Создание эффективных ингибиторов генной экспрессии на основе олигонуклеотидов с природным сахаро-фосфатным остовом тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ

I. ПРОБЛЕМЫ И ПЕРСПЕКТИВЫ ПРИМЕНЕНИЯ АНТИСМЫСЛОВЫХ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ ДЛЯ ПОДАВЛЕНИЯ ГЕННОЙ ЭКСПРЕССИИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1. Принцип действия антисмысловых олигонуклеотидов.

1.1.1. Направления действия антисмысловых олигонуклеотидов.

1.1.2. Механизм действия антисмысловых олигонуклеотидов.

1.1.3. Свойства, необходимые антисмысловым олигонуклеотидам.

1.2. Принципы химической модификации антисмысловых олигонуклеотидов.

1.2.1. Модификация межнуклеотидных групп.

1.2.1.1. Тиофосфатные аналоги олигонуклеотидов.

1.2.1.2. Метилфосфонатные аналоги олигонуклеотидов.

1.2.1.3. Амидофосфатные аналоги олигонуклеотидов.

1.2.1.4. Фосфотриэфирные аналоги олигонуклеотидов.

1.2.2. Модификация углеводных остатков.

1.2.2.1. а-олигонуклеотиды.

1.2.2.2. 2'-0-замещенные олигонуклеотиды.

1.2.3. Одновременная модификация углеводных остатков и межнуклеотидных групп олигонуклеотидов.

1.2.3.1. Морфолиновые аналоги олигонуклеотидов.

1.2.3.2. Пептидные нуклеиновые кислоты.

1.2.4. Модификация гетероциклических оснований олигонуклеотидов.

1.2.5. Химерные олигонуклеотиды.

1.2.6. Модификация концевых группировок сахаро-фосфатного остова.

1.2.6.1. Конъюгаты олигонуклеотидов с интеркаляторами.

1.2.6.2. Реакционно-способные производные олигонуклеотидов.

1.2.6.3. Бинарные системы олигонуклеотидов.

1.2.6.4. Производные олигонуклеотидов с гидрофобными соединениями.

1.2.6.5. Производные олигонуклеотидов с пептидами.

1.3. Фармакология антисмысловых олигонуклеотидов.

1.3.1. Проникновение и внутриклеточное распределение олигонуклеотидов в культуре клеток.

1.3.2. Проникновение и распределение олигонуклеотидов в тканях живых организмов.

1.3.3. Токсические эффекты олигонуклеотидов.

1.3.3.1. Метаболизм модифицированных олигонуклеотидов.

1.3.3.2. Неспецифические взаимодействия олигонуклеотидов.

1.4. Системы-носители для доставки олигонуклеотидов в клетку.

1.4.1. Пептидные конструкции для доставки олигонуклеотидов в клетку.

1.4.2. Липосомы.

1.4.2.1. Анионные и нейтральные липосомы.

1.4.2.2. рН-чувствительные липосомы.

1.4.2.3. Иммунолипосомы.

1.4.2.4. Рецептор-направленные липосомы.

1.4.2.5. Фузогенные липосомы.

1.4.2.6. Катионные липосомы.

1.4.3. Наночастицы.

1.4.4. Дендримерные носители полиамидоаминного типа.

1.5. Механизм действия антисмысловых олигонуклеотидов.

1.5.1. Гидролиз РНК в дуплексе с олигонуклеотидом РНКазой Н.

1.5.2. Блокирование процессинга РНК без участия РНКазы Н.

1.5.2.1. Ингибирование обратной транскрипции.

1.5.2.2. Ингибирование трансляции.

1.5.2.3. Ингибирование созревания мРНК.

1.5.2.4. Ингибирование процессинга РНК за счет взаимодействия олигонуклеотида с ее функционально значимыми структурными элементами.

1.5.3. Место действия антисмыслового олигонуклеотида в клетке.

1.6. Перспективы использования антисмысловых олигонуклеотидов.

II. СОЗДАНИЕ ЭФФЕКТИВНЫХ ИНГИБИТОРОВ ГЕННОЙ ЭКСПРЕССИИ НА ОСНОВЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ С ПРИРОДНЫМ САХАРО-ФОСФАТНЫМ ОСТОВОМ (ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ). 11.1. Активация концевых фосфатных групп олигонуклеотидов в водной среде. II. 1.1. Метод карбодиимидной конденсации.

II. 1.1.1. Конденсация мононуклеотидов с амино- и оксисоединениями. II. 1.1.2. Конденсация олигонуклеотидов с амино- и оксисоединениями. II. 1.1.3. Общая характеристика метода карбодиимидной конденсации.

II. 1.2. Конденсация олигонуклеотидов с оксисоединениями, индуцируемая бромцианом. II. 1.2.1. Влияние природы буфера на активацию фосфатной группы бромцианом. II. 1.2.2. Изучение механизма активации фосфатной группы методом ЯМР-спектроскопии. II. 1.2.3. Общая характеристика метода. II. 1.3. Фосфорилирующие производные олигонуклеотидов. П.2. Получение антисмысловых олигонуклеотидов, содержащих концевые ненуклеотидные группировки. И.2.1. Получение производных олигонуклеотидов с интеркаляторами. II.2.2. Получение производных олигонуклеотидов с пептидами. П.2.3. Получение производных олигонуклеотидов с липофильными соединениями.

П.З. Конструирование антисмысловых олигонуклеотидов с повышенной специфичностью взаимодействия с РНК-мишенями и устойчивостью к ферментативному гидролизу.

П.З. 1. Химерные антисмысловые олигонуклеотиды.

П.З. 1.1. Получение и гибридизационная способность химерных а-р олигонуклеотидов.

11.3.1.2. Устойчивость химерных олигонуклеотидов к нуклеазному гидролизу.

11.3.1.3. Специфичность взаимодействия химерных олигонуклеотидов с РНК-мишенью.

11.3.1.4. Ингибирование трансляции мРНК онкогена рт-1 химерными олигонуклеотидами.

11.3.2. Циклические антисмысловые олигонуклеотиды.

И.3.2.1. Получение циклических олигонуклеотидов.

11.3.2.2. Изучение термической стабильности дуплексов, образованных циклическими олигонуклеотидами.

11.3.2.3. Биологические свойства циклических олигонуклеотидов.

11.3.3. Псевдоциклические олигонуклеотиды.

П.3.3.1. Подтверждение вторичной структуры псевдоциклического олигонуклеотида.

II.3.3.2. Взаимодействие псевдоциклического олигонуклеотида с РНК-мишенью и его гидролитическая устойчивость.

11.3.4. Олигонуклеотиды, формирующие внутримолекулярные дуплексы.

И.3.4.1. Дизайн олигонуклеотидных конструкций.

11.3.4.2. Изучение гибридизации структурированных олигонуклеотидов с ДНК- и РНК-мишенями.

11.3.4.3. Гидролиз РНК-матрицы РНКазой Н в составе дуплексов с олигонуклеотидами.

11.3.4.4. Устойчивость олигонуклеотидов различной вторичной структуры в биологических средах.

11.4. Проникновение и внутриклеточное распределение олигонуклеотидов в присутствии систем-носителей.

11.4.1. Сравнение эффективности использования различных носителей для транспорта олигонуклеотидов в клетки.

11.4.2. Кинетика проникновения комплекса олигонуклеотида с дендримером в клетки.

11.4.3. Изучение влияния клеточного цикла на внутриклеточное распределение олигонуклеотидов.

11.5. Изучение кинетики гибридизации структурированных олигонуклеотидов с РНК-мишенями разной длины.

11.5.1. Дизайн олигонуклеотидов для изучения кинетики их гибридизации с разными РНК-матрицами.

11.5.2. Изучение взаимодействия структурированных олигонуклеотидов с разными матрицами.

11.5.3. Гибридизация антисмыслового олигонуклеотида с РНК в присутствии SuperFect™.

11.5.4. Исследование гибридизации структурированных олигонуклеотидов с мРНК белка оболочки вируса Friend ex vivo.

11.6. Изучение фармакологического действия антисмысловых олигонуклеотидов.

11.6.1. Разработка тест-системы для изучения биологического действия антисмысловых олигонуклеотидов.

11.6.2. Изучение ингибирующего действия антисмысловых олигонуклеотидов.

11.6.2.1. Влияние структуры олигонуклеотида на эффективность ингибирования.

11.6.2.2. Влияние концентрации антисмыслового олигонуклеотида на ингибирующее действие.

11.6.2.3. Зависимость величины ингибирующего действия антисмыслового олигонуклеотида от эффективности его проникновения в клетку.

II.6.3. Изучение механизма действия антисмысловых олигонуклеотидов.

III. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

IV. ВЫВОДЫ

V. Литература

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

В работе использованы символы и сокращения структурных компонентов нуклеиновых кислот в соответствии с рекомендациями Комиссии по номенклатуре Международного союза чистой и прикладной химии (IUPAC) и Международного Союза биохимиков (IUB), а также следующие обозначения:

НК - нуклеиновая кислота

АТР - аденозин-5'-трифосфат мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота н.п. - нуклеотидные пары

УФ-спектр - ультрафиолетовый спектр

ЯМР - ядерный магнитный резонанс м.д. - миллионные доли

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

МКХ - микроколоночная хроматография

ПААГ - полиакриламидный гель

Трис - трис(гидроксиметил)-аминометан

МЭС - 2-морфолино-этансульфокислота

HEPES - 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфокислота

ЭДТА - этилендиаминтетраацетат натрия

ЭДК - 1-этил-3(3'-диметиламинопропил)карбодиимид

ХС - ксиленцианол

ВРВ - бромфеноловый синий

FITC - флуоресцеинизотиоционата изомер I

ДМЕМ - культуральная среда,

BSA - альбумин бычьей сыворотки,

FBS - бычья сыворотка,

PMSF - ингибитор протеаз

NP-40 - детергент.

выводы

1. Предложена стратегия модификации концевых фосфатных групп олигонуклеотидов в водной среде, позволяющая получать фосфамидные и фосфодиэфирные производные незащищенных олигонуклеотидов с различными соединениями: флуоресцентными красителями, интеркаляторами, гидрофобными молекулами, аминокислотами, пептидами. Эта стратегия основана на активации фосфомоноэфирной группы олигонуклеотидов водорастворимым карбодиимидом или бромцианом с М-замещенным морфолином в присутствии различных нуклеофильных соединений.

2. Получено несколько новых типов антисмысловых олигонуклеотидов: химерные олигонуклеотиды, содержащие а-аномерные фрагменты, циклические, псевдоциклические и структурированные олигонуклеотиды. Изучено влияние их структуры на эффективность и специфичность их гибридизации с РНК-мишенями и их устойчивость к нуклеазному гидролизу в различных биологических системах.

Показано, что для химерных а-(3-олигонуклеотидов оптимальной с точки гибридизационной способности, гидролитической устойчивости и специфичности ингибирующего действия является структура, состоящая из одного а- и одного ^-фрагмента, соединенных между собой З'-концами. Циклические олигонуклеотиды обладают повышенной устойчивостью к нуклеазному гидролизу в биологических средах, особенно в тех, которые не имеют высокой эндонуклеазной активности, и способны образовывать с РНК достаточно устойчивые дуплексы. Однако в случае протяженных РНК, обладающих сложной пространственной структурой, эффективность их гидролиза РНКазой Н в комплексах с циклическими олигонуклеотидами существенно ниже, чем с линейными. Это можно объяснить тем, что циклическая структура олигонуклеотида затрудняет его взаимодействие со структурированной РНК. Кроме того, удлинение одноцепочечной части олигонуклеотида повышает возможность образования им нежелательных комплексов и тем самым может снизить специфичность действия циклических оли го нуклеотидо в.

Олигонуклеотиды, концы которых вовлечены в образование внутримолекулярных дуплексов, значительно устойчивее к ферментативному гидролизу, чем линейные олигонуклеотиды. Они способны эффективно гибридизоваться с комплементарными РНК, при этом происходит денатурация их внутримолекулярной структуры и образуются совершенные комплексы с мишенью. Учитывая доступность и простоту синтеза этих соединений, их наиболее целесообразно использовать в качестве антисмысловых реагентов.

3. Изучена способность двух коммерческих реагентов: полиамидоаминного дендримера SuperFect™ и катионных липосом DAC-30™ - обеспечивать транспорт фосфодиэфирных олигонуклеотидов через цитоплазматическую мембрану и предохранять их от ферментативного гидролиза в клетках HeLa и NIH ЗТЗ. Установлено, что SuperFect™ является более эффективным носителем для используемых олигонуклеотидов и клеток, чем DAC-30™.

4. Методом тушения флуоресценции изучено взаимодействие структурированных олигонуклеотидов с РНК-мишенью in vitro и ex vivo. Установлено, что скорость и эффективность этого взаимодействия снижаются с увеличением длины и усложнением структуры РНК. SuperFect™ не влияет на гибридизацию олигонуклеотида с протяженной мРНК, но полностью блокирует ее в случае короткой РНК-мишени. Оптимальной для антисмыслового олигонуклеотида с точки зрения эффективности и специфичности его взаимодействия с целевой мРНК является структура типа "ракетки" с небольшой петлей и коротким внутримолекулярным дуплексом с Тш, в районе 45-50°С.

5. Изучена зависимость между характером внутриклеточного распределения олигонуклеотидов, векторизованных SuperFect™, и тем, в какой фазе находится клетка. Обнаружена преимущественная ядерная локализация олигонуклеотида в клетках в фазе G2/M. Для клеток, находящихся в фазах G1 и S, характерно гетерогенное распределение олигонуклеотида с преимущественной его локализацией в эндосомах и других везикулах с кислой средой. Установлено, что невекторизованные фосфодиэфирные олигонуклеотиды могут проникать в облученные опухолевые клетки, при этом эффективность их проникновения зависит от дозы облучения.

6. Для оценки эффективности и специфичности действия, а также токсичности различным образом модифицированных антисмысловых олигонуклеотидов и систем-носителей разработана простая тест-система, которая позволяет быстро и количественно определить все перечисленные параметры. Она представляет собой два разных репортерных гена под контролем одного и того же промотора, уровень экспрессии которых можно количественно измерить. Один из этих генов (ген зеленого флуоресцирующего белка) используется как мишень для антисмыслового олигонуклеотида, второй (ген (3-галактозидазы) - как контроль его специфичности и токсичности. С использованием этой тест-системы измерено ингибирующее действие олигонуклеотидов различной структуры в присутствии двух носителей: БирегРе^™ и БАС-ЗО™

7. Установлено, что фосфодиэфирные олигонуклеотиды, имеющие структуру типа "ракетки" и содержащие по две тиофосфатные группы на концах, способны специфично подавлять экспрессию целевого гена зеленого флуоресцирующего белка (ОБР) с эффективности 70-80%. Степень ингибирования зависит от нескольких факторов: эффективности проникновения векторизованного олигонуклеотида в клетку, расположения участка его узнавания в структуре мРНК, стабильности вторичной структуры самого олигонуклеотида. Снижение уровня синтеза ОБР связано с непосредственным действием антисмысловых олигонуклеотидов на его мРНК, а не какими-либо вариациями в уровне трансфекции плазмид или изменениями в клеточном метаболизме.

8. По результатам ингибирования экспрессии ОБР выбран наиболее эффективный олигонуклеотид-ингибитор и изучен механизм его действия. Установлено, что подавление белкового синтеза связано с тем, что в присутствии антисмыслового олигонуклеотида происходит специфичное расщепление мРНК гена %[р РНКазой Н. Эффективность гидролиза мРНК увеличивается с увеличением концентрации олигонуклеотида. Степень гидролиза мРНК соответствует степени ингибирования белкового синтеза.

1. Uhlmann, E., Peyman, A. (1990). Antisense oligonucleotides: a new therapeutic principle. Chem. Reviews, 90, 544-584.

2. Agrawal, S. (1996). Antisense oligonucleotides: towards clinical trials. Trends Biotechnol., 14, 376-387.

3. Curcio, L.D., Bouffard, D.Y., Scanlon, K.J. (1997). Oligonucleotides as modulators of cancer gene expression. Pharmacol. Ther., 74, 317-332.

4. Eder, P.S., Devine, R.J., Dagle, J.M., Walder, J.A. (1991). Substrate specificity and kinetics of degradation of antisense oligonucleotides by a 3' exonuclease in plasma. Antisense Res. Dev., 1, 141-151.

5. Wickstrom, E. (1986). Oligodeoxynucleotide stability in subcellular extracts and culture media. J. Biochem. Biophys. Methods, 13, 97-102.

6. Agrawal, S., Mayrand, S.H., Zamecnik, P.C., Pederson, T. (1990). Site specific excision from RNA by RNase H and mixed-phosphate-backbone oligodeoxyribonucleotides. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 1401-1405.

7. Monia, B.P. (1997). First- and second-generation antisense inhibitors targeted to human c-raf kinase: in vitro and in vivo studies. Anticancer Drug Des., 12, 327-339.

8. Позмогова, Г.E., Кноре, Д.Г. (1998). Белковые и пептидные конструкции для доставки олигонуклеотидов и ДНК в клетки. Вопросы Медицинской Химии, 44, 331-337.

9. Mishra, R.K., Moreau, C., Ramazeilles, C., Moreau, S., Bonnet, J., Toulme, J.-J. (1995). Improved leishmanicidal effect of phosphorotioate antisense oligonucleotides by LDL-mediated delivery. Biochim. Biophys. Acta, 1264, 229-237.

10. Belikova, A.M., Zarytova, V.F., Grineva, N.I. (1967). Synthesis of ribonucleosides and diribonucleoside phosphates containing 2-chloroethylamine and nitrogen mustard residues. Tetrahedron Lett., 37, 3557-62.

11. Гринева, Н.И. (1977). Химическое алкилирование в специфичных комплексах как метод исследования структуры и функции нуклеиновых кислот и нуклеопротеидов. Биохимия, 42, 370-374.

12. Кнорре, Д.Г. (1977). Аффинная модификация белков, нуклеиновых кислот и их компонентов. Мол. биол., 11, 1304-1310.

13. Zamecnik, P.C., Stephenson, M.L. (1978). Inhibition of Rous sarcoma virus replication and cell transformation by a specific oligodeoxynucleotide. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 75, 280-284.

14. Stephenson, M.,L., Zamecnik, P.C. (1978). Inhibition of Rous sarcoma viral RNA translation by a specific oligodeoxyribonucleotide. Proc. Natl. Acad. Sci.bvgftr54 USA, 75, 285-288.

15. Kawasaki, E.S. (1985). Quantitative hybridization-arrest of mRNA in Xenopus oocytes using single-stranded complementary DNA or oligonucleotide probes. Nucleic Acids Res., 13, 4991- 5004.

16. Crooke, S.T. (1992). Therapeutic applications of oligonucleotides. Biotechnology (N. KJ, 70, 882-886.

17. Crooke, S.T., Bennett, C.F. (1996). Progress in antisense oligonucleotide therapeutics. Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol, 36, 107-129.

18. Stein, C.A., Cheng, Y.C. (1993). Antisense oligonucleotides as therapeutic agents is the bullet really magical? Science, 261, 1004-1012.

19. Chiang, M.Y., Chan, H., Zounes, M.A., Freier, S.M., Lima, W.F., Bennett, C.F. (1991). Antisense oligonucleotides inhibit intercellular adhesion molecule 1 expression by two distinct mechanisms. J. Biol. Chem., 266, 18162-18171.

20. Colige, A, Sokolov, B.P., Nugent, P., Baserga, R., Prockop, D.J. (1993). Use of an antisense oligonucleotide to inhibit expression of a mutated human procollagen gene (COL1 Al) in transfected mouse 3T3 cells. Biochemistry, 32, 7-11.

21. Dean, N.M., McKay, R. (1994). Inhibition of protein kinase C-alpha expression in mice after systemic administration of phosphorothioate antisense oligodeoxynucleotides. Proc. Natl Acad. Sci. U.S.A., 91, 11762-11766.

22. Gao, W.Y., Han, F.S., Storm, C., Egan, W., Cheng, Y.C. (1992). Phosphorothioate oligonucleotides are inhibitors of human DNA polymerases and RNase H: implications for antisense technology. Mol. Pharmacol, 41, 223-229.

23. Stein, C.A, Krieg, A.M. (1994). Problems in interpretation of data derived from in vitro and in vivo use of antisense oligodeoxynucleotides. Antisense Res. Dev., 4, 6769.

24. Stein, C.A. (1995). Does antisense exist? Nature Med., 1, 1119-1121.

25. Stein, C.A. (1997). Controversies in the cellular pharmacology of oligodeoxynucleotides. Ciba Found. Symp., 209, 79-93.

26. Wittung-Stafshede, P. (1998). Genetic medicine-when will it come to the drugstore? Science, 281, 657-658.

27. Stein, C.A. (1998). How to design an antisense oligodeoxynucleotide experiment: a consensus approach. Antisense Nucleic Acid Drug. Dev., 8, 129-132.

28. Helene, C., Toulme, J.-J. (1990). Specific regulation of gene expression by antisense, sense and antigene nucleic acids. Biochim. Biophys. Acta, 1049,99-125.

29. Stein, H., Haussen, P. (1969). Enzyme from calf thymus degrading the RNA moiety of DNA-RNA hybrids: effect on DNA dependent RNA polymerase. Science, 166, 393396.

30. Shuttleworth, J., Colman, A. (1988). Antisense oligonucleotide-directed cleavage of mRNA in Xenopus oocytes and eggs. EMBO J., 7, 427-434.

31. Eder, P.S., Walder, R.Y., Walder, J.A. (1993). Substrate specificity of human RNase H I and its role in excision repair of ribose residues misincorporated in DNA. Biochimie, 75, 123-126.

32. Busen, W., Peters, J.H., Hausen, P. (1977). Ribonuclease H levels during the response of bovine lymphocytes to concanavalin A. Eur. J. Biochem., 74, 203-208.

33. Busen, W. (1980). Purification, subunit structure, and serologicai analysis of calf thymus ribonuclease H I. J. Biol. Chem., 255, 9434-9443.

34. Kanaya, S., Ikehara, M. (1995). Functions and structures of ribonuclease H enzymes. Subcell. Biochem., 24, 377-422.

35. Torrence, P.P., Maitra, R.K., Lesiak, K., Khanmei, S., Zhou, A., Silverman, R.H. (1993). Targeting RNA for degradation with a (2'-5')oligoadenylate-antisense chimera. Proc. Natl. Acad. Sei. U.SA., 90, 1300-1304.

36. Robbins, I., Mitta, G., Vichier-Guerre, S., Sobol, R., Ubysz, A., Rayner, B., Lebleu, B. (1998). Selective mRNA degradation by antisense oligonucleotide-2,5A chimeras: involvement of RNase H and RNase L. Biochimie, 80, 711-720.

37. Wu, H., MacLeod, A.R., Lima, W.F., Crooke, S.T. (1998). Identification and partial purification of human double strand RNase activity. A novel terminating mechanism for oligoribonucleotide antisense drugs. J. Biol. Chem., 273, 2532-2542.

38. Goodchild, J., Carroll, E., Greenberg, J.R. (1988). Inhibition of rabbit beta-globin synthesis by complementary oligonucleotides: identification of mRNA sites sensitive to inhibition. Arch. Biochem. Biophys., 263, 401-409.

39. Bennett, C.F., Condon, T.P., Grimm, S., Chan, H., Chiang, M Y. (1994). Inhibition of endothelial cell adhesion molecule expression with antisense oligonucleotides. Immunol., 152, 3530-3540.

40. Monia, B.P., Johnston, J.F., Ecker, D.J., Zounes, M.A., Lima, W.F., Freier, S.M. (1992). Selective inhibition of mutant Ha-ras mRNA expression by antisense oligonucleotides. J. Biol. Chem., 267, 19954-19962.

41. Wagner, R.W. (1994). Gene inhibition using antisense oligodeoxynucleotides. Nature, 572, 333-335.

42. Cazenave, C., Chevrier, M., Nguyen, T.T., Helene, C. (1987). Rate of degradation of alpha.- and [beta]-oligodeoxynucleotides in Xenopus oocytes. Implications for antimessenger strategies. Nucleic Acids Res., 15, 10507-10521.

43. Dagle, J.M., Weeks, D.L., Walder, J.A. (1991). Pathways of degradation and mechanism of action of antisense oligonucleotides in Xenopus laevis embryos. Antisense Res. Dev., 1, 11-20.

44. Agrawal, S., Temsamani, J., Tang, J.Y. (1991). Pharmacokinetics, biodistribution, and stability of oligodeoxynucleotide phosphorothioates in mice. Proc. Natl. Acad. Sci. U.SA., 88, 7595-7599.

45. Bennett, R.M. (1993). As nature intended? The uptake of DNA and oligonucleotides by eukaryotic cells. Antisense. Res. Dev., 3, 235-241.

46. Budker, V.G., Knorre, D.G., Vlassov, V.V. (1992) Celle membranes as barriers for antisense oligonucleotides. Antisense Res. Dev., 2, 177-184.

47. Miller, P.S., Yano, J., Yano, E., Carroll, C., Jajaraman, K., Ts'o, P.O.P. (1979). Nonionic nucleic acids analogues. Synthesis and characterization of deoxyribonucleotide methylphosphonates. Biochemistry, 18, 5134-5143.

48. Зарытова, В.Ф., Карпова, Г.Г., Кнорре, Д.Г., Попова, B.C., Стефанович, JT.E., Шешегова, Е.А. (1980). Алкилирующие производные этиловых эфиров олигонуклеотидов проникающие в клетки комплементарно-адресованные реагенты. Дот. АН СССР, 255, 10-13.

49. Stec, W.J., Zon, G., Egan, W., Stec, B. (1984). Automated solid-phase synthesis, separation and stereochemistry of phosphorothioate analogues of oligodeoxyribonucleotides. J. Amer. Chem. Soc., 106, 6077-6079.

50. Gryaznov, S.M., Lloyd, D.H., Chen, J.-K., Schultz, R.C., DeDionisio, L.A., Ratmeyer, L., Wilson, W.D. (1995). Oligodeoxyribonucleotide N3'->P5' phosphoramidates. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 92, 5798-5802.

51. Agrawal, S., Goodchild, J. (1987). Oligonucleotide methylphosphonates: synthesis and enzymatic degradation. Tetrahedron Lett., 28, 3539-3542.

52. Hoke, G.D, Draper, K., Freier, S.M., Gonzalez, C., Driver, V.B., Zounes, M.C., Ecker, D.J. (1991). Effects of phosphorothioate capping on antisense oligonucleotide stability, hybridization and antiviral efficacy versus herpes simplex virus infection.

53. Nucleic Acids Res., 19, 5743-5748.

54. Tidd, D.M., Warenius, H.M. (1989) Partial protection of oncogene antisense oligodeoxynucleotides against serum nuclease degradation using terminal methylphosphonate groups. Br. J. Cancer, 60, 343-350.

55. Stein, C.A., Subasinghe, C., Shinozuka, K, Cohen, J.S. (1988). Physicochemical properties of phosphorothioate oligodeoxynucleotides. Nucleic Acids Res., 16, 32093221.

56. Zamecnik, P.C., Agrawal, S. (1991). Oligodeoxynucleotide hybridization inhibition of HIV and influenza virus. Nucleic Acids Symp. Ser., 127-131.

57. Watson, P.H., Pon, R.T., Shiu, R.P. (1991). Inhibition of c-myc expression by phosphorothioate antisense oligonucleotide identifies a critical role for c-myc in the growth of human breast cancer. Cancer Res., 51, 3996-4000.

58. Monia, B P., Johnston, J.F., Geiger, T., Muller, M., Fabbro, D. (1996). Antitumor activity of a phosphorothioate antisense oligodeoxynucleotide targeted against C-raf kinase. Nature Med., 2, 668-675.

59. Krieg, A.M., Stein, C.A. (1995). Phosphorothioate oligodeoxynucleotides: antisense or anti-protein? Antisense Res. Dev., 5, 241

60. Gao, W.Y., Stein, C.A., Cohen, J.S., Dutschman, G.E., Cheng, Y.C. (1989). Effect of phosphorothioate homo-oligodeoxynucleotides on herpes simplex virus type 2 -induced DNA polymerase. J. Biol. Chem., 264, 11521-11526.

61. Stein, C.A., Tonkinson, J.L., Yakubov, L. (1991). Phosphorothioate oligodeoxynucleotides antisense inhibitors of gene expression? Pharmacol. Ther., 52, 365-384.

62. Stein, C.A., Neckers, L.M., Nair, B.C., Mumbauer, S., Hoke, G., Pal, R. (1991). Phosphorothioate oligodeoxycytidine interferes with binding of HIV-1 gpl20 to CD4. J. AIDS, 4,686-693.

63. Srinivasan, S.K., Tewary, H.K., Iversen, P.L. (1995). Characterization of binding sites, extent of binding, and drug interactions of oligonucleotides with albumin. Antisense Res. Dev., 5, 131-139.

64. Dorr F.A. (1999). Antisense oligonucleotides in the treatment of cancer. Antisense Nucl. Acid Drug Dev., 9, 391-396.

65. Miller, P.S., McPariand, K.B., Jayaranian, K., Ts'o P.O.P. (1981). Biochemical and biological effects of nonionic nucleic acid methylphosphonates. Biochemistry, 20, 1874-1880.

66. Miller, P.S. (1991). Oligonucleoside methylphosphonates as antisense reagents. Biotechnology (N.Y.), 9, 358-362.

67. Akhtar, S., Basu, S., Wickstrom, E., Juliano, R.L. (1991). Interactions of antisense DNA oligonucleotide analogs with phospholipid membranes (liposomes). Nucleic Acids Res., 19, 5551-5559.

68. Chang, E.H., Miller, P.S., Cushman, C., Devadas, K„ Pirollo, K.F., Ts'o P.O.P., Yu, Z.P. (1991). Antisense inhibition of ras p21 expression that is sensitive to a point mutation. Biochemistry, 30, 8283-8286.

69. Gryaznov, S., Skorski, T., Cucco, C., Nieborowska-Skorska, M., Chiu, C.Y., Lloyd, D., Chen, J.K., Koziolkiewicz, M., Calabretta, B. (1996). Oligonucleotide N3'->P5' phosphoramidates as antisense agents. Nucleic Acids Res., 24, 1508-1514.

70. Barsky, D., Colvin, M.E., Zon, G., Gryaznov, S. (1997). Hydration effects on the duplex stability of phosphoramidate DNA-RNA oligomers. Nucleic Acids Res., 25, 830-835.

71. Skorski, T., Perrotti, D., Nieborowska-Skorska, M., Glyaznov, S., Calabretta, B. (1997). Antileukemia effect of c-myc N3'—>P5' phosphoramidate antisense oligonucleotides in vivo. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 94, 3966-3971.

72. Tosquellas G., Alvarez K., Dell'Aquila C., Morvan F., Vasseuer J.-J., Imbach J.-L., Rayner B. (1998). The pro-oligonucleotide approach: solid phase synthesis and preliminary evaluation of model pro-dodecathymidylates. Nucleic Acids Res., 26, 2069-2074.

73. Morvan, F., Rayner, B., Imbach, J.-L. (1993). Alpha-oligodeoxynucleotides. Methods Mol. Biol., 20, 261-283.

74. Stein, D., Foster, E., Huang, S.B., Weller, D., Summerton, J. (1997). A specificity comparison of four antisense types: morpholino, 2'-0-methyl RNA, DNA, and phosphorothioate DNA. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 1, 151-157.

75. Brown-Driver V., Eto T., Lesnik E., Anderson K.P., Hanecak R. (1999). Inhibition of translation of hepatitis C virus RNA by 2'-modified antisense oligonucleotides. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 9, 145-154.

76. Wang A., Wang J.H. (1999). Effective treatment of murine leukemia with antisense poly-2'-0-(2,4-dinitrophenyl)-oligoribonucleotides. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 9, 43-51.

77. Hudziak R.M., Barovsky E., Barovsky D.F., Weller D.L., Huang S.B., Weller D.D. (1996). Resistance of morpholino phosphoramidate oligomers to enzymatic degradation. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 6, 267-272.

78. Summerton, J., Weller, D. (1997). Morpholino antisense oligomers: design, preparation, and properties. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 1, 187-195.

79. Summerton, J., Stein, D., Huang, S.B., Matthews, P., Weller, D., Partridge, M. (1997). Morpholino and phosphorothioate antisense oligomers compared in cell-free and in cell systems. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 7, 63-70.

80. Giles, R.V., Spiller, D.G., Clark, R.E., Tidd, DM. (1999). Antisense morpholino oligonucleotide analog induces missplicing of C-myc mRNA. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 9, 213-220.

81. Schmajuk G., Sierakowska H., Kole R. (1999). Antisense oligonucleotides with different backbones. J. Biol. Chem., 274, 21783-21789.

82. Nielsen, P.E. (1995). DNA analogues with nonphosphodiester backbones. Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct., 24, 167-183.

83. Buhr C., Wagner R.W., Grant D., Froehker B.C. (1996). Oligonucleotides containing C-7 propyne analogs of 7-deaza-2'-deoxyguanosine and 7-deaza-2'-deoxyadenosine.

84. Nucleic Acids Res., 24, 2974-2980.

85. Moulds C., Lewis J.G., Froehler B.C., Grant D., Huang T., Milligan J.F., Matteucci M.D., Wagner R.W. (1995). Site and mechanism of antisense inhibition by C-5 propyne oligonucleotides. Biochemistry, 34, 5044-5053.

86. Flanagan W.M., Kothavale A., Wagner R.W. (1996). Effects of oligonucleotide length, mismatches and mRNA levels on C-5 propyne-modified antisense potency.

87. Nucleic Acids Res., 24, 2936-2941.

88. Gutierrez A.J., Matteucci M.D., Grant D., Matsumura S., Wagner R.W., Froehler B.C. (1997). Antisense gene inhibition by C-5-substituted deoxyuridine-containing oligodeoxynucleotides. Biochemistry, 36, 743-748.

89. Wagner, R.W., Matteucci, M.D., Lewis, J.G., Gutierrez, A.J., Moulds, C., Froehler, B.C. (1993). Antisense gene inhibition by oligonucleotides containing C-5 propyne pyrimidines. Science, 260, 1510-1513.

90. Hamel, Y., Lacoste, J., Frayssinet, C., Sarasm, A., Garestier, T., Francois, J.-C., Helene, C. (1999). Inhibition of gene expression by anti-sense C-5 propyne oligonucleotides detected by a reporter enzyme. Biochem. J., 339, 547-553.

91. Giles, R. Tidd, D. (1992). Increased specificity for antisense oligodeoxynucleotide targeting of RNA cleavage by RNaseH using chimeric methylphosphonodiester/phosphodiester structures. Nucleic Acids Res., 20, 763-770.

92. McKay, R.A., Miraglia, L.J., Cummins, L.L., Owens, S.R., Sasmor, H., Dean, N.M. (1999). Characterization of a potent and specific class of antisense oligonucleotide inhibitor of human protein kinase C-alpha expression. J. Biol. Chem., 274, 1715-1722.

93. Finn P.J., Gibson N.J., Fallon R., Hamilton A., Brown T. (1996). Synthesis and properties of DNA-PNA chimeric oligomers. Nucleic Acids Res., 24, 3357-3363.

94. Uhlmann, E. (1998). Peptide nucleic acids (PNA) and PNA-DNA chimeras: from high binding affinity towards biological function. Biol. Chem., 379, 1045-1052.

95. Gamper H.B., Reed M.W., Cox T., Virosco J.S., Adams A.D., Gall A.A., Scholler J.K., Meyer R.B. (1993). Facile preparation of nuclease resistant 3' modified oligodeoxynucleotides. Nucleic Acids Res., 21, 145-150.

96. Verspieren, P., Cornelissen, A., Thuong, N,T., Helene, C., Toulme, J.-J. (1987) An acridine-linked oligodeoxynucleotide targeted to the common 5'-end of Trypanosome mRNA kills cultered parasites. Gene, 61, 307-315.

97. Asseline, U., Bonfils, E., Dupret, D., Thuong, N. T. (1996). Synthesis and binding properties of oligonucleotides covalently linked to an acridine derivative: A new study of the influence of the dye attachment site. Bioconjugate Chem., 7, 369-379.

98. Asseline, U., Thuong, N. T., Helene, C. (1997). Synthesis and properties of oligonucleotides covalently linked to intercalating agents. New J. Chem., 21, 5-17.

99. Zerial, A., Thuong, N.T., Helene, C. (1987). Selective inhibition of the cytopathic effect of type A influenza viruses by oligodeoxynucleotides covalently linked to an intercalating agent. Nucleic Acids Res., 15, 9909-9919.

100. Абрамова, T.B., Власов, В.В., Зарытова, В.Ф., Иванова, Е.М., Кулигина, Е.А., Райт, А.С. (1991). Влияние модификации концов олигонуклеотидов на их стабильность в культурах клеток. Мол. биол., 25, 624-632.

101. Абрамова, Т.В., Власов, В.В., Иванова, Е.М., Зарытова, В.Ф., Фокина, Т.Н., Фролова, Е.И., Юрченко, JI.B. (1994). Подавление трансляции мРНК NP-белка вируса гриппа in vitro производными антисмыслового олигонуклеотида. Мол. биол., 28, 307-312.

102. Дедовских, Н.Б., Юрченко, Л.В., Невинский, Г.А., Фролова, Е.И., Иванова, Е.М., Кошкин, А.А., Булычев, Н.А., Зарытова, В.Ф., Власов, В.В. (1992). Подавление транскрипции РНк вируса гриппа производными олигонуклеотидов. Мол. биол., 26, 635-644.

103. Toulme, J.-J., Lettinevez, R., Brossalina, E. (1996). Targeting RNA structures by antisense oligonucleotides. Biochimie, 78, 663-673.

104. Bruice, T. W., Lima, W. F. (1997). Control of complexity constraints on combinatorial screening for preferred oligonucleotide hybridization sites on structured RNA. Biochemistry, 36, 5004-5019.

105. Cload, S. Т., Richardson, P. L., Huang, Y. H., Schepartz, A. (1993). Kinetic and thermodynamic analysis of RNA binding by tethered oligonucleotide probesalternative structures and conformational changes. J. Amer. Chem. Soc., 115, 50055014.

106. Brossalina, E., Pascolo, E., Toulme, J.-J. (1993). The binding of an antisense oligonucleotide to a hairpin structure via triplex formation inhibits chemical and biological reactions. Nucleic Acids Res., 21, 5616-5622.

107. Brossalina, E., Demchenko, Y., Vlassov, V., Toulme, J.-J. (1996). Triplex-forming oligonucleotides trigger conformation changes of a target hairpin sequence. Nucleic Acids Res., 24, 3392-3398.

108. Francois, J.-C., Helene, C. (1999). Recognition of haipin-containing single-stranded DNA by oligonucleotides containing internal acridine derivatives. Bioconjugate Chem., 10, 439-446.

109. Ali, О. M., Franch, Т., Gerdes, K., Pedersen, E. B. (1998). Targeting of nucleic acid junctions: addressing to a branch point an oligodeoxynucleotide conjugated with an intercalator. Nucleic Acids Res.,. 26, 4919-4924.

110. Кнорре, Д.Г., Власов, В.В. (1983). Олигонуклеотиды и их производные как биологически активные вещества Вестник АН СССР, 12, 74-81.

111. Knorre, D.G., Vlassov, V.V., Zarytova, V.F. (1985). Reactive oligonucleotide derivatives and sequence-specific modification of nucleic acids. Biochimie, 67, 785789.

112. Knorre, D.G., Vlassov, V.V., Zarytova, V.F., Lebedev, A.V., Fedorova, O.S. (1994). Design and targeted reactions of oligonucleotide derivatives. Boca Raton, Florida: CRC Press.

113. Vlassov, V.V. (1994). The Lock- and Key Principe. Ed. Behr J.-P., New-York: Wiley, 89-147.

114. Зарытова, В.Ф., Иванова, E.M., Карпова, Г Г., Кнорре, Д.Г., Пичк,о Н.П., Райт, А.С., Стефанович, Л.Е. (1981). Комплементарно адресованное алкилирование поли(А)-фрагмента мРНК в клетках асцитной карциномы Кребса. Биоорган, химия, 7, 1512-1522.

115. Ryte, A.S., Karamyshev, V.N., Nechaeva, M.V., Guskova, Z.V., Ivanova, E.M., Zarytova, V.F., Vlassov, V.V. (1992). Interaction of cholesterol-conjugated alkylating oligonucleotide derivatives with cellular biopolymers. FEBS Lett., 303, 124-126.

116. Chernolovskaya, E.L., Kobets, N.D., Borissov, R.G., Abramova, T.V., Vlassov, V.V. (1992). Affinity modification of human chromatin with reactive derivatives of oligonucleotides. FEBS Lett., 303, 269-271.

117. Yakubov, L., Khaled, Z., Zhang, L.M., Truneh, A., Vlassov, V., Stein, C.A. (1993). Oligodeoxynucleotides interact with recombinant CD4 at multiple sites. J. Biol. Chem., 268, 18818-18823.

118. Шестова, O.E., Андреева, А.Ю., Власов, В.В., Якубов, JI.A. (1999). Транспорт комплексов олигонуклеотидов с белками клеточной поверхности в клеточное ядро. Докл. Акад. Наук, 368, 264-267.

119. Webb, T.R., Matteucci, M.D. (1986). Sequence-specific cross-linking of deoxyoligonucleotides via hibridization-triggered alkylation. J. Amer. Chem. Soc., 108, 2764-2765.

120. Webb, T.R., Matteucci, M.D. (1986). Hibridization-triggered cross-linking of oligonucleotides. Nucleic Acids Res., 14, 7661-7674.

121. Kang, H., Rokita, S.E. (1996). Site-specific and photo-induced alkylation of DNA by dimethylanthraquinone-oligodeoxynucleotide conjugate. Nucleic Acids Res., 24, 38963902.

122. Mastruzzo, L., Woisard, A., Ma, D.D., Rizzarelli, E., Favre, A., Le Doan, T. (1994). Targeted photochemical modification of HIV-derived oligoribonucleotides by antisense oligodeoxyribonucleotides linked to porphyrins. Photochem. Photobiol., 60, 316-322.

123. Nakatani, K., Shirai, J., Sando, S., Saito, I. (1997). Guanine specific DNA cleavage by photoirradiation of dibenzoyldiazomethane-oligonucleotide conjugates. J. Amer. Chem. Soc., 119, 7626-7635.

124. Helene, С., Thuong, N.T., Saison-Behmoaras, Т., Francois, J.-C. (1989). Sequence-specific artificial endonucleases. Trends in Biotechnol., 7, 310-315.

125. Frolova, E.I., Fedorova, O.S., Knorre, D.G. (1993). Kinetic study of the addressed modification by hemin derivatives of oligonucleotides. Biochimie, 75, 5-12.

126. Doan, Т., Perrouault, I., Chassignol, M., Thuong, N.T., Helene, С. (1986). Sequence-specific chemical modifications of nucleic acids by complementary oligonucleotides covalently linked to iron-porphyrins. Nucleic Acids Res., 15, 86438659.

127. Bigey, P., Pratviel, G., Meunier, B. (1995). Cleavage of double-stranded DNA by "metalloporphyrin-linker-oligonucleotide" molecules: influence of the linker. Nucleic Acids Res., 23, 3894-3900.

128. Бросалина, Е.Б., Власов, ВВ., Казаков, С.A. (1988). Комплементарно-адресованная модификация одноцепочечной ДНК с помощью (Fe ЭДТА)-производного олигонуклеотида. Биоорганич. химия, 14, 125-128.

129. Magda, D., Miller, R.A., Sessler, J.L., Iverson, B.L. (1994). Site-specific hydrolysis of RNA by europium (III) texaphyrin conjugated to a synthetic oligodeoxyribonucleotide. J. Amer. Chem. Soc., 16, 7439-7440.

130. Hall, J., Husken, D., Haner, R. (1996). Towards artificial ribonucleases: the sequence-specific cleavage of RNA in a duplex. Nucleic Acids Res., 24, 3522-3526.

131. Sergeev, D.S., Zarytova, V.F., Mamaev, S.V., Godovikova, T.S., Vlassov, V.V. (1992). Sequence-specific cleavage of single-stranded DNA by oligonucleotides conjugated to bleomycin. Antisense Res. Dev., 2, 235-241.

132. Vlassov, V., Abramova, Т., Godovikova, Т., Giege, R., Silnikov, V. (1997). Sequence-specific cleavage of yeast tRNAPhe with oligonucleotides conjugated to diimidazole construct. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 7, 39-42.

133. Fedorova, O.S., Podust, L.M., Maksakova, G.A., Gorn, V.V., Knorre, D.G. (1992). The influence of the target structure on the efficiency of alkylation of single-stranded DNA with reactive derivatives of antisense oligonucleotides. FEBSLett., 302, 47-50.

134. Dobrikov, M.I., Gaidamakov, S.A., Gainutdinov, T.I., Koshkin, A.A. Vlassov, V.V. (1997). Sensitized photomodification of single-stranded DNA by a binary systems of oligonucleotide conjugates. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 7, 309-317.

135. Воробьев, П.Е., Маркушин, Ю.Я., Сергеев, Д.С., Зарытова, В.Ф. (1996). Повышение эффективности сайт-специфического расщепление ДНК-мишени блеомициновым производным тетрануклеотида с помощью олигонуклеотидов-эффекторов. Биоорган, химия, 22, 111-116.

136. Dobrikov, M.I., Gaidamakov, S.A., Gainutdinov, T.I., Koshkin, A.A., Vlassov, V.V. (1997). Sensitized photomodification of single-stranded DNA by a binary system of oligonucleotide conjugates. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 7, 309-317.

137. Polushin, N.N., Cohen, J.S. (1994). Antisense pro-drugs: 5'-ester oligodeoxynucleotides. Nucleic Acids Res., 22, 5492-5496.

138. Ramazeilles, C., Mishra, R.K., Moreau, S., Pascolo, E., Toulme, J.-J. (1994). Antisense phosphorothioate oligonucleotides: selective killing of the intracellular parasite Leishmania amazonensis. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A, 91, 7859-7863.

139. Svinarchuk, F.P., Konevetz, D.A., Pliasunova, O.A., Pokrovsky, A.G., Vlassov, V.V. (1993). Inhibition of HIV proliferation in MT-4 cells by antisense oligonucleotide conjugated to lipophilic groups. Biochimie, 75, 49-54.

140. Bonora, G.M., Ivanova, E., Zarytova, V., Burcovich, В., Veronese, F.M. (1997). Synthesis and characterization of high-molecular mass polyethylene glycol-conjugated oligonucleotides. Bioconjugate Chem., 8, 793-797.

141. Vorobjev, P.E., Zarytova, V.F., Bonora, G.M. (1999). Oligonucleotide conjugated to linear and branched high molecular weight polyethylene glycol as substrates for RNase H. Nucleosides Nucleotides, 18, 2745-2750.

142. White, J.M. (1992). Membrane fusion. Science, 258, 917-924.

143. Morris, M.C., Vidal, P., Chaloin, L., Heitz, F., Divita, G. (1997). A new peptide vector for efficient delivery of oligonucleotides into mammalian cells. Nucleic Acids Res., 25, 2730-2736.

144. Bongartz, J.P., Aubertin, A.M., Milhaud, P.O., Lebleu, B. (1994). Improved biological activity of antisense oligonucleotides conjugated to a fusogenic peptide. Nucleic Acids Res., 22, 4681-4688.

145. Pichon, C., Freulon, I., Midoux, P., Mayer, R., Monsigny, M., Roche A.-C. (1997). Cytosolic and nuclear delivery of oligonucleotides mediated by an amphiphilic anionic peptide. Antisense Res. Dev., 7, 335-343.

146. Hughes, J.A., Aronsohn, A.I., Avrutskaya, A.V., Juliano, R.L. (1996). Evaluation of adjuvants that enhance the effectiveness of antisense oligodeoxynucleotides. Pharmaceutical Res., 13,404-410.

147. Degols, G., Leonetti, J.P., Benkirane, M., Devaux, C., Lebleu, B. (1992). Poly(L-lysine)-conjugated oligonucleotides promote sequence-specific inhibition of acute HIV-1 infection. Antisense Res. Dev., 2, 293-301.

148. Sebestyen, M.G., Ludtke, J.J., Bassik, M.C., Zhang, G., Budker, V., Lukhanov, E.A., Hagstrom, J.E., Wolff, J.A. (1998). DNA vector chemistry: the covalent attachment of signal peptides to plasmid DNA. Nature Biotechnol., 16, 80-85.

149. Bachmann, A.S., Surovoy, A., Jung, G., Moelling, K. (1998). Integrin receptor-targeted transfer peptides for efficient delivery of antisense oligodeoxynucleotides. J. Mol.Med, 76, 126-132.

150. Soukchareun, S., Tregear, G.W., Haralambidis, J. (1995). Preparation and characterization of antisense oligonucleotide-peptide hybrids containing viral fusion peptides. Bioconjugate Chem., 6, 43-53.

151. Vives, E., Brodin, P., Lebleu, B. (1997). A truncated HIV-1 Tat protein basic domain rapidly translocates through the plasma membrane and accumulates in the cell nucleus. J. Biol. Chem., 272, 16010-16017.

152. Derossi, D., Joliot, A.H., Chassaing, G., Prochiantz, A. (1994). The third helix of the Antennapedia homeodomain translocates through biological membranes. J. Biol. Chem., 269, 10444-10450.

153. Pichon, C., Arar, K, Stewart, A.J., Dodon, M.D., Gazzolo, L., Courtoy, P.J., Mayer, R., Monsigny, M., Roche, A.C. (1997). Intracellular routing and inhibitory activity of oligonucleopeptides containing a KDEL motif. Mol. Pharmacol, 57, 431-438.

154. Derossi, D., Calvet, S., Trembleau, A., Brunissen, A., Chassaing, G., Prochiantz, A. (1996). Cell internalization of the third helix of the Antennapedia homeodomain is receptor-independent. J. Biol. Chem., 271, 18188-18193.

155. Noonberg, S.B., Garovoy, M.R., Hunt, C.A. (1993). Characteristics of oligonucleotide uptake in human keratinocyte cultures. J. Invest. Dermatol., 707, 727-731.

156. Zamecnik, P.C., Agnajanian, 1., Zamecnik, M., Goodchild, J., Witman, G. (1994). Electron micrographie studies of transport of oligodeoxynucleotides across eukaryotic cell membranes. Proc. Natl. Acad. Sci. U.SA., 91, 3156-3160.

157. Crooke, R.M., Graham, M.J., Cooke, M.E., Crooke, S.T. (1995). In vitro pharmacokinetics of phosphorothioate antisense oligonucleotides. J. Pharmacol. Exp. Ther., 275, 462-473.

158. Shoji, Y., Akhtar, S., Periasamy, A., Herman, В., Juliano, R.L. (1991). Mechanism of cellular uptake of modified oligodeoxynucleotides containing methylphosphonate linkages. Nucleic Acids Res., 19, 5543-5550.

159. Tarrason, G., Bellido, D., Eritja, R., Vilaro, S., Piulats, J. (1995). Digoxigenin-labeled phosphorothioate oligonucleotides: a new tool for the study of cellular uptake. Antisense Res. Dev., 5, 193-201.

160. Yakubov, L.A., Deeva, E.A., Zarytova, V.F., Ivanova, E.M., Ryte, A.S., Yurchenko, L.V., & Vlassov, V.V. (1989). Mechanism of oligonucleotide uptake by cells: involvement of specific receptors? Proc. Natl. Acad. Sci. U.SA., 86, 6454-6458.

161. Yakubov, L., Yurchenko, L., Nechaeva, M., Rykova, E., Karaymshev, V., Tonkinson, J., Vlassov, V., Stein, C.A. (1991). Interaction of oligonucleotides with cellular receptors. Nucleic Acids Symp. Ser., 311.

162. Vlassov, V.V., Deeva, E.A., Nechaeva, M.N., Rykova, E.N. Yabukov, L A. (1991). Interaction of oligonucleotide derivatives with animal cells. Nucleotides Nucleosides, 10, 581-582.

163. Власов, В.В., Иванова, Е.М., Нечаева, М.В., Рыкова, Е.Ю., Якубов, Л.А., Зон, Д. (1993). Аффинная модификация белков, связывающих нуклеиновые кислоты в клетках млекопитающих, алкилирующими производными олигонуклеотидов. Биохимия, 58, 962-966.

164. Yao, G.Q., Comas, S., Cheng, Y.C. (1996). Identification of two oligodeoxyribonucleotide binding proteins on plasma membranes of human cell lines.

165. Biochem. Pharmacol, 57, 431-436.

166. Власов, В.В., Паутова, Л.В., Рыкова, ЕЮ., Якубов, Л.А. (1993). Взаимодействие олигонуклеотидов с белками сыворотки крови. Биохимия, 58, 1247-1251.

167. Кит, Ю.Я., Кулигина, Е.В., Романникова, И.В., Семенов, Д.В., Рихтер, В.А., Власов, В.В. (1998). В препаратах человеческого а-лакальбумина.индуцирующих апоптоз трансформированных клеток, присутствуют рибоолигонуклеотиды. Докл. Акад. Наук, 360, 406-408.

168. Кулигина, Е.В., Андреева, Е.В., Могельницкий, А.С., Кит, Ю.Я., Якубов, JI.A., Рихтер, В.А., Власов, В.В. (1999). Олигонуклеотиды и олигонуклеотид-связывающие белки спинномозговой жидкости человека. Докл. Акад. Наук, 364, 832-834.

169. Якубов, ДА., Шестова, О.Е., Андреева, А.Ю., Власов, В.В. (1998). Участие специфических белков клеточной поверхности в транспорте нуклеиновых кислот в клетки. Докл. Акад. Наук, 361, 550-553.

170. Власов, В.В., Нечаева, М.В., Байбородин, С.И., Шестова, О.Е., Сафронов, И.В., Кошкин, А.А. Якубов, Л.А. (1995). Поглощенные клеткой олигонуклеотиды быстро накапливаются в ядре. Докл. Акад. Наук, 345, 123-126.

171. Hawle,y P., Nelson, J.S., Fearon, К., Zon, G., Gibson, I. (1999). Comparison of binding N3'—>N5' phosphoramidate and phosphorothioate oligonucleotides to cell surface proteins of culted cells. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 9, 61-69.

172. Zhao, Q., Song, X., Waldschmidt, T., Fisher, E., Krieg, A.M. (1996). Oligonucleotide uptake in human hematopoietic cells is increased in leukemia and is related to cellular activation. Blood, 88, 1788-1795.

173. Noonberg, S.B., Scott, O.K., Garovoy, M.R., Benz, C.C., Hunt, C.A. (1994). In vivo generation of highly abundant sequence-specific oligonucleotides for antisense and triplex gene regulation. Nucleic Acids Res., 22, 2830-2836.

174. Fisher, T.L., Terhorst, T., Cao, X., Wagner, R.W. (1993). Intracellular disposition and metabolism of fluorescently-labeled unmodified and modified oligonucleotides microinjected into mammalian cells. Nucleic Acids Res., 21, 3857-3865.

175. Clarenc, J.P., Lebleu, B., Leonetti, J.-P. (1993). Characterization of the nuclear binding sites of oligodeoxyribonucleotides and their analogs. J. Biol. Chem., 268, 5600-5604.

176. Poddevin, B., Meguenni, S., Elias, I., Vasseur, M., Blumenfeld, M. (1994). Improved anti-herpes simplex virus type 1 activity of a phosphodiester antisense oligonucleotide containing a 3'-terminal hairpin-like structure. Antisense Res. Dev., 4, 147-154.

177. Bergan, R., Connell, Y., Fahmy, B., Neckers, L. (1993). Electroporation enhances c-myc antisense oligodeoxynucleotide efficacy. Nucleic Acids Res., 21, 3567-3573.

178. Barry, E.L, Gesek, F.A., Friedman, P.A. (1993). Introduction of antisense oligonucleotides into cells by permeabilization with streptolysin O. Biotechniques, 15, 1016-8,1020.

179. Spiller, D.G., Tidd, D.M. (1995). Nuclear delivery of antisense oligodeoxynucleotides through reversible permeabilization of human leukemia cells with streptolysin O. Antisense Res. Dev., 5, 13-21.

180. Butler, M., Stecker, K, Bennett, C.F. (1997). Cellular distribution of phosphorothioate oligodeoxynucleotides in normal rodent tissues. Lab. Invest., 77, 379-388.

181. Srinivasan, S.K., Iversen, P. (1995). Review of in vivo pharmacokinedcs and toxicology of phosphorothioate oligonucleotides. J. Clin. Lab. Anal., 9, 129-137.

182. Agrawal, S., Iyer, R.P. (1997). Perspectives in antisense therapeutics. Pharmacol. Ther., 76, 151-160.

183. Bennett, C.F. (1998). Antisense oligonucleotides: is the glass half foil or half empty? Biochem. Pharmacol, 55, 9-19.

184. Oberbauer, R., Schreiner, G.F., Meyer, T.W. (1995). Renal uptake of an 18-mer phosphorothioate oligonucleotide. Kidney Int., 48, 1226-1232.

185. Biessen, E.A., Vietsch, H., Kuiper, J., Bijsterbosch, M.K., Berkel, T.J. (1998). Liver uptake of phosphodiester oligodeoxynucleotides is mediated by scavenger receptors. Mol. Pharmacol, 53, 262-269.

186. Mann, M.J., Gibbons, G.H., Hutchinson, H., Poston, R.S., Hoyt, E.G., Robbins, R.C., Dzau, V.J. (1999). Pressure-mediated oligonucleotide transfection of rat and human cardiovascular tissues. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96, 6411-6416.

187. Nesterova, M., Cho-Chung, Y.S. (1995). A single-injection protein kinase A-directed antisense treatment to inhibit tumour growth. Nat. Med., 7, 528-533.

188. Cho-Chung, Y.S., Nesterova, M., Kondrashin, A., Noguchi, K., Srivastava, R., Pepe, S. (1997). Antisense-protein kinase A: a single-gene-based therapeutic approach. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 7, 2X1-223.

189. Jansen, B., Schlagbauer-WadI, H., Brown, B.D., Bryan, R.N., van, E.A., Muller, M,, Wolff, K., Eichler, H.G., Pehamberger, H. (1998). bcl-2 antisense therapy chemosensitizes human melanoma in SCID mice. Nat. Med., 4, 232-234.

190. Noiri, E., Peresleni, T., Miller, F., Goligorsky, M.S. (1996). In vivo targeting of inducible NO synthase with oligodeoxynucleotides protects rat kidney against ischemia. J. Clin. Invest., 97, 2377-2383.

191. Metzger, W.J., Nyce, J.W. (1999). Oligonucleotide therapy of allergic asthma. J. Allergy Clin. Jmmunol., 104, 260-266.

192. Bennett, C.F. (1999). Regulation of immune response with antisense oligonucleotides.

193. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 9, 423-427.

194. Reed, J.C. (1997). Promise and problems of Bcl-2 antisense therapy. ./. Natl. Cancer Inst., 89, 988-990.

195. Robertson, D. (1997). Crohn's trial shows the pros of antisense. Nature Biotechnol., 15, 209

196. Gewirtz, A.M. (1997). Developing oligonucleotide therapeutics for human leukemia. Anticancer Drug Des., 12, 341-358.

197. Temsamani, J., Roskey, A., Chaix, C., Agrawal, S. (1997). In vivo metabolic profile of a phosphorothioate oligodeoxyribonucleotide. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 7, 159-165.

198. Vaerman, J.L., Moureau, P., Deldime, F., Lewalle, P., Lammineur, C., Morschhauser, P., Martiat, P. (1997). Antisense oligodeoxyribonucleotides suppress hematologic cell growth through stepwise release of deoxyribonucleotides. Blood, 90, 331-339.

199. Mazumder, A., Neamati, N, Sommadossi, J.P., Gosselin, G., Schinazi, R.F., Imbach, J.L., Pommier, Y. (1996). Effects of nucleotide analogues on human immunodeficiency virus type 1 integrase. Mol Pharmacol., 49, 621-628.

200. Ellington, A.D., Szostak, J.W. (1992). Selection in vitro of single-stranded DNA molecules that fold into specific ligand-binding structures. Nature, 355, 850-852.

201. Ellington, A.D., Conrad, R. (1995). Aptamers as potential nucleic acid pharmaceuticals. Biotechnol. Annu. Rev., 1, 185-214.

202. Krieg, A.M. The CpG motif: Implications for clinical immunology. (1998). BioDrugs, 10, 341-346.

203. Da Vis, H.L., Weeranta, R., Waldschmidt, T.J., Tygrett, L., Schorr, J., Krieg, A.M. (1998). CpG DNA is a potent adjuvant in mice immunized with recombinant hepatitis B surface antigen. J. Immunol., 160, 870-876.

204. Moldoveanu, Z., Love-Homan, L., Huang, W.Q., Krieg, A.M. (1998). CpG DNA, a novel adjuvant for systemic and mucosal immunization with influenza virus. Vaccine, 16, 1216-1224.

205. Krieg, A.M., Yi, A.K., Maison, S., Waldschmidt, T.J., Bishop, G.A., Teasdale, R., Koretzky, G.A., Klinman, D.M. (1995). CpG motifs in bacterial DNA trigger direct B-cell activation. Nature, 574, 546-549.

206. Ballas, Z.K., Rasmussen, W.L., Krieg, A.M. (1996). Induction of natural killer activity in murine and human cells by CpG motifs in oligodeoxynucleotides and bacterial DNA. J. Immunol., 157, 1840-1845.

207. Chu, R.S., Targoni, O.S., Krieg, A.M., Lehmann, P.V., Harding, C.V. (1997). CpG oligodeoxynucleotides act as adjuvants that switch on Thl immunity. J. Exp. Med., 186, 1623-1631.

208. Monteith, D.K., Henry, S.P., Howard, R.B., Floumoy, S., Levin, A.A., Bennett, C.F., Crooke, S.T. (1997). Immune stimulation a class effect of phosphorothioate oligodeoxynucleotides in rodents. Anti-Cancer Drug Des., 72, 421-432.

209. Galbraith, W.M., Henry S.P., Taylor J., Midgley L., Levin A.A., Kornbrust D.J. (1997). Evaluation of the toxicity profile of ISIS 2302, a phosphorothioate oligonucleotide in a 4-week study in CD-I mice. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 1, 145-155.

210. Henry, S.P., Templin, M.V, Gillett, N., Rojko, J., Levin, A.A. (1999). Correlation of toxicity and pharmacokinetic properties of a phosphorothioate oligonucleotide designed to inhibit ICAM-1. Toxicol Pathol, 27, 95-100.

211. Henry, S.P., Taylor, J., Midgley, L., Levin, A.A., Kornbrust, D.J. (1997). Evaluation of the toxicity of ISIS 2302, a phosphorothioate oligonucleotide, in a 4-week study in CD-I mice. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 1, 473-481.

212. Monteith, D.K., Levin, A.A. (1999). Synthetic oligonucleotides: the development of antisense therapeutics. Toxicol. Pathol., 27, 8-13.

213. Juliano, R.L., Alahari, S., Yoo, H., Kole, R., Cho, M. (1999). Antisense pharmacodynamics: critical issues in the transport and delivery of antisense oligonucleotides. Pharm. Res., 16, 494-502.

214. Roskelley, C.D., Desprez, P.Y., Bissell, M.J. (1994). Extracellular matrix-dependent tissue-specific gene expression in mammary epithelial cells requires both physical and biochemical signal transduction. Proc. Natl. Acad. Sci. IJ.SA., 91, 12378-12382.

215. Hagios, C., Lochter, A., Bissell, M.J. (1998). Tissue architecture: the ultimate regulator of epithelial function? Philos. Trans. R. .Soc .Lond. B. Biol. Sci., 353, 857870.

216. St. Croix, B., Kerbel, R.S. (1997). Cell adhesion and drug resistance in cancer. Curr. Opin.Oncol., 9, 549-556.

217. Mahato, R.I, Takakura, Y., Hashida, M. (1997). Development of targeted delivery systems for nucleic acid drugs. J. Drug Target, 4, 337-357.

218. Citro, G., Perrotti, D., Cucco, C., Dangnano, I., Sacchi, A., Zupi, G., Calabretta, B. (1992). Inhibition of leukemia cell proliferation by receptor-mediated uptake of c-myb antisense oligodeoxynucleotides. Proc. Natl Acad. Sci. U.S. A, 89, 7031-7035.

219. Mahato, R.I., Takemura, S., Akamatsu, K., Nishikawa, M., Takakiira, Y., Hashida, M. (1997). Physicochemical and disposition characteristics of antisense oligonucleotides complexed with glycosylated poly(L-lysine). Biochem. Pharmacol, 53, 887-895.

220. Stewart, A.J., Pichon, C., Meunier, L., Midoux, P., Monsigny, M., Roche A.-C. (1996). Enhanced biological activity of antisense oligonucleotides complexed with glycosylated poly-L-lysine. Mol. Pharmacol., 50, 1487-1494.

221. Deshpande, D., Toledo-Velasquez, D., Thakkar, D., Liang, W.W., Rojanasakul, Y. (1996). Enhanced cellular uptake of oligonucleotides by EGF receptor-mediated endocytosis in A549 cells. Pharm. Res., 13, 57-61.

222. Dokka, S., Toledo-Velasquez, D., Shi, X., Wang, L., Rojanasakul, Y. (1997). Cellular delivery of oligonucleotides by synthetic import peptide carrier. Pharm. Res., 14, 1759-1764.

223. Ginobbi, P., Geiser, T.A., Ombres, D., Citro, G. (1997). Folic acid-polylysine carrier improves efficacy of c-myc antisense oligodeoxynucleotides on human melanoma (Ml 4) cells. Anti-Cancer Res., 17, 29-35.

224. Kirn, J.S., Kirn, B.I., Maruyama, A., Akaike, Т., Kirn, S.W. (1998): A new non-viral DNA delivery vector: the triplex system. J. Contr. Release, 53, 175-182.

225. Болдырев, А.А., Котелевцев, C.B., Ланио, M., Альварес, К, Перес, П. (1990). Введение в биомембранологию. М.: МГУ, 60-63.

226. Thierry, A.R., Dritschilo, A. (1992). Intracellular availability of unmodified, phosphorothioated and liposomally encapsulated oligodeoxynucleotides for antisense activity. Nucleic Acids Res., 20, 5691-5698.

227. Chonn, A., Cullis, P.R. (1995). Recent advances in liposomal drug-delivery systems. Curr. Opin. Biotechnol., 6, 698-708.

228. Thierry, A.R., Rahman, A., Dritschilo, A. (1993). Overcoming multidrug resistance in human tumor cells using free and liposomally encapsulated antisense oligodeoxynucleotides. Biochem. Biophys. Res. Commtm., 190, 952-960.

229. Tari, A.M., Tucker, S.D., Deisseroth, A., Lopez-Berestein, G. (1994). Liposomal delivery of methylphosphonate antisense oligodeoxynucleotides in chronic myelogenous leukemia. Blood, 84, 601-607.

230. Tari, A.M., Stephens, C., Rosenblum, M. Lopez-Berestein, G. (1998). Pharmacokinetics, tissue distribution and safety of P-ethoxy oligonucleotides incorporated in liposomes. J. Lipos. Res., 251-264.

231. Duzgunes, N., Straubinger, R.M., Baldwin, P.A., Friend, D.S., Papahadjopoulos, D. (1985). Proton-induced fusion of oleic acid-phosphatidylethanolamine liposomes. Biochemistry, 24, 3091-3098.

232. Chu, C.J, Dijkstra, J., Lai, M.Z., Hong, K., Szoka, F.C. (1990). Efficiency of cytoplasmic delivery by pH-sensitive liposomes to cells in culture. Pharm. Res., 1, 824-834.

233. Milhaud, P., Bongartz, J.P., Lebleu, B. (1996). pH sensitive liposomes and antisense oligonucleotides delivery. Drug Delivery, 3, 67-73.

234. Ropert, C., Lavignon, M., Dulbernet, C., Couvreur, P., Malvy, C. (1992). Oligonucleotides encapsulated in pH sensitive liposomes are efficient toward Friend retrovirus. Biochem. Biophys. Res. Commun., 183, 879-885.

235. Duzgunes, N., Pretzer, E., Simoes, S., Slepushkin, V., Konopka, K., Flasher, D., (1999). Liposome-mediated delivery of antiviral agents to human immunodeficiency virus-infected cells. Mol. Membrane Biol., 16, 111-118.

236. Huang, L., Connor, J., Wang, C.Y. (1987). pH-sensitive immunoliposomes. Methods Enzymol., 149, 88-99.

237. Machy, P., Barbet, J., Leserman, L.D. (1982). Differential endocytosis of T and B lymphocyte surface molecules evaluated with antibody-bearing fluorescent liposomes containing methotrexate. Proc. Natl. Acad. Sci. U.SA., 79, 4148-4152.

238. Machy, P., Leserman, L.D. (1983). Small liposomes are better than large liposomes for specific drug delivery in vitro. Biochim. Biophys. Acta, 750, 313-320.

239. Selvam, M.P., Buck, S.M., Blay, R.A,, Mayner, R.E., Mied, P.A., Epstein, J.S. (1996). Inhibition of HIV replication by immunoliposomal antisense oligonucleotide. Antiviral Res., 33, 11-20.

240. Phillips, N.C., Dahman, J. (1995). Immunogenicity of immunoliposomes: reactivity against species-specific IgG and liposomal phospholipids. Immunol. Lett, 45, 149152.

241. Fresta, M., Chillemi, R., Spampinato, S., Sciuto, S., Puglisi, G. (1998). Liposomal delivery of a 30-mer antisense oligodeoxynucleotide to inhibit proopiomelanocortin expression. J. Pharm. Sci., 87, 616-625.

242. Kaneda, Y., Uchida, T., Kirn, J., Ishiura, M, Okada, Y. (1987). The improved efficient method for introducing macromolecules into cells using HYJ (Sendai virus) liposomes with gangliosides. Exp. Cell Res, 173, 56-69.

243. Tomita, N., Higaki, J., Morishita, R., Kato, K., Mikami, H„ Kaneda, Y., Ogihara, T. (1992). Direct in vivo gene introduction into rat kidney. Biochem. Biophys. Res. Commun., 186, 129-134.

244. Mann., M.J., Morishita, R., Gibbons, G.H., von der Leyen, H.E., Dzau, V.J. (1997). DNA transfer into vascular smooth muscle using fusigenic Sendai virus (HVJ)-liposomes. Mol. Cell. Biochem., 172, 3-12.

245. Rose, J.K., Buonocore, L., Whitt, M.A. (1991). A new cationic liposome reagent mediating nearly quantitative transfection of animal cells. Biotecniques, 20, 520-525.

246. Arima, H., Aramaki, Y., Tsuchiya, S. (1997). Effects of oligodeoxynucleotides on the physicochemical characteristics and cellular uptake of liposomes. J. Pharm. Sciences, 86, 438-441.

247. Zeiphati, O., Szoka, F.C., Jr. (1996). Intracellular distribution and mechanism of delivery of oligonucleotides mediated by cationic lipids. Pharmacol. Res., 13 13671372.

248. Sato, T., Nishi, H., Okahata, Y., Shoji, Y., Shimada, J. (1997). Analysis for the subcellular distribution of oligonucleotide/lipid complexes. Nucleic Acids Symp Ser., 37, 303-304.

249. Marcusson, E.G., Balkrishen, B., Manoharan, M., Bennett, C.F., Dean, N.M (1998). Phosphorothioate oligodeoxyribonucleotides dissociate from cationic lipids before entering the nucleus. Nucleic Acids Res., 26, 2016-2023.

250. Konopka, K., Pretzer, E., Feigner, P.L., Duzgunes, N. (1996). Human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) infection increases the sensitivity of macrophages and THP-1 cells to cytotoxicity by cationic liposomes. Biochim. Biophys Acta, 1312, 186-96

251. Farhood, H., Serbina, N., Huang, L. (1995). The role of dioleoyl phosphatidylethanolamine in cationic liposome mediated gene transfer. Biochim. Biophys. Acta, 1235, 289-295.

252. Jaaskelainen, I., Monkkonen, J., Urtti, A. (1994). Oligonucleotide-cationic liposome interactions. A physicochemical study. Biochim. Biophys. Acta, 1195, 115-123.

253. Bennett, C.F., Chiang, M.Y., Chan, H., Shoemaker, J.E., Mirabelli, C.K. (1992). Cationic lipids enhance cellular uptake and activity of phosphorothioate antisense oligonucleotides. Mol. Pharmacol, 41, 1023-1033.

254. Hanecak, R., Brown-Driver, V., Fox, M.C., Azad, R.F., Furusako, S., Nozaki, C., Ford, C., Sasmor, H., Anderson, K.P. (1996). Antisense oligonucleotide inhibition of hepatitis C virus gene expression in transformed hepatocytes. J. Virol., 70, 5203-5212.

255. Kanamam, T., Takagi, T., Takakura, Y., Hashida, M. (1998). Biological effects and cellular uptake of c-myc antisense oligonucleotides and their cationic liposome complexes. J. Drug Target., 5, 235-246.

256. Chakraborty, R., Dasgupta, D., Adhya, S., Basu, M.K. (1999). Cationic liposome-encapsulated antisense oligonucleotide mediates efficient killing of intracellular Leishmania. Biochem. J, 340, 393-396.

257. Woodi, M.C., Lasic, D.D. (1992). Sterically stabilized liposomes. Biophys. Acta. 905, 171-199.

258. Wu, N.Z., Da, D., Rudoll, T.L., Needham D., Whorton, A.R., Dewhirst, M.W. (1993). Increased microvascular permeability contributes to preferential accumulation of Stealth liposomes in tumor tissue. Cancer Res., 53, 3765-3770.

259. Yuan, F., Leunig, M., Huang, S.K., Berk, D.A., Papahadjopoulos, D., Jain, R.K. (1994). Microvascular permeability and interstitial penetration of sterically stabilized (stealth) liposomes in a human tumor xenograft. Cancer Res., 54, 3352-3356.

260. Zabner, J., Fasbender, A.J., Moninger, T., Poellinger, K.A., Welsh, M.J. (1995). Cellular and molecular barriers to gene transfer by a cationic lipid. J. Biol. Chem., 270, 18997-19007.

261. Zeiphati, O., Uyechi, L.S., Barren, L.G., Szoka, F.C., Jr. (1998). Effect of serum components on the physico-chemical properties of cationic lipid/oligonucleotide complexes and on their interactions with cells. Biochim. Biophys. Acta, 16, 119-133.

262. DeLong R.K., Yoo H., Alahari S.K., Fisher M., Short S.M., Kang S.H., Kole R„ Janout V., Regan S.L., Juliano R.L. (1999). Novel cationic amphiphiles as delivery agents for antisense oligonucleotides. Nucleic Acids Res., 27, 3334-3341.

263. Nakada, Y., Fattal, E., Foulquier, M., Couvreur, P. (1996). Pharmacokinetics and biodistribution of oligonucleotide adsorbed onto poly(isobutylcyanoacrylate) nanoparticles after intravenous administration in mice. Pharm. Res., 13, 38-43.

264. Fattal, E., Vauthier, C., Aynie, I., Nakada, Y., Lambert, G., Malvy, C., Couvreur, P. (1998). Biodegradable polyalkylcyanoacrylate nanoparticles for the delivery of oligonucleotides. J. Controlled Release, 53, 137-143.

265. Lambert, G., Fattal, E., Brehier, A., Feger, J., Couvreur, P. (1998). Effect of polyisobutylcyanoacrylate nanoparticles and lipofectin loaded with oligonucleotides on cell viability and PKC alpha neosynthesis in HepG2 cells. Biochimie, 80, 969-976.

266. Zobel, H.-P., Kreuter, J., Werner, D., Noe, C.R., Kumel, G., Zimmer, A. (1997). Cationic polyhexylcyanoacrylate nanoparticles as carriers for antisense oligonucleotides. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 7, 483-493.

267. Chavany, C., LeDoan, T., Couvreur, P., Puisieux, F., Helene, C. (1992). Polyalkylcyanoacrylate nanoparticles as polymeric carriers for antisense oligonucleotides. Pharm.Res., 9, 441-449.

268. Godard, G., Boutorine, A.S., Saison-Behmoaras, E., Helene, C. (1995). Antisense effects of cholesterol-oligodeoxynucleotide conjugates associated with poly(alkylcyanoacrylate) nanoparticles. Eur. J. Biochem., 232, 404-410.

269. Tondelli, L., Laus, M., Ricca, A., Citro, G. (1999). Specifically designed polymeric nanospheres increase cellular uptake of unmodified antisense ODNs. Nucleosides Nucleotides, 18, 1677-1679.

270. Bazile, D, Prud, Bassoullet, M.T., Marlard, M., Spenlehauer, G., Veillard, M. (1995). Stealth Me.PEG-PLA nanoparticles avoid uptake by the mononuclear phagocytes system. J. Pharm. Sci., 84, 493-498.

271. Gref, R., Minamitake, Y., Peracchia, M.T., Domb, A., Tmbetskoy, V., Torchilin, V., Langer, R. (1997). Poly(ethylene glycol)-coated nanospheres: potential carriers for intravenous drag administration. Pharm. Biotechnol., 10, 167-198.

272. Peracchia, M.T., Vauthier, C, Puisieux, F., Couvreur, P. (1997). Development of sterically stabilized poly(isobutyl 2-cyanoacrylate) nanoparticles by chemical coupling of poly(ethylene glycol). J. Biomed. Mater. Res., 34, 317-326.

273. Ilium, L., Jones, P.D., Baldwin, R.W., Davis, S.S. (1984). Tissue distribution of poly(hexyl 2-cyanoaciylate) nanoparticles coated with monoclonal antibodies in mice bearing human tumor xenografts. J. Pharmacol. Exp. Ther., 230, 733-736.

274. Manil, L., Roblot-Treupel, L., Couvreur, P. (1986). Isobutyl cyanoacrylate nanoparticles as a solid phase for an efficient immunoradiometric assay. Biomaterials, 7, 212-216.

275. Akhtar, S. Lewis, K.J. (1997). Antisense oligonucleotide delivery to cultured macrophages is improved by incorporation into sustained release biodegradable polymer microspheres. Int. J. Pharm., 151, 57-67.

276. Poxon, S.W., Mitchell, P.M., Liang, E., Hughes, J.A. (1996). Dendrimer delivery of oligonucleotides. Drug Delivery, 3, 255-261.

277. Tang, M.X., Redemann, C.T., Szoka, F.C., Jr. (1996). In vitro gene delivery by degraded polyamidoamine dendrimers. Bioconjugate Chem., 7, 703-714.

278. Alahari, S.K., Delong, R., Fisher, M.H., Dean, N.M., Viliet, P., Juliano, R.L. (1998). Novel chemically modified oligonucleotides provide potent inhibition of P-glycoprotein expression. J. Pharmacol. Exp. Ther., 286, 419-428.

279. Roberts, J.C., Bhalgat, M.K., Zera, R.T. (1996). Preliminary biological evaluation of polyamidoamine (PAMAM) Starburst dendrimers. J. Biomed. Mater. Res., 30, 53-65.

280. Qin, L., Pahud, D.R., Ding, Y., Bielinska, A.U., Kukowska-Latallo, J.F., Baker, J.R.J., Bromberg, J.S. (1998). Efficient transfer of genes into murine cardiac grafts by Starburst polyamidoamine dendrimers. Hum.Gene Ther., 9, 553-560.

281. Turunen, M P., Hiltunen, M.O., Ruponen, M, Virkamaki, L., Szoka, F.C.J., Urtti, A., Yla-Herttuala, S. (1999). Efficient adventitial gene delivery to rabbit carotid artery with cationic polymer-plasmid complexes. Gene Ther., 6, 6-11.

282. Barth, R.F., Adams, D.M., Soloway, A.H., Alam, F., Darby, M.V. (1994). Boronated starburst dendrimer-monoclonal antibody immunoconjugates: evaluation as a potential delivery system for neutron capture therapy. Bioconjugate Chem., 5, 58-66.

283. Singh, P., Moll, F., Lin, S.H., Ferzli, C., Yu, K.S., Koski, R.K., Saul, R.G, Cronin, P. (1994). Starburst dendrimers: enhanced performance and flexibility for immunoassays. Clin. Chem., 40, 1845-1849.

284. Dash, P., Lotan, L, Knapp, M., Kandel, E.R., Goelet, P. (1987). Selective elimination of mRNAs in vivo: complementary oligodeoxynucleotides promote RNA degradation by an RNase H-like activity. Proc. Natl. Acad. Sci. U.SA., 84, 7896-7900.

285. Shuttleworth, J., Matthews, G., Dale, L., Baker, C., Colman, A. (1988). Antisense oligodeoxyribonucleotide-directed cleavage of maternal mRNA in Xenopus oocytes and embryos. Gene, 72, 267-275.

286. Condon, T.P., Bennett, C.F. (1996). Altered mRNA splicing and inhibition of human E-selectin expression by an antisense oligonucleotide in human umbilical vein endothelial cells. J. Biol. Chem., 271, 30398-30403.

287. Ho, S.P., Bao, Y., Lesher, T., Conklin, D., Sharp, D. (1999). Regulation of the angiotensin type-1 receptor by antisense oligonucleotides occurs through an RNase H-type mechanism. Brain Res. Mol. Brain Res., 65, 23-33.

288. Loreau, N., Boiziau, C., Verspieren, P., Shire, D., Toulrne, J.-J. (1990). Blockage of AMV reverse transcriptase by antisense oligodeoxynucleotides. FEBS Lett., 274, 5356.

289. Boiziau, C., Thuong, N.T., Toulme, J.-J. (1992). Mechanisms of the inhibition of reverse transcription by antisense oligonucleotides. Proc. Natl. Acad. Sci. U.SA., 89, 768-772.

290. Boiziau, C., Larrouy, B., Sproat, B.S., Toulme, J.-J. (1995). Antisense 2'-0-alkyl oligoribonucleotides are efficient inhibitors of reverse transcription. Nucleic Acids Res., 23, 64-71.

291. Heidenreich, 0., Gryaznov, S., Nerenberg, M. (1997). RNase H-independent antisense activity of oligonucleotide N3'-> P5' phosphoramidates. Nucleic Acids Res., 25, 776780.

292. Dominski, Z., Kole, R. (1993). Restoration of correct splicing in thalassemic pre-mRNAby antisense oligonucleotides. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 90, 8673-8677.

293. Sierakowska, H., Sambade, M.J., Agrawal, S., Kole, R. (1996). Repair of thalassemic human beta-globin mRNA in mammalian cells by antisense oligonucleotides. Proc. Natl. Acad. Sci. U.SA., 93, 12840-12844.

294. Mishra, R.K., Tinevez, R., Toulme, J.-J. (1996). Targeting nucleic acid secondary structures by antisense oligonucleotides designed through in vitro selection. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93, 10679-10684.

295. Bruice, T. W., Lima, W. F. (1997). Control of complexity constraints on combinatorial screening for preferred oligonucleotide hybridization sites on structured RNA. Biochemistry, 36, 5004-5019.

296. Petyuk, V.A., Zenkova, M.A., Giege, R., Vlassov, V.V. (1999). Hybridization of antisense oligonucleotides with the З'-part of tRNAphe. FEBSLett., 444, 217-221.

297. Mestre, В., Arzumanov, A., Singh, M., Boulme, F., Litvak, S., Gait, M.J. (1999). Oligonucleotide inhibition of the interaction of HIV-1 Tat protein with the trans-activation responsive region (TAR) of HIV RNA. Biochim. Biophys. Acta, 1445, 8698.

298. Meunier, L., Mayer, R., Monsigny, M., Roche, A.C. (1999). The nuclear export signal-dependent localization of oligonucleopeptides enhances the inhibition of the protein expression from a gene transcribed in cytosol. Nucleic Acids Res., 27, 27302736.

299. Gewirtz, A.M. (1997). Antisense oligonucleotide therapeutics for human leukemia. Crit. Rev. Oncol., 8, 93-109.

300. Но, P.Т., Parkinson, D.R. (1997). Antisense oligonucleotides as therapeutics for malignant diseases. Semin. Oncol, 24, 187-202.

301. Mulamba, G.B., Hu, A., Azad, R.F., Anderson, K.P., Coen, D M. (1998). Human cytomegalovirus mutant with sequence-dependent resistance to the phosphorothioate oligonucleotide fomivirsen (ISIS 2922). Antimicrob Agents Chemother., 42, 971-973.

302. Dreyfuss, G., Matunis, M.J., Pinol-Roma, S., Burd, C.G. (1993). hnRNP proteins and the biogenesis of mRNA. Annu. Rev. Biochem., 62, 289-321.

303. Branch, A.D. (1998). Antisense drug discovery: can cell-free screens speed the process? Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 8, 249-254.

304. Milner, N., Mir, K.U., Southern, E.M. (1997). Selecting effective antisense reagents on combinatorial oligonucleotide arrays. Nature Biotechnol, 15, 537-541.

305. Southern, E.M., Milner, N., Mir, K.U. (1997). Discovering antisense reagents by hybridization of RNA to oligonucleotide arrays. С iba Found. Symp., 209, 38-44.

306. Корана, Г. (1964). Новые направления в химии биологически важных эфиров фосфорной кислоты. М.: Мир, 146-162.

307. Krzyzosiak, W.J., Biernat, J., Ciesiolka, J., Gornicki, P., Wiewiorowski, M. (1979). Chemical modification of N6-(N-threonylcarbonyl)adenosine. II. Condensation of the carboxyl group with amines. Nucleic Acids Res., 7, 1663-1674.

308. Кочетков, H.K., Будовский, Э.И., Свердлов, Е.Д., Симукова, Н.А., Турчинский, М.Ф., Шибаев, В.Н. (1970). Органическая химия нуклеиновых кислот. Ред. Кочетков Н.К. М.: Химия, 189, 383-384.

309. Кирби, А., Уоррен, С. (1971). Органическая химия фосфора. М.: Мир, 387.

310. Брюс, Т., Бенкович, С. (1970). Механизмы биоорганических реакций. М.: Мир, 47.

311. Kanaya, Е., Yanagawa, Н. (1986). Template-directed polymerization of oligoadenylates using cyanogen bromide. Biochemistry, 25, 7423-7430.

312. Sokolova, N.I., Ashirbekova, D.T., Dolinnaya, N.G., Shabarova, Z.A. (1988). Chemical reactions within DNA duplexes. Cyanogen bromide as an effective oligodeoxyribonucleotide coupling agent. FEBSLett., 232, 153-155.

313. Shumyantseva, V.V., Sokolova, N.I., Shabarova, Z.A. (1976). Modification of end phosphate groups in mono- and oligonucleotides. Nucleic Acids Res., 3, 903-916.

314. Chu, B.C.F., Wahl, G.M., Orgel, L.E. (1983). Derivatization of unprotected polynucleotides. Nucleic Acids Res., 11, 6513-6529.

315. Lohrmann, R., Orgel, L.E. (1977). Reactions of adenosine 5'-phosphorimidazolide with adenosine analogs on a polyuridilic acid template. J. Mol. Biol., 113, 193-198.

316. Николаев, A.B., Туркин, С.И., Потапов, В.К., Шабарова, З.А. (1975). Использование а-пиридиловых эфиров нуклеотидов в олигонуклеотидном синтезе. Биоорган, химия, 1, 1236-1237.

317. Годовикова, Т.С., Зарытова, В.Ф., Халимская, JI.M. (1986). Реакционноспособные фосфамиды моно- и динуклеотидов. Биоорган, химия, 126 475-481.

318. Helene, С. (1991). Control of gene expression by triplex-forming-oligonucleotides.

319. Ropert, C., Malvy, C., Couvreur, P. (1993) Inhibition of the Friend retrovirus by antisense oligonucleotides encapsulated in liposomes: Mechanism of action. J. Pharm Research„ 10, 1427-1433.

320. Metelev, V.G., Zayakina, G.V., Ryabushenko, I.L., Krynetskaya, N.F., Romanova, E.A., Oretskaya, T.C., Shabarova, Z.A. (1988). Influence of probe structure on unique (regiospecific) cleavage of RNA by RNAase H. FEBSLett., 226, 232-234.

321. Giles, R.V., Spiller, D.G. and Tidd, D M. (1993). Chimeric oligodeoxyribc nucleotide analogues: enhanced cell uptake of structures whic direct ribonuclease H which hight specificity. Anti-Cancer Drug Des., 8, 33-51.

322. Dagle, J.M., Andracki, M.E., Devine, R.J., Walder, J.W. (1991). Physical properties of oligonucleotides containing phosphoramidate-modified internucleotide linkage. Nucleic Acids Res., 19, 1805-1810.

323. Moroy T. (1993). Expression of a Pim-1 transgene accelerates lymphoproliferation and inhibits apoptosis in lpr/lpr mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90, 10734-10738.

324. Shabarova, Z.A. (1988). Chemical development in the design of oligonucleotide probes for binding to DNA and RNA. Biochimie. 70, 1323-1334.

325. Kool, Е.Т. (1991) Molecular recognition by circular oligonucleotides: increasing the selectivity of DNA binding. J. Amer. Chem. Soc., 113, 6265-6266.

326. Wang, S., Kool, E.T. (1994) Recognition of single-stranded nucleic acids by triplex formation: the binding of pyrimidine-rich sequences. J. Amer. Chem. Soc., 116, 88578858.

327. Vo, Т., Wang, S., Kool, E.T. (1995) Targeting pyrimidine single strands by triplex formation: structural optimization of binding. Nucleic Acids Res., 23, 2937-2944.

328. Dolinnaya, N.G., Blumenfeld, M., Merenkova, I.N., Oretskaya, T.S., Krynetskaya, N.F., Ivanovskaya, M.G., Vasseur, M., Shabarova, Z.A. (1993) Oligonucleotide circularization by template-directed chemical ligation. Nucleic Acids Res., 21, 54035407.

329. Chu, B.C.F., Orgel, L.E. (1992). The stability of different forms of double-stranded decoy DNA in serum and nuclear extracts. Nucleic Acids Res., 20, 5857-5858.

330. Xodo, L. E.; Manzini, G.; Quadrifoglio, F., van der Marel, G., van Boom J.H. (1991). Effect of 5-methylcytosine on the stability of triple-stranded DNA a thermodynamic study. Nucleic Acids Res., 19, 1505-1511.

331. Bonnet G., Tyagi S., Libchaber A., Kramer F.R. (1999). Thermodynamic basis of the enhanced specificity of structured DNA probes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96, 61716176.

332. Gregoire, M., Hernandez-Verdun, D., Bouteille, M. (1984). Visualisation of chromatin distribution in living PTO cells by Hoechst 33342 fluorescent staining. Exp. Cell. Res., 152, 38-46.

333. Stein, G.S., Stein, J.L., Lian, J.B., Last, T.J, Owen, T., McCabe, L. (1994). Synchronisation of normal diploid and transformed mammalian cells. Cell biology: A Laboratory Handbook. Ed. Cells J., New York: Academic Press, 282-287.

334. Frankenberg-Schwager, M. (1989). Review of repair kinetics for DNA damage induced in eukaryotic cells in vitro by ionizing radiation. Radiother. Oncol, 74, 307320.

335. Matlashewski, G., Banks, L., Pim, D., Crawford, L. (1986). Analysis of human p53 proteins and mRNA levels in normal and transformed cells. Eur. J. Biochem., 154, 665-672.

336. Hwang, A., Muschel, R.J. (1998). Radiation and the G2 phase of the cell cycle. Radial Res., 150, 52-59

337. Han, Z., Chatterjee, D., He, D.M., Early, J., Pantazis, P., Wyche, J.H., Hendrickson, E.A. (1995). Evidence for a G2 checkpoint in p53-independent apoptosis induction by X-irradiation. Mol Cell Biol, 15, 5849-5857.

338. Tonkinson, J.L., Stein, C.A. (1994). Patterns of intracellular compartmentalization, trafficking and acidification of 5'-fluorescein labeled phosphodiester and phosphorothioate oligodeoxynucleotides in HL60 cells. Nucleic Acids. Res., 22, 42684275.

339. Gokhale, P.C., McRae, D., Monia, B.P., Bagg, A., Rahman, A., Dritschilo, A., Kasid, U. (1999). Antisense raf oligodeoxyribonucleotide is a radiosensitizer in vivo. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 9, 191 -201.

340. Tyagi, S., Kramer, R. (1996): Molecular beacons: probes that fluoresce upon hybridization. Nature Biotechnol. 14, 303-308.

341. Nazarenko, LA., Bhatnagar, S.K., Hohman, R.J. (1997). A closed tube format for amplification and detection of DNA based on energy transfer. Nucleic Acids Res., 25, 2516-2521.

342. Sokol, D.L., Zhang, X., Lu, P., Gewirtz, A.M. (1998). Real time detection of DNA/RNA hybridization in living cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA,. 95, 1153811543.

343. Nucleic Acids Res., 26, 735-743.

344. Delihas, N., Rokita, S.E., Zheng, P. (1997). Natural antisense RNA/target RNA interactions: possible models for antisens oligonucleotide drug design. Nature Biotechnol. 15, 151-153.

345. Ho, P.S., Bao, Y., Lesher, T., Malhortra, R., Ma, L.Y., Fluharty, S.J., Sakai, R.R. (1998). Mapping of RNA accessible sites for antisense experiments with oligonucleotide libraries. Nature Biotechnol. 16, 59-63.

346. Bradford, M.M. (1976). A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 72, 248-54.