением и последующий анализ экстракта методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Научная новизна.

Впервые предложен, разработан и экспериментально изучен способ экспрессной идентификации лекарственного растения «расторопша пятнистая» и препаратов на его основе по совокупности интерполяционных величин удерживания при ГХ анализе равновесной газовой фазы.

Для повышения информативности ГХ анализа лекарственного растения «расторопша пятнистая» впервые предложено концентрирование летучих компонентов из паровой фазы сырья на сверхсшитые полимерные сорбенты.

Предложена методика определения молекулярной массы и температуры кипения неизвестных летучих компонентов «расторопши пятнистой» хромато-распределительным методом.

Впервые для извлечения основных полифенольных соединений «расторопши пятнистой» предложено использование диоксида углерода, находящегося в неидеальном состоянии, а также жидкостной экстракции под давлением с использованием этанола, субкритической воды и водно-этанольных смесей.

Практическая значимость. Представленные в работе новые инструментальные и методические решения экспрессной идентификации и анализа лекарственного растения «расторопша пятнистая» внедрены в практику работы следующих предприятий Самарской области: ООО «ОЗОН» (г. Жигулёвск), ГУЗ «Центр контроля качества лекарственных средств Самарской области» (г. Самара), ООО «Пранафарм» (г. Самара), ООО «Центр-Аналитика» (г.Самара), ООО «СайКлан» (г.Самара), ФГБОУВПО «Самарский государственный технический университет» (г.Самара), ФГБОУВПО «Самарский государственный медицинский университет» (г. Самара).

На защиту выносятся следующие положения:

1. Способ экспресс-идентификации лекарственного растения «расторопша пятнистая» и препаратов на его основе, основанный на газовой экстракции летучих органических соединений с последующим газохроматографическим анализом.

2. Методика определения молекулярной массы и температуры кипения неизвестных летучих органических соединений «расторопши пятнистой» хромато-распределительным методом, основанным на равновесном распределении анализируемых компонентов в гетерофазных системах и определении интерполяционных характеристик удерживания при газохроматографическом анализе.

3. Способы динамического и статического извлечения биологически активных веществ из «расторопши пятнистой» экстрагентами органического и неорганического происхождения в суб- и сверхкритическом состояниях при различных температурах и давлениях.

4. Методика количественного определения биологически активных веществ в «расторопше пятнистой», включающая извлечение биологически активных веществ жидкостной экстракцией под давлением и последующий анализ экстракта методом ВЭЖХ.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 17 работ, из них 4 статьи в рецензируемых научных журналах, входящих в перечень ВАК, 3 патента.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы представлены и доложены на Всероссийском форуме «Аналитика и аналитики» (Воронеж, 2008); Международной конференции «Основные тенденции развития химии в начале XXI века» (Санкт-Петербург, 2009); Всероссийской конференции «Теория и практика хроматографии. Хроматография и нанотехнологии» (Самара, 2009); V Международной научно-практической конференции «Сверхкритические флюиды: фундаментальные основы, технологии, инновации» (Суздаль, 2009); Съезде аналитиков России «Аналитическая химия - новые методы и возможности» (Москва, 2010); IV Международной конференции «Экстракция органических соединений» (Воронеж, 2010); Всероссийской конференции «Аналитическая хроматография и капиллярный электрофорез» (Краснодар, 2010); XIX Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Волгоград, 2011); III Всероссийском симпозиуме «Разделение и концентрирование в аналитической химии и радиохимии» с международным участием (Краснодар, 2011), XIII Международной конференции «Физико-химические основы ионообменных и хроматографических процессов» (ИОНИТЫ -2011) (Воронеж, 2011).

Структура и объём работы. Диссертационная работа состоит из введения, четырех глав, выводов, списка цитируемой литературы, включающего 340 наименований. Материалы диссертации изложены на 138 страницах текста, включая 30 рисунков и 17 таблиц.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во Введении к работе дано обоснование актуальности темы исследования, сформулированы цели и задачи работы.

В первой главе «Обзор литературы» дан обзор и информация по современным методам экстрагирования, имеющих большую практическую значимость в области аналитической химии, в том числе в подготовке растительного материала к анализу. Отмечены условия проведения экстракции, представлены данные о применении экстракционных методов, отмечены их недостатки. Показано влияние различных факторов на процесс извлечения аналитов из различных матриц.

Во второй главе «Газохроматографический способ идентификации лекарственного растения «расторопша пятнистая» и препаратов на его основе»

представлены экспериментальные данные по идентификации «расторопши пятнистой» и препаратов на её основе.

На сегодняшний день в фармацевтической практике идентификацию лекарственного растения «расторопша пятнистая» проводят на основании качественного и количественного определения суммы флаволигнанов. В основе методики лежит измерение оптической плотности спиртового экстракта при длине волны 289 нм. Известны также методики по идентификации с использованием тонкослойной хроматографии, ВЭЖХ и газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектором (ГХ-МС). Как правило, эти методики требуют проведения длительной пробоподготовки и, в ряде случаев, дорогого аппаратурного оформления.

Нами, на примере ГХ исследования летучих соединений в «расторопше пятнистой» и препаратах на её основе, показана возможность идентификации как сырья, так и препаратов по хроматографическим профилям и совокупности индексов

удерживания летучих соединений с использованием капиллярной колонки с полидиметилсилоксановой неподвижной фазой при их регистрации пламенно-ионизационным детектором (ПИД). Так, для плодов «расторопши пятнистой» получен хроматографический профиль равновесной газовой фазы над сырьём с 27 компонентами. Индексы удерживания летучих компонентов «расторопши пятнистой» были рассчитаны при линейном программировании температуры колонки. По результатам оценки точности определения индексов удерживания установлено, что суммарная погрешность определения индексов удерживания, с учётом правильности и прецизионности, не превышает Д =± 2 ед. индекса.

Для идентификации препаратов на основе «расторопши пятнистой» нами выбраны только те характеристические пики, которые присутствуют на всех хроматограммах изучаемых объектов, но при этом отсутствуют на хроматограммах холостого опыта. Для этих пиков также определены индексы удерживания I] (таблица 1).

Таблица 1. Индексы удерживания I] характеристических пиков летучих компонентов равновесной паровой фазы растительного сырья и _препаратов на основе «расторопши пятнистой»_

I] ± Д, ед. индекса

лекарственное растительное сырьё БАД спиртовой экстракт лекарственные препараты

Плоды расторопши Лузга расторопши Порошок расторопши Экстракт расторопши жидкий Карсил Силимар

540±2 542±2 540±2 - 542±2 541 ±2

561±2 561±2 560±2 562±2 561±2 562±2

570±2 568±2 568±2 569±2 570±2 568±2

589±2 587±2 588±2 587±2 588±2 587±2

711±2 713±2 711±2 712±2 712±2 711±2

805±2 804±2 804±2 805±2 803±2 804±2

Из данных, представленных в таблице 1, видно, что характеристические пики со значениями индексов удерживания 540, 560, 568, 587,711 и 804 присутствуют в плодах, лузге, порошке расторопши, а также в лекарственных препаратах «Карсил» и «Силимар». Содержание характеристических летучих компонентов в паровой фазе спиртового экстракта («Экстракт расторопши жидкий») близко к их содержанию в аналогичной фазе растительного сырья, однако в спиртовом экстракте не удалось определить компонент с индексом удерживания 540 из-за влияния большого хроматографического пика этанола, что связано с особенностями технологии производства этого препарата.

Для подтверждения предложенного метода идентификации лекарственного сырья нами была создана проба-фальсификат, содержащая лекарственные растения «зверобой» и «расторопша пятнистая».

На рис.1 представлены фрагменты хроматографических профилей паровой фазы указанной выше пробы, а также профиль расторопши пятнистой.

ПИД, мВ 35

30'

25-

Рис. 1. Хроматографические профили летучих компонентов:

1 - расторопши,

2 - пробы-фальсификата (зверобой+ расторопша)

500 600 700 800 900 1000

ноо /Г

Как видно из рис.1 представленные хроматографические профили имеют схожий вид. Однако для каждого анализируемого объекта имеется своя совокупность относительных и интерполяционных характеристик удерживания.

Информативность анализа и достоверность подтверждения идентификации фармацевтического сырья и фармпрепаратов с применением предложенного подхода могут быть повышены за счёт увеличения числа регистрируемых летучих соединений на хроматограмме паровой фазы. Такого эффекта можно добиться за счёт проведения стадии концентрирования ЛОС из паровой фазы. Широко используемым приёмом проведения концентрирования в таких системах является так называемая «твердофазная микроэкстракция» (ТФМЭ) - извлечение летучих компонентов из паровой фазы на малом объёме сорбента с последующей термодесорбцией аналитов непосредственно в испарителе газового хроматографа. Для концентрирования летучих компонентов «расторопши пятнистой» ранее такой подход не применяли. Использовали сорбент на основе стирол-дивинилбензола Науе8ер «И» и сверхсшитыс полистирольные сорбенты МЫ-202 и МЫ-270.

В качестве устройств для концентрирования использовали капилляры из нержавеющей стали длиной 40 мм и внутренним диаметром 0.5 мм. Капилляры взвешивали до и после заполнения полимерными сорбентами. Фиксацию сорбента в капилляре осуществляли путём обжима капилляра. Измельчённое сырьё массой 1.3 г помещали в стеклянный флакон, устанавливали в стальной контейнер, герметично закрывали с использованием фторопластовой мембраны и термостатировали при Т=65°С в течение 30-40 минут. Концентрирование ЛОС на сорбент проводили путём пропускания через капилляр с сорбентом паровой фазы сырья объёмом 100 см3. Десорбцию ЛОС осуществляли при температуре 270°С.

Наибольшее число летучих соединений из паровой фазы над образцами «расторопши пятнистой» извлекается с использованием сорбента ММ-202. Вероятнее всего это связано с тем, что сорбент №N-202 является бипористым и макропоры обеспечивают более эффективный массопсренос аналитов на стадиях сорбции и десорбции.

На рис. 2 приведены фрагменты хроматографических профилей ЛОС лекарственного растительного сырья «расторопша пятнистая», полученные с использованием двух вариантов предложенной методики.

ПИД, к

60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0

ос

УН

4 5

Время, мин

Рис. 2. Хроматографические профили летучих

компонентов «расторопши пятнистой»:

1-е использованием анализа паровой фазы;

2-е использованием ТФМЭ на Науе8ер«Я»;

3 - ТФМЭ на МЫ-202

Первый вариант включал прямой анализ паровой фазы над растительным сырьём; второй - твердофазную микроэкстракцию летучих компонентов из паровой фазы на сорбентах МИ-202 и НауеБер с последующей термодесорбцией и ГХ определением.

Как видно из представленных хроматографических профилей использование концентрирования методом ТФМЭ, по сравнению с прямым анализом паровой фазы лекарственного растения, повышает . информативность, а, следовательно, и достоверность анализа образца.

Таким образом, на примере лекарственного растения «расторотиа пятнистая» и препаратов на его основе показана возможность их экспрессной идентификации, основанная на проведении газохроматографического анализа паровой фазы лекарственного растения и препаратов на его основе, регистрации пиков с последующим расчётом их индексов удерживания при линейном программировании температуры, а также предложено проведение концентрирования ЛОС из паровой фазы на полимерные сорбенты для повышения информативности и достоверности анализа сырья и фармпрепаратов.

Третья глава «Определение молекулярной массы и температуры кипения неизвестных летучих органических соединений лекарственного растительного сырья хромато-распределительным методом» посвящена методике определения молекулярной массы и температуры кипения летучих компонентов «расторопши пятнистой».

Использование высокоинформативных методов идентификации, таких как ГХ-МС, ГХ-ИК далеко не всегда возможно в практике работы аналитических лабораторий. Кроме того, информация, полученная с использованием данных методов, зачастую может содержать артефакты о свойствах компонентов анализируемых образцов и даже их структурах. В этой связи использование хромато-распределительного метода, основанного на равновесном распределении анализируемых соединений в гетерофазных системах на стадии пробоподготовки, обеспечивает возможность определения состава сложных смесей (групповую и индивидуальную идентификацию) с использованием относительных и интерполяционных характеристик удерживания.

Применение такой комплексной ГХ информации позволяет получить дополнительные характеристики для идентификации. Такими характеристиками могут быть индексы чувствительности детекторов к анализируемым веществам (.//Л7',^,"'зд), индексы молекулярной массы и температуры кипения а также рассчитанные на их

основе величины молекулярной массы Л/, и температуры кипения ТЬ1.

Объектами исследования являлись 19 органических соединений, принадлежащих к разным классам, смесь стандартных н-алканов (от гексана до эйкозана), а также паровая фаза растительного сырья (плодов «расторопнш пятнистой»). Для анализа равновесной паровой фазы растительное сырьё помещали в герметичный сосуд и выдерживали при температуре 60°С в течение 30-40 мин. Объём вводимой в хроматограф жидкой пробы 0.5 -1 мкл, объём пробы при анализе паровой фазы 2.0 см3. Ввод пробы осуществляли с делением потока (1:100). Использовали ступенчато-линейный режим программирования температуры: 60°С (6 мин), линейное программирование (5°С/мин) в интервале 60-220°С.

Для определения относительного коэффициента распределения Кс) компонентов модельной смеси и компонентов паровой фазы в закрытый сосуд помещали 1.0 см3 н- гексана и 1.0 см3 ацетонитрила, предварительно осушенного молекулярным ситом СаА. В полученную двухфазную систему вводили жидкую модельную смесь в количестве 50 мкл или паровую фазу в количестве 10 см3. Полученную смесь встряхивали в течение нескольких минут при комнатной температуре (20°С). После расслоения из каждого стоя отбирали 0.5 см3 раствора и помещали в отдельный сосуд. Для ГХ анализа отбирали пробы объёмом 1-2 мкл.

Коэффициент распределения определяли по уравнению:

где А1гс/Агс и А1ан/Ааи - относительные значения площадей/-х пиков на хроматограмме, 4-с и А, - площади пиков растворителей (гексана и ацетонитрила).

Использование относительных площадей пиков вместо абсолютных позволило повысить точность определения Кс/ за счёт уменьшения влияния объёма пробы при анализе гексанового и ацетонитрильного слоев.

С использованием полученных экспериментальных дшшых (1]', Кс1) рассчитывали

./'-фактор, характеризующий групповую принадлежность /-го компонента смеси по уравнению

(2)

где Ъ - коэффициент, пропорциональный разности свободных энергий сольватации метиленового фрагмента в двух фазах, причём для системы «гексан - ацетонитрил» ¿=10"3.

Индексы молекулярной массы и температуры кипения Зт рассчитывали по следующим уравнениям:

если величинау-фактора изменяется от 0.5 до +0.15;

./„ —1, (4)

и. 100 и

при величине>фактора выше 0.15;

1Т

Л =-2—0.7^ т" 100

1«

при значениях_/'-фактора от -0.5 до +0.75;

1Т

Л = —^+0.7 г" 100

•в:

Л/, : (5)

(6)

100-У..

Ч /

при величинеу'-фактора свыше 0.75.

Молекулярную массу и температуру кипения рассчитывали по уравнениям:

Л/,.=14,/д,+2 (7)

^Г^ =0.5836 ^^-0.0034 ^+2.1005 (8)

Оценку правильности определения М, и Т^ проводили с использованием

экспериментально определённых и справочных данных для компонентов модельной смеси:

' г-'00 (9)

зТь = -юо (Ю)

Экспериментальные исследования показали, что значения /] исследованных 19 органических соединений и значения у'-фактора (-0.41 (н-нонан) до +1.69 (деканол-1)) оказались сопоставимыми со справочными данными.

Значения правильности определения М, и Ти хромато-распределительным способом составили: 5М =4.2% и =3.6%, что свидетельствует о правомерности применения данной методики.

Методика экспериментальных исследований по определению молекулярной массы и температуры кипения неизвестных летучих органических соединений в «расторопше пятнистой» заключается в следующем:

- вначале составляется список возможных претендентов по совпадению экспериментальных индексов удерживания при программировании температуры /,г со справочными данными изотермических индексов Ковача, приведённых к среднему значению в условиях программирования температуры:

1х,расч =-— , (11)

где 1х ,,1х 2 - индексы Ковача сорбата, соответствующие температурам ТЯ ! и Т„ выхода н-алканов с числом атомов углерода в молекуле г и (г+1), между которыми из колонки элюируется /-ый сорбат.

В список возможных претендентов включаются вещества, имеющие значения 1*.Гасч, отличающиеся от /,Г, не более, чем на 10 ед. индекса.

На второй стадии идентификации для каждого претендента оцениваются правильность определения молекулярной массы (£„) и температуры кипения (5Т ), а

также суммарная погрешность \,+8п. По наименьшей величине общей

погрешности выбираются соответствующие претенденты.

Заключительной стадией идентификации является сопоставление /,г и для возможных претендентов и окончательный выбор того из них, для которого эта разность оказывается наименьшей.

Подтверждающей стадией идентификации является отнесение выбранного претендента по /-критерию к данному гомологическому ряду.

На .примере компонента с /,г =722 были рассчитаны Л/, =103.1, Г6,=104.3°С и

/=+1.11. В таблице 2 представлен список возможных претендентов со значениями 1х,ра„, близкими к экспериментальной величине =122. В этой же таблице приведены справочные данные по величинам М, и ТЬ1, на основании которых и с использованием экспериментальных значений М,=103.1 и ТЬ[ -104.3°С рассчитаны величины суммарной погрешности -8М+ 8Т>.

Таблица 2. Список претендентов для исследуемого компонента паровой фазы «расторопши пятнистой» с экспериментальными характеристиками: 1]=722, М, =103.1, 7;,=104.3°С,7=+1.П

№ Список претендентов Справочные данные

п/п 4,120 4.160 и

1 Диэтилацеталь 719 710 722 118.17 103.2 12.8 1.1 13.9

2 Тиазол 715 713 716 85.13 117.0 21.1 10.9 32.0

3 Метилбутират 716 709 718 102.13 102.0 0.9 2.3 3.2

4 Бутилформпат 722 720 723 102.13 106.6 0.9 2.2 3.1

5 Метилизобутилкетон 725 718 727 100.15 116.2 2.9 10.2 13.1

6 Диметилдисульфид 730 726 731 94.20 109.7 9.7 4.9 14.6

Из данных таблицы 2 по величине критерия выбраны два претендента: метилбутират (метилбутаноат) (1г=3.2%) и бутилформпат (бутилметаноат) (£¿=3.1%). По величинеу-критерия (/эга1=Н .11) оба претендента относятся к гомологическому ряду эфиров (/=1.02±0.12). Они имеют одинаковую молекулярную формулу С5Н10О2 и одинаковую молекулярную массу (102.13), так как являются структурными метамерами. Величины для них практически совпадают. В приведённом примере есть основания полагать, что исследуемый компонент с большей вероятностью принадлежит бутилформиату, так как для него А/ = !х.раСч — /,г = 723 - 722 = +1 ед. индекса, а для метилбутирата ДI = 718 - 722 ед. индекса.

Таким образом, предложенная методика позволяет с использованием коэффициента распределения аналитов в системе «гексан-ацетонитрил» и их индексов удерживания, определённых на капиллярной колонке с поладиметилсилоксановой неподвижной фазой при программировании температуры, рассчитать молекулярную массу и температуру кипения неизвестных компонентов и, тем самым, повысить информативность результатов газохроматографической идентификации.

В четвёртой главе «Жидкостная экстракция под давлением и сверхкритическая флюидная экстракция биологически активных веществ из лекарственного растения «расторопша пятнистая»» описаны экспериментальные способы динамического и статического извлечения БАВ из «расторопши пятнистой» экстрагентами органического и неорганического происхождения в суб- и сверхкритическом состояниях при различных температурах и давлениях.

Одним из требований аналитического контроля качества лекарственного растительного сырья является количественное определение БАВ. Наиболее часто для этих целей применяют хроматографические методы, что требует проведения соответствующей пробоподготовки. Основными БАВ в составе «расторопши пятнистой» являются флаволигнаны таксифолин, силикристин, силидианин и силибин. Основным методом определения этих соединений является обращённо-фазовая (ОФ) ВЭЖХ. Традиционно для извлечения аналитов из растительного сырья используют экстрагирование органическими растворителями при комнатной или повышенной температуре в статических условиях. Появившиеся в последнее время способы экстрагирования под давлением в динамических условиях, а также экстрагирование суб- и сверхкритическими экстрагентами представляют интересную альтернативу традиционным способам, что позволяет снизить трудоёмкость и затраты времени на проведете стадии пробоподготовки, а также уменьшить объём используемых токсичных органических растворителей.

Эксперименты ио изучению процесса извлечения БАВ из расторопши пятнистой для выявления оптимальных схем экстрагирования проводили с использованием сверхкритического С02, а также этанола, субкритической воды и водно-этанольных смесей при повышенных температурах и давлении в статическом и динамическом (проточном) режимах на установках, схемы которых представлены на рис. 3 и 4.

7Г

Рис. 3. Схема установки для экстракции сверхкритическим С02: 1 - источник углекислого газа; 2 - манометры; 3 - фильтры (цеолиты №Х, активированный уголь); 4 - насос высокого давления; 5 - экстрактор; б - термостат; 7 - регулятор давления; 8 - сосуды

Рис. 4. Схема установки для жидкостной экстракции под давлением: 1 - сосуд с экстрагентом; 2-насос высокого давления; 3 - капилляр предварительного нагрева экстрагента; 4 - экстрактор (колонка из нержавеющей стали 250 мм* 10 мм); 5 - термостат; 6 - охлаждаемый капилляр; 7 - манометр; 8 - регулятор давления

Экстрагирование БАВ из плодов расторопши пятнистой проводили при условиях, указанных в таблице 3.

Экстрагент Режим экстрагирования Диапазон температур, "С Диапазон давлений, МПа

Сверхкритический С02 Динамика 31,50 7.5-20

Вода Статика 100 0.1

Этанол ■ Статика 80- 100

Этанол Динамика 105-150 12.5

Субкритическая вода Статика 105

Субкритическая вода Динамика 105-250

Водазтанол (90:10) Динамика 105, 200

Вода:этанол (50:50) Динамика 105

Качественный и количественный анализ полученных экстрактов проводили в ОФ варианте ВЭЖХ в изократическом режиме со спектрофогометрическим детектированием при длине волны Х=289 нм. Разделение осуществляли на колонке фирмы РЬепошепех (США) (250мм*4.6 мм) с сорбентом С18 (с!р=5 мкм). В качестве подвижной фазы использовали смесь ацетонитрила с 0,01 М водным раствором фосфатного буфера (рН = 3) в объёмном соотношении 35:65.

На рис. 5 представлена диаграмма, показывающая концентрацию извлеченного силибина в зависимости от температуры и давления проведения экстракции С02, находящегося в неидеальном состоянии.

Как видно из рис. 5 максимальная концентрация достигается при темпершуре 50°С и давлении 20 МПа, при этом количество извлечённого силибина составило 0.0045 мг из 1 грамма сырья. В этих условиях проведения экстракции диоксид углерода имеет плотность 0.8 г/см3 и его свойства близки к свойствам жидкого

со2.

Минимальное значение концентрации извлекаемого компонента наблюдали при условии, когда углекислота имеет плотность 0.2 г/см3 (Т=50°С, 7.5 МПа) и находится в газообразном состоянии.

Экстракция БАВ из плодов «расторопши пятнистой» сверхкритическим С02 при изученных температурах и давлениях оказалась малоэффективной вследствие того, что малополярный сверхкритический С02 является плохим растворителем для извлекаемых полярных аналитов.

На рис. 6-8 представлены кривые экстрагирования силибина, наглядно демонстрирующие процесс динамической экстракции, а также позволяющие оценить время экстракции и объём затраченного экстрагента для максимального извлечения БАВ, что даёт возможность оптимизации процесса экстракции. Аналогичные зависимости были получены и для других изученных компонентов (таксифолина, силикристина и силидианина).

31°С 50°С

■ 7,5 МПа »10 МПа в 20 МПа

Рис. 5. Зависимость концентрации силибина от условий проведения экстракции С02

200« Е 1800

I 1600

3 1400 1200

5 юоо

| 800

!■ 600 а

% 400

I 200

2000

11800

Е 1600

5 1400 х

| 1200

5 юоо

| 800 л

? 600 х

я 400

й 200

80 60 70 Время, мин

90 100 110 120

40 50 60 Время, мин

Рис. 7. Кривые экстрагирования силибина, полученные в режиме динамической экстракции

субкритической водой при см3/мин для Т=105, 150°С; 7^=1.5 см3/мин для Т=200°С; ^с=2.5 см3/мин для Т=250°С), при давлении 12.5 МПа:

1 -Т=105°С;

2 —Т=150°С

3 - Т=200°С

4 - Т=250°С

Рис. 8. Кривые экстрагирования силибина, полученные в режиме динамической экстракции водно-этанольными смесями при Рс=) см3/мин, давлении 12.5 М11а в соотношениях: 1- 90:10 при Т=105°С;

2 - 50:50 при Т=105°С;

3 - 90:10 при Т=200°С

Рис. 6. Кривые экстрагирования силибина, полученные в режиме динамической экстракции

этанолом при /у=1 см3/мин, давлении 12.5 МПа: 1 -Т=105°С; 2-Т=125°С; 3 -Т=150°С

2000

"к 1800

£ 1600

X 1400

V© 8 1200

в 1000

г 3 800

Си с 600

5Г 400

1 200

1) 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 ПО 120 Время, мин

Как видно из рис. 6-8 выходные кривые «концентрация-время» имеют вид асимметричного пика с размытым задним фронтом с максимумом на начальных участках кривой экстрагирования. Чем выше температура в системе, тем меньший объём экстрагента содержит основную долю извлекаемых аналитов. Экспериментальные данные, полученные при использовании субкритической воды в диапазоне температур 200-250°С сопоставимы с результатами, полученными при экстрагировании этиловым спиртом в диапазоне температур 105-125°С, а также с экстракцией водно-этанолъными смесями в объёмном соотношении 90:10 при Т=200°С и 50:50 при Т=105°С. Причиной такого поведения системы с субкритической водой является изменение физико-химических свойств воды (диэлектрической проницаемости, вязкости и плотности). Необходимо также отметить, что при

температуре 250°С ионное произведение воды на три порядка выше по сравнению с обычными условиями (Т=25°С, Р=1 атм).

В таблице 4 представлены данные по количественному извлечению исследованных БЛВ при использовании различных экстрагентов в проточном и статическом режимах при различных температурах.

Таблица4. Количество извлеченных БЛВ при различных условиях экстрагирования при одинаковом объёме экстрагента в расчёте на 1 грамм исходного сырья

Условия экстракции Количество БАВ (мг/г сырья) ± Д, мг/г

Т, °С Р, МПа Таксифолин Силикристин Силидиагаш Силибин Сумма БАВ

Экстракция этанолом в динамическом режиме

105 12.5 4.4±0.5 17.6±1.1 3.4±0.4 5.4±0.5 30.8±0.6

125 4.5±0.5 17.8±1.1 3.7±0.5 6.0±0.5 32.0±0.6

150 4.7±0.5 18.0±1.1 3.9±0.5 6.9±0.6 33.5±0.7

Экстракция субкритической водой в динамическом режиме

105 12.5 3.9±0.5 17.1±1.0 2.4±0.4 3.5±0.5 26.9±0.6

150 4.2±0.5 17.8±1.1 3.3±0.4 4.7±0.5 30.0±0.б

200 3.7±0.5 17.6±1.1 3.6±0.5 5.9±0.5 30.8±0.6

250 3.6±0.5 17.5±1.1 3.7±0.5 6.1±0.5 30.9±0.6

Экстракция субкритической водой с добавлением этанола в динамическом режиме

105* 12.5 4.3±0.5 17.4±1.0 3.2±0.4 5.1±0.5 30.0±0.6

105** 4.2±0.5 17.2±1.0 2.8±0.4 4.0±0 4 28.2±0.6

200** 4.4±0.5 17.7±1.1 3.8±0.5 6.2±0.6 32.1±0.б

Экстракция этанолом в статическом режиме***

кипящая водяная баня 3.5±0.5 16.7±1.0 4.1±0.5 6.8±0.6 31.1±0.6

Экстракция водой в статическом режиме***

кипящая водяная баня 2.5±0.4 7.6±0.6 1.7±0.3 1.6±0.2 13.4±0.4

* - соотношение вода:спирт 50:50

** - соотношение вода:спирт 90:10 Л - доверительный интервал (Р=0,95; п=5)

*** - при атмосферном давлении

Как видно из таблицы 4, при одинаковом объёме затраченного экстрагента (300 см3) суммарное количество извлекаемых БАВ водно-этанольными смесями и этанолом в статическом и динамическом режимах в интервале температур 105-200°С сопоставимо. Однако при экстрагировании в динамическом режиме при температурах 200-250°С 90 %-ое извлечение БАВ достигается уже в течение 20-30 минут, а при статической экстракции временные затраты увеличиваются в 4-5 раз.

При использовании воды в субкритическом состоянии в качестве экстрагента значительное увеличение доли экстрагируемых веществ наблюдается с ростом температуры. Следует отметить и тот факт, что максимальное извлечение силибина и силидианина при экстрагировании субкритической водой (ЭСВ) наблюдается при 250°С, а для таксифолина и силикристина оно достигается при температуре 150°С. Это связано с тем, что эти вещества менее термически стабильны, чем силибин и силидианин, и они претерпевают частичную деструкцию при температуре выше 150°С. Экспериментальные данные по ЭСВ, полученные при температуре 250°С и давлении 12.5 МПа сопоставимы с экстракцией этанолом как в динамических, так и в статических условиях. Добавление 10% об. этилового спирта в воду в качестве модификатора при

проведении жидкостной экстракции под давлением увеличивает количественный выход исследуемых компонентов не более, чем на 10%.

Из данных таблицы 4, также видно, что суммарное количество извлекаемых компонентов динамическим методом ЭСВ при 105°С, давлении 12.5 МПа в 2 раза выше по сравнению со статической экстракцией водой при температуре 100°С при атмосферном давлении. Данный факт можно объяснить изменением физико-химических свойств воды в субкритическом состоянии, а также тем, что в динамическом режиме, благодаря постоянной подаче новых порций чистой воды, обеспечиваются наиболее оптимальные условия по количественному извлечению целевых компонентов из сложной матрицы. Несмотря на то, что эффективность ЭСВ при извлечении таксифолина, силикристина, силидианина и силибина из расторошпи пятнистой при 250°С и давлении 12.5 МПа сопоставима со спиртовой экстракцией, используя метод ЭСВ, можно получать новые биологически доступные формы гепатопротекторных соединений, не содержащие следов токсичных примесей, присутствующих в органическом экстрагенте. Более того, проведение экстрагирования в динамических условиях позволяет существенно сократить время проведения пробоподготовки по сравнению с традиционной экстракцией на водяной бане — с 1.5-2 часов до 20 минут, а использование субкритической воды позволяет получить водный экстракт, удобный для последующего ОФ ВЭЖХ определения флаволишанов.

Для обеспечения селективного экстрагирования изученных БАВ, в связи с их различной полярностью и термической стабильностью, была проведена ЭСВ в режиме ступенчатого программирования температуры со 150 до 250°С.

Так как результаты по количественному извлечению субкритической водой не уступают экстрагированию этанолом и водно-этанольными смесями, для аналитического контроля лекарственного растительного сырья «расторошпа пятнистая» предложена методика, которая включает пробоподготовку с использованием динамической экстракции субкритической водой при программировании температуры от 150°С до 250°С при давлении 12.5 МПа в течение 20 минут, а затем определение БАВ в полученном экстракте методом ОФ ВЭЖХ.

Выводы

1. Разработан способ экспрессной идентификации лекарственного растения «расторопша пятнистая» и препаратов на его основе по совокупности интерполяционных величин удерживания при ГХ анализе равновесной газовой фазы.

2. Показано, что использование твердофазной микроэкстракции увеличивает число регистрируемых летучих соединений при газохроматографическом анализе паровой фазы над образцами «расторопши пятнистой», что повышает информативность и достоверность анализа исследуемых образцов.

3. Показано, что хромато-распределительный метод применим для определения молекулярной массы и температуры кипения неизвестных JIOC лекарственного растения «расторопша пятнистая».

4. Проведена сравнительная оценка количественного извлечения флаволигнанов из «расторопши пятнистой» сверхкритическим С02, этанолом, субкритической водой и водно-этанольными смесями. Установлено, что экстрагирование БАВ из плодов «расторопши пятнистой» сверхкритическим С02 при изученных параметрах оказалось малоэффективным, наиболее полное извлечение достигается при проведении экстрагирования этанолом в динамическом режиме при температуре 150°С и давлении

12.5 МПа. Кроме того показано, что результаты, полученные при экстрагировании субкритической водой в диапазоне температур от 200 до 250°С сопоставимы с экспериментальными данными, полученными при использовании этилового спирта при Т=105°С; водно-этанольных смесей в соотношениях 90:10 и 50:50 при Т=200°С и Т=105°С, соответственно.

5. Предложена методика количественного определения БАВ из «расторопши пятнистой», основанная на извлечении флаволигнанов (таксифолина, силикристина, силидианина и силибина) субкритической водой в динамических условиях при программировании температуры экстракции от 150°С до 250°С при давлении 12.5 МПа с последующим анализом экстракта методом ОФ ВЭЖХ.

Основные результаты диссертации изложены в следующих публикациях:

1. Экстракция субкритической водой биологически активных соединений из плодов расторопши пятнистой (БИуЬит тапапит Ь.) / ИЛ. Платонов, НВ. Никитченко, Л.А. Онучак, Ю.И. Арутюнов, В.А. Куркин, П.В. Смирнов // Сверхкритические флюиды: теория и практика. - 2010. - Т.5, №3. - С. 67-75.

2. Применение хромато-распределительного метода для определения молекулярной массы и температуры кипения неизвестных компонентов смеси / Ю.И. Арутюнов, Л А. Онучак, И А. Платонов, Н.В. Никитченко // «Сорбционные и хроматографические процессы». - 2011. - Т. 11, В. 4. - С. 502-510.

3. Газохроматографические характеристики летучих веществ в плодах и препаратах расторопши пятнистой (БИуЬит тапапит Ь.) / Ю.И. Арутюнов, ЛА. Онучак, В.А. Куркин, И.А. Платонов, Н.В. Никитченко // Журнал аналитической химии. - 2012. -Т.67, №6. - С. 619-624.

4. Экстракциопно-хроматографическое определение качества лекарственного растительного сырья «расторопша пятнистая» / Н.В. Никитченко, ИА. Платонов, ЛА. Онучак, Ю.И. Арупонов // Аналитика и контроль. - 2012. - Т.16,№2. - С. 169-173.

5. Патент 2324173 РФ. Способ получения градуировочных смесей летучих компонентов и устройство для его осуществления / В.Г. Берёзкин, Ю.И. Арутюнов, И.А. Платонов, И.Н. Смыгина, Н.В. Никитченко - заявка № 2006128705/28, 07.08.2006, опубл. 10.05.2008; Бюл. №13-6 с.

6. Патент №2324174 РФ. Способ получения потока газа с постоянными концентрациями летучих компонентов и устройство для его осуществления / В.Г. Берёзкин, Ю.И. Арутюнов, И А. Платонов, И.Н. Смыгина, Н.В. Никитченко - заявка №2006128706/28,07.08.2006, опубл. 10.05.2008; Бюл. №13 -6 с.

7. Патент №2452944 РФ. Способ оценки подлинности лекарственного растительного сырья и устройство для его осуществления / Ю.И. Арутюнов, Л А. Онучак, ВА. Куркин, ИА. Платонов, Н.В. Никитченко - заявка № 2010140814/28, 05.10.2010, опубл. 10.06.2012; Бюл. №16 - 7 с.

8. Применение хромато-десорбционных систем в анализе летучих кислородсодержащих органических соединений / В.Г. Берёзкин, И.А. Платонов, И.Н. Колесниченко, ЕА. Новикова, Н.В. Никитченко // II Международный форум «Аналитика и аналитики». - 2008, Воронеж. - Т.1. - С. 252.

9. Изучение влияния температуры и давления на экстракцию силибина из плодов расторопши пятнистой /ИА. Платонов, В А. Куркин, Л.А. Онучак, Н.В. Никитченко, Н.Д. Лужнов // Международная конференция «Основные тенденции развития химии в начале XXI века».-2009, Санкт-Петербург. - С. 223.

Ю.Изучение летучих компонентов плодов растения Silybum marianum L. газохроматографическими и физико-химическими методами / ЛА. Онучак, Ю.И.Арутюнов, В.А.Куркин, ИА.Платонов, Н.В.Никитченко, М.А. Назарова // Всероссийская конференция «Теория и практика хроматографии. Хроматография и нанотехнологии». -2009, Самара. - С. 156.

11. Экстракция горячей водой под давлением биологически активных соединений из плодов расторошпи / ИА. Платонов, ВА. Куркин, JIA. Онучак, HB. Никитченко, В.И.Платонов, Н.Д. Лужнов // V Международная научно-практическая конференция «Сверхкритические флюиды: фундаментальные основы, технологии, инновации». - 2009, Суздаль. - С. 93.

12. Статическая и динамическая экстракция субкритической водой силибина из плодов расторопши пятнистой / Н.В. Никитченко, ИА. Платонов, В.А. Куркин, Л.А. Онучак, ЮЛ. Арутюнов, П.В. Смирнов // Съезд аналитиков России и Школа молодых учёных «Аналитическая химия — новые методы и возможности». — 2010, Москва. - С. 205.

13. Применение хромато-распределительного метода для определения молекулярной массы и температуры кипения неизвестных компонентов смеси / Л А. Онучак, Ю.И. Арутюнов, И А. Платонов, Н.В. Никитченко // IV Международная конференция «Экстракция органических соединений». - 2010, Воронеж. - С. 145.

14. Изучение экстракции флаволигнанов субкритической водой в проточном режиме / И А. Платонов, Н.В. Никитченко, Л А. Онучак, П.В. Смирнов, С.И. Осипова // Всероссийская конференция «Аналитическая хроматография и капиллярный электрофорез». - 2010, Краснодар. - С. 69.

15. Использование экологически безопасных растворителей для извлечения биологически активных веществ из лекарственного сырья растительного происхождения / ИА. Платонов, Н.В. Никитченко, ЛА. Онучак, Ю.И. Арутюнов, ВА. Куркин // XIX Менделеевского съезда по общей и прикладной химии. Волгоград. 2011. С. 399.

16. Современные экстракционные методы для извлечения биологически активных соединений и оценки подлинности лекарственного растительного сырья / Н.В. Никитченко, И.А. Платонов, П.В. Смирнов // III Всероссийский симпозиум «Разделение и концентрирование в аналитической химии и радиохимии» с международным участием. - 2011, Краснодар. - С. 124.

17. Аналитические возможности современных экстракционных методов в химии лекарственного сырья / И А. Платонов, Н.В. Никитченко, Л А. Онучак, Ю.И. Арутюнов // XIII Международная конференция «Физико-химические основы ионообменных и хроматографических процессов» (ИОНИТЫ - 2011). -2011, Воронеж. - С. 425.

Работы №1—4 опубликованы в журналах, рекомендованных ВАК РФ для публикации содержания диссертации.

Подписано в печать 17.10.2012 г. Формат 60x80/16. Объем 1,0 усл. печ. л. Тираж 100 экз. Бумага офсетная. Печать оперативная. Заказ № 207

Отпечатано в типографии ООО «Порто-принт» 443041, г. Самара, ул. Садовая, д. 156

Содержание диссертации автор исследовательской работы: кандидата химических наук, Никитченко, Наталья Викторовна

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Газовая экстракция

1.2. Микроволновая экстракция

1.3. Ультразвуковая экстракция

1.4. Сверхкритическая флюидная экстракция

1.5. Ускоренная экстракция растворителем

1.6. Экстракция субкритической водой 46 1.6.1. Факторы, влияющие на экстракцию субкритической водой

1.6.1.1. Температура

1.6.1.2. Давление

1.6.1.3. Добавление органических растворителей и поверхностно-активных веществ

Глава 2. Газохроматографический способ идентификации лекарственного растения «расторопша пятнистая» и препаратов на его основе

2.1. Исследования равновесной газовой фазы лекарственного растения «расторопша пятнистая» и препаратов на его основе

2.1.1. Результаты экспериментальных исследований равновесной газовой фазы лекарственного растения и препаратов на его основе

2.2. Твердофазная микроэкстракция летучих компонентов из газовой фазы лекарственного растения

2.2.1. Методика изготовления микроколонок для динамической твердофазной микроэкстракции и подготовка лекарственного растительного сырья для концентрирования летучих органических соединений

2.2.2. Результаты экспериментальных исследований летучих компонентов лекарственного растительного сырья с использованием твёрдофазной микроэкстракции

Глава 3. Определение молекулярной массы и температуры кипения неизвестных летучих органических соединений лекарственного растительного сырья хромато-распределительным методом

3.1. Результаты экспериментальных исследований по определению молекулярной массы и температуры кипения неизвестных летучих органических соединений лекарственного растительного сырья

Глава 4. Жидкостная экстракция под давлением и сверхкритическая флюидная экстракция биологически активных веществ из лекарственного растения «расторопша пятнистая»

4.1.Экспериментальные исследования по извлечению биологически активных веществ из лекарственного сырья сверхкритическим диоксидом углерода и жидкостной экстракцией под давлением

4.1.1. Установка для экстракции сверхкритическим диоксидом углерода

4.1.2. Установка для жидкостной экстракции под давлением

4.1.3. Проведение качественного и количественного анализа экстрактов

4.1.4. Результаты экспериментального изучения сверхкритической флюидной экстракции

4.1.5. Результаты экспериментального изучения процесса жидкостной экстракции под давлением

4.1.6. Сопоставление эффективности различных способов экстрагирования биологически активных веществ из «расторопши пятнистой»

Выводы

Введение диссертация по химии, на тему "Определение состава экстрактов "расторопши пятнистой" хроматографическими методами"

Актуальность. В последнее время особое внимание учёных уделяется исследованию фенольных и полифенольных соединений растительного происхождения. Данные соединения обладают широким спектром биологической активности: антиоксидантной, противовирусной, капилляроукрепляющей, гепатопротекторной и др. Поэтому важной задачей является выбор метода и условий извлечения данных соединений из анализируемых объектов. Традиционные методы извлечения фенольных и полифенольных соединений из лекарственных растений, как правило, связаны с использованием токсичных органических растворителей, а также требуют больших затрат времени. Альтернативным подходом может служить использование экологически безопасных растворителей, таких как вода и диоксид углерода, находящихся в суб- и сверхкритических состояниях.

Индивидуальная и групповая идентификация компонентов сложных объектов, в том числе и объектов растительного происхождения, является актуальной задачей аналитической химии. Кроме того, руководствуясь совокупностью характеристических физико-химических признаков, полученных во время хроматографического анализа, можно проводить распознавание образа сложного объекта по так называемым хроматографическим «отпечаткам пальцев» (хроматографическим профилям, фингерпринтам). Особую актуальность данный подход находит при анализе лекарственных растений, поскольку в большинстве случаев их идентификация проводится визуальным способом, а содержание компонентов, определяющих их качество - полуколичественными методами

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи: 1. Разработать способ экспрессной идентификации лекарственного растения «расторопша пятнистая» и препаратов на его основе по совокупности интерполяционных величин удерживания при газохроматографическом (ГХ) анализе равновесной газовой фазы.

5. Провести экспериментальные исследования по извлечению БАВ из «расторопши пятнистой» этанолом, субкритической водой и водно-этанольными смесями в статических и динамических режимах при различных температурах и давлениях.

1. Разработать методику количественного определения БАВ из «расторопши пятнистой», включающую извлечение БАВ жидкостной экстракцией под давлением и последующий анализ экстракта методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Научная новизна.

Практическая значимость. Представленные в работе новые инструментальные и методические решения экспрессной идентификации и анализа лекарственного растения «расторопша пятнистая» внедрены в практику работы следующих предприятий Самарской области: ООО «ОЗОН» (г. Жигулёвск), ГУЗ «Центр контроля качества лекарственных средств Самарской области» (г. Самара), ООО «Пранафарм» (г. Самара), ООО «Центр-Аналитика» (г. Самара), ООО «СайКлан» (г. Самара), ФГБОУ ВПО «Самарский государственный технический университет» (г. Самара), ФГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» (г. Самара).

На защиту выносятся следующие положения:

Заключение диссертации по теме "Аналитическая химия"

Выводы

1) Разработан способ экспрессной идентификации лекарственного растения «расторопша пятнистая» и препаратов на его основе по совокупности интерполяционных величин удерживания при ГХ анализе равновесной газовой фазы.

2) Показано, что использование твердофазной микроэкстракции увеличивает число регистрируемых летучих соединений при газохроматографическом анализе паровой фазы над образцами «расторопши пятнистой», что повышает информативность и достоверность анализа исследуемых образцов.

3) Показано, что хромато-распределительный метод применим для определения молекулярной массы и температуры кипения неизвестных ДОС лекарственного растения «расторопша пятнистая».

4) Проведена сравнительная оценка количественного извлечения флаволигнанов из «расторопши пятнистой» сверхкритическим СОг, этанолом, субкритической водой и водно-этанольными смесями. Установлено, что экстрагирование БАВ из плодов «расторопши пятнистой» сверхкритическим СО2 при изученных параметрах оказалось малоэффективным, наиболее полное извлечение достигается при проведении экстрагирования этанолом в динамическом режиме при температуре 150°С и давлении 12.5 МПа. Кроме того показано, что результаты, полученные при экстрагировании субкритической водой в диапазоне температур от 200 до 250°С сопоставимы с экспериментальными данными, полученными при использовании этилового спирта при Т=105°С; водно-этанольных смесей в соотношениях 90:10 и 50:50 при Т=200°С и Т=105°С, соответственно.

5) Предложена методика количественного определения БАВ из «расторопши пятнистой», основанная на извлечении флаволигнанов (таксифолина, силикристина, силидианина и силибина) субкритической водой в динамических условиях при программировании температуры экстракции от 150°С до 250°С при давлении 12.5 МПа с последующим анализом экстракта методом ОФ ВЭЖХ.

Список источников диссертации и автореферата по химии, кандидата химических наук, Никитченко, Наталья Викторовна, Самара

1. Li L., Zhao J. Determination of the Volatile Composition of Rhodobryum giganteum (Schwaegr.) Par. (Bryaceae) Using Solid-Phase Microextraction and Gas Chromatography/Mass Spectrometry (GC/MS) // Molecules. 2009. V.14. P. 2195-2201.

2. Витенберг А.Г., Иоффе Б.В. Газовая экстракция в хроматографическом анализе. Л.: Химия, 1982. 280 с.

3. Зеленин К.Н. Органические вещества атмосферы // Соросовский образовательный журнал. 1998. №4. С. 39-44.

4. Charalambous G. Analysis of Food and Beverages. Head-space Techniques. N.Y.: Academic Press, 1978. 394 p.

5. Головня P.B. Проблемы исследования запаха пищевых продуктов и создания имитаторов // Усп. хим. 1976. Т.45. №10. С. 1895-1916.

6. Головня Р.В. Исследование компонентов запаха некоторых пищевых продуктов: автореферат диссертации . доктора химических наук/ ИНЭОС. - Москва, 1973. - 51 с.

7. Jeltes R.J. Fingerprinting techniques as aids in the analysis of composite chemical pollutants in the environment // J. Chromatography Sci. 1974. V.12. №10. P. 599-605.

8. Politzer I.R., Dowty B.J., Laseter J.L. Use of gas chromatography and mass spectrometry to analyze underivatized volatile human or animal constituents of clinical interest // Clin. Chem. 1976. V.22. P. 1775-1788.

9. Hood L.V.S., Barry G.T. Headspace volatiles of marihuana and hashish: Gas chromatographic analysis of samples of different geographic origin // J. Chromatogr. 1978. V.166. P. 499-506.

10. Bonadio F., Margot P., Delémont О., Esseiva P. Headspace solid-phase microextraction (HS-SPME) and liquid-liquid extraction (LLE): Comparison of the performance in classification of ecstasy tablets (Part 2) // Forensic Sci. Int. 2008. V.182. P.52-56.

11. Cartier J., Gueniat O., Cole M.D. Headspace analysis of solvents in cocaine and heroin samples // Sci. Justice. 1997. V.37. P. 175-181.

12. Bicchi С., Corderoa С., Libertoa E., Sgorbinia В., Rubioloa P. Headspace sampling of the volatile fraction of vegetable matrices // J. Chromatogr. A. 2008. V.1184. P.220-233.

13. Bertsch W., Chang R.C., Zlatkis A. The determination of organic volatiles in air pollution studies: characterization of profiles // J. Chromatogr. Sci. 1974. V.12. №4. P. 175-182.

14. Melcher R.G., Caldecourf V.J. Delayed injection-preconcentration gas chromatographic technique for parts-per-billion determination of organic compounds in air and water // Anal. Chem. 1980. V.52. №6. P.875-881.

15. Russell J.W., Shadoff L.A. The sampling and determination of halocarbons in ambient air using concentration on porous polymer // J. Chromatogr. A. 1977. V.134. №2. P.375-384.

16. Taraka T. Chromatographic characterization of porous polymer adsorbents in a trapping column for trace organic vapor pollutants in air // J. Chromatogr. 1978. V.153. P.7-13.

17. Harsch D.E. Evaluation of a versatile gas sampling container design // Atmos. Environ. 1980. V.14. №9. P.l 105-1109.

18. Altshuller A.P., Clemons C.A. Gas chromatographic analyses of aromatic hydrocarbons at atmospheric concentrations using flame ionization detection // Anal. Chem. 1962. V.34. №4. P.466-472.

19. Bellar Т., Sigsby J.E., Clemons C.A., Altshuller A.P. Direct application of gas chromatography to atmospheric pollutants // Anal. Chem. 1962. V.34. №3. P.763-765.

20. Другов Ю.С., Берёзкин В.Г. Газохроматографический анализ загрязненного воздуха. М.: Химия, 1981. 256 с.

21. William P.S., Harry L.R. Preparation of gas cylinder standards for the measurement of trace levels of benzene and tetrachloroethylene // Anal. Chem. 1983. V.55.№2. P.290-294.

22. Saltzman B.E., Coleman A.I., Clemons C.A. Halogenated compounds as gaseous meteorological tracers // Anal. Chem. 1966. V.38. №6. P.753-758.

23. Naganowska-Nowak A., Konieczka P., Przyjazny A., Namiesnik J. Development of techniques of generation of gaseous standard mixtures // Crit. Rev. Anal. Chem. 2005. V.35. №1. P.31-35.

24. McKinley J., Majors R.E. The preparation of calibration standarts for volatile organic compounds a question of traceability // LC-GC Europe. 2000. V.18. №12. P. 892-901.

25. Другов Ю.С. Экологическая аналитическая химия. М.: Изд-во «Анатолия», 2000. - 432 с.

26. Яшин Я.И., Яшин А.Я. Миниатюризация газохроматографической аппаратуры // Журн. аналит. хим. 2001. Т. 56. №9. С.902-914.

27. Баскин 3.J1. Промышленный газохроматографический эколого-аналитический контроль // РЖХО им. Д.И. Менделеева. 2002. Т. 56. №4. С.93-99.

28. Ioffe B.V., Kostkina M.I., Vitenberg A.G. Preparation of standard vapor-gas mixtures for gas chromatography: giscontinuous gas extraction. // Anal. Chem. 1984. V.56. P. 2500-2503.

29. Мариничев A.H., Виттенберг А.Г. Закономерности многоступенчатой газовой экстракции растворов // Журн. прикл. химии. 1990. Т.63. №10. С.2385-2388.

30. Витенберг А.Г., Косткина М.И. Статический способ приготовления парогазовых смесей с известным содержанием органических веществ при использовании равновесия жидкость пар // Журн. аналит. химии. 1980. Т.35. №3. С.539-546.

31. Витенберг А.Г., Бутаева И.Л., Димитрова З.С. Дозирование в хроматограф равновесного с жидкостью газа// Зав. лаб. 1975. Т.41. С.931.

32. Vitenberg A.G., Kostkina M.I., Ioffe B.V. Preparation of standard vapor-gas mixtures for gas chromatography: continuous gas extraction // Anal. Chem. 1984. V.56. P.2496-2500.

33. Витенберг А.Г., Ефимова O.B., Котов Г.Н. Методы приготовления парогазовых смесей с постоянным микросодержанием летучих веществ наоснове буферного эффекта гетерогенных систем // Журн. прикл. химии. 2002. Т.75. №1. С. 39-46.

34. Scarano Е., Gay G., Forina М. Hydrogen chloride partial pressure of dilute hydrogen chloride-concentrated lithium chloride aqueous solution // Anal. Chem. 1971. V.43.P.206-211.

35. Scarano E., Forina M., Gay G. Hydrochloric acid and ammonia gaseous standard solutions //Anal. Chem. 1971. V.43. P. 1310-1312.

36. Берёзкин В.Г., Платонов И.А., Лепский M.B., Исмагилов Д.Р., Онучак Л.А. Динамический способ получения парогазовых потоков летучих органических соединений в инертном газе // Вестник СамГУ. Естественнонаучная серия. Специальный выпуск. 2002. С.115-123.

37. Платонов И.А., Исмагилов Д.Р., Кудряшов С.Ю., Смыгина И.Н., Онучак Л.А., Берёзкин В.Г. Получение газовых потоков с постоянноймикроконцентрацией сероводорода // Журн. аналит. химии. 2006. Т.61. №1. С.59-64.

38. Платонов И.А. Многоступенчатые барботажные способы и устройства для получения газовых смесей с постоянной концентраций // Сорбционные и хроматографические процессы. 2006. Т.6. №5. С.833- 843.

39. Берёзкин В.Г., Платонов И.А., Онучак Л.А., Лепский М.В. Способ получения постоянных микроконцентраций летучих соединений в потоке газа. Патент 2213958 (2001) РФ // Бюл. изобр. 2003. №28.

40. Берёзкин В.Г., Арутюнов Ю.И., Платонов И.А., Кудряшов С.Ю., Исмагилов Д.Р., Устюгов B.C., Милочкин Д.А. Устройство получения постоянных концентраций веществ в газе. Патент 2312335 (2004) РФ // Бюл. изобр. 2007. №34.

41. Берёзкин В.Г., Платонов И.А., Арутюнов Ю.И., Исмагилов Д.Р., Устюгов B.C., Милочкин Д.А. Способ получения постоянных концентраций веществ в потоке газа и устройство для его осуществления. Патент 2279672 (2004) РФ // Бюл. изобр. 2006. №19.

42. Берёзкин В.Г., Платонов И.А., Арутюнов Ю.И., Смыгина И.Н. Способ получения газового потока с постоянными концентрациями летучих веществ и устройство для его осуществления. Патент 2302629 (2005) РФ // Бюл. изобр.-2007. №19.

43. Берёзкин В.Г., Платонов И.А., Смыгина И.Н. Хромато-десорбционный способ получения потока газа, содержащего микропримеси летучих соединений // Известия ВУЗов. Химия и химическая технология. 2007. Т.50. В.8. С. 22-25.

44. Moskvin L.N., Rodinkov O.V. Continuous chromatomembrane headspace analysis // J. Chromatogr. A. 1996. V.725. P.351-359.

45. Москвин JI.H., Родинков О.В., Катрузов А.Н. Непрерывное выделение газообразных и легколетучих примесей из водных растворов с использованием хроматомембранного метода // Журн. аналит. химии. 1996. Т.51. №2. С.215-217.

46. Москвин J1.H., Родинков О.В., Катрузов А.Н. Хроматомембранный метод разделения и его аналитические возможности // Журн. аналит. химии. 1996. Т.51. №8. С.835-843.

47. Москвин JI.H., Родинков О.В. Хроматомембранный парофазный анализ водных растворов // Журн. эколог, химии. 1995. Т.4. №2. С.112-116.

48. Москвин А.Л., Москвин JI.H., Родинков О.В. Хроматомембранные методы новый принцип функционирования устройств для пробоподготовки в аналитических приборах // Научное приборостроение. 1999. Т.9. №4. С.62-72.

49. Родинков О.В., Москвин Л.Н., Майорова H.A., Зеймаль А.Е. Газохроматографическое определение алкилацетатов в водных растворах с хроматомембранной газовой экстракцией // Журн. аналит. химии. 2003. Т.58. №6. С.617-622.

50. Москвин Л.Н., Родинков О.В. Газохроматографическое определение газообразных углеводородов в водных растворах с хроматомембранной газовой экстракцией // Журн. аналит. химии. 2003. Т.58. №1. С.82-87.

51. Москвин Л.Н. Хроматомембранный метод разделения веществ // Докл. АН. 1994. Т.334. №5. С.599-601.

52. Москвин Л.Н., Родинков О.В., Григорьев Г.Л. Непрерывное хроматомембранное выделение летучих примесей из водных растворов для последующего газохроматографического анализа // Журн. аналит. химии. 1996. Т.51. №11. С. 1130-1132.

53. Родинков О.В., Москвин Л.Н., Папсуева А.Г., Григорьев Г.Л. Условия осуществления хроматомембранного процесса в системах жидкость -жидкость и жидкость газ // Журн. физ. химии. 1999. Т.73. №9. С.1638—1640.

54. Москвин JI.H. Хроматомембранный метод и его аналитические возможности для концентрирования веществ из жидкой и газовой фазы // Журн. аналит. химии. 1996. Т.51. №11. С. 1125-1129.

55. Родинков О.В. Жидкостно-газовая хроматография и хроматомембранный массообменный процесс в системе жидкость газ: автореферат диссертации . доктора химических наук / СПбГУ. - С.-Петербург, 2004. - 32 с.

56. Родинков О.В., Москвин Л.Н. Закономерности противоточной хроматомембранной газовой экстракции // Журн. аналит. химии. 2003. Т.58. №6. С.611-616.

57. Родинков О.В. Закономерности непрерывной хроматомембранной газовой экстракции при движении фаз в одном направлении // Вестник СПбГУ. 2001. №.3. С.68-74.

58. Родинков О.В., Москвин Л.Н. Физико-химическая модель хроматомембранной жидкостной хемосорбции микропримесей из газовой фазы // Журн. физ. химии. 2001. Т.75. №2. С.329-332.

59. Родинков О.В., Москвин Л.Н. Непрерывная двухмерная хроматомембранная газовая экстракция. Тарелочная модель и ее практические следствия // Журн. аналит. химии. 2000. Т.55. №9. С.950-955.

60. Родинков О.В., Рачковский И.Н., Москвин Л.Н. Хроматомембранное газоэкстракционное генерирование стандартных газовых смесей с применением композиционных угольно-фторопластовых матриц // Журн. аналит. химии. 2008. Т.63. №9. С.941-947.

61. Kaufmann В., Christen P. Recent Extraction Techniques for Natural Products: Microwave-assisted Extraction and Pressurised Solvent Extraction // Phytochem. Anal. 2002. V.13. P. 105-113.

62. Abu-Samra A., Morris J.S., Koirtyohann S.R. Wet ashing of some biological samples in a microwave oven // Anal. Chem. 1975. V.47. P.1475-1477.

63. Camel V. Recent extraction techniques for solid matrices-supercritical fluid extraction, pressurized fluid extraction and microwave-assisted extraction: their potential and pitfalls // Analyst. 2001. V.126. P.l 182-1193.

64. Thuery J. Microwaves and matter in Microwaves: Industrial, Scientific and Medical Applications, Part 1. London: Artech House, 1992. P.83-125.

65. Demesmay C.,0 lie M. Utilisation des micro-ondes dans les laboratoires d'analyse // Spectra Analyse. 1993. V.175. P.27-32.

66. Sinquin A., Gorner Т., Dellacherie E. L'utilisation des micro-ondes en chimie analytique // Analusis. 1993. V.21. P. 1-10.

67. Ganzler K., Szinai I., Salgo A. Effective sample preparation method for extracting biologically active compounds from different matrixes by a microwave technique // J. Chromatogr. 1990. V.520. P.257-262.

68. Barnabas I.J., Dean J.R., Fowlis I.A., Owen S.P. Extraction of polycyclic aromatic hydrocarbons from highly contaminated soils using microwave energy // Analyst. 1995. V.120. P. 1897-1904.

69. Onuska F.I., Terry K.A. Microwave extraction in analytical chemistry of pollutants: polychlorinated biphenyls // J. High Resol. Chromatogr. 1995. V.18. P.417-421.

70. Jassie L., Revesz R., Kierstead T. Microwave-assisted solvent extraction. In Microwave-Enhanced Chemistry. Fundamentals, Sample Preparation, and Applications. Washington, DC: Am. Chem. Soc., 1997. - P.569-609.

71. Kingston H.M., Haswell S.J. Microwave Enhanced Chemistry: Fundamentals, Sample Preparation and Applications. Washington, DC: Am. Chem. Soc., 1997. - P.124-138.

72. Nuchter N., Ondruschka В., Bonrath W. Microwave assisted synthesis a critical technology overview // Green Chem. 2004. V.6. P. 128-141.

73. Lew A., Krutzik P.O., Hart M.E., Chamberlin A.R. Increasing rates of reaction: microwave-assisted organic synthesis for combinatorial chemistry // J. Comb. Chem. 2002. V.4. P.95-105.

74. Кубракова И.В. Микроволновое излучение в аналитической химии: возможности и перспективы использования // Усп. хим. 2002. Т.71. №4. С.327-340.

75. Кубракова И.В., Мясоедова Г.В., Еремин С.А., Плетнёв И.В., Моходоева О.Б., Морозова В.А., Хачатрян К.С. Подготовка проб в условияхмикроволнового нагрева // Методы и объекты химического анализа. 2006. Т.1. №1. С.27-34.

76. Ganzler К., Salgo A., Valko К. Microwave extraction. A novel sample preparation method for chromatography // J. Chromatogr. 1986. V.371. P.299-306.

77. Ganzler K., Salgo A. Microwave-extraction a new method superseding traditional Soxhlet extraction // Z. Lebensm. Unters. Forsch. 1987. V.184. P.274-276.

78. Kingston H.M., Jassie L.B. Introduction to Microwave Sample Preparation: Theory and Practice. Washington, DC: Am. Chem. Soc., 1988.

79. Кубракова И.В., Кузьмин H.M. Микроволновая пробоподготовка в неорганическом элементном анализе (обзор) // Журн. завод, лаб. 1992. Т.58. №8. С.1-5.

80. Jin Q., Liang F., Zhang H., Zhao L., Huan Y., Song D. Application of microwave techniques in analytical chemistry // Trends Anal. Chem. 1999. V.18. P.479-484.

81. Pare J., Belanger J., Stafford S. Microwave-assisted process (MAP™): a new tool for the analytical laboratory // Trends Anal. Chem. 1994. V.13. P. 176-184.

82. Camel V. Microwave-assisted solvent extraction of environmental samples // Trends Anal. Chem. 2000. V.19. P.229-248.

83. Smith F.E., Arsenault E.A. Microwave-assisted sample preparation in analytical chemistry//Talanta. 1996. V.43 P.1207-1268.

84. Chakraborty R., Das A.K., Cervera M.L., de la Guardia M. Literature study of microwave-assisted digestion using electrothermal atomic absorption spectrometry // Fresenius J. Anal. Chem. 1996. V.355. №2. P.99-111.

85. Kingston H.M. In Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry. New York: Wiley-VCH, 1998.-P. 33.

86. Лукьянчук И.И., Калинин Л.Г., Тучный В.П. Микроволновые технологии в народном хозяйстве. Проблемы. Перспективы. Киев: Издательство Бартенева, 2000. - 242 с.

87. Лукьянчук И.И. Микроволновая экстракция биологически-активных соединений из растительного сырья // Микроволновые технологии в народном хозяйстве. 2009. Т.7-8. С.61-65.

88. Ерёмин А.Д., Ракитин А.Н., Лузгин В.Г. Экстракция с использованием электрофизических методов. Таганрог. 1999. - 135 с.

89. Renoe B.W. Microwave assisted extraction // Am. Lab. 1994. №26. P.34-40.

90. Pare J.R.J. Patent 90250286.3 (1990). US. Microwave extraction of volatile oils and apparatus therefore.

91. Pare J.R.J. Patent 519,588 (1991). US. Microwave-assisted natural products extraction.

92. Chen S.S., Spiro M. Study of microwave extraction of essential oil constituents from plant materials // J. Microw. Electromagn. Energy. 1994. V.29. P.231-241.

93. Romele L., Polesello S. How to minimize the use of solvents // Laboratorio 2000. 1997. V.l 1. P.102-110.

94. Majors R.E. Sample preparation perspectives. New approaches to sample preparation // LC-GC Int. 1998. V.8. P. 128-133.

95. Budzinski H., Baumard P., Papineau A., Wise S., Garrigues P. Focused microwave assisted extraction of polycyclic aromatic compounds from standard reference materials, sediments and biological tissues // Arom. Сотр. 1996. V.9. P.225-232.

96. Лукьянчук И.И., Калинин Л.Г., Тучный В.П. Микроволновые технологии в фармации // Микроволновые технологии в народном хозяйстве. 2000. Т.2-3. -174 с.

97. Chen L.G., Jin H.Y., Ding L., Zhang H.R., Li J., Qu C.L., Zhang H.Q. Dynamic microwave-assisted extraction of flavonoids from Herba Epimedii // Sep. Pur. Tech. 2008. V.59. P.50-57.

98. Ganzler K., Bati J., Valko K. A new method for the extraction and highperformance liquid chromatographic determination of vicine and convicine in faba beans // Chromatography. 1986. V.84. P.435-442.

99. Carro N., Garcia C.M., Cela R. Microwave-assisted extraction of monoterpenols in must samples // Analyst. 1997. V.122. P.325-329.

100. Pare J.R.J. Patent 29,358 (1994). US. Microwave extraction of volatile oils.

101. Collin G.J., Lord D., Allaire J., Gagnon D. Huiles essentielles et extraits "microondes" // Parfums, Cosmet., Aromes. 1991. V.97. P. 105-112.

102. Craveiro A.A., Matos F.J.A., Alencar J.W., Plumel M.M. Microwave oven extraction of an essential oil // Flavour Fragr. J. 1989. V.4. P.43-44.

103. Young J.C. Microwave-assisted extraction of the fungal metabolite ergosterol and total fatty acids // J. Agric. Food Chem. 1995. V.43. P.2904-2910.

104. Kaufmann В., Christen P. Parameters affecting microwave-assisted extraction of withanolides // Phytochem. Anal. 2001. V.12. P.327-331.

105. Brachet A., Christen P., Veuthey J.L. Focused microwave-assisted extraction of cocaine and benzoylecgonine from coca leaves // Phytochem. Anal. 2002. V.12. P. 162-169.

106. Bicchi C., Bellardo F., Rubbiolo P. Estrazione di alcaloidi da specie di Senecio II Laboratorio 2000. 1992. V.6. P.36-38.

107. Бергман Jl.M. Ультразвук и его применение в науке и технике. М.: Изд-во ИЛ, 1956.-726 с.

108. Молчанов Г.И. Ультразвук в фармации. М.: Медицина, 1980. - С. 176.

109. Брук М.М. Получение лекарственных препаратов из растительного и животного сырья под действием ультразвука. Ультразвук в физиологии и медицине. Т.1. Ростов-на-Дону. 1972. - С.115-116.

110. Агранат Б.А. Ультразвуковая технология. М.: Металлургия, 1974. - С. 12-16.

111. Физика и техника мощного ультразвука, том II. Мощные ультразвуковые поля. Под ред. Розенберга Л.Д. М.: Наука, 1968, 268 с.

112. Пономарёв В.Д. Экстрагирование лекарственного сырья. М.: Медицина, 1976. -204 с.

113. Fang Q., Yeung H.W., Leung H.W., Huie C.W. Micelle-mediated extraction and preconcentration of ginsenosides from Chinese herbal medicine // J. Chromatogr. A. 2000. V.904. P.47-55.

114. Kadkhodaee R., Hemmati-Kakhki A. Ultrasonic Extraction of Active Compounds from Saffron 11 Acta Horticulturae. 2007. V.739. P.417-426.

115. Alupului A., Calinescu I., Lavric V. Ultrasonic vs. Microwave Extraction Intensification of Active Principles from Medicinal Plants // AIDIC Conference Series. 2009. V.9. P.l-8.

116. Kobus Z. Studies upon the ultrasonic extraction process on an example of dry matter extraction from dried carrots // Kom. Mot. Energ. Roln. 2006. V.6. P.101-114.

117. Pena A., Ruano F., Mingorance M. D. Ultrasound-assisted extraction of pesticides from olive branches: a multifactorial approach to method development // Anal. Bioanal. Chem. 2006. V.385. P.918-925.

118. Tang D.S., Tian Y.J., He Y.Z., Li L., Hu S.Q., Li B. Optimisation of Ultrasonic-assisted Protein Extraction from Brewer's Spent Grain // Czech J. Food Sci. 2010. V.28. P.9-17.

119. Valachovic P., Pechova A., Mason T.J. Towards the industrial production of medicinal tincture by ultrasound assisted extraction // Ultrason. Sonochem. 2001. V.8. 111-117.

120. Hromadkova Z., Ebringerova A., Valachovic P. Comparison of classical and ultrasound-assisted extraction of polysaccharides from Salvia officinalis L. // Ultrason. Sonochem. 1999. V.5. P. 163-168.

121. Hromadkova Z., Ebringerova A., Valachovic P. Ultrasound-assisted extraction of water-soluble polysaccharides from the roots of valerian (Valeriana officinalis L.) // Ultrason. Sonochem. 2002. V.9. P.37-44.

122. Ebringerova A., Hromadkova Z. Effect of ultrasound on the extractibility of corn bran hemicelluloses // Ultrason. Sonochem. 2002. V.9. P.225-229.

123. Chang Y-H., Yang J-C. Molecular mass distribution and degradation rate of xylan sonicated in acid and alkaline media // Food Hydrocolloid. 2006. V.20. P.348-356.

124. Hromadkova Z., Kovacikova J., Ebringerova A. Study of the classical and ultrasound-assisted extraction of the corn cob xylan // Ind. Crop. Prod. 1999. V.9. P. 101-109.

125. Li J.W., Ding S.D., Ding X.L. Optimization of the ultrasonically assisted extraction of polysaccharides from Zizyphus jujuba cv. jinsixiaozao II J. Food Eng. 2007. V.80 P.176-183.

126. Ebringerova A., Hromadkova Z., Hirsch J. An Immunomodulatory Xylan-Phenolic Complex from the Seed Hulls of Buckwheat (Fagopyrum esculetum Moench) // Chem. Pap. 2005. V.59. P.223-224.

127. Hromadkova Z., Ebringerova A. Ultrasonic extraction of plant materials— investigation of hemicellulose release from buckwheat hulls // Ultrason. Sonochem. 2003. V.10. P.127-133.

128. Ebringerova A., Hromadkova Z., Kost'alova Z., Sasinkova V. Chemical valorization of agricultural by-products: Isolation and characterization of xylan-based antioxidants from almond shell biomass // BioResources. 2008. V.3. №1. P.60-70.

129. Hromadkova Z., Kost'alova Z., Ebringerova A. Comparison of conventional and ultrasound-assisted extraction of phenolics-rich heteroxylans from wheat bra // Ultrason. Sonochem. 2008. V.15. P.1062-1068.

130. Sun R.C., Tomkinson J. Characterization of hemicelluloses obtained by classical and ultrasonically assisted extractions from wheat straw // Carbohydr. Polym. 2002. V.50.P.263-271.

131. Sun R.C., Tomkinson J. Separation and characterization of cellulose from wheat straw // Sep. Sci. Technol. 2004. V.39. P.391-411.

132. Sun R.C., Sun X.F., Ma X.H. Effect of ultrasound on the structural and physiochemical properties of organosolv soluble hemicelluloses from wheat straw//Ultrason. Sonochem. 2002. V.9. P.95-101.

133. Sun J.X., Sun R.C., Sun X.F., Su Y.Q. Fractional and physico-chemical characterization of hemicelluloses from ultrasonic irradiated sugarcane bagasse // Carbohydr. Res. 2004. V.339. №2. P.291-300.

134. Sun J.X., Sun X.F., Zhao H., Sun R.C. Isolation and characterization of cellulose from sugarcane bagasse // Polym. Degrad. Stab. 2004. V.84. P.331-339.

135. Yang B., Jiang Y., Zha M., Shi J., Wang L. Effects of ultrasonic extraction on the physical and chemical properties of polysaccharides from longan fruit pericarp // Polym. Degrad. Stab. 2008. V.93. P.268-272.

136. Chen X.Q., Zhang Y. Ultrasonic-associated extraction of water soluble polysaccharides from defatted Korean pine kernel // J. Forest. Res. 2007. V.18. №2. P.133-135.

137. Caili F., Haijun T., Quanhong L., Tongyi C., Wenjuan D. Ultrasound-assisted extraction of xyloglucan from apple pomace // Ultrason. Sonochem. 2006. V.13. P.511-516.

138. Panchev I.N., Kirtchev N.A., Kratchanov G. Improving pectin technology: II. Extraction using ultrasonic treatment // Int. J. Food Sci. Tech. 1988. V.23. P.37-341.

139. Panchev I.N., Kirtchev N.A., Kratchanov C.G. On the production of low esterified pectins by acid maceration of pectic raw materials with ultrasound treatment // Food Hydrocolloid. 1994. V.8. P.9-17.

140. Sriroth К., Chollakup R., Chotineeranat S., Piyachomkwan K., Oates C.G. Processing of cassava waste for improved biomass utilization // Bioresource Technol. 2000. V.71. P.63-69.

141. A. c. SU 1286232 A1 В 01 D 11/02. Способ экстрагирования из твёрдого тела / Долинский А.А., Мудриков В.Н., Корчинский Р.Н. (СССР). -№3936068/31-26; Опубл. 08.08.1985, Б.И. № 22.

142. Гершал Д.А., Фридман В.М. Ультразвуковая аппаратура. М.: Энергия, 1967.-300 с.

143. Новицкий Б.Г. Применение акустических колебаний в химико-технологических процессах. -М.: Химия, 1983. 192 с.

144. Жарова Е.Я. Применение ультразвука при кристаллизации глюкозы.- М.: Центр НИИИиТЭИ пищ.пр-сти, 1974. 32 с.

145. Коган В.Б. Гетерогенные равновесия. JL: Химия. 1968. - С.431.

146. Anklam Е., Berg Н., Mathiasson L., Sharman М., Ulberth F. Supercritical fluid extraction (SFE) in food analysis // Food Additives & Contaminants: Part A.1998. V. 15. №6. P.729-750.

147. Del Valle J.M., Aguilera J.M. High pressure CO2 extraction. Fundamentals and applications in the food industry // Food Science & Technology International.1999. V.5. P.l-24.

148. Raventos M., Duarte S., Alarcon R. Application and Possibilities of Supercritical CO2 Extraction in Food Processing Industry: An Overview // Food Science & Technology International. 2002. V.8. P.269-284.

149. Гумеров Ф.М., Сабирзянов A.H., Гумеров Г.И. Суб- и сверхкритические флюиды в процессах переработки полимеров. Казань: «ФЭН», 2007. -С.12-13.

150. Lang, Q., Wai С.М. Supercritical fluid extraction in herbal and natural product studies // Talanta. 2001. V.53. P.771-782.

151. Bondar E., Koel M. Application of supercritical fluid extraction to organic geochemical studies of oil shales // Fuel. 1998. V.77. P.211-213.

152. Bernardo-Gil G., Onetto C., Antunes P., Rodrigues M.F., Empis J.M. Extraction of lipids from cherry seed oil using supercritical carbon dioxide // Eur. Food Res. Tecnol. 2001. V.211. P. 170-174.

153. Fratianni A., Caboni M.F., Irano M., Panfili G. A critical comparison between traditional methods and supercritical carbon dioxide extraction for the determination of tocochromanols in cereals // Eur. Food Res. Tecnol. 2002. V.215. P.353-358.

154. Kohler M., Haerdi W., Christen P., Veuthey J.-L. Extraction of artemisinin and artemisinic acid from Artemicia annua L. using supercritical carbon dioxide // J. Chromatogr. A. 1997. V.785. P.353-360.

155. Le Floch F., Tena M.T., Rios A., Valcárcel M. Supercritical fluid extraction of phenol compounds from olive leaves // Talanta. 1998. V.46. P.1123-1130.

156. Lin M.C., Tsai M.J., Wen K.C. Supercritical fluid extraction of flavonoids from Scutellariae Radix II J. Chromatogr A. 1999. V.830. P.387-395.

157. Ramos L., Hernández L.M., González M.J. Study of the distribution of the polychlorinated biphenyls in the milk fat globule by supercritical fluid extruction // Chemosphere. 2000. V.41. P.881-888.

158. Bravi M., Bubbico R., Manna F., Verdone N. Process optimisation in sunflower oil extraction by supercritical C02 // Chem. Eng. Sci. 2002. V.57. P.2753-2764.

159. Залепугин Д.Ю., Тилькунова Н.А., Чернышова И.В., Полякова B.C. Развитие технологий, основанных на использовании сверхкритических флюидов // Сверхкритические флюиды: Теория и практика. 2006. Т.1. №.1. С.27-51.

160. Engwicht A., Girreses U., Muller B.W. Characterization of co-polymers of lactic and glycolic acid for supercritical fluid processing // Biomaterials. 2000. V.21. P.1587-1593.

161. Каныгина Э.Л., Бедрин A.K. Патент 95109015 (1997). РФ. Способ извлечения органических веществ.

162. Mendes R.L., Nobre B.R., Cardoso М.Т., Pereira A.P., Palavra A.F. Supercritical carbon dioxide extraction of compounds with pharmaceutical importance from microalgae // Inorg. Chim. Acta. 2003. V.356. P.328-334.

163. Goto M., Sato M., Kodama A., Hirose T. Application of supercritical fluid technology to citrus oil processing // Physica B. 1997. V.239. P. 167-170.

164. González-Vila F.G., Bautista J.M., Gutiérrez A., Del Rio J.C., González A.G., Supercritical carbon dioxide extraction of lipids from Eucalyptus globulus wood // J. Biochem. Biophys. Meth. 2000. V.43. P.345-351.

165. Хроматографические продукты для анализа и очистки. M.: SUPELCO, 2004. - С. 672.

166. Heaton D.M., Bartle K.D., Rayner R.M., Clifford A.A. Application of supercritical fluid extraction and supercritical fluid chromatography to the production of taxanes as anti-cancer drugs // J. High Resol. Chromatogr. 1993. V.16. P.666-670.

167. Su Sh., Wang T., Chen T., Duan J., Yu L., Tang Y. Cytotoxicity activity of extracts and compounds from Commiphora myrrha resin against human gynecologic cancer cells // J. of Medicinal Plants Research. 2011. V.5. P. 1382-1389.

168. Lui B., Lockwood G.B., Gifford L.A. Supercritical fluid extraction of diosgenin from tubers of Dioscorea nipponicall J. Chromatogr. A. 1995. V.690. P.250 253.

169. Chun M.K., Shin H.W., Lee H. Supercritical fluid extraction of taxol and baccatin III from needles of Taxus cuspidatall Biotechnol. Tech. 1994. V.8. P.547-550

170. Smith R.M., Burford M.D. GLC of supercritical fluid extracts of essential oils from the medicinal herbs, Feverfew, Tansy, and German chamomile // J. Chromatogr. Sci. 1994. V.32. P.265-269.

171. Lopez-Avila V., Benedicto J. Supercritical fluid extraction of oxindole alkaloids from Uncaria tormentosa II J. High Resol. Chromatogr. 1997. V.20. №4. P.231-236.

172. Lopez-Avila V., Benedicto J. Supercritical fluid extraction of kava lactones from Piper methysticum (kava) herb // J. High Resol. Chromatogr. 1997. V.20. №10. P.555-559.

173. Lienert D., Anklam E., Panne U. Gas chromatography-mass spectral analysis of roots of Echinacea species and classification by multivariate data analysis // Phytochem. Anal. 1998. V.9. P.88-98.

174. Dean J.R., Liu B., Price R. Extraction of Tanshinone IIA from Salvia miltiorrhiza bunge using supercritical fluid extraction and a new extraction technique, phytosol solvent extraction // J. Chromatogr. A. 1998. V.799. P.343-348.

175. Da Costa C.T., Margolis S.A., Benner B.A.J., Horton D. Comparison of methods for extraction of flavanones and xanthones from the root bark of the Osage orange tree using liquid chromatography. // J. Chromatogr. A. 1999. V.831. P.167-178.

176. Friedrich J.P., List G.R., Heakin A.J. Petroleum-free extraction of oil from soybeans with supercritical C02 // J. Am. Oil Chemists' Society. 1982. V.59. №7. P.288-292.

177. Cocero M.J., Calvo L. Supercritical fluid extraction of sunflower seed oil with C02-ethanol mixtures // J. Am. Oil Chemists' Society. 1996. V.73. №11. P.1573-1578.

178. Perakis C., Louli V., Magoulas K. Supercritical fluid extraction of black pepper oil // J. Food Eng. 2004. V.71. №4. P.386-393.

179. Porta G.D., Porcedda S., Morongiu B., Reverchon E. Isolation of eucalyptus oil by supercritical fluid extraction // Flavour and Fragr J. 1999. V.14. P.214-218.

180. Taniguchi M., Nomura R., Kijima I., Kobayashi T. Preparation of defatted mustard by extraction with supercritical carbon dioxide // Agricul. Biolog. Chem. 1987. V.51. P.413-417.

181. Ronyai E., Simandi B., Tomoskozi S., Deak A., Vigh L., Weinbrenner Z. Supercritical fluid extraction of corn germ with carbon dioxide-ethyl alcohol mixture // J. Supercrit. Fluids. 1998. V.14. №1. P.75-81.

182. Friedrich J.P., Pryde E.H. Supercritical C02 extraction of lipid-bearing materials and characterization of products // J. Am. Oil Chemists' Society. 1984. V.61. P.223-228.

183. Sovova H., Komers R., Kucera J., Jez J. Supercritical carbon dioxide extraction of caraway essential oil // Chem. Eng. Sci. 1994. V.49. P.2499-2505.

184. Gopalakrishnan N., Narayanan C.S. Supercritical carbon dioxide extraction of cardamom//J. Agric. Food Chem. 1991. V.39. P. 1976-1978.

185. Ge Y., Yan H., Hui B., Ni Y., Wang S., Cai T. Extraction of natural vitamin E from wheat germ by supercritical carbon dioxide // J. Agric. Food Chem. 2002. V.50. P.686-689.

186. Poiana M., Fresa R., Mincione B. Supercritical carbon dioxide extraction of bergamot peels: extraction kinetics of oil and its components // Flavour Fragr. J. 1999. V.14. P.358-366.

187. Dunford N.T., Temelli F. Extraction and fractionation of canola phospholipids with supercritical carbon dioxide and ethanol mixture // J. Am. Oil Chemists' Society. 1995. V.70. P.1009-1015.

188. Favati F., King J.W., Friedrich J.P., Eskins K. Supercritical C02 extraction of carotene and lutein from leaf protein concentrate // J. Food Sci.1988. V.53. №5. P.1532-1536.

189. Chao R.R., Mulvaney S.J., Swanson D.R., Hsieh F., Tempesta M.S. Supercritical C02 extraction of annatto (Bixa orellana) pigments and some characteristics of the color extracts // J. Food Sci.1991. V.56. P.80-83.

190. Favati F., King J.W., Mazzati M. Supercritical carbon dioxide extraction of evening primrose oil //J. Am. Oil Chemists' Society. 1991. V.68. №6. P.422-427.

191. Spanos G., Chen H., Schwartz S. Supercritical C02 extraction of carotene from sweet potatoes//J. Food Sci.1993. V.58. P.817-820.

192. Vega P.J., Balaban M., Sims C.A., O'Keefe S.F., Cornell J.A. Supercritical carbon dioxide extraction efficiency for carotenes from carrots by RSM // J. Food Sci.1996. V.61. P.757-759.

193. Franca L.F., Meireles M.A.A. Modeling the extraction of carotene and lipids from pressed palm oil (Elaes guineensis) fiber using supercritical C02 // J. Supercrit. Fluids. 2000. V.18. P.35-47.

194. Cadoni E., De Giorgi M.R., Medda E., Poma G. Supercritical C02 extraction of lycopene and (3-carotene from ripe tomatoes // Dyes and Pigments. 2000. V.44. №1. P.27-32.

195. Barton P., Hughes R.E., Hussein M.M. Supercritical carbon dioxide extraction of peppermint and spearmint // J. Supercrit. Fluids. 1992. V.5. №3. P. 157-162.

196. Anitescu G., Doneanu C., Radulescu V. Isolation of coriander oil: comparison between steam distillation and supercritical C02 extraction // Flavour Fragr. J. 1997. V.12. P. 173-176.

197. Luengthanaphol S., Mongkholkhajornsilp D., Douglas S., Douglas P.L., Pengsopa L.I., Pongamphai S. Extraction of antioxidants from sweet Thai tamarind seed coat: preliminary experiments // J. Food Eng. 2004. V.63. №3. P.247-252.

198. Lee W.Y., Cho Y.J., Oh S.L., Park J.H., Cha W.S., Jung J.Y., Choi Y.H. Extraction of grape seed oil by supercritical CO2 and ethanol modifier // Food Sci. Biotech. 2000. V.9. P. 174-178.

199. Pandey R., Ahmad Z., Sharma S., Khuller G.K. Nano-encapsulation of azole antifungals: Potential applications to improve oral drug delivery // Int. J. Pharm. 2005. V.301. P.268-276.

200. Huang Z., Sun G. В., Chiew Y. C., Kawi S. Formation of ultrafine aspirin particles through rapid expansion of supercritical solutions (RESS) // Powder Technol. 2005. V.160. P.127-134.

201. Richter B.E., Jones B.A., Ezzell J.L., Porter N.L., Avdalovic N., Pohl C. Accelerated solvent extraction: A technique for sample preparation //Anal. Chem. 1996. V.68. P.1033-1039.

202. ASE 200, Accelerated Solvent Extractor Operator's Manual // U.S.A.: Dionex Corp., Document No.031149, Revision 03, Sunnyvale, 1997.

203. Pawliszyn J. Kinetic model of supercritical fluid extraction // J. Chromatogr. Sci. 1993. №31. P.31-37.

204. Benthin B., Danz H., Hamburger M. Pressurized liquid extraction of medicinal plants // J. Chromatogr. A. 1999. V.837. №1-2. P.211-219.

205. Hofler F., Richter B., Felix D., Accelerated Solvent Extraction // U.S.A.: Dionex Corp., LPN0639-01 20 M 8/95.

206. Lide D.R. Handbook of chemistry and physics. Florida: CRC Press, 1993. 2475 p.

207. Xianwen L., Janssen H.G., Cramers C.A. Parameters Affecting the Accelerated Solvent Extraction of Polymeric Samples // Anal. Chem. 1997. V.69. №8. P.1598-1603.

208. Jiang Y., Li P., Li S.P., Wang, Y.T., Tu P.F. Optimization of pressurized liquid extraction of five major flavanoids from Lysimachia clethroide II J. Pharm. Biomed. Anal. 2007. V.43. P.341-345.

209. Hang Y., Li S.H., Wu X.W. Pressurized liquid extraction of flavonoids from Houttuynia cordata Thunb. // Sep. Pur. Tech. 2008. V.58. P.305-310.

210. Howard L., Pandjaitan N. Pressurized liquid extraction of flavonoids from spinach // J. Food Sci. 2008. V.73. P.151-157.

211. Soltoft M., Christensen J.H., Nielsen J., Knuthsen P. Pressurised liquid extraction of flavonoids in onions. Method development and validation // Talanta. 2009. V.80. P.269-278.

212. Kawamura F., Kikuchi Y., Ohira T., Yatagai M. Accelerated solvent extraction of paclitaxel and related compounds from the bark of Taxus cuspidate II J. Nat. Prod. 1999. V.62. P.244-247.

213. Morf S., Debrunner B., Meier B., Kurth H. Automatische Probenvorbereitung von Pflanzlichen Arzneimittel // Labor Praxis. 1998. V.22. P.56-62.

214. Brachet A., Rudaz S., Mateus L., Christen P., Veuthey J.L. Optimisation of accelerated solvent extraction of cocaine and benzoylecgonine from coca leaves //J. Sep. Sci. 2001. V.24. P.865-873.

215. Kaufmann B., Christen P., Veuthey J.L. Study of factors influencing pressurised solvent extraction of polar steroids from plant material // Chromatographia. 2001. V.54. P.394-398.

216. Andersson T. Parameters Affecting the Extraction of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons with Pressurised Hot Water: Academic Dissertation. -Helsinki, 2007.

217. Uematsu M., Franck E.U. Static Dielectric Constant of Water and Steam // J. Phys. Chem. Ref. Data. 1980. V.9. №4. P.1291-1306.

218. Wagner W., PruB A. The IAPWS formulation 1995 for the thermodynamic properties of ordinary water substance for general and scientific use // J. Phys. Chem. Ref. Data. 2002. V.31. №2. P.387-535.

219. García-Marino M., Rivas-Gonalo J.C., Ibáñez E., García-Moreno C. Recovery of catechins and proanthocyanidins from winery by-products using subcritical water extraction // Anal. Chim. Acta. 2006. V.563 P.44-50.

220. Marshall W.L. Ion product of water substance, 0-1000D, 1-10,000 bars; New international formulation and its background // J. Phys. Chem. Ref. Data. 1981. V.10. P.295-304.

221. Khajavi H.S., Ota S., Kimura Y., Adachi S. Kinetics of maltooligosaccharide hydrolysis in subcritical water // J. Agric. Food Chem. 2006. V.54. P.3663-3667.

222. Rogalinski T., Herrmann S., Brunner G. Production of amino acid from bovine serum albumin by continuous subcritical water hydrolysis // J. Supercrit. Fluids. 2005. V.36. P.49-58.

223. Sasaki M., Fang Z., Fukushima Y., Adschiri T., Arai K. Dissolution and hydrolysis of cellulose in subcritical and supercritical water // Ind. Eng. Chem. Res. 2000. V.39. P.2883-2890.

224. Bjorklund E., Nilsson T., Bowadt S. Pressurised liquid extraction of persistent organic pollutants in environmental analysis // Trends Anal. Chem. 2000. V.19. P.434-441.

225. Lou X., Janssen H., Cramers C.A. Parameters Affecting the Accelerated Solvent Extraction of Polymeric Samples // Anal. Chem. 1997. V.69. №8. P.1598-1603.

226. Kronholm J., Hartonen K., Riekkola M. Analytical extractions with water at elevated temperatures and pressures // Trends Anal. Chem. 2007. V.26. P.396-412.

227. Lamoolphak W., Goto M., Sasaki M., Suphantharika M., Muangnapoh C., Prommuag C., Shotipruk A. Hydrothermal decomposition of yeast cells for production of proteins and amino acids // J. Hazard. Mater. 2006. V.137. №3. 1643-1648.

228. Wiboonsirikul J., Adachi S. Extraction of functional substances from agricultural products or by-products by subcritical water treatment // Food Sci. Technol. Res. 2008. V.14.№4.P.319.

229. Hawthorne S.B., Yang Y., Miller D.J. Extraction of Organic Pollutants from Environmental Solids with Sub- and Supercritical Water // Anal. Chem. 1994. V.66. P.2912-2920.

230. Karasek P., Planeta J., Roth M. Solubility of solid polycyclic aromatic hydrocarbons in pressurized hot water at temperatures from 313 K to the melting point // J. Chem. Eng. Data. 2006. V.51. P.616-622.r

231. Herrero M., Martin-Alvarez P.J., Senorans F.J., Cifiientes A, Ibanez E. Optimization of accelerated solvent extraction of antioxidants from Spirulina platensis microalga II Food Chem. 2005. V.93. P.417-423.

232. Wiboonsirikul J., Kimura Y., Kadota M., Morita H., Tsuno T., Adachi S. Properties of extracts from defatted rice bran by its subcritical water treatment // J. Agric. Food Chem. 2007. V.55. P.8759-8765.

233. Hata S., Wiboonsirikul J., Maeda A., Kimura Y., Adachi S. Extraction of defatted rice bran by subcritical water treatment // Biochem. Eng. J. 2008. V.40. P.44-53.

234. Richter B.E., Jones B.A., Ezzell J.L., Porter N.L., Avdalovic N., Pohl C. Accelerated solvent extraction: A technique for sample preparation //Anal. Chem. 1996. V.68. №6. P.1033-1039.

235. Liithje K. On-line coupling of pressurised hot water extraction and microporous membrane --liquid-liquid-- extraction---with- chromatography-- in- analysis of environmental samples. Doctoral thesis, University of Helsinki, Helsinki, 2004,47 p.

236. Kubatova A., Miller D.J., Hawthorne S.B. Comparison of subcritical water and organic solvents for extracting kava lactones from kava root // J. Chromatogr. 2001. V.923. P.187-192.

237. Shotipruk A., Kiatsongserm J., Pavasant P., Goto M., Sasaki M. Pressurized hot water extraction of anthraquinones from the roots of Morinda citrifolia II Biotechnol. Prog. 2004. V.20. P. 1872-1880.

238. Choi M.P.K., Chan K.K.C., Leung H.W., Huie C.W. Pressurized liquid extraction of active ingredients (ginsenosides) from medicinal plants using non-ionic surfactant solutions // J. Chromatogr. A. 2003. V.983. P. 153-162.

239. Palma M., Pineiro Z., Barroso C.G. In-line pressurized-fluid extraction-solid-phase extraction for determining phenolic compounds in grapes // J. Chromatogr. A. 2002. V.968. P. 1-7.

240. Pineiro Z., Palma M., Barroso C.G. Determination of catechins by means of extraction with pressurized liquids // J. Chromatogr. A. 2004. V.1026. P. 1-29.

241. Ju Z.Y., Howard L.R. Effects of solvent and temperature on pressurized liquid extraction of anthocyanins and total phenolics from dried red grape skin // J. Agric. Food Chem. 2003. V.51. P.5207-5212.

242. Eller F.J., Taylor S.L. Pressurized fluids for extraction of cedarwood oil from Juniperus virginianna II J. Agric. Food Chem. 2004. V.52. P.2335-2340.

243. Fernandez-Perez V., Jimenez-Carmona M.M., de Castro L.M.D. An approach to the static-dynamic subcritical water extraction of laurel essential oil: comparison with conventional techniques // Analyst. 2000. V.125. №3. P.481-485.

244. Jimenez-Carmona M.M., Ubera J.L., de Castro L.M.D. Comparison of continuous subcritical water extraction and hydrodistillation of marjoram essential oil // J. Chromatogr. A. 1999. V.855. P.625-632.

245. Chen P.Y., Tu Y.X., Wu C.T., Jong T.T., Chang C.M.J. Continuous hot pressurized solvent extraction of l,l-diphenyl-2-picrylhydrazyl free radical scavenging compounds from Taiwan Yams (Dioscorea alata) // J. Agric. Food Chem. 2004. V.52. P.1945-1950.

246. Basile A., Jimenez-Carmona M.M., Clifford A.A. Extraction of rosemary by superheated water//J. Agric. Food Chem. 1998. V.46. №12. P.5205-2509.

247. Lamm L.J., Yang Y. Off-line coupling of subcritical water extraction with subcritical water chromatography via a sorbent trap and thermal desorption // Anal. Chem. 2003. V.75. №10. P.2237-2242.

248. Ong E.S., Len S.M. Pressurized hot water extraction of berberine, baicalein and glycyrrhizin in medicinal plants // Anal. Chim. Acta. 2003. V.482. №1. P.81-89.

249. Ong E.S., Len S.M. Evaluation of pressurized liquid extraction and pressurized hot water extraction for Tanshinone I and IIA in Salvia miltiorrhiza using LC and LC-ESI-MS // J. Chromatogr. Sci. 2004. V.42. P.211-217.

250. Ozel M.Z., Kaymaz H. Superheated water extraction, steam distillation and Soxhlet extraction of essential oils of Origanum onites II Anal. Bioanal. Chem. 2004. V.379.P.1127-1132.

251. Gogus F., Ozel M.Z., Lewis A.C. Superheated water extraction of essential oils of Origanum micranthum // J. Chromatogr. Sci. 2005. V.43. P.87-92.

252. Ju Z.Y., Howard L.R. Subcritical water and sulfured water extraction of anthocyanins and other phenolics from dried red grape skin // J. Food Sci. 2005. V.70. P.270-276.

253. Mannila M., Wai C.M. Pressurized water extraction of naphtodianthrones in St. John's wort (Hypericum perforatum L.) // Green Chem. 2003. V.5. №4. P.387-391.

254. Lang Q., Wai C.M. Pressurized water extraction (PWE) of terpene trilactones from Ginkgo biloba leaves // Green Chem. 2003. V.5. P.415-421.

255. Smith R.M., Burgess R.J. Superheated Water as an Eluent for Reversed-Phase HighPerformance Liquid Chromatography // J. Chromatogr. 1997. V.785. P.49-55.

256. Rovio S., Hartonen K., Holm Y., Hiltunen R., Riekkola M.-L. Extraction of clove using pressurized hot water // Flavour Fragr. J. 1999. V.14. P.399-404.

257. Eikani M. H., Golmohammad F., Mirza M., Rowshanzamir S. Extraction of volatile oil from cumin (Cuminum cyminum L.) with superheated water // J. Food Process Eng. 2007. V.30. P.255-266.

258. Eikani M. H., Golmohammad F., Rowshanzamir S. Subcritical water extraction of essential oils from coriander seeds (Coriandrum sativum L.) // J. Food Eng. 2007. V.80. №2. P.735-740.

259. Li-Hsun C., Ya-Chuan C., Chieh-Ming C. Extracting and purifying isolavones from defatted soybean lakes using superheated water at elevated pressures // Food Chem. 2004. V.84. P.279-285.

260. Sereewatthanawut S., Prapintip S., Watchiraruji K., Goto M., Sasaki M., Shotipruk A. Extraction of protein and amino acids from deoiled rice bran by subcritical water hydrolysis // Bioresour. Technol. 2008. V.99. №3. P.555-561.

261. Jimenez-Carmona M. M., de Castro L.M. D. Isolation of eucalyptus essential oil for GC-MS analysis by extraction with subcritical water // Chromatographia. 1999. V.50. P.578-582.

262. Ho C.H.L., Cacace J.E., Mazza G. Extraction of lignans, proteins and carbohydrates from flaxseed meal with pressurized low polarity water // LWT-Food Sci. Technol. 2007. V.40. P.1637-1647.

263. Anekpankul T., Goto M., Sasaki M., Pavasant P., Shotipruk A. Extraction of anti-cancer damnacanthal from roots of Morinda citrifolia by subcritical water // Sep. Pur. Tech. 2007. V.55. P.343-349.

264. Kubatova A., Lagadec A.J.M., Miller D.J., Miller S.B. Selective extraction of oxygenates from savory and peppermint using subcritical water // Flavour Fragr. J. 2001. V.16. P.64-75.

265. Moldoveanu S.C., David V. Solvent Extraction in Sample Preparation in Chromatography. Amsterdam: Elsevier, 2002. - P.322-327.

266. Hartonen K., Meissner G., Kesala T. Pressurized Hot Water Extraction (PHWE) of n-Alkanes and Polyaromatic Hydrocarbons (PAHs): Comparison for PAHs with Supercritical Fluid Extraction // J. Microcolumn Sep. 2000. V.12. P.412-418.

267. Yang Y., Bowadt S., Hawthorne S.B. Subcritical Water Extraction of Polychlorinated Biphenyls from Soil and Sediment // Anal. Chem. 1995. V.67. P.4571-4576.

268. Curren, M.S.S., King, J.W. Solubility of triazine pesticides in pure and modified subcritical water// Anal. Chem. 2001. V.73. P.740-745.

269. Herrero M., Cifuentes A. Sub- and supercritical fluid extraction of functional ingredients from different natural sources: plants, food by-products, algae and microalgae // Food Chem. 2006. V.98. P.136-148.

270. Тимофеев Н.П. Достижения и проблемы в области изучения, использования и прогнозирования биологической активности экдистероидов // Бутлеровские сообщения. 2006. Т.8. №2. С.7-35.

271. Ong E.S., Cheong J.S.H., Goh D. Pressurized hot water extraction of bioactive or marker compounds in botanicals and medicinal plant materials // J. Chromatogr. A. 2006. V.1112. №1-2. P.92-102.

272. Куркин B.A. Фармакогнозия. // Учебник для студентов фармацевтических вузов (факультетов). 2-е издание. Самара: Изд-во ООО «Форт», 2007. -1239 С.

273. Другов Ю.С., Зенкевич И.Г., Родин А.А. Газохроматографическая идентификация загрязнений воздуха, воды, почвы и биосред.// Практическое руководство. 2-ое издание перераб. и дополн. М.: Бином. Лаборатория знаний, 2005. - С. 12-34.

274. Столяров Б.В., Савинов Н.М., Витенберг А.Г. и др. // Практическая газовая и жидкостная хроматография. / Учебное пособие.- СПб: Изд-во С.Петербург. ун-та, 1998 С. 232-253.

275. Зенкевич И.Г. Нетрадиционные критерии хроматографической и хромато-масс-спектрометрической идентификации органических соединений. // Журн. аналит. химии, 1998. Т. 53. №8. - С. 828-835.

276. Gazcia М.А., Sanz J. Analysis of origanum vulgare by direct thermal desorption coupled to gas chromatography mass spectrometry. // J. Cromatogr. A., 2001. 918. P. 189-194.

277. Карасек Ф., Клемент Р. Введение в хромато-масс-спектрометрию. Пер. с англ. М: Мир, 1993. - 237 С.

278. ЗМ.Баффингтон Р. Применение атомно-эмиссионной спектроскопии в высокочастотном разряде для газовой хроматографии. Пер. с англ. М.: Мир, 1994.-78 С.

279. Гольберт K.A., Вигдергауз M.C. Введение в газовую хроматографию. М.: Химия, 1990.-352 с.

280. Высокоэффективная газовая хроматография/ Под ред. К. Хайвер. М.: Мир, 1993.-288 с.

281. Колб Б. Газовая хроматография с примерами и иллюстрациями / пер. с нем. под ред. J1.A. Онучак, 2-е изд., перераб. и доп. Самара: изд-во «Самарский университет», 2007. - 247 с.

282. Яшин Я.И., Яшин Е.Я., Яшин А.Я. Газовая хроматография. М.: Изд-во «ТрансЛит», 2009. 528 с.

283. Арутюнов Ю.И., Вигдергауз М.С. Аппаратурно-методическая реализация некоторых специфических особенностей хроматографии // Журн. аналит. химии, 1994. Т.49. №8. С.796-803.

284. Арутюнов Ю.И., Курбатова С.В., Платонов И.А., Кудряшов С.Ю., Медведева М.Э. Способ определения мольных коэффициентов чувствительности детекторов по теплопроводности и ионизации пламени. Патент РФ № 2137123 от 10.09.1999.

285. Арутюнов Ю.И., Онучак Л.А., Кудряшов С.Ю., Гузенко О.Г. Хроматографический способ определения молекулярной массы. Патент РФ № 2145709 от 20.02.2000.

286. Арутюнов Ю.И., Онучак Л.А., Кудряшов С.Ю. Газохроматографическнй анализ смесей, содержащих неизвестные компоненты. Определение молекулярной массы // Журн. аналит. химии, 2004. Т.59. №4. С.1-9.

287. Арутюнов Ю.И., Кудряшов С.Ю., Онучак Л.А. Газохроматографическнй анализ смесей, содержащих неизвестные компоненты. Определение температуры кипения // Сорбционные и хроматографические процессы, 2005. Т.5. №4. С.578-589.

288. Берёзкин В.Г., Лощилова В.Д., Панков А.Г., Ягодовский В.Д. Хромато-распределительный метод. М.: Наука, 1976. - 112 с.

289. Рабинович В.А., Хавин З.Я. Краткий химический справочник. Изд-е 2-ое, испр. и доп. М.: Химия, 1978. - 392 с.

290. Мс Reynolds W.O. Gas chromatographic retention Data. Evanston. PRESTON Technical organic compounds. Eds. Pacokova V., Felte L. Ellis Harwood, Ltd., 1992.-285 p.

291. Вигдергауз М.С., Семенченко Л.В., Езрец В.А., Богословский Ю.Н. Качественный газохроматографический анализ. M.: «Наука», 1978. -244 с.

292. Кочетова М.В., Семенистая E.H., Ларионов О.Г., Ревина A.A. Определение биологически активных фенолов и полифенолов в различных объектах методами хроматографии // Успехи химии, 2007. Т.76. Вып. 1. С.88-100.

293. Зилфикаров И.Н., Челомбитько В.А., Алиев A.M. Обработка лекарственного растительного сырья сжиженными газами и сверхкритическими флюидами. Пятигорск, 2006. - 243 с.

294. Волоцуева A.B. Фитохимическое исследование по созданию гепатопротекторных лекарственных средств на основе плодов расторопши пятнистой: атореферат диссертации .кандидата фармацевтических наук / СамГМУ Самара, 2004. - 22 с.

295. Государственная фармакопея СССР. XI издание. Москва: Медицина, 1991. Выпуск 2. С. 147-148.

296. Куркин В.А., Лебедев A.A., Авдеева Е.В. Спопосб получения экстракта расторопши пятнистой. Патент РФ №2102999 от 07.09.1996. // Бюл. изобр. №10 от 27.01.1998.

297. G. Tittel, H. Wagner. Hochleistungsflüssigchromatographie von Silymarinen. II. Quantitative Bestimmung von Silymarin aus Silybum marianum durch Hochleistungsflüssigchromatographie // J. Chromatogr. 1978. Vol. 158. P. 227-232.

298. Минахметов P.A., Онучак Л.А., Куркин B.A., Авдеева E.B., Волоцуева A.B. Анализ флавоноидов в плодах Silybum marianum методом высокоэффективной жидкостной хроматографии // Химия природных соединений. 2001. Т. 37. №4. С. 318-321.

299. Дёрффель К. Статистика в аналитической химии / Пер. с нем. М.: Мир, 1994.

300. ГОСТ Р ИСО 5725-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений.