Синтез олигосахаридных цепей гликопротеиновых антигенов HNK-1 тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.03 ВАК РФ

Учреждение Российской академии наук Институт органической химии имени Н. Д. Зелинского РАН

На правах рукопиеи

' ' / « У г

СУХОВА ЕЛЕНА ВИКТОРОВНА

СИНТЕЗ ОЛИГОСАХАРИДНЫХ ЦЕПЕЙ ГЛИКОПРОТЕИНОВЫХ АНТИГЕНОВ НЖ-1

□и3455512

02.00.03 - органическая химия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

0 5 ДЕН 2008

Москва 2008

003455512

Работа выполнена в лаборатории химии гликоконъюгатов Учреждения Российской академии наук Института органической химии имени Н. Д. Зелинского РАН

Научный руководитель: кандидат химических наук Юрий Евгеньевич Цветков

Официальные оппоненты; доктор химических наук Дмитрий Владимирович Яшунский доктор химических наук Яков Васильевич Возный

Ведущая организация:

Химический факультет Московского государственного университета имени М. В. Ломоносова

Защита состоится «-/¿7» декабря 2008 года в /О часов на заседанш диссертационного совета Д 002.222.01 по химическим наукам при Институт органической химии имени Н. Д. Зелинского РАН по адресу 119991, Москва Ленинский проспект, 47.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИОХ РАН

Автореферат разослан « /Л ноября 2008 года

Ученый секретарь диссертационного совета Д 002.222.01 доктор химических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность данной работы: Биомолекулы, несущие углеводные цепи, - гликолипиды и гликопротеины - определяют адгезию нервных клеток, играют важную роль в процессах роста и развития нервных тканей и передачи нервного импульса. Углеводные структуры опосредуют многие процессы межклеточного распознавания и, следовательно, играют важную роль в формировании сложных молекулярных событий на клеточной поверхности и во внеклеточном матриксе. Большое структурное разнообразие углеводных цепей допускает огромные комбинаторные возможности, которые могут лежать в основе тонкой «настройки» межклеточных и клеточно-матриксных взаимодействий. Особое место среди углеводных структур занимают олигосахариды, распознаваемые антителами HNK-1. Эти олигосахариды относятся к так называемым углеводным антигенам HNK-1, получившим свое название от антител против поверхностных антигенов лимфоцитов человека -натуральных киллеров. Общим структурным элементом олигосахаридных цепей, распознающихся антителами HNK-1, является трисахаридная последовательность ~S03-3G!cAP-(1^3)-Gal¡3-(l-M)GlcNAc (1).

Содержание таких углеводов на клеточных поверхностях очень мало, что делает их доступность из природных источников весьма ограниченной. Поэтому синтетические олигосахариды этой группы являются незаменимыми инструментами при изучении роли углеводных структур в природных процессах. Поскольку для медико-биологических исследований наиболее полезны не только сами олигосахариды, но и их моно- и поливалентные конъюгаты, то особенно актуально получение олигосахаридов, несущих функционализированную спейсерную группу, с помощью которой возможно ковалентное связывание углеводов с метками или носителями. Необходимость исследования роли отдельных элементов структуры олигосахарида 1 в биологических процессах делают актуальным разработку эффективного метода стерео- и регионаправленного синтеза не только самой трисахаридной последовательности 1, но и родственных ей структур, в частности, миметиков, где остаток глюкуроновой кислоты заменен остатком глюкозы, несущим при

1

0-6 сульфогруппу, мимикрирующую карбоксильную группу в остатке глюкуроновой кислоты.

Цель работы: Диссертация посвящена синтезу 2-аминоэтилгликозида трисахарида 1 (2), его дисульфатированному аналогу 3 и производному, несущему фукозный остаток в положении 3 глюкозамина 4, а также синтезу сульфо-миметика 5 антигенного трисахарида НМК-1 1 и соответствующих ему моносульфатированных производных 6 и 7.

Все перечисленные сульфатированные олигосахариды необходимо было получить в виде 2-аминоэтилгликозидов, то есть в форме, позволяющей их дальнейшую конъюгацию с различными метками и носителями.

Научная новизна и практическая ценность работы: В настоящей работе осуществлен синтез природного антигенного трисахарида НЫК-1; впервые синтезированы его дисульфатированное производное и производное, несущее фукозный остаток в третьем положении глкжозаминового блока, а также сульфо-миметик и соответствующих ему моносульфатированных производных. Все целевые соединения получены в спейсерированной форме, то есть в виде 2-аминоэтилгликозидов.

Усовершенствован метод селективной защиты гидроксильной группы при 0-3 глюкуроновой кислоты, основанный на использовании производных глкжопирануроно-6,3-лактонов. Впервые показана возможность получения 3,6-сульфатированого глюкозного блока из левоглюкозана. Найдены условия селективного гидрогенолиза бензильных групп в сульфатированных

г 1Г=:Н з й'" ЭО^Мэ

5 И1= |?2 = ЭОзИа

6 1?1= БОзЫа, (?2= Н

7 И1= Н,

4

олигосахаридах, позволяющие минимизировать побочную реакцию десульфатирования.

Публикации: По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, в том числе 3 статьи и тезисы 2 докладов на конференциях.

Объем диссертации и ее структура: Диссертация состоит из введения, литературного обзора, посвященного особенностям гликозилирования гидроксильной группы при С-4 глюкозамина, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка цитированной литературы. Общий объем диссертации страниц.

Автор выражает глубокую благодарность заведующему лабораторией химии гликоконъюгатов ИОХ РАН доктору химических наук, профессору Николаю Эдуардовичу Нифантьеву за внимание и помощь, оказанные при выполнении работы.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Ретроеинтетический анализ целевых структур: При

ретросинтетическом анализе (схема 1) целевых продуктов 2-7 во внимание принимались их ключевые структурные особенности, а именно: последовательность моносахаридных блоков в углеводном скелете, конфигурация межмоносахаридных связей, наличие сульфогруппы при 0-3 остатка глюкуроновой кислоты (для олигосахаридов 2, 3, 4) и 0-6 глюкозаминового блока (для олигосахарида 3), необходимость сульфатирования по 0-3 и 0-6 глюкопиранозного остатка (для олигосахарида 5) и наличие аминогруппы в агликоне.

Предшественником аминогруппы в трисахаридах 2-7 (схема 1) была выбрана азидная группа, поскольку она является устойчивой в условиях реакций планируемого синтеза.

Предшественниками целевого природного антигенного трисахарида НМС-1 2 и его сульфатированного или фукозилированного аналогов 3 и 4 являются моногидроксильное производное 8, дигидроксильное производное 9 и фукозилированное производное 10 соответственно. Предшественником

3

соединения 8 является дибензиловый эфир 11, а производные 9 и 10 могут быть получены из общего предшественника 12, в котором защитные группы при 0-3 и 0-6 глюкозамина ортогональны как между собой, так и защитным группам в остальной части трисахаридной молекулы.

11 н'-Вп

12 ^ т РМР(п-МеОСбН4)

Схема1.

Общим предшественником целевых соединений 5-7 является диол 13, который планировалось получить из трисахарида 14, содержащего временные ацетильные защитные группы при С-3 и С-6 глюкозного остатка.

Представив трисахариды 11, 12 и 14 в виде обобщенной структуры 15 (схема 2), рассмотрим ретросинтез трисахаридного скелета.

Схема 2.

Синтез трисахаридной последовательности 15 предполагалось осуществить

либо по схеме [1+2], либо по схеме [2+1] (схема 3). Лактозаминовый блок 17 и

4

дисахаридный блок 21 предполагалось синтезировать из моносахаридных предшественников 16 (У = СООСНзили СНЬОАс), 20 и 19. Их, в свою очередь, можно получить из у-лактона глюкуроновой кислоты (или левоглюкозана в случае У = СН2ОАс), р-пентаацетата Б-галактозы и И-ацетил-В-глюкозамина соответственно.

РЬ

Ь

о

lLo _

НОУа»^ У-R' <-- Acyll

OBz

АсОУ.и«Г V.R OBz

it

16 " [1+2]

Ь I 12+11

oT ^OR1

OBi OBI NHAc

21 Ph

°Ll

BIO-TV-O + V-^-0

AcO \.R HOXee^sX-R'

OBI OBI

16 20 Схема 3. Ретросинтетический анализ трисахаридной последовательности 15.

Синтез глюкуронил-доноров 27 и 30: Для получения целевого природного антигенного трисахарида НМК-1 2 и его аналогов 3 и 4, необходимо использовать глюкуронил-доноры с временной защитной группой при О-З. Селективное удаление такой защиты позволяет получить моногидроксильные производные для последующего сульфатирования.

Первой задачей настоящей работы была оптимизация условий получения селективно защищенных моногидроксильных производных по схеме, включающей 6,3-лактонизацию производного уроновой кислоты, ацилирование

образующегося лактона и раскрытие лактонового кольца в условиях мягкого основного метанолиза.

соон

но-\Д—Л „

а,б

СООН

он

23

V

ОВг ОБг

СООСН]

АсОЛ^Д^вЕ! ОВг

I-29 Р-Н

1—► 30 И = Ас

СООСН, ВгО-Г-^Ч

КОЛ-Т-Д-ОАП

ОВг

Г|-24 Я=Н

1-► 25 Я»Ас —

СООСН; Д ВгО-гД^-О

032

Л ■ С(МН)СС!з

Схема 4. Реагенты и условия: а) Вг20 (25-30 эквив.), ДМФА, 85°С, 4ч; б) Вг20, Ру, 4-(диметиламино)пиридин, ДМФА, Збч, 20°С; в) МеОН, АсО№, ДМФА; г) Ас20, Ру; д) РйС12, МеОН, 2ч; е) СС13СМ, К2СО}, СН2С12, -5°С.

Исходные соединения 22 и 28 были получены омылением их полных ацетатов обработкой 1ЛОН в водном ТГФ. Для получения 2,4-диацилированных производных была разработана методика, включающая: (1) лактонизацию уроновых кислот под действием бензойного ангидрида (20-30 экв.) в ДМФА при температуре 80-85°С; (2) О-бензоилирование 6,3-лактона типа 23 в Ру в присутствии 4-(диметиламино)пиридина (БМАР); (3) метанолиз лактона в присутствии безводного асетата натрия (АсОКа).

Так, исходные кислоты 22 и 28 переводили через промежуточное образование лактонов в целевые моногидроксильные производные 24 и 29 с выходом 64 и 62% соответственно. Наличее свободных ОН-групп при С-3 в соединениях 24 и 29 подтверждалось сильнопольными расположениями сигналов протонов Н-3 в спектрах 'Н-ЯМР. Ацетилирование единственной ОН-группы в соединениях 24 и 29 позволило получить производные уроновой кислоты 25 и 30, содержащие временную ацетильную защитную группу при О-3, что обеспечивает возможность дальнейшего З-О-сульфатирования.

Гликозид 25 деаллилировали под действием хлорида паладия (Рс1С12) в метаноле, полученный полуацеталь 26 переводили в трихлорацетимидатный донор 27.

Таким образом, были получены глюкуронил-доноры 27 и 30 с временной защитной группой при 0-3.

Синтез галактозных блоков 32 и 33: 4,6-О-Бензилиденовые производные этилтио- и аллил-галактозида 32 и 33, отвечающие обобщенной структуре 20 (схема 3), были синтезированы по известным методикам из пентаацетата галактозы 31 (схема 5).

Использование тиогалактозида 32 в качестве гликозил-акцептора приводит непосредственно к дисахаридным гликозил-донорам типа 21 (схема 3, Б." = БЕ!) без каких-либо дополнительных превращений. С другой стороны, соединение 32 может быть превращено в гликозил-донор общей формулы 18 простым ацилированием по 0-3. Наличие аномерной аллильной группы в галактозиде 33 позволяет не только осуществлять все необходимые трансформации защитных групп, но и легко переходить от аллилгликозидов к восстанавливающим производным Сахаров, а от них - к гликозил-донорам для последующего роста углеводной цепи.

Синтез глгокозаминовых блоков 36 и 39: Синтез 2-азидоэтилгликозидов глюкозамина типа 19 представлен на схеме 6. Бензиловый эфир 35 был получен в шесть стадий по известным методикам исходя из Л'-ацетилглюкозамина. Далее соединение 35 переводили в 3,6-ди-О-бензильное производное 36 (выход 84%) с помощью региоизбирательного восстановительного раскрытия бензилиденового цикла под действием комплекса МезКГ-ВНз и А1СЬ в присутствии 2 экв. воды. Положение свободной гидроксильной группы в

зз

31

32

суммарный выход 23%

суммарный выход 25%

Схема 5.

соединении 36 подтверждалось на основе корреляции в спектре Ж)Е8У между протонами Н-3 и Н-6 глюкозамина и метиленовыми протонами бензильных групп, а также наличием корреляции между протонами Н-4 и 4-ОН.

Схема 6. Реагенты и условия: а) Ме3№ВН3, А1С13, Н20, ТГФ, 4°С -> 20°С; б) АсОН, 40°С, 36ч; в) Т5С1, Ру, 0°С; г) п-МеОС6Н4ОН, НаН, ДМФА, 60'С.

Удалением бензилиденовой защитной группы в соединении 35 водной АсОН был получен диол 37, который избирательно 6-О-тозилировали действием ТбО в Ру. Полученный тозилат 38 затем был превращен в п-метоксифенильное производное 39 реакцией с п-метоксифенолом в присутствии ЫаН. Таким образом, был получен глюкозаминовый акцептор 39 с ортогональными защитными группами при 0-3 и 0-6, которые позволяют дальнейшую функционализацию остатка глюкозамина в составе трисахарида.

Синтез трисахарида 43 по схеме [1+2]: Согласно ретросинтетической схеме 3, синтез общего дисахаридного блока Оа1Р-( 1 —>4)-С51сЫАс предполагалось провести с использованием 3-0-хлорацетилированного этилтиогликозида 40 и глюкозаминового акцептора 36 (схема 7).

ри

одсо-у.« \-SEt

ОВг

40

ОВп 0

Ы« | А" 11111 I I ^ I ь

-I— 411?-С1Ас 1-»42К = Н

Схема 7. Реагепты и условия: а) N18, ТГОН, Мв 4А, СНгСЬ, -30°С; 6) тиомочевина, «ш-коллидин.

В результате гликозилирования в присутствии промотирующей системы № йодосукцинимид (N15) - трифторметансульфокислота (ТЮН) и молекулярных сит 4А был получен дисахарид 41 с выходом 70%. Р-Конфигурация вновь образованной гликозидной связи в этом соединении подтверждалась характерным значением КССВ (7^=8.2) Гц аномерного протона остатка галактозы в спектре 'Н-ЯМР. После удаления хлорацетатной группы в дисахариде 41 под действием тиомочевины в присутствии сим-коллидина был получен целевой лактозаминовый акцептор 42 с выходом 90%.

Для получения трисахарида 43 по схеме [1+2] лактозаминовый акцептор 42 необходимо подвергнуть глюкуронилированию с использованием доноров 27 или 30. При попытке гликозилирования акцептора 42 этилтиогликозидом 30 в присутствии N15 и ТЮН не происходило образования трисахарида 43 (схема 8). При использовании же в качестве глюкуронил-донора трихлорацетимидата 27 трисахарид 43 был получен с выходом лишь 10%.

Схема 8. Реагента и условия: а) N18, ТЮН, МБ 4А, СН2С12, -30"С; б) ВРз'ЕъО, МБ AW300> СН2С12, 0'С.

Таким образом, неприемлемо низкий выход на стадии получения трисахарида заставил нас отказаться от схемы [1+2] и исследовать альтернативную схему сборки [2+1].

Синтез трисахаридов 11 и 12 по схеме [2+1]: При сборке трисахаридной цепи по этой схеме на первом этапе было необходимо получить дисахаридный блок типа 21 (схема 3). Все попытки гликозилирования тиогалактозида 32 различными глюкуронил-донорами не дали положительного результата. Напротив, реакция трихлорацетимидата 27 с аллилгалактозидом 33 в толуоле в

9

присутствии ЕН'У^гО и молекулярных сит А\У300 привела к дисахаридному продукту 44 с хорошим выходом 64% (схема 9).

Схема 9. Реагенты и условия: а) ВРз'Е^О, МЭ А\У300, толуол, 0°С—>10°С.

Для превращения гликозида 44 в дисахаридный донор кислотолабильная 4,6-О-бензилиденовая группа была заменена на устойчивые в кислых условиях бензоильные остатки (схема 10). Удаление аллильной группы в полученном производном 46 взаимодействием с Р(1С12 в присутствии АсСЖа в 95% уксусной кислоте был получен восстанавливающий дисахарид 47, который реакцией с СС13СК в присутствии ВВи превращали в трихлорацетимидат 48 с выходом 85%.

СООСНд ОВг

сооснз сокг

Вг1 Ас

ОВг ОВг

С45Н=0А11,1*1 = К!=Н

46 I* = ОАП, Я1 = I?2 =Вг-,

|- 47 I* = ОН, Я1 = Н! =Вг -.—I 0

' I—► 48 I? = ОС{ЫН) СС|3, ^ = ^ =Вг 19 Г? = БЕ!, ^ = =Вг ..-

Схема 10. Реагенты и условия: а) п-толуолсульфонат пиридиния, 90% водный СИзСИ, 80'С; б) ВгС1, Ру, -10'С; в) 1МС12, АсО№, АсОН 95%, 80'С; г) СС13СМ, БВ1Г, СН2С12,4°С; д) Е151Г, ТМЭСШ; МЭ 4А, СН2С12.

При попытке гликозилирования донором 48 производного глюкозамина 36 наблюдалась только деструкция донора, а акцептор 36 выделялся в неизменном виде. Поэтому трихлорацетимидат 48 взаимодействием с этантиолом в присутствии триметилсилилтрифлата (ТМБОТ!) был превращен в тиогликозид 49 (выход количественный). Последующее гликозилирование глюкозаминовых

акцепторов 36 и 39 тиогликозидом 49 в присутствии N15, ТЮН и молекулярных сит А\У300 приводило к трисахаридам 11 и 12 с выходами 52 и 60% соответственно (схема 11).

COOCHj BzO --OBz COOCHj BzO --OBz 0R

38 ИЛИ 39 + ВДс1

11 R-Bn

12 R = PMP

Схема 11. Реагенты и условия: а) N15, ТЮН, МБ А\У300, СН2С12, -23'С-*10"С.

Получение сульфатированных трисахаридов 51 и 53: Для введения сульфатной группы, единственную ацетильную группу в остатке глюкуроновой кислоты в трисахариде 11 удаляли действием НС1 в метаноле. Полученное моногидроксильное производное 50 (схема 12) сульфатировали комплексом БОз'Ру с образованием моносульфата 51 с выходом 86%.

Схема 12. Реагенты и условия: а) 6% HCl, МеОН, 4'С; б) S03'Py, ДМФА, 20"С; в) (NH4)2Ce(N02)6,90% водный CH3CN, О'С.

Для получения дисульфатированного трисахарида 53 в исходном соединении 12 сначала удаляли п-метоксифенильную группу в остатке глюкозамина, а затем кислотным метанолизом высвобождали гидроксильную группу в положении 3 остатка уроновой кислоты. Далее диол 52 обрабатывали S03'Py и получали дисульфатированное производное 53 с выходом 81% (схема 12).

И

Получение трисахаридных производных 2 и 3: В сульфатированных трисахаридах 51 и 53 было необходимо восстановить азидную группу в агликоне и удалить бензильные и ацильные защитные группы. Попытки одновременного восстановления азидной группы и удаления бензильных защит каталитическим гидрогенолизом над палладиевым катализатором не привели к успеху, вероятно, из-за отравления катализатора образующимся свободным амином. Поэтому восстановление азидной группы и удаление бензильных групп проводили в два этапа (схема 13). На первом из них после восстановления азидогруппы в трисахаридах 51 и 53 образующийся амин превращали в трифторацетамид обработкой этилтрифторацетатом. Далее 14-защищенные продукты подвергали дальнейшему гидрогенолизу. В случае дисульфатированного производного гидрогенолиз единственной бензильной группы протекал без осложнений и гладко приводил к дебензилированному продукту 55. Однако в случае моносульфатированного трисахарида гидрогейолиз сопровождался значительным десульфатированием, что приводило к существенному снижению выхода производного 54. Мы обнаружили, что проведение дебензилирования в присутствии каталитического количества ацетата натрия хотя и замедляет реакцию, но практически полностью подавляет реакцию десульфатирования, что позволяет получить диол 54 с приемлемым выходом.

91 53

а, б а, г

54 ^ =. во^а, ^ = Н 55 к1« кг = 80зма

0 И

Схема 13. Реагенты и условия: а) Н2, РсЮ/С, МеОН-АсОН, 2ч; затем СРзСОСЮ, Е13М, МеОН; б) Н2, РсЮ/С, МеОН, АсОКа (кат), 72ч; в) ШН в водном ТГФ, -10'С; затем КаОН в водном МеОН; г) Н2, РсЮ/С, МеОН.

В полученных производных 54 и 55 в условиях мягкого щелочного гидролиза сначала омыляли сложноэфирную группу уроновой кислоты, а затем удаляли бензоильные и М-трифторацетильную группы в более жестких щелочных условиях. В результате были получены 2-аминоэтилгликозиды 2 и 3 с выходом 72 и 83% соответственно.

Получение тетрасахарида 4: Для введения в трисахарид 12 остатка а-Ь-фукозы необходимо было освободить гидроксильную группу при С-3 в остатке глюкозамина. С этой целью соединение 12 подвергали каталитическому гидрированию в присутствии Рс10/С, образующийся амин трифторацетилировали и повторным гидрированием удаляли единственную бензильную группу (схема 14). Гликозилирование полученного таким образом акцептора 56 этилтиофукозидом 57 в присутствии N18 и ТГОН приводило к тетрасахариду 58 с выходом 52%.

Схема 14. Реагенты и условия: а) Н2, РсЮ/С, МеОН-АсОН, 2ч; затем СРзСОСЖ, Н13К, МеОН; б) Н2> РсЮ/С, МеОН; в) МБ, ТЮН, МБ 4А, СН2С12.

Удаление п-метоксифенильной и бензильной групп в О-

сульфатированных соединениях может осложняться конкурентным

десульфатированием (см. выше), поэтому в проведенном синтезе тетрасахарида

4 удаление этих групп проводилось перед сульфатированием (схема 15). Так

гидрогенолиз тетрасахарида 58 и последующая обработка

церийаммонийнитратом гладко приводят к диолу 59, который далее

бензоилировали с образованием соединения 60. Селективным удалением

13

12

единственной ацетильной группы в положении 3 остатка уроновой кислоты было получено моногидроксильное производное 61, взаимодействие которого БОз'Ру приводило к сульфату 62.

Сульфатированный тетрасахарид 62 содержит только ацильные О- и Ы-защитные группы, которые без осложнений были удалены двухстадийным щелочным гидролизом (см. получение трисахаридов 2 и 3), в результате чего целевой тетрасахарид 4 был получен с выходом 92%.

Схема 15. Реагенты и условия: а) Н2, PdO/C, МеОН; б) (NU4)2Ce(N02)6, 90% водный CH3CN, О'С; в) BzCl, Ру, -Ю'С; г) 6% HCl, МеОН, 4'С; д) S03'Py, ДМФА-Ру 3:1,20'С, 42ч; е) LiOH в водном ТГФ, затем NaOH в водном МеОН.

Синтез миметика 5 антигенного трисахарида 2 и его аналогов 6 и 7:

Заключительная часть работы посвящена синтезу дисульфатированного

миметика трисахаридной последовательности 2, в котором сульфогруппа при

0-6 глюкозного остатка имитирует карбоксильную группу глюкуроновой

кислоты, а также двух моносульфатированных аналогов 5 — соединений 6 и 7.

Эти производные необходимы для выяснения роли анионных групп в

положениях 3 и 6 уроновой кислоты в процессах биологического

распознавания антигенов HNK-1.

Для синтеза указанных соединений необходимо было располагать

глюкозил-донорами, содержащими временные защитные группы при 0-3 и 0-6.

14

Как и ранее, в качестве временных защитных групп мы использовали ацетильные группы, а в кач'естве постоянных - бензоильные. Синтез 2,4-ди-О-бензоилированных производных глюкопиранозы из предшественников с 4С1 конформацией пиранозного цикла является нетривиальной задачей, тогда как при использовании левоглюкозана 63 с инвертированной конформацией цикла возможно достаточно эффективное проведение одностадийного 2,4-дибензоилирования с образованием дибензоата 64 (схема 16).

ОВг 0В2 ОН ОН

68 69

Схема 16. Реагенты и условия: а) В2С1, Ру, 4°С; б) Ас20, Ру, 4°С; в) Ас20, Н2804(кат), 4'С; г) 1\2Н4'НОАс, ДМФА; д) СС13СМ, ОВи, СН2С12, е) 33% НВг в АсОН, Ас20, СН2С12.

Ацетилированием дибензоата 64 был получен ацетат 65, последующий ацетолиз которого количественно приводит к 1,3,6-триацетату 66. Взаимодействием последнего с НВг в АсОН с количественным выходом получали глюкозилбромид 68. Для получения трихлорацетимидата 69 соединение 66 сначала избирательно дезацетилировали действием ацетата гидразина с образованием полуацеталя 67 с выходом 88%. Взаимодействием последнего с ССЬСЫ в присутствии БВи с выходом 81% получали трихлорацетимидат 69.

Сборка трисахарида по схеме [1+2] с использованием общего для двух групп олигосахаридов лактозаминового блока 42 (схема 7) не дала положительных результатов; глюкозилирование дисахарида 42 донорами 68 или 69 приводило к образованию лишь следовых количеств целевого трисахарида.

Альтернативная схема с [2+1] - сборкой цепи предполагает на первом этапе синтез глюкозилгалактозного блока. При оптимизации условий гликозилирования было найдено, что наилучший результат (схема 17) достигается при взаимодействии аллилгалактозида 33 с трихлорацетимидатом 69. Дисахаридный блок 70 в этом случае был получен с выходом 48%.

Схема 17. Реагенты и условия: а) ВРз'ЕЪО, МЭ А'ТООО, толуол, 0°С->10°С.

Полученный аллилгликозид 70 был далее превращен в дисахаридный донор. По аналогии с дисахаридным глюкуронилгалактозным блоком 44

I

соединение 70 было превращено в этилтиогликозид 85, как показано на схеме 18.

б I- 81 К-ОАЩОоК'.Н

1—1■•821?-ОА111|?1=[«г"Вг -1 в

г I-83 я ■ он, к' = яг!=вг •*—'

'—" 84 Я = ОС(МН) СС1>, й1■ Иг =Вг-,

85 Я а вЕ^ К1 в еВг --1

Схема 18. Реагенты и условия: а) п-толуолсульфонат пиридиния, 90% водный СНзСМ, 80°С; б) ВгС1, Ру, -10*С; в) РсГСЬ, АсОХа, 95% АсОН, 80'С; г) СС13СК, БВи, СН2С12, 4°С; д) Е1вН, ТМвСЛТ, МЭ 4А, СН2С12.

Далее нами был получен трисахарид 14 (выход 50%) гликозилированием глюкозаминового акцептора 36 донором 85 в условиях, аналогичных условиям получения трисахарида 11 с глюкуронильным фрагментом в терминальном положении - активацией N18 в присутствии ТЮН и молекулярных сит AW300.

Схема 19. Реагенты и условия: а) Ш, ТГОН, МЭ АШЗОО, СН2С12, -23°С^10°С.

Фуикционалнзацня трисахарида 14: 3,6-Диол 13 был получен с выходом 81% действием раствора НС1 в метаноле на 3,6-диацетат 14. Производное 13 служило исходным соединением в синтезе трех сульфатированных трисахаридов - 3,6-дисульфата 5,3-сульфата 6 и 6-сульфата 7 (схема 20).

-.ОЭОаИа

6

-*" ИаОдБО -^-ОБид

СВ2

86

Схема 20. Реагенты и условия: а) 6% НС1, МеОН, 4°С; б) Б03Ру (10 экв.), ДМФА, 20"С; в) ВгСК, EtзN, 20'С; г) БОуРу (3 экв.), Ру, 4°С.

Дисульфат 86 был получен с выходом 86% действием большого избытка (10 экв.) сульфатирующего реагента на диол 13 (схема 20). Для получения 6-0-сульфатированного производного 88 диол 13 избирательно сульфатировали при пониженной температуре, используя 3 экв. БОз'Ру. Выход моносульфа 88 составил 80%.

Для получения З-О-сульфатированного производного 87 необходимо было предварительно защитить в диоле 13 более реакционноспособную первичную шдроксильную группу. Для этого диол 13 обрабатывали 1.2 экв. мягкого бензоилирующего реагента ВгСЫ в присутствии Е13Ы при комнатной

температуре. Из-за близких значений Кг продуктов реакции бензоилирования было решено провести дальнейшее сульфатирование реакционной смеси без выделения индивидуальных продуктов (схема 20). Необходимый 3-0-сульфатированный трисахарид 87 был выделен хроматографически с общим выходом на 45% две стадии.

Дальнейшее превращение защищенных производных 86-88 в свободные сульфатированные трисахариды 5-7 проводилось по схеме, аналогичной использовавшейся для получения глюкуронильных трисахаридов 2 и 3.

Азидную группу в соединениях 86-88 восстанавливали каталитическим гидрированием до аминогруппы, которую временно защищали М-трифторацетилированием (схема 21). Соответствующие трифторацетамиды были выделены с выходами 62-83%. Последующее удаление бензильных групп с помощью гидрогенолиза сопровождалось частичным десульфатированием, особенно заметным в случае получения моносульфатов 90 и 91. Оптимизация условий' реакций для каждого субстрата позволила получить продукты дебензилирования 89-91 с выходами 44-83%. На заключительной стадии с помощью щелочной обработки удалялись бензоильные и №трифторацетильная группы, а целевые сульфатированные трисахариды 5-7 далее выделялись гель-хроматографией на Сефадексе 0-15.

86 И1 ■ К2' ВОзЫг 87 ^ = Вг, БОзМа 88 ^ = вОзИа, Я2 = Н

89 р'. = БОз^а 90 И1 ■ Вг, Яг = БОзМа 91 Я1» $05Иа, = Н

и в га

Схема 21. Реагенты и условия: а) Н2, Ра(ОН)2/С, МеОН, АсОН (кат); затем СР3СООЕ1, Е13Н МеОН; б) Н2, РсЮ/С, МеОН, АсОН (кат); в) 1М МеОКа, МеОН; 1М NaOH, Н20.

Строение сульфатированных олигосахаридов 2-7 было подтверждено данными 'Н- и 13С-ЯМР спектроскопии. Отнесение сигналов в спектрах !Н- и ,3С-ЯМР проводилось с помощью двумерной гомо- и гетероядерной коррелляционной спектроскопии COSY, TOCSY, ROESY и HSQC. В частности, конфигурации аномерных центров доказывались значениями КССВ Ji2 соответствующих моносахаридных остатков в спектрах 'Н-ЯМР. Гликозилирование 0-3 в остатках галактозы и 0-4 в остатках глюкозамина подтверждалось слабопольными химическими сдвигами сигналов соответствующих атомов углерода в спектрах 13С-ЯМР. Слабопольные химические сдвиги сигналов протонов и атомов углерода в спектрах !Н- и 13С-ЯМР в положениях, несущих сульфатные группы, однозначно подтверждали локализацию последних в соединениях 2-7.

ВЫВОДЫ

1. Синтезирован 2-аминоэтилгликозид антигенного трисахарида HNK-1 и его производные, содержащие 6-0-сульфо или З-О-а-Ь-фукозильный заместитель в остатке GlcNAc.

2. Синтезирован миметик природных антигенных олигосахаридов HNK-1, содержащий 3,6-О-дисульфоглюкозу вместо 3-0-сульфатированной глюкуроновой кислоты, а также соответствующие ему моносульфатированные производные - целевые соединения получены в виде 2-аминоэтилгликозидов.

3. В ходе получения целевых соединений исследованы различные пути синтеза трисахаридных последовательностей GlcAp-(l->3)-Gaip-(l-»4)-GlcNAc(3 и Glcp-(l-»3)-Galp-(l->4)-GlcNAcP и показано, что наиболее эффективным является синтез по схеме [2+1].

4. Найдены условия гидрогенолиза бензильных групп в сульфатированных олигосахаридах, позволяющие минимизировать побочную реакцию десульфатирования.

Основные результаты работы изложены в следующих публикациях:

1. A.V. Kornilov, E.V. Sukhova, N.E. Nifantiev, Preparative route to glucuronyl donors bearing temporary protecting group at 0-3 via 6,3-lactonisation by Bz20 or Piv20. Carbohydr. Res., 2001, 336, 309-313.

2. A.A. Sherman, O.N. Yudina, Y.V. Mironov, E.V. Sukhova, A.S. Shashkov, V.M. Menshov, N.E. Nifantiev, Study of glycosylation with iV-trichloroacetyl-D-glucosamin derivatives in the syntheses of the spacer-armed pentasaccharides sialyl lacto-N-neotetraose and lacto-N-tetraose, their fragments, and analogues. Carbohydr. Res., 2001,336,13-46.

3. E.B. Сухова, A.B. Дубровский, Ю.Е. Цветков, Н.Э. Нифантьев, Синтез олигосахаридов, родственных антигену HNK-1. Сообщение 5. Синтез сульфомиметика антигенного трисахарида HNK-1. Изв. АН. Сер. хим., 20t>7, 1593-1607.

4. Pervushina E.V., Kornilov A.V., Nifantiev N.E. «Improved preparation of selectively З'-O-protected GlcA and GlcA(pi-3) glycosyl donor for the synthesis of carbohydrate chains of HNK-1 antigens», Proceedings of the 20th International Carbohydrate Symposium.- Hamburg. 2000. B306.

5. Сухова E.B., Дубровский A.B., Цветков Ю.Е., Нифантьев Н.Э., Синтез HNK-1 антигенного трисахарида и его сульфо-миметиков. XVIII Менделеевский съезд по общей и прикладной химии, Москва, 23-28 сентября 2007г. 2007,1,451:

Подписано в печать 13.11.2008 г.

Печать трафаретная

Заказ № 1172 Тираж: 150 экз.

Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 wvw.autoreferat.ru

ВВЕДЕНИЕ

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Реакционная способность гидроксильной группы при С-4 N-ацетилглюкозамина.

1.2 Стерические и электронные эффекты заместителей в гликозил-акцепторе

1.3 Гликозилирование диолов

1.4 Образования водородных связей между амидной NH-группой и гидроксильной группы при С-4 глюкозаминового остатка

1.5 Повышение нуклеофильных свойств гидроксильной группы при С-4 путем предотвращения образования внутримолекулярной водородной связи с NH-группой

1.6. Нуклеофильные свойства атома кислорода и азота ацетамидной группы

1.7 Побочные продукты в реакциях гликозилирования N-ацетил-глюкозамина

2.2 Ретросинтетический анализ целевых структур

2.3 Синтез олигосахаридов 5-7

2.3.1 Синтез моносахаридных блоков GlcA, GlcNAc и Gal

2.3.1.1 Синтез доноров на основе глюкуроновой кислоты

2.3.1.2 Получение селективно защищенных 2-азидоэтилгликазидов N-ацетил-О- глюкозамина

2.3.1.3 Синтез галактозного блока - соединения 47 и 48

2.3.2 Синтез трисахаридов 14 и 15 по схеме [1+2]

2.3.2.1 Получение лактозаминового блока Gaip-(1—>4)-GlcNAcP-OC2H4N3

2.3.2.2 Результаты гликозилирования лактозаминового акцептора 51 различными глюкуронил-донорами

2.3.3 Синтез трисахаридов 14 и15 по схеме [2+1]

5 7 7 8

13 17

25 ; 27

40

41 43 43 45 48 48 48

50

52

53

53

54

55

Cks

2.3.3.1 Получение дисахарида 01сАр-(1->3)-0а1р 55

2.3.3.2 Трансформация аллильного дисахарида в гликозил-донор 58

2.3.3.3 Препаративный синтез трисахаридов 14 и 15 59

2.3.3.4 Введение сульфогрупп в трисахариды 14 и 15 61

2.3.3.5 Получение трисахаридных производных 5 и 6 61

2.3.3.6 Получение тетрасахарида 7 63 2.4 Синтез миметика 8 антигенного трисахарида 5 и его аналогов 9,10 66

2.4.1 Синтез глюкозного блока 66

2.4.2 Попытка синтеза трисахарида 17 по схеме [1+2] 69

2.4.3 Попытка синтеза трисахарида 17 по схеме [2+1] 71

2.4.3.1 Оптимизация условий получения дисахаридного блока 01ср-(1->3)-0аф 71

2.4.3.2 Трансформация аллильного дисахарида 99 в гликозил-донор и синтез трисахаридной структуры 17 74

2.4.3.3 Функционализация трисахарида 17 75 2.4.3.4 Получение трисахаридных производных 8, 9 и 10 78 ВЫВОДЫ 81 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 82 ПРИЛОЖЕНИЕ 114 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 128

Список используемых сокращений

Ас - ацетил АН - аллил Вп - бензил Bz - бензоил С1Ас - хлорацетил

CSA - (±)-камфор-10-сульфоновая кислота DBU - 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен DIEA - диизопропилэтилами DMAP - 4-диметиламинопиридин DMF - Ы,К-диметилформамид DMSO - диметилсульфоксид

DMTST - диметил(метилтио)сульфоний трифторметансульфонат

DTBMP - 2,6-дитретбутил-4-метилпиридин

Fmoc - 9-флуоренилметоксикарбонил

Gal - галактоза

Glc - глюкоза

GlcA - глюкуроновая кислота GlcNAc — N-ацетилглюкозамин

HNK-1 - Название антител, распознающих углеводный эпитоп на натуральных киллерах человека (human natural killer cells, HNK) ImH - имидазол

Lev - левулиноил (CH3C(0)CH2CH2C(0)-)

MS - молекулярные сита

NIS - N-иодсукцинимид

Ph - фенил

Phth - фталоил

PMB - п-метоксибензил

PMP - п-метоксифенил

PPTS - пиридиний п-толуолсульфонат

Py - пиридин

Sug - остаток moho- или олигосахарида

TBDMS - трет-бутилдиметилсилил

TBDPS - трет-бутилдифенилсилил

TCP - тетрахлорфталоил

TDS - тексилдиметилсилил

TES - триэтилсили

Tf- трифторметилсульфонил

TFA - трифторуксусная кислота

THF - тетрагидрофуран

TMS - триметилсилил

TMU - тетраметилмочевина

TsOH - п-толуолсульфоновая кислота

ТСХ - тонкослойная хроматография

ВВЕДЕНИЕ

Биомолекулы, несущие углеводные цепи, - гликолипиды и гликопротеины -определяют адгезию нервных клеток, играют важную роль в процессах роста и развития нервных тканей и передачи нервного импульса. Углеводные структуры опосредуют многие процессы межклеточного распознавания и, следовательно, играют важную роль в формировании сложных молекулярных событий на клеточной поверхности и во внеклеточном матриксе.

Большое структурное разнообразие углеводных цепей допускает огромные комбинаторные возможности, которые могут лежать в основе тонкой «настройки» межклеточных и клеточно-матриксных взаимодействий. Особое место среди углеводных структур занимают олигосахариды, распознаваемые антителами HNK-1. Эти олигосахариды относятся к так называемым углеводным антигенам HNK-1, получившим свое название от антител против поверхностных антигенов лимфоцитов человека - натуральных киллеров. Общим структурным элементом олигосахаридных цепей, распознающихся антителами HNK-1, является трисахаридная последовательность ~S03-3GlcA(3-( 1 —>3)-Gal(3-( 1 —>4)GlcNAc.

Содержание таких углеводов на клеточных поверхностях очень мало, что делает их доступность из природных источников весьма ограниченной. Поэтому синтетические олигосахариды этой группы являются незаменимыми инструментами при изучении роли углеводных структур в природных процессах. Поскольку для медико-биологических исследований наиболее полезны не только сами олигосахариды, но и их моно- и поливалентные конъюгаты, то особенно актуально получение олигосахаридов, несущих функционализированную спейсерную группу, с помощью которой возможно ковалентное связывание углеводов с метками или носителями. Необходимость исследования роли отдельных элементов структуры олигосахарида S03-3GlcA(3-(I-^3)-GaI(3-(1—>4)GlcNAc в биологических процессах делают актуальным разработку эффективного метода стерео- и регионаправленного синтеза не только самой трисахаридной последовательности, но и родственных ей структур, в частности, миметиков, где остаток глюкуроновой кислоты заменен остатком глюкозы, несущим при 0-6 сульфогруппу, мимикрирующую карбоксильную группу в остатке глюкуроновой кислоты.

В соответствии с особенностями строения природных олигосахаридов основными синтетическими задачами, требующими решения в представленной диссертационной работе, являются стерео- и регионаправленное создание гликозидной связи между остатками глюкуроновой кислоты и галактозы, а затем дальнейшее наращивание углеводной цепи, разработка метода получения селективно защищенных моногидроксильных олигосахаридов для сульфатирования, а также получение спейсерированных форм олигосахаридов для получения на их основе неогликоконъюгатов.

Работа выполнена в лаборатории химии гликоконъюгатов № 52 Института органической химии им. Н.Д. Зелинского РАН. Диссертация состоит из трех основных частей - литературного обзора, обсуждения результатов и экспериментальной части, а также списка цитированной литературы. Соединения, схемы и таблицы в литературном обзоре и в обсуждении результатов шифруются независимо.

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Особенности гликозилирования гидроксильной группы при С-4 глюкозамина

Глюкозамин, как правило, в виде его К-ацетилированного производного, является одним из наиболее широко распространенных природных моносахаридов. Он входит в состав углеводных цепей большинства гликопротеинов, гликолипидов, протеогликанов, многих бактериальных полисахаридов и других природных углеводсодержащих биополимеров. Поэтому не удивительно, что синтезу олигосахаридов, включающих остатки 1Ч-ацетилглюкозамина, посвящена значительная часть огромного массива публикаций по олигосахаридному синтезу.

Фрагмент 81Щ-(1—>4)-01сМАс, где представлен остатками галактозы [1, 2,], [3], мапнозы [4], глюкуроновой и идуроновой кислот [5] и другими, входит в число наиболее распространенных элементов углеводных цепей перечисленных выше гликоконъюгатов.

Рассмотрению сложностей, связанных с гликозилированием гидроксильной группы при С-4 в производных глюкозамина, прежде всего Т\Г-ацетилированных, и попыток объяснения часто наблюдаемой низкой реакционной способности глюкозаминовых акцепторов и посвящен настоящий литературный обзор.

выводы

1. Синтезирован 2-аминоэтилгликозид антигенного трисахарида НЫК-1 и его производные, содержащие 6-О-сульфо или З-О-а-Ь-фукозильный заместитель в остатке С1сЫАс.

2. Синтезирован миметик природных антигенных олигосахаридов НЫК-1, содержащий 3,6-О-дисульфоглюкозу вместо З-О-сульфатированной глюкуроновой кислоты, а также соответствующие ему моносульфатированные производные - целевые соединения получены в виде 2-аминоэтилгликозидов.

3. В ходе получения целевых соединений исследованы различные пути синтеза трисахаридных последовательностей 01сАр-(1->3)-0а1р-(1—»4)-О1сКАср и С1ср-(1->3)-Оа1р-(1—»4)-С1сКАсР и показано, что наиболее эффективным является синтез по схеме [2+1].

4. Найдены условия гидрогенолиза бензильных групп в сульфатированных олигосахаридах, позволяющие минимизировать побочную реакцию десульфатирования.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Для всех опытов использовали свежеперегнанные в атмосфере аргона растворители. Дихлорметан промывали концентрированной серной кислотой, затем водой, перегоняли над К2СОз, далее над Р205 и затем над СаН2. Толуол перегоняли над натрием. Метанол абсолютизировали кипячением в течение 2 часов над метилатом магния и последующей перегонкой с дефлегматором в атмосфере сухого аргона, и хранили над MS ЗА (Fluka). DMF перегоняли в вакууме последовательно над нингидрином и гидридом кальция и хранили над MS 13Х (Fluka). Абсолютную уксусную кислоту перегоняли после кипячения в течение 2 ч над перманганатом калия. Пиридин перегоняли над Р205. Методики очистки других растворителей и реагентов аналогичны приведённым в работе [92].

Тонкослойную хроматографию проводили на пластинках с силикагелем Kieselgel 60 F254 (Merck), вещества обнаруживали опрыскиванием 10%-ным (v/v) раствором 85% ортофосфорной кислоты в этаноле с последующим нагреванием при t = 150°С. Колоночную хроматографию защищенных соединений выполняли иа силикагеле 63/200 мкм Kieselgel 60 (Fluka). Ионообменную хроматографию проводили на анионите DEAE-Sephadex А25 (Pharmacia Fine Chemicals) на колонке размером 20x3 см при градиентном элюировании от воды к 20% (v/v) уксусной кислоте при скорости потока элюента 3 мл/мин. Гель-хроматографию проводили на колонке (2 х 100 cm) Sephadex G-15 при элюировании водой со скоростью потока 2 мл/мии.

Оптическое вращение растворов полученных соединений измеряли в хлороформе (с 1, если не указано особо) на цифровом поляриметре JASKO DIP-360 (Япония) при 26-30°С. Спектры 'Н-ЯМР защищенных олигосахаридов зарегистрированы на приборах Bruker WM-250, АМ-300 и DRX-500 в дейтерохлороформе при температуре 303 К. Спектры и 13С-ЯМР незащищенных олигосахаридов зарегистрированы в D20 на приборе Bruker DRX-500 с

1 13 использованием ацетона ( Н 5 2.225 м.д.; С 5 31.45 м.д.) в качестве стандарта.

Отнесение сигналов в одномерных спектрах 'Н-ЯМР полученных олигосахаридов проводили с использованием двумерных спектров 'Н-'Н COSY и TOCSY. Отнесение сигналов в одномерных спектрах 13С-ЯМР проводили с использованием двумерных спектров 'i-I-^C HSQC. Данные ЯМР-спектров для протонов и атомов углерода пиранозных циклов приведены в Приложении в таблицах 1 и 2 для моно-и дисахаридов и в таблицах 3 и 4 для три- и тетрасахаридов. Масс-спектры MALDI-TOF были получены на спектрометре VISION 2000. Метил(аллил-3-0-ацетил-2,4-0-бензоил-Р-0-глюкопиранозид)уронат (31). — Раствор 320 мг (1.37 ммоль) аллилглюкуронозида 28 в 15 мл DMF и 6.19 г (27.7 ммоль) Bz20 нагревали при 85°С в течение 7 ч, охлаждали до комнатной температуры и прибавляли 5 мл пиридина и 84 мг (0.69 ммоль) DMAP. Реакционную смесь выдерживали 14 ч при 35°С, разбавили 20 мл этилацетата и промыли 20 мл 1М H2SO4, водой, насыщенным раствором №НСОз (2x40 мл) и водой. Экстракт фильтровали через слой ваты, концентрировали, сушили, а затем растворяли в 2 мл абс. метанола, прибавляли 10 мг (0.15 ммоль) безводного ацетата натрия и выдерживали 20 ч при 20°С. К реакционной смеси прибавляли 2 мл катионита КУ-2 (Н -форма) и выдерживали 30 мин. Катионит отфильтровывали, промывали 20 мл метанола, фильтрат упаривали и хроматографией остатка (этилацетат-петролейный эфир, 1:2) выделяли соединение 30 (381 мг), которое ацетилировали 2 мл Ас20 в 2 мл Ру при 20°С в течении 24 ч. Раствор упаривали с 40 мл толуола, высушивали, хроматографией остатка (этилацетат-петролейный эфир, 1:2) и последующей кристаллизацией выделили 415 мг продукта 31 (61%) в виде игл: т. пл. 176-177°С (этилацетат-петролейный эфир, 1:2); [a]D -3° (с 1; СНС13); R/0.3 (этилацетат-петролейный эфир, 1:2). Спектр 'Н-ЯМР (CDC13): 5 5.78 (м, 1 Н, ОСН2С#=СН2), 5.29-5.01 (м, 2 Н, ОСН2СН=С#2), 4.45-4.33 и 4.20-4.05 (м, 2 Н, ОС#2СН=СН2)Найдено (%): С, 62.59; Н, 4.98. С26Н26О10. Вычислено (%): С, 62.65; Н, 5.26.

Метил(3-0-ацетил-2,4-0-бензоил-а-О-глюкопиранозил)уронат] трихлороацетимидат (33). - К раствору аллилгликозида 31 (207 мг, 0.42 ммоль) в 10 мл абс. МеОН добавляли 25.8 мг (0.15 ммоль) хлорида палладия. Реакционную смесь выдержали 2 ч, фильтровали через слой целита и упаривали. Сухой остаток растворяли в ЕЮ Ас (20 мл) и промывали раствором NaHC03 (50 мл), органическую фазу фильтровали через слой ваты, концентрировали, остаток фильтровали через слой силикагеля и выделяли полуацеталь 32 (135 мг, аморфный). К раствору 32 в 2 мл абс. СН2С12 в атмосфере сухого аргона при -5°С прибавили 259 мкл (2.59 ммоль) трихлрацетонитрила и 200 мг (1.43 ммоль) К2С03. В течении 2 ч реакционную смесь нагревали до 20°С и хроматографией в системе этилацетат-петролейный эфир (1:3) с добавлением 1% триэтиламина выделяли трихлорацетимидат 33. Выход 151 мг (58%), аморфный, [a]D +61° (с 0.5, СНС13). Спектр 'Н-ЯМР (CDC13): 5 8.70 (с, 1Н, NЯ), 1.90 (с, ЗН, СОСН3). Этил-1-тио-р-Б-глюкопиранозидуроновая кислота (34). - К раствору метил[этил-2,3,4-три-0-ацетил-1-тио-р-0-глюкопиранозид)уропата (620 мг, 1.65 ммоль) в 16.5 мл смеси THF-H20 (10:1) при -10°С прибавляли 5 мл 2 М LiOH, смесь выдерживали 5 ч при постепенном повышении температуры до комнатной. К реакционной смеси прибавляли 4 мл катионита КУ-2 (Н+-форма) и 10 мл МеОН. Через 30 мин. катионит отфильтровали, промывали 20 мл МеОН, фильтрат упаривали. Ионообменной хроматографией и последующей лиофилизацией выделяли продукт 34. Выход 370 мг (94%), аморфный [a]D -35°, (с 1 СН3ОН). Спектр 'Ы-ЯМР (CD3OD): 5 2.65 (м, SC#2CH3), 1.25 (т, SCH2C#5 ). Найдено (%): С, 40.39; II, 5.96. C8H1406S. Вычислено (%): С, 40.33; Н, 5.92.

Метил(этил-2,4-ди-0-бензоил-1-тио-Р-Б-глюкопиранозид)уронат (35). - Раствор 65 мг (0.27 ммоль) тиоэтилглюкоуроната 34 и 1.53 г (6.83 ммоль) Bz20 в 5 мл DMF нагревали при 85°С в течение 3 ч, охлаждали до комнатной температуры и прибавляли 3 мл пиридина и 17 мг (0.34 ммоль) DMAP. Реакционную смесь выдерживали 36 ч при 35°С, разбавляли 20 мл этилацетата и промывали 20 мл 1 М H2S04, водой, насыщенным раствором NaHC03 (2x40 мл) и водой. Экстракт фильтровали через слой ваты, концентрировали, сушили, а затем растворяли в 2 мл абс. метанола, прибавляли 10 мг (0.15 ммоль) безводного ацетата натрия и выдерживали 12 ч при 20°С. К реакционной смеси прибавляли 2 мл катионита КУ-2 (Н*), через 30 мин. катионит отфильтровывали, промывали 20 мл метанола, фильтрат упаривали и хроматографией остатка (этилацетат-петролейный эфир, 1:2), а затем кристаллизацией выделяли соединение 35. Выход 381 мг (64%), иглы, т. пл.164-166°С, [a]D -11°, (с 1, СНС13). Спектр 'Н-ЯМР (CDC13): 5 3.66 (с, ЗН, С02С#5), 2.75 (м, SC#2CH3), 1.23 (т, SCH2C#j). MALDI-TOF-MS: Расчитанно для [М + Na]+: 483.5. Найдено: 483.1. Найдено (%): С, 59.99; Н, 5.25; S, 6.96. C23H2408S. Вычислено (%): С, 59.92; Н, 5.27; S, 6.80.

Метил(этил-3-0-ацетил-2,4-0-бензоил-1-тио-р-В-глюкопиранозид)уронат (36).

- Тиогликозид 35 (60 мг, 0.13 ммоль) ацетилировали в смеси Ру (2мл) и Ас20 (2мл) при 20°С в течении 24 ч. Реакционную смесь упаривали с 40 мл толуола, высушивали, хроматографией остатка (этилацетат-петролейный эфир, 1:2) и последующей кристаллизацией выделили 3-ацетат 36. Выход 63 мг (94%), иглы, т. пл. 207-209°С, [a]D -9°, (с 0.6, СНС13). Спектр 'Н-ЯМР (CDC13): 5 3.70 (с, ЗН, С02СЯ5), 2.78 (м, SC#2CH3), 1.25 (т, SCH2C#5 ). MALDI-TOF-MS: Расчитанно для [М + Na]+: 525.5. Найдено: 524.9. Найдено (%): С, 59.82; Н, 5.21. C25H2609S. Вычислено (%):С, 59.75; Н, 5.21.

2-Хлорэтил-2-ацетамидо-3,4,6-три-0-ацетил-2-дезокси-Р-0-глюкопиранозид

38). - Суспензию 5.0 г (13.70 ммоль) хлорида 37 и 6.93 г (27.43 ммоль) Hg(CN)2 в 14 мл 2-хлорэтанола нагревали при 60°С до полного растворения промотора (3 час.). Реакционную смесь упаривали, остаток растворяли в хлороформе (100 мл). Выпавшие соли ртути отфильтровывали через слой целита, фильтрат последовательно промывали 1 М раствором КВг (80 мл), насыщенным раствором NaHC03 (80 мл), водой (80 мл), органический слой фильтровали через слой ваты и упаривали. Остаток перекристаллизовывали из 2-пропанола и получили гликозид 43. Выход 4.136 г (73%), белые кристаллы, т. пл. 143°С, [a]D -16° (с 0.5 МеОН), Rf 0.28 (толуол-ацетон 7:4). Спектр 'Н-ЯМР: 5 5.77 (д, 1Н, NiTAc, J2,nhac=8.7 Гц), 4.193.60 (м, 4Н, ОСН2СН2С1), 2.11-1.92 (4с, 12Н, 4 СН3С(0)). Спектр 13С-ЯМР: 8 69.7 (ОСН2СН2С1), 42.9 (ОСН2СН2С1), 23.4 (CH3C(0)N), 20.7-20.8 (3 сигнала, ЗСН3С(0)0). Найдено (%): С, 46.76; Н, 5.72; N, 3.68. C,6H24C1N09. Вычислено (%): С, 46.89; Н, 5.90; N,3.42.

2-Азидоэтил-2-ацетамидо-3,4,6-три-0-ацетил-2-дезокси-Р-В-глюкопиранозид

39). - 4.1 г (10.00 ммоль) хлорэтилгликозида 38 растворяли в 65 мл абс. DMF, добавляли 13.2 г (0.20 ммоль) NaN3 и 264 мг (1.00 ммоль) 18-краун-6. Перемешивали при 70°С в течение 36 часов. Реакционную смесь разбавляли ЕЮАс

200 мл) и промывали водой (3x200 мл), органический слой фильтровали через слой ваты и упаривали. Сушили в вакууме масляного насоса, кристаллизацией (изопропиловый спирт, 100 мл) выделили азидоэтильное производное 39. Выход 3.70 г (89%), белые кристаллы, т.пл. 149°С, [ct]D -30° (СНС13), Rf 0.29 (толуол-ацетон 7:4). Спектр 'Н-ЯМР: 5 5.60 (д, 1Н, N#Ac, J2,nhac=8.6 Гц), 4.08-3.64 (м, 2Н, OC#2CH2N3), 3.51-3.22 (м, 2Н, ОСНзСН^з), 2.08-1.92 (4 с, 12Н, 4 СН3С(0)). Спектр 13С-ЯМР: 5 68.4 (OCH2CH2N3), 50.6 (OCH2CH2N3), 23.4 (CH3C(0)N), 20.820.6 (3 сигнала, 3 СН3С(0)0). Найдено (%): С, 45.87; Н, 5.65; N, 13.68. С16Н24^09. Вычислено (%): С, 46.15; Н, 5.81; N, 13.46.

2-Азидоэтил-2-ацетамидо-4,6-СМ5ензилиден-2-дезокси-Р-0-глюкопиранозид (40). - К раствору 3.7 г (8.89 ммоль) азидоэтильного производного 39 в 12 мл абс. МеОН прибавляли 0.9 мл 1 М раствора метилата натрия в метаноле. Через 3 часа смесь деионизовали катионитом КУ-2 (Н+), катионит отфильтровывали, промывали метанолом, фильтрат упаривали и получали 2.47 г 3,4,6-триола. К раствору 2.47 г (8.51 ммоль) триола и 81 мг (0.43 ммоль) Ts0H-H20 в 14 мл абс. DMF прибавляли 2.56 мл (17.01 ммоль) а,а-диметокситолуола, смесь выдерживали 5 часов при 60°С, после чего добавляли 120 мкл Et3N (0.86 ммоль). Реакционную смесь разбавляли СН2С12 (150 мл) и промывали насыщенным водным раствором NaCl (3x100 мл), водой (3x100 мл), органический слой фильтровали через слой ваты и упаривали. Из остатка колоночной хроматографией (хлороформ-метанол 40:1.2) выделяли 4,6-0-бензилиденовое производное 40. Выход 2.86 г (85%), кристаллы, т.пл. 239°С, [а]о -92° (с 0.5 СН3ОН), Ry0.48 (хлороформ-метанол 40:1.2). Спектр 'Н-ЯМР: 5 7.48-7.26 (м, 5Н, Ph), 5.49 (с, 1Н, РЬСЖО), 3.98-3.58 (m, 2Н, OC#2CH2N3), 3.47-3.19 (м, 2Н, OCH2C#2N3), 1.93 (с, ЗН, C#3C(0)N). Спектр 13С-ЯМР: 8 101.7 (PhCH<0), 68.3 (OCH2CH2N3), 50.6 (OCH2CH2N3), 22.9 (CH3C(0)N). Найдено (%): С, 53.94; Н, 5.91; N, 14.68. Ci7H22N406. Вычислено (%): С, 53.96; Н, 5.86; N, 14.81. 2-Азидоэтил-2-ацетамидо-3-0-бензил-4,6-С?-бензилиден-2-дезокси-Р-О-глюкопиранозид (41). - К охлажденной до -20°С смеси 2.75 г (7.28 ммоль) 4,6-0-бензилиденового производного 40 и 814 мг 60% суспензии NaH в минеральном масле (20.30 ммоль NaH) в 35 мл абс. DMF при перемешивании прибавляли 0.96 мл (8.03 ммоль) бромистого бензила. Реакционную смесь постепенно нагревали до

20°С и выдерживали 1 час при этой температуре. Охлаждали до -40°С и добавляли

I.95 мл (34.10 ммоль) уксусной кислоты. В течение 2 ч реакционную смесь нагревали до 20°С, разбавляли СН2С12 (150 мл) и промывали водой, насыщенным раствором NaHC03, органический слой сушили и упаривали. При кристаллизации остатка и перекресталлизацией маточного раствора из смеси этилацетат-петролейный эфир получали 3-0-бензильное производное 41. Выход 2.84 г (83%), кристаллы, т. пл. 242°С, [a]D -71° (с 0.5 СН3ОН), R/0.20 (толуол-этилацетат 3:2). Спектр *Н-ЯМР: 5 7.51-7.23 (м, ЮН, 2Ph), 5.63 (д, 1Н, N#Ac, J2>nhac=7.3 Гц), 5.57 (с, 1Н, РИСЖО), 4.88-4.63 (2д, 2Ы, СЯ^РИ, Л.м=11.7 Гц), 4.04-3.68 (м, 2Н, OCtf2CH2N3), 3.48-3.23 (м, 2Н, ОСН2СЯ2Ы3), 1.89 (с, ЗН, СЯ5С(0)Ы). Спектр 13С-ЯМР: 5 101.3 (PhCH<0), 74.7 (OCH2Ph), 68.8 (OCH2CII2N3), 50.7 (OCH2CH2N3), 23.7 (CTI3C(0)N). Найдено (%): С, 61.32; H, 5.81; N, 11.81. C24H28N406. Вычислено (%):C, 61.53; H, 6.02; N, 11.96.

2-Азидоэтил-2-ацетамидо-3,6-ди-0-бензил-2-дезокси-Р-О-глюкопиранозид (42).

- К 205 мг (0.44 ммоль) 4,6-0-бензилиденированного производного 41 прибавляли 127 мг (1.74 ммоль) Me3N-BH3 в атмосфере сухого аргона и смесь растворяли в 7 мл a6c.THF. Охлаждали до 4°С, прибавляли 350 мг (2.62 ммоль) безв. А1С13, после полного растворения последнего добавляли 15.8 мкл воды (0.88 ммоль). Смесь перемешивали 12 ч при 20°С, разбавляли EtOAc (50 мл) и промывали последовательно 1М НС1 (40 мл), насыщенным водным раствором NaCl (40 мл) и водой (40 мл), органический слой фильтровали через слой ваты и упаривали. Кристаллизацией остатка из 2-пропанола получали 3,6-ди-О-бензильное производное 42. Выход 2.84 г (84%), белые кристаллы, т.пл. 243°С, [а]д -17° (с 1 МеОН), R/0.25 (толуол-ацетон 10:3). Спектр 'Н-ЯМР: 5 7.45-7.20 (м, ЮН, 2 Ph), 5.73 (д, 1Н, NHAc, J2>nhac=7.6 Гц), 4.84-4.78 (2d, 2Н, СЯ2РЬ, JrcM=l 1.7 Гц), 4.65-4.53 (2d, 2Н, Ctf2Ph, JreM=12.1 Гц), 4.11-3.63 (м, 2Н, ОСЯ2СН^3), 3.53-3.19 (м, 2Н, ОСН2СЯ^3), 2.80 (д, 1Н, 4-ОЯ, J4,oh<1 Гц), 1.85 (с, ЗН, СЯ5С(0)Ы). Спектр 13С-ЯМР: 5 50.6 (OCH2CH2N3), 23.6 (CH3C(0)N). Найдено (%): С, 60.97; Н, 6.23; N,

II.74. C24H3oN406. Вычислено (%): С, 61.26; Н, 6.43; N, 11.91.

2-Азидоэтил-2-ацетамидо-3-0-бензил-2-дезокси-Р-Б-глюкопиранозид (43). -Раствор 2.04 г (5.40 ммоль) 4,6-0-бензилиденового производного 41 в 60 мл 80% водной уксусной кислоты перемешивали при 40°С в течение 36 ч, упаривали, соупаривали с толуолом (3x20 мл). Хроматографией остатка (этилацетат-метанол 27:1) выделяли 4,6-диол 43. Выход 1.34 г (86%), аморфный, Яу 0.22 (этилацетат-метанол 27:1). Спектр ЯМР !Н: 5 7.10-7.22 (м, 6Н, РЬ), 4.69, 4.52 (2д, 2Н, СЯ2РЬ), 3.90-3.51 (м, 2Н, ОСЯ2СН2К3), 3.48-3.19 (м, 2Н, ОСН2СЯ2К3), 1.73 (с, ЗН, СЯ5С(0)^. Найдено (%): С, 51.22; Н, 6.78; N. 14.65. С^Н^НА. Вычислено (%): С, 51.13; Н, 6.93; К 14.81.

2-Азидоэтил-2-ацетамидо-3-0-бензил-2-дезокси-6-0-тозил-Р-в-глюкопиранозид (44). - К раствору 0.71 г (2.46 ммоль) 4,6-диола 43 в 7 мл пиридина при охлаждении льдом добавляли 0.57 г (3.00 ммоль) ТбСЬ Через 10 минут охлаждение сняли и перемешивание продолжали при комнатной температуре. Через 24 часа, реакционную смесь разбавляли хлороформом (120 мл), промывали последовательно водой (80 мл), 1М раствором НС1 (80 мл), водой (80 мл), насыщенным раствором ЫаНС03 (80 мл), фильтровали через слой ваты и упаривали. Колоночной хроматографией (толуол-этилацетат, 1:1) получали тозилат 62. Выход 0.82 г (75%), белые кристаллы, т. пл. 226-227°С (этилацетат-петролейный эфир, 1:2) [а]д +32.2° (с 1, СНС13), 11^0.10 (толуол-этилацетат 1:1). Спектр ЯМР 'Н: 5 7.79-7.22 (м, 9Н, РЬ, 08(0)2СбЯ4СН3), 5.79 (д, 1Н, ЫЯАс, л,ынас=7.7 Гц), 4.69 (с, 2Н, СЯ2РЬ), 3.90-3.51 (м, 2Н, ОСЯ2СН21Ч3), 3.48-3.19 (м, 2Н, ОСН2СЯ2М3), 2.71 (д, 1Н, 4-ОН, 74,4-он=1-9 Гц), 2.42 (с, ЗН, 08(0)2С6Н4СЯ5), 1.89 (с, ЗН, СЯ5С(0)М). Найдено: С, 58.27; Н, 6.29; N. 11.12. С25Н32К,Об8. Вычислено (%): С, 58.12; Н, 6.24; N. 10.85.

2-Азидоэтил-2-ацетамидо-3-0-бензил-2-дезокси-6-0-(«-метоксифенил)-Р-О-глюкопиранозид (45). - К смеси 437 мг (3.52 ммоль) п-метоксифенола и 155 мг 60% суспензии ЫаН в минеральном масле (3.88 ммоль №Н) в 3 мл абс. БМБ в атмосфере сухого аргона при перемешивании прибавляли раствор 1.42 г (3.21 ммоль) тозилата 44 в 7 мл абс. БМР. Реакционную смесь перемешивали 72 ч при 60°С в атмосфере аргона. Реакционную смесь разбавляли СН2С12 (300 мл) и промывали водой (200 мл), насыщенным водным раствором ЫаНС03 (200 мл), органический слой сушили и упаривали. Хроматографией остатка в системе толуол-этилацетат (1:1) получали 6-0-п-метоксифенильное производное 45. Выход

1.31 г (91%), аморфный, [а]о +37.80° (с 1, СНС13), Я/0.21 (толуол-этилацетат 1:1). Спектр ЯМР 'Н: 5 7.10-7.22 (м, 6Н, РЬ), 6.76-6.89 (2 д, 4Н, ОСбЯ,ОСН3), 6.05 (м, 1Н, ЫЯАс), 4.74, 4.78 (2 д, 2Н, СН2РЬ), 3.79(с, ЗН, ОСН3), 3.68-3.99 (м, 2Н, ОС#2СН^3), 3.20-3.54 (м, 2Н, ОСН2СЯ2Ы3), 1.93 (с, ЗН, СЯ5С(0)Ы). Спектр ЯМР 13С: 74.3 (РЬСН2), 68.2 (ОСН2СН2Ы), 55.7 (ОС6Н4ОСН3), 50.6 (ОСН2СН2Ы), №1СОСН5 23.5. Найдено (%): С, 58.96; Н, 6.29; Ы, 11.35. С^Изо^С^. Вычислено (%):С, 59.25; Н, 6.22; Ы, 11.52.

2-Азидоэтил-(4,6-0-бензилиден-2-0-бензоил-3-0-хлорацетил-Р-В-галактопиранозил)-(1—>4)-2-ацетамидо-3,6-ди-0-бензил-2-дезокси-Р-В-глюкопиранозид (50). - Суспензию 172 мг (0.33 ммоль) производного глюкозамина 42, 227 мг (0.46 ммоль) тиогалактозида 49 и 1.4 г молекулярных сит МБ 4А перемешивали в 4 мл абс. СН2С12 в течение 40 минут в атмосфере аргона. Суспензию охлаждали до -30°С, добавляли 145 мг N18 (0.64 ммоль), через 5 минут добавляли 65 мкл ТГОН (0.69 ммоль) и реакционную смесь выдерживали 1 ч. Нагревали до 0°С, добавляли 0.19 мл триэтиламина (1.36 ммоль) и выдерживали 1ч при 20°С. Суспензию разбавляли 20 мл СН2С12 и фильтровали через слой целита, который затем промывали 40 мл СН2С12. Фильтрат промывали смесью 1 М раствора Ыа28203 и насыщенного раствора №НС03 (3:1) (80 мл), органический слой фильтровали через слой ваты, концентрировали. Хроматографией в системе толуол-этилацетат (5:1, 3:1) выделяли дисахарид 50. Выход 208 мг (70%), сироп, Яу-0.24 (толуол-ацетон (5:2)), [а]0 +4° (с 1, СНС13). Спектр 'Н-ЯМР: 5 8.11-7.08 (м, 20Н, 4РЬ), 5.82 (д, 1Н, ЫЯАс, ^2>Ынлс=8.1 Гц), 5.52 (с, 1Н, РЬСЖО), 4.96-4.71 (2д, 2Н, СН2РЬ, Лем=П.7 Гц), 4.63-4.39 (2д, 2Н, СН2РЬ, Лсм=13.2 Гц), 4.05-3.96 (2д, 2Н, С1СЯ2С(0)0, ЛслГ13.8 Гц), 3.82-3.38 (м, 2Н, ОСЯ2СН2Ы3), 3.38-3.17 (м, 2Н, ОСН2СЯ^3), 1.91 (с, ЗН, СЯ5С(0)Ы). Спектр 13С-ЯМР: 5 101.1 (РЬСН<0), 74.0 (ОСН2РЬ), 73.5 (ОСН2Р11), 68.0 (00-12СН2Ы3), 50.5 (ОСН2СН2Ы3), 40.6 (С1СН2С(0)0), 23.4 (СН3С(0)Ы).

2-Азидоэтил-(4,6-0-бензилиден-2-О-бензоил-Р-В-галактопиранозил)-(1—>4)-2-ацетамидо-3,6-ди-0-бензил-2-дезокси-Р-В-глюкопиранозид (51). - К раствору 343 мг (0.38 ммоль) хлорацетильного производного 50 в смеси 3.2 мл абс. СН2С12 и 3 мл абс. метанола прибавили 144 мг (1.89 ммоль) тиомочевины и 50 мкл

0.38 ммоль) 2,4.6-коллидина. Реакционную смесь перемешивали при 65°С с обратным холодильником в течение 10 ч и упаривали. Остаток растворяли 80 мл СНС13, промывали IM HCl (80 мл), водой (80 мл), насыщенным раствором NaHC03 (80 мл) и органический слой упаривали. Хроматографией (толуол - ацетон, 5:1) остатка выделяли производное 51. Выход 280 мг (90%), аморфный, Rf=0.17 (толуол-ацетон (5:1)), [a]D +3° (с 1, СНС13). Спектр 'Н-ЯМР: 5 8.09-7.18 (м, 20Н, 4Ph), 5.83 (д, III, N#Ac, J2,nhac=8.2 Гц), 5.56 (с, 1Н, PhC#<0), 4.99-4.69 (2д, 2Н, Cfi^Ph, Лем=11-6 Гц), 4.60-4.39 (2д, 2Н, СН2Ph, Лем=12.0 Гц), 3.84-3.38 (м, 2Н, OCtf2CH2N3), 3.38-3.15 (м, 2Н, OCH2C^N3), 1.91 (с, ЗН, C#5C(0)N). Спектр 13С-ЯМР: 5 101.5 (PhCTKO), 50.5 (OCIT2CH2N3), 23.5 (CH3C(0)N). Аллил-[метил(3-0-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-Р-В-глюкопиранозил)уронат]-(1—>3)-4,6-0-бензилиден-2-0-бензоил-Р-2)-галактопиранозид (63) - К смеси 1.12 г (2.70 ммоль) аллилгалактозида 48, 1.47 г (2.33 ммоль) трихлорацетимидата 33 и 20 г молекулярных сит MS AW300 в атмосфере сухого аргона добавили 190 мл абс. толуола. Смесь перемешивали 1 ч при 20°С, затем охлаждали до 0°С и добавляли 173.2 мкл (1.40 ммоль) BF3Et20. Реакционную смесь выдерживали 48 ч при 4°С, в течение 2.5 ч нагревали до 10°С, фильтровали через слой целита, который промывали смесью дихлорметан-этилацетат 3:1 (2x80 мл). Фильтрат упаривали при температуре 35°С наполовину, промывали насыщенным раствором NaHC03 (2x80 мл) и водой. Органический слой фильтровали через слой ваты и упаривали, кристаллизацией остатка из смеси этилацетат-петролейный эфир выделяли дисахарид 63. Выход 1.24 г (64%), кристаллы, т. пл. 267°С, [a]D +14.6° (с 1, СНС13), R/0.41 (толуол-ацетон, 3:1). Спектр 'Н-ЯМР: 8 7.90-7.10 (м, 20Н, 4 Ph), 5.59-5.68 (м, 1Н, ОСН2СЯ"=СН2), 5.52 (с, 1Н, РЬСЖО), 5.09-4.96 (2 дд, 2Н, ОСН2СН=СЯ^), 4.24-4.03 (2 д, 2Н, ОСЯ^СН=СН2), 1.70 (с, ЗН, GfirjC(O)O). Спектр 13С-ЯМР: 8 129.7 (ОСН2СН=СН2), 117.0 (ОСН2СН=СН2), 100.8 (PhCH<0), 68.9 (ОСН2СН=СН2), 20.3 (СН3С(0)0). Найдено (%): С, 64.96; Н, 5.29. С46Н440,6. Вычислено (%): С, 64.78; Н, 5.20.

Аллил-[метил(3-0-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-Р-В-глюкопиранозил)уронат]-(1—>3)-2-0-бензоил-Р-1)-галактопиранозид (64). - К раствору 1.10 г (1.29 ммоль) 4,6-Обензилиденового производного 63 в 170 мл 90% водного ацетонитрила при перемешивании добавляли 1.15 г (4.60 ммоль) PPTS, выдерживали реакционную смесь при 80°С в течение 36 ч и ацетонитрил упаривали. Полученную водную суспензию экстрагировали хлористым метиленом (3x80 мл), экстракт упаривали, сушили в вакууме масляного насоса и получали дисахарид 64. Выход 1.00 г (98%), сироп, [afo +5° (с 1, СНС13), R/0.32 (толуол-ацетон 2:1). Спектр 'Н-ЯМР: 8 7.827.01 (м, 15Н, 3 Ph), 5.55-5.40 (м, 1Н, ОСН2СЯ=СН2), 4.93-4.82 (2 дд, 2Н, ОСН2СН=С#Д 4.09-3.85 (2 д, 2Н, ОС#2СН=СН2), 1.58 (с, ЗН, СЯ3С(0)0). Спектр 13С-ЯМР: 5 129.5 (ОСН2СН=СН2), 116.7 (ОСН2СН=СН2), 69.3 (ОСН2СН=СН2), 20.0 (СНзС(О)О). Найдено: С, 61.56; Н, 5.29. C39H4oOi6. Вычислено (%):С, 61.25; Н, 5.27. Аллил-[метил(3-0-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-р-О-глюкопиранозил)уронат|-(1—>3)-2,4,6-три-0-бензоил-Р~/)-галактопиранозид (65). - К раствору 1.00 г (1.31 ммоль) диола 64 в 18 мл пиридина прибавили при -10°С 1.10 мл (9.55 ммоль) бензоилхлорида, выдерживали 3 ч, разбавляли хлористым метиленом (100 мл), промывали последовательно 1М раствором НС1 (80 мл), водой. (80 мл), насыщенным раствором NaHC03 (80 мл), фильтровали через слой ваты и упаривали. Колоночной хроматографией остатка в системе толуол-этил ацетат (2:0.4 —> 2:1) получали бензоилированный продукт 65. Выход 1.17 г (92%), аморфный, [а]0 +23.7° (с 1, СНС13), R/ 0.33 (петролейный эфир-этилацетат, 5:4). Спектр ^-ЯМР: 5 8.13-7.13 (м, 25Н, 5 Ph), 5.75-5.65 (м, 1Н, ОСН2СЯ=СН2), 5.144.02 (2 дд, 2Н, ОСН2СН=С#Д 4.34-4.23 (2 д, 2Н, ОС#2СН=СН2), 1.63 (с, ЗН, СЯ3С(0)0). Спектр 13С-ЯМР: 5 132.8 (ОСН2СН=СН2), 117.7 (ОСН2СН=СН2), 69.7 (ОСН2СН=СН2), 20.3 (СН3С(0)0). Найдено (%): С, 65.56; Н, 5.11. С53Н48018. Вычислено (%):С, 65.43; Н, 4.97.

Метил(3-0-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-р-0-глюкопиранозил)уронат]-(1—>3)-2,4,6-три-0-бензоил-Р-0-галактопираноза (66). - Суспензию 1.17 г (1.20 ммоль) аллилгликозида 65, 243 мг (1.37 ммоль) хлорида палладия и 238 мг (2.90 ммоль) ацетата натрия в 40 мл 95% водной уксусной кислоты нагревали при перемешивании при 70°С в течение 3 ч. Реакционную смесь разбавляли хлороформом (70 мл), фильтровали через целит и упаривали. Остаток соупаривали с толуолом (4x20 мл). Колоночной хроматографией (петролейный эфир-этилацетат, 2:1) выделяли полуацеталь 66. Выход 716 мг (64%), аморфный, [а]о +29° с 1, CHCI3), RyO.32 (петролейный эфир-этилацетат, 4:3). Спектр 'Н-ЯМР: 5 8.197.09 (м, 25Н, 5 Ph), 1.72 (с, ЗН, СЯ3С(0)0). Спектр 13С-ЯМР: 5 20.3 (СН3С(0)0). Найдено (%): С, 64.56; Н, 5.01. CsobL^Ag. Вычислено (%):С, 64.38; Н, 4.75. [Метил(3-0-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-р-В-глюкопиранозил)уронат]-(1—>3)-2,4,6-три-0-бензоил-1)-галактопиранозилтрихлорацетимидат (67). — К раствору 150 мг (0.16 ммоль) полуацеталя 66 в 2.0 мл абс. CH2CI2 в атмосфере сухого аргона при -30°С прибавляли 161.3 мкл (1.61 ммоль) трихлорацетонитрила и 7.15 мкл (0.05 ммоль) DBU. В течение 2 ч реакционную смесь нагревали до 20°С и хроматографией в системе этилацетат-петролейный эфир (2:1.5) с добавлением 1% (по объему) триэтиламина выделяли трихлорацетимидат 67. Выход 129.7 мг (75%), пена, [a]D +50.8° (с 1, СНС13), R/0.47 (этилацетат-петролейный эфир, 1:1). Спектр 'Н-ЯМР: 5 8.50 (с, 1Н, OC(N#)CCl3), 8.15-7.11 (м, 25Н, 5 Ph), 1.61 (с, ЗН, СНзС(О)О). Спектр 13С-ЯМР: 8 20.3 (СН3С(0)0).

Этил-[метил(3-0-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-Р-В-глюкопиранозил)уронат]-(1->3)-2,4,6-три-0-бензоил-1-тио~Р-0-галактопиранозид (68). - К раствору 932.4 мг (0.87 ммоль) трихлорацетимидата 67 в 10 мл абс. дихлорметана в атмосфере сухого аргона добавляли 109 мкл (1.47 ммоль) этилмеркаптана и 900 мг молекулярных сит MS 4А. Смесь перемешивали в течение 40 мин, охлаждали до 4°С, добавляли 55.0 мкл TMSOTf (0.31 ммоль) и выдерживали 2 ч. Реакционную смесь фильтровали через слой целита, который промывали CH2CI2 (80 мл). Фильтрат промывали насыщенным раствором NaHC03, водой, фильтровали через слой ваты и упаривали. Колоночной хроматографией в системе толуол-ацетоп (2:0.3) выделяли тиогликозид 68. Выход 830.3 мг (98%), кристаллы, т. пл. 78°С, [a]D +17° (с 1, СНС13), Ry0.33 (петролейный эфир-этилацетат, 4:3), Спектр 'Н-ЯМР: 8 8.12-7.13 (м, 25Н, 5 Ph), 2.78-2.61 (м, 2Н, SC#2CH3), 1.66 (с, ЗН, С#5С(0)0), 1.18 (т, ЗН, SCHzCi/j). Спектр 13С-ЯМР: 8 24.1 (SCH2CH3), 20.2 (СН3С(0)0), 14.8 (SCH2CH3). Найдено (%): С, 63.56; Н, 5.01. C52H48017S. Вычислено (%): С, 63.93; Н, 4.95.

2-Азидоэтил-3,6-ди-0-бензил-2-дезокси-2-{{1-{[метил(3-О-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-р-В-глюкопиранозил)уронат]-(1—>3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-1)-галактопиранозилокси)}этилиденамино}}-Р-Х)-глюкопиранозид (69). - Смесь

16.2 мг (0.015 ммоль) тиогликозида 68, 5.2 мг (0.009 ммоль) акцептора 42 и 100 мг MS 4Á в 1,5 мл абс. СЫ2С12 перемешивали в атмосфере сухого аргона в течение 20 мин, охлаждали до -23°С, прибавляли 4.7 мг (0.021 ммоль) NIS и, через 5 мин, 2 мкл (0.03 ммоль) ТЮН. Реакционную смесь нагревали до -10°С в течение 2.5 ч. После этого добавляли 0.5 мл пиридина, разбавляли хлористым метиленом (10 мл) и фильтровали через слой целита. Фильтрат промывали 1 М водным раствором Na2S203 (30 мл), насыщенным раствором NaHC03 (30 мл) и органический слой упаривали. Остаток хроматографировали в системе толуол-этилацетат (2:0.3) и получали трисахарид 68. Выход 5.6 мг (70%), аморфный, R/ 0.72 (этилацетат-толуол, 0.6:2)

2-Азидоэтил-[метил(3-0-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-Р-Вглюкопиранозил)уронат]-(1—>3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-В-галактопиранозил)-(1—>4)-2-ацетамидо-3,6-ди-0-бензил-2-дезокси-Р-Х)-глюкопиранозид (14) -Смесь 96.7 мг (0.01 ммоль) тиогликозида 68, 29.0 мг (0.06 ммоль) акцептора 42 и 300 мг MS AW300 в 3 мл абс. СН2С12 перемешивали в атмосфере сухого аргона в течение 20 мин, охлаждали до -23°С, прибавляли 31.0 мг (0.14 ммоль) NIS и, через 5 мин, 13 мкл (0.15 ммоль) ТЮН. Реакционную смесь нагревали до -10°С в течение 2.5 ч, затем добавляли 0.6 мл пиридина, разбавляли хлористым метиленом (80 мл) и фильтровали через слой целита. Фильтрат промывали 1 М водным раствором Na2S203 (70 мл), насыщенным раствором NaHC03 (70 мл), органический слой упаривали и остаток хроматографировали в системе толуол-ацетон (2:0.4). Получили трисахарид 14, выход 59.2 мг (69%), аморфный, [a]D -9.5° (с 1, СНС13), R/ 0.33 (толуол-ацетон, 2:0.5). Найдено (%): С, 64.33; Н, 5.09; N, 4.24. C74H72N4023. Вычислено (%): С, 64.16; Н, 5.24; N, 4.04.

2-Азидоэтил-[метил(3-О-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-Р-В-глюкопиранозил) уронат]-(1—>3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-0-галактопиранозил)-(1—>4)-2-ацетамидо-3-0-бензил-2-дезокси-6-0-(/г-метоксифенил)-Р-0-глюкопиранозид (15) - Смесь 66.0 мг (0.068 ммоль) тиогликозида 68, 18.3 мг (0.038 ммоль) акцептора 45 и 200 мг MS AW300 в 2 мл абс. СН2С12 перемешивали в атмосфере сухого аргона в течение 20 мин, охлаждали до -23°С, прибавляли 21.4 мг (0.095 ммоль) NIS и, через 5 мин, 9.2 мкл (0.102 ммоль) ТЮН. Реакционную смесь нагревали до -10°С в течение 2.5 ч, после чего реакцию останавливали 0.4 мл пиридина, разбавляли хлористым метиленом (20 мл) и фильтровали через слой целита. Фильтрат промывали 1 М водным раствором Na2S203 (50 мл) и насыщенным раствором NaHC03 (50 мл) и органический слой упаривали. Остаток хроматографировали в системе толуол-ацетон (2:0.4) и получили трисахарид 15. Выход 30.8 мг (60%), аморфный, [a]D +8° (с 0.5, СНС13), R/ 0.23 (толуол-ацетон, 2:0.8). Найдено (%): С, 63.43; Н, 5.11; N, 4.14. C74H72N4O24. Вычислено (%): С, 63.42; Н, 5.18; N,4.00.

2-Азидоэтил-[метил(2,4-ди-0-бензоил-р-О-глюкопиранозил)уронат]-(1-»3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-0-галактопиранозил)-(1—>4)-2-ацетамидо-3,6-ди-0-бензил-2-дезокси-Р-0-глюкопиранозид (70) - К 49 мг (0.04 ммоль) трисахарида 14 добавляли 5.0 мл раствора HCl в МеОН (приготовлен добавлением 0.2 мл ацетилхлорида к 5 мл абс. МеОН при охлаждении льдом). Смесь выдерживали 16 ч при 4°С, разбавляли дихлорметаном (50 мл) и промывали насыщенным водным раствором NaCl + NaHC03 (1:1, 50 мл). Органический слой упаривали, остаток хроматографировали в системе толуол-ацетон (2:0.6) и получали продукт 70. Выход 40.6 мг (86%), аморфный, [a]D -12.2° (с 1, СНС13), R/ 0.3 (толуол-ацетон, 2:0.8). Найдено (%): С, 64.33; Н, 5.09; N, 4.24. C72H7oN4022. Вычислено (%): С, 64.37; Н, 5.25; N,4.17.

2-Азидоэтил-[метил(2,4-ди-0-бензоил-3-0-сульфо-р-В-глюкопиранозил) уронат]-(1-»3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-0-галактопиранозил)-(1—>4)-2-ацетамидо-3,6-ди-0-бензил-2-дезокси-Р-О-глюкопиранозид, натриевая соль (71) - К раствору 21.6 мг (16.4 мкмоль) гидроксипроизводного 70 в 1 мл DMF прибавляли 21 мг (0.13 ммоль) комплекса SOyPy и реакционную смесь выдерживали 1.5 ч при 20°С. Прибавили 54 мг (0.64 ммоль) тв. NaHC03, перемешивали 1 ч и фильтровали. Осадок промывали 10 мл метанола, фильтрат упаривали. Остаток растворяли в 5.5 мл смеси Ме0Н-Н20 (10:1) и добавляли 2 мл катионита Амберлит IRA-120 (Na+). Смесь выдерживали 20 мин, фильтровали, смолу промывали 10 мл метанола и упаривали. Хроматографией остатка в системе хлороформ-метанол 10:1 выделяли сульфат 71. Выход 17 мг (86%), аморфный, [a]D -12° (с 1 МеОН), R/ 0.58 (хлороформ-метанол, 3:1). MALDI-TOF-MS: Рассчитано m/z) для [C72H69N4025SNa, + Na]+: 1468.3. Найдено (m/z): 1468.2. Рассчитано (m/z) для [C72H69N4025SNa + K]+: 1484.4. Найдено (m/z): 1484.3.

2-Азидоэтил-[метил(2,4-ди-0-бензоил-р-О-глюкопиранозил)уронат]-(1—>3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-Б-галактопиранозил)-(1—>4)-2-ацетамидо-3-0-бензил-2-дезокси-Р-О-глюкопиранозид (72) - К растрору 127.0 мг (0.091 ммоль) трисахарида 15 в 9.0 мл смеси CH3CN-H20 (8:1) добавляли при -5°С 150 мг (0.3 ммоль) церийаммонийнитрата. Смесь перемешивали 1 час при 4°С, разбавляли дихлорметаном (50 мл) и промывали насыщенным раствором NaHC03 (50 мл). Органический слой упаривали, остаток хроматографировали в системе толуол-ацетон (2:0.6) и получали моногидроксильный продукт, выход 99.0 мг (84%), аморфный, [a]D -4.2° (с 1, СНС13), R/ 0.3 (толуол-ацетон, 2:0.8). К 99 мг (0.08 ммоль) моногидроксильного продукта добавляли 5.0 мл раствора HCl в МеОН (приготовлен добавлением 0.2 мл ацетилхлорида к 5 мл абс. МеОН при охлаждении льдом) и выдерживали 8 часов при 4°С. Реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (50 мл) и промывали насыщенным раствором NaCl + NaHC03 (1:1, 50 мл). Органический слой упаривали и остаток хроматографировали в системе хлороформ-метанол (20:3). Получали диол 72, выход 80.7 мг (85%), аморфный, [a]ß -18.2° (с 1, СНС13), R/ 0.3 (толуол-ацетон 2:0.6). Найдено (%): С, 62.24; Н, 5.07; N, 4.25. С65Н64^022. Вычислено (%): С, 62.30; Н, 5.15; N, 4.47. 2-Азидоэтил-[метил(2,4-ди-0-бензоил-3-0-сульфо-Р-0-глюкопиранозил) уронат]-(1-»3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-В-галактопиранозил)-(1—>4)-2-ацетамидо-3-0-бензил-2-дезокси-6-О-сульфо-Р-О-глюкопиранозид, динатриевая соль (73) - К раствору 82.0 мг (67.8 мкмоль) 3",6-диола 72 в 6 мл DMF прибавляли 100 мг (0.68 ммоль) комплекса S03Py. Реакционную смесь выдерживали 30 мин при 20°С, прибавляли 154 мг (1.84 ммоль) NaHC03, перемешивали 1 ч и фильтровали. Осадок промывали на фильтре 10 мл метанола и фильтрат упаривали. Остаток растворяли в 5.5 мл смеси Ме0Н-Н20 (10:1) и добавляли 2 мл катионита Амберлит IRA-120 (Na+). Смесь выдерживали 20 мин, фильтровали, смолу промывали 10 мл метанола и упаривали. Хроматографией остатка в системе хлороформ-метанол 10:1 выделяли дисульфатированный продукт 73. Выход 77 мг (81%), аморфный, [a]ß +5° (с 1 МеОН), R/ 0.28 (хлороформметанол, 10:1). MALDI-TOF-MS: Рассчитано (m/z) для [CösH^N^gSiNaz + Na]+: 1480.30. Найдено (m/z): 1480.7. Рассчитано (m/z) для [C^H^N^A^^ + K]+: 1496.41. Найдено (m/z): 1496.5.

2-Трифторацетамидоэтил-[метил(2,4-ди-0-бензоил-3-0-сульфо-Р-О-глюкопиранозил)уронат]-(1—>3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-Б-галактопиранозил)-(1—>4)-2-ацетамидо-2-дезокси-Р-0-глюкопиранозид, натриевая соль (74). —

Раствор 54 мг (38 мкмоль) трисахарида 71 в 2 мл абс. МеОН гидрировали 1 ч в присутствии 10 мкл уксусной кислоты в атмосфере водорода над 30 мг 10% PdO/C. Реакционную смесь фильтровали через слой целита, который далее промывали метанолом (30 мл) и толуолом (30 мл) и фильтрат упаривали. Остаток растворяли в 2 мл абс. метанола, добавляли 30 мкл (0.25 ммоль) этилтрифторацетата и 22 мкл (0.15 ммоль) триэтиламина и выдерживали 4 ч. Упаривали, фильтровали через слой силикагеля в смеси хлороформ-метанол (5:1) и выделяли 55 мг N-трифторацетилированного продукта. Раствор полученного вещества в 2 мл абс. МеОН гидрировали 72 ч в присутствии 5 мг безводного ацетата натрия в атмосфере водорода над 30 мг 10% PdO/C. Реакционную смесь фильтровали через слой целита, который промывали метанолом (30 мл), фильтрат упаривали. К раствору остатка в 2 мл смеси Ме0Н-Н20 (3:1) прибавляли 2 мл катионита Амберлит IRA-120 (Na+), смесь выдерживали 20 мин, фильтровали, смолу промывали 10 мл метанола и фильтрат упаривали. Хроматографией остатка в системе хлороформ-метанол 5:1 выделяли сульфат 74. Выход 22.4 мг (45%), аморфный, [a]ö -8° (с 1 МеОН), R/-0.31 (хлороформ-метанол, 10:3). MALDI-TOF-MS: Рассчитано (m/z) для [C6oH58F3N2Na026S + Na]+: 1358.14. Найдено (m/z): 1358.22. Рассчитано (m/z) для [C60H58F3N2NaO26S + К]+: 1374.25. Найдено (m/z): 1374.33. 2-Трифторацетамидоэтил-[метил(2,4-ди-0-бензоил-3-0-сульфо-р-В-глюкопиранозил)уронат]-(1—>3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-О-галактопиранозил)-(1->4)-2-ацетамидо-2-дезокси-6-0-сульфо-Р-В-глюкопиранозид, динатриевая соль (75). - Раствор 77 мг (53 мкмоль) трисахарида 73 в 2 мл абс. МеОН гидрировали 2 ч в присутствии 10 мкл уксусной кислоты в атмосфере водорода над 30 мг 10% PdO/C. Реакционную смесь фильтровали через слой целита, который промывали метанолом (30 мл) и фильтрат упаривали. Остаток растворяли в 2 мл абс. метанола, добавляли 30 мкл (0.25 ммоль) этилтрифторацетата и 22 мкл (0.15 ммоль) триэтиламина и выдерживали 4 часа. Упаривали, остаток фильтровали четез слой силикагеля в смеси хлороформ-метанол (5:1) и выделяли 67 мг N-трифторацетилированного продукта. Раствор полученного вещества в 2 мл абс. МеОН гидрировали 2 ч в в атмосфере водорода над 30 мг 10% PdO/C. Реакционную смесь фильтровали через слой целита, который далее промывали метанолом (30 мл), фильтрат упаривали. Остаток растворяли в 2 мл смеси Ме0Н-Н20 (3:1), прибавляли 2 мл катионита Амберлит IRA-120 (Na+). Смесь выдерживали 20 мин, фильтровали, смолу промывали 10 мл метанола и упаривали. Хроматографией остатка в системе хлороформ-метанол 5:1 выделяли дисульфат 75. Выход 57.7 мг (77%), аморфный, [a]ö -11° (с 1 МеОН), Rf 0.32 (хлороформ-метанол, 10:3). MALDI-TOF-MS: Рассчитано (m/z) для [C6oH57F3N2Na2028S2 + Na]+: 1444.19. Найдено (m/z): 1444.12. Рассчитано (m/z) для [C60H57F3N2Na2O28S2 + К]+: 1460.30. Найдено: 1460.45.

2-Аминоэтил-(3-0-сульфо-Р-О-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1—>3)-(ß-D-галактопиранозил)-(1—>4)-2-ацетамидо-2-дезокси-Р-0-глюкопиранозид, динатриевая соль (5) - К раствору 48 мг (35.9 мкмоль) трисахарида 74 в смеси THF и воды (10:1) прибавили 0.2 мл 2М гидроксида лития при -10°С. Реакционную смесь выдерживали 3 ч при постепенном повышении тумпературы до комнатной. К реакционной смеси добавляли 5 мл смеси метанол - вода (5:3) и 0.4 мл 2 M гидроксида натрия, выдерживалили 48 ч при комнатной температуре, нейтрализовали 0.1 мл уксусной кислоты и упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с Sephadex G-15 воде, фракции, содержащие продукт, лиофилизовали и получили 2-аминоэтилгликозид 5. Выход 18.8 мг (72%), аморфный, [a\D -10° (с 1 МеОН), R/ 0.32 (ацетонитрил-вода-метанол-бутанол-пропанол-0.1 н. HCl, 1:1:1:1:2:1). MALDI-TOF-MS: Рассчитано (m/z) для [C22H36N2Na2O20S + Na]+: 749.56. Найдено (m/z): 749.47. Рассчитано (m/z) для [C22H36N2Na202oS + К]+: 765.67. Найдено (m/z): 765.52.

2-Аминоэтил-(3-0-сульфо-р-О-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1—>3)-(P-D-галактопиранозил)-(1—>4)-2-ацетамидо-2-дезокси-6-0-сульфо-Р-0-глюкопиранозид, тринатриевая соль (6) - К раствору 50 мг (35.2 мкмоль) трисахарида 75 в смеси THF и воды (10:1) прибавляли 0.1 мл 2 М раствора гидроксида лития при -10°С. Реакционную смесь выдержали 3 ч при постепенном повышении температуры до комнатной, затем добавляли 5 мл смеси метанол-вода (5:3) и 0.4 мл 2 М гидроксида натрия. Полученную смесь выдерживали 48 ч при комнатной температуре, нейтрализовали 0.1 мл уксусной кислоты и упаривали. После гель-хроматографии (Sephadex G-15) и последующей лиофилизацией получен 2-аминоэтилгликозид 6. Выход 20.8 мг (83%), аморфный, [а]^ -13.6° (с 1 Н20), Ry 0.52 (ацетонитрил-вода-метанол-бутанол-пропанол-0.1 п. HCl, 1:1:1:1:2:1). MALDI-TOF-MS: Рассчитано {m/z) для [C22H35N2Na3022S2 + Na]+: 835.60. Найдено (m/z): 835.71. Рассчитано (m/z) для [C22H35F3N2Na3022S2 + К]+: 851.70. Найдено (m/z): 851.59.

2-Трифторацетамидоэтил-[метил(3-0-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-Р-О-глюкопиранозил)уронат]-(1->3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-0-галактопиранозил)-(1-^4)-2-ацетамидо-2-дезокси-6-0-(/1-метоксифенил)-Р-0-глюкопиранозид (76) - Раствор 120 мг (85 мкмоль) трисахарида 15 в 5 мл абс. МеОН гидрировали 2 ч в присутствии 20 мкл уксусной кислоты в атмосфере водорода над 50 мг 10% PdO/C. Реакционную смесь фильтровали через слой целита, который промывали метанолом (30 мл) и фильтрат упаривали. Остаток растворяли в 5 мл абс. метанола, добавляли 50 мкл (0.42 ммоль) этилтрифторацетата и 42 мкл (0.28 ммоль) триэтиламина и выдерживали смесь 4 часа. Растворитель упаривали, остаток фильтровали через слой силикагеля в смеси толуол-ацетон (2:1) и получили 101 мг N-трифторацетилированного продукта. Раствор полученного вещества в 4 мл абс. МеОН гидрировали 2 ч в атмосфере водорода над 30 мг 10% PdO/C. Катализатор отфильтровывали через слой целита, промывали на фильтре метанолом (30 мл) и фильтрат упаривали. Хроматографией в системе толуол-ацетон (2:1) выделяли моногидроксильное производное 76. Выход 67 мг (57%), аморфный, [a]D +38.6° (с 1 СНС13), Ry 0.32 (толуол-ацетон, 2:0.8). Найдено (%): С, 60.23; Н, 5.09; N, 2.24. C69H67F3N2025. Вычислено (%): С, 60.00; Н, 4.89; N, 2.03. 2-Трифторацетамидоэтил-[метил(3-0-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-Р-1)-глюкопиранозил)уронат]-(1-^3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-0-галактопиранозил)-(1-^4)-[(2-0-бензил-3,4-ди-0-бензоил-а-Ь-фукопиранозил)-(1->3)]-2-ацетамидо

2-дезокси-6-0-(и-метоксифенил)-Р-О-глюкопиранозид (78) - Смесь 30.7 мг (0.06 ммоль) тиогликозида 77, 35.0 мг (0.03 ммоль) акцептора 76 и 200 мг MS 4Á в 3 мл абс. СН2С12 перемешивали в атмосфере сухого аргона в течение 20 мин, затем охлаждали до -23°С, прибавляли 19.0 мг (0.08 ммоль) NIS и, через 5 мин, 6.3 мкл (0.07 ммоль) ТЮН. Температуру реакционной смеси поднимали до -10°С в течение 3 ч, добавляли 0.5 мл пиридина, разбавляли хлористым метиленом (30 мл) и фильтровали через слой целита. Фильтрат промывали 1 М водным раствором Na2S2Ü3 (70 мл), насыщенным раствором NaHC03 (70 мл), органический слой упаривали и остаток хроматографировали в системе толуол-ацетон (2:04). Получили тетрасахарид 78, выход 24.2 мг (52%), аморфный, [a]D -75.5° (с 1, СНС13), %0.33 (толуол- ацетон, 2:0.5). Найдено (%): С, 63.08; Н, 5.09; N, 1.27. C96H91N4O31. Вычислено (%): С, 63.15; Н, 5.02; N, 1.53. 2-Трифторацетамидоэтил-[метил(3-0-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-Р-О-глюкопиранозил)уронат]-(1^3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-0-галактопиранозил)-(1^4)-[(3,4-ди-0-бензоил-а-Ь-фукопиранозил)-(1—>3)]-2-ацетамидо-2-дезокси-P-D-глюкопиранозид (79) - Раствор 27.0 мг (14.7мкмоль) тетрасахарида 78 в 2 мл абс. метанола гидрировали 2 ч над 30 мг 10% PdO/C. Катализатор отфильтровывали через слой целита, промывали на фильтре метанолом (30 мл) и фильтрат упаривали. Полученное моногидроксильное производное растворяли в 2.0 мл смеси CH3CN-H20 (8:1) и добавляли при -5°С 21.9 мг (0.4 ммоль) церийаммонийнитрата. Смесь выдерживали 1 час при 4°С, разбавляли дихлорметаном (50 мл) и промывали насыщенным водным раствором NaHC03 (50 мл). Органический слой упаривали, остаток хроматографировали в системе толуол-ацетон (2:0.6) и получали диол 79. Выход 15.4 мг (64%), аморфный, [a]D -102.2° (с 1, СНС13), R/0.30 (толуол-ацетон, 2:1). Найдено (%): С, 60.27; Н, 5.09; N, 1.53. C82H79F3N203o. Вычислено (%): С, 60.44; Н, 4.89; N, 1.72. 2-Трифторацетамидоэтил-[метил(3-0-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-р-Б-глюкопиранозил)уронат]-(1^3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-0-галактопиранозил)-(1->4)-[(2,3,4-три-(?-бензоил-а-Ь-фукопиранозил)-(1^3)]-2-ацетамидо-6-0-бензоил-2-дезокси-Р-0-глшкопиранозид (80) - К раствору 15.1 мг (9.2 мкмоль) диола 79 в 1 мл пиридина при охлаждении лед. водой добавляли 6.4 мкл

0.06 ммоль) BzCl. Через 10 минут охлаждение сняли, выдерживали реакционную смесь 4 ч при комнатной температуре и разбавляли хлороформом (10 мл). Полученный раствор последовательно промывали водой (30 мл), 1М раствором HCl (30 мл), водой (50 мл), насыщенным раствором NaHC03 (50 мл), фильтровали через слой ваты и упаривали. Из остатка колоночной хроматографией (толуол-ацетон, 2:0.9) выделяли дибензоат 80, выход 16.1 мг (95%), пена, [a]D -43° (с 1, СНС13), Ry 0.50 (толуол-ацетон, 2:0.9). Найдено (%): С, 62.91; Н, 4.59; N, 1.67. C96H87F3N2032. Вычислено (%): С, 62.74; Н, 4.77; N, 1.52.

2-Трифторацетамидоэтил-[метил(2,4-ди-0-бензоил-Р-О-глюкопиранозил) уронат]-(1->3)-(2Д6-три-0-бензоил-рЛ)-галактопиранозил)-(1—»4)-[(2,3,4-тpи-0-бeнзoил-a-L-фyкoпиpaнoзил)-(l—>3)]-2-ацетамидо-6-0-бензоил-2-дезокси-Р-D-глюкопиранозид (81) - К 15 мг (8.20 мкмоль) тетрасахарида 80 добавляли 2.0 мл раствора HCl в МеОН (приготовлен добавлением 0.2 мл ацетилхлорида к 5 мл абс. МеОН при охлаждении льдом). Реакционную смесь выдерживали 1 ч при 4°С и затем 2 ч при комнатной температуре. Разбавляли дихлорметаном (20 мл), промывали насыщенным водным раствором NaCl + NaHC03 (1:1, 40 мл) и органический слой упаривали. Остаток хроматографировали в системе толуол-ацетон (2:0.6) и получали продукт 81, выход 11 мг (75%), аморфный, [a]D -61° (с 1, СНС13), R/0.5 (толуол-ацетон, 2:0.9). Найдено (%): С, 62.61; II, 4.59; N, 1.67. C94H85F3N203i. Вычислено (%): С, 62.87; Н, 4.77; N, 1.56. 2-Трифторацетамидоэтил-[метил(2,4-ди-0-бензоил-3-0-сульфо-р-0-глюкопиранозил)уронат]-(1^3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-0-галактопиранозил)-(1—>4)-[(2Д4-три-0-бензоил-аЛ^-фукопиранозил)-(1—>3)]-2-ацетамидо-6-0-бензоил-2-дезокси-Р-0-глюкопиранозид, натриевая соль (82) — К раствору 11.0 мг (6.0 мкмоль) гидроксипроизводного 81 в 1 мл смеси DMF-Py (3:1) прибавляли 47.8 мг (0.3 ммоль) комплекса S03Py. Реакционную смесь выдерживали 42 ч при 20°С, прибавляли 200 мг (2.37 ммоль) NaHC03, перемешивали 1 ч и фильтровали. Осадок промывали 20 мл метанола и фильтрат упаривали. Остаток растворяли в 5.5 мл смеси Ме0Н-Н20 (10:1), добавляли 2 мл катионита Амберлит IRA-120 (Na+), смесь выдерживали 20 мин, фильтровали, смолу промывали 10 мл метанола и фильтрат упаривали. Хроматографией остатка в системе хлороформ-метанол 10:1 выделяли сульфат 82. Выход 9.8 мг (85%), аморфный, [а]0 -42° (с 1 МеОН), Ry 0.28 (хлороформ-метанол, 10:1). MALDI-TOF-MS: Рассчитано (m/z) для [C94H84F3N2Na034S + Na]+: 1920.71. Найдено (m/z): 1920.57. Рассчитано (m/z) для [C94H84F3N2Na034S + К]+: 1936.82. Найдено (m/z): 1936.67.

2-Аминоэтил-[3-0-сульфо-р-О-глюкопиранозилуроновая кислота]-(1—>3)-(ß-D-галактопиранозил)-(1—>4)-[(а-Ь-фукопиранозил)-(1—>3)]-2-ацетамидо-2-дезокси-Р-Б-глюкопиранозид, динатриевая соль (7) — К раствору 11 мг (5.7 мкмоль) тетрасахарида 82 в 1 мл смеси THF и воды (10:1) прибавляли 60 мкл 2 М гидроксида лития при -10°С. Реакционную смесь выдержали 3 ч при постепенном повышении температуры до комнатной, добавляли 1 мл смеси метанол - вода (5:3) и 0.1 мл 2 М гидроксида натрия, после чего выдерживали 48 ч при камнатной температуре. Нейтрализовали 0.1 мл уксусной кислоты, упаривали и остаток подвергали гель - хроматографии (Sephadex G-15) в воде. После лиофилизации получили 2-аминоэтилгликозид 7. Выход 4.6 мг (92%), аморфный, [a]ß -32° (с 1 МеОН), Ry 0.42 (ацетонитрил-вода-метанол-бутанол-пропанол-0.1 н. HCl, 1:1:1:1:2:1). MALDI-TOF-MS: Рассчитано (m/z) для, [C35H5oN2Na2025S + Na]+: 999.81. Найдено (m/z): 999.84. Рассчитано (m/z) для [C35H5oN2Na2025S + К]+: 1915.91. Найдено (m/z): 1915.68.

1,6-Ангидро-2,4-ди-0-бензоил-Р-В-глюкопираноза (84) - К раствору 5.25 г (32.38 ммоль) левоглюкозана 83 в 25 мл пиридина прибавляли по каплям 7.5 мл (65.12 ммоль) бензоилхлорида при 4°С и перемешивали реакционную смесь 2 часа при 4°С. Разбавляли смесь 100 мл СНС13 и промывали 1 М H2S04 (3x50 мл), водой (3x50 мл) и насыщенным раствором NaHC03 (3x50 мл). Органический слой отделяли, фильтровали через слой ваты и концентрировали. Соупаривали е толуолом (4x10 мл) и из остатка колоночной хроматографией (этилацетат-петролейный эфир, 12:5) выделяли дибензоат 84. Выход 4.89 г (40%), белые кристаллы, т. пл. 130°С, [ctb -34° (с 1, СНС13) (лит. данные [86]: т. пл. 128-129°С, [a]D -34° (СНС13)), Ry 0.10 (толуол-этилацетат 10:1). Найдено (%): С, 64.60; Н, 4.76. С20Н,8О7. Вычислено (%):С, 64.86; Н, 4.90. Спектр 'Н-ЯМР: 5 8.10-7.10 (м, ЮН, 2 Ph), 3.33 (д, 1Н, Ъ-ОН, J3>он=5.3 Гц).

1,6-Ангидро-3-0-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-Р-О-глюкопираноза (85) - К раствору 3.8 г (10.26 ммоль) дибензоильного производного 84 в 8.5 мл пиридина прибавляли по каплям 4.9 мл (51.88 ммоль) уксусного ангидрида при 4°С. Смесь выдерживали 24 ч при комнатной температуре, упаривали и соупаривали с толуолом (3x5 мл). Кристаллизацией из смеси этилацетат-петролейный эфир и последующей колоночной хроматографией маточного раствора (толуол-этилацетат, 25:1) получали ацетилированный продукт 35. Выход 4.06 г (96%), кристаллы, т. пл. 125°С, [oc]D -35° (с 1, СНС13), % 0.35 (толуол-этилацетат 10:1). Спектр 'Н-ЯМР: 5 8.12-7.48 (м, ЮН, 2 Ph), 2.12 (с, ЗН, СЯ5С(0)0). Найдено (%): С, 64.18; Н, 4.60. С22Н2о08. Вычислено (%): С, 64.07; Н, 4.89.

1,3,6-Три-0-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-а-О-глюкопираноза (86) - К раствору 4.0 г (9.70 ммоль) производного 85 в 35 мл Ас20 прибавляли по каплям 0.25 мл (4.69 ммоль) конц. H2S04 при 4°С. Реакционную смесь выдерживали 18 ч при 4°С, выливали в лед (200 мл) и перемешивали 2 ч. Смесь экстрагировали хлороформом (2x100 мл), экстракт промывали водой (2x100 мл), насыщенным раствором NaHC03 (2x100 мл), сушили и упаривали. Остаток соупаривали с толуолом (4x20 мл), высушивали в вакууме и получали триацетат 86. Выход 4.97 г (98%), аморфный, [a]¿) +57° (с 1, СНС13), R^ 0.33 (петролейный эфир-этилацетат 2:1). Спектр 'Н-ЯМР: 5 8.10-7.12 (м, ЮН, 2Ph), 2.21, 2.08, 1.89 (Зс, 9Н, 3 СЯ5С(0)0). Спектр 13С-ЯМР: 5 21-20 (3 сигнала, ЗСН3С(0)0). Найдено (%): С, 60.56; Н, 5.16. С26Н260„. Вычислено (%): С, 60.70; Н, 5.09.

3,6-Ди-0-ацетил-2,4-ди-О-бензоил-О-глюкопираноза (87) - К раствору 505 мг (0.98 ммоль) триацетата 86 в 7 мл DMF при 4°С добавляли 225 мг (2.44 ммоль) N2H4-H0Ac, выдерживали в течение 2 ч при комнатной температуре, разбавляли EtOAc (60 мл) и промывали водой (3x50 мл). Органический слой отделяли, фильтровали через слой безводного MgS04, концентрировали и из остатка колоночной хроматографией (толуол-этилацетат, 3:1) выделяли полуацеталь 87. Выход 409 мг (88%), аморфный, [oc]D +36°(с 1, СНС13), R/0.23 (толуол-этилацетат, 4:1). Найдено (%): С, 60.82; Н, 5.28. С24Н240ю. Вычислено (%):С, 61.01; Н, 5.12. Спектр 1 Н-ЯМР: 5 8.10-7.40 (м, ЮН, 2 Ph), 3.95, 3.19 (2 д, 2Н, 1-ОЯ для риа аномера соответственно), 2.05, 1.87 (2с, 6Н, 2 C//jC(0)0).

3,6-Ди-0-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-а-О-глюкопиранозилтрихлорацетимидат (89) - К раствору 3.6 г (7.63 ммоль) полуацеталя 87 в 68 мл абс. СН2С12 в атмосфере сухого аргона прибавляли 7.62 мл (76 ммоль) трихлорацетопитрила, а затем при 4°С — 1.45 мл (9.54 ммоль) DBU. В течение 2 ч температуру реакционной смеси повышали до 20°С, растворитель упаривали и хроматографией остатка в системе толуол-этилацетат (9:1) с добавлением 1% (по объему) Et3N выделяли трихлорацетимидат 89. Выход 3.81 г (81%), аморфный, [a]D +60° (с 1,СНС13), R/ 0.32 (толуол-этилацетат, 9:1). Спектр 'Н-ЯМР: 5 8.75 (с, 1Н, OC(N#)CCl3), 8.12-7.12 (м, ЮН, 2 Ph), 2.12, 1.75 (2с, 6Н, 2С#5С(0)0).

3,6-Ди-0-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-а-О-глюкопиранозилбромид (88)

К раствору 334 мг (0.65 ммоль) ацетата 86 в 2.5 мл абс. СН2С12 при 4°С добавляли 3.0 мл 33% раствора НВг в АсОН и 0.15 мл (5% по объему) уксусного ангидрида. Смесь выдерживали 18 ч при 4°С, разбавляли СНС13 (50 мл), промывали ледяной водой (3x30 мл) и насыщенным раствором NaHC03 (3x30 мл). Органический слой фильтровали через слой ваты, упаривали, остаток высушивали в вакууме и получали глюкозилбромид 88. Выход 344 мг (99%), аморфный, [a]D +212° (с 0.5 СНС13), R/0.52 (толуол-этилацетат 8:1). Спектр 'Н-ЯМР: 5 8.10-7.45 (м, ЮН, 2 Ph), 2.05, 1.85 (2с, 6Н, 2 Cff3C(0)0).

Фенил-3,6-ди-0-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-1-тио-Р-О-глюкопиранозид (93)

К раствору 200 мг (0.37 ммоль) бромида 88 в 3 мл ацетонитрила в атмосфере сухого аргона при охлаждении льдом добавляли 46 мкл (0.45 ммоль) тиофенола и 107 мкл (0.75 ммоль) триэтиламина. Температуру реакционной смеси поднимали до 20°С в течение 2 ч, после чего растворитель упаривали и остаток соупаривали с толуолом (4x10 мл). Колоночной хроматографией (толуол-этилацетат 30:1) выделяли тиогликозид 93. Выход 189 мг (89%), аморфный, [a]D +10° (с 1, СНС13), Ry 0.33 (толуол-этилацетат, 10:1). Спектр 'Н-ЯМР: 5 8.11-7.21 (м, 15Н, 3 Ph), 2.05, 1.87 (2 с, 6Н, 2 C#jC(0)0). Найдено (%): С, 63.87; Н, 5.13. C30H28O9S. Вычислено (%): С, 63.82; Н, 5.00.

Дисахаридный ортоэфир (102) - Смесь 28.7 мг (68.9 мкмоль) тиогликозида 47, 51.6 мг (96.5 мкмоль) глюкозилбромида 88, 170 мг MS 4Á в 2 мл абс. СН2С12 перемешивали в атмосфере сухого аргона в течение 2 ч. Охлаждали до -22°С, прибавляли 15 мкл (0.11 ммоль) 2,4,6-коллидина и, через 5 мин, раствор 37.1 мг (0.14 ммоль) AgOTf в 0.5 мл абс. толуола. Реакционную смесь нагревали до 0°С в течение 2 ч. После этого добавляли 0.5 мл пиридина, разбавляли хлороформом (80 мл), фильтровали через слой целита, фильтрат промывали насыщенным раствором NaHC03 (80 мл) и водой (80 мл). Органический слой упаривали, остаток соупаривали с толуолом и хроматографировали в системе толуол-ацетон 15:1. Получили ортоэфир 102. Выход 27.7 мг (46%), аморфный. R/0.19 (толуол-ацетон 15:1). Спектр 'Н-ЯМР: 5 8.03-7.24 (м, 20Н, 4Ph), 5.36 (с, 1Н, РЬСЖО), 2.90-2.71 (м, 2Н, SC#2CH3), 1.99, 1.91 (2 с, 6Н, 2 СЯ5С(0)0), 1.37 (т, ЗН, SCH2C#j). Спектр 13С-ЯМР: 5 101.1 (PhCH<0), 22.7 (SCH2CH3), 20.6, 20.6 (2 сигнала, 2СН3С(0)0), 14.8 (SCH2CH3).

Аллил-(3,6-ди-С^ацетил-2,4-ди-0-бензоил-Р-О-глюкопиранозил)-(1—>3)-4,6-0-бензилиден-2-0-бензоил-Р-0-галактопиранозид (99) - К смеси 116.4 мг (0.28 ммоль) аллилгалактозида 48, 174.3 мг (0.28 ммоль) трихлорацетимидата 89 и 800 мг MS AW300 в атмосфере сухого аргона добавляли 8 мл абс. толуола и перемешивали смесь 1 ч при 20°С, затем охлаждали до 0°С. Прибавляли 21.3 мкл (0.17 ммоль) BF3-Et20, смесь перемешивали 48 ч при 4°С, в течение 2.5 ч нагревали до 10°С, разбавляли абс. дихлорметаном (5 мл), перемешивали в течение 10 мин и фильтровали через слой целита. Осадок на фильтре промывали смесью дихлорметан-этилацетат 3:1 (2x80 мл). Фильтрат упаривали при температуре 35°С наполовину, промывали насыщенным раствором NaHC03 (2x80 мл) и водой. Органический раствор фильтровали через слой ваты и упаривали, остаток кристаллизовали из смеси этилацетат-петролейный эфир и получали дисахарид 99. Выход 121 мг (48%), кристаллы, т.пл. 251°С, [a]D +10° (с 1, СНС13), R/0.38 (толуол-ацетон, 10:3),. Спектр 'Р1-ЯМР: 8 7.95-7.13 (м, 20Н, 4 Ph), 5.71-5.62 (м, 1Н, ОСН2С#=СН2), 5.51 (с, 1Н, РЬСЖО), 5.14-4.97 (2 дд, 2Н, ОСН2СН=СЯ2), 4.28-4.13 (2 д, 2Н, ОС#2СН=СН2), 1.92, 1.70 (2 с, 6Н, 2 С#5С(0)0). Спектр 13С-ЯМР: 8 129.7 (ОСН2СН=СН2), 117.0 (ОСН2СН=СН2), 100.8 (PhCH<0), 68.9 (OCPI2CH=CPI2), 20.6, 20.3 (2 сигнала, 2 СР13С(0)0). Найдено (%): С, 65.12; Н, 5.48. С47Н46О16. Вычислено (%):С, 65.12; PI, 5.35.

Аллил-(3,6-ди-С?-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-Р-О-глюкопиранозил)-(1—>3)-2-0-бензоил-Р-О-галактопиранозид (107) - К раствору 1.75 г (1.98 ммоль) 4,6-0-бензилиденового производного 99 в 170 мл 90% водного ацетонитрила при перемешивании добавляли 946 мг (3.77 ммоль) PPTS и выдерживали реакционную смесь при 80°С в течение 36 ч. Ацетонитрил упаривали, водную суспензию экстрагировали хлористым метиленом (3x80 мл), экстракты упаривали и остаток сушили в вакууме масляного насоса. Получили дисахарид 107, выход 1.51 г (98%), сироп, [a]D +3° (с 1,СНС13), R/0.27 (толуол-ацетон, 2:1). Спектр 'Н-ЯМР: 5 7.927.11 (м, 15Н, 3 Ph), 5.65-5.58 (м, 1Н, ОСН2СЯ=СН2), 5.08-4.92 (2 дд, 2Н, ОСН2СН=СЯ2), 4.24-3.98 (2 д, 2Н, ОСЯ2СН=СН2), 2.01, 1.58 (2 с, 6Н, 2 СЯ5С(0)0). Спектр 13С-ЯМР: 5 129.7 (ОСН2СН=СН2), 117.0 (ОСН2СН=СН2), 100.8 (PhCH<0), 68.9 (ОСН2СН=СН2), 20.6, 20.3 (2 сигнала, 2 СН3С(0)0). Найдено (%): С, 61.53; Н, 5.42. С4оН4201б. Вычислено (%): С, 61.69; Н, 5.44.

Аллил-(3,6-ди-0-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-Р-0-глюкопиранозил)-(1—>3)-2,4,6-три-О-бензоил-Р-О-галактопиранозид (108) - К раствору 1.54 г (1.98 ммоль) диола 60 в 15 мл пиридина прибавляли 1.38 мл (11.90 ммоль) бензоилхлорида при -10°С и затем выдерживали 3 ч при комнатной температуре. Смесь разбавляли хлористым метиленом (100 мл), промывали последовательно 1 М раствором HCl (80 мл), водой (80 мл), насыщенным раствором NaHC03 (80 мл), фильтровали через слой ваты и упаривали. Колоночной хроматографией остатка в системе петролейный эфир-этил ацетат 2:1 —> этилацетат выделяли бензоилированный продукт 108. Выход 1.95 г (99%), аморфный, [a]D +16° (с 1,СНС13), Rf 0.33 (петролейный эфир-этилацетат, 5:4). Спектр *Н-ЯМР: 5 8.13-7.13 (м, 25Н, 5 Ph), 5.70-5.61 (м, 1Н, ОСН2СЯ=СН2), 5.09-4.96 (2 дд, 2Н, ОСН2СН=СЯ2), 4.27-4.03 (2 д, 2Н, ОСЯ2СН=СН2), 1.91, 1.63 (2 с, 6Н, 2 СЯ5С(0)0). Спектр 13С-ЯМР: 5 132.7 (ОСН2СН=СН2), 117.6 (ОСН2СН=СН2), 69.7 (ОСН2СН=СН2), 20.5, 20.2 (2 сигнала, 2 СН3С(0)0). Найдено (%): С, 65.74; Н, 5.08. С54Н5о018. Вычислено (%): С, 65.71; Н, 5.11.

3,6-Ди-0-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-Р-В-глюкопиранозил)-(1—>3)-2,4,6-три-0-бензоил-О-галактопираноза (109) - Суспензию 2.06 г (2.09 ммоль) аллилгликозида 62, 422 мг (2.38 ммоль) хлорида палладия и 414 мг (5.05 ммоль) ацетата натрия в 40 мл 95% водной уксусной кислоте перемешивали при 70°С в течение 3 ч. Реакционную смесь разбавляли хлороформом (70 мл), фильтровали через целит и фильтрат упаривали. Остаток соупаривали с толуолом (4x20 мл) и колоночной хроматографией (петролейный эфир-этил ацетат, 2:1) выделяли полуацеталь 109. Выход 1.33 г (67%), аморфный, [a]D +33° (с 1,СНС13), R/0.30 (петролейный эфир-этилацетат, 4:3). Спектр 'Н-ЯМР: 5 8.10-6.99 (м, 25Н, 5 Ph), 1.92, 1.62 (2 с, 6Н, 2 СН3С(0)0). Спектр 13С-ЯМР: 5 20.7, 20.3 (2 сигнала, 2 Œ3C(0)0). Найдено (%): С, 64.42; Н, 5.08. C5iH46018. Вычислено (%): С, 64.69; Н, 4.90.

3,6-ди-0-ацетил-2,4-ди-О-бензоил-Р-О-глюкопиранозил)-(1—>3)-2,4,6-три-0-бензоил-сх-1)-галактопиранозилтрихлорацетимидат (110) — К раствору 1.10 г (1.16 ммоль) 1-ОН-производного 63 в 5.8 мл абс. СН2С12 в атмосфере сухого аргона при 4°С прибавляли 1.16 мл (11.62 ммоль) трихлорацетонитрила и 0.22 мл (1.45 ммоль) DBU. В течение 2 ч температуру реакционной смеси поднимали до 20°С, растворитель упаривали и хроматографией остатка в системе этилацетат-петролейный эфир (2:1.5) с добавлением 1% (по объему) триэтиламина выделяли трихлорацетимидат 64. Выход 931 мг (73%), аморфный, [a]D +50 (с 1,СНС13), Ry 0.42 (этилацетат-петролейный эфир, 1:1). Спектр 'Н-ЯМР: 5 8.49 (с, 1Н, OC(N#)CCl3), 8.11-7.06 (м, 25Н, 5 Ph), 1.99, 1.68 (2 с, 6Н, 2 СН3С(0)0). Спектр |3С-ЯМР: 5 20.6, 20.2 (2 сигнала, 2 СН3С(0)0).

Этил-(3,6-ди-0-ацетил-2,4-ди-0-бензоил-Р-0-глюкопиранозил)-(1->3)-2,4,6-три-0-бензоил-1-тио~Р-0-галактопиранозид (111) — К раствору 913 мг (0.84 ммоль) трихлорацетимидата 110 в 5 мл абс. дихлорметана в атмосфере сухого аргона добавляли 105 мкл (1.42 ммоль) этилмеркаптана и 500 мг MS 4Â перемешивали в течение 40 мин, охлаждали до 4°С и добавляли 53 мкл (0.29 ммоль) TMSOTf. Реакционную смесь выдерживали 2 ч, фильтровали через слой целита, осадок промывали на фильтре СН2С12 (80 мл). Фильтрат промывали насыщенным раствором NaHC03, водой, фильтровали через слой ваты и упаривали. Колоночной хроматографией остатка в системе петролейный эфир-этилацетат (2:1.3) выделяли тиогликозид 111. Выход 815 мг (98%), кристаллы, т. пл. 84°С, [a]D +12° (с 1, СНС13), R/0.33 (петролейный эфир-этилацетат, 4:3).

Спектр 'Н-ЯМР: 5 8.12-7.13 (м, 25Н, 5 Ph), 2.76-2.61 (м, 2Н, SC#2CH3), 1.91, 1.64 (2 с, 6Н, 2 СЯзС(О)О), 1.18 (т, ЗН, SCHjCtfj). Спектр 13С-ЯМР: 5 24.1 (SCH2CH3), 20.5, 20.2 (2 сигнала, 2 СН3С(0)0), 14.8 (SCH2CH3). Найдено (%): С, 64.00; Н, 5.30. C53H5oOI7S. Вычислено (%): С, 64.23; Н, 5.09.

2-Азидоэтил-(3,6-ди-0-ацетил-2,4-ди-О-бензоил-Р-О-глюкопиранозил)-(1—>3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-О-галактопиранозил)-(1—>4)-2-ацетамидо-3,6-ди-0-бензил-2-дезокси-р-0-глюкопиранозид (17) - Смесь 49.6 мг (0.05 ммоль) тиогликозида 111, 14.7 мг (0.03 ммоль) акцептора 42 и 300 мг MS AW300 в 3 мл абс. СН2С12 перемешивали в атмосфере сухого аргона в течение 40 мин, охлаждали до -23°С, прибавляли 15.6 мг (0.06 ммоль) NIS и, через 5 мин, 7 мкл (0.08 ммоль) ТЮН. Температуру реакционной смеси поднимали до -10°С в течение 2.5 ч, после чего добавляли 0.8 мл пиридина, разбавляли смесь хлористым метиленом (80 мл) и фильтровали через слой целита. Фильтрат промывали 1 М водным раствором Na2S203 (80 мл) и насыщенным раствором NaHC03 (80 мл), органический слой упаривали и остаток хроматографировали в системе петролейный эфир-этилацетат (1:2). Получили трисахарид 17, выход 21.8 мг (50%), кристаллы, т. пл. 77°С, [a]D -14° (с 1, СНС13), R/ 0.23 (этилацетат- петролейный эфир, 2:1). Найдено (%): С, 64.32; Н, 5.16; N, 4.22. CvsI^N^. Вычислено (%): С, 64.37; Н, 5.33; N, 4.00. 2-Азидоэтил-(2,4-ди-0-бензоил-Р-О-глюкопиранозил)-(1—>3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-0-галактопиранозил)-(1—>4)-2-ацетамидо-3,6-ди-0-бензил-2-дезокси-P-D-глюкопиранозид (16) - К 747 мг (0.53 ммоль) трисахарида 17 добавляли 5.2 мл раствора НС1 в МеОН (приготовлен добавлением 0.2 мл ацетилхлорида к 5 мл абс. МеОН при охлаждении льдом) и выдерживали смесь 16 ч при 4°С. Прибавляли дихлорметан (100 мл) и промывали раствор насыщенным водным раствором NaCl + NaHC03 (1:1, 100 мл). Органический слой упаривали и остаток хроматографировали в системе хлороформ-метанол (20:1). Получили диол 16, выход 571 мг (81%), аморфный, [a\D -15° (с 1, СНС13), R/ 0.19 (этилацетат-петролейный эфир, 2:1). Данные спектров *Н- и 13С-ЯМР см., соответственно, табл. 3 и 4 приложения. Найдено (%): С, 64.96; Н, 5.62; N, 4.31. C71H7oN4021. Вычислено (%): С, 64.83; Н, 5.36; N, 4.26.

2-Азидоэтил-(2,4-ди-СМ)ензоил-3,6-ди-0-сульфо-Р-О-глюкопиранозил)-(1—>3)-(2Д6-три-0-бензоил-Р-О-галактопиранозил)-(1—^^-ацетамидо-З^-ди-О-бензил^-дезокси-Р-О-глюкопиранозид, динатриевая соль (112) - К раствору 50 мг (38 мкмоль) 3,6-диола 16 в 1 мл DMF прибавляли 60 мг (0.38 ммоль) комплекса S03-Py. Реакционную смесь выдерживали 1.5 ч при 20°С, прибавили 54 мг (0.64 ммоль) NaHC03, перемешивали 1 ч и фильтровали. Осадок промывали 10 мл метанола и фильтрат упаривали. Остаток растворяли в 5.5 мл смеси МеОН-Н20 (10:1) и добавляли 2 мл катионита Амберлит IRA-120 (Na+). Смесь выдерживали 20 мин, фильтровали, смолу промывали 10 мл метанола и фильтрат упаривали. Хроматографией остатка в системе хлороформ-метанол (10:1) выделили дисульфатированный продукт 112. Выход 49 мг (86%), аморфный, [a]D +5° (с 1 МеОН), Rf 0.28 (хлороформ-метанол, 20:1.8). MALDI-TOF-MS: Рассчитано (m/z) для [C7iH68N4Na2027S2 + Na]+: 1542.4. Найдено (m/z): 1542.2. Рассчитано (m/z) для [C71H68N4Na2027S2 + К]+: 1558.4. Найдено (m/z): 1558.2. 2-Азидоэтил-(2,4,6-три-0-бензоил-3-0-сульфо-Р-О-глюкопиранозил)-(1—>3)-(2Д6-три-0-бензоил-Р-О-галактопиранозил)-(1—^^-ацетамидо-З^-ди-О-бензил^-дезокси-Р-О-глюкопиранозид, натриевая соль (113) — К раствору 141 мг (0.11 ммоль) 3,6-диола 16 в 4 мл абс. ацетонитрила добавляли 17 мг (0.13 ммоль) бензоилцианида и 15 мкл (0.11 ммоль) триэтиламина. Смесь выдерживали 12 ч при 20°С, добавляли 7 мл метанола и через 15 мин упаривали. Остаток растворяли в 3 мл DMF и прибавляли 119 мг (0.75 ммоль) комплекса S03Py. Реакционную смесь выдерживали 3 ч при 20°С, прибавили 128 мг (1.78 ммоль) NaHC03, перемешивали 1 ч и фильтровали. Осадок промывали 10 мл метанола и фильтрат упаривали. Остаток растворяли в 5.5 мл смеси Ме0Н-Н20 (10:1), добавляли 2 мл катионита Амберлит IR-120 (Na+), смесь выдерживали 20 мин, фильтровали, смолу промывали 10 мл метанола и фильтрат упаривали. Хроматографией остатка в системе хлороформ-метанол (20:1) выделяли 15.8 мг (10%) продукта дибензоилирования 116, 73.3 мг (45%) З-О-сульфатированного продукта 113, а также 13 мг смеси 3-сульфата 113 и 6-сульфата 115 и 54.4 мг (32%) дисульфатироваиного продукта 112. Данные для 3-сульфата 113, аморфный, [a]D +4° (с 1 МеОН), R/ 0.49 (хлороформ-метанол, 5:1). MALDI-TOF-MS:

Рассчитано (m/z) для [C78H73N4Na025S + Na]+: 1544.5. Найдено (m/z): 1544.4. Рассчитано (m/z) для [C78PI73N4Na025S + K]+: 1560.5. Найдено (m/z): 1560.4. 2-Азидоэтил-(2,4-ди-0-бензоил-6-0-сульфо-Р-0-глюкопиранозил)-(1-»3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-В-галактопиранозил)-(1->4)-2-ацетамидо-3,6-ди-0-бензил-2-дезокси-Р-О-глюкопиранозид, натриевая соль (114) - К раствору 21 мг (16 мкмоль) 3,6-диола 16 в 1.5 мл пиридина при охлаждении льдом прибавляли 7.6 мг (48 мкмоль) комплекса S03-Py. Реакционную смесь выдерживали 12 ч при 4°С, затем добавляли 6.8 мг (94 мкмоль) NaHC03, перемешивали 1 ч и фильтровали. Осадок промывали на фильтре 10 мл метанола и фильтрат упаривали. Остаток растворяли в 5.5 мл смеси Ме0Н-Н20 (10:1) и добавляли 2 мл катионита Амберлит IRA-120 (Na+). Смесь выдерживали 20 мин, фильтровали, смолу промывали 10 мл метанола и фильтрат упаривали. Хроматографией остатка в системе хлороформ-метанол (10:1) выделяли 6-О-сульфатированный продукт 114, выход 18 мг (79%), аморфный, [a]D -14° (с 1 МеОН), R/0.19 (хлороформ-метанол, 10:1). MALDI-TOF-MS: Рассчитано (m/z) для [C7iH69N4Na024S + Na]+: 1440.4. Найдено (m/z): 1440.1. Рассчитано (m/z) для [C71H69N4Na024S + К]+: 1456.4. Найдено (m/z): 1456.1. 2-Трифторацетамидоэтил-(2,4-ди-0-бензоил-3,6-ди-0-сульфо-р-О-глюкопиранозил)-(1—>3)-(2,4,6-три-0-бензоил-р-0-галактопиранозил)-(1—>4)-2-ацетамидо-3,6-ди-0-бензил-2-дезокси-Р-О-глюкопиранозид, динатриевая соль (117) - Раствор 54 мг (35 мкмоль) 3,6-дисульфата 112 в 2 мл абс. МеОН гидрировали 1 ч в присутствии 10 мкл уксусной кислоты в атмосфере водорода над 30 мг 10% Pd(OH)2/C. Реакционную смесь фильтровали через слой целита, который промывали метанолом (30 мл) и толуолом (30 мл) и фильтраты упаривали. Остаток растворяли в 3.8 мл абс. метанола и добавляли 25 мкл (0.21 ммоль) этилтрифторацетата и 20 мкл (0.14 ммоль) триэтиламина. Смесь выдерживали 3 часа, упаривали, остаток растворяли в 2 мл смеси Ме0Н-Н20 (3:1) и прибавляли 2 мл катионита Амберлит IRA-120 (Na+). Смесь выдерживали 20 мин, фильтровали, смолу промывали 10 мл метанола и фильтрат упаривали. Хроматографией остатка в системе хлороформ-метанол (5:1) выделяли N-трифторацетилированный продукт 117. Выход 46.8 мг (83%), аморфный, [a]D -9° (с 1 МеОН), R/ 0.32 (хлороформ-метанол, 10:3). MALDI-TOF-MS: Рассчитано (m/z) для [C73H69F3N2Na2028S2 + Na]+:

1612.4. Найдено (m/z): 1611.7. Рассчитано (m/z) для [C73H69F3N2Na2028S2 + К]+:

1628.4. Найдено (m/z): 1621 Л.

2-Трифторацетамидоэтил-(2,4,6-три-0-бензоил-3-0-сульфо-Р-0-глюкопиранозил)-(1^3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-В-галактопиранозил)-(1—>4)-2-ацетамидо-3,6-ди-0-бензил-2-дезокси-Р-О-глюкопиранозид, натриевая соль

118) - Раствор 42 мг (28 мкмоль) 3-сульфата 113 в 2 мл абс. МеОН гидрировали 1 ч в присутствии 10 мкл уксусной кислоты в атмосфере водорода над 20 мг 10% Pd(OH)2/C. Реакционную смесь фильтровали через слой целита, катализатор на фильтре промывали метанолом (30 мл) и толуолом (30 мл) и фильтраты упаривали. Остаток растворяли в 3.8 мл абс. метанола, добавляли 20 мкл (0.17 ммоль) трифторэтилацетата и 16 мкл (0.11 ммоль) триэтиламина, смесь выдерживали 3 ч и упаривали. К остатку добавляли 2 мл смеси Ме0Н-Н20 (3:1) и 2 мл катеонита Амберлит IR-120 (Na+), смесь выдерживали 20 мин, фильтровали, смолу промывали 10 мл метанола и фильтрат упаривали. Хроматографией остатка в системе хлороформ-метанол (10:1) выделяли N-трифторацетилированный продукт

118. Выход 35.6 мг (81%), аморфный, [afo +4° (с 1 МеОН), R/ 0.40 (хлрроформ-метанол, 5:1). MALDI-TOF-MS: Рассчитано (m/z) для [CsoHy-^NsNaOseS + Na]+:

1614.5. Найдено (m/z): 1614.4. Рассчитано (m/z) для [C80H74F3N2NaO26S + К]+: 1630.5. Найдено (m/z): 1630.4.

2-Трифторацетамидоэтил-(2,4-ди-0-бензоил-6-0-сульфо-Р~В-глюкопиранозил)-(1-^3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-0-галактопиранозил)-(1->4)-2-ацетамидо-3,6-ди-0-бензил-2-дезокси-Р-О-глюкопиранозид, натриевая соль

119) - Раствор 24 мг (17 мкмоль) 6-сульфата 114 в 2 мл абс. МеОН гидрировали 1 ч в присутствии 10 мкл уксусной кислоты в атмосфере водорода над 30 мг 10% Pd(OH)2/C. Реакционную смесь фильтровали через слой целита, катализатор промывали метанолом (30 мл) и толуолом (30 мл) и фильтраты упаривали. Остаток подвергали N-трифторацетилированию этилтрифторацетом (12 мкл, 0.10 ммоль) в присутствии триэтиламина (10 мкл, 72 мкмоль) и ионному обмену под действием Амберлита IR-120 (Na+) как описано для соединения 118. Хроматографией в системе хлороформ-метанол 10:1 выделяли N-трифторацетилированный продукт

119. Выход 15.8 мг (63%), аморфный, [a]D -12° (с 0.5 МеОН), R/0.21 (хлороформметанол, 5:3). Найдено: 1526.1. MALDI-TOF-MS: Рассчитано (m/z) для [C59H58F3N2Na025S + Na]+: 1510.4. Найдено (m/z): 1510.1. Рассчитано для [C59H58F3N2Na025S + К]+: 1526.4. Найдено (m/z): 1526.7 2-Трифторацетамидоэтил-(2,4-ди-0-бензоил-3,6-ди-0-сульфо-Р-0-глюкопиранозил)-(1—>3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-В-галактопиранозил)-(1—>4)-2-ацетамидо-2-дезокси-Р-В-глюкопиранозид, динатриевая соль (120) - Раствор 21 мг (13 мкмоль) 3,6-дисульфата 117 в 2 мл абс. МеОН гидрировали 40 ч в присутствии 10 мкл уксусной кислоты в атмосфере водорода над 15 мг 10% PdO/C. Реакционную смесь фильтровали через слой целита, катализатор промывали метанолом (30 мл) и толуолом (30 мл). Фильтрат упаривали и остаток хроматографировали в системе хлороформ-метанол (5:1). Выделяли дебензилированный продукт 120, выход 15.4 мг (83%), аморфный, [a]D +5° (с 1 МеОН), RyO.32 (хлороформ-метанол, 10:3). MALDI-TOF-MS: Рассчитано (m/z) для [C59H57F3N2Na2028S2 + Na]+: 1432.2. Найдено (m/z): 1432.2. Рассчитано (m/z) для [C59H57F3N2Na2028S2 + К]+: 1448.2. Найдено (m/z): 1448.1. 2-Трифторацетамидоэтил-(2,4,6-три-0-бензоил-3-0-сульфо-Р-В-глюкопиранозил)-(1->3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-В-галактопиранозил)-(1—>4)-2-ацетамидо-2-дезокси-Р-Б-глюкопиранозид, натриевая соль (121) - Раствор 13 мг (8 мкмоль) 3-сульфата 118 в 1 мл абс. МеОН гидрировали 5 ч в присутствии 5 мкл уксусной кислоты в атмосфере водорода над 26 мг 10% PdO/C, реакционную смесь обрабатывали как описано для соединения 117 и хроматографией в системе хлороформ-метанол (10:1) выделяли продукт дебензилирования 121. Выход 5.0 мг (44%), аморфный, [a]D +18° (с 0.5 МеОН), R/ 0.37 (хлороформ-метанол, 5:1). MALDI-TOF-MS: Рассчитано (m/z) для [C66H62F3N2Na026S + Na]+: 1434.3. Найдено (m/z): 1434.0. Рассчитано (m/z) для [C66H62F3N2Na026S + К]+: 1450.3. Найдено (m/z): 1450.0.

2-Трифторацетамидоэтил-(2,4-ди-0-бензоил-6-0-сульфо-Р-0-глюкопиранозил)-(1—>3)-(2,4,6-три-0-бензоил-Р-0-галактопиранозил)-(1->4)-2-ацетамидо-2-дезокси-р-Б-глюкопиранозид, натриевая соль (122) - Раствор 16 мг (11 мкмоль) 6-О-сульфата 119 в 2 мл абс. метанола гидрировали 12 ч в присутствии 10 мкл уксусной кислоты в атмосфере водорода над 16 мг 10% PdO/C как описано для соединения 117. Колоночной хроматографией в системе хлороформ-метанол (10:1) выделяли дебензилированный продукт 122. Выход 7.9 мг (56%), аморфный, [a]D +4° (с 0.5 МеОН), Ry- 0.40 (хлороформ-метанол, 20:1.8).

2-Аминоэтил-(3,6-ди-0-сульфо-Р-1)-глюкопиранозил)-(1—>3)-(ß-Z>-галактопиранозил)-(1—>4)-2-дезокси-2-ацетамидо-Р-2>-глюкопиранозид, динатриевая соль (8) - К раствору 22 мг (15 мкмоль) защищенного трисахарида 120 в 1.5 мл абс. МеОН прибавляли 0.16 мл 1 M раствора мегилата натрия в метаноле и выдерживали 18 ч, далее прибавляли 100 мкл 1 M раствора NaOH в воде и выдерживали еще 24 ч. Прибавляли 15 мкл (0.25 ммоль) уксусной кислоты, концентрировали и остаток подвергали гель-хроматографии на колонке с Sephadex G-15 в воде. 3,6-Ди-О-сульфатированный трисахарид 8 лиофилизовали из воды. Выход 11.8 мг (96%), аморфный, [a]D -5° (с 0.5 Н20), R/ 0.43 (ацетонитрил-вода-метанол-бутанол-пропанол-0.1 н. HCl, 1:1:1:1:2:1). MALDI-TOF-MS: Рассчитано (m/z) для [CziHsgNzNazCbSi + Na]+: 815.6. Найдено (m/z): 815.1. Рассчитано (m/z) для [C22H38N2Na2022S2 + К]+: 831.6. Найдено (m/z): 831.1. 2-Аминоэтил-(3-0-сульфо-р-2>-глюкопиранозил)-(1—>3)-(ß-2>-галактопиранозил)-(1->4)-2-дезокси-2-ацетамидо-Р-2>-глюкопиранозид, натриевая соль (9) - Защищенный трисахарид 121 (19 мг, 13 мкмоль) подвергали дебензоилированию метилатом натрия в метаноле и щелочному гидролизу как описано для соединения 120. После гель-хроматографии и последующей лиофилизации получили З-О-сульфатированный трисахарид 9. Выход 9.2 мг (99%), аморфный, [a]D -5° (с 0.5 Н20), Ry 0.43 (ацетонитрил-вода-метанол-бутанол-пропанол-0.1 н. HCl, 1:1:1:1:2:1). MALDI-TOF-MS: Рассчитано (m/z) для [C22bÍ39N2NaOi9S + Na]+: 713.6. Найдено (m/z): 714.3. Рассчитано (m/z) для [C22H39N2Na019S + К]+: 729.6. Найдено (m/z): 730.2. 2-Аминоэтил-(6-0-сульфо-Р-2>-глюкопиранозил)-(1—>3)-(ß-Z>-галактопиранозил)-(1—>4)-2-дезокси-2-ацетамидо-Р-2>-глюкопиранозид, натриевая соль (10) — Защищенный трисахарид 122 (32 мг, 25 мкмоль) подвергали дебензоилированию метилатом натрия в метаноле и щелочному гидролизу как описано для соединения 120. Продукт очищали гель-хроматографией на колонке с

Sephadex G-15 в воде и лиофилизовали. Выделили 6-О-сульфатированный трисахарид 10, выход 16.2 мг (94%), аморфный, [<x]D -10° (с 1 Н20), R/ 0.52 (ацетонитрил-вода-метанол-бутанол-пропанол-0.1 н. HCl, 1:1:1:1:2:1). MALDI-TOF-MS: Рассчитано (m/z) для [C22H39N2NaOi9S + Na]+: 713.6. Найдено (m/z): 713.3. Рассчитано (m/z) для [C22H39N2Na019S + К]+: 729.6. Найдено (m/z): 729.3.

1. Volshoi H., van Zuylen C.W., Loveless R.W., Lawson A.M., Margolis R.U., Feizi T. // J.Biol.Chem.- V.271(1996).- P.22957

2. Feizi T., Childs R.A. // J.Biochem.- V.245(1987).-P.l

3. Yuen C.T., Lawson A.M., Chai W., Larkin M., Stoll M.S., Stuart A.C., Sullivan F.X., Ahern T.J., Feizi T. // Biochem.- V.31(1992).-P.9126

4. Varki A. // Glycobiology.- V.3(1993).-P.97

5. Kleene R., Schachner M. // Nature Reviews Neuroscience.- V.5(2004).-P. 195

6. Paulsen H. //Angew. Chem., Int. Ed. Engl.- V.21(1982).-P.155

7. P.M. Collins, R.J. Ferrier // Kh Monosaccharides: their chemistry and their roles in natural products John Wiley & Sons. 1995. P 345-346

8. Ding Y., Fukuda M., Hindsgaul O. // Bioorg. Med. Chem. Lett.- V.8(1998).-P.1903

9. Okuyama T. // Chem. Abstr.- V.54(1960).-P.6562e

10. Schmidt F., Sinay P. // Carbohydr. Res.- V.29(1973).-P.99

11. Hindsgaul O., Norberg T., Pendu J., Lemieux R. // Carbohydr. Res.- V.109(1982).-P.109

12. Clinch K., Evans G., Furneaux R., Rendle P.M., Roberton A., Rosendale D., Tyler P.C., Wright D.P. // Carbohydr. Res.- V.337(2002).-P.1095

13. Kiyoi T., Nakai Y., Kondo, H., Ishida H., Kiso M., Hasegawa A. // Bioorg. Med. Chem.- V.4(1996).-P.l 167

14. Yoshido M., Kawakami Y., Ishida H., Kiso, M., Hasegawa A. // J. Carbohydrate Chem.- V.15(1996).-P.399

15. Misra A.K., Ding Y., Lowe J.B., Hindsgaul O. // Bioorg. Med. Chem. Let.-V.10(2000).-P.1505

16. Dekany G., Wright K., Toth I. // J. Carbohydr. Chem.- V.16(1997).-P.983

17. Ding Y., Labbe J., Kanie O., Hindsgaul O. // Bioorg. Med. Chem.- V.4(1996).-P.683

18. Numomura S., Iida M., Numata M., Sugimoto M., Ogawa T. // Carbohydr. Res.-V.263(1994).-P.C1

19. Ehara T., Kameyama A., Yamada Y., Ishida H., Kiso M., Hasegawa A. // Carbohydr. Res.- V.281(1996).-P.237

20. Zhang Y.M., Brodzky A., Sinay P., Saint-Marcoux G., Perly B. // Tetrahedron Assymetry.- V.6(1995).-P.l 195

21. Limberf G., Slim G.C., Compston C.A., Stangier P., Palcic M., Furneaux R.H. // Liebigs Ann. Org. Bioorg. Chem.- V.l 1(1996).-P. 1773

22. Toepfer A., Kinzy W., Schmidt R.R. // Liebigs Ann. Chem.- (1994).-P.446

23. Figueora-Perez S., Verez-Bencomo V. // Tetrahedron Lett.- V.39(1998).-P.9143

24. Debenham J., Rodebaugh R., Fraser-Reid B. // Liebigs Ann.- (1997).-P.791

25. Xue J., Khaja S.D., Locke R.D., Matta K.L. // Synlett.- (2004).-P.861

26. Lay L., Manzoni L., Schmidt R.R. // Carbohydr. Res.- V.310(1998).-P.157

27. Gan Z, Cao S, Wu Q., Roy R. // J. Carbohydrate Chem.- V.18(1999).-P.755

28. Crich D., Dudkin V. // J. Am. Chem. Soc.- V.123(2001).-P.6819

29. Fowler P., Bernet В., Vasella A. // Helv. Chim. Acta- V.79(1996).-P.269

30. Crich D., Vinod A.U. // J. Org. Chem.- V.70(2005).-P.1291

31. Liao L., Auzanneau F.I. // Organic Letters- V.5(2003).-P.2607

32. Mogemark M., Elofsson M., Kihlberg J. // J. Org. Chem.- V.68(2003).-P.7281

33. Lucas R, HamzaD., Lubineau A., Bonnaffe D. // Eur. J. Org. Chem.- (2004).-P.2107

34. Cheng A., Hendel J.L., Colangelo K., Bonin M., Auzanneau F-I. // J. Org. Chem.-V.73(2008).-P.7574

35. Hendel J.L., Cheng A., Auzanneau F-I. // Carbohydr. Res.- (2008), doi:10.1016/j.carres.2008.08.025

36. Liao L, Auzanneau F-I. // J. Org. Chem.- V.70(2005).-P.6265

37. Pougni J.R., Nassr M.A., Naulet N., Sinay P. // Nouveau J. Chim.- V.2(1978).-P.389

38. Roger R., Neilson D.G. // Chem. Rev.- V.61(1961).-P.179

39. Lemieux R.U., Driguez H. // J. Am. Chem. Soc.-V.97(1975).-P.4069

40. Pougny J.-R., Sinay P. // Carbohydr. Res.- V.47(1976).-P.69

41. Dauben W.G., Koehler P. // Carbohydr. Res.- V.203(1990).-P.47

42. Paz J.L., Ojeda R., Barrientos A.G., Penadez S., Martin-Lomas M. // Tetrahedron Assymetry.- V.16(2005).-P.149

43. Хатунцева E.A., Цветков Ю.Е., Грачев A.A., Нифантьев Н.Э. // Журнал органической химии,- Т.41(2005).-С. 1849

44. Aguilera В., Fernando-Mayoralas А. // J. Org. Chem.- V.63(1998).-P.2719

45. Pozsgay V., Brisson J.R, Jennings H.J. // J. Org. Chem.- V.56(1991).-P.3377

46. Krog-Jensen С., Oscarson S. // J. Org. Chem.- V.61(1996).-P.1234

47. Hasegawa A., Kato M., Ando Т., Ishida H., Kiso M. // Carbohydr. Res.-V.274(1995).-P.165

48. Lemieux R.U., Cromer R., Spohr U. // Can. J. Chem.- V.66(1988).-P.3083

49. Malet C., Hindsgaul O. // Carbohydr. Res.- V.303(1997).-P.51

50. Кононов JI.O., Корнилов A.B., Шерман A.A., Зырянов Е.В., Затонский Г.В., Шашков А.С., Нифантьев Н.Э. // Биоорганическая химия- Т.24(1998).-С.608

51. Spijker N.M., Constant А.А. //Angew. Chem., Int. Ed. Eng.- V.30(1991).-P.180

52. Fraser-Reid В., Lopez J.C., Gomez A.M., Uriel C. // Eur. J. Org. Chem.- (2004).-P.1387

53. Sakagami M., Florie K., Nakamoto K., Kawaguchi Т., Ilamana H. // Bioorg Med. Chem. Let.- V.8(1998).-P.2783

54. Fields R.D., Itoh K. // Trends Neurosci.- V. 19(1996).- P.473.

55. Schachner M. // Curr. Opin. Cell Biol.- V.9(1997).- P.627.

56. Makoto Y, Robert K.Yu. // Glycobiology.- V. 17(2007).- P.57R.

57. Saghatelyan A.K., Gorissen S.,. Meigel I, Mosbacher J., Kaupmann K., Bettler В., Kornilov A.V., Nifantiev N.E., Schachner M., Dityaev A. // Mol. Cell. Neurosc.-V.24(2003).- P.271.

58. Chou K.H., Ilyas A.A., Evans J.E, Costello C., Quarles R.H., Jungawala F.B. // J. Biol. Chem.- V.261(1986).- P.l 1717-11725

59. Kornilov A.V., Sukhova E.V., Nifantiev N.E. // Carbohydr. Res.- V.33 6(2001).-P.309.

60. Корнилов A.B., Кононов JI.O., Затонский Г.В., Шашков A.C., Нифантьев Н.Э. // Биоорган, химия.- V.21(1997).- Р.655.

61. Kornilov А.V., Sherman А.А., Kononov L.O., Shashkov S.S., Nifantiev N.E. // Carbohydr. Res.- V.329(2000).- P.717.

62. Eklind Т., Gustaffson R., Tiden A.K., Norberg Т., Aberg P,M. // J. Carbohydr. Chem.- V.15(1996).-P.l 161

63. Sherman A.A., Yudina O.N., Mironov Y.V., Sukhova E.V., Shashkov A.S., Menshov V.M., Nifantiev N.E. // Carbohydr. Res.- V.336(2001).-P.13

64. Byramova N.E., Ovchinnikov M.V., Backinowsky L.V., Kochetkov N.K. // Carbohydr. Res.- V. 124(1983).- P.C8

65. NakanoT., Ito Y, Ogawa T. // Carbohydr. Res.- V.243(1993).- P.43

66. Isogai Y., Kawase Т., Ishida H., Hasegawa A. // J. Carbohydr. Chem.- V. 15(1996).-P.1001

67. Черняк А.Я., Антонов K.B., Кочетков H.K. // Биорган. химия.- Т. 13(1987).-С.958-966

68. Chernyak A.Ya., Kononov L.O., Kochetkov N.K. // Carbohydr. Res.- V.216(1991).-P.381-398

69. Черняк А.Я., Кононов JI.O., Антонов K.B. // Изв. АН СССР. Сер. хим.-Т.(1988).-С.1660-1667

70. Chernyak, A. Ya., Antonov, К. V., Kochetkov, N. К. // Bioorg. Khim.- V. 13(1987).-Р.958

71. Ogawa Т., Yamamoto H. // Agric. Biol. Chem.- V.49(1985).- P.475-482

72. Heidlas J.E.,. Lees W.J, Pale P., Whitesides G.M. // J. Org. Chem.- V.57(1992).- P.46

73. Liu M.-Z., Fan H.-N., Guo Z.-W., Hui Y.-Z. // Carbohydr. Res.- V.290(1996).- P.233

74. Jacquinet J.-C., Sinay P. // Tetrahedron.- V.35(1979).- P.365

75. Kobayashi Y., Shiozaki M. // J. Org. Chem., -V.60(1995). -P.2570

76. Abbas S.A., Haines A.H. // Carbohydr. Res. -V.39(1975).-P.358

77. Zsiska M., Meyer B. // Carbohydr. Res.- V.215(1991).-P.279

78. Higson A.P., Tsvetkov Y.E., Ferguson M.A.J., Nikolaev A.V. // J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1-V.l(1998).-P.2587

79. Nifant'ev N.E., Amochaeva V.Y., Shashkov A.S., Kochetkov N.K. // Carbohydr. Res.- V.242(1993).- P.77-89

80. Ding Y., Fukuda M., Hindsgaul O. // Bioorg. Med. Chem. Lett.- V.8(1998).- P.1903

81. Das S.K, Roy N. //Carbohydr. Res.- V.271(1995).- P. 177

82. Aberg P.-M., Blomberg L., Loenn H.,. Norberg T. // J. Carbohydr. Chem.-V.13(1994).- P.141.

83. Chen L, Kong F. // Carbohydr. Res.- V.337(2002).- P. 1373.

84. Smith A.B., Rivero R.A., Hale K.J., Vaccaro H.A. // J. Am. Chem. Soc.-V.l 13(1991).- P.2092

85. Hanessian S., Kagotani M. // Carbohydr. Res.- V.202(1990).- P.67

86. Brimacombe J.S., Tucker L.C. // Carbohydr. Res.- V.40(1975).- P.387

87. Wang L.X., Sakairi N., Kuzuhara H. // J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1- (1990).-P.1677

88. Nunomura S., Ogawa T. // Tetrahedron Lett.- V.29(1988).- P.5681

89. Dasgupta, Roy В., Mukhopadhyay B. // Carbohydr. Res.- V.341(2006).- P.2708

90. Bazin H.G., Polat Т., Linhardt R. J. // Carbohydr. Res.- V.309(1998).- P.189

91. Jain R.K., Piskorz C.F., Matta K.L. // Carbohydr. Res.- V.275(1995).- P. 231

92. Нифантьев Н.Э., Бакиновский JI.B., Липкинд Г.М., Шашков А.С., Кочетков Н.К. // Биоорган, химия,- V.17(1991).-P. 517