Полимерные комплексы сорбиновой кислоты и их антифунгальное действие тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.06 ВАК РФ

На правах рукописи

СУПРУН ОЛЬГА ВАСИЛЬЕВНА

Полимерные комплексы сорбиновой кислоты и их антифунгальное действие

Специальность: 02.00.06 - Высокомолекулярные соединения

Автореферат

Диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Москва - 2006

Работа выполнена в Российском химико-технологическом университете

имени Д.И.Менделеева

Научный руководитель Официальные оппоненты

Ведущая организация

доктор химических наук, профессор Штильман М.И.

доктор химических наук, профессор Ямсков И. А.

доктор химических наук, профессор Коршак Ю.В. Московская государственная академия тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова

Защита состоится «01» ноября 2006 г. в часов на заседании

Диссертационного совета Д 212.204.01 в Российском химико-технологическом университете им. Д.И.Менделеева (125047 Москва, Миусская площадь, д.9.) в ауд. 443.

С диссертацией можно ознакомиться в Информационно-библиотечном центре РХТУ им. Д.И.Менделеева

Автореферат разослан «29» сентября 2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Д 212.204.01, доцент, кандидат технических наук

Л.ФЛСлабукова

1. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Создание биологически активных систем, обладающих повышенной эффективностью, имеет большое значение для разработки новых типов препаратов, предназначенных для применения в медицине, биотехнологии, сельском хозяйстве, пищевой и косметической промышленности.

Одним из направлений разработки таких систем, привлекающих в последнее время широкое внимание, является использование биологически активных веществ в виде форм с контролируемым выделением этих веществ. В большинстве случаев такие формы содержат макромолекулярные компоненты, связанные с выделяющимся активным веществом лабильной (чаще всего за счет гидролиза) связью.

В частности, для таких препаратов, обладающих пролонгированным (контролируемым) действием, важную роль играет прочность связи полимерного носителя и выделяющегося активного вещества. В большинстве случаев связывание компонентов системы реализуется за счет образования между ними гидролизуемой ковалентной, реже ионной, связями.

В то же время, для препаратов с ингибирующей и биоцидной активностью, когда требуется обеспечить высокую концентрацию активного вещества уже в начальные периоды действия, эффективность препарата может обеспечить образование более слабой связи полимерного носителя и иммобилизованного вещества, например, водородной связи.

Несмотря на то, что получение таких полимерных комплексов осуществляется значительно проще, чем систем с ковалентной связью, разработка эффективных препаратов на их основе сдерживается недостаточной изученностью взаимосвязи их строения и активности.

В связи с этим, большое значение имеют выбор технологически доступных методов получения таких систем и оптимизация их строения в соответствии с требуемыми свойствами.

В том числе это относится к препаратам, обладающим фунгицидным и фу и ги стати чески м действием, находящим применение в различных областях.

Цели и задачи исследования. Целью работы является получение новых полимерных производных сорбиновой кислоты (полимерных комплексов с п о л и-N-ви н и л п и ррол и до н ом и полимерных эфиров на основе эпоксидсодержащего поли-Ы-винилпирролидона), обладающих

антифунгальной активностью по отношению к микроскопическим грибам, и исследование влияния их строения на свойства и активность. Выбор данного активного вещества в том числе связан с его весьма низкой побочной токсичностью для человека и широкими возможностями практического применения.

v Научная новизна.

• Получены полимерные комплексы сорбиновой кислоты и поли-Ы-винилпирролидона широкого ряда молекулярных масс (от 2 до 360 тыс), исследованы их свойства и показана высокая антифунгальная активность против различных типов микроскопических грибов.

• Исследованием ИК-спектров системы «полимер-кислота» установлено, что взаимодействие ее компонентов реализуется с участием водородной связи между водородом карбоксильной группы и кислородом карбонильной группы пирролидового кольца полимера, причем с использованием диализа, вискозиметрии и метода конкурентного комплексообразования показано, что устойчивость комплексов поли-Ы-винилпирролидона и сорбиновой кислоты повышается с увеличением молекулярной массы полимера,

• Установлено, что уровень антифунгальной активности иммобилизованной на полимерном носителе сорбиновой кислоты (на примере Fusarium oxysporum f. radicis-cucumerinum N-IO, Candida albicans TEI 101, Candida tropicais TEI 184, Aspergilus parasiticus 1130, Pénicillium viridcatum CA 100) определяется прочностью ее связи с полимерным носителем, повышаясь с

ее уменьшением, причем активность полимерных комплексов сорбиновой кислоты с п о л и -N-ви ни л п ирр о л и д он ом превышает активность самой кислоты, сорбата калия и ее полимерных эфиров.

Практическая значимость. Показано, что полученные системы могут найти применение в ряде пищевых технологий, в частности для создания грибоустойчнвой бумажно-полимерной упаковки и оболочки пищевых продуктов.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены на Международных конференциях Biomed 2002 (IXlh International Symposium on Biomedical Science and Technology [19-22 Sept. 2002, Kemer-Antalya, Turkey], European Material Research Society. Fall Meeting [Warshaw, 15-19 September, 2003], «Биологически активные полимеры: Синтез, свойства и применение» [Ташкент, 2003] и XIV, XV и XVI Международных конференциях молодых ученых [2002, 2003, 2004, Москва].

Публикации. Основные положения и результаты работы изложены в 13 печатных работах, в том числе, 5 статьях в журналах и сборниках, 3 тезисах докладов и 4 депонированных рукописях. 1 статья отправлена в печать.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на _

страницах, состоит из введения, обзора литературы, обсуждения результатов,

экспериментальной части, выводов, списка литературы; содержит_таблиц,

_рисунков,_библиографических ссылок.

2. Полученные результаты и их обсуждение Как известно, сорбиновая кислота (СК), являющаяся известным антифунгальным агентом, обладающим низкой токсичностью и широко используемым в пищевой промышленности, медицине, биотехнологии является наиболее активной в ряду низкомолекулярных карбоновых кислот, обладающих антифунгальной активностью.

В то же время, недостаточная растворимость СК и невысокая устойчивость самой кислоты и ее солей в жидких средах, их подверженность побочной

биодеградации позволяют предположить, что эффективность сорбиновой кислоты может быть увеличена при ее использовании в виде «систем с контролируемым выделением активного вещества».

В данной работе в качестве таких систем были рассмотрены полимерные комплексы и полимерные эфиры СК, способные выделять свободную кислоту со скоростью, зависящей от строения системы и влияющей на уровень биологической активности.

2.1. Получение полимерпых производных сорбиновой кислоты на основе полн-ТЧ-внннлпирролидона

В качестве полимерного ностеля для получения полимерных комплексов в работе был использован по л и-1Ч- в и н и л п и рр о л и д он (ПВП), который, как известно, образует комплексы с различными соединениями, что, в частности, определяет его широкое использование в качестве компонента кровезаменителей-дезиитоксикаторов и носителя различных лекарственных препаратов. В работе для получения комплексов были использованы полимеры Ы-в и н и л п и рролидона с различной молекулярной массой.

Для исследования и препаративного получения полимерных комплексов было использовано взаимодействие полимерного носителя и кислоты в среде этанола с последующим выделением образовавшегося комплекса осаждением в диэтиловый эфир. Полимерные комплексы могут быть получены и в водной среде.

Исследование влияния на состав полученных полимерных комплексов условий получения показало, что содержание СК в более высокомолекулярных комплексах было ниже (Рис.1), Можно предположить, что это явление связано с более затрудненным образованием комплексов в случае высокомолекулярных полимеров, что возможно объясняется меньшей доступностью их карбонильных групп при более крупном макромолекулярном клубке, особенно, как будет показано ниже, в условиях его компактизации при связывании годрофобных молекул кислоты.

Рис. 1. Влияние молекулярной массы п ол и -К-в и н и л п и рро л и д о на на содержание сорбиновой кислоты в комплексах (Т = 70°С, соотношение 1:1 осново-моль/моль).

На рис, 2 приведена зависимость количества связанной кислоты от ее

количества, введенного в систему.

моль СК/осново-моль ПВП

Рис. 2. Влияние соотношения СК:ПВП на содержание сорбиновой кислоты в комплексах (Т=70°С, М= 10x103). 1 - % масс., 2-% мольн.

Содержание сорбиновой кислоты в комплексах, полученных на основе полимеров с различной молекулярной массой (ПК-10, ПК-25, ПК-30, ПК-40, ПК-90,

ПК-360, где цифра обозначает тысячи молекулярной массы) в различных исследованных образцах было от 2,5 до 12,0 масс.% (2,56 - 14,0 мольн.%).

Для сравнения свойств полимерных комплексов сорбиновой кислоты с другими ее полимерными производными, в которых кислота связана с полимерным носителем гидролизуемой ковалентной связью, в работе были получены ее полимерные эфиры, которые были синтезированы взаимодействием кислоты с эпоксидированным полимером Ы-винилпирролидоном в среде сухого диметилформамида при 100°С:

_СН2-СН—• - -снг-сн

I о +НОСХЖ_ I I II

0 11 N ,С—С-ЫН2

-^с-ш, ? X

о \—/ о-с-я

II

о

В этом случае были использованы образцы полимера с различной молекулярной массой (10, 40, 360*Ю3) и приблизительно одинаковым содержанием эпоксидных групп (7-11 молн.%) и содержанием звеньев со связанной кислотой (3,4-5,1 молн.%).

Содержание сорбиновой кислоты в ее иммобилизованных формах определяли по поглощению в УФ-областн (X = 254 нм).

2.2. Строение н структура полимерных комплексов.

Для исследования строения комплексов был использован ИК-спектральный анализ. Наличие на спектрах поглощения в области 2500-2800 см'1, отсутствующего на спектре кислоты и на спектре полимера и соотвествующего колебанию водородной связи типа С=0—Н-0-, позволяет полагать, что образование комплекса протекает с участием гидроксила карбоксильной группы и карбонила кольца пирролидона:

■СН2—СН— I

N

о-- - ноос-и. — СН=СН-СН=СН-СН3

При этом, для самой кислоты поглощение, соответствующее водородной связи, проявляется в области 2000-2200 см'1 и не наблюдается в случае комплекса, что подтверждает, что большинство молекул кислоты в системе (в рамках точности метода) находится в виде Н-комплекса с полимером.

Комплексообразование полимеров Ы-ви ни л п ирр о л и до н а с сорбиновой кислотой приводило к нарушению ее кристаллической структуры. На рентгенограммах систем на основе ПВП с различной молекулярной массой (2.6, 10, 40, 360x103) и СК не наблюдаются рефлексы кристаллической решетки кислоты. Можно предположить, что аморфизация системы, наблюдаемая в этом случае, объясняется распределением отдельных молекул кислоты по полимерной цепи в процессе образования полимерного комплекса.

2.3. Свойства полимерных комплексов сорбиновой кислоты и поли-1Ч-виннлпирролидона Вероятно, на выделение активного вещества в случае полимерных комплексов влияет не только образование водородной связи между носителем и иммобилизованной СК, но также и уплотнение макромолекулярного клубка, наблюдаемое при связывании сорбиновой кислоты с полимером. Это было показано исследованием вискозиметрических свойств, светорассеяния растворов полимерных комплексов и методом конкурентного комплексообразования.

Вязкость разбавленных растворов. Комплексообразование поли-Ы-винилпирролидона с низкомолекулярными веществами приводит к изменению конформации полимера, проявляющееся в увеличении плотности макромолекулярного клубка, что объясняется введением в макромолекулярную систему боковых гидрофобных фрагментов. Так, определение

характеристической вязкости разбавленных растворов показало снижение последней в случае комплекса по сравнению со свободным полимером уже при введении в раствор 2 мол.% СК, что, вероятно, определяется повышением общей гидрофобности системы после связывания с поли-Ы-винилпирролидоном кислоты, содержащей длинноцепной алифатический радикал.

Светорассеяние водных растворов. В работе факт компактизации макромолекулярного клубка п о ли-Ы- в и ни л пиррол ид он а при связывании с ним сорбиновой кислоты был подтвержден исследованием светорассеяния растворов полимерных комплексов. Эти исследования позволили определить эффективные гидродинамические радиусы комплексов (Яь) используя уравнение Стокса-Эйнштейна.

25 п

20

"е я

10 -. 5 -

0 "Т-'-1-1-1--1-1-1-(

0 100000 200000 300000 400000

Рис.3. Эффективный гидродинамический радиус ПВП и ПВП/СК комплексов как функция от молекулярной массы полимеров.

Как было показано (рис.3), введение СК в систему вызывает значительное понижение размеров макромолекулярных клубков полимера, в который введена связанная кислота.

Как видно, соотношение эффективных гидродинамических радиусов чистого п ол и-Ы- в ини л п ирролидона и его комплексов с СК зависят от

молекулярной массы полимеров. Причем степень компактизации при увеличении молекулярной массы повышается. При этом во всех случаях эффективные гидродинамические радиусы комплексов ниже, чем у соотвествующих полимерных носителей.

Исследование конкурентного комплексообразовання. Склонность СК к образованию комплекса с ПВП была оценена также методом конкурентного связывания. Этот метод основан на исследовании спектров флуоресценции двух систем - системы, содержащей ПВП и флуоресцентный краситель и системы, содержащей ПВП, флуоресцентный краситель и СК.

В качестве флуоресцентного зонда в работе была использована Ы-фенил-1-нафтиламин-8-сульфокислота (1-анилинонафтил-8-сульфокислота) (АНСК), находящаяся в свободном состоянии в виде не флуоресцирующего димера:

и образующая флуоресцирующий комплекс состава 1 молекула АНСК на 1 звено полимера за счет водородной связи между -ЗО^Н группой и кослородом карбонила пирролидонового кольца.

При наличии в системе СК - конкурента в связывании АНСК с полимером, уровень флуоресценции снижался.

Как было показано, интенсивность флуоресценции, с одной стороны, увеличивается с увеличением количества введенной АНСК, а с другой стороны, проявляется зависимость между интенсивностью флуоресценции и молекулярной массой используемого полимера. Наибольшая величина

интенсивности флуоресценции наблюдается для ПВП с молекулярной массой 360*103 и уменьшается с уменьшением молекулярной массы.

Зависимость между интенсивностью флуоресценции и молекулярной массой полимера для систем, содержащих СК и АНСК представлена на рис.4.

Рис.4. Интенсивность флуоресценции растворов ПВП различной молекулярной массы, содержащих АНСК или АНСК и СК (Х=475 нм, [АНСК]= 6><1 О*4 моль/л, [ПВП] = [СК] =1,2 хЮ"4 осново-моль/л (моль/л).

Равновесный диализ. Для исследования уровня связывания сорбиновой кислоты в заранее приготовленных комплексах с ПВП в работе был использован метод равновесного диализа через полупроницаемую мембрану (диализные мешки на основе целлюлозы).

При исследованиях были использованы предварительно диализованные через эти же мембраны образцы ПВП молекулярной массы 10 и 360* 10\ Содержание СК в исследованных при диализе комплексах соответствовало 3 мольн.% звеньев, содержащих связанную СК. Количество выхода кислоты через диализную мембрану оценивали по поглощению при длине волны 254 нм.

Изменение интенсивности поглощения вне диализного мешка при помещении в него раствора комплекса сорбиновой кислоты и полимера с молекулярной массой 10 и 360 * 10'3 показано на рис. 5.

[СК]х1<Л моль/л 1

Время, часы

Рис,5. Зависимость количества выхода СК из водного раствора (1), из комплекса СК и ПВП с М = 10x103 (2), комплекса СК и ПВП с М=360х103 (3) через диализную мембрану от времени. Температура 24°С. [СК] = 0,5x10"4, [ПВП] = 0,5*10*3. X = 254 нм.

Как видно, в случае комплексов скорость выхода СК снижалась с увеличением молекулярной массы полимера, что указывает на большую устойчивость комплексов, образовавшихся на основе ПВП с большей молекулярной массой.

Таким образом, комплексы АНСК и ПВП образуются легче в случае более низкомолекулярных полимеров. Однако, с другой стороны, уже образовавшиеся комплексы более устойчивы в случае более высокомолекулярных полимеров.

Причем, даже в случае такой слабой связи, как водородная, иммобилизация СК на полимерном носителе существенно изменяет свойства системы, что сказывается на скорости выделения активного вещества и

отражается на биологической активности полимерных комплексов по сравнению с самой кислотой.

По-видимому, существенное влияние на выход кислоты оказывает и установленная выше степень компактизации макромолекулярного клубка.

2.4. Биологическая активность полимерных производных

сорбииовой кислоты

В работе были исследованы особенности биологической активности полимерных производных сорбиновой кислоты, связанных с полимерными носителями различными типами связи - водородной связью и ковалентной гидролизуемой (в данном случае - сложной эфирной).

Сравнительное исследование антифунгальной активности трех полимерных эфиров и трех полимерных комплексов, полученных на основе полимеров с молекулярной массой 10, 40 и 360 х 10\ Сравнение активности полимерных эфиров и полимерных комплексов проводили на культуре Fusarium oxysporum f. radicis-cucumerinum N-JO. Опыты проводили методом агаровых блочков в течение шести дней, при 27°С, рН=6.4.

На рис. 6 показана сравнительная эффективность ингибирующего действия этих полимерных производных по окончании эксперимента.

Как видно, во-первых, во всех случаях антифунгальная активность для полимерных носителей с одинаковой молекулярной массой значительно выше в случае полимерных комплексов, и во-вторых, во всех случаях активность повышается с уменьшением молекулярной массы полимеров.

Было показано, что антифунгальная активность повышается с уменьшением молекулярной массы полимерного носителя при действии комплексов и на другие типы микроскопических грибов, например, относящихся к группам плесени (Aspergillus prasiticus и Penicillum viridicatum) и дрожжей {Candida tropicallis и Candida albicans) (Таблица 1).

45т

40 +

35

#30-«г s

¡25 +

8.

ё2

* .i S 15"

10-

— о

¡S

¡sí

ч-о

о О ¡é о

¡I

о tí о и о So

D I -

VO

Атк^галшьй aratr

Рис. 6. Степень ингибирования роста колонии культуры Fusarium oxysporum f. radicis-cucumerimtm N-10 (6 дней, 27°C, pH=6.4) для различных полимерных производных сорбиновой кислоты.

Концентрация (мл)

Рис. 7. Зависимость степени ингибирования роста колонии культуры Fusarium oxysporum f. radicis-cucumerinum N-10 (6 дней, 27°C, pH=6,4) для различных полимерных комплексов сорбиновой кислоты при различной ее концентрации в комплексах.

Таблица 1

Минимальная ингибирующая концентрация сорбиновой кислоты (СК), сорбата калия (К-С) и полимерных комплексов (ПК) сорбиновой кислоты и поли-Ы-винипирролидона различной молекулярной массы при действии на различные культуры.

Культура МИК, мкг/мл

СК К-С ПК-10 ПК-25 ПК-30 ПК-40 ПК-90 ПК-360

Candida albicans TEI101 1000 >1000 250 300 400 500 700 1000

Candida tropicais TEI184 1000 >1000 300 400 500 600 800 >1200

Aspergilus parasiticus 1130 300 500 100 150 200 250 300 500

Pénicillium viridcatum С A 100 500 750 200 250 300 350 500 750

Заметное различие в активности самой СК и ее комплексов было выявлено и в опытах по исследованию способности к росту колоний культур (Candida tropicalis TEI 184 и Aspergillus parasiticus 1130) после отмывки от среды, содержащей антифунгальный агент.

Как было показано, сама сорбиновая кислота и более высокомолекулярные комплексы оказывают фунгистатическое действие. С другой стороны, в случае комплекса с низкомолекулярным полимерным носителем при длительном культивировании в присутствии антифунгального агента наблюдается фунгициное действие вводимого антифунгального агента (полученные данные приведены в работе).

Таким образом, во всех исследованных случаях повышение активности систем с иммобилизованным антифунгальным агентом проявляется в большей степени при ослаблении прочности связи между носителем и иммобилизованным активным веществом, как это имеет место в случае

перехода от полимерных эфиров к полимерным комплексам или при уменьшении молекулярной массы полимерного носителя.

2.5. Возможности применения

Полученные полимерные комплексы СК представляют собой системы, хорошо растворимые в воде и большинстве органических растворителей и образуют при нанесении из раствора прозрачные гомогенные пленки, обладающие антифунгальной активностью.

Как было показано (опыты проводились в Проблемной лаборатории полимеров и Испытательном центре Московского государственного университета прикладной биотехнологии), комплексы ПВП и СК могут быть использованы в качестве антифунгальных добавок к полимерным латексам, используемым для покрытия сыров, и для пропитки бумажной упаковки продуктов, снижая их осемененность микроорганизмами.

3. Выводы

1. Впервые получены водорастворимые полимерные комплексы сорбиновой кислоты и поли-Ы-винилпирролидона широкого ряда молекулярных масс (от 10 до 360 тыс), исследованы их свойства и показана высокая антифунгальная активность против различных типов микроскопических грибов. Взаимодействием эпоксидсодержащего поли-Ы-винилпирролидона различной молекулярной массы и сорбиновой кислоты получен ряд ее водорастворимых полимерных эфиров.

2. Исследованием ИК-спектров системы «поли-ЬГ-винилпирролндон -сорбиновая кислота» установлено, что их взаимодействие реализуется с участием водородной связи между водородом карбоксильной группы и кислородом карбонильной группы пирролидового кольца полимера. Изучением рентгенограмм комплексов показано, что при этом нарушается кристаллическая система кислоты.

3. Определением вязкости разбавленных водных растворов комплексов и методом светорассеяния показано, что комплексование поли-Ы-

винилпирролидона и сорбиновой кислоты приводит к уплотнению макромолекулярного клубка, проявляющемуся в большей мере для более высокомолекулярных полимеров.

4. Методами конкурентного комплексообразования, диализа и исследованием особенностей получения комплексов установлено, что образование и разрушение комплексов происходят легче в случае более низкомолекулярных полимеров.

5. Показана высокая активность комплексов поли-И-винилпирролидона и сорбиновой кислоты по отношению к микроскопическим грибам различных групп. При этом антифунгальная активность полимерных производных сорбиновой кислоты повышается с уменьшением прочности ее связи с полимерным носителем, причем активность полимерных комплексов сорбиновой кислоты с п ол и-N- ви н и л п и рр о л и дон о м превышает активность самой кислоты, сорбата калия и полимерных эфиров сорбиновой кислоты.

6. Показано, что полученные полимерные комплексы, обладающие хорошей растворимостью в воде и в полярных органических растворителях и способные к образованию пленок, могут быть использованы для создания антифунгальных покрытий пищевых продуктов и пропитки бумаго-полимерных упаковочных материалов.

Список работ по теме диссертации

1. Штильман М.И., Супрун О.В., Tzatzarakis Е., Лоттер М.И., Лебедева Т.Л., Харенко A.B., Tsatsakis A.M. Комплексы п ол n-N-ви н и л пиррол ид о н а и сорбиновой кислоты. // Пластические массы, 2004, № 2, С.23-27.

2. Снежко А.Г., Федотова A.B., Борисова З.С., Филинская Ю.А., Штильман М.И., Супрун О.В. Использование полимерных комплексов сорбиновой кислоты для получения антимикробных покрытий пролонгированного действия из полимерных латексов. // Лакокрасочные материалы и их применение, 2006, № 10, С.25-32.

3. Супрун О.В., Садовский С.Н., Шашкова И.М., Штильман М.И. Иммобилизация фунгицида сорбиновой кислоты на полимерных носителях. // Успехи в химии и химической технологии, 2002, Т.16, №3(20), С.63.

4. Супрун О.В., Лоттер М.М., Штильман М.И. Исследование полимерных комплексов сорбиновой кислоты, // Успехи в химии и химической технологии, 2003, Т.17, J&5, 118-125.

5. Супрун О.В., Ловягин Дм.А., Штильман М.И, Биологическая активность полимерных комплексов сорбиновой кислоты и п о л и-N-в и н и л пи рро л и дон а. // Успехи в химии и химической технологии, 2004, Т. 18, №2 (42), С.79-82.

6. Исследование физико-химических свойств комплексов сорбиновой кислоты и поли-N-винилпирролидона / Штильман М.И., Супрун О.В., Лоттер М.М., Tzatzarakis Е., Tsatsakis A.M., Депонир.рукопись (ВИНИТИ), № 2069-В-2003 от 28.11.03.

7. Исследование полимерных комплексов сорбиновой кислоты методом равновесного диализа / Штильман М.И., Супрун О.В., Лоттер М.М., Tzatzarakis Е„ Tsatsakis A.M., Депонир.рукопись (ВИНИТИ) № 2070-В-2003 от 28.11.03.

8. Фунгицидная активность сорбиновой кислоты и полимерных производных / Штильман М.И., Супрун О.В., Лоттер М.М., Tzatzarakis В., Tsatsakis A.M. Депонир.рукопись (ВИНИТИ) № 2071 -В-2003 от 28. И .03.

9. Фунгицидная активность сорбиновой кислоты, ряда органических кислот и их солей / Штильман М.И., Супрун О.В., Лоттер М.М., Tzatzarakis Е., Tsatsakis A.M. Депонир.рукопись (ВИНИТИ) № 2072-В-2003 от 28.11.03,

10.Tsatsakis А.М., Manolis N.Tzatzarakis, Suprun O.V., Shtilman M.I. Polymeric derivatives of sorbic acid - water-soluble preparations for fungicide activity. // Biomed 2002 (IXth International Symposium on Biomedical Science and Technology [19-22 Sept. 2002, Kemer-Antalya, Turkey], 2002, P-48.

П.Супрун O.B., Лоттер M,M., Тзатзаракис Э., Тсатсакис А.М., Штильман М.И. Полимерные комплексы сорбиновой кислоты. // Тезисы докл. Международной конференции «Биологически активные полимеры: Синтез, свойства и применение» [Ташкент, 2003].- АН Респ.Узбекистан-2003, с.64.

12.Suprun O.V., Lotter М.М., Shtilman M.I., Tsatsakis A.M. Polymeric complexes of sorbic acid, // Тезисы докл. European Material Research Society. Fall Meeting [Warshaw, 15-19 September, 2003].- 2003, P.168.

Заказ № 638. Объем 1пл. Тираж ЮОэкз. Отпечатано в ООО «Петроруш» г.Москва,ул.Палиха 2а.тел .250-92-06 www.postitar.ru

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Полимерные системы с антифунгальной активностью»

2.1. Общие положения

2.2. Методы синтеза полимерных производных низкомолекулярных антифунгальных агентов

2.2.1. Иммобилизация металлорганических соединений

2.2.1.1. Полимеризация и сополимеризация

2.2.1.2. Реакции с полимерными носителями

2.2.2. Полимерные комплексы йода

2.2.3. Полимерные производные синтетических органических и элемеитоорганических антифунгальных агентов

2.2.3.1. Полимерные производные фенолов

2.2.3.2. Полимерные производные гетероциклических соединений

2.2.3.3. Полимерные производные других синтетических антифунгальных соединений

2.2.3.4. Полимерные производные антибиотиков

2.3. Гидролиз полимерных производных низкомолекулярных антифунгальных агентов

2.4. Биологическая активность макромолекулярных антифунгальных агентов

2.4.1. Полимерные производные низкомолекулярных антифунгальных агентов

2.4.2. Полимеры с собственной биологической активностью

2.4.3. Полимеры с неясным механизмом действия

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

3.1. Получение и свойства полимерных комплексов сорбиновой кислоты

3.1.1. Общие положения

3.1.2. Полимерные носители

3.1.3. Получение полимерных производных сорбиновой кислоты на основе поли-]Ч-винилпирролидона

3.1.3.1. Полимерные комплексы

3.1.3.2. Полимерные эфиры

3.1.4. Строение и структура полимерных комплексов сорбиновой кислоты на основе поли-N-винилпирролидона

3.1.4.1. ИК-спектральный анализ

3.1.4.2. Рентгенографические исследования

3.1.5. Свойства полимерных комплексов сорбиновой кислоты на основе поли->1-винилпирролидона

3.1.5.1. Вязкость разбавленных растворов

3.1.5.2. Светорассеяние водных растворов

3.1.5.3. Исследование конкурентного комплексообразования

3.1.5.4. Исследование комплексообразования методом 63 равновесного диализа

3.2. Биологическая активность полимерных производных 66 сорбиновой кислоты

3.2.1. Антифунгальная активность низкомолекулярных 66 карбоновых кислот

3.2.2. Антифунгальная активность полимерных эхфиров и 67 полимерных комплексов сорбиновой кислоты

3.3. Возможности применения полимерных комплексов 77 сорбиновой кислоты и поли-1Ч-винилпирролидона

4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

4.1. Используемые вещества

4.2. Получение полимерных производных сорбиновой 85 кислоты

4.3. Используемые методы

4.4. Исследование антифунгальной активности

5. ВЫВОДЫ

Актуальность проблемы. Создание биологически активных систем, обладающих повышенной эффективностью, имеет большое значение для разработки новых типов препаратов, предназначенных для применения в медицине, биотехнологии, сельском хозяйстве, пищевой и косметической промышленности.

Одним из направлений разработки таких систем, привлекающих в последнее время широкое внимание, является использование биологически активных веществ в виде форм с контролируемым выделением этих веществ. В большинстве случаев такие формы содержат макромолекулярные компоненты, связанные с выделяющимся активным веществом лабильной (чаще всего за счет гидролиза) связью.

В частности, для таких препаратов, обладающих пролонгированным (контролируемым) действием, важную роль играет прочность связи полимерного носителя и выделяющегося активного вещества. В большинстве случаев связывание компонентов системы реализуется за счет образования между ними гидролизуемой ковалентной, реже ионной, связями.

В то же время, для препаратов с ингибирующей и биоцидной активностью, когда требуется обеспечить высокую концентрацию активного вещества уже в начальные периоды действия, эффективность препарата может обеспечить образование более слабой связи полимерного носителя и иммобилизованного вещества, например, водородной связи.

Несмотря на то, что получение таких полимерных комплексов осуществляется значительно проще, чем систем с ковалентной связью, разработка эффективных препаратов на их основе сдерживается недостаточной изученностью взаимосвязи их строения и активности.

В связи с этим, большое значение имеют выбор технологически доступных методов получения таких систем и оптимизация их строения в соответствии с требуемыми свойствами.

В том числе это относится к препаратам, обладающим фунгицидным и фунгистатическим действием, находящим применение в различных областях.

Цели и задачи исследования. Целью работы является получение новых полимерных производных сорбиновой кислоты (полимерных комплексов с поли-Ы-винилпирролидоном и полимерных эфиров на основе эпоксидсодержащего поли-Ы-винилпирролидона), обладающих антифунгальной активностью по отношению к микроскопическим грибам, и исследование влияния их строения на свойства и активность. Выбор данного активного вещества в том числе связан с его весьма низкой побочной токсичностью для человека и широкими возможностями практического применения.

Научная новизна.

• Получены полимерные комплексы сорбиновой кислоты и поли-N-винилпирролидона широкого ряда молекулярных масс (от 2,6 до 360 тыс), исследованы их свойства и показана высокая антифунгальная активность против различных типов микроскопических грибов.

• Исследованием ИК-спектров системы «полимер-кислота» установлено, что взаимодействие ее компонентов реализуется с участием водородной связи между водородом карбоксильной группы и кислородом карбонильной группы пирролидонового кольца полимера, причем с использованием диализа, вискозиметрии и метода конкурентного комплексообразования показано, что устойчивость комплексов поли-N-винилпирролидона и сорбиновой кислоты повышается с увеличением молекулярной массы полимера.

• Установлено, что уровень антифунгальной активности иммобилизованной на полимерном носителе сорбиновой кислоты (на примере Fusarium oxysporum f. radicis-cucumerinum N-10, Candida albicans TEI 101, Candida tropicais TEI 184, Aspergilus parasiticus 1130, Penicillium viridcatum С A 100) определяется прочностью ее связи с полимерным носителем, повышаясь с ее уменьшением, причем активность полимерных комплексов сорбиновой кислоты с поли-]Ч-винилпирролидоном превышает активность самой кислоты, сорбата калия и ее полимерных эфиров.

Практическая значимость. Показано, что полученные системы могут найти применение в ряде пищевых технологий, в частности для создания грибоустойчивой бумажно-полимерной упаковки и оболочки пищевых продуктов.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены на Международных конференциях Biomed 2002 (IXth International Symposium on Biomedical Science and Technology [19-22 Sept. 2002, Kemer-Antalya, Turkey], European Material Research Society. Fall Meeting [Warshaw, 15-19 September, 2003], «Биологически активные полимеры: Синтез, свойства и применение» [Ташкент, 2003] и XIV, XV и XVI Международных конференциях молодых ученых [2002, 2003, 2004, Москва].

Публикации. Основные положения и результаты работы изложены в 12 печатных работах, в том числе, 5 статьях в журналах и сборниках, 3 тезисах докладов и 4 депонированных рукописях.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 107 страницах, состоит из введения, обзора литературы, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов, списка литературы; содержит 10 таблиц, 18 рисунков, 155 библиографических ссылок.

6. Выводы

1. Впервые получены водорастворимые полимерные комплексы сорбиновой кислоты и поли-И-винилпирролидона широкого ряда молекулярных масс (от 10x103 до 360x103), исследованы их свойства и показана высокая антифунгальная активность против различных типов микроскопических грибов. Взаимодействием эпоксидсодержащего поли-N-винилпирролидона различной молекулярной массы и сорбиновой кислоты получен ряд ее водорастворимых полимерных эфиров.

2. Исследованием ИК-спектров системы «поли-Ы-винилпирролидон -сорбиновая кислота» установлено, что их взаимодействие реализуется с участием водородной связи между водородом карбоксильной группы и кислородом карбонильной группы пирролидонового кольца полимера. Изучением рентгенограмм комплексов показано, что при этом нарушается кристаллическая система кислоты.

3. Определением вязкости разбавленных водных растворов комплексов и методом светорассеяния показано, что комплексование поли-N-винилпирролидона и сорбиновой кислоты приводит к уплотнению макромолекулярного клубка, проявляющемуся в большей мере для более высокомолекулярных полимеров.

4. Методами конкурентного комплексообразования, диализа и исследованием особенностей получения комплексов установлено, что образование и разрушение комплексов происходят легче в случае более низкомолекулярных полимеров.

5. Показана высокая активность комплексов поли-№-винилпирролидона и сорбиновой кислоты по отношению к микроскопическим грибам различных групп. При этом антифунгальная активность полимерных производных сорбиновой кислоты повышается с уменьшением прочности ее связи с полимерным носителем, причем активность полимерных комплексов сорбиновой кислоты с поли-К-винилпирролидоном превышает активность самой кислоты, сорбата калия и полимерных эфиров сорбиновой кислоты. 6. Показано, что полученные полимерные комплексы, обладающие хорошей растворимостью в воде и в полярных органических растворителях и способные к образованию пленок, могут быть использованы для создания антифунгальных покрытий пищевых продуктов и пропитки бумаго-полимерных упаковочных материалов.

1. Controlled Release Technology: Methods, Theory, Application/Ed. By Kydonius A.F. Boca Raton: CRC, 1980. V. 1, 2.

2. Cardarelli N. Controlled Release Pesticide Formulations. Clewland: CRC Press, Inc., 1975, 193 p.

3. Stilman M.I. Immobilization on Polymers. Utrecht; Tokyo: VSP, 1993,497р.

4. Bioactiv Polimer Systems. /Ed. By Gebelein C.G., Carraher C.E. New York; London: Plenum Press, 1985, 689 p.

5. Штильман М.И. Полимерные биоциды. // Итоги науки и техники ВИНИТИ. М.: ВИНИТИ АН СССР, 1985. Т.20. С.252-295.

6. Harris F.W. Polymers containing pendent pendent pesticide substituents. // Bioactive Polymer Systems. / Ed. by Gebelein C.G., Carraher C.E. New York; London: Plenum Press, 1985. P.63-82.

7. Cardarelli N.F., Cardarelli B.M. Controlled-release pesticides. Historical summary and state of the art. // Bioactive Polymer Systems/Ed. By Gebelein C.G., Carraher C.E. New York; London: Plenum Press, 1985. P.31-92.

8. Вирник A.B. Биологически активные производные целлюлозы. // Успехи химии. 1973. Т.42. №3. С.547-552.

9. Donaruma L.G., Brierley J.A., Hatch М. et al.Polymeric antimicrobial drags. Proc. Symp. "Biomed. Polymers"/ Ed. By Goldberg E.P., Nakajima A. New York: Acad. Press, 1980. P.401-430.

10. Афигенов Г.Е., Панарин Е.Ф. Антимикробные полимеры. Санкт-Петербург: Гиппократ, 1993, 271 с.

11. Stahl G.A., Pittman C.U. Polymers tilms containing chemically bond fungicides. An introduction // J. Coat. Technol. 1978. V.50. № 639. P.62-65.

12. Вирник А.Д., Мальцева Е.А. Придание волокнистым материалам антимикробных и антигрибковых свойств. М.: ЦНИИЛегпром, 1966, 58 с.

13. Вольф Л.А., Меос А.И. Волокна специального назначения. М.: Химия, 1971.224 с.

14. Мищенко В.Д., Рзаев З.М., Зубов В.А. Биостойкие оловоорганические полимеры. М.: Химия, 1995. 432 с.

15. Кочкин Д.А. // Проблемы биологических повреждений и обрастаний материалов, изделий и сооружений. М.: Наука, 1972. С. 233-241.

16. Lubrick J.R. Coating for protection against microorganisms. Pat. 3167473 USA. 1965; Chem.Abstrs., 62: 6687d.

17. Котон M.M., Киселева T.M., Парибок В.А. Дифенилсвинецдиметакрилаты и их полимеры. // Докл. АН СССР. 1959. Т.125.№6. С.1263-1270.

18. Кочкин Д.А., Новиченко Ю.П., Кузнецова Г.И., Лейко Л.В. Авт.свид. 133224 СССР. // Бюл.Изобр. 1960. №21.

19. Кабанов В.Я., Воронков Н.А., Кочкин Д.А., Спицин В.И. Биологически активные оловоорганические материалы. // Докл. АН СССР, 1971, Т.200, №3, С.628-629.

20. Wang C.-S., Sheetz D.P. Antimicrobial monomers and polymers of 10-(alkenilenoksy)phenoxyarsines. Pat. 3660353 USA. 1972. // Chem. Abstrs.l972.V.77. 75732р.

21. Thurmon F.M. Carboxylic cation-exange-resin dusting powders. // Pat.2883324 USA. 1959; Chem.Abstrs., 1958, V.52, P17626g.

22. Thurman F.M. Therapeutic mixures of ion-exchange resins. // Pat.276418 USA. 1956; Chem.Abstrs., 1959, V.53, P13519g.

23. Полесская С.Ф., Роговин З.А., Кошкин А. А. Получение марли, обладающей новыми свойствами методом химической модификации. // Текстильная промышленность, 1971, № 9, С.33-35.

24. Ермилова И.А., Быкова Е.А., Хохлова В.А., Вольф JI.A. К вопросу о предохранении шерсти от микробного разрушения. // Изв. Вузов. Технология текстильной промышленности. 1976. №1. С. 92-95.

25. Вирник А.Д., Роговин З.А.// Изв. Вузов. Технология текстильной промышленности. 1966. №5. С. 160-163.

26. Вирник А.Д., Горчакова В.А., Будзан Б.И., Плоткина Н.С. Влияние структуры привитых сополимеров целлюлозы, содержащих антимикробные препараты. // Высокомолекулярные соединения. А. 1984. Т.26. № 6. С.1264-1267.

27. Kiese H.J., Thust U., Berger G., Hoffman G., Kochman W., Taschach A. Microbiocidal finishing of cellulose-containing textile fibers and sheels. // Pat.207740 Ger.(East).1984; Chem. Abstrs. 1984. V.101. 132420a.

28. Артемова Ю.В., Вирник А.Д., Землянский H.H. Фунгицидные производные целлюлозы.// Высокомолекулярные соединения, Б. 1967, Т.9, № 11, С.797-801.

29. Sherer P.S., Soul G.A. // Rayon Text. Monthly, 1947, V.28, P.537-540.

30. Huettinger K.J. Carrier-bound desinfectantes. // Chem.-Ztg., 1982, B.106, № 12, S.415-420.

31. Герцев B.B., Нестеренко Л.Я., Романов Ю.А. Борная целлюлоза модифицированный полимер с антисептическими, противогрибковыми и гемостатическими свойствами. // Химико-фармацевтический журнал, 1990, Т.24, № 6, С.36-38.

32. Герцев В.В., Нестеренко Л.Я., Романов Ю.А. Синтез и исследование борных эфиров целлюлозы. // Высокомолекулярные соединения, Б, 1967, Т.9, № 6, С.470-474.

33. Maurer К., Reiff G. Oxidation with N02 (II) cellulose. // Makromol. Chem., 1943, B.l, S.27-30; Chem.Absrs., 1944, V.38, 12112.

34. Klemann S.G., Claus G. Fungicidal cupper-amine complexes. // Pat.3522000 FRG. 1986; Chem. Abstrs. 1986. V.105. 37477y.

35. Panarin E.F., Solovsky M.V., Zaikina N.A., Afmogenov G.E. Macromolecular antimicrobial substrates and pharmaceuticals. // J.Macromol. Chem. Suppl., 1984, V.9,P.25-29.

36. Мищенко В.Ф. Конформационные эффекты в реакциях сополимеров малеинового ангидрида с бис-три-н-бутилоловооксидом. // Высокомолекул. соедин., Б, 1989, Т.31, № 11, С.806-809.

37. Мирсков Р.Г., Игценко О.С., Скоробогатова В.И., Коротаева И.М. Способ получения ПВП. // А.С. 340668 СССР. 1972.; Chem. Absrs. 1973. V.78. 30556 р.

38. Мохнач В.О. Теоретические основы биологического действия галоидных соединений. Л.: Наука, 1968. 198 с.

39. Kirsh Y.E. Water-soluble poly(N-vinylamines): microstructure, solvatation, conformatine state and complexes formation in aqueous solution. // Progr. Polym. Sci., 1993, N.18, P.519-525.

40. Digenis G.A., Wells D.A., Ansell I.M, Blecher I. Disposition of 14C. povidone after oral administration to the rat. // Food Chem. Toxicol., 1987, V.25, P.241-243; Chem.Abstrs., 1985, V.103, 105342m.

41. Van Garsse A. Iodinated poly(vinylpyrrolidone): universal antiseptic. // Rev. Med. Liege, 1976, V.31, N.12, P.394-396.

42. Jones F.E., De Cosse J .J., Condon R.E. Experimental evaluation of preparation of the colon with povidone-iodine. // Surg.Clin. North. Am., 1975, V.55, N.6, P.1343-1348.

43. Laboratories Interpharma S.A. Pat. 418, 908 Span.1976. Antiseptic soluble iodine. //Chem. Abstrs. 1976. V.85. P130534t.

44. Langmaack H.J. Iodine poly(vinylpyrrolidone) preparations in hospital ptactice. // Krankenhaus-Apotheke, 1976, V.26, N. 2, P.14-15; Chem. Abstrs. 1976, V. 85, R130388y.

45. Bhagwat D., Oshlack B. Stabilized PVP-I solutions. // Пат. 512 6127 США, 1992.//РЖХим. 1991.18 О 145.

46. Login R.B., Merianoes J.J. Water soluble complexes of polyvinylpyrrolidone and iodine and process for marking the same. // Пат. 4939272 США, 1990. // РЖХим. 1993. 16 0 96.

47. Barnes C.E. Biocidal complexes and dressing formed therefrom. USA Pat.5051256. 1991//РЖХим. 1992. 22 О 202.

48. Chazan R., Tischer E.Z. Germicidal cleaning composition. Ger. Offen 2539462 (FRG); Chem.Abstrs., 1976, V.84, P166637x.

49. Мальцева T.A., Вирник А.Д., Пестерева Г.Ф., Роговин З.А. // Изв. Вузов. Технология текстильной промышленности. 1966. № 4. С.92-97.

50. Denick J. Medicament adsorbates. // Pat. USA 4719106. 1988; РЖХим. 1989. 180241.

51. Nippon Halogen Kagaku K.K. Iodine controlled release macrobiocides. Pat.6001108 85 01108. Jpn. 1985; Chem. Abstrs. 1985,V.102, 199591w.

52. Ikari K., Tabata Y. Iodine-containing anion-exchanging resins as pesticides. Pat. 600243003 85 243003. Jpn. 1985; Chem. Abstrs.1986. V.104. 104466р.

53. Potin С., Salles G., Pleurdeau A., Bruneeau C.M. Synthesis of monomers and polymers used in paint formulation with biocide properties. //17th Congr. FATIPEC. 1984. N. 3. P.213-214. // Chem. Abstrs.1985, V.102, 104466 p.

54. Potin C., Pleurdeau A., Bruneau C.M. Polymers a proprietes biocides pour revetements de peinture. // Chimie des peintures. 1985. V. 32. N. 351-352. P.33-51. // Chem. Abstrs. 1985. V.103. 178684j.

55. Будзан Б.И., Горчакова B.A. Синтез трихлорфенилового эфира метакриловой кислоты. // Вестник Львовского политехнического института, 1982, № 163, С.110-111; РЖХим, 1982, 15Ж135.

56. Абдулаев О.Г., Цой О.Г., Календарева Т.И., Штильман М.И., Рашидова С.Ш. Полимерные производные галоидфенолов с потенциальной биоцидной активностью. // Высокомол. соедин., Сер.Б. 1989. Т.31. N.4. С.271-275.

57. Абдулаев О.Г., Календарева Т.П., Рашидова С.Ш. Сополимеризация N-винилпирролидона с 2,4,5-трихлорфенилметакрилатом. // Узбекский химический журнал, 1987, № 4, С.11-15; РЖХим., 1987, №20, С269.

58. Ishikava Т., Asai S. Preparation and properties of polymers anchoring biphenyl-2-ol. //Bull. Chem. Jpn., 1983, V.56, N. 7, P.2177-2178.

59. Reddy B.S.R., Arshady R., Georg M.N. Copolymerisation of N-vinyl-2-pyrrolidone with 2,4,5-trichlorophenylacrylate and 2-hydroxyethylmethacrylate. // Eur. Polym. J., 1985, V.21, N. 6, P.511-515; Chem.Abstrs, 1985, V.103, 105342m.

60. Jezl J.J. Phenol salts of polyester amines for use as fungicides or rodent repellents. Pat. 2957850 USA. 1960; Chem. Abstrs., 1985, V. 55, 2990f.

61. Мальцева T.A., Вирник А.Д., Роговин 3.A., Щеглов Г.В. // Текстильная промышленность, 1965, № 4, С. 15-17.

62. Пенежик М.А., Вирник А.Д., Воробьева И.Н., Плоткин Н.С. Получение антимикробной целлюлозной ткани. // Текстильная промышленность, 1978, № 12, С.63-65.

63. Allan G.G., Halabiski D.D. // J. Appl. Chem. Biotechnol., 1971, V.21, N. 7, P.190-193 .

64. Paulis W., Pauli 0. Antimicrobielle Autshurting Von Textilmaterial mit Higle von Reaktivwirkstoffen. // Textil Veredlung, 1970, V.5, N. 4, P. 247-255.

65. Bahadir M., Pfister G. Controlled release formulation of pesticides. // Chem. of Plant Protect. / Ed. By Bower W.S., W.Ebing, D.Martin, R.Wegler. Berlin: Springer, 1990. V. 6. P. 1-64.

66. Bahadir M., Kotre F. Formulation and application of controlled release pesticides. // Pestic. Sci., Biotechnol., Proc. Int. Congr. Pestic Chem., 6th 1986 (Pub. 1987), P. 265-272; Chem.Abstrs., 1987. V.107. 170480g.

67. Вирник А.Д., Горчакова B.A., Будзан Б.И., Плоткин Н.С. Влияние строения привитых сополимеров целлюлозы, содержащих антимикробные вещества и их свойства. // Высокомолекулярные соединения. А. 1984. Т.26. № 6. С. 1264.

68. Абдулаев О.Г., Артыкова З.Б., Календарева Т.И. Полимерные фунгициды и бактерициды. М.1988.23 с.-Деп. в ВИНИТИ. 02.08.88, № 6174; РЖХим. 1988.22 0 368.

69. Полищук Б.О., Котецкий В.В., Шапиро Е.И., Вольф JI.A., Гиллер С.А. // Химические волокна. 1970.№ 4. С.447-449.

70. Вирник А.Д. Химия медицинских волокон и тканей. // ЖВХО. 1985. Т.30. № 4. С.447.

71. Carlsohn Н., Hartmann М. Manganes (IV) initiated graft copolymerisation of methyl methacrylate and other acrylic monomers on starch and dextrane/

72. Acta Polymerica, 1982, V.33, P.640-643; Chem.Abstrs, 1983, V.98, 126728k .

73. Carlsohn H., Hipler U.-Ch., Breuer A., Shutz A., Shutz H., Hartmann M.// Biocide polymere. // Pharmazie, 1983, V.38, № 12, P. 823-826.

74. Carlsohn H., Hipler U.-Ch., Breuer A., Hartmann M., Shutz H. Synthesis of unsaturated l-acyl-3-methylpyrazols. // Z. Chem., 1981, V.21, P. 283-284; Chem.Absrs., 1981, V.95, 219998b.

75. Hartmann M., Bauer H.-J., Wermann K. Biocide polymers. 15. Esterification of poly-(vinylalcohol) with biologically active N-phosphopylated 3(5)-methylpyrazoles. // Polym. Bull., 1986, Y.15, №2, P.93-100.

76. Hartmann M.// Biocide polymere: synthese von polymeren mit seiten standing gebundenem 2,6-dimethyllin. // Z. Chem., 1988, B.28, № 2, S.61-62.

77. Pittman C.U., Stahl G.A., Winters H. Polymer films containing chemically bound fungicides// J. Coat. Technol., 1978, V.50, № 639, P.62-65.

78. Stahl G.A., Pittman C.U. // Am. Chem. Soc., Div. Org. Coat. Plast. Chem. Pap, 1977, V. 37, № 1, P.355-359.

79. Naruse H, Maekawa K. Controlled-realease pesticides. Fungicidally active water-soluble polymer. // J. Fac. Agric. 1977. V.21. № 4. P.153-159; Chem. Abstrs, 1977, V.87, 178833h.

80. Ida T, Takahashi S, Hashimoto T. Fungicide from a (3-(5-nitro-2-furil)acrylamide polymer. Pat. 797 Jpn. 1967. // Chem Abstrs, 1967, V.67, 54619k.

81. Smith R. Antifungal compounds. Pat. 3963682 USA.1967. // Chem Abstrs!, 1967, V.67, 37495k.

82. Горбачева И.Н., Козинда З.Ю., Суворова Е.Г. Активные азокрасители с фунгицидными свойствами. А.с. 910703 СССР. 1982. //РЖХим, 1983, 6 Н 249.

83. Ackart W.B., Camp R.L., Wheelwright W.L. Antimicrobial polymers. // J.Biomed.Mater.Res. 1975. V.9. № 1. P.55-68.

84. Чуйко JI.C., Волошинец B.A., Яриш M.E., Солонин В.Н., Кондрина Т.П. Синтез биоцидных полимеров, содержащих тиолсульфатные группы. // Украинская республиканская конференция по химии высокомолекулярных соединений, Киев, 1988, С.53-54.

85. Nauruse Н., Maekawa К. -// J. Fac. Agric., 1977, V.21, № 2-3, P. 107-111.

86. Титов В.В. О фунги статических и фунгицидных свойствах серосодержащих производных бальзама Шостаковского. // Химия ацетилена. Казань: Казанский ветеринарный институт, 1968, С. 438-440.

87. Todorov N.G., Georgieva М.Р., Kabaivanov V. A study on the copolymerization of vinylacetate and acryl estor of the salycylanycide. // Dokl.Bulg. Akad. Nauk. 1975, V.28, № 3, P.343-346.

88. Olsten A.D. Пат.5142010 США. 1992. Polymeric biocidal agents; РЖХим. 1993. 1C.439.

89. Коршак B.B., Штильман М.И., Ярошенко И.В. // Реакция ацилирования поливинилового спирта хлорангидридом сорбиновой кислоты. // Высокомолекул. соедин., Б.1977, Т.19, № 3, С.234-236.

90. Умэкава О., Макэнори К., Катаяма С. Бромацетоксиалкиловые эфиры метакриловой кислоты. Заявка 56 156237 Япония. // РЖХим. 1983. 3 О 396 П.

91. Kubis A., Witer R, Krutul H., Zaba A. Pat. 125375 Poland. 1985. Complex of ethanolamine with polyvinylpyrrolidone or polyvinylalcohol. // Chem. Abstrs. 1985. V.103.183578g.

92. Вайнштейн В.А., Наумчик Г.Н. // Антибиотики, 1974, Т. 19, № 4, С.303-306.

93. Заботин К.П., Ческидова И.Н., Малышева JI.B., Новоспасский Н.Ю. // Труды по химии и химической технологии, 1975, Вып. 3, С.67-70.

94. Polind F. Polymers with antifungal activity. Pat.3167473 USA. 1965. // Chem Abstrs., 1965, V.63, 17692k.

95. Мищенко В.Ф., Зубов B.A., Еременко P.T.// Космическая биология и авиакосмическая медицина. 198. № 5. С.89-93.

96. Мищенко В.Ф., Зубов В.А., Еременко Ю.Г., Садовская И.А. // Пластмассы. 1985. № 4. С. 17-19.

97. Haler D., Aebi A. Antibacterial substances. //Nature, 1961, V.190, P.734-736.

98. Donaruma L.G. Poly(2-methacryloyloxytropone). // Pat.3424841 USA. 1969; Chem.Abstrs., 1969, V.68, P62693r.

99. Mills P.R., Wood R.K.S. The effects of polyacrylic acid, acetylsalicylic acid and salicylic acid on resistance of cucumber to colletotricum lagenarium. // Phytopatol.J., 1984, V.l 11, № 3-4, P.209-216.

100. Legator M. Polyamines as antimicrobial agents. // Pat. 3567420 USA, 1971; Chem.Abstrs, 1970, V.74, P140092j.

101. Sumoto I. Pat.3923937 USA.1975. // Chem Abstrs, 1976, V.84, 34741n.

102. Kanedo Ltd. Controlled release fungicidec or fertilizers. Pat.59230081 84 230081.Jpn. 1984; Chem. Absrts. 1985. V.102. 186304.

103. Lane E.W. Polyalkylphenylphenetyl halides. Pat. 2806019 USA.1957. // Chem.Abstrs., I960, V.54, 1420a.

104. Якушина H.A., Чичинадзе Ж.А., Штильман М.И., Шашкова И.М., Давлетукаева Н.В. Способ защиты винограда от милдью. // Пат. 1814515. Россия; Б.И. 1993. № 17.

105. Controlled Release Technology: Methods, Theory, Application. /Ed. By Kydonius A.F. Boca Raton: CRC, 1980. V. 1.2.

106. Коршак B.B., Штильман М.И. Полимеры в процессах иммобилизации и модификации природных соединений, М.: Наука.- 1984.- 261 С.

107. Shtilman M.I. Immobilization on polymers, VSP: Utrecht-Tokyo, 1993 479 P.

108. Shtilman M.I., Tsatsakis A.M., Alegakis A.K., Voskanyan P.S., Shashkova I.M., Rizos A.K., Krambovitis E. Structure vs. release-rate relationship in polymeric esters of plant growth regulators. // J. of Materials Science, 2002, V.37, N.19, 4677-4682.

109. Штильман М.И. Полимерные биоциды и фитоактивные полимеры.// Итоги науки и техники ВИНИТИ.- 1985,- Вып.20,- С.252-295.

110. Harris F.W. // In: Bioactive Polymer Systems. / Ed. by Gebelein C.G., Carraher C.E. New York; London:Plenum Press, 1985. P.63- 73.

111. Коршак B.B., Штильман М.И., Ярошенко И.В., Минченко И.Э. Ацилирование поливинилового спирта хлорангидридом нафтилуксусной кислоты.// Высокомол. соедин., Сер.А,- 1980.- Т.22,- N.5.- С.982-988.

112. Коршак В.В., Штильман М.И., Крамар В.В., Лялюшко Н.С., Ярошенко И.В. Полимеры, содержащие активированную хлорметильную группу как носители карбоксилсодержащих регуляторов роста растений.// Высокомол. соедин, Сер.Б.- 1980.- Т.22,- N.10.- С.791-794.

113. Коршак В.В., Штильман М.И., Восканян П.С., Денисова JI.A. О взаимодействии полиглицидилметакрилата с карбоновыми кислотами. // Высокомол.соедин. Сер.А.-1982,- Т.24,- N.12,- С.2633-2637.

114. Коршак В.В., Штильман М.И., Восканян П.С., Денисова Л.А., Зарезова Г.Н. Реакции карбоновых кислот с полимерными и низкомолекулярными эпоксидами. // ДАН СССР,- 1982,- Т.266,- N2.- С.367-369.

115. Коршак В.В., Штильман М.И., Восканян П.С., Саркисян М.Б., Селиванова И.М. Полимерные эфиры на основе полиэпоксидов и арил- и арилоксиалканкарбоновых карбоновых кислот.// Высокомол. соедин., Сер.Б.- 1985,- T.27.-N.7.- С.513-517.

116. Коршак В.В., Штильман М.И., Ярошенко И.В. Реакция ацилирования поливинилового спирта хлорангидридом сорбиновой кислоты. // Высокомол. соедин., Сер.Б. 1977.- Т. 19.- N.3.- С.234-236.

117. Сидельковская Ф.П. Химия N-винилпирролидона и его полимеров. М.: Наука, 1970.

118. Кирш Ю.Э. Поли-Ы-винилпирролидон и другие поли-М-виниламиды. М.: Наука, 1998.-251 с.

119. М.И. Штильман, В.Ю. Хвостова, Р.И.Ташмухамедов, Т.А. Головкова, A.M.Tsatsakis. Эпоксидсодержащий поли-Ы-винилпирролидон. // Пластмассы.- 2001. N.7. - С.5-9.

120. Коршак В.В, Штильман М.И, Табидзе Р.П, Залукаева Т.П. Сополимеры N-винилпирролидона и эпоксидсодержащих мономеров.// Высокомол. соедин, Сер.Б.-1983.- Т.25,- N.6.- С.403-406.

121. Ташмухамедов С.А, Сагдулаев Б.У, Карабаев А.Ш, Тиллаев Р.С. Параметр растворимости поливинилпирролидона. // Узб.химич.ж, 1972, Т. 16, № 16, С. 47-49.

122. Pecsok R, Shield L.D, Cairns T, McMillan I.G. Modern methods of chemical analysis. Pneumatikou: Athens, 1980, pp. 145-192.

123. Rizos A.K, Doetschman D.C, Dwyer D.W, Tsatsakis A.M., Shtilman M.I. Study of diclophenac polymeric derivative with 12-DOCSYL spin probe. // Polymer. 2000. V.41. P.l 131-1138.

124. Коршак В.В, Штильман М.И, Ярошенко И.В, Бестужева Т.А. Исследование кинетики ацилирования поливинилового спирта в растворе. //Высокомол.соедин, Сер.Б.- 1977.- Т. 19.- N.10.- С.734-737.

125. Haaf F, Sanner A, Straub F, Polymers of N-vinylpyrrolidone: synthesis, characterization and uses. // Polym. J, 1985, Y.17, N.l, P.143-152.

126. Гиллет Дж. Фотофизика и фотохимия полимеров. М.: Мир, 1988. 435 с.

127. Gareis, М, Bauer, J, Montgelas, A, and Gedek, В, 1984, Stimulation of aflatoxin B1 and T-2 toxin production by SA. Applied Environmental Microbiology, 47(2), 416-418.

128. Eklund, T. J. The antimicrobial effect of dissociated and undisociated sorbic acid at different pH. // Appl. Bacteriol, 1983, V.54, P.383-389.

129. Herting, D. С., Drury, E. E. Alcanoic acids pesticide composition. // Cereal Chem., 1974, V.51, P.74-83.

130. De Boer, E., "Introduction to Foodborne Fungi". Eds R.A. Samson, E.S. van Reenen-Hoekstra. Centraalbureau voor Scimmelcultures, Baarn-Delft, 268-273 pp (1988).

131. Skrinjar, M., Danev, M., and Dimic, G., 1995, Interactive effects of propionic acid and temperature on growth and ochratoxin A production by Penicillium aurantiogriseum. Folia Microbiology, 40(3), 253-256.

132. HO.Mahjoub, A., and Bullerman, L. В., 1986, Effects of natamycin and potassium sorbate on growth and aflatoxin production in olives. Archives of Institute Pasteur Tunis, 63(4), 513-525.

133. Sofos, J. N., Fagerberg, D. J., and Quarles, C. L., 1985, Effects of SA feed fungistat on the intestinal microflora of floor-reared broiler chickens. Environment and Health, 64, 832-840.

134. Monnet, D., Vidal, D. and Creach, 0. Influence of metabolic and physical factors on production of diacetooxyprenol by Fusarium sabusinum Fuckel. // Appl. Environ. Microbiol., 1988, V.54, N.9, P.2167-2169.

135. Bullerman, L. B. // In: 39th Annual Meeting Institute Food Technol., St. Louis, MO, 1979, P.10-13.

136. Przybulski, K. S. and Bullerman, L. B. Influence of sorbic acid on viability and ATP content of Conidia of Aspergilus parasiticus. // J. Food Sci., 1980, V.45, P.375-376.

137. Lennox, J. E., Mcelroy, L. J. Inhibition of growth and patulin synthesis in Penicillium expausum by potassium sorbate and sodium propionate in culture. // American Society of Microbiology, 1984, V.48, N.2, 1031-1033.

138. Skirdal I.M., Elclund T. Microculture model studies on the effect of sorbic acid on Penicillum chrysogenum, cladosporium cladosporioides and Ulocladium atrum at different pH levels. // J Appl Bacteriol., 1993, V. 74, P.191-195.

139. Vandegraft, E. E, Hesseltine, C. W. and Shotwell, 0. L. // Cereal Chem, 1975, V.52, P.79-84.

140. Holmquist, G. U, Walker, H. W. and Stahr, H. M. Influence of temperature, pH, water activity and antifungal agents on growth of Aspergilus flavus and A. parasiticus. // J. Food Sci, 1983, V.48, P.778-782.

141. Luck, E, Food applications of SA and its salts. // Food Additives and Contaminants, 1990, V.7, N.5, P.711-715.

142. Richard, J. L, Cole, R. J, Archibald, S. 0, et al, (Task Force Members), 1989. // In: Mycotoxins, economic and health risks. Council for Agricultural Science Technology, Report No. 116.

143. Holley, R. A. Prevention of surface mold growth on Italian dry sausage by natamycin and potassium sorbate. // Appl. Environ. Microbiol, 1981, V.41, P.422-429.

144. Bartov, I. Effect of various factors on plasma of turkey. // Poultry Sci, 1983, V.62, P.2195-2200.

145. Штильман М.И,Тсатсакис А.М,Влахос Дж,Драгасаки М,Шашкова И.М, Лоттер М.М. Биологическая активность поливиниловых эфиров 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты.// Физиология растений, 1998.-Т.45.-N.I.- С.108-111.

146. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. / Под ред. М.О.Биргера, М, Медицина, 1982.

147. Практикум по микробиологии. / Под ред. А.И.Нетрусова, М, Из-во МГУ, 2005.