Синтез разветвленных олигосахаридов - фрагментов О-антигенных полисахаридов Salmonella и растительного ксилоглюкана тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

Нечаев, Олег Анатольевич АВТОР
кандидата химических наук УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ
Москва МЕСТО ЗАЩИТЫ
1993 ГОД ЗАЩИТЫ
   
02.00.10 КОД ВАК РФ
Автореферат по химии на тему «Синтез разветвленных олигосахаридов - фрагментов О-антигенных полисахаридов Salmonella и растительного ксилоглюкана»
 
Автореферат диссертации на тему "Синтез разветвленных олигосахаридов - фрагментов О-антигенных полисахаридов Salmonella и растительного ксилоглюкана"

vv» v

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ' ИНСТИТУТ ОРГАНИЧЕСКОЙ ХИМИИ имени Н.Д.ЗЕЛИНСКОГО

На правах рукописи

УДК 547.458,118,915.5.057:579.842.14:577.124.5

НЕЧАЕВ Олег Анатольевич

Синтез разветвленных олигосахаридов - фрагментов О-антигешшх полисахаридов Salmonella и растительного ксилоглюкана

02.00.10 - Биоорганическая химия, химия природ!шх и физиологически активных веществ■

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Москва 1993

Работа выполнена в лаборатории химии углеводов ордена Трудового Красного Знамени Института органической химии имени Н.Д.Зелинского Российской Академии наук

Научные руководители: доктор химических наук, профоссор ШИБАЕВ В.Н. кандидат химических наук ТОРГОВ В.И.

Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор Дмитриев Б.А. кандидат химических наук, доцент Морозова Н.Г.

Ведущая организация: Российский Государственный Педагогический Университет имени В»И.Ленина.

Защита состоится "4$.". .Ч-.^НЛ____ 1993 г.

лл0 °

в и.лУ." часов на заседании специализированного, совета К 002.62.02 в Институте органической химии им. Н.Д.Зелинского РАН (П7913 Москва, Ленинский проспект, 47, конференц-зал).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института органической химии им. Н.Д.Зелинского РАН

Автореферат разослан Л&.ЧЖ.. 1993 г.

Ученый секретарь специаличгтпр|йннпт,п совета К 002.62.02,

доктор химических наук

Н.Я.Григорьева

Актуальность проблемы. Исследование связи структуры, тформяции и биологической активности сложных уг.чпводсодержа-IX биополимеров - одна из важнейших задач современной гоорганичоской химии. Существенное место в решении этой подочи шимаот целенаправленный синтоз олигосяхаридов определенного •роения, необходим« для проведения структурных, шко-химических и биологических исслодовпний.

Предметом настоящей работа является направленный мичеекий синтез ряда разветвленных олигосахаридов и их юизводннх, которые представляют значительный интерес в связи разработкой бездеструктивного метода анализа структуры тулярннх полисахаридов по их спектрам 13С-ЯМР, развитием [мико-ферментативного синтеза разветвленных бактериальных >лисахаридов, а также в связи с подавно появившимися данными » активности олигосахаридшх фрагментов растительного :илоглюкона как (Хштогормонов, что вызывает необходимость ¡следования связи структур» и биологической активности в этом [ду соединений.

Цель работы. Настоящая работа состоит из двух частой, ¡утри каждой из которых решаются две конкретнее синтетические дачи.

Целые первой части работа является сиитез разветвленных псах аридных Фрагментов о-специфических полисахаридов льмонелл серогрунн В и С3> а также родственных соединений. В мках этой части решились следующие задачи:

1. Синтез набора производи!« разветвленных грисахаридов, держащих остаток (5 м^тил-Пгалактопирпнозида, гликозилирован-Я но пишшалмшм СИ-группам различными моносахаридами, а

кже родственных дисахарилшх производных.

1

2. Синтез полипренилполифосфатных производных да-трисахаридов, представляющих интерес как Возможные субстрат химико-ферментативного синтеза разветвленных О-специфически полисахаридов Сальмонелл.

Целью второй части работа бил синтез разветвлении олигосахаридов-фрагмонтов растительного ксилоглюкана. литературе имелись данные об антиауксишюй активност нонаеахаридного фрагмента этого полисахарида. В связи исследованием связи структуру и биологической активности 5тог соединения были поставлены следующие синтетические задачи:

1. Синтез шнтасахаридного фрагмента ксилоглюкана соответсгьуилцого по структуре "правой части" биологическ; активного нонасахарида, а также его трисахаридного фрагмента.

2. Синтез тетрасахаридаого фрагмента, отвечающего "лево; части" биологически активного нонасахарида, а также ег аналогов, содержащих остаток р-В-ксилогшранозы.

Научная новизна и практическая ценность работы. Впервые

синтезированы разветвленные трисахариддые фрагмент!

О-антигешшх полисахаридов бактерий рода 8аЫопеИ>

серологических групп В и С3 и некоторые их модифицирование

аналоги. Исследование 13С- и 1Н-ЯМР спектров получении:

соединений позволило получить даяние о связи структуры 1 я

конфирмации и С-ЯМР спектров олигосахаридов при вининально: замещении остатка галактозы.

Шесть полученных олигосахаридов превращены ] соответствующие а-моратгренилдифосфатные производные, которые били использованы для получения химико-ферментативным синтеза разветвленных 0-антигенных полисахаридов £. кетиску и 5 гургЛтиПт или, их аналогов.

Впервые синтезированы три-, тотрн- и пеитасахаридше агмонти растительного ксилоглюкаиа. Исследование полученных единений позволило обнаружить высокую биологическую тивность для пентасахаридного Фрагмента.

Апробация работы. Результаты работы докладывались на кон-рсо молодых .ученых ИОХ РАН (1989 г.), VIII Всесоюзной нфорепции по 'химии и биохимии угловодов (Тбилиси, Í987 ), V ропоПском симпозиуме по углеводом (Прпга, ЧСФР, Í989), XV ждупародном симпозиуме по углеводам (Иокогама, Япония, 1990), Советско шведском симпозиуме по химии и биохимии угловодов унл, Швеция, 4РЭ0).

Публикации. По теме диссертации имеотся 11" публикаций. Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, терятурного обзора, посвященного синтезу разветвленных нгосахаридов, обсуждения результатов, экспериментальной части выводов. Работа изложено на ? стр., содержит < рис., с. табл. и Ж литературных ссылок.

Содержание работы Синтез олигосахаридов, моделирующих фрагменты О-антигенных полисахаридов Salmonella

В рамках первой части работы был проведен синтез 5ора олигосахаридов - производных метил-р-П-гплоктопиршюзи-, включашцего в собя десять дисахаридоп, в которых остаток гил-р-Р-галактозы моногликозилирован по ОН-2, 01Г-3 или, ОН-4 -10)*, четыре трисахарида с вицинальшм З^-зпмевдетк-м 1-14) и семь триспхяридов с вицинальным ?,,.Ч-эг1мещенным ¡-21).

¡al, Glc, Mnn, Xyl -D-конфигурацил. Filia, Fue -I,--конфигурация.

Glcwl-4Gaip0Hu 1: w-a; 2: utp; Manul-3GalpOMe 5: (¿=a; 6: Glcul 3GaipOMu 3: u>=a; 4: w=p; Rliawl -3GalpOMe 7: uwi; 8: u>=p Glcu)1-2CaipOMu 9: 10 u^p;

Manal-3(Glcu1-4)GaipOMe Rhaa1-3(Glcwl • 4)GalpOMe

11: 12: u^p 13: ома; 14: w=(3

Glcul-2 (Manal-3)GalpOMo Clcw1-2(IUiaa1-3)GalpOMti

15; w»a; 16: u-p 17: u-a; 18: w-p

Glcal-2(Glcw1-3)GaipOMu Glcp1-2(Ulcp1-3)GuipOMu

19: u^p; 20: w=-a; 21

Схема синтеза разрабатывалась с расчетом боле

рационального получении моделей для комплексных структурных

Ф13ико-хммичйских и биохимических исследований. Объектами там

исследований в данной работе являются О-сгюцифичоск»

полисахарида S.typtitmurlm (coporpyima В) 22 и S. kentuct

(серогрупно Сд), причем для последнего полисахарида первонач«

льно била предложена структура 23, о затем (по результат

исследований нашей лаборатории) - структура 24.

-2)Маш1 -4Rhaa1-3Gal (а1 - -4 )Шшр1 -2Ыапа1 -2Mam1 -3Gal (pi -3 4 3 X

loAbe laGlc . laAbe Glcal

23: X=4

22 S. typhlmurlvm 24: X=2 s- bentuck¡j

Для анализа спектров 13С-ЯМР полисахарида S. копIиску его фрагментов с цель») однозначного подтверждения структур было необходимо иметь модельные соединения, соответствуют структурам 11 и 15. В этой связи витал вопрос о более детали! исследовании спектров ПМР и 13С-ЯМР раэьотшютшх трисахаридо содержащих остаток галактозы, гликоэилиронашшй по ОН 2 и ОН или ОН-3 и ОН-4, и соотьчтствуицих модельных дисахаридов. Э задача обусловила выбор структуры дисахаридов и разветвлен)!

рисзхаридов, синтез которых был осуществлен н настоящей абото. Для облегчения спектроскопических исследований все «дельные соединения этого ряда получены в виде р-мотилгликози-:ов. Кромо конкретных структурных исследований полисахарида 5. :еп1иску синтезированный набор соединений позволяет изучить 1лия1гие осношшх структурных Факторов на спектры 13С-ЯМР в ютатке (З-В-галактоггаранозы, замощенном по вицинолышм •идроксилыгам группам,.что крайне полезно для изучения строения (ругих полисахаридов, содержащих такие остатки.

Наряду с р-мотилгликозидами, нами был осуществлен также шитез некоторых полипренилпирофосфатсахаров, представляющих штерес для биохимических исследовании. Разработанный в нашей 1аборатории химико-ферментативный подход к синтезу •етерополисахаридов бактерий предполагает получение химическим митозом или комбинацией химических и ферментативтх реакций юлипренилпирофосфатолигосахаридов - биосинтетических предшественников бактериальных полисахаридов и проведения заключительной поликондчнсации повторяющихся звеньев с помощью (юрментатипной реакции. Для . проверки ' применимости шмико-ферментатитюго подхода к синтезу разветвленных толиспхаридов Э. 1урЬ.[тиг1ш и 5. ^»хсйт/ и их

юдиФициропанннх производных было необходимо иметь

юлипречгалпирофосфатные производные дисахаридов 25, 26 и разветвленных трисахаридов 27-30.

31си1 -2Па1(а)-рр- Мрг ГШяа!-3(01сш1 -4)Ся1(а)-рр-Мрг

55: «-а; 26: о>-р 27: о>-а; 20: <.)=•()

Пси1 -2(Мапа1 -3 )Са1 (а) - рр-Мрг 29: м=а; 30: о>-р

НоС.

Мрг = ^ )ОС11-СН

НоС усп-■3 у,-Г, с

гли /01! п3су чн

1.1. Синтез дисахаридов и разветвленных трисахаридов 1.1.1. Производные трисахаридов с остатком И-галактозы, заиа-щанныы по 0-3 к 0-4, и соответствующие ыодельные дасахариды.

Для синтеза олигосахаридов 1-14 в качестве ключевого предшественника сил использован метил-2,6-ди-0-бензил-р-В-талакто-пиранозид 31. Его взаимодействие с диэтилацеталем бензальдеги-да в присутствии р-толуол'сульфокислоты приводило к смеси экэо-и знОо-бензилиденовых производных 32 и 33 с выходами 44% и 47%, соответственно. Восстановительное раскрытие бензилиденовогс цикла с помощью реагента А1С13-ЫА1Н4 протекало с высокое стереоизбирательностью - продуктом реакции в случае соединена 32 был метил-2,3,6-три-0-бензил-р-Б-галактопиранозид 34 (выхо; 80%), а в случае соединения 33 - метил-2,4,6-три-0-бензил-р-О-галактошранозид 35 (85%).

Эти моногидроксильные производные . были использованы, соответственно, в синтезе (1-4)- и (1-3)-связанных, дисахаридов, а для получения трисахаридов 11-14 исходным веществом служи; метил-2,6-ди-0-бензил-3-0-бензош1-р-Ю-галактопиранозид 36, полученный из диола 31 селективним бензоилированиом (см. схему 1)

СН30Вг>

ко/ о

ОМа

Схема 1

он«

ОВп

ОВп

ОВп

1 РШ1(0Ег)2, 11 ИА1Н4-А1С13, Ег20; 1И ВгО!, Ру, 4°С.

Взаимодействие 2,3,4,6-тотра-0 -ацетшьа-Г-манношфпнозил -бромида 37 с галактозидом 35 в условиях реакции Гельфериха СНв(СМ)2, СНдСШ приводило с выходом 94% к защищенному производному 38. Аналогично гликозилированием галактозида 35 2,3,4-три-0~ацетил-а-Ь-рашюпиранозилбромидом 39 било получено дисахаридное производное 40 с виходом 95% (схема 2).

Схема 2.

СНаОАс СНаОДс СН3ОВп

35 • 6

37 38 овп

1 Ий(СМ)2. СН3СМ, 4 А; 11 Г) ИеОКа, МеОН, 2) Рй/С, 1{?.

Синтез дисахаридов 6 и 8 с 1,2-цис-конфигурацией маннозидной и рампозидной связей включал гликозилирование моногидроксильного 1фоизводного 35 бромидами с несоучаствуетцей группой при С-2. При взаимодействии 2,3-0-карбонил-4.г щ-0-ацетил-а-Б-маннопиранозилбромида 41 с галактозидом ■-> в присутствии А£?0 образуется зэщищогаюе производное 42 с выходом 51%. Взаимодействие 2,3-0-кар0ошл-4~0-ацетил-а-Ь-рамнозилбро-мида 43 с галактозидом 35 в аналогичных условиях приводило с выходом 42% к защищешюму производному 44 (Схема 3).

Для синтеза дисахаридов 1-4 мы использовали нестереоспецкфичность гликозилироватьт 2,3,4,6-тетра-0-бензил--а-Г-глюкопиранозилбромидом 45 в системе ОЛ^С^-НвССН^, что

Схема 3

СНаОАс

СН20Дс СН20Вп

35

43

V

V 44

ОВп

1 л«20. СН2С12, 4А; 11 1) МеСШ, МеОН, 2) Рй/С,

позволяет сразу получить необходимую пару изомеров (схема 4

СНаОВп

СН,ОВп СНдОВп

-о _„ )-о

, ОВп ВпО\| /Вг

34

45

ОВп

Вп1

СНаОВп

СНаОВп

оме 11

Вп(

45 + 35

I Н8(СЮ2, СН2С12. 4А

II РЙ/С, н2

Вп(

11

ВпО

СНаОВп СНаОВп

чоме 11 овп 49 овп

8

4

ликозилирование бромидом 45 галактозидов 34 и 35 привело в эрвом случав к смоси(а1-4/-и (р1-4)-производных 46 и 47 (выделен-их с помощью ВЭЖХ с выходами 44% и 46%), а во втором случае к иеси.(а1-ЗЬ и (р1-¿^-производных 48 и 49 (выходы 45% и 47%).

При аналогичном • гликозилировании 3-0-бензоильного роизводного 36 бромидом 45 (схема Б) образуется смесь (а1-4Ь и 1-4-дисахаридов 50 и 51, выделенных ВЭЖХ с виходами 24% и 50%, □ответственно. Омшюше производных 50 и 51 обработкой втилятом натрия в метаноле приводит к моногидроксилышм роизводным 52 и 53, которые служили исходными веществами для интеза разветвленных трисахаридов 11-14.

СН,ОВп

СН,ОЭп

45 + 36

Нй(СЮ2, СН2С12,

Вп(

Вп(

Схема Б.

?Мв 50: И = В2 52: Я = Н

51: И = Вг 53: И = Н

ОВп

ОВп

Мтпюзилированиэ соединений 52 и 53 ацетоброммашюзой 37 в гловиях реакции Гольфориха (Нй(СН)2> (Ш3СИ) дало защищенные рисахариды 54 и 55 с выходами 80% и 75%. Подобным жо образом змнозилированиэ ацетобромрамнозой 39 производных 52 и 53 дает эщищеннне трисахариды 56 и 57 с выходами 73% и 85%.

Удаление защитных групп с полученных производных 46-49, 3, 42, 40, 44, 54-57 приводило с высокими выходам ¡с эответствующим свободным метилгликозидам 1-8, 11-14.

он«

55 (Я = ^>-»-12

57 (Н =

ОВп ОВп АсО О Ас

1.1.2. Производные трисахаридов с остатком Б-галактозы, заме. щешшм по 0-2 и 0-3 и соответствующие модельные дасахарида.

При синтезе разветвленных трисахаридов 15-21 первоначально были получены защищенные производные (1 -2)- связанных изомерных дисахаридов 9 и 10 со свободной гидроксильной группой при С-3.

В качестве исходного соединения был выбран мэт1«-3-0-бензоил-4,б-ди-0-бензил~рЧ)~галактогшранозид 58, синтез которого, включающий в качестве ключевой стадии селективное 3-0-бензоилирование метил-4,6-0-бензил-р-В-галакто-пиранозида, подробно описан в диссертационной работе. Для синтеза дисахаридов 9 и 10 мы использовали подход, основанный на нестереоспецифичности гликозилировашя . производного 58 глюкозилбромидом .45 в системе СН2С12-Н£(СН)2 (схема 6). Гликозшшрование бромидом 45 галактозида 58 привело к смеси производных 59 и 60 с а- и ^-конфигурацией гликозидной связи, продукты выделены ВЭЖХ с выходами 42% и 50%. Омыление дисахаридных производных 59 и 60 дало моногидроксилыше производные 61 и 62, которые служили исходными веществами для синтеза разветвленных трисахаридов 15-21, а в результате гидрогенолиза соединений 61 и 62 получены дисахариды 9 и 10.

. ВпО

ОН«

45

1 не(сш2, сн2с12,

Взаимодействие ацетобромманнозы 37 с производными дисаха->идов 61 и 62 в условиях реакции Гольфериха [Нз(СИ)2, СН3СЫ] гриводило к защищенным трисахаридним производным 63 и 64 с ¡нходом 86% и 87%. Подобным же образом рамнозилирование [роизводных 61 и 62 ацетобромрамнозой 39 в аналогичных условиях ,ает защищенные трисахариды 65 и 66 с выходами 94Я и 96%.

СНдОВп СН,ОВп

.ОМ*

Вп<

?п<

61 (Н=Н)

63 Ш=Я,)-*-15

65 (Н=%)-«-17

68 (й=В)-»-20

69 (Н=А)-»-19

62 (П-Н)

64 (Н=Я<)-*-16

66 (П=1у —*-18

67 (Н=В)-*-21

СН,ОАс / АсО\

оТЗИ'

Дс(

V

АсО ' ОДа

СНдОАс

Ас(

ОАс

О Ас

икозилирование производных 61 и 62 ацетобромглюкооой в.

аналогичных условиях приводило к разным результатам. Если i случае производного 62 нарушения стереоспецифичности hi наблюдалось и ожидаемый трисахарид 67 с ß-конфигурацией (1-2)-: (1 -3)-глюкозилгалактозидшх связей образовывался с выходом 93% то в случае производного 61 в результате глинозилировани получена пара изомеров 68 и 69 с (01 -3)-глюкозилгалактозидно связью, которые выделены ВЭЖХ с выходами 44Ж и 11% соответственно.После омыления производных 63-69 и последующег гвдрогенолиза получены свободные трисахариды 15-21.

1.1.3. Исследование спектров ЯМР свободных олигосахаридов

Данные 13С-ЯМР спектров полученных олигосахаридов, во все случаях однозначно подтверждающие приписываемую им структуру более подробно обсуждены в диссертации. Совместно с д.х.н А.С.Шашковнм и д.х.н. Г.М.Лишиндом был проведен боле детальный анализ влияния структуры олигосахаридов на эффект гликозилирования в спектрах 13С-ЯМР, детальное исследование v. спектров 1Н-ЯМР, включающее определение ЯЭО и конформационнъ анализ синтезированных олигосахаридов. Результаты этой, работь имеют существенное значение для выяснения связи структурь конформации и спектров ЯМР олигосахаридов, а также для развита бездеструктивного метода определения.строения полисахаридов.

1.1.4. Превращение иетилгликозидов в соответствующие полные ацетаты олигосахаридов

Ацетилирование метилгликозидов 9, 10 и трисахаридов 13-' и последующий ацетолиз производашх 70-75 (2% HgS04, Ас20, 4 ' 20°С) приводили с выходами, близкими к количественным соответствующим октаацэтатам 76 и 77 и ундекаацетатам 78-8 которые служили исходными соединениями при синте: а-гликозилфосфатов - производных этих олигосахаридов. Д

70,76 Нз=Н4=Ас, П2=А; 71,77 Н3=Н4=Ас, Н2-В; 72,78 Н2=Лс, 1^=11, Н4=А; 73,79 Н^Ас, 1^=5, Н4=В; 74,80 И2=А, Н3=Р1) й4=Ас; 75,81 Г^В, Яд^й,, Я4=Лс.

дополнительного подтверждения неизменности углеводного состава в процессе ацетолиза ацетаты 78 и 79 путем омыления метилатом натрия в метаноле переводили в свободные трисахариды 82 и 83.

1.2. Синтез полипренилпирофосфатсвхаров

Исходными веществами для синтеза целевых полилренил-пирофосфатолигосахаридов .являются а-гликозилфосфаты - производные олигосахаридов.

Сплавление ацетатов 76-81 с 6-8-кротным избытком безводной фосфорной кислоты (2 ч, 60°С, в вакууме) с последующим омылением действием ИОН и очистка ионообменной хроматографией привело к а-гликозилфосфатам 84-89 с выходами 40-60%. . С1сш1-2аа1(а)~Р 84: а>=а; 85: а>=Р;

Ш1аа1 -3(С1сш1 -4)0а1 (а)-Р 86: 87 «=р; 01со}1-2(Мапа1-3)Са1(а)-Р 88: и=а; 89

Отроение гликозилфосфатов 84-89 однозначно следовало из анализа их 13С-ЯМР спектров, данные которых и их обсуждение правопет в диссертации.

Для получения полипренилпирофосфатолигосахаридов был в качестве исходного вещества использован фосфат морапренола (растительный ундекапренол три-транс-, поли-цис-типа из листьев шелковицы (см. формулу на стр. 5), который близок по строению к бактериальному ундекапренолу, относящемуся к ди-транс-, поли-цис-типу). При синтезе пирофосфатов применен разработанный в нашей лаборатории ' метод, основанный на реакции полипренилфосфоимидазолидов с незащищенными гликозилфосфатами.

О 0 0 0

+ Бив-0-1-0Н :-»- Мгр-О-Ы-О-Бие

ЫНз-иА ^ 8*1-89 ¿Н-гНОсЦ 2£-30 нА ¿Н-2Ж3

Бия: Й1си)1 -2Са1(а)- 84,25: ю=а; 85,26: и=р;

Ш*а1 ~3 (С.1.сы1 -4)Са1(а)~ 86,2Т: ш=а; 87,28: и=р;

С1си)1-2(Мапа1-3)Са1(а)- 88,29: ш=а; 89,30: ы=р;

Взаимодействие морапренилфосфоимидазолида 90 (получен из морепренола и кароонилдиимвдазола) и бис-(три-н-октил)аммониевой соли гликозилфосфатов 84-89 в смеси абс. ТНР-ШЗСМ:1 (37°С, 18 ч) приводило к полипренилпирофосфатсахарам 25-30. Целевые соединения 25-30 были очищены ионообменной хроматографией на ДЕАЕ-целлшозэ и получены с выходом 25-30%. Строение соединений 25-30 было подтверждено результатами специфической деградации под действием фенола или водного аммиака.

Проведенные в нашей лаборатории Т.Н.Дружининой и О.В.Сизовой биохимические исследования соединений 25-30 показали, что данные соединения можно ферментативными реакциями достроить до биосинтетических предшественников соответствующих О-антигешшх . полисахаридов ЗаШопеЫа или их аналогов, содержащих повторяющееся звено с. остатком а- или р-глюкозы в разветвлении и. использовать их в реакциях ферментативной

полимеризации. В результате . бил впервые осуществлен химико-ферментативный синтез регулярных разветвленных полисахаридов, соответствующих О-специфическим полисахаридам Salmonella серогруппы В и С3, лишенным 3,6-дидезоксисахара С91, 93), и их аналогов (92, 94). В более поздней работе синтезированные нами полипренилпирофосфатолигосахариды бы,пи применеш для синтеза полных О-специфических полисахаридов S. typhlmurlvm 22 и S. Kentucky 24.

-2)Mam1-4Rhaa1-3(Glcu>1-4)Gal(a1- 91: ш=а; 92: w=ß

-4)Rhaß1 -2Мапа1 -2Маш1 -3(Glcwl-2)Gal(ßl- 93: o>=a; 94: w=ß

2. Синтез фрагиентов ксилоглюкана растительных клеток

Вторая часть диссертационной работы посвящена синтезу олигосахаридов 95-97 - фрагментов ксилоглюкана клеточной стенки растительных клеток, а также' их аналогов, содержащих остаток ß-D-ксилопиранози - -олигосахаридов 98 и 99.

Растительный ксилоглюкан содержит линейную цепь из Р(1-4)-связашшх остатков D-глюкозы, которые на 60-75% замещены по 0-6 остатками a-D-ксилозы, последние, в свою очередь, на 20-40% ß-D-галвктозилированн по 0-2 и, наконец, некоторые из остатков галактозы замещены a-L-фукозой по 0-2. При расщеплении данного полисахарида действием эндо-1,4-0-глюканазы образуется ряд олигосахаридных фрагментов, среди которых основной

Fucal -2Galß1 -2Xyl 95 Fuca1-2Galß1-2Xyla1-6Glc(J1-4Gl<; 96

Xylu1-6Glcß1 -4(Xyla1-6)C.lc 97: м; 98: u=ß Glcß1-4(Xylß1-6)Glc 99 1aXyl 1aXyl

i 4

Glcß1-4Glcß1-4Glcß1-4Glc 100 6

?uca1 -2fial ßl -?.X,y lal

компонент - нонасахарид 100 обладает высокой биологической активностью как ингибитор ауксина. Выбор целевых олигосахаридов 95-99 связан с тем, что доступность этих соединений, позволяет начать биологические исследования по выявлению связи структуры олигосахаридаых фрагментов ксилоглюкына с их биологической активностью.

2.1. Синтез трмсахарнда Fuca1-2Gaipi-2Xyl (95)

Схема синтеза трисахарида 95 заключалась в ступенчатом наращивании моносахаридних остатков на невосстанавливающий конец цепи и предполагала первоначальное галактозилирование по ОН-2 моногидроксилыюго производного ксилозы.

Vf

О Ас OR

Не

101: R=Ac 103 Н=0Ас 105 R=Ac

102: R=Bn 104 Н=Вг 106 R=H

I 1) Н+; 2) Ас20, Ру; 3) НВГ, СН2С12.

II 1) Hg(CN)г, СН3СГ?, А110Н; 2) МеоМ,

В качестве исходного производного ксилозы нами был выбран аллил~3,4-да-0-0ензнл-р-Б-ксилошранозид 106, который получали в шесть стадий, исходя из 3,4-ди-0-ацетил-1,2-метшюртоацетил--а-П-ксилопиранозида 101 (схема 7). Бензилирование ортоэфира 101 в присутствии НаОН с количественным выходом приводило к бензилгликозиду 102, из которого обработкой 90% АсОН и исчерпывающим ацетилированиом получали диацетат 103. Обработка последнего раствором НВг в С^С^ при комнатной температуре дала с количественным выходом а-бромид, взаимодействие которого с аллиловнм спиртом ССНдСЫ, Не(СН)21 привело к ¡3-эл.лижсилозиду 105. В результате омылв1шя

МеОН

последнего получен в кристаллическом виде целевой ксилозид 106.

Для введения остатка (З-Р-галактозы мы выбрали 2-0-бензоил-3,4,6-три-0-бензил-а-0-галактопиранозилхлорид 110. Для получения галактозилхлорида 110 использовали 3,4,б-три-О-бонзил-1,2-0-мотилорпоацетил-а-0-галактопиранозид 107 (схема 8). Раскрытие ортоэфира 107 90% АсОН и последующее бензоилирование количественно дало кристаллическую 1-О-ацв-тил-2-0-бензоил-3,4,6-три-0-бензоил-а-0-галактопиранозу 108,

Схема 8.

1 I) Н+; 2) Bzci, Ру;. 110: RrH> R^01-

11 1) Et3N, МеОН; 2) С1С0С0С1, DMPA

избирательное деацетилированио которой было достигнуто действием триэтиламина в метаноле при 4°С. Обработка полученного 1-ОК производного 109 оксалилхлоридом в DMFA количественно дает а-гликозилхлорид 110.

Взаимодействие гликозйлхлорида 110 с моногидроксилышм призводннм 106 с CHgCN в присутствии Hg(CN)2 с выходом 55% приводит к (1-2)связанному дисахаридному производному 111. В результате омыления соединения 111 получено кристаллическое моно-гидроксильное дисахаридное производное 112, которое использовали на заключительном этапе синтеза трисахарида 95 (схема 9).

BnO

CHjOBn

ОЛ1 |

BnO

111: R=Bz; 112: R=H i Hg(CN)2, CH3CN, 4A

Гликозилирование соединения 112 2,3,4-три-0-0ензил-а-Ь-фукопиранозилбромидом 113 в присутствии Et, ,МБг, DMPA и

о

молекулярных сит 4 А привело с выходом 97% к трисахпридному производному 114 (схема 10).

Схема 10.

вы

112

114: R|-0А11, R2=H; 115 (R^R^H.OH) -» 95 i Et4NBr, DMFA, 4A 118: R1=H, R^Cl; 119: R, =R2=H,-тиопиридил В результате удаления аллильной защиты с гликозида 114 обработкой трет.-бутилатом калия в DM30 .и последующего гидролиза 1-пропенилгликозида действием Hg(0Ac)2 в водном ацетоне с высоким выходом было получено трисахаридное производное 115 со свободным полуацетальным гидроксилом, которое, с одной стороны, использовали в синтезе пентасахаридного фрагмента ксшюглюкана 96; с другой стороны, гидрогенолиз 115 привел к свободному трисахариду 95.

2.2. Синтез пентасахарида Fucot1-2Galß1-2Xyla1-6Glcß1-4Glc (96).

Синтез был проведен по схеме (3f2) путем гликозилировагая производным трисахарида 115 первичной гидроксилыюй группы

избирательно защищенного производного целлобиози р-бенэил-2,3,6,2',31-понта-0-бензилцэллобиоэида 116. Бензилцол-лобиозид 116 получали, исходя из р-бензилцеллоОиозвда 117 путем введения 4'«б'-бонзилиденовой группы, дальнейшего бензили-рования в присутствии КОН и последующего кислотного гидролиза бензилиденовой группы. В результате кристаллический продукт 116 был выделен о 80% выходом.

СНаОВп СНа0Н

. ОВгл ч ОВгл

СВп

ОВп

116 117

Гликозидироваше 4',6'-доола 116 как гликозилхлоридом 11В

(см. схему 10) (получен из _ 1-ОН приэводного 115 действием оксалилхлорида аналогично получению 110) .в толуоле в

о

присутствии CFgSOgOAg, 2,4,6-коллидина и мол. сит 4, при ~60°С, так и тиогликозидом 119 (см. схему 10) (получен из 1-ОН производного 115 действием BüqP и дштиридилдисульфида) в С!1,С12 в присутствии Ci-Ljl, . мол. сит 4., при 50°С приводило к пентасахаридному производному 120, выход его в обоих случаях составил 15%.,

В результате гидрогенолиза производного' 120 получен нолевой пентасахарид 96.

Bnl

ОВ.Ч

ОВп

ОВп

2.3. Синтез тетрасахарида Ху1а1-6С1ср1-4(Ху1а1-6)С1с (97) и

родственных соединений.

Для синтеза тетрасахарида 97 было использовано последовательное введение остатков а-ксилозы в молекулу частично защищенного р-бензилцеллобиозида, сначала по 0Н-6, затем по ОН-6'. Для реализации такой последовательности гликозилировашя бал выбран 2,3,2',3'-тетра-0-бензил-4',6'-0-бензилиден-р-бензилцеллобиозвд 121.Исходный целлобиозид 121 получали исходя из р-бензил-4'.б'-бензилиденцеллобиозида 122

путем последовательного тритилирования, бензилирования 6-0-тритильного производного и удаления тритильной защиты.

Взаимодействие моногидроксильного производного 121 с 2,3,4-три-0-бенэил-а-0-ксилошрыюзилбромидом 123 n CH^Clg в

о

присутствии Hg(CH>2 и молекулярных сит 4 приводило к смеси а- и p-трисахаридных производных 124 и 125, выделенных с выходами 78% и 16% (схсма 11).

Удаление 4,6-бензилиденовой группы в производном 124 путем обработки СРдСООН привело с выходом 90% к трисахаридаому диолу 126, повторное ксилозилироваше которого в условиях предыдущего синтеза протекало региоизбиртелыю, и давало смесь а- и р-производных (схема 12). Тетрасахарида 127 и 128 выделены с выходами 58 и 29%, соответственно.

В результате гидрогенолиза производных 127, 128 и 125 гюлуч свободные олигосахарида 97-99.

.ОВп ЕЬйМ /Вг

121

ОВп

123

N ОВп ВпОМ / О-

Схема 11.

--СЩ

ОВп

Я1ОСНа

. ОВп

к,о

ОВп

. ОВп

ОВп ОВп

124: й^й^РШк; 126: Й,=Й2=Н. —о „

. Ойп

-сн.

ЭСН,

ВпО

РЬ

Н8(СЮ2. СН2012, 4А

ОВп н'\

ОВп

ОВп

ой1

ОВп

125

99

Схема 12.

?3+126

Нв(СМ)2. сн2012, ксвп

4 Л .ВпО

овг. 128

Биологический испытания полученных синтетических фрагментов ксилоглюкана проводятся во ВНИИ сельскохозяйственной биотехнологии РАСХН (А.В.Бабаков и сотр.). В настоящее время показано, что синтезированный нами пенгасахарид 96 обладает высокой ингибирующей активностью при стимуляции роста семядолей тыквы как цитокшшном, так и фузикокцином. При внесении его в питательную среду для культивирования незрелых зародышей пшеницы это соединешю стимулирует каллусообрэзование и вызывает ризогенез. Эти результаты показывают перспективность синтетических исследований в области синтеза олигосахаридннх фрагментов растительного ксилоглюкана; обнаруженная биологическая активность может иметь практическое значение.

ВЫВОДЫ

1. Разработана удобная схема синтеза производных разветвленных трисахаридов, содержащих остаток р-метил-Б-галактопира-нозида, глакозилированный по ОН-3 и ОН-4 или ОН-3 и ОН-2.

Впервые получены 11 соединений-этого ряда, а также 10 родствон-

1 ч 1

шх дисахаридных производных. Исследование С- и [{-ЯМР спектров полученных соединений позволило получить данные о связи структуры, конформации и ,3С-ЯМР спектров олигосахаридов при вицина.; ыюм замощении остатка галактозы, что позволяет расширить область применения разработанного в лаборатории компьютерного метода анализа структуры полисахаридов.

2. На примере производных дисахаридов и трисахаридов, являющихся фрагментами О-антигеншх полисахаридов Сальмонелл серогруппы С3 1С1са1-2Са1,Маш1-3(С1са1-2)0а1] и В

[Шта1-3(С.1са1-4)Са1], а также их аналогов, содержащих остаток р-Г-глюкопиранози, разработана оптимальная схема превращения (3-метилгликозидов в а-морапренилдифосфатше производные.

Использование этих соединений в качество субстратов позволило провести химико-ферментативный синтез разветвленных О-специфических полисахаридов Сальмонелл.

3. Впервые осуществлен синтез три- и пентасахаридного фрагментов растительного ксилоглюкана Fuccx1-2Galß1-2Xyl и Fuca1-2Galß1-2Xyla1-6Glcß1-4Glc, представляющих интерес в связи с известной антиауксинной активностью нонасахаридного фрагмента этого полисахарида. Исследование полученных соединений позволило впервые обнаружить высокую биологическую активность для пентасахарида.

4. Проведен первый синтез тетрасахаридного фрагмента другого участка молекулы растительного . ксилоглюкана Xylai-6Glcß1-4(Xyla1-6)Glc, a также его аналогов, содержащлх остаток ß-B-ксилопиранози.

Основное содержание диссертации изложено в следующих публикациях:

1. Нечаев O.A., Торгов В.И., Шибаев В.Н., Мамян С.С. Синтез ß-метилгликозидов ди- и трисахаридов с остатком D-галактози, замещенным по 03, 04 или 03 и 04. // Биоорган.химия, т. 14. (1988). № 3. С. 359-370.

2. Нечаев O.A., Торгов В.П., Шибаев В.К. Синтез ß-мвтилгликози дов ди- и трисахаридов с остатком D-галактозы, монозомещен-ным по 02 и дизамещеншлл по 02 и 03. // Биоорган.химия.

Т. 14. (1988). Л 9. С. 1224-1233.

3. Нечаев O.A., Сизова О.В., Дружинина Т.Н., Торгов В.И., Шибаев В.Н. Превращение металгликозидов ди- и трисахаридов в морапронллтфофосфатные производные и использование пое

■ ледних для изучения субстратной специфичности маннозилтрано фораз Salmonella kcnîucky. // Биоорган.химия, т. 14. (1988). » 9. С. 1290-1292.

4. Торгов В.И., Дружинина Т.Н., Нечаев O.A., Шибаев В.Н. Синтез морипренилпирофосфатних производных З-О-а-Ь-рамиопи

ранозил- (4-0--а-В-глюко1транозил)-а~1У-глюкопиранозн и 3-0--а-Ъ-рамношфанозил-(4-0-р-Р-г,люкоггиранозил)-о.-0-глю1сотфя-нозы и исследование их субстратных свойств в реакциях Сио-синтетиза О-ашигенных полисахаридов Salmonella typhtmurlum и Salmonella cmatum. // Биоорган.химия, т. 13. (1987). №7. С. 947-957.

б. Торгов В.И., Нечаев O.A., Усов А.И., Шибаев В.К. Синтез три-сахариднго и пентасахаридного фрагментов растительного кси-логлюкана - потенциальных ингибиторов ауксина. // Биоорган.химия, т. 16. (1990). Л 6. С. 854-857.

6. Торгов В.И., Нечаев O.A., Усов А.И., Шибаев В.Н. Синтез фрагмента растительного ксилоглюкана - тетрасахарида Xylal -6GIcpt—<<Kyla.t-6)Glc и его три- и тетрасохприщшх аналогов. // Биоорган.химия, т. 17. (1991). №3. С.424-426.

7. Лшкиид Г.М., Мамян С.С., (Пашков A.C., Нечаев O.A., Торгов В.И., Шбавв В.Н., Кочетков Н.К. Ядерный эффект Оперхаузера и конформации 1-3- и 1-4-связашшх гликозилгалогенидов.

// Биоорган.химия, т. 14. (1988). J6 3. С. 340-351 .

8. Лиикиид Г.М., Шашков A.C., Нечаев O.A., Торгов В.И., Шибаев В.Н., Кочетков Н.К. Конформации разветвленных трисахаридов с вищшалышм замещением по данным ядерных эффектов Оверхаузера и теоретических расчетов. 1. Трисяхяриды с замещением по положениям 3 и 4 остатков галактозу.

// Биоорган.химия, т. 15. (1989). » 5. С. 656-669.

9. Липнинд Г.М., Шаьлсов A.C., Нечаев O.A., Торгов В.И., Шибаев В.Н., Кочетков Н.К. Конформации разветвленных трисахаридов с вициналыгим замещением по данным, ядерных эффектов . Оверхаузера и теоретических расчетов. 2. 'Грисахарнлы с замещением по положениям 2 и 3 остатков галактозы.

// Биоорган.химия, т. 15. (1989). * 5. С. 670-680.

Ю.Липкинд Г.М., Шашков A.C., Нечаев O.A., Торгов В.И., Шибаев В.Н., Кочетков Н.К. Конформации разветвленных трисахаридов с вицинальшм замещением по данным ядерных эффектов Оверхаузера и теоретических расчетов. 3. Спектры ^С-ЯМР и конформации трисахаридов с остатками галактозы в узле разветвления. // Биоорган.химии, т. 15. (1989). Л Ю. С. 1366-1374.

1l.ravlova Z.N., Ash O.A.,. VnuchKova V.A., Babakuv A.V., Torgov V.I., Necliaev O.A., Uaov A.I., Stilbaev V.N. Biological activity of a oynthetlc pentasaccharide fragjnent of xyloglucan. // Plant Science, v. 85. (1992) P. 131-134.