Разработка аппаратурного оформления для твердофазного синтеза пептидов с использованием свеллографического мониторинга тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

московская государственная академия ^.тонкой химической технологии им. М.в.ломоносова

ОТВДШГИЗИРОВАННШ СОВЕТ Д O63.4X.0I

На правах рукопись

БАРУ МИХАИЛ БОРИСОВИЧ

разработка аппаратурного сшршения для твердофазного синтеза пишщов с использованием свеллограе'кческого мошторюта.

02.00.10

Биоорганическая химия., химия природных и физиологически активны! соединений

АВТОРЕФЕРАТ диссертации па соискакиэ уча кой степени кандидата технических наук

Научный руководитель: академик В.Т.Иванов

москва - 1993

Работе выполнена в Филиала Ордена Трудового Красного.Знамени Института Сиооргаиичвской химии им«ш; академиков М.М.Шемякина и й.А.Оьчииникоаа Российской АН.

Научные) руководитель: академик Иванов В.Г.

О^мдиальша оппоне:гги: доктор хтп'.чееких наук, профессор Алахов Ю.Е.

доктор технических наук Строгое С.Е.

Ведущая оргашэг.щя; 'Лкстктут вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН. г. Москва

гя-^

Защита диссертации состоится еГ&ы-г^дуЛ. 1993г.

на наседают. специализированного совета Д 063.41.01 при Московской Госул«рствоиноп Ака домии тонкой химической технологии т. М.В.Ломоносова по адросу: 117571, г. Москва, проспект Вернадского, 86.

С диссертацией можно ознакомиться е библиотеке Московской Государственной дко дегям тонкой химической технологии им. Ы.В.Ломо-носовапо адресу: II9831, г. Москва, ул. Малая Пироговская д.1.

-ь-о^У^.

Автореферат разослан ¿Со -Н-о у-^. 1993г.

Ученый секретарь

слацийлизкроваЕкого совета Лютик А.И.

кандидат химических наук

Актуальность проблени. с тех пор как Меррифялд предложил твердофазный метод синтеза пептидов (ТФСП*), наиболее используемой и дешевой матрицей, на которой он проводится, является, им жо предложенная, полистирольная с поперечными диЕияилбвпзолышми сшивками.. При всех своих очевидных преимуществах она имеет годос -таток,, существенно усложняющий эе практическое использование - изменяет свой объем как в хода всего синтеза, так и в ходе отдельных операций синтетического цикла. Невозможность предварительного определения набухших объбмов пептидилполимера в том или ином реагенте на той или иной стадии процесса синтеза заставляет использовать реакторы относительно большого объема при их малой загрузка. Это, в свою очередь, приводит к постоянному наличию мертвого объема в реакционной камеро. Разработка проточных реакторов, позволящкх гораздо более эффективно использовать свой рабочий объем при работе в проточном режиме и аппаратурного оформления для могвторгаг'Д за качеством и количеством операций промывок синтетического цикла (составляющих подавляющее большинство операций) представляется важным для дальнейшего прогресса твердофазного метода. Создп/.л автоматизированных установок для твердофазного синтеза пептидов и шфокоо их использование в биотехнологии особенно актуально в настоящее время.

Данная работа выполнена в ФИБХ РАК в рамках государственник целевых научно-технических программ "Белковая инженерия" и "Новей-

'Принятые сокращения: ТОСП - твердофазный синтез пептидов; дао -дамегалформамвд;" ДХМ - дииюрметвн; ТЭА - триэтяламин; ТФУК - тру-фторуксуспая кислота; ПП - пептидоинолимер; ПН - полимерный носи тель; ПА - подвижный адаптор; УВВ - устройство ввода/вывода; ■ ПРПО - проточный реактор переменного объема; ПУУ - програщшо-управляющее устройство.

шие мэтодо сиоинженержС. Комар государственной регистрации темы "Болков.чя иниешрия" 01.8.80064726.

Цель работы. Цель» настоящего исследования являлась разработ-проточных реакторов непрерывного действия с переменным объемом для работы с набухавдкми полимерными матрицами; опре дало нив оптимальных рлтаков функционирования таких реакторов; создание аппаратурного оформления (в том числе полуавтоматического и автоматического) для ТОСП с использованном оригинального свеллографического мониторинга за ходом отдельных операций синтетического цикла.

Научная новизна и практическая ценность работа. Впервые в ТФСП создан и практически использован проточный реактор непрерив-ного действия с шременшм объемов для работы с набухающими сти-ролдшйпшлсеязольиы'Ю! полимерными матрицами. Разработана система нвгфйрьишЯ регистрации изменений объема полимерной матрицы в ходе 'ГОС.П (свелкографкческия метод шнитс-ринга). Исследовано влияние физических параметров системы на результаты сввляографячоских из-моронкй 11 проведана кх оптимизация. Проведена алгоритмизация свеллографического подхода применительно к ТФСП и разработаны алгоритма синтеза в "ручном", полуавтоматическом и автоматическом режимах, позволяющие организовать взаимодействие системы свэллог-рафяческого мониторинга с комплексом исполнительных устройств синтезатора. Разработаны, практически реализованы и экспериментально опробованы в ТФСП "ручные", полуавтоматические и автоматические установки о обратной связью о использованием СЕвллографичоского мониторинга, на основе единого модульного принципа построения, что приближает разработанные конструкции к универсальной модели роботизированных "конструкторов".На базовых установках получено несколько десятков пептидов, что показывает потенциально большие препаративные возможности таких установок.

Осноьнне положения, вшосиыиа на защиту:

- разработка проточних реакторов нсиговрыглого действия с но-ромэшшм объемом для работа с набухающими полимерными матрицами я определение оптимальных режимов Функционирования таких реакторов;

- система непрерывной регистрации изменений объема полимерной матрицы в хода ИХЯ1 (своллографический метод мониторинга);

- о лгоритмизацкя своллографического подхода применительно к тезрдофазному синтезу пептидов;

- создашю аппаратурного оформлении (в том тесла полуовтоиа -•лнеского и автоматического) для ТФСП с использованием свеллогрэ-фэтоского мониторинга за ходом отдельных операций синтетического цякла.

ПуОликации. По материалам диссертации опубликовано I? работ, результаты доложены на 21 Европейском пептидной симпозиуме (Платья дэ Аро, Испания, 1990); 2 Международном симпозиуме по нововведениям и перспективам в твердофазном синтезе (Кентербери, Великобритания, 1991); 8 Конференции молодых ученых по биооргаииче гагой химия (Рига, Латвия, 1991); 2 Японском симпозиуме по химии пептидов (Шизуока, Япония, 1992).

Объэы работы. Диссортйиля изложена на 209 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: введение, литературный обзор, посвященный принципам построения и детальному описанию приборов для твердофазного синтеза пептидов, обсуждение результатов, экспериментальная часть, вывода и список цитированной литературы, включающий 147 ссылок. Диссертация содержит 70 рисунков и 5 таблиц. . '

Содврзэнив работа. Существующие проточные реакторы непрерывного действия с фиксированным объемом ориентированы либо на специальные "жбсткие" мсптеш (дорогие и имеюищв огр«пг?енное применение ), либо на такие протоколы синтетического цикла ТФСП, которые

сводят к минимуму изменения объёма полимерной матрицы в ходе синтеза. Последнее практически не достижимо, т.к. рост в ходе синтеза пептидно® составляющей пептидилполимэра, как правило, приводит к I лету оОъбма полимерных гранул.

Существует еде одна сторона работы с набухающими стироляиви-нилбвкзольнымм матрицами в непроточных реакторах периодического действия. В процессе выполнения синтетического цикла, в который входит целый ряд различиях вспомогательных операций (промывка, нейтрализация и т.д.) проблема определения завершения каздой отдельной операции является очень существенной.Традиционно пользуются эмпирическими (достаточно. приблизительными) расчетами величин набухания подкшрной матрицы, что на практике есть не что иное как многократные промывки в течении одной операции каким-либо реагентом или растворителем, взятым к тому ке в большом избытке. Отсюда вытекает, что в таких условиях масштабирование процесса Т<ЮП приводит к нерациональному использованию еще больших избытков реагентов и растворителей. Т.о. для аффективной работы с набухающими полимерными матрицами в ходе ТФСП нам было необходимо решить следующие задачи: работа в проточном режиме (в реакторе непрерывного действия) при контролируемых и минимально-возможных рабочих давлениях; постоянная минимизация мертвого объема реактора и т.о. повышение его коэффициента эффективности использования рабочего объема (Ку); создание соответствующей агшаратуры (автоматической) для осуществления обратной связи. »

Проточный реактор переыенного оОъеыа (ПРПО). Для решения сформулированных задач нами был предложен ПИЮ, схема которого изображена на рис Л. £ ходе синтеза подвижный адаптор (ПА) постоянно находится в контакте с изменяющим свой объем пептидилполимором, минимизируя "мертвый объем". Для этого к ПА, должна быть прилокена внешняя сила, экспериментально подобранная таким образом, чтобы в

Рис. I Принципиальная схема проточного реактора переменного объема (ПРПО). I - стеклянный цилиндрический корпус реакторе; 2 -реакционный объем; 3 - неподвижный адапгор; 4 - подвижный вдзп-тор; 5 - пористые стеклянные фильтры; 6 - стрелка указывавшая направление приложения внешней силы Г. Стрелки указывают направление потока РРА через ПРПО.

процоссо сжатия шптидалшдшера он (ПА) успевал "догонять" схима-отлйся полимер. Постоянная минимизация мертвого объема реактора привела к резкому повышению эффективности использования ого раОо-1,"то объема (но сравнению с обычными непроточными реакторами периодического действия в 15-30 раз). Используя в качестве элэментар-. ной ячейки ПИТО мы разработали составную многореакторную систему для синтеза пептидных ашлогов (от 2 до 10 реакторных ячеек).

СвеллогрефкческиЯ мониторинг. Успешное использование ИРПО в ТФСП показало, что кроме ужо описанных выше возможностей такого реактора к ним можно добавить еще одну, и очень существенную. Этой возможностью является мониторинг всех объемных изменений (набухания и сжатий) полимеркой подложки в процессе синтетического цикла ТФСЛ. Для этого необходимо осуществлять постоянный контроль за перемещениями ПА.. Кинематически связанный с ПА потенциометрический датчик позволяет контролировать таюго перемещения. Производится автоматическое изыореяке изменений еысоты столСа набухшего полимера (ирямопропорционечьнчх изменениям его объема), помещенного в цилгадричееккй ПИЮ. Полученный электрический сигнал внводится на стандартный погвнциокотрический-самописец. Таким образом результирующая кривая на ленте самописца, названная наш свеллограммой, есть отрэкениэ реальных изменений объема полимерной подложки. Используя сввллсграфмеский мониторинг, можно достоверно судить о начало или завершении той или иной. операции синтетического цикла ТФСП и как результат,иметь документированную запись об их выполнении. На рис. 2 представлена типовая свеллограмма Вое- протокола синтетического цикла ТФСП в синтезе пептида КЙРЕТЦРАСУМЦШ.ЧЕ.

Исследование влияния физических параметров система на результаты свеллографических измерений. Нами исследовалось влияние на результаты свеллсграфичэских. измерений следующих факторов: внешней силы, приложенной к ПА; гидравлического сопротивления ПРПО; силы

Рис. '2 Свеллограмма типового протокола синтетического цикла присоединения Вос-АКОРГр в синтезе пептида KGPETLFACYHLNDNE. Стрелки указывают моменты начала прокачивания соответствующих РРЛ через ПРПО. Скорость потока - 2мл/мин. I - Л?.!0: 2 - 5СГ.ТФУХ в ДХМ; 3 - 10ЖТЭА в Д№>; 4 - ДМ; 5 - Ъ0% ДМФ в t-БаОН; 6 - раствор Вос-АКОРГр в ДМФ.

тра;<ня; температуры. Анализ этого влияния показал, что для получо-н.п минимально возмущзшшх параметров набухания необходимо акстра-пол1гровать в нуль зависимость этих величин от величины внешней силы (напр. от веса груза), измеренных при нулевой скорости протока через ПИЮ; работая с сильновязкими жидкостями, следует проводить измерения при строго постоянной и минимально экспериментально приемлемой скорости потока через ПИЮ; степень влияния силы траьия может быть оценена измерениям величины приборного гистерезиса. Эта величина при необходимости может быть использована для корректировки получаемых параметров набухания; при работе с термочувствительными полимерными носителями целесообразно термостатировать ПРПО.

Построение систем с обратной связью на основе светографического мониторинга и обл>5а алгоритм их работы. Для построения систем с обратной связью на основа свеллографического мониторинга мы разработали универсальную слок-схэму (рис.3). Изменяя, в зависимости от задачи, количество блоков и уровень их сопряжения мы создавали системы с различной степенью автоматизации - от ручных до автоматических, работающие в единицах реального времени. В общем виде члгоритм работы синтезатора с обратной связь» на основе свеллогра-фического мониторинга представлен на рис.4.

Оптимизация синтетического протокола ТШ1, связанная с испо-льзовашеи ПИЮ и свеллографического иониторанге. Как прааило, в автоматических синтезаторах для 'ШЛТ. работающих с нежесткими полимерными носителями (ПН) в проточных реакторах, периодического действия в синтетическом протоколе непосредственно перед конденсацией предусмотрено предварительное набухание ПН в том же растворит теле, в котором происходит сама реакция ( т.н. "рге'л&вй."). После этого в реакционный объим вводится раствор требуемого аминокислотного производного. Т.о. раствор последнего разбавляется тем количество« растворителя, которое уже находится в реакторе, понижая

Устройство

ввода/вывода

информация

ручное управление

ИУУ

Система а ческога ж зеплографи-эниторинга

Санопиоец Потенцио- кетрический датчик

ПРПО

кик сжатого инертного гас«

Систем« ручного пробоотбора

Приводи распределит. устройств

Устройства

насосной

подачи

РРА

Устройства распределения РРА

__проба ПП для параллельного

традиционного х;ш.контроля

Рис.3 Блок схема синтезатора для »ТФСП с обратной связью на основе свеллографического мокиториига.

-ТО-

Рис. А Принципиальный алгоритм риботи синтезатора для ТФСП с рорэтной связью на оспою свеллографического мониторинга.

т'ем са:я1М концентрации аминокислотного производного (для реакции необходимы только гранулы ПН набухшие в растворителе). Используя игаописоншо преимущества ПРПО мы продували последний током сухого инертного газа, т.о. удалял растворитель из пространства между гранулами ПН до тех пор, пока в роакторе не оставались только гранулы ПН, набухшего п растворителе, используемом в реакции конденсации. В результате количество растворителя, в котором растворпот-сп производное аминокислоты перед реакцией конденсации, стало воз-мокншл существенно сократить. Такое сокращено объективно лело ;< повышения скорости реакции.

Практически во всех синтезаторах для ТФСП, кмеггегас проточные реактора периодического действия, скоу.сть потока рпчгонтоп через реактор постоянна. Мозду тем нам удалось показать, что в начале и а конце про юса. набухания (или скатил) оптимально скорость потока через ПГПО существенно различается. В начале (напр., набухания ГШ) скорость потока ткет быть максимальюй, т.к. к> обходимо как моию быстрее вытеснить осношюэ количество предыдущего реагента и заменить ого подаваемым реагентом. В конце же процесса такая скорость потока должна Сыть существенно пике, т.к. скорость диффузии нового реагента подает пропорционально ладони» градиента концентраций двух реагентов. Т.о. скорость вымывания остатков предыдущего реагента на конечной стадии процесса о-гонь мало' зс.зисиг от скорости подачи задевающего реагента.В качестве модельной системы для иллюстрации вышеописанных полскенлй мы использовали процесс набухания гранул В1о-В;зааа Б-XI в хлороформе. На рис.5а,О,в представлены три свеллограмми набухания полимерного носителя: а) и б) при постоянных скоростях потока хлороформа через ПРПО; в) - в градиенте скорости потока.

Разработка практических взриактоа реяли зции аппаратуры со свеллографической системой мониторинга для 'ГОСП.

Рис.5 Свеллограммы набухания 0,8г. В1о-ВеаОз 3-Х1 в хлоро-

форме при различных скоростях потока через ПГПО. а) при постоянной скорости - 0.5мл/мин. ; б) лри постоянной скорость - 2мл/мин. ; в) в градиенте скорости потока от 5 до 0,2мл/мин. Стрелки указывают начало прокачивания соответствующих растворителей через ПРПО, I - ацетон: 2 - хлороформ; Набухший объем 1Ш в ацетоне условно принят аа нулевой.

Система дяя ручного ТФСП. "Ручной" свеллограф представлен но рис.6. Ключевин узлом ПРПО является ПА, от нормальной и бесперебойной работы которого зависит качество получаемых свеллогрямм. Его фторопластовое уплотнение сконструировано так, чтобы избежать даже минимального мертвого объема з пространстве от нихней кромки последнего до линии уплотнения. В этом его (ПА) принципиальное отличие от подобных адаптеров з проточном реакторе синтезатора Шо1упх и хроматографических колонках для жидкостной хроматографии низких и средних давлений. Для параллельного традицискно1 о химико-аналитического контроля за полнотой протокьшя реакций (в том случае, когда это необходимо) мы разработал;*, соответствующий пробоотборник.

Синтеза.эр для полуавтоматического ТФСП. Полуавтоматический синтезатор, представленный на рм.7, рассчитан на автоматизацию синтетического цикла присоединения одной аминокислоты. Синтезатор выполнен в виде моноблока (за исключением насосного устройства подачи, которое является самостоятельной единицей), содержащего: ПИЮ с устройством пробоотбора или без него; трч плоских псворот-нда крана; компрессор дЛя подачи, сотого воздуха или инертного газа; датчик давления с проточной ячейкой и системой регистрации текущих величин давления; микропроцессорное программно-управляющее устройство (ПУУ) для управления исполнительными механизмами. Микропроцессорное ПУУ-синтезатора обеспочивзет программирование выбора реагентов з любой необходимой. по еле до в а т о ль но с ти операций на один синтетический цикл. Максимально возможное количество опэраций в цикле -32.

Система для автоматического ТФСП, Синтезатор "СииХрсы". Син тезатор "СинХром" (рис.8) предаэБнач^н для присоединения в автоматическом режиме, до <-оми ■ аминокислот; Синтезатор состоит практически из того жь набора исполнительных узгройств, что и полуозтомаг

Рис.6 * Внешний вид свеллографа для ручного ТФСП. I - ПА; 2 груз прижимающий ПА к ПН;, 3 - блок решстрации перемещений; 4 пробоотборник; 4а - пробсприемник; 5 - ПП; 6 - зубчатая рейка; ? - кабели к источнику питания и самописцу.

Рис.? Внешний вид полуавтоматического синтезатора для ТФСП на базе ПРИО и свеллографическэго мониторинга. I - стеклянный корпус реактора; 2 - ПА; 3 - корпус винтовой передачи; 4 - один из кранов системы распределения РРА (семиходоьоЛ кран); 5 - проточная камера датчик« давления; 6- пробоотборник; 7 - резерву яш с РРА.

Рис. 8 Внешний вид автоматического синтезатора для ТФСП "СинХром" с обратной связью на основе светографического мониторинга. Г - свеллограф; 2 - микропроцессорное ПУУ; 3 - насос; 4 -распределительные устройства (восьмиходовые краны); 5 - резервуары с РРА.

(ПГПО, насос, три многоходовых крана, микропроцессорное ПУУ), однако возможное™ у него гораздо шире. В качество ПРПО ми иепо"Л,за вали ручную модель свеллогра$а. ПУУ синтезатора, размещенное в отдельном блоке, позволяет программировать все три крана совершенно независимо, что.в сочетании с модуль"Л схемой построения прибора, позволяет собрать любой из трех вариантов систем;: ручной, полуавтоматический или автоматический. Прибор может работать в трех режимах: с использованием свеллографического мшппоринга (с обратной связью)'; в разимо задачи длительности каждой операции; в смешанном роииме. Программирование каждой операции (шага программы) описывается положением (позицией) каждого из трех кранов на данном шаге. Цикл копируется в памяти ПУУ п раз, гдо п количество аминокислотных остатков. При необходимости кавднй цикл может редактироваться отдельно.

Практическое использование разработанной свеллографической аппаратура э ТССГ1. Вся, созданная нами аппаратура использовалась для практического ТФСИ (последовательности содержали от 4 до 25 аминокислотных остатков). Было синтезировано несколько десятков (около пятидесятиЭнептидов, в которых содержались практически все кодируемые аминокислоты. При этом в синтезе использовалась как Бос-, так и Ртос-защитная^ стратегия. Гомогенность полученных пептидов (по данным обратеннофазовой ВЭЖХ) составляла от 80 до 95%, в зависимости от ;шпш и последовательности.последних. Выходы варьировались от 53 до ВЭ%. Аминокислотный состав синтезированных пептидов подтверждали аминокислотном анализом. Шике приведены пинте-зироватле последовательности.■

улгагтеттап; • НАКУТГЛиСРЯЕААУ;. РСБШТСАРК; ЦОЬОККХУШЛОУ; сьтлткгатуалошт.'а'ок; нку;;скег,1)кгк1; уштауякьмт; усюеезмш; ргкерпкк; кзусштгршюггсш; р1вшбкак; с (а его )уявдузл5шк; иокаяшллилшйзо; аайзмбшштку;

VQGCESNDK; KLKTODQQAMYO; EEPi"VGSM)VSYTBSHGFHG; RONS;'

QAHROKKKSG; GWHWVYYTSSPDTPY; EKNKRHRG; LQLCAEST; IAOV; YINFDI.YI^Ki IQQV; fi (Acra )EKQKQQAANQA1AGSQ; RTHQGVREIKKGIKKIA'G;' KCKQKCAYFAS; CQJ'RITQVYT; KGF'/IfHKIPLDG; YACLQ'.VHKfKRRFtG; RUi'KSlCPPKKGV; ШШЯЫЦУСН; RKGPPKPTOQTRQPKSJCPPKKGVQ; С(Ао®)Щ1КШ'А^аТЕ£; ТРЮАГРЖРОЕВРР.; CUcra>YflEQVSAK№; EKG LP VHLDQS IF Я; KGPEPI AG УИЬМШЕ ; DAQDEGLLSD; EYWYTSSPDTPY; KQMKiKQVYMTHR; HKYSGKEGDICFKL; DAQIIEGLLSD; MHLQLHEUQYGII;

ВЫВОДЫ

I Разработан принципиально новый проточный реактор переменного объема, который дает возможность работать с гелеобразными гранулированными полимерсг.яаешшми реагентами (ПОР) к "мягкими" хроматогра-фичосккмя носителями в процессах, протекающих с изменениями объема последних.

г Разработана система непрерывной регистрации изменений 11СР з ходе ТФСП и других процессов с участием ЛОР. " '

3 Исоледовото влияние таких физических параметров системы как: влеиней силы, приложенной к подвижному адаптору реактора, переменного объема; гидравлического сопротивления реактора; силы трения; х'емперятурына результата своллографичоских покорений и проведена оптимизация этих параметров. -

4 разработаны принципы модульного построения нового поколения установок для ТФСП на основе проточных реакторов переменного объема к сгслдсграфмчзсксгс мониторинга.

5 Проведена алгоритмизация овеллографического мете да применительно к ТФСП и разработены алгоритмы синтеза в "ручном", полуавтоматическом и евтоматичиском режимах. ' ^ в На основе свеллогрвфического моииториш'а разработано устройство для одновременного параллельного синтеза пептидных аналогов.

7 Разработаш и практически реализованы различные варианты исподне шгя сввлдографов. Экспериментально проверена работоспособность свеллографической техники в ТОСП и показана возможность их приме-нания в препаративно?, биотехнологии.

Основные результаты диссертации изложена в следующих работах: «

1.A.c. 1650240 (СССР). Проточный реактор для твердофазного синтеза биополимеров / М.Б. Бару, И.Л. Родионов, л.Я. Шестаковс-кий, В.Т. Ларин. - Опубл. В БИ, 1991, Щ9.

2.PCT/SU88/OOM2 WO 88/909010.6. Reactor for Solid-Phase Syn-thesla of Blopolymers / M.fi. Baru. I.I. Rodloriuv, L.Ya. Sheslakov-sky, V.T.Larln, S.M.Deryabin. - Опубл. 12.09.90.

3.Заявка на изобретение 48442G7 (СССР). Установка для осуществления физйко-хгаямоских процессов с участием полимерных носителей/ М.Б. Бы, у, IT.J[. Родионов, В.Г. Ларин. - Решение с выдаче а.с. ОТ 24.06.91.

4.Заявка на изобретение 4875911 (СССР). Проточный реактор для твердофазного синтеза биополимеров / М.Б. Бару, И.Л. Родионов, Б.В. Иванов, В.Т. Квэной.- Решение о выдаче а.с. от 23.11.91.

5.А.с. 1744087 (СССР). Способ управления процессом твердофазного синтеза биополимеров / М.Б. Бару, И.Л. Родионов, Л.Я. Шесгя-ковский, В.Т. Ларин. - Опубл. в БИ, IS92, JS24.

. 6.PCT/SU88/00156 WO 88/89900366.9 Method of Monitoring the Ргосезз of Solid-Phase Synthesis or Blopolynera/ K.B.Baru, I.L.Ro-dlor.ov, L.la.ShestaKovslcy, V.T.Larln. - Опубл.08.08.90.

7.Baru M.B.,.Ivanov V.T., Kodlonov l.L.. A New Feedback Control Principle in Continuous Flow Solid Phase Synthesis: Direct Monitoring of the Peptide-Resin Spelling Behaviour. -In : Peptides 1990. ?roc. 21st European Pept. Syrrp../ Glralt E., Aridreau D., eds. - ESCOM Science Publishers Q.V., Lslden 1991, - pp.193-199.

t.RodJonov 1.1., Baru M.B., Ivanov V.T.. A Swellographlc Approach to Monitoring Continuous Flow Solid. Phase Peptide Synthesis.- Peptide Res.. 1992, v.5, JS2. pp.119-125.

9.Вага M.B., ГеасКепХо I.A. Rodlonova L.N., Rodlonov I.L.. А Comparative Study of Swellograplilo and Spectrophotometry Approaches to Monitoring of Continuous' Flow Tmoc-SPPS.- In: Peptide Chemistry 1992. TTanalhara N. ed., ESCOM. pp 116-118.

10.Rodlonov I.L., Ваги M.B., Ivanov V.T.. Continuous Monitoring the Spelling Behaviour oi Gel-Турэ Heactlve Polymers and ClLromatographlc Media. Some Practical Applications of the Technique..- React. Pol. v.16. I991/1992 pp.311-319.

11.A.o. 1787989 (СССР). Синтезатор биополимеров / М.Б. Бару, И.Л. Родионов, С.М. Дерябин, Л.Я. Щестаковский, H.A. Макаров. -Опубл. в ЕИ, 1993, JK.

12.Заявка на изобретение 4293280 (СССР). Способ сш1твза пеп-тидилполимеров на некостком полимерном носителе /М.Б. Бару, И.Л. Родионов, Л.Я. Шастаковский, В.Т. Ларин, С.М. Дерябин. - Решение о выдаче а.с. от IG.09.88.

13.Barn М.В., Rodlonov I.I. Hew generation of continuous-flow technique for efficient SPPS on gel-type supports - In: Peptide Chemistry 1992, Yanalhara N. ed., JESCObi, pp 119-121.

14.Веявка не изобретение 4651454 (СССР). Синтезатор биополимеров / H.A. Макаров, М.Б. Бару, И.Л. Родионов, Л.Я. Шестаковский.-- Решение о выдаче а.с. от 24.08.89,

15.Bodlcr.ov I.L., Ваги М.В., V.T. Ivanov. A Swellographlc Approach to Stadying Swelling Beliavlour of Gel-Type Heactlve Polymers. - In: Innovation and perspectives in solid phase synthesis, Proc. of 2nd International Syrap., Cantsrbury, 1991/ Epton Й.; v* ed.,- Interaept limited, Andover 1992,- pp.449-453.

16.Rodlonov 1.1.., Ваги М.В., УД'. Ivanov. Qualitative Aspects

oi Swellographlc Approach to Monitoring Solid Phase Procoanes.-In: Innovation anil perspectives In solid phase synthesis, Proo. of 2nd International Symp., Canterbury, 1991/ Epton H., ed.Inter-sept Limited, Ajulover 1992,- pp.455-459.

I7.Golov!clna I., Abataimov V., Muntaeva L., Baldakova I., Bare M., Rodlonov I. Stenographic Monitoring oi Continuous-flow Fmoc-Solld Phase Peptide Syntheols.- In: Proc. of the 8th Conference of Yolng Scientists on Organic Bloorganlc Chemistry, / Kalnlna A., ed.,- Latvian Academy ot Sclenceo, Institute oi Organic Synthesis, lUga, 1991, pp.125-126.

Усл.печ.л,- 1,4 Уч.изд.л. 1,2 Формат 60x90/16 Заказ ¿25 Тирах 80 . Бесплатно Ротапринтная ..¡ЯШ' Ломоносова

¿.Пироговская Ул. ,д.1