Синтез и свойства пептидных аналогов олигонуклеотидов тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫЕ АНАЛОГИ С ПОЛНОЙ ЗАМЕНОЙ САХАРОФОСФАТНОГО ОСТОВА НА ПЕПТИДНУЮ ЦЕПЬ литературный обзор)

1.1. Аналоги, построенные на основе нуклеоаланинов

1.2. Аналоги, построенные на основе а-аминокапроновой кислоты

1.3. Аналоги, построенные на основе глутаминовой кислоты

1.4. Аналоги, построенные на основе лизина

1.5. Аналоги, построенные на основе а- и Р- аминомасляных и а-аминоизомасляной кислот , ' •

1.6. Аналоги, построенные на основе пролина, . , '

1.7. Аналоги, построенные на основе орнитина

1.8. Аналоги, построенные на основе оксиаминокислот

1.9. Аналоги, построенные на основе цистеина и (3-аминоаланина

1.10. Новые мономеры для синтеза пептидных аналогов олигонуклеотидов

ГЛАВА 2. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

2.1. Разработка методов синтеза гомогенных олигонуклеопептидов

ОНП I (тип а)

2.2. Разработка методов синтеза гомогенных олигонуклеопептидов

ОНП II (тип б, в, г)

2.3. Разработка методов синтеза гетерогенных ОНП II (тип виг)

2.4. Изучение гибридизационных свойств олигонуклеопептидов методом УФ спектроскопии

ГЛАВА 3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

3.1. Исходные вещества и вспомогательные реагенты

3.2. Аналитические методы

3.3. Синтез пиримидил- и пуринилацетальдегидов

3.4. Получение оптически активных нуклеоаминокислот

3.5. Синтез производных нуклеоаминокислот

3.6. Синтез пиримидил- и пуринилуксусных кислот

3.7. Синтез производных Ь-орнитина

3.8. Синтез гомогенных ОНП

3.9. Синтез гетерогенных ОНП

3.10. Изучение гибридизационных свойств олигонуклеопептидов

ВЫВОДЫ

В последнее десятилетие сильно возрос интерес к созданию антисенсовых реагентов на основе синтетических олигонуклеотидов. Эти синтетические фрагменты нуклеиновых кислот природного строения или модифицированные, обладающие свойством образовывать высокоспецифические комплементарные комплексы с исследуемыми нуклеиновыми кислотами, были сконструированы в целях ингибирования трансляции генов путем связывания с мРНК.

Прогресс в этой области исследований, направленных в конечном счете на создание высокоэффективных фармацевтических средств регуляции экспрессии генов, связан с поиском оптимальной химической структуры антисенсового олигонуклеотида. На сегодня очевидны основные требования, предъявляемые к реагентам подобного рода: они должны быть относительно устойчивы к деградации под действием клеточных нуклеаз, способными образовывать высокоспецифичные и термически устойчивые комплексы, проникать через клеточные мембраны и достигать НК-мишени, и в то же время не быть токсичными для клетки. К настоящему времени предложено и исследовано в качестве регуляторов генной экспрессии in vivo и in vitro достаточно много различных модифицированных олигонуклеотидов, некоторые из них проходят клинические испытания. Несмотря на большие успехи, достигнутые в этой области, остается множество проблем, главная из которых заключается в неудовлетворительных фармакологических свойствах антисенсовых реагентов.

Широкую известность получили аналоги олигонуклеотидов, в которых сахарофосфатный остов полностью заменен на полиамидную цепь. К таким аналогам относятся, в частности, так называемые «пептидонуклеиновые кислоты (PNA)», которые дают сверхпрочные комплексы с соответствующими комплементарными олигонуклеотидами. При изучении их антисенсовых свойств на клеточном уровне было показано, что эти соединения не лишены некоторых недостатков. Поэтому дизайн новых антисенсовых реагентов, содержащих пептидный остов и обладающих улучшенными антисенсовыми свойствами, является актуальной задачей. Наличие пептидного фрагмента придает антисенсовому реагенту ряд полезных физико-химических и фармакокинетических свойств таких, как улучшенная способность проникать через клеточную мембрану, устойчивость к нуклеазной деградации, а также способность медленно разлагаться под действием протеаз. Эта же особенность позволяет избежать таких недостатков, как низкая специфичность связывания, легкая деградация под

ГЛАВА 1. ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫЕ АНАЛОГИ С ПОЛНОЙ ЗАМЕНОЙ САХАРОФОСФАТНОГО ОСТОВА НА ПЕПТИДНУЮ ЦЕПЬ (литературный обзор)

Аналоги олигонуклеотидов с заменой сахарофосфатного остова на различные полимерные цепи привлекали внимание исследователей практически со времени установления структуры нуклеиновых кислот. В качестве полимерного остова в таких структурах выступали соединения самых разных классов: виниловые полимеры [1-5], полиметакрилаты, полиэтиленимины [6], полиуретаны, найлон [7], а также полиаминокислоты и пептиды [6, 8-10].

Особую актуальность разработка подобных структур приобрела в связи с поиском эффективных антисенсовых реагентов [11]. Для того, чтобы претендовать на роль таких реагентов, соединения должны обладать определенными свойствами: они должны проникать через клеточные мембраны и достигать НК-мишени, образовывать с ней высокоспецифичные комплексы, быть устойчивыми к деградации под действием клеточных нуклеаз и не быть токсичными для клетки.

В начале 90-х годов в группе Нильсена были синтезированы полиамидные аналоги (PNA), которые оказались способными образовывать исключительно прочные комплементарные комплексы с нуклеиновыми кислотами и между собой [12-13]. Это открытие дало мощный толчок, с одной стороны, к поиску аналогов PNA, обладающих заданными свойствами [14-16], а с другой стороны, к дальнейшей разработке аналогов олигонуклеотидов с модифицированным остовом [17], в том числе с полностью замененным, построенном на основе циклических соединений (морфолина [18], пиранов [19] и др.), либо ациклических, содержащих или не содержащих фосфат [16].

Особое место среди аналогов олигонуклеотидов с полностью замененным сахарофосфатным остовом занимают соединения, построенные на основе пептидной цепи, т.е. содержащие остов, состоящий из аминокислотных остатков, несущих в боковых цепях нуклеиновые основания. Интерес к такого рода аналогам первоначально был вызван тем, что аминокислоты, содержащие нуклеиновые основания, нуклеоаминокислоты (HAK), были найдены в природных объектах как в свободном состоянии, так и в составе пептидов [20-24]. Кроме того, эти аналоги привлекают внимание тем, что они построены на основе хорошо исследованного класса биополимеров (пептидов), могут включать в свою структуру большой набор аминокислотных остатков, обладающих различными химическими и физико-химическими свойствами; и, наконец, пептидный остов способен подвергаться действию протеаз, и следовательно, потенциальные антисенсовые реагенты, созданные на основе пептидных структур, могут включаться в метаболизм и не проявлять токсичность in vivo.

Сведения о ранних работах в области химии нуклеоаминокислот и пептидов на их основе содержатся в обзоре Швачкина и др. [8], более поздние работы в этой области частично отражены в обзоре Фалькиевича [16]. В настоящем обзоре обобщены данные, касающиеся синтеза и свойств, включая комплементационные свойства, олигонуклеотидных аналогов, содержащих пептидный остов.

Для построения пептидного остова используют самые разные аминокислоты, как природные, так и неприродные, образующие пептидную связь через аминогруппу не только в а-, но и в ©-положениях. Аминокислоты в этих аналогах выполняют либо роль структурной единицы остова, к которой присоединено нуклеиновое основание, либо роль спейсерных аминокислот, которые вводятся в структуру соединений для придания им определенных свойств. В качестве аминокислот, несущих в боковой цепи нуклеиновое основание, выступают аланин, аминомасляные кислоты, аминокапроновая кислота и другие аминокарбоновые кислоты, а также аминокислоты с дополнительной функциональной группой: лизин, орнитин, (3-аминоаланин, глутаминовая кислота, серии, гомосерин, цистеин. В качестве аминокислот-спейсеров наиболее часто используются глицин и серии, а также лизин, аргинин, валин, глутаминовая кислота, тирозин, треонин.

Для того чтобы аналог олигонуклеотида был способен образовывать комплекс с НК, он должен обладать структурой, в которой нуклеиновые основания были бы расположены таким образом, чтобы они могли принимать участие в комплементационных взаимодействиях с парными основаниями НК. Теоретические расчеты таких структур были проведены спустя два десятилетия после первых синтезов пептидных аналогов олигонуклетидов. Расчеты различных структур олигонуклеотидных аналогов с полностью модифицированным остовом, а именно, найлоновых, полиуретановых и полипептидных [7], показали, что пептидные аналоги могут образовывать низкоэнергетические конформеры, способные взаимодействовать с НК в форме А- и В-спиралей. При этом имеет значение, на каком расстоянии друг от друга (параметр а) и от остова (параметр b -длина бокового линкера) расположены в структуре аналога нуклеиновые основания (Рис. 1). Было показано, что эти параметры важны и в структуре полиамидных аналогов, так для PNA расстояние а составляет 6 простых связей, а расстояние b - 3 простые связи [17, 25].

выводы

1. Впервые осуществлены дизайн и синтез новых типов пептидных аналогов олигонуклеотидов на основе 5-орнитина.

2. Твердофазным синтезом получен октадекануклеопептид, включающий чередующиеся остатки Ь-3-(тиминил-1)аланина и глицина.

3. Предложен новый метод модификации а-аминогрупп орнитина 2-(тиминил-1)ацетальдегидом, с последующим восстановлением Шиффовых оснований: этим методом получен гомогенный тимин-содержащий декаорнитин.

4. С помощью постсинтетической модификации олиго-5-орнитилполимера производными нуклеоаминокислот осуществлен синтез гомогенных катионных олигонуклеопептидов, содержащих нуклеиновые основания тимин и аденин.

5. Разработан метод ступенчатого твердофазного синтеза гетерогенного олигонуклеопептида с использованием в качестве мономера орнитина, модифицированного №-трифторацетильными производными нуклеоаминокислот.

6. Разработан оригинальный метод синтеза гетерогенных олигонуклеопептидов на полимере путем модификации орнитинового остатка пиримидил- и пуринилуксусными кислотами на каждой стадии пептидного синтеза олигоорнитина.

7. Методом УФ спектроскопии впервые показано, что катионные олигонуклеопептиды, полученные на основе орнитина, модифицированного производными нуклеоаминокислот, образуют стабильные комплексы с комплементарными последовательностями ДНК и между собой.

1. Pitha P.M. and Pitha J. Preparation and properties of poly-9-vinyladenine. // Biopolymers. 1970. V. 9. P. 965-977.

2. Pitha J., Pitha P. M., Ts'O P. O. P. Poly(l-vinyluracil): The preparation and interactions with adenosine derivatives. //Biochim. Biophys. Acta. 1970. V. 204. P. 39-48.

3. Pitha P. M., Michelson A. M. Preparation and properties of poly (1-vinylcytosine). // Biochim. Biophys. Acta. 1970. V. 204. P.381-388.

4. Reynolds F., Grunberger D., Pitha J., Pitha P. M. Inhibition of cell-free protein synthesis by poly(9-vinyladenine), poly(l-vinyluracil), and the corresponding vinyl copolymer. // Biochemistry. 1972. V. 11 (17). P. 3261-3266.

5. Pitha J., Pitha P. M. Antiviral resistance by the polyinosinic acid-poly (1-vinylcytosine) complex. // Science. V. 172 (988). 1971. P. 1146-1148.

6. Inaki Y. Synthetic nucleic acid analogs. // Prog. Polym. Sci. 1992. V. 17 (4). P. 515-570.

7. Weller D. D., Daly D. Т., Olson W.K., Summerton J. E. Molecular Modeling of Acyclic Polyamide Oligonucleotide Analogues. //J. Org. Chem. 1991. V. 56. P. 6000-6006.

8. Швачкин Ю.П., Мишин Г.П., Коршунова Г.А. Успехи и перспективы химии нуклеоаминокислот и нуклеопептидов. //Успехи химии. 1982. Вып. 2. С. 311-331.

9. Лидак М.Ю., Плата М.Г., Лулле И.Ж., Швачкин Ю.П. Полипептиды урацилил-Ы'-а-аланина и тиминил-^-а-аланина. // ХГС. 1971. № 4. С. 570.

10. Лидак М.Ю., Паэгле Р.А., Страуме В.Э., Шноре Д.Э., Швачкин Ю.П. Синтез пептидов на основе р-(урацилил-К1)-а-аланина. //ХГС. 1971. № 3. С. 404-408.

11. Кнорре Д.Г. Ген-направленные биологически активные вещества (антисмысловые олигонуклеотиды и их производные). //Биоорган, химия. 1997. Т. 23 (1). С. 3-17.

12. Nielson Р.Е., Egholm М., Berg R.H., Buchardt О. Sequence-selective recognition of DNA by strand displacement with a thymine-substituted polyamide. // Science. 1991. V. 254. P. 14971500.

13. Egholm M., Nielsen P.E,, Buchardt O., Berg R.H. Recognition of Guanine and Adenine in DNA by Cytosine and Thymine Containing Peptide Nucleic Acids (PNA). // J. Am. Chem. Soc. 1992. V. 114 (24). P. 9677-9678.

14. Knudsen H., Nielsen P.E. Antisense properties of duplex and triplex forming PNA. // Nucleic Acids Res. 1966. V. 24. P. 494-500.

15. Larsen H.J., Bentin Т., Nielsen P.E. Antisense properties of peptide nucleic acid. // Biochimica et Biophysica Acta. 1999. V. 1489. P. 159-166.

16. Falkiewicz В. Peptide nucleic acids and their structural modifications. // Acta Biochimica Polonica. 1999. V. 46 (3). P. 509-529.

17. De Mesmaeker A., Altmann K.-H. Backbone modifications in oligonucleotides and peptide nucleic systems. // Curr. Opin. Struct. Biol. 1995. V. 5 (3). P. 343-355.

18. Summerton J., Weller D. Morpholino antisense oligomers: design, preparation, and properties. // Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 1997. V. 7 (3). P. 187-195.

19. Prévost N., Rouessac F. Isonucleosides by Michael addition of pyrimidine bases on 2,6-disubstituted 2H-pyran-3(6H)-ones. Tetrahedron Lett. 1997. V. 38 (24). P. 4215-4218.

20. Gmelin R. Free amino acids in seeds of Acacia willardiana. Isolation of willardiine, a new plant amino acids, probably L-uracil-l-(a-aminopropionic acid). // Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem. 1959. V. 316. P. 164-169.

21. Kristensen I., Larsen P.O. y-Glutamylwillardine and y-glutamylphenylalanylwillardiine from seeds ofFagus silvatica. //Phytochemistry. 1974. V. 13 (12). P. 2799-2802.

22. Kristensen I., Larsen P.O., Sorensen H. Free amino acids and y-glutamyl peptide in seeds of Fagus silvatica//Phytochemistry. 1974. V. 13 (12). P. 2803-2811.

23. Ballio A., Barcellona S., DiVittoro V. Nucleotides of microorganisms (VII) stereochemistry of adenosine succinic acid. // Arch. Biochem. Biophys. 1963. V. 101. P. 311-315.

24. Carter C.E., Cohen L.H. Enzymic synthesis of adenylosuccinic acid. // J. Am. Chem. Soc. 1955. V. 77. P. 499-500.

25. Almarsson O., Bruice T.C. Peptide nucleic acid (PNA) conformation and polymorphism in PNA-DNA and PNA-RNA hybrids. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. V. 90. P. 9542-9546.

26. Швачкин Ю.П., Олсуфьева E.H., Семилетов Ю.А. Гомо- и гетеронуклеопептиды, содержащие радикалы урацила и аденина. // ЖОХ. 1974. Т. 44 (10). С. 2368.

27. Doel M. T., Jones A. S., Walker R.T. The synthesis of peptides containing purine and pyrimidine derivatives of DL-alanine. // Tetrahedron. 1974. V. 30. P. 2755-2759.

28. Buttrey J. D , Jones A. S., Walker R. T. The resolution of DL-P-(thymin-l-yl)alanine and of the p-(thymin-l-yl)alanines. //Tetrahedron. 1975. V. 31. P. 73-75.

29. Швачкин Ю.П., Коршунова Г.А., Воскова H.A. Синтез гомонуклеопептидов поликонденсацией активированных эфиров нуклеоаминокислот. // ЖОХ. 1976. Т. 46 (1). С. 199-200.

30. Швачкин Ю.П., Семилетов Ю.А., Воскова Н.А. Получение стереорегулярных нуклеопептидов смешанного типа с чередующимися остатками Ь-урацилил-Ы^а-аланина и L-серина. // ЖОХ. 1977. Т. 47 (11). С. 2635-2636.

31. Семилетов Ю.А., Коршунова Г.А., Швачкин Ю.П. Нуклеоаминокислоты и нуклеопептиды. VIII. Твердофазный синтез нуклеопептидов смешанного типа, содержащих остатки Р-(урацилил-К1)-а-аланина и аланина. //ЖОХ. 1981. Т. 51 (10). С. 2369-2372

32. Воскова Н.А., Семилетов Ю.А., Сумбатян Н.В., Швачкин Ю.П. Ступенчатый синтез в растворе стереорегулярных гомонуклеопептидов, содержащих остатки урацилил-N'-a-аланина. //ЖОХ. 1980. Т. 50 (2). С. 477-478.

33. Diederichsen U. Pairing properties of alanyl peptide nucleic acids containing an amino acid backbone with alternating configuration. // Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1996. V. 35. P. 445448.

34. Рябцева O.H., Коршунова Г.А., Семилетов Ю.А., Швачкин Ю.П. Синтез стереорегулярных нуклеопептидов смешанного типа, содержащих остатки L-нуклеоаминокислот и L-лизина. //ЖОХ. 1983. Т. 53 (10). С. 2411-2412.

35. Рябцева ОН., Коршунова Г.А., Семилетов Ю.А., Швачкин Ю.П. Нуклеоаминокислоты и нуклеопептиды. XI. Синтез нуклеопептидов смешанного типа, родственных киоторфину. //ЖОХ. 1985. Т. 55 (1). С. 208-214.

36. Семилетов Ю.А., Коршунова Г.А., Швачкин Ю.П. // Синтез стереорегулярных нуклеопептидов смешанного типа, содержащих остатки Ь-тиминил-И'-а-аланина, L-аденилил-1Ч9-а-аланина и L-лизина. //ЖОХ. 1980. Т. 50 (4). С. 958-959.

37. Конде К., Семилетов Ю.А., Швачкин Ю.П. Синтез стереорегулярных аргининовых олигопептидов смешанного типа. //ЖОХ. 1986. Т. 56 (3). С. 724-725.

38. Семилетов Ю.А., Тяглов Б.В., Пермогоров В.И. Синтез стереорегулярных нуклеопептидов смешанного типа и изучение их взаимодействия с природными полинуклеотидами. //ЖОХ. 1981. Т. 51 (1). С. 230-238.

39. Тяглов Б.В., Пермогоров В.П., Черных Н.А., Семилетов Ю.А., Конде К., Швачкин Ю.П. Нуклеоаминокислоты и нуклеопептиды. XV. Изучение взаимодействия аргининсодержащих нуклеопептидов с полинуклеотидами. // ЖОХ. 1987. Т. 57 (9). С. 2124-2126.

40. Семилетов Ю.А., Швачкин Ю.П. Ступенчатый синтез в растворе стереорегулярных нуклеопептидов, содержащих остатки Ь-урацилил-ГЧ'-а-аланина и L-серина. // ЖОХ. 1981. Т. 51 (2). С. 490-491.

41. Семилетов Ю. А. Синтез и свойства нуклеопептидов смешанного типа // Дисс. канд. хим. наук. М.: МГУ. 1982.

42. Lohse Р., Oberhauser В., Oberhauser-Hofbauer В., Baschang G., Eschenmoser А. Chemie von a-Aminonitrilen. XVII. 01igo(nucleodipeptairiidmium)-Salze // Croat Chem. Acta. 1996. V. 69. P. 535-562.

43. De Koning, H., Pandit, U.K. Unconventional nucleotide analogues. VI. Synthesis of purinyl-and pyrimidinyl-peptides. //Ree. Trav. Chem. 197I.V. 90. P. 1069-1080.

44. Diederichsen U., Schmitt H.W. ß-Homoalanyl-PNA: A special case of ß-peptides with ß-sheet-like backbone conformation; organization in higher ordered structures. // Eur. J. Org Chem. 1998. P. 827-835.

45. Diederichsen U., Schmitt H.W. ß-Homoalanyl PNAs: Synthesis and indication of higher ordered structures. // Angew. Chem. Int. Ed. 1998. V. 37. P. 302-305,

46. Huang S-B., Nelson J. S., Weller D. D. Acyclic nucleic acid analogues: Synthesis and oligomerization of y,4-diamino-2-oxo-l(2H)-pyrimidinepentanoic acid and 5,4-diamino-2-oxo-1 (2H)-pyrimidinehexanoic acid. //J. Org. Chem. 1991. V. 56. P. 6007-6018.

47. Azumaya I., Aebi R., Kubik S., Rebek J. Jr. Synthesis and coupling reactions of a,a-dialkylated amino acids with nucleobase side chains. // Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 1995. V. 92. P. 1201312016.

48. Kubik, S., Meissner, RS., Rebek, J. Jr. Synthesis of a, a-dialkylated amino acids with adenine or thymine residues. A new mild facile hydrolysis of hydantoins. // Tetrahedron Lett. 1994. V. 35. P. 6635-6638.

49. Lenzi A., Reginato G., Taddej M., TrifilieffE. Solid Phase synthesis of a self complementary (antiparallel) chiral peptidic nucleic acid strand. // Tetrahedron Lett. 1995. V. 361 (10). P. 1717-1718.

50. Ceulemans G., Khan K., Van Schepdael A., Herdewijn P. Peptide analogues of DNA consisting of L-a-amino-y-thymine butyric acid and L-valine subunits. // Nucleosides & Nucleotides. 1995. V. 14 (3-5). P. 813-816.

51. Howarth N.M., Wakelin L.P.G. a-PNA: A novel peptide nucleic acid analogue of DNA. // J Org. Chem. 1997. V. 62. P. 5441-5450.

52. Umemiya H., Komatsu K., Yamazaki Т., Kagechika H., Shudo K., Hashimoto Y. Synthesis of oligopeptides as polynucleotide analogs. // Nucleic Acids Symp. Ser. 1995. V. 34. P. 37-38.

53. Umemiya H., Kagechika H., Hashimoto Y., Shudo K. Synthesis of oligopeptides as polynucleotide analogs. // Nucleosides & Nucleotides. 1996. V.15. P. 465-475.

54. Yamazaki T., Komatsu K., Umemiya H., Hashimoto Y., Shudo K., Kagechika H. Dinucleotide-analogous tetrapeptides. Specific triplex formation with complementary polynucleotides. //Tetrahedron Lett. 1997. V. 38. P. 8363-8366.

55. Diederichsen U., Schmitt H.W. Self-pairing PNA with alternating alanyl/homoalanyl backbone. // Tetrahedron Lett. 1996 V. 37. P. 475-478.

56. Shah V.J., Cerpa R., Kuntz I.D.Jr., Kenyon G.L. Solid-phase synthesis of peptide-derived enantiospecific nucleic acid analogs. // Bioorg. Chem. 1996. V. 24. P. 201-206.

57. Nollet A.J., Huting C.M., Pandit U.K. Unconventional nucleotide analogues. I. N-purinyl alpha-aminoacids. //Tetrahedron. 1969. V. 25. P. 5971-5981.

58. Nollet A.J., Pandit U.K. Unconventional nucleotide analogues III. 4-(N-pyrimidyl)-2-aminobutyric acids. //Tetrahedron. 1969. V. 25. P. 5989-5994.

59. Lenzi A., Reginato G., and Taddej M. Synthesis of N-Boc-a-amino acid with nucleobase residues as building blocks for the preparation of chiral PNA. // Tetrahedron Lett. 1995. V. 36 (10). P. 1713-1716.

60. Szyrwiel J., Mlynarz P., Kozlowski H., Taddei M. Chiral peptide nucleic acids: a new family of ligands for metal ions. // J. Chem. Soc. Dalton Trans. 1998. P. 1263-1264.

61. Jordan S., Schwemler C., Kosch W., Kretschmer A., Schwenner E., Stropp U., Mielke B. Synthesis of new building blocks for peptide nucleic acids containing monomers with variations in the backbone. //Bioorg. Med. Chem. Lett. 1997. V. 7. P. 681-686.

62. Jordan S., Schwemler C., Kosch W., Kretschmer A., Stropp U., Schwenner E., Mielke B. New hetero-oligomeric peptide nucleic acids with improved binding properties to complementary DNA. //Bioorg. Med. Chem. Lett. 1997. V. 7. P. 687-690.

63. Lowe G., Vilaivan T. Aminoacids bearing nucleobases for the synthesis of novel peptide nucleic acids. //J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1997. V. 1. P. 539-546.

64. Lowe G., Vilaivan T. Dipeptides bearing nucleobases for the synthesis of novel peptide nucleic acids. //J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1997. V. 1. P. 547-554.

65. Löbberding A., Mielke B., Schwemler C., Schwenner E., Stropp U., Springer W., Kretschmer A., Potter T. Europian patent EP 0646596 Al. 1995.

66. Van der Laan A. C., van Amsterdam I., Oosting R. S., Brans R., Meeuwenoord M.J., Kuyl-Yeheskiely E., van Boom J. H. Synthesis of new chiral PNA analogues. Netherland 1995 Nucleic Acids Symposium. P16.

67. Van der Laan A.C., van Amsterdam I., Kuyl-Yeheskiely E., van Boom J.H. In "Innovations and perspectives in Solid Phase Synthesis: Fourth International Symposium Collected Papers" Epton, R. (Ed.) Mayflower worldwide Ltd. Birmingham. 1996. P.543-544.

68. Van der Laan A. C., van Amsterdam I., Tesser G. I., van Boom J. H., Kuyl-Yeheskiely E. Synthesis of chirally pure ornithine based PNA analogs // Nucleosides & Nucleotides. 1998. V. 17(1-3). P. 219-231.

69. Petersen K.H., Buchardt O., Nielsen P.E. Synthesis and Oligomerization of Ns-Boc-Na-(thymin-1 -ylacetyl)ornitine. //Bioorg. Med. Chem. Lett. 1996. V. 6. P. 793-796.

70. Lioy E., Kessler H, Synthesis of a new chiral peptide analogue of DNA using ornithine subunits and solid-phase peptide synthesis methodologies. // Liebigs Ann. 1996. P. 201 -204.

71. Inaki Y., Tohnai N., Miyabayashi K., Wada Т., Miyata M. Isopoly-L-ornithine derivatives of thymine and thymidine. //Nucleosides & Nucleotides. 1998. V. 17 (1-3). P. 339-350.

72. Garner P., Yoo J.U. Peptide-based nucleic acid surrogates incorporating SerCH2B.-Gly subunits. // Tetrahedron Lett. 1993 V. 34. P. 1275-1278.

73. Altmann K.-H., Chiesi C.S., Garcia-Echeverria C. Polyamide based nucleic acids analogs -synthesis of 5-amino acids with nucleic acid bases bearing side chains. // Bioorg. Med. Chem. Lett, 1997. V. 7. P. 1119-1122.

74. Garcia-Echeverria C., Husken D., Chiesi C.S., Altmann K.-H. Novel polyamide based nucleic acid analogs synthesis of oligomers and RNA-binding properties. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 1997. V. 7. P. 1123-1126.

75. Inaki Y., Miyata M., Tohnai N. New synthetic nucleic acid analogs and interaction: with polynucleotides.// Nucleic Acids Res. Sym. Ser. 1996. V. 35. P. 25-26.

76. Fujii M., Yoshida K., Hidaka J.; Ohtsu T. Hybridization properties of nucleic acid analogs containing P-aminoalanine modified with nucleobases. // Chem. Commun. 1998. V. 6. P 717718.

77. Fujii M., Hidaka J. Nucleic acid analog peptide containing 2-aminoalanine modified with nucleobase. //Nucleosides & Nucleotides. 1999. V. 18 (6-7). P. 1421-1422.

78. Savithri D., Leumann C., Scheffold R. Synthesis of a building block for nucleic-acid analog with a chiral, flexible peptide backbone. // Helv. Chim. Acta. 1996. V. 79. P. 288-294.

79. Cantin M., Schutz R, Leumann C.J. Synthesis of the monomeric building blocks of Z-olefmic PNA (Z-OPA) containing the bases adenine and thymine. /'/ Tetrahedron Lett. 1997. V. 38. P. 4211-4214.

80. Швачкин Ю.П. Нуклеоаминокислоты и нуклеопептиды. I. Общая концепция и основные определения. // ЖОХ. 1979. Т. 27. С. 2285-2288.

81. Merrifield R.B. Solid phase peptide synthesis I. The synthesis of a tetrapeptide. // J. Am. Chem. Soc. 1963. V. 85. P. 2149-2154.

82. Merrifield R. B. Solid-phase synthesis. // Science. 1986. V. 232. P. 341-347.

83. Швачкин Ю.П., Воскова H.A., Коршунова Г.А., Семилетов Ю. А., Савелова Н. В Получение оптически активных нуклеоаминокислот. // Вестник МГУ хим. 1976. Т. 17 (5). С. 598-601.

84. Швачкин Ю.П., Воскова Н.А., Семилетов Ю. А., Коршунова Г.А., Купцова О С., Яковлева И. В. О разделении (3-(тиминш1-М')- а-аланина и р-(цитозинил-Ы1)-о.-аланина на оптические антиподы. //Вестник МГУ хим. 1977, Т. 18 (4). С. 482-484.

85. Коршунова Г.А., Семилетов Ю. А., Рябцева О. Н. Швачкин Ю.П. О разделении рацематов нуклеоаминокислот на оптические антиподы. // Вестник МГУ хим. 1982 Т. 23 (4). С. 412-413.

86. Doel М. Т., Jones A. S., Tylor N. An approch to the synthesis of peptide analogs of oligonucleotides (nucleopeptides). // Tetrahedron lett. 1969. V. 27. P. 2285-2286.

87. Cole M., Deacylation of acylamino compounds other then Penicillins by the cell-bound Penicillin Acyla.se of Escherichia coli //Biochem. J. 1969. V. 115. P. 741-745.

88. Там. J. P., Kent S. В., Wong T. W., Merrifield R. B. Improved synthesis of 4-(Boc-aminoacyloxymethyl) phenylacetic acids for use in solid phase peptide synthesis. // Synthesis. 1979. V. 12. P. 955-957.

89. Позднев В. Ф. Ацилировние аминокислот трет-алкилпирокарбонатами. // ХПС. 1971. Т. 3. С. 384-385.

90. Reid G. Е., Simpson R. J. Automated solid-phase peptide synthesis: use of 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tetramethyluronium tetrafluoroborate for coupling of tert-butyloxycarbonyl amino acids. // Anal Biochem. 1992. V. 200 (2) P.301-309.

91. Kaiser E., Colescott R.L., Bossinger G.D., Cook P.I. Color test for detection of free terminal amino groups in the solid-phase synthesis of peptides. // Anal. Biochem. 1970. V. 34 P. 594598.

92. Гершкович А.А., Кибирев В.К. Химический синтез пептидов. Киев: Наукова думка, 1992.360с.

93. Чаман Е С., Головчинская Е.С. Синтезы в ряду производных пурина II, Изокофеин-8-альдегид и некоторые его производные. // ЖОХ. 1962. Т. 32 С. 2015-2019.

94. Finn, P. J., Gibson, N. J., Fallon, R., Hamilton, A., Brawn, T. Synthesis and properties of DNA-PNA chimeric oligomers. // Nucl. Acids Res. 1996. V. 24 (17). C.3357-3363.

95. Aldrian-Herrada G., Rabie A., Wintersteiger R., Brugidou J. Solid-phase synthesis of peptide nucleic acid (PNA) monomers and their oligomerization using disulphide anchoring linkers. // J. Peptide Sci. 1998. V. 4. P. 266-281.

96. Nispen J. W., Polderdijk J. P., Janssen W. P. A., Greven H. M. Replacement of hydrogen fluoride in solid phase peptide synthesis by methanesulfonic acid. // Rec. trav. Chim. Pays-Bas. 1981. V. 100 (11). P. 435-436.

97. Uhlmann E. Peptide nucleic acids (PNA) and PNA-DNA chimeras: from high binding affinity towards biological function. //Biol. Chem. 1998. V. 379 (8-9). P. 1045-1052.

98. Barany G., Merrifield R. B. Peptides. // Rockefeller univ. New York. NY 19021 USA. 1980. V. 2. P. 1-284.

99. Schlatter J. M., Mazur R. H., Goodmonson O. Hydrogenation in solid phase peptide synthesis. 1. Removal of product from the resin. // Tetrahedron Lett. 1977. P. 2851-2852.

100. Kisfaludy L., Low M., Nyeki O. Die Verwendung von pentafluorphenylestern bei peptid synthesen//Liebigs Ann. Chem. 1973. N. 9. P. 1421-1429.

101. Романов В В., Воскова H.A., Коршунова Г.А., Швачкин Ю.П. Нуклеоаминокислоты и нуклеопептиды. Изучение конформации нуклеоаминокислот в растворах // Биоорган, химия. 1979. Т. 5 (4). С. 536-545.

102. Органикум. Практикум по органической химии. II. М.: Мир, 1979. С. 360.

103. Воскова H.A., Рябцева О.Н., Баратова JI.A. Швачкин Ю.П. Определение нуклеоаминокислот методом ионообменной хроматографии // ЖАХ. 1985. Т. 40 (8). С. 1518-1520.

104. Купцова О.С. Получение и своства оптических изомеров |3-(цитозинил-1Ч1)-а-аланина //Дипл. работа. М: МГУ. 1976.

105. Рябцева О. Н. Синтез и свойства нуклеоаминокислотных аналогов некоторых регуляторных пептидов. // Дисс. канд. хим. наук. М.: МГУ. 1986.

106. Laboratory Chemicals and Analytical Reagents // Fluka. 1999/2000. P. 653.

107. Руководство к прибору "Applied Biosystems, model 431A". 1990. C. 215.