Проточно-инжекционные определения некоторых химиотерапевтических, анальгезирующих и антиаритмических лекарственных веществ в биологических жидкостях и лекарственных формах тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ

На правах рукописи

РГб од

1 3 ДЕК Г.п«

ШАКИРОВА Лилия Шамнльевна

ПРОТОЧНО-ИНЖЕКЦИОННЫЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

НЕКОТОРЫХ ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ, АНАЛЬГЕЗИРУЮЩИХ И АНТИАРИТМИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ

02.00.02 - аналитическая химия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Казань - 2000

Работа выполнена на кафедре аналитической химии, сертификации меледжмента качества Казанского государственного технологическог университета.

Научные руководители: доктор химических наук, г- ' профессор Евгеньев М.И.,

кандидат химических наук, доцент Гармонов С.Ю.

Официальные оппоненты: доктор химических наук,

профессор Абдуллин И.Ф.,

доктор химических наук, профессор Новиков В.Ф.

Ведущая организация: Центр химии лекарственных средств -

Всероссийский научно-исследовательский химико-фармацевтический институт, г. Москва

Защита диссертации состоится « /У » декабря 2000 года в часов т заседании диссертационного Совета К 053.29.02 по химическим наукам Казанского государственного университета по адресу:

420008, г. Казань, ул. Кремлевская, 18, химический факультет, Бутлеровская аудитория.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке им. Н.И. Лобачевского Казанского государственного университета.

Отзывы на автореферат просим присылать по адресу: 420008, г. Казань, ул. Кремлевская, 18, КГУ, научная часть.

Автореферат разослан « » ноября 2000 года

Ученый секретарь ь УЬ/У? Р

диссертационного Совета, кандидат химических наук у / Федотова Н.Р.

Актуальность темы: Соединения с аминными функциональными группами представляют собой важные классы лекарственных веществ (JIB) и находят широкое применение в медицинской практике как эффективные препараты с разнообразной фармакологической активностью (химиотерапевтической, анальгезирующей, антиаритмической и др.). Многокомпонентность технологических смесей синтеза и лекарственных форм, токсичность многих из них при нарушении дозировки, а также генетическая детерминированность и индивидуальная вариабельность процессов Jix биотрансформации в организме человека требуют применения избирательных, чувствительных методов определения этих ксенобиотиков в биологических жидкостях и лекарственных формах.

В последнее десятилетие в анализе лекарственных веществ, наряду с развитием различных физико-химических методов, наблюдается тенденция к использованию такой аналитической системы, как проточно-инжекционный анализ (ПИА). Этому способствовали такие преимущества ПИА, как простота технического исполнения, высокая производительность, надежность и экономичность определений, возможность получения большого объема аналитической информации. ПИА все шире находит применение для оценки основных параметров, определяющих качество лекарств - их эффективности и безопасности.

Проблемой, ограничивающей применение ПИА в фармацевтическом анализе, является избирательность и чувствительность детектирования определяемых соединений. Это связано со сложным составом анализируемых матриц при низких содержаниях ана-лита, а также со спецификой значительной части J1B и их метаболитов, имеющих высокую полярность, слабо выраженные хромофорные, элекгрофорные или флуорофорные свойства. Кроме того, измерение аналитического сигнала в неравновесных условиях, когда физические и химические процессы в реакторе не завершены, вызывают необходимость быстрого изменения аналитических свойств JIB за время движения определяемого соединения к детектору. Использование большей части реакций дериватизации аминосоединений из-за низкой специфичности взаимодействия и реакционной способности реагентов существенно ограничивает возможности проточно-инжекционного анализа лекарственных веществ.

В то же время существует потребность в использовании таких аналитических реакций, которые благодаря хромофорным свойствам образующихся производных можно использовать в ПИА для селективных и чувствительных определений аминосодержа-щмх лекарственных веществ в сложных по составу смесях без их разделения.

Целью работы являлось изучение условий проведения реакций дериватизации некоторых аминосодержащих лекарственных веществ химиотерапевтического, анальге-зирующего н антиаритмического действия хлординитрозамещенными бенз-2,1,3-оксадиазола в системе проточно-инжекционного анализа и разработка методик избирательного и чувствительного определения их в реакционных смесях, лекарственных формах и биологических жидкостях. Научная иовнзна:

- показана возможность избирательных и чувствительных проточно-инжекционных определений сульфаниламидов, производных п-аминобензойной и п-аминосалициловой кислот, диаминодифенилсульфона, гетероциклических аминов в биологических жидкостях и лекарственных формах;

- изучены спектральные, кислотно-основные и другие характеристики дннитробсн-зофуразановых и динитробензофуроксановых производных ряда аминосодержа-щих лекарственных веществ химиотерапевтического, анальгезирующего и антиаритмического действия;

- обоснованы условия использования 4-хлор-5,7-дишггробензофуразана и его 1М-оксида при проточно-инжекцнонных (ПИ) определениях, выработаны критерии их выбора для дериватизации некоторых аминосодержащих лекарственных веществ различных классов;

- выявлен характер влияния состава потока носителя, физико-химических и гидродинамических характеристик растворителей и компонентов анализируемых сред на избирательность и чувствительность проточно-инжекционных определений;

-для достижения избирательности детектирования определяемых антибиотиков пенициллинового ряда в лекарственных смесях показана возможность использования приема кинетической "дискриминации";

- найдены рабочие условия проточно-инжекционных определений лекарственных веществ в сложных по составу анализируемых матрицах;

- показана возможность использования реакций дериватизации сульфаниламидов для изучения фенотипических особенностей биотрансформации ксенобиотиков в организме человека и проведения спортивного биохимического мониторинга. Практическая значимость работы. Предложены экспрессные и чувствительные

методики проточно-инжекционного, спектрофотометрического определения ряда аминосодержащих лекарственных веществ химиотерапевтического, анальгезирующего и антиаритмического действия в реакционных смесях, лекарственных формах, биологических жидкостях человека.

В клинических условиях апробированы методики определения сульфаниламидов, производных п-аминобснзойной и п-аминосалициловой кислот, диаминодифенилсуль-фона в различных биологических субстратах, полученных у пациентов в процессе терапевтического мониторинга. Результаты исследования метаболических превращений диуцифона в организме пациентов и фармакокинетики его метаболита диаминодифе-нилсульфона могут быть использованы для оптимизации безопасного и эффективного клинического использования этого нротиволепрозного и иммуномодулирующего лекарственного средства. Разработан метод определения генетически детерминированного процесса биотрансформации ксенобиотиков но типу ацетилирования в организме человека при использовании сульфадимезина в качестве фармакогенетического маркера. Метод пригоден для оптимизации безопасной дозировки лекарственных веществ и установления показателя адаптации организма к интенсивной мышечной деятельности.

Результаты работы используются в фармакокинетических исследованиях (Казанский государственный медицинский университет), биохимических исследованиях функционального состояния спортсменов, оценке степени их тренированности (казанский государственный педагогический университет) и внедрены в лечебную практику Казанской городской клинической больницы № 6. Экспериментальные результаты и выводы на их основе использованы в учебном процессе Казанского государственного технологического университета в курсах "Контроль качества лекарственных препаратов" и "Экологический мониторинг".

На защиту выносится:

• Результаты изучения и подбор оптимальных условий проведения аналитических реакций аминосодержащих лекарственных веществ химиотерапевтического, анальгезирующего и антиаритмического действия с хлординитрозамещенными бенз-2,1,3-оксадиазола в системе ПИА;

• Обоснование роли растворителя и компонентов анализируемой матрицы в формировании аналитического сигнала при определениях аминосодержащих лекарственных веществ в виде их производных в равновесных и неравновесных условиях;

• Результаты изучения влияния состава потока и его гидродинамических параметров, pH, свойств используемого реагента и определяемого вещества на выбор условий избирательного и чувствительного детектирования сульфаниламидов, производных н-аминобензойной и п-аминосалициловой кислот, диаминодифенил-сульфона, п-аминофенола, гетероциклических аминов в виде бензоксадиазольных производных в системе проточно-инжекционного анализа;

• Методики проточно-инжекционного и спектрофотометрического определения сульфаниламидов, производных п-аминобензойной и п-аминосалициловой кислот, диаминодифенилсульфона, п-аминофенола, гетероциклических аминов в промышленных и модельных смесях, лекарственных формах и биологических жидкостях;

• Способ определения фенотипа биотрансформации при использовании сульфадимезина как фармакогенетического маркера и результаты его применения в клинических условиях, а также в режиме профессиональной спортивной деятельности.

• Данные по метаболизму диуцифона в организме человека и возможность их кли-нико-фармакологического использования.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены на V Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1998), XVI Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Москва, 1998), III Всероссийской конференции "ЭКОАНАЛИТИКА - 98" с международным участием (Краснодар, 1998), V Международной конференции "Наукоемкие химические технологии" (Ярославль, 1998), . XII Международной Конференции молодых ученых по химии и химической технологии МКХТ -98 (Москва, 1998), Втором Всероссийском симпозиуме «Проточный химический анализ» (Москва, 1999), Поволжской региональной конференции, посвященной 80-летию со дня рождения A.A. Попеля (Казань, 1999), итоговых научных конференциях КГТУ (Казань, 1998 - 2000).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано и прошли рецензирование 9 статей и 9 тезисов докладов.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, трех глав экспериментальной части, в которых описана постановка задачи, аппаратура, объекты и техника эксперимента и изложены результаты с их обсуждением, выводов, заключения и списка цитируемой литературы. Диссертация изложена на 152 страницах, содержит 20 рисунков, 28 таблиц и библиографию 239 наименований. В приложении к диссертации представлены акты использования аналитических методик.

Диссертационная работа выполнена при поддержке Международного Научно-Технического Центра (ISTC, Project № 498, № 1517), индивидуального гранта "Соро-совский аспирант" (2000 г.).

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Проточно-инжекционные определения проведены с использованием обращенного варианта одноканалыюго проточно-инжекционного анализатора с плунжерным насосом D1 (Mickrotechna) и проточной кюветой объемом 6 мкл с длиной оптического пути 0,5 см. В качестве детектора применяли спектрофотометр Specol-210 (Karl Zeiss Yena). Регистрограммы записывали на самописце TZ-4100. В качестве инжектора использовали шестиходовой кран (Mickrotechna) с калиброванной петлей объемом 110 мкл. Проточные коммуникации были выполнены из тефлоновых трубок с внутренним диаметром 0,6 мм. Длина реакционной спирали составляла 2,5 м.

Спекгрофотометрические измерения проведены на спектрофотометре СФ-26. По-тенциометрическне измерения выполнены на электронном рН-милливольтметре MV-87S (Германия).

Хроматографические определения проводили с использованием системы НР-1100 с диодно-матричным детектором (Hewlett-Packard, Waldbronn, FRG). Тонкослойная хроматография выполнена на пластинках Силу фол УФ-254.

Все органические соединения промышленного изготовления, а также используемые органические растворители при необходимости подвергали дополнительной очистке по известным методикам. Лекарственные вещества (анестезин (этиловый эфир п-аминобензойной кислоты), новокаин (гидрохлорид диэтиламиноэтилового эфира п-аминобензойной кислоты), новокаинамид (гидрохлорид (î-диэтиламиноэтиламида п-аминобензойной кислоты), п-аминосалицилат натрия (ПАСК), стрептоцид (п - амино-бензолсульфамид), норсульфазол (2 - (п - аминобензолсульфамидо) - тиазол)), сульфадимезин (2 - (п - аминобензолсульфамидо) - 4,6 - диметилпиримидин)), этазол (2 - (п -аминобензолсульфамидо) - 5 - этил - 1,3,4 - тиадиазол)), сульфапиридазин (2 - (п - аминобензолсульфамидо) - 3 - метоксипиридазин)), сульфадиметоксин (6 - (п - аминобензолсульфамидо) - 2,4 - диметоксипиримидин)), сульфацил-натрий (п - аминобеизол-сульфацетамид - натрий), сульфален (2 - (и - аминобензолсульфамидо) - 3 - метокснпи-разин)), сульгин (п - аминобензолсульфогуанидин), фталазол ((2 - п - фталиламинобен-золсульфамидо) - тиазол), букарбан (N - (п - аминобензолсульфонил) - N' - н - бутил-мочевина), церукал (4-амино-5-хлор-К-(2-диэтиламиио-этил)-2-метоксибешамида гидрохлорид), фуросемнд (4-хлор-М(2-фурил метил) 5-сульфаноилантраниловая кислота), диафенилсульфон (4,4'-диамино-дифенилсульфон), диуцифон (4,4* - бис (2,4 - диоксо -6 - метил - 1,2,3,4 - тетрагидропиримидинил - 5 - сульфонамидо) дифенилсульфон), а также новокаиновая, натриевая, калиевая, Ы,М-дибензилэтилендиаминовая соли бен-зилпенициллина) и их формы (таблетки, инъекционные растворы, мази, сиропы, суппозитории) - фармакопейной чистоты.

Биологические жидкости (плазма крови, цельная кровь) предоставлены станцией переливания крови; моча получена у пациентов 6 клинической больницы г. Казани, а также спортсменов факультета физической культуры КГПУ в процессе клинического и спортивного биохимического мониторинга.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ВОЗМОЖНОСТИ 4-ХЛОР-5.7-ДИНИТРОБЕНЗОФУРАЗАНА И ЕГО ^ОКСИДА ПРИ ПРОТОЧНО-ИНЖЕКЦИОННЫХ ОПРЕДЕЛЕНИЯХ АМИНОСОДЕРЖАЩИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ

Для выбора условий избирательного и чувствительного детектирования ЛВ в системе ПИА проведены исследования реакций амииосодержащих ЛВ с 4-хлор-5,7-динитробензофуразаном (БФЗ) и его N-оксидом - 7-хлор-4,6-ди1нпробензофуроксаном (БФО) в равновесных условиях. Взаимодействие БФО и БФЗ с ЛВ в полярных невод-пых и смешанных растворителях протекает с образованием интенсивно окрашенных соединений, типичные спектры поглощения которых приведены на рис. I:

Максимумы поглощения соответствующих производных находятся в интервале 470-500 нм, при этом положение и интенсивность полос поглощения определяются природой используемого реагента, электронными эффектами заместителей, растворителем. Более высокие значения молярных коэффициентов поглощения наблюдаются в полярных растворителях (спирты, диметилсульфоксид (ДМСО) и их водные смеси), что позволяет использовать эти среды в качестве рабочих. Сопоставление молярных коэффициентов поглощения продуктов реакции указывает на практически количественное протекание реакций с аналитическими реагентами. Так, например, для анестезина в смеси диметилсульфоксид-вода (10:90, об.) значения е для синтетически выделенного производного и продукта аналитической реакции в тех же условиях составляют 36000 и 34500 л моль"'см"' (^„,=480 нм), соответственно.

В целом для бензофуроксановых производных определяемых соединений характерен более длинноволновый сдвиг полос поглощения по сравнению с аналогичными бензофуразановыми производными (ДА™ =20 - 40 нм). При определениях первичных ариламинов с использованием в качестве реагента БФЗ происходит частичное наложение полос поглощения производных (продуктов аналитических реакций) на полосы поглощения гидролизованной формы реагента. В случае динитробензофуроксановых производных ариламинов такое наложение полос поглощения продуктов конкурирующих реакций незначительно. В связи с этим при ПИ определениях JIB в качестве реагента использован БФО. В то же время для этого реагента характерна и более высокая реакционная способность в реакциях с первичными аминами по сравнению с БФЗ. Выбор аналитических длин волн для детектирования производных в системе ПИА проводили с учетом их спектроскопических характеристик (рис.1).

0,8

0.2

0,6

0,4

А

Рис. 1. Спектры поглощения 4,6-динитробензофуроксаиовых (3, 4, 8, 9, 10) и 5,7-динитробензофуразановых (1, 2, 5, 6, 7) производных лекарственных веществ. У- сульфацил-нагрия (10 5 М) в воде, рН 6,68; 2-стрептоцида (Ю-4 М) в диметилсульфоксиде, 3- сульфацил-натрия (10'5 М) в воде, рН 6,68; 4- букар-бана (1,23-Ю'5 М) в смеси диметилсуль-фоксид: вода (1: 99, об.), рН 6,7; 5 -бу-карбана (1,4-105 М) в смеси метанол: вода (4: 96, об.), рН 6,82; 6 - сульфодиме-токсина (2-10"5 М) в смеси диметилсуль-фоксид: вода (3:97, об.), рН 6,7; 7 - суль-фодиметоксина (2-10"5 М) в смеси метанол: вода (1, об.), рН 6,74; 8 - сульфале-на (410"5 М) в воде, рН 6,74; 9 -норсульфазола (2 10"5 М) в смеси метанол: вода (10: 90,об.), рН 6,74.

Избирательность спектрофотометрического детектирования JIB в системе ПИЛ определяется природой заместителя в ароматическом ядре определяемого вещества. Для стрептоцида, фталазола, диуцифона образуются производные, для которых характерен гипсохромный сдвиг полос поглощения по сравнению с другими J1B. Реакции БФО с натриевой, калиевой и Ы,К-дибензилэтилендиаминовой солями бензилпеницил-лина не приводят к образованию продуктов, имеющих поглощение при длинах волн 490-520 им (рис.2). В то же время при использовании БФЗ в потоке наблюдается образование окрашенных производных с этими J1B. Эти данные указывают на возможность использования эффекта кинетической «дискриминации» реакций путем вариации реакционной способности используемых реагентов для повышения избирательности аналитических определений новокаиновой соли в системе ПИА. Такой же подход при ПИ определениях ЛВ был использован для регулирования избирательности и чувствительности их детектирования в анализируемой матрице в присутствии других аминосодержа-щих компонентов.

При подборе условий ПИ определений выявлен сложный характер влияния состава реакционной среды, рН, других химических и физических переменных на величину аналитического сигнала. Из-за проявления NH-кислотности динитробензоксадиазоль-нымн производными ЛВ повышение кислотности раствора приводит к уменьшению интенсивности длинноволновых полос поглощения и их положения. В проточной системе скорость образования динитробензофуроксановых производных ЛВ и, соответственно, интенсивность аналитического сигнала также зависит от величины рН среды. На рис.3 приведена типичная зависимость высоты пика при определении новокаинамида ог рН потока. Более высокая интенсивность сигнала и, следовательно, чувствительность определений достигается в нейтральной среде.

А

0,2

0,1

Рис.2. Спектры поглощения 4,6-динитробензофуроксановых (3) и 5,7-динитробензофуразановых {1,2,4) производных лекарственных веществ: 1- натриевая соль бензилпенициллина; 2- N,N1-дибензилэтилендиаминовая соль бензилпенициллина; 3- новокаиновая соль бензилпенициллина; 4- новокаиновая соль бензилпенициллина. Растворитель: метанол-вода, 30:70 % об. Концентрация, моль/л: 1 - ЮЛ 2-5 10"5; 3 - 105; 4 - 10"5.

450 490 530

Высокая реакционная способность БФО обеспечивает возможность регистрации продуктов реакции даже в кислых средах, хотя при этом происходит значительное снижение интенсивности сигнала. Уменьшение интенсивности сигнала в щелочных средах связано со снижением эффективной концентрации реагента в потоке из-за влияния конкурирующей реакции БФО с ионами гидроксила. Для определений использованы потоки, содержащие фосфатный буфер с рН=6,86 - 7,69.

Состав реакционной среды в потоке носителя, природа растворителя для инжектируемого в поток реагента влияют на полноту завершения реакции и интенсивность сигнала при ПИ определениях J1B.

Растворимость определяемых ЛВ и их производных определяет необходимость выбора состава среды. Для производных изученных ЛВ характерна хорошая растворимость в водно-органических средах и биологических жидкостях. Из-за плохой растворимости анестезина, норсульфазола, сульгина, сульфадимезина, сульфалена, сульфапи-ридазнна, сульфадиметоксина и солей бензилпенициллина в воде использованы неводные среды (спирты, ацетоннтрил, в ряде случаев ДМСО). Дальнейшее разбавление таких растворов спиртами или их водными смесями при приготовлении рабочих раство-

Ь.мм

Рис. 3. Зависимость высоты пика при проточно-инжекционных определениях новокаинамида (7,2 10'5 М) отрН реакционной среды. Поток этанол-фосфатный буферный раствор с рН 6,86 (0,06 М) (30:70, об.). Скорость потока 1,3 мл/мин.

?. 4 6 8 10 рН

ров не вызывало седиментации определяемых JIB (так, содержание ДМСО в подвижно; фазе не превышало 0,5 %, об.).

Использование подвижных фаз на основе малополярных растворителей затрудни ется проявлением спектральных равновесии динитробензоксадиазольных производны; определяемых веществ, растворимостью соединений и низкой скоростью аналитиче ской реакции. Лучшие условия детектирования наблюдаются в полярных средах, но и i них характерно сильное влияние растворителей на степень завершения реакции и реги стрируемый сигнал. ПИ определения проводили в основном в водно-органических смс сях, в которых спектральные характеристики производных менялись незначительно. I связи с этим справедливо допущение, что интенсивность фиксируемого сигнала в ос новном связана со степенью завершенности химической реакции при условии сохранс ния постоянства гидродинамических параметров в проточной системе.

Таблица I. - Влияние природы носителя на интенсивность сигнала при определении но вокаинамида (4,5-Ю"6 моль/л) и анестезина (7-10"6 моль/л) в виде 4,6 динитробензофурокса-новых производных. Концентрация реагента Ю"2 моль/л, ско рость потока 1,15 мл/мин, Х=510 нм, ДН=1 мм

Состав потока (объемные %) Определяемые вещества Высота пика, (Н, мм)

Метанол (100) Анестезин 58

Метанол - вода (85 : 15) Анестезин 84

Метанол - вода (70 : 30) Анестезин 93

Метанол - вода (50 : 50) Анестезин 96

Метанол - вода (30 : 70) Анестезин 98

Метанол - вода (15 : 85) Анестезин 82

Метанол (100) Новокаинамид 39

Метанол - вода (30 : 70) Новокаинамид 44

Этанол (100) Новокаинамид 45

Этанол - вода (70 : 30) Новокаинамид 50

Этанол - вода (50 : 50) Новокаинамид 53

Этанол - вода (30 : 70) Новокаинамид 62

Этанол - вода (10 : 90) Новокаинамид 51

Ацетонитрил (100) Новокаинамид 25

Ацетонитрил - вода (30: 70) Новокаинамид 43

ДМСО (100) Новокаинамид 20

ДМСО : вода (30 : 70) Новокаинамид 36

Пропанол-2 (100) Новокаинамид 43

Пропанол-2 - вода (30 : 70) Новокаинамид 63

Вода (100) Новокаинамид 32

Типичное влияние состава потока на аналитический сигнал для ПИ определен анестезина и новокаинамида представлено в табл.1. Большая чувствительность достиг ется в спиртово-водных средах. С точки зрения гидродинамических характеристик и пользуемых растворителей оптимальный состав соответствует этанольно-водной смес

В этом потоке сохраняется и гомогенность среды. В других бинарных смесях, а также при проведении определений в неводных средах наблюдается понижение полноты завершения аналитической реакции. Аналогичное влияние состава потока на ПИ определения наблюдаются для сульфаниламидов, новокаиновой соли бензилпенициллина, других JIB и п-аминофенола.

Растворитель, используемый для приготовления растворов инжектируемого реагента, также влияет на полноту образования производных J1B. Более высокую устойчивость (до 8 часов) реагента обеспечивает ацетонитрил. Чувствительность определений зависит и от концентрации реагента, инжектируемого в поток. При концентрации реа-reirra ниже 8 10"3 моль/л наблюдается понижение интенсивности сигнала. В то же время при концентрациях БФО свыше 4 I0'2 моль/л происходило нарушение гомогенности потока, затрудняя проведение аналитических определений (рис.4).

Гидродинамические параметры определяют время пребывания реакционной зоны в системе ПИА, влияя на полноту протекания химической реакции и размывание регистрируемых пиков. При малых скоростях потока наблюдается влияние диффузии, а при больших скоростях уменьшается степень завершения аналитической реакции. Для изученных соединений зависимость интенсивности сигнала от скорости потока имеет плато в интервале 0,6 - 2,6 мл/мин. Длина реактора свыше 250 см при его внутреннем диаметре 0,6 мм не оказывала влияния на интенсивность сигнала. Оптимальный объем инжектируемого раствора реагента составлял 110 мкл.

Аналитические характеристики для ПИ определений исследуемых лекарственных веществ при условиях, описанных выше, представлены в табл. 2. Результаты демонстрируют линейность градуировочных зависимостей в интервале определяемых концентраций. Значения пределов обнаружения, определенных в соответствии с ЗБ-критерием и производительности определений представлены в табл. 2.

Изучено влияние различных органических и неорганических веществ, являющихся потенциальными компонентами реакционных сред, содержащих JIB, на результаты их определений. Присутствие неорганических солей и вспомогательных веществ, входящих в состав таблеток (лимонная и ацетилсалициловая кислоты, аскорбат натрия, глюкоза, сахароза, крахмал и др.), определениям не мешает.

—■ Рис.4. Влияние концентрации

инжектируемого реагента на сигнал при проточно-инжекционных определениях новокаина (5,55-Ю"6 моль/л). Поток метанол - вода (30:70, об.), рН =7,12, скорость потока 1,2 мл/мин.

—I--

4

С 10>моль/л

Таблица 2. - Аналитические характеристики проточно-инжекционных определений

аминосоединений

Определяемое вещество Состав потока Уравнение регрессии (Н, мм; Сх, мкг/мл) Интервал определяемых концентраций (мкг/мл) Коэффициент корреляции Про-извоДИ- тель-ность проб/ час Предел обна-руже ния, мкг/ мл

Анестезин Метанол-вода (30:70, об.) Н =83,84СХ -0,4 0,1-2,5 0,9998 25 0,04

Новокаин Метанол-фосфатный буферный раствор с рН 6,68 (30:70, об.) II =63,73СХ + 0,2 0,12-3,5 0,9998 24 0,05

Новокаин-Амид Этанол-фосфатный буферный раствор с рН 6,68 (30:70, об.) Н =48,2СХ -0,8 0,16-5,0 0,9999 26 0,07

п-Амино-салицилаг натрия Этанол-фосфатный буферный раствор с рН 6,68 (30:70, об.) Н =95,1СХ + 0,5 0,08 - 2,5 0,9999 28 0,03

Норсульфазол Этанол-фосфатный буферный раствор с рН 6,71 (50:50, об.) Н =22,11СХ + 1,33 0,39-3,1 0,9984 17 0,24

Этазол Этанол-фосфатный буферный раствор с рН 7,4 (30:70, об.) Н =40,08СХ -0,8 0,31-5,0 0,9987 20 0,21

Сульфапи-ридазин Этанол-фосфатный буферный раствор с рН 6,8 (30:70, об.) Н =32,45СХ -0,61 0,28 - 2,8 0,9998 12 0,31

Сульфадимезин Метанол-вода (30:70,об.) Н =40,49СХ -1,49 0,28 -5,0 0,9996 14 0,18

Сульфади-метоксин Метанол-фосфатный буферный раствор с рН 6,8 (30:70, об.) Н =41,72СХ + 1,34 0,24 -3,2 0,9998 14 0,12

Сульфацил-натрий Водный буферный раствор с рН 7,4 Н =50,14СХ -0,002 0,200,54 0,9983 18 0,13

Сульгин Метанол-фосфат-ный буферный раствор с рН 6,76 (30:70, об.) Н =25,65СХ +1,00 0,21 -2,14 0,9997 19 0,21

Сульфален Водный буферный раствор с рН 6,71 Н =42,43СХ -0,02 0,22 - 8,4 0,9989 15 0,19

Букарбан Метанол-фосфатный буферный раствор с рН 6,8 (30:70, об.) Н =39,27СХ -0,31 0,272,72 0,9985 16 0,14

Церукал Водный буферный раствор с рН 6,86 Н = 10,64с* -0,36 1,01 -8,25 0,9995 31 0,59

Фуросемид Ацетонитр ил-водный буферный раствор с рН 6,86 (15:85, об.) Н =8,58СХ + 1,34 1,6513,22 0,9999 13 0,33

Диамино-дифенил-сульфон Этанол-фосфатный буферный раствор с рН 6,0 (30:70, об.) II =89,09С, -0,16 0,991,49 0,9992 18 0,37

Новокаи-новая соль бензилпе-нициллина Метанол - вода (30:70, об.) Н=140,43СХ +1,02 0,04-0,98 0,9993 36 0,025

п-Аминофе-нол (примесь в парацетамоле) Этанол- фосфатный буфер с рН 7,69 (75:25, об). Н=139,7СХ +1,2 0,04-0,98 0,9992 35 0,025

Таблица 3. - Результаты определения лекарственных веществ в биологических средах методом добавок (л=4, Р=0,95)

Биологическая Определяемые Введено, мкг/мл Найдено,

Жидкость вещества мкг/мл

1'идролизат белков ПАСК 0,55 0,60±0,06 0,06

Новокаинамид 1,3 1,40±0,13 0,06

Сывороточный Новокаинамид 0,85 0,90+0,09 0,06

альбумин ПАСК 1,8 1,80+0,14 0,05

Плазма крови Новокаинамид 5,12 4,80±0,38 0,05

ПАСК 16,5 16+1 0,05

Сульфален 0,9 0,87±0,07 0,05

Сульфадимезин 1,3 1,35+0,11 0,05

Кровь ПАСК 4,30 3,90±0,31 0,05

Новокаинамид 2,8 2,90+0,23 0,05

Новокаинамид 10,25 10±1 0,05

ПАСК 28,1 28+2 0,04

Сульфадимезин 3,0 2,9±0,2 0,05

Сульфадиметоксин 2,5 2,6±0,2 0,05

Моча Сульфадимезин 6,1 6,0±0,5 0,05

Сульфадимезин 15,5 16±1 0,04

Сульфален 3,0 2,9±0,2 0,05

Сульфален 5,8 5,5+0,4 0,04

Сульфадиметоксин 3,2 3,1+0,3 0,05

Кроме того, избирательные определения этих веществ возможны и в присутствии различных органических компонентов, сопутствующих определяемым веществам (алкила-мины, аммиак, алкалоиды, фенол, димедрол, атропин, фурацилин, тримекаин, левоми-цетин, сахара, диуцифон, парацетамол и др.).

Возможность определения лекарственных веществ была проверена и в биологических жидкостях организма человека. ПИ определениям не мешают различные компоненты биологических жидкостей, содержащие аминные функциональные группы (аминокислоты, биогенные амины). Регистрируемые сигналы фона при введении в поток депротешшзированных гидролизата белков, сывороточного альбумина, плазмы крови и цельной крови незначительно отличается от исходного значения. Мешающее влияние биогенных аминосодержащих компонентов мочи можно устранить пробоподготовкой биосубстратов. Это позволяет проводить ПИ определения ЛВ в указанных биологических матрицах (табл.3.).

ПРОТОЧНО-ИНЖЕКЦИОННЫЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ

Избирательность детектирования в системе ПИА химиотерапевтических, аналь-гезирующих и антиаритмических лекарственных веществ (сульфаниламидов, производных п-аминобензойной и п-аминосалициловой кислот, диаминодифенилсульфона, пс-нициллинов) в биологических субстратах и лекарственных смесях нашла применение для фармакокинетических исследований, контроля качества лекарственных форм, а также изучения процессов биотрансформацни лекарственных веществ в организме человека.

Комплекс методик ПИ определения ЛВ апробирован в контроле качества различных многокомпонентных лекарственных форм (табл.4). Правильность методик ПИ определений ЛВ проверена сопоставлением результатов анализа лекарственных форм пс Фармакопее РФ.

Определения токсичного п-аминофенола использованы для оценки безопасности парацетамола, что было проверено на примере анализа готовых лекарственных фор.\ (табл. 5). Содержание токсиканта в отечественных препаратах несколько выше по сравнению с зарубежными аналогами, но не превышает нормы. Кроме того, наблюдаете? тенденция к увеличению его содержания в процессе хранения лекарственных форм.

Методики ПИ определений, наряду с хроматографическими (ВЭЖХ, ТСХ) I спектрофотометрическим методами, использованы для фармакокинетических исследо ваний ЛВ. При изучении метаболических превращений нового иммуномодулятора диу цифона в организме человека было показано, что одним из продуктов его биотрансфор мации является диаминодифенилсульфон (ДДС), который обнаруживается в моче наци ентов после приема ими как самого диуцифона, так и ДДС (рис.5).

"аблица 4. - Результаты определения лекарственных веществ в лекарственных формах

(п=4, Р=0,95).

Состав лекарственной формы Определяемые вещества Найдено по Фармакопее РФ, г Найдено по РМ*,г

>вокаина гидрохлорид - 0,25 г; НС1 0,1 н - 0,3 [; №С1 - 0,85 г; вода до 100 мл Новокаин 0,24±0,01 0,25±0,01

створа СаС12 6,0 г - 200,0 мл; №Вг - 4,0 г; >вокаина гидрохлорид - 1,0 г Новокаин 0,98±0,03 1,01 ±0,03

Щедрина гидрохлорид - 6,0 г; новокаина гид-хлорид 1% - 200 мл; димедрол - 2,0 г Новокаин 1,98±0,06 1,99±0,06

гропина сульфат - 0,02 г; эфедрина гидро-орид - 0,05 г; новокаина гидрохлорид - 0.04 вода до 10,0 мл Новокаин 0,04310,002 0,042±0,002

шедрол - 0,025 г, эфедрин - 0,025 г; ново-ииа гидрохлорид - 0,2 г; №С1 - 0,06 г Новокаин 0,18±0,01 0,19+0,01

!всчи с новокаином», новокаин - 0,1 г Новокаин 0,11 ±0,01 0,10±0,01

1счн «Анестезол»; анестезин - 0,1 г; дерма-л - 0,04 г; окись иинка - 0,02 г; ментол -)04 г; полнэтиленоксидная основа до 2,73 г Анестезин 0,095±0,03 0,096+0,02

)вока1Ш - 0.5 г; анестезин - 0,5 г, ментол -25 г; спирта этилового 70% - 50,0 г Новокаин Анестезин 0,49±0,02 0,48±0,02 0,50±0,02 0,49±0,01

1триевая соль бензилпеиициллина -0,05 /мл; калиевая соль бензилпеиициллина -)5 мг/мп Новокаи-новая соль бензилпеиициллина 1,8±0,1 мкг/мл 1,8±0,1 мкг/мл

[циллин - 5 Новокаи-новая соль бензилпеиициллина 0,89±0,01 0,90±0,01

[блеткн новокаинамида - 0,25 г Новокаи-намид 0,23+0,01 0,22±0,01

'а раствор п-аминосалицилата натрия для гьекций ПАСК 0,028±0,002 г/мл 0,029±0,003 г/мл

грептоцид- 0,75 г, норсульфазол - 0,75 г, 1Мол - 0,015 г; масло эвкалиптовое - 0,015 г; 1сло мяты перечной - 0,015 г; этанол 95 % -8 г; сахароза - 1,5 г; глицерин-2,1 г Норсульфазол 0,75±0,03 0,74+0,03

аблетки норсульфазола - 0,25 г Норсульфазол 0,24±0,01 0,24±0,01

орсульфазол-натрий - 0,5 г; глюкоза - 0,5 г, ада - 9 мл Норсульфазол 0,51 ±0,02 0,5±0,02

ульфадиметоксин - 4 г; левомицетин - 1,0 г; шмекаин - 3,0 г; полиэтиленоксид до 100 г Сульфади-метоксин 3,9±0,2 4,0+0,2

Таблетки сульфадиметоксина - 0,25 г Сульфади-метоксин 0,24±0,01 0,2510,01

Фурацилин - 0,015 г; сульфацил-натрий - 0,1 г; этанол 70 % - 20 мл Сульфацил-натрий 0,10±0,01 0,1110,01

Аскорбат натрия - 0,15 г; сульфацил-натрий -3 г, вода - 7 мл Сульфацил-натрий 2,9±0,1 2,910,1

Таблетки сульфалена - 0,2 г Сульфален 0,19+0,01 0,20+0,01

Раствор Ы-метилглюкаминовой соли сульфалена для инъекций Сульфален 0,09410,005 г/мл 0,09210,005 г/мл

Таблетки сульгина - 0,5 г Сульгин 0,49±0,02 0,50+0,02

Таблетки сульфапиридазина - 0,5 г Сульфапи-ридазин 0,095+0,03 0,09610,02

Таблетки этазола - 0,25 г Этазол 0,26±0,01 0,2510,01

Таблетки букарбана - 0,5 г Букарбан 0,4910,02 0,5010,02

Таблетки сульфадимезина - 0,5 г Сульфадимезин 0,4810,02 0,4910,02

• РМ - разработанная методика

Сопоставление результатов определения ДДС в биологической жидкости при анализе почасовых проб показало хорошее согласование для обоих случаев. В то же время наблюдается различие параметров метаболических превращений ДДС и диуцифона, что можно объяснить низкой растворимостью диуцифона и его пониженной абсорбцией в желудке, которые, по-видимому, и лимитируют выведение препарата из организма.

Сочетание ПИА, хроматографичсских и спектрофотометрических методов использовано для разработки метода диагностики фенотипа биотрансформации пациентов по типу ацетилирования с использованием сульфадимезина в качестве фармакогенети-ческого маркера. Метод основан на изучении кинетики выведения сульфадимезина с мочой обследуемого после однократного приема разовой дозы препарата. Эта

Таблица 5. - Результаты проточно-инжекционного определения л-аминофенола в лекарственных формах (п=4, Р=0,95)

Лекарственные формы Найдено, %

Парацетамол (3,910,2)10-'

Панадол (2,6+0,1)10"'

Парамол 0,16±0,01мкг/мл

Эффералган (1,3010,08)10"'

Цитрамон П (2,110,1)10-"1

Дафалган (1,1010,06)10-'

Ди-антальвик (1,0010,05)10"'

Таблица 6 - Кинетические параметры выделения диаминодифенилсульфона с мочой за сутки при пероральном приеме диаминодифенилсульфона и диуцифоиа.

Кинетические параметры Диаминодифенил-сульфон (7 пациентов) Диаминодифенилсульфон при приеме диуцифона (20 пациентов)

Период полувыведения, ч 5,00 ±0,5 7,3 ± 0,7

Количество выводимого вещества в % от дозы 19,6 + 0,9 10,5 ±0,7

Максимально выводимое за сутки количество препарата, мг 39,2 ± 1,8 31,5 ±2,1

роцедура не требует инвазивных методов отбора биологических жидкостей, техниче-ки проста и информативна. Было показано, что присутствие основного продукта био-рансформации сульфадимезина (ацетильного производного) и других метаболитов в нализируемой матрице не мешает спектрофотометрическому детектированию ЛВ.

Кинетические кривые выведения сульфадимезина с мочой приведены на рис. 6. 1ак видно, значения кинетических параметров имеют бимодальное распределение и сличаются в группах обследуемых (табл.7). Это позволяет оценить генетически обу-ловленную активность N-ацетилтрансферазы отдельных пациентов. Предложенный юдход прошел клиническую апробацию и пригоден для оптимизации безопасной дози-ювкн лекарственных веществ с учетом фенотипических особенностей пациентов, а акже может быть использован для профессионального отбора персонала при работе с шределешшми классами токсикантов, способными к метаболизму по типу ацетилиро-шгия.

т, мг

Рис. 5. Фармакокинетические кривые выве- Рис. 6. Фармакокинетические кривые ку-дения с мочой пациентов диаминодифенил- мулятивного выведения сульфадимезина с сульфона после перорального приема 200 мг мочой после перорального приема 0,5 г диаминодифенилсульфона (/) и 400 мг диу- препарата: 1 - "сверхбыстрый" тип ацети-цнфона (2). лирования, 2 - быстрый тип ацетилирова-

ния, 3 - медленный тип ацетилирования.

Таблица 7. - Фармакокинетические параметры выведения сульфадимезина с мочси при пероралыюм приеме пациентами 0,5 г лекарственного вещества

Кинетические параметры Быстрые ацетиляторы (12 пациентов) Медленные ацетиляторь; (7 пациентов)

Количество выводимого за 7 часов лекарственного вещества в % от дозы 5,5 ± 0,6 10,1 ± 1,1

Константа скорости выведения, час"1 0,15 ±0,02 0,28 ± 0,03

Максимально выводимое за 7 часов количество препарата, мг 27,5 ± 3,0 50,5 ± 5,5

Подбор систем лекарственных веществ, увеличивающих или уменьшающих а рость ацетилирования позволяет обеспечить более эффективное и безопасное приме! ние лекарств за счет детоксикации организма. На основании экспериментальных да ных предложены индукторы (пантотснат кальция, ксимедон) и ингибиторы (циметиди Ы-ацетшпрансферазы.

Разработанный метод определения фенотипа ацетилирования практически и пользован для изучения влияния мышечных тренировок на процесс ацетилирован; сульфадимезина. Для этого были обследованы спорстсмены, имеющие большой спо тивный стаж. Полученные результаты свидетельствуют, что спортсмены по фенотш ацетилирования распределились на три группы: "сверхбыстрые", быстрые и медленш (рис. 6). Наличие группы "сверхбыстрых" ацетиляторов установлено впервые, причс они составляют 48,4 % всех испытуемых. Эти данные свидетельствуют о том, что процессе адаптации организма к систематическим мышечным нагрузкам формирует! фенотип "сверхбыстрого" ацетилирования, что является одним из показателей присш собления организма к мышечным нагрузкам. Предлагаемый способ определения тиг ацетилирования можно использовать для биохимической оценки степени тренирова] ности спортсменов.

ВЫВОДЫ

1. Впервые показана возможность проточно-инжекционных определений с спекгрофотометрическим детектированием химиотерапевтических, анальгезирующих антиаритмических лекарственных веществ в биологических жидкостях и лекарстве! ных формах. Чувствительность и избирательность детектирования достигается при ш пользовании хлординитрозамещенных бенз-2,1,3-оксадиазола.

2. Установлены рабочие условия проточно-инжекционных определений лекарст венных веществ по составу реакционных сред (рН, компоненты потока, природа ш водного растворителя) и гидродинамическим характеристикам. Регулирование избирг тельности и чувствительности спектрофотометрнческого детектирования определяемы лекарственных веществ достигается выбором реагента, подбором состава растворитсл в потоках носителя и реагента, направленным изменением спектральных характеристи

роизводных определяемых веществ и степенью завершения аналитических реакций в гравновесных условиях.

3. Разработаны избирательные и чувствительные методики проточно-нжекционного определения сульфаниламидов, производных п-аминобензойной, п-линосапициловой кислот и диаминодифенилсульфона, п-аминофенола, гетероцикли-гских аминов в смесях сложного состава и биологических субстратах с производи-;льностыо до 36 проб/час, интервалом определяемых содержаний 0,04 - 13,2 мкг/мл, ределом обнаружения до 0,03 мкг/мл. Методики проточно-инжекционного определе-ия апробированы при контроле качества лекарственных форм, для изучения метаболи-гских превращений диуцифоиа и в клинических исследованиях.

4. Предложен и прошел клиническую апробацию метод установления генетиче-си детерминированных процессов биотрансформации ксенобиотиков в организме че-эвека по типу ацетилирования при использовании сульфадимезина как фармакогене-1ческого маркера. Метод позволяет оптимизировать безопасную дозировку лекарств, :уществлять подбор лекарственных веществ для предотвращения и уменьшения полных эффектов от их применения с учетом фенотипических особенностей пациентов, первые показана тримодалыюсть распределения фенотипа ацетилирования у спорт-ленов.

Основное содержание диссертационной работы изложено в следующих пуб-икацнях:

Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Евгеньева И.И., Погорельцев В.И., Шакирова JI.II1. Хлординитрозамещенные бенз-2,1,3-оксадиазола - новые эффективные реагенты в фармацевтическом анализе // Тез. докл. V Российский национальный конгресс "Человек и лекарство". Москва. 1998. С. 649-651.

Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Евгеньева И.И., Горюнова С.М., Шакирова Л.Ш., Победимский Д.Г. Реакции дериватизацин в проточных методах анализа токсичных аминосоединений // Тез. докл. XVI Менделеевский съезд по общей и прикладной химии. Т.З, Санкт-Петербург. 1998. С. 90-91.

Евгеньев М.И., Гармонов С. Ю., Погорельцев В.И., Евгеньева И.И., Шакирова Л.Ш. Аналитические методы при исследовании генетически детерминированных реакций биотрансформации веществ в организме человека // Тез. докл. XVI Менделеевский съезд по общей и прикладной химии. Т.З. Санкт-Петербург. 1998. С. 91-92. . Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш., Горюнова С.М., Евгеньева И.И. Хроматографическое исследование реакций биотрансформации аминосодержащих ксенобиотиков в организме человека // Тез. докл. III Всероссийской конференции "ЭКОАНАЛИТИКА - 98". Краснодар. 1998. С. 241-242.

Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Евгеньева И.И., Шакирова Л.Ш., Победимский Д.Г. Экспресс - методы контроля токсика!ггов в технологии лекарственных препаратов и биологически активных веществ // 'Геэ. докл. V Международной конф. "Наукоемкие химические технологии". Ярославль. 1998. T.l. С.215-216.

Шакирова Л.Ш., Брысаев A.C., Гармонов С.Ю. Хроматографические и спектрофо-тометрические методы определения аминосоединений в лекарственных препаратах и биологических средах. // Тез. докл. XII Международной Конференции молодых ученых по химии и химической технологии МКХТ -98. Москва. 1998. С. 50.

/. Брысаев A.C., Шакирова Л.Ш., Гармонов С.Ю. Применение 7-хлор-4,6-динитробензофуроксана для анализа п-аминофенола в парацетамоле // Тез. докл. IX Всероссийской студенческой научной конференции. Екатеринбург. 1999. С. 15-16.

8. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш., Брысаев A.C. Спектрофотометри-ческое определение производных п-аминобензОйной и п-аминосалициловой кислот t лекарственных формах и биологических жидкостях. // Хим. - Фарм журнал. 1999 Т.ЗЗ. №5. С.50-54.

9. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш. Реакции дериватизации в проточно инжекционном анализе амииосодержащих лекарственных веществ // Тез. докл. Второго Всероссийского симпозиума «Проточный химический анализ». Москва. 1999

10. Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш., Евгеньев М.И. Проточно-инжекционный анали: амииосодержащих лекарственных веществ со спектрофотометрическим детектиро ванием // Тез. докл. Поволжской региональной конференции, посвященной 80-летик со дня рождения A.A. Попеля. Казань. 1999. С. 95.

11. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш. Избирательные проточно инжекционные определения производных 4-аминобензойной и 4-аминосапицилово] кислот в смесях. // Журнал аналит. химии. 2000. Т.55. Ns7. С. 775-784.

12. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш, Левинсон Ф.С. Спектрофотометри ческое и хромагографическое определение сульфаниламидов в биологических жид костях и лекарственных формах И Журнал аналит. химии. 2000. Т.55. №8. С.888-895,

13. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш., Брысаев A.C. Спектрофотометри ческое и хроматографическое определение n-аминофенола в парацетамоле. // Хим. Фарм. журнал. 2000. Т.34. №5. С. 52-54.

14. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш. Проточно-инжекционное определе ние и-аминофенола в смесях со спектрофотометрическим детектированием. II Заво дская лаборатория. 2000 Т.68. №10. С. 19-24.

15. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш., Погорельцев В.И. Метод определе иия фенотипа ацетилирования при использовании сульфадимезина как фармакогеие тического маркера // Хим. - Фарм журнал. 2000. Т.34. №11.С. 5-8.

16. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш Проточно-инжекционный анализ ле карственных веществ (обзор) // Журнал аналит. химии (прошла рецензирование).

17. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш Проточно-инжекционное определе ние новокаиновой соли бензилпенициллина в препаратах пенициллина со спектро фотометрическим детектированием. // Журнал аналит. химии (прошла рецензирова ние). ' ■ •■

18. Абзалов P.A., Нигматуллина P.P., Хайруллина Г.Н., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш Евгеньев М.И. Влияние мышечных тренировок на скорость ацетилирования сульфа димезина // Бюлл. эксперим. биологии и медицины (прошла рецензирование).

С. 22.

Соискатель Заказ № ш

Л.Ш. Шакирова

Тираж 80 экп

Офсетная лаборатория Казанского государственного технологического университета 420015, г. Казань, ул. К. Маркса, 68

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Проточно-инжекционный анализ лекарственных веществ

1.2 Проточно-инжекционный анализ в практике производства и применения лекарственных препаратов

1.3 Свойства нитрозамещенных производных бенз-2,1,3-оксадиазола и их аналитическое использование

ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. Постановка задачи

2.2. Аппаратура, объекты и техника эксперимента

ГЛАВА 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ВОЗМОЖНОСТИ 4-ХЛОР-5,7

ДИНИТРОБЕНЗОФУРАЗАНА И ЕГО N-ОКСИДА ПРИ ПРОТОЧНО-ИНЖЕКЦИОННЫХ ОПРЕДЕЛЕНИЯХ АМИНОСОДЕРЖАЩИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ

3.1 Реакции аминосодержащих лекарственных веществ с хлорди-нитрозамещенными бенз-2,1,3-оксадиазола в равновесных условиях

3.2 Влияние природы растворителя и компонентов смеси на реакции аминосодержащих лекарственных веществ в системе ПИА

3.3 Проточно-инжекционные определения химиотерапевтических, анальгезирующих и антиаритмических лекарственных веществ со спектрофотометричесим детектированием

ГЛАВА 4. ПРОТОЧНО-ИНЖЕКЦИОННЫЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ

4.1 Исследование генетически детерминированных процессов биотрансформации сульфаниламидов в организме человека

4.2 Изучение метаболических превращений диуцифона в биологических средах

4.3 Проточно-инжекционное и хроматографическое определение п-аминофенола в парацетамоле 116 4.4. Проточно-инжекционное определение новокаиновой соли бензилпенициллина в препаратах пенициллина со спектрофотометрическим детектированием

Актуальность темы: Соединения с аминными функциональными группами представляют собой важные классы лекарственных веществ (J1B) и находят широкое применение в медицинской практике как эффективные препараты с разнообразной фармакологической активностью (химиотерапевтической, анальгезирующей, антиаритмической и др.). Генетическая детерминированность и индивидуальная вариабельность процессов их биотрансформации в организме человека, токсичность многих из них при незначительном нарушении дозировки, а также многокомпонентность технологических смесей синтеза и лекарственных форм требуют применения избирательных, чувствительных методов для мониторинга этих ксенобиотиков в биологических жидкостях и лекарственных формах.

В последнее десятилетие в анализе лекарственных веществ, наряду с развитием различных физико-химических методов, наблюдается тенденция к использованию такой аналитической системы, как проточно-инжекционный анализ (ПИА). Этому способствовали такие преимущества ПИА, как простота технического исполнения, высокая производительность, надежность и экономичность определений, возможность получения большого объема аналитической информации.

Однако проблемой, ограничивающей применение ПИА в фармацевтическом анализе, является возможность избирательного и чувствительного детектирования определяемых соединений. Это связано как со спецификой значительной части JIB и их метаболитов, связанной с высокой полярностью, слабо выраженными хромофорными, электрофорными или флуорофорными свойствами, так и сложным составом анализируемых матриц при низких содержаниях аналита. Кроме того, измерение аналитического сигнала в неравновесных условиях, когда физические и химические процессы в реакторе не завершены, вызывают необходимость быстрого изменения аналитических свойств JIB за время движения определяемого соединения к детектору. По этим причинам большая часть реакций дериватизации аминосоединений существенно ограничивает возможности проточно-инжекционного анализа лекарственных веществ.

В то же время существует потребность в использовании таких аналитических реакций, которые благодаря хромофорным свойствам образующихся производных можно использовать в ПИА для селективных и чувствительных определений амино-содержащих лекарственных веществ в сложных по составу смесях без их разделения.

Целью работы является изучение условий проведения реакций дериватизации некоторых аминосодержащих лекарственных веществ химиотерапевтического, аналь-гезирующего и антиаритмического действия хлординитрозамещенными бенз-2,1,3-оксадиазола в системе проточно-инжекционного анализа и разработка методик избирательного и чувствительного определения их в реакционных смесях, лекарственных формах и биологических жидкостях.

Научная новизна:

- в системе проточно-инжекционного анализа как аналитический реагент для дериватизации сульфаниламидов, производных п-аминобензойной и п-аминосалициловой кислот, диаминодифенилсульфона, гетероциклических аминов впервые использован 7-хлор-4,6-динитробензофуроксан;

- изучены спектральные, кислотно-основные и другие характеристики синтетически выделенных динитробензофуразановых и динитробензофуроксано-вых производных ряда аминосодержащих лекарственных веществ химиотерапевтического, анальгезирующего и антиаритмического действия, установлен их состав;

- обоснованы условия использования 4-хлор-5,7-динитробензофуразана и его N-оксида при проточно-инжекционных определениях, выработаны критерии их выбора для дериватизации некоторых аминосодержащих лекарственных веществ различных классов;

- выявлен характер влияния состава потока, его физико-химических и гидродинамических характеристик, компонентов анализируемых сред на избирательность и чувствительность проточно-инжекционных определений;

- показана возможность использования приема кинетической "дискриминации" для достижения избирательности детектирования определяемых антибиотиков пенициллинового ряда в лекарственных смесях сложного состава;

- найдены рабочие условия проточно-инжекционных определений лекарственных веществ в сложных по составу анализируемых матрицах;

- показана возможность использования реакций дериватизации сульфаниламидов для изучения фенотипических особенностей биотрансформации ксенобиотиков в организме человека и проведения функционального спортивного биохимического мониторинга.

Практическая значимость работы. Предложены экспрессные и чувствительные методики проточно-инжекционного, спектрофотометрического определения ряда аминосодержащих лекарственных веществ химиотерапевтического, анальгезирующе-го и антиаритмического действия в реакционных смесях, сложных по составу лекарственных формах, биологических жидкостях организма человека.

В клинических условиях апробированы методики определения сульфаниламидов, производных п-аминобензойной и п-аминосалициловой кислот, диаминодифе-нилсульфона в различных биологических субстратах, полученных у пациентов в процессе терапевтического мониторинга. Результаты исследования метаболических превращений диуцифона в организме пациентов и фармакокинетики его метаболита диаминодифенилсульфона могут быть использованы для оптимизации безопасного и эффективного клинического использования этого противолепрозного и иммуномоду-лирующего лекарственного средства. Разработан метод определения генетически детерминированного процесса биотрансформации ксенобиотиков по типу ацетилирова-ния в организме человека при использовании сульфадимезина в качестве фармакоге-нетического маркера. Метод пригоден для оптимизации безопасной дозировки лекарственных веществ и установления показателя адаптации организма к интенсивной мышечной деятельности.

Результаты работы используются в фармакокинетических исследованиях (Казанский государственный медицинский университет), биохимических исследованиях функционального состояния спортсменов, оценке степени их тренированности (Казанский государственный педагогический университет) и внедрены в лечебную практику Казанской городской клинической больницы № 6. Экспериментальные результаты и выводы на их основе использованы в учебном процессе Казанского государственного технологического университета в курсах "Контроль качества лекарственных препаратов" и "Экологический мониторинг".

На защиту выносится:

• Результаты изучения и подбор оптимальных условий протекания аналитических реакций аминосодержащих лекарственных веществ химиотерапев-тического, анальгезирующего и антиаритмического действия с хлординит-розамещенными бенз-2,1,3-оксадиазола;

• Обоснование роли растворителя, компонентов анализируемой матрицы в формировании аналитического сигнала при определениях аминосодержащих лекарственных веществ в виде их производных в равновесных и неравновесных условиях;

• Результаты изучения влияния состава потока и его гидродинамических параметров, рН, электрофильных свойств используемого реагента, свойств определяемого вещества на выбор условий избирательного и чувствительного детектирования сульфаниламидов, производных п-аминобензойной и п-аминосалициловой кислот, диаминодифенилсульфона, п-аминофенола, гетероциклических аминов в виде бензоксадиазольных производных в системе проточно-инжекционного анализа;

• Методики проточно-инжекционного и спектрофотометрического определения сульфаниламидов, производных п-аминобензойной и п-аминосалициловой кислот, диаминодифенилсульфона, п-аминофенола, гетероциклических аминов в промышленных и модельных смесях, лекарственных формах и биологических жидкостях;

• Способ определения фенотипа биотрансформации при использовании сульфадимезина как фармакогенетического маркера и результаты его применения в клинических условиях, а также в режиме профессиональной спортивной деятельности.

• Данные по метаболизму диуцифона в организме человека и возможность их клинико-фармакологического использования.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены на V Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1998), XVI Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Москва, 1998), III Всероссийской конференции "ЭКОАНАЛИТИКА - 98" с международным участием (Краснодар, 1998), V Международной конференции "Наукоемкие химические технологии" (Ярославль, 1998), . 9

XII Международной Конференции молодых ученых по химии и химической технологии МКХТ -98 (Москва, 1998), Втором Всероссийском симпозиуме «Проточный химический анализ» (Москва, 1999), Поволжской региональной конференции, посвященной 80-летию со дня рождения А.А. Попеля (Казань, 1999), итоговых научных конференциях КГТУ (Казань, 1998 - 2000).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 статей и 9 тезисов докладов.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, четырех глав экспериментальной части, в которых описана постановка задачи, аппаратура, объекты и техника эксперимента и изложены результаты с их обсуждением, выводов, заключения и списка цитируемой литературы. Диссертация изложена на 152 страницах, содержит 20 рисунков, 28 таблиц и библиографию 239 наименований. В приложении к диссертации представлены акты использования аналитических методик.

выводы

1. Впервые показана возможность проточно-инжекционных определений хи-миотерапевтических, анальгезирующих и антиаритмических лекарственных веществ в биологических жидкостях и лекарственных формах. Чувствительность и избирательность спектрофотометрического детектирования прточно-инжекционных определений достигается при использовании хлординитрозамещенных бенз-2,1,3-оксадиазола.

2. Установлены рабочие условия для проточно-инжекционных определений лекарственных веществ по составу реакционных среды (рН, компоненты потока, природа неводного растворителя) и гидродинамическим характеристикам. Регулирование избирательности и чувствительности спектрофотометрического детектирования определяемых лекарственных веществ достигается выбором реагента, подбором состава растворителя в потоках носителя и реагента, направленным изменением спектральных характеристик производных определяемых веществ и степенью завершения аналитических реакций в неравновесных условиях.

3. Разработаны избирательные и чувствительные методики проточно-инжекционного определения сульфаниламидов, производных п-аминобензойной, п-аминосалициловой кислот и диаминодифенилсульфона, п-аминофенола, гетероциклических аминов в смесях сложного состава и биологических субстратах с производительностью до 36 проб/час, интервалом определяемых содержаний 0,04 - 13,2 мкг/мл, пределом обнаружения до 0,03 мкг/мл. Методики проточно-инжекционного определения апробированы при контроле качества лекарственных форм, для изучения метаболических превращений диуцифона и в клинических исследованиях.

4. Предложен и прошел клиническую апробацию метод установления генетически детерминированных процессов биотрансформации ксенобиотиков в организме человека по типу ацетилирования при использовании сульфадимезина как фармако-генетического маркера. Метод позволяет оптимизировать безопасную дозировку лекарств, осуществлять подбор лекарственных веществ для предотвращения и уменьшения побочных эффектов от их применения с учетом фенотипических особенностей пациентов. Впервые показана тримодальность распределения фенотипа ацетилирования у спортсменов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

1. Ruzicka J., Hansen E.H. Flow 1.jection Analysis // Anal. Chim. Acta.-1986.-V. 179, №1.-P.l-7.

2. Ruzicka J., Hansen E.H. Flow Injection Analysis.-New York: John Wiley, 1981.-P. 207213.

3. Ueno K., Kino K. Introduction to Flow Injection Analysis: Principles and Applications. -Ellis Horwood. Chichester, 1987.-P. 415-421.

4. Ruzicka J., Hansen E.H. Flow injection analysis Where are we heading?.//Trends in Anal. Chem. 1998. V. 17. № 2. P. 69-75.

5. Luque de Castro M.D., Valcarcel M. Flow-injection analysis of pharmaceuticals // J. Pharm. And Biomed. Anal.-1989.-V.7, №12.-P.1291-1300.

6. Шпигун Л.К. Проточно-инжекционный анализ // Ж. аналит. химии.-1990.-Т.45, вып.б.-С. 1045-1090.

7. Wang J., Chen Liang, Chicharro M. Trace measurements of nucleic acids using flow injection amperometry//Anal. Chim. Acta. 1996. V.319. № 3. P.347-352.

8. Maiella L. Ramos, Julian F. Tyson, David J. Curran Determination of acetaminophen by flow injection with on-line chemical derivatization: Investigations using visible and FTIR spectrophotometry//Anal. Chim. Acta. 1998. V.364. P. 107-116.

9. Gorog S. The changing face of chemical derivatization in pharmaceutical and biomedical analysis // Fresenius J. Anal. Chem.-1998.-V.362.-P.4-11.

10. Koupparis M.A., Anagnostopoulou P.I. // Anal. Chim. Acta. 1988. V.204. P.271-279.

11. Esteve Romero J.S., Ramis Ramos G., Coll Forteza R., Martin Cerda Flow-injection spectrophotometric determination of arylamines and sulfonamides by diazotization and coupling in a micellar medium //Anal. Chim. Acta. 1991. V.242. N 1. P. 143-146.

12. Berzas Nevado J.J., Lemus Gallego J.M., Buitrago Laguna P. Spectrophotometric determination on of catecholamines with metaperioclate by flow-injection analysis // Anal. Chim. Acta. 1995. V.300. N 1-3. P.293-297.

13. Martin M.I.G., Perez C.G., Lopez M.A.B. Batch and flow spectrophotometric determination of aztreonam// Analyst. 1992. V.117.N 11. P. 1789-1792.

14. Karlicek R., Solish P. Flow-injection spectrophotometric determination of tetracycline antibiotics //Anal. Chim. Acta. 1994. V.285. N 1-2. P. 9-12.

15. Kamath B.V., Shivram K., Vangani S. Flow injection analysis of famotidine with spectrophotometric detection //Anal. Lett. 1993. V.26. N 10. P. 2183-2191.

16. Sultan S.M., Suliman F.-E.O. Flow injection spectrophotometric detection of the antibiotic ciprofloxacin in drug formulations // Analyst. 1992. V.l 17. № 9. P. 1526-1526.

17. Solich P., Sedliakova V., Karlicek R. Spectrophotometric determination of cardiac glycosides by flow-injection analysis Spectrophotometric determination of cardiac glycosides by flow-injection analysis // Anal. Chim. Acta. 1992. V.269. N 2. P. 199-203.

18. A1-Tamrah S.A., Alwarthan A.A. Determination of some tetracyclines spectrophotometrically by flow-injection analysis // Anal. Lett. 1992. V.25. N 10. P. 18651876.

19. Suliman F.-E.O., Sultan S.M. Sequential optimization of a flow injection spectrophotometric method for the assay chlorpromasine in pharmaceutical preparations // Talanta. 1994. V.41. № 11. P. 1865-1871.

20. Lin Zhisong, Yuan Bo, Fu Guiying Определение цефалексина в сложных капсулах цефалексина с помощью ПИА // Chin. Pharm. J. 1996. V.31. № 5. P. 297-298.

21. Jingfu Liu, Yingdi Feng Determination of nicotine by reagent injection flow injection photometric method // Talanta. 1998. V.47. P. 833-840.

22. Garcia M.S., Sanchez-Pedreco C., Albero M.I., Rodenas V. Determination of penicillamine or thiopronin in pharmaceutical preparations by flow injection analysis // J. Pharm. and Biomed. Anal. 1993. V.ll. № 8. P. 633-638.

23. Calataynd J.M., Sarrion S.N., Sampedro A.S., Benito C.G. Determination of promethazine hydrochloride with bromophenol blue by a turbidimetric method and flow-injection analysis //Microchem. J. 1992. V.45. N 2. P. 129-136.

24. Nevado Berzas J.J., Gallego Lemus J.M., Laguna Buitrago P. Spectrophotometric determination of dopamine and methyldopa with mataperiodate by flow injection analysis // Fresenius J. Anal.Chem. 1995. V 353. P. 221-223.

25. Clarke D.J., Greenway G.M. Method for the determination of a penicillin by flow-injection spectrophotometry//Anal. Proc. 1992. V.29. N 8. P. 368-373.

26. Khokhar M.Y., Miller J.N. Flow-injection studies of cyclodextrin-enhanced fluorescence in the aminoacid-thiol-o-phthalaldehyde reaction // Anal. Proc. 1993. V.30. N 2. P. 93-94.

27. Gunaratua P.Ch., Wilsen G.S. Noncompetitive flow injecton immunoassay for a hapten, a-(difluoromethyl) ornithine // Anal. Chem. 1993. V.65. N 9. P. 1152-1159.

28. Bermudes В., Lazaro F., Dobores L.C.M. et al. Individual and simultaneous fluorimetric determination of glycine and cystein by flow injection analysis // Microchem. J. 1987. V.35. N3. P. 315-323.

29. Lopez Erros C., Vinas P., Mernandez Cordoba M. Flow-injection fluorimetric analysis of sulphamethoxazole in pharmaceutical preparations and biological fluids // Talanta. 1994. V.41.P. 2159-2164.

30. Blanco M., Coello J., Iturriaga H., Maspoch S., Pages J. FIA fluorimetric determination of calcium pantothenate. Validation and quantitation in multivitamin preparations // Anal. Lett. 1995. V.28.N5.P. 821-833.

31. Whiteside I.R.C., Worsfold P.J., Me Kerrell E.H. Flow-injection determination of secondary amines in non-aqueous solution with fluorescence detection // Anal. Chim. Acta. 1988. V.204. P. 343-348.

32. Manedero M.C., Aaron J.J. Flow-injection determination of sulphonamides with fluorimetric or photochemical-fluorimetric detection // Anal. Chim. Acta. 1992. V.269. N 2. P.193-198.

33. Alonso A., Almendral M.J., Merino F., Palmero S.P. Micellar catalysed reactinos for flow injection systems. Determination of piridoxal-5 phosphate // Analyst. 1995. V.120. № 9. P. 2401-2405.

34. Calataynd J.M., Blasco Martinez F.J., Sagrado Vives. S. Fluorometric determination of diphenhydramine by flow-injection analysis // Microchim. Acta. 1992. V.l. P. 319-325.

35. Segarra Guerrero R., Sagrado Vives. S., Calataynd J.M. Fluorimetric determination of captoril by flow-injection analysis // Microchem. J. 1991. V.43. N 3. P. 176-180.

36. Perez-Ruiz Т., Martinez-Lozano C., Tomas V., Casajus R. Flow-injection fluorimetric determination of thiourea// Talanta. 1995. V.42. P. 391-394.

37. Albero M.I., Sanchez-Pedreco C., Garcia M.S. Flow-injection spectrofluorimetric determination of flufenamic and mefenamic acid in pharmaceuticals // J. Pharm. and Biomed. Anal. 1995. V. 13. № 9. P. 1113-1119.

38. Vinas P., Lopez-Erroz C., Cerdan F.J., Hernandez-Cordoba M. Determination of phenylpropanolamine and methoxamine using flow-injection with fluorimetric detection // Talanta. 1998. V.47. P. 455-462.

39. Mori H., Natsume К. Flow injection-fluorimetric determination of amino acids utilizing enhanced catalytic reaction // Anal. Sci. 1987. V.3. P.581-582.

40. De la Pena L., Gomez-Hens A., Perez-Bendito D. Simultaneous kinetic-photometric determination of imipramine and desipramine by stopped-flow mixing technique // Anal. Chim. Acta. 1993. V. 283. N 1. P.471-478.

41. Sultan Salah M. Flow-injection stopped-flow kinetic determination of the anxiolytic sedative bromazepam in dosage forms // Analyst. 1992. V.l 17. № 4. P. 773-776.

42. Hasan B.A., Khalaf K.P., De La Guardia M. Flow analysis-spectrophotometric determination of L-DOPA in pharmaceutical formulations by reaction with p-aminophenol // Talanta. 1995. V.42. P. 627-633.

43. Parra Almendral M.J., Mateos A.A., Mata M.M., Garcia de Maria C. Enzymatic flow-injection determination of L-phenylalanine using the stopped-flow and merging-zones techniques//Talanta. 1998. V.47. P. 121-126.

44. Georgiou C.A., Koupparis M.A., Hadjiioannou T.P. Flow-injection stopped-flow kinetic spectrophotometric determination of drugs, based on micellar-catalysed reaction with 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene //Talanta.-1991 .-V.3 8.-P.689-696.

45. Rosenberg E., Kellner R. Enhansing the selectivity of FTIR spectroscopy by enzimatic FIA //Pittsburgh Conf., Anal. Chem. And Appl. Spectrosc., Atlanta. 1993. P. 459-465.

46. Martinez Calataynd J., Sancher Sampedro A. Turbidimetric determination of phenformin by flow injection analysis //Analysis. 1989. V.17. P.413-416.

47. Romero A.M., Benito G.G., Catalaynd J.M. On-line photochemical derivatization and flow-injection spectrophotometric determination of ergonovine maleate // Anal. Chim. Acta. 1993. V.282. N 1. P. 95-100.

48. Gomez Beninto C., Garcia S.T., Martinez Calataynd J. Spectrophluorimetric determination of emetine by flow injection using barium peroxide and UV derivatization // Anal. Chim. Acta. 1993. V.279. N 2. P. 293-298.

49. Alwarthan A.A., Al-Tamrah S.A., Akel A.A. Determination of promethazine by its inhibition of the chemiluminescence of the luminol-hydrogen peroxide-chromium(III) system // Anal. Chim. Acta. 1993. V.282. N 1. P. 169-174.

50. Jiachu Huang, Chengxiao Zhang, Zhujun Zhang Flow injection chemiluminescence determination of isoniazid with electrogenerated hypochlorite // Fresenius Z. Anal. Chem. 1999. B.363. N 1. S.126-128.

51. Danet A.F., Calataynd J.M. FIA-spectrophotometric determination of thiamine after UV-irradiation // Talanta. 1994. V.41. P. 2147-2151.

52. Hasebe Takashi, Nagao Junko, Kawashina Takuji Simultaneons flow injection determination of acetylcholine and choline based on limunol chemiluminescence in a micellar system whit on-line dialysis // Anal. Sci. 1997. V.13. № 1. P. 93-98

53. Al-Warthan A.A., Al-Tamrah S.A., Akel A.A. Flow- injection determination of kanamycin by inhibition of the lucegenin-H202-Co system // Anal. Chim. Acta. 1994. V.293. N 1-2. P. 201-208.

54. Defitereos N.T., Colokerinos A.C., Efstathion C.E. Flow-injection chemiluminometric determination of epinephrine, norepinephrine, dopamine and L-dopa // Analyst. 1993. V.188. № 6. P. 627-632

55. Al-Warthan A.A., Al-Tamrah S.A., Akel A.A. Determination of isoprenaline with lucigenin chemiluminescence using flow injection analysis // Anal. Sci. 1994. V.10. № 3. P. 449-452.

56. Deftereos N.T., Colokerinos A.C. Flow-injection chemiluminometric determination of steroids //Anal. Chim. Acta. 1994. V.290. P. 190-200.

57. Perez-Ruiz Т., Martinez-Lozano C., Sanz A., Tomas V. Photokinetic determination of riboflavin-5 -phosphate using flow-injection analysis and chemiluminescence detection // Analyst. 1994. V.119. № 8. P. 1825-1828.

58. Hu Xincheng, Takenaka Norimishi, Kitano Masaru, Bandow Hiroshi, Maeda Yasuaki, Hattori Masaharu Determination of trace amounts of urea by using flow injection with chemiluminescence detection // Analyst. 1994. V.l 19. № 8. P. 1829-1833.

59. Chen D., Ribs A., Lique de Castro M.D., Valcarcel M. Simultanious flow injection determination of chlorpromazine and promethazine by photochemical reaction// Talanta. 1991. V.38. P.1227-1233.

60. Perez-Ruiz Т., Martinez-Lozano С., Sanz A. Flow-injection determination of ascorbic acid based // Anal. Chim. Acta. 1995. V.308. P. 299-307.

61. Hasebe Takashi, Kawashina Takuji Flow injection determination of ascorbic acid by iron (III) -catalyzed lucigenin chemiluminescence in a micellar system // Anal. Sci. 1996. V.12. № 5. P. 773-777.

62. Fatma A. Aly, Nawal A. Alarfaffi, Abdulrahman A. Alwarthan Permanganate-based chemiluminescence analysis of cefadroxil monohydrate in pharmaceutical samples and biological fluids using flow injection // Talanta. 1998. V.47. P.471-478.

63. Nagels L. J., Mush G., Massart D. L Rapid-scan hydrodynamic voltammetry and cyclic voltammetry of pharmaceuticals in flow-injection analysis conditions // J. Pharm. and Biomed. Anal. 1989. V.7. № 12. P. 1479-1483.

64. Cataldi T. R. I., Palmisano F., Zambonin P. G. Flow injection with anodic polarographic detection for the determination of allopurinol in pharmaceutical formulations // Analyst. 1989. V.114. № 11. P. 1449-1452.

65. Гурьев И.А., Зюзина Л.Ф., Шабарин А.А. Проточно-инжекционное определение некоторых азотсодержащих лекарственных препаратов // Ж. Аналит. химии. 1998. т.53. №10. с. 1098-1102

66. Lima Jose L.F., Conceicao М., Montenegro B.S., Alonso J., Bartroli J., Raurich J.G. Solid-state PVC flow-through benzoate electrode // J. Pharm. and Biomed. Anal. 1989. V.7. № 12. P. 1490-1505.

67. Palsson Bernhard O., Shen Bing Q., Meyerhoff Mark E., Trojano wicz Marek Simultaneous determination of ammonia nitrogen and L-glutamine in bioreactor media using flow injection analysis // Analyst.-1993.-V. 118, N 11 .-P. 1361 -1365.

68. Kravczyk Vel Т., Trojanowics M., Lewenstam A. Enzymatic flow-injection determination of urea in blood serum using potentiometric gas sensor with iternal nonacting based ISE // Talanta. 1994. V.41. № 8. P.1229-1236.

69. Cookeas E.G., Efstathiou C.E. Flow-injection amperometric determination of thiocyanate and selenocyanate at a cobalt phthalocyanine modified carbon paste electrode // Analyst. 1994. V.l 19. № 7. P. 1607-1612.

70. Moody G.J., Sanghera G.S., Thomas J.D.P Flow-injection determination of glucose in blood and an amperometric detection// Anal. Proc. 1986. V.23. P. 446.

71. Wieck H.J., Heider G.N.Jn., Yacunych A. Glucose determination using flow injection analysis and an amperometric biosensor based on glucose oxidase immobilized on carbon electrode//Anal. Chim. Acta. 1984. V.158. P. 137-141.

72. Smolander M., Cooper J., Schuhmann W., Hammerle M., Schmidt H. Determination of xylose and glucose in a flow-injection system with PQQ-dependent aldose dehydrogenase // Anal. Chim. Acta. 1993. V.280., P.l 19-127.

73. Cios J.F., Dorsey J.G. Enhanced stability of electrochemical detection with surfactant containing mobile phases in liquid chromatography and flow injection analysis // Anal. Lett.-1990.- V.23, N 12.-P.2327-2331.

74. Дакашев А., Илчева JI., Джамбазова П. Определение анальгина при помощи проточно-инжекционного метода с кулонометрическим детектированием // Изв. хим. /Болг. АН. 1991. т.24. №1. с. 118-123.

75. Lahuerta Zamora L., Martinez Calatayund J. Flow-injection spectrophotometrie determination of amino acids based on an immobilized copper (II)- zincon system // Anal. Chim. Acta. 1993. V.281. № 3. P.601-605.

76. Kojto A., Pusanovska-Tarasiewicz, Martinez Calatayund J. Immobilization of hexaeianoferrate (III) for a blow injection-spectrophotometric determination of prometazine //Anal. Lett. 1993.v.26. № 3. P.593-604.

77. Emara S., Razel S., El-Shorbagi A.-N., Masujima Tsutomu Flow injection method for the determination of methotrexate with a column packed oxidizing agent // Analyst. 1996. V.121. №2. P. 183-186.

78. Pereira A.V., Fatibello-Filho O. Spectrophotometric flow injection determination of L-ascorbic acid with a packed reactor containing ferric hydroxide // Talanta. 1998. V.47. P.l 118.

79. Rus J., Lazaro F., Luque de Castro M.D Flow injection systems with enzymes reactors // J. Antom. Chem. 1988. V.10. P.15-19.

80. Chemnitius Gabrielle C., Erdmann Helmut, Schmidt Rolf D. Solubilized substrates for the on-line measurement of lipases by flow injection analysis during chromatographic enzyme purification / Anal. Biochem.1992. v.202. №1. P. 16-24.

81. Girotti S., Ferri E., Ghini S., Rauch P., Carrea G., Bovara R., Roda A., Giosue M.A., Masotti P., Gangemi G. Bioluminescent flow-sensing device for the determination of magnesium (II) // Analyst. 1993. V.l 18. №7. P. 849-853.

82. Simonian A.L., Badalian I.E., Beresov T.T., Smirnova I.P., Khaduev S.H. Flow-injection amperometric biosensor based on immobilized L-Lysine-a-oxidase for L-Lysine determination//Anal. Lett. 1994 N21. № 15. P.2849-2860.

83. Wade A. P., Crouck S. R. //Anal. Chem. 1987. V. 59. P. 2245-2252.

84. Matsumoto K., Kanukado H., Matsubara H., Osajima Y. Flow-injection determination of glucose, fructose and citrose in biological samples II Ibid. 1988. V. 60. P. 147.

85. Tang Lian X., Rowell F.J., Cumming R.H. Rapid and sensetive assay for some protease enzymes using a fluorosubstrate-immobilized bioreactor // Analyst. 1995. V.l20. №7. P. 1949-1952.

86. De Farria L.C., Pasguini G., De Olivetta Neto G. Determination of urea in serum by using naturally immobilized urease in a flow injection conductimetric system // Analyst. 1991. V.116. №4. P.357-360.

87. De Alwis W. U., Wilson G. S. Flow injection electrochemical detection of immunological reactions // Abstr. Pap. Pittsburgh Conf. and Expo Anal. Chem. and Appl. Spectrosc., Atlantic City, N. Y., March 10—14, 1986. S. L., s. a., 1971; РЖХим. 1987. 2Г34.

88. De Alwis W. U., Wilson G. S. Electrochemical detection of immunoassays //Abstr. Pap. Pittsburgh Conf. and Expo. Anal. Chem. and Appl. Spectrosc., Atlantic City, N. Y., March 9—13, 1987. Pittsburgh, 1987. P. 677; РЖ Хим. 1988, 4Г2.

89. Arefyev A.A., Vlasenko S.B., Eremin S.A., Osipov A.P., Egorov A.M. Flow-injection enzyme immunoassay of haptens with enhanced chemiluminescence detection // Anal. Chim. acta. 1990. V. 237. P. 285-289.

90. Wolters R., Van Opstal M.A.J., Kateman G. Quantitive validation of a flow-injection determination of penicillin in pharmaceutical formulations by means of a validation program based on an expert system //Anal. Chim. Acta. 1990. V.233. N 1. P.65-76.

91. Li Xianng-Ming, Chen Manxiang, Ruan Fu-Chang, Ng Wing-Yan Characteristics and redout correlation of flow injection anlysis for penicillin// Anal. Chim. acta. 1992. V. 269. №1. P. 35-40.

92. Hasebe Y., Takamori K., Uchiyama S. Enzyme-based chemically amplified flow-injection determination of catechol and catecholamines using an immobilized tyrosinase reactor and I-ascorbic acid // Anal. Chim. Acta. 1993. V.282. № 2. P.363-367.

93. Fatibello-Filho O., Da Chir Vuira I. Flow-injection spectrophotometric determination of L-dopa and carbidopa in pharmaceutical formulations using a crude extract of sweet potato root as enzymatic source // Analyst. 1997.V. 122, № 4. P. 345-350.

94. Alonso A., Almendral M.J.,Baer M.D., Porras M.J., Alonso C. Determination of L-arginine by flow-injection techniques // Anal. Chim.acta.l995.V. 308, № 1-3. P. 164-169.

95. Almendral M.J., Porras M.J., Alonso C., Baer M.D., Alonso C. Spectrophotometric determination of L-asparagine immobilized on an epoxy resin // Anal. Chim acta.1995. V. 308, № 1-3. P. 170-177.

96. Sanchez- Cabezudo, Fernander- Romero J.M., Lugue de Gastro M.D. Fluorimetric-flow injection determination of theophyline based on its inhybitore effect on immobilized alkaline phosphatase //Anal. Chim.acta. 1995. V. 308 , № 1-3. P. 159-163.

97. Sacai Т., Ohta N., Sasaki H. Flow-injection analysis of cationic disinfectants in pharmaceutical using ion associates formed between sulphonephthalein dyes and quinidine // Fresenius J.Anal.Chem. 1994. V. 349, №6. P. 475-476.

98. Liu Gaoyuan, Goodall David M., Loran John S. Quantification and enantiomeric purity of pharmaceuticals in dosage form using flow-injection analysis with dual absorbance and polarimetric detection // Anal. Proc. 1992. V. 29, № 6. P. 255-257.

99. Burns D.Thorburn, Chimpalu N., Leiwongcharoen K. Flow-injection extraction spectrophotometric determination of salbutamol by oxidative coupling with 4-amino-N,N-dimethylaniline // Anal. Chim. Acta. 1992. V.260, №1. P.65-68.

100. Burns D.T., Chimpalee N., Harriot M. Flow-injection extraction spectrophotometric determination of bismuth as tetraiodobismuthate (III) with the tetramethylenbis(triphenilphosphonium) cation // Anal. chim. Acta. 1989.V. 225, № 2. P. 449-453.

101. Miller B.E., Paulson J., Prusak J. The determination of choline type pharmaceutical compounds by solvent extraction // flow injection analysis // Pittsburg Conf. Presents PITTCON'92, New Orleans (La)., 1992. P.328-337.

102. Sacai J., Ohno N. Novel flow-injection analysis for selective spectrophotometric determination of cetylpyridinium chloride in pharmaceuticals utilizing thermochromism of ion associates // Anal. Sci. 1991. V. 7, № 6, Pt 1, Suppl. P. 297-300.

103. Karlberg В., Thelander S. Flow injection determination of codeine with extraction procedure // Anal. Chim. Acta. 1978. V.98. № 1. P. 1-8.

104. Sahlestrom Y., Karlberg B. Determination of codeine of pharmaceutical preparations by flow injection analysis with liquid extraction // Anal. Chim. Acta. 1986. V.179. № 1-2. P.315-321.

105. Gallego M., Silva M., Valcarcel M. Flow injection analysis codeine in pharmaceutical samples // Fresenius Z. Anal. Chem. 1986. B.323. N 1. S.50-56.

106. Maeda M., Tsuji A. // Analyst. 1985. V. 110. № 2. P. 665-669.

107. Cooper J.C., Danzer J., Schmidt H.-L. Enhanced selectivity in flow injection analysis for L-amino acids using electrodialysis with amino acids oxidation // Anal. Chim. Acta. 1993. V.282. N 2. P.369-374.

108. Shi G., Xu F., Zhou H., Mao L., Jin L. Flow injection analysis-electrochemical detection for the determination of drug protein interactions with microdialysis sampling // Anal. Chim. Acta. 1999. V.386. N 1-2. P.123-128.

109. Hansen E.H., Ruzicka J., Rietz B. // Anal. Chim. Acta. 1977. V.89. N 1-2. P.241-246.

110. Gorton L., Ogren L. //Anal. Chim. Acta. 1981. V.130. N 1-2. P.45-49.

111. Lundback H, Olsson B. // Anal. Lett. 1985. V.18. № A7. P. 871-878.

112. Fang Qun, Shi Xiao-Tong, Sun Yi-Quin, Fang Zhao- Lun Flow injection analysis-electrochemical detection for the determination of drug protein interactions with microdialysis sampling // Anal. Chem. 1997. V. 69, № 17. P. 3570-3577.

113. Weinmann W., Svoboda M. Fast screening for drugs of abuse by solide phase extraction combined with flow-injection ionspray-tandem mass spectrometry // Anal. Toxic. 1998. V. 22. №4. P. 319-326

114. Fang Z., Fang Q., Liu X., Chen H., Liu C. Continuous monitoring in drug dissolution testing using flow injection systems // Trends in Anal. Chem. 1999. V. 18. № 4. P. 261269.

115. Luque de Castro M.D., Valcarel M. Flow injection analysis of drugs // J. Pharm.Biomed. Anal. 1990. V.8. P.329-335.

116. BarnettN., Lenehan C., Lewis S. Sequential injection analysis: an alternative approach to process analytical chemistry // Trends in Anal. Chem. 1999. V. 18. № 5. P. 346-352.

117. Barnett N.W., Lenehan C.E., Lewis S.W., Tucker D.J., Essery K.M.—// Analyst. 1998. V.123. P.601-609.

118. Barnett N.W., Lenehan C.E., Lewis S.W Sequential injection analysis: an alternative approach to process analytical chemistry //Trends in Anal. Chem. 1999. V.18, №5. P.346-351.

119. Good Laboratory Practices in Governmental Drug Control Laboratories. WHO Technical Report Series 748, Geneva, 1987.

120. Guide 25. General Requirements for the Competence of Testing and Calibration Laboratories. Third edition. ISO/IEC. 1990

121. Guide to Inspections of Pharmaceutical Quality Control Laboratories. US FDA, 1993.

122. European Department for the Quality of Medicines. Quality assurance manual. Version 2.1. May 1998.

123. Guide to Drug Directorate Laboratory Activities Quality Assurance Program. Canada, 1991.

124. Good Laboratory Practice and Current Good Manufacturing Practice. A Primer. Ludwig Huber. Hewlett Packard, 1994.

125. Good Manufacturing Practices for Pharmaceutical Products (GMP), WHO Technical Report Series, №823, 1992, Geneva, Annex 1. P. 77-79.

126. Internationally Harmonised Guide for Active Pharmaceutical Ingredients, Good Manufacturing Practice (API Guide). Draft, September 1997, Pharmaceutical Inspection Convention and Co-operation Scheme (PIC-PIC/S).

127. Хмельницкий Л.И., Новиков С.С., Годовикова Т.Н. Химия фуроксанов (строение синтез).-М.: Наука, 1981.-328с.

128. Хмельницкий Л.И., Новиков С.С., Годовикова Т.И. Химия фуроксанов (реакции и применение).-М.: Наука, 1983.-312с.

129. Общая органическая химия. Т.9. Кислородсодержащие, серосодержащие и другие гетероциклы. -М.: Химия, 1985.-800с.

130. Grundemann Е., Niclas H.-J., Gohrmann В. N.M.R.Studies on Aminated Dinitrobenzofuroxan and Dinitrobenzofurazan Derivatives // J. Prakt. Chem.-1990.-B.332, N 6.-S.931-938.

131. Mc Cormack P., Halle J.-C., Pouet M.-J. Unusual structure in meisenheimer complex formation from the highly electrophilic 4,6-dinitrobenzofuroxan // J. Org. Chem.-1988.-V.53,18.-P.4407-4409.

132. Spear R.J., Norris W.P., Read R.W. Direct (uncatalysed) formation of meisenheimer complexes from primary, secondary and tertiary arylamines // Tetrahedron Letters.-1983.-V.24, №14.-P.1555-1558.

133. Buncel E., Renfrow R.A. Reactivity-selectivity relationships in reactions of ambident nucleophiles with the superelectrophiles 4,6-dinitrobenzofuroxan and 4,6-dinitro-2-(2^4^6'-trinitrophenyl)benzotriazole 1-oxide// J. Org. Chem.-1987.-V.52.-P.67-72.

134. Read R.W., Norris W.P. The nucleophilic substitution reaction of 5-and 7-chloro-4,6-dinitrobenzofurazan -oxide by aromatic amines // Austr. J. Chem.-1985.-V.38.-P.435-445.

135. Сайке П. Механизмы реакций в органической химии.-М.:Химия,1991. -448 с.

136. Литвиненко Л.М., Тицкий Г.Д., Шумейко А.Е. Исследование кинетики реакций пикрилгалогенидов с анилином в бензольном растворе // Ж. орг. химии.-1975.-Т.11.-С. 1011-1014.

137. Bunnet J.F., Cartano A.B. Differing behavior of pyrrolidine and yperidine as nucleophiles toward 2,4-dinitrophenyl and 2,4-diitro-6-methylphenyl phenyl ethers // J. Am. Chem. Soc.-1981. V.103.-P.4861-4865.

138. Днепровский А.С., Темникова Т.И. Теоретические основы органической химии.-Л.: Химия, 1991.-415 с.

139. Саввин С.Б. Органические реагенты в спектрофотометрическом анализе // Успехи химии.-1985.-Т.54, N 11.-С. 1814-1840.

140. Watanabe J., Imai К. Liquid chromatographic determination of amino and imino acids and thiols by postcolumn derivatization with 4-fluoro-7-nitrobenzodiazole // Anal. Chem. 1983,- V.55,N 11.-P. 1789-1791.

141. Imai K., Uzu S., Toyo'oka T. Fluorogenic reagents, having benzofurazan structure in liquid chromatography // J. Pharm. Biomed. Anal.-1989.-V.7, N 2.-P.1395-1403.

142. Klimisch H.-J., Stadler M. Microquantitative determination of aliphatic amines with 7-chloro-4-nitrobenzo-2-oxa-l,3-diazole // J. Chromatogr.-1974.-V.90, N 1.-P. 141-148.

143. Ahnoff M., Grundevik I., ArfVudssonA., Fouselius G., Persson B. Derivatisation with 4-chloro-7-nitrobenzofurazan for liquid chromatographic determination of hydroproline in collagen hydrolysate // Anal. Chem.-1981.-V53.-P.485-489.

144. Toyo'oka Т., Watanabe J.,Imai K. Reaction of amines of biological importance with 4-fluoro-7-nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazole. //Analyt. Chem. Acta.-1983.-V.149.-P.305-312.

145. Umagat H., Kucera P., Wen L.F. Total amino acid analysis using precolumn fluorescence derivatization //J. Chromatogr.-1982.- V.239.-P. 463-474.

146. Imai K., Watanabe J., Toyo'oka T. Fluorimetric assay of amino acids and amines by use of 7-fluoro-4-nitrobenzo-2-oxa-l,3-diazole in high-performance liquid chromatography // Chromatographia.-1982.-V. 16.-P. 214-215.

147. Ghosh P.B., Whitehouse B. 7-chloro-4-nitrobenzofurazan: a new fluorigenic reagent for amino acids and other amines // J. Med. Chem.-1968.-V.l l.-P. 305-311.

148. Евгеньев М.И., Левинсон Ф.С. Производные динитробензофуразана как селективные реагенты для органического анализа // Химия гетероциклических соединений.-1991.- № 11.-С. 1565-1571.

149. Николаева Н.Г. Хлординитрозамещенные бенз-2,1,3-оксадиазола и их N-оксиды как аналитические реагенты для аминосоединений: Дис. канд. хим. наук Казань, 1994,- 147с.

150. Евгеньев М.И., Евгеньева И.И., Москва Н.А., Николаева Н.Г., Желтухин И.А., Будников Т.К. Селективное спектрофотометрическое определение аминов различной степени замещения в смесях // Ж.аналит.химии.-1993.-Т.48, N 7.-С.1226-1234.

151. Евгеньев М.И., Евгеньева И.И., Москва Н.А., Левинсон Ф.С. 5-хлор-4,6-динитробензофуразан как реагент в тонкослойной хроматографии ароматических аминов // Зав.лаборат. 1992.-Т.58, N 4.-С.11-13.

152. Евгеньев М.И., Евгеньева И.И., Сарандова А.Б., Аверко-Антонович А.А. Спектрофотометрическое определение анилина и м-нитроанилина в реакционных смесях, содержащих изомерные нитроанилины // Изв. вузов. Химия и хим технол. 1992.-Т.35, N 11-12.-С.45-48.

153. Евгеньев М.И., Николаева Н.Г., Евгеньева И.И., Левинсон Ф.С., Будников Г.К. Селективное определение гидразинов и гидразидов в их смеси // Ж.аналит.химии,-1992.-Т.42, № 6.-С.1123-1127.

154. Евгеньев М.И., Николаева Н.Г., Евгеньева И.И., Желтухин И.А. Спектрофотометрическое определение фенилгидразина в сточных водах // Ж.аналит.химии. 1992.-Т.47, № 9.-С.1699-1703.

155. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Трубникова Г.Г., Евгеньева И.И., Погорельцев В.И., Емельянов В.П., Будников Т.К., Валимухаметова Д.А. Спектрофотометрическое определение фосфабензида в биологических жидкостях // Хим.-фарм. журн.-1995.-Т.29, № 8. С.59-62.

156. Гармонов С.Ю. Применение хлординитрозамещенных бенз-2,1,3-оксадиазола в проточном анализе аминосоединений. Дисс. на соиск. уч. степени кан. хим. наук.-Казань КГУ, 1995.- 162с.

157. Евгеньев И.И., Евгеньева И.И., Горюнова С.М., Гармонов С.Ю., Газизуллина Л.Ш. Избирательное проточно-инжекционное определение 1,1-диметилгидразина в смесях // Журн. аналит. химии. 1998. Т.53, №6. С.650-654.

158. Evgenyev M.I., Garmonov S.Y., Evgenyeva I.I., Budnicov G.K. Determination of Hydrazine derivatives by flow-injection analysis with photometric detection // Talanta. 1995.V.42, №10. P.1465-1469.

159. Евгеньев М.И., Евгеньева И.И., Левинсон Ф.С. Проточно-инжекционное определение ариламинов с фотометрическим детектированием //Зав. лаборат. 1996. Т.62, №11. С.11-14.

160. Крешков А.П., Быкова J1.H., Казарян Н.А. Кислотно-основное титрование в неводных растворах. -М.: Химия, 1967.-192 с.

161. Петухова JI.B. Ионизация и диссоциация некоторых ОН- и NH-кислот и их солей в диполярных протонных и апротонных растворителях. -Казань: КХТИ, 1984.-168 с.

162. Денет И. Титрование в неводных средах. -М.: Мир, 1971.-414 с.

163. Гордон А., Форд Р. Спутник химика. -М.: Мир, 1976.-544 с.

164. Вайсбергер А.В., Проскауэр Э., Риддик Дж., Тупс Э. Органические растворители. -М.: ИЛ, 1958.-519 с

165. Шарнин Г.П., Левинсон Ф.С., Акимова С.А., Хасанов Р.Х. Способ получения 4-хлор-5,7-динитробензофуразана. А.С. 657025 (СССР), опубл. БИ №14.-1979.

166. Bailey A.S., Case J.R. 4,6-dinitrobenzofuroxan, nitrobenzodifuroxan and benzotrifuroxan: a new series of complex-forming reagent for aromatic hydrocarbons // Tetrahedron.-1958.-V.3.-P.113-131.

167. Машковский М.Д. Лекарственные средства. 4.II. М.: Медицина, 1993.- 686 с.

168. Н.В. Лазарев, Э.Н. Левина (ред.) Вредные вещества в промышленности, T.II, Химия, Ленинград 1976. -251 с.

169. Коренман И.М. Фотометрический анализ. Методы определения органических соединений М.: :Химия, 1970.-343 с.

170. Полюдек-Фабини Р., Бейрих Т.: Органический анализ. Л.:Химия, 1981.-624 с.

171. Хирц Ж. Аналитические методы исследования метаболизма лекарственных веществ. М.: Медицина, 1975.-270 с.

172. Максютина Н.П., Каган Ф.Е., Кириченко Л.А. и др. Методы анализа лекарств К.: Здоров'я, 1984. -224 с.197. .Государственная фармакопея СССР. М.: Медицина, 1987. - 333 с.

173. Hollas Y.M., Wright R.A. Vibrational analysis of the near Ultraviolet spektrum of 2,1,3-benzothiadiazole and the analogous spectra of benzofurazan and 2,1,3-benzoselenadiazole //Spectrochimica acta, 1969.-V.25A.-P.1211-1225.

174. Tobiason F.L., Huestis L., Chandler Ch., Pedersen S.E., Peters Ph. Moleculare dipols of benzo-x-diazole 2,1,3- //J.Heterocycl. Chem. 1973.-V.10, N 5.-P.777-778.

175. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии / Под ред. Хеншен А., Хупе К.-П., Лотшпайх Ф., Вольтер В. -М.: Мир. 1988.

176. Lindeman Н., Underberg W.J.M. Detection-oriented derivatisation techniques in Liquid chromatography. N.Y. : Marcel Decker. 1990. P. 392.202. . Центовский B.M., Евгеньев М.И., Шулаева И.В. и др. // Журн. общей химии. 1989. Т. 59. № 2. С. 405-409.

177. Heberer Н., Matschiner Н. // Z. Prakt. Chemie. 1986. В. 328. № 2. S. 261-264.

178. Connors К.A. Reaction mechanisms in organic analytical chemistry.-N.Y.: J. Wiley, 1973.-673 p.

179. Райхардт К. Растворители и эффекты среды в органической химии. М.:Мир, 1991.763 с.

180. Mclver R.T. Chemical Reactions Without Solvation // Scienific American, 1980.-V.243.-P.148-157.

181. Taft R.W. Protonic Acidityes and Basicities in the Gas Phase and in Solution: Substituent and Solvent Effects // Progr. Phys.Org.Chem. 1983.-V.14.-P.247-259.

182. Евгеньев М.И., Петухова Л.В. // Изв. вузов. Химия и хим. технология. 1993. Т. 36. № 11.С. 40-45.

183. Литвиненко Л.М., Тицкий Г.Д., Шумейко А.Е. //Журн. органич. химии. 1977. Т. 13. № 4. С. 767 770.

184. Sakurai Н., Ishimitsu Т. Microionization constants of sulphonamides // Talanta. 1980. -v.27. P.293 298.

185. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Евгеньева И.И., Угричич-Требинский В.В. Избирательное проточно-инжекционное определение гидразина// Журн. аналит. химии. 1998. Т.53, № 3. С 272-277.

186. Евгеньев И.И., Евгеньева И.И., Горюнова С.М., Васякина А.Х. Избирательное проточно-инжекционное определение ароматических и гетероароматических аминов в смесях // Журн. аналит. химии. 1998. Т.53, №4. С.432-437.

187. Norris W.P., Spear R.J., Read R.W. Explosive meisenheimer for med by addition of nucleophilic reagents to 4,6-dinitrobenzofurazan 1-oxide // Austr. J. Chem.-1983.-V.36.-P.297-309.

188. Шаршунова M., Шварц В., Михалец Ч. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии. 4.1. М.: Мир, 1980. 320 с.

189. Холодов J1.E., Яковлев В.П. Клиническая фармакокинетика. М.: Медицина, 1985.463 с.

190. Соради И. Основы и педиатрические аспекты фармакогенетики. Budapest:Akademiai Kiado, 1984.-248 с.

191. В.А. Макаров, А.Н. Кудрин, В.П. Черных и др. Фармакология сульфаниламидных и сульфамидных препаратов Здоров'я Киев 1982. 305 с.

192. Clinical Pharmacy and Therapeutics / Ed. D.R.Gourley, L.A.Hart. Baltimore: Williams and Wilkins. 1992.-1628 p.

193. Л.И. Гребенник // Проблемы туберкулеза 1961. № 4 c.69.

194. П. Джорджеску, Е. Пэунеску. Биохимические методы диагноза и исследования/ Медицинское издательство, Бухарест. 1963. 285 с.

195. Ch. Gaitonde, P.V. Pathak//J.Chromatogr. Biomed. Appl. 1990.V 532 №2. C.418-423.

196. Mawatari Ken-ichi, F. Iinuma, M. Watanabe // Anal. Sci. 1990 V. 532 №2. C. 418-423

197. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Погорельцев В.И., Валимухаметова Д.А. Определение фенотипа ацетилирования для терапевтического мониторинга лекарственных средств // Клинич. лаборат. диагностика. 1996. N 5. С.24-27.

198. Черепнев Г.В. Ксимедон ингибирует индуцированный SOS-ответ в клетках прокариот // Тез. докл. Российс. конф. «Мутагены и канцерогены окружающей среды. Проблемы антимутагенеза». Казань. 1996.- С. 36-37.

199. Труды Российск. конф. «Мутагены и канцерогены окружающей среды. Проблемы антимутагенеза». Казань.-1996.-68 с.

200. Абзалов Р.А., Нигматуллина P.P. Изменение показателей насосной функции сердца у спортсменов и неспортсменов при выполнении мышечной нагрузки повышающейся мощности// Теор. и практ. ФК.- 1999.-N2.- С.11- 15.

201. Дубровский В.И. Спортивная медицина.- М.: Гуманит.изд-во центр. ВЛАДОС, 1998,- 480 с.

202. Evans D.A.P. Genetic variations in the acetylation of isoniazid and other drugs// Ann.N.Y.Acad. Sci.- 1968.- v.151.-P.723-733.

203. Лильин E.T., Трубников В.И., Ванюков M.M. Введение в современную фармакогенетику.- М.: Медицина, 1984.- 159 с.

204. Холодов Л.Е., Лильин Е.Т., Мексин В.А., Ванюков М.М. Фармакогенетика сульфалена. Популяционно- генетический аспект// Генетика,- 1979.- N12.- С.2210-2214.

205. Harding S.M., S.M., Eilot L.A., Harris A.M. Factors affecting the intramuscular absorption of cefuroxime// J.Antimicrob.Chemother.- 1979.- v.5.- p.87- 93.

206. Пономарев Г.А. Фармакодинамика сульфаниламидов и регуляция их распределения в организме. Автореф. дисс.- М., 1959.

207. Paterson D.J. Antiarrhythmic mechanisms during exercise// J.Appl.Physiol.- 1996.-v.80, N6.-P.1853-1862.

208. Пшенникова М.Г. Адаптация к физическим нагрузкам// Физиология адаптационных процессов. Руководство по физиологии.- М.: Наука, 1984,- С. 124- 223.

209. Методы экспериментальной химиотерапии / Под ред. Г.Н.Першина. М.: Медицина, 1971.

210. F. Terrier, Xiao Lan, Hlaibi Miloude, I.C. Halle //1. Chem. Soc. Perkin Trans.2, 1993 № 3. p.337 341.152

211. Ahnoff M., Grundevik I., ArfvudssonA., Fouselius G., Persson B. Derivatisation with 4-chloro-7-nitrobenzofurazan for liquid chromatographic determination of hydroxyproline in collagen hydrolysate // Anal. Chem.-1981.-V53.-P.485-489.

212. Основное содержание диссертационной работы отражено в следующихпубликациях:

213. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш. Реакции дериватизации в проточно-инжекционном анализе аминосодержащих лекарственных веществ //

214. Тез. докл. Второго Всероссийского симпозиума «Проточный химический анализ», Москва, 1999. с. 22

215. Брысаев А.С., Шакирова Л.Ш., Гармонов С.Ю. Применение 7-хлор-4,6-динитробензофуроксана для анализа п-аминофенола в парацетамоле // Тез. докл. IX Всероссийской студенческой научной конференции, Екатеринбург, 1999. с.15-16

216. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш., Брысаев А.С. Спектрофотометрическое определение производных п-аминобензойной и п-аминосалициловой кислот в лекарственных формах и биологических жидкостях. // Хим-Фарм журнал, 1999, т.ЗЗ, №5, с.50-54

217. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш. Избирательные проточно-инжекционные определения производных 4-аминобензойной и 4-аминосалициловой кислот в смесях. // Журнал Аналит. химии, 2000, т.55, №7, с. 775-784

218. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш, Левинсон Ф.С. Спектрофотометрическое и хроматографическое определение сульфаниламидов в биологических жидкостях и лекарственных формах // Журнал Аналит. химии, 2000, т.55, №8, с. 888-895

219. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш., Брысаев А.С. Спектрофотометрическое и хроматографическое определение п-аминофенола в парацетамоле. // Хим-Фарм журнал, 2000, т.34, №5, с. 52-54

220. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш. Проточно-инжекционное определение п-аминофенола в смесях со спектрофотометрическим детектированием. // Заводская лаборатория, 2000, т. ,№10, с. 18-21

221. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш Проточно-инжекционный анализ лекарственных веществ (обзор) // Журнал Аналит. химии, 2000, т.56, №12, с. (в печати)

222. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш., Погорельцев В.И. Метод определения фенотипа ацетилирования при использовании сульфадимезина как фармакогенетического маркера // Хим-Фарм журнал, 2001, т.35, с.

223. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш Проточно-инжекционное определение новокаиновой соли бензилпенициллина в препаратах пенициллина со спектрофотометрическим детектированием. // Журнал Аналит. Химиии, 2001, т.56, №1, с.156-162

224. Абзалов Р.А., Нигматуллина P.P., Хайруллина Г.Н., Гармонов С.Ю., Шакирова Л.Ш, Евгеньев М.И. Влияние мышечных тренировок на скорость ацетилирования сульфадимезина // Бюлл. эксперим. биологии и медицины, 2001, т. 129, №3, с. (в печати)