Стереонаправленный синтез фрагментов фукоиданов тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.03 ВАК РФ

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК ИНСТИТУТ ОРГАНИЧЕСКОЙ ХИМИИ имени Н.Д. ЗЕЛИНСКОГО

На правах рукописи

УСТЮЖАНИНА НАДЕЖДА ЕВГЕНЬЕВНА

СТЕРЕОНАПРАВЛЕННЫЙ СИНТЕЗ ФРАГМЕНТОВ ФУКОИДАНОВ

02.00.03 - органическая химия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Москва 2005

Работа выполнена в лаборатории химии гликокоиыогатов (№52) Института органической химии имени Н.Д. Зелинского Российской академии наук

Научный руководитель: доктор химических наук Николай Эдуардович Нифантьев

Официальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор Леон Владимирович Бакиновский доктор химических наук Дмитрий Владимирович Яшунскин

Ведущая организация:

химический факультет Московского Государственного Университета имени М.В. Ломоносова

Защита состоится 10 июня 2005 года в 10 часов на заседании диссертационного совета К 002.222.01 при Институте органической химии имени Н.Д. Зелинского РАН по адресу 119991, Москва, Ленинский проспект, 47.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИОХ РАН

Автореферат разослан « 6 » 2005

г.

Ученый секретарь диссертационного совета К 002.222.01 доктор химических наук

Родиновская Л.А.

zoo 6 7 295

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Углевод-белковые взаимодеетвия определяют протекание многих важных физиологических процессов. В связи с этим представляется перспективным использование доступных природных олиго- и полисахаридов и их модифицированных производных для получения фармацевтических препаратов. Среди интенсивно исследуемых природных углеводных макромолекул все возрастающий интерес вызывают полисахариды фукоиданы, выделенные из бурых водорослей и морских беспозвоночных. Эти биополимеры эффективно ингибируют опосредованные L- и Р-селектинами воспаления, оказывают антикоагулянтное и антиангиогенное действие, блокируют бактериальную и вирусную адгезию на клетках млекопитающих. Такой широкий спектр физиологической активности обусловлен, по-видимому, тем, что отдельные участки углеводной цепи фукоиданов мимикрируют природные лиганды белковых рецепторов.

Фукоиданы построены преимущественно из остатков a-L-фукопиранозы. Наличие сульфатных и ацетильных групп, углеводных заместителей (остатков фукозы, ксилозы, глюкозы, глюкуроновой кислоты, маннозы) вносит существенное разнообразие в структуру фукоиданов, маскирует регулярнсть их цепей и значительно усложняет установление строения этих полисахаридов с использованием известных химических и физико-химических методов.

Направленный синтез и изучение свойств фрагментов представляется перспективным подходом к выявлению взаимосвязи структуры и свойств фукоиданов. Синтетические олигосахариды, включающие фрагменты фукоиданов, являются ценными модельными соединениями: их спектральные (ЯМР) данные необходимы для анализа структуры полисахаридов, а их биохимическое исследование позволит определить участки углеводных цепей, ответственные за физиологическую активность.

Целью работы является разработка эффективного блочного синтеза олигосахаридных фрагментов фукоиданов, построенных из несульфатированных и избирательно сульфатированных остатков a-L-фукопиранозы, различающихся длиной цепи (от ди- до октасахаридов), типом гликозидных связей, степенью сульфатирования и расстановкой сульфатных групп.

Научная новизна и практическая ценность работы. Впервые проведен регио- и стереонаправленный синтез большой группы избирательно сульфатированных и несульфатированных фукоолигосахаридных фрагментов фукоиданов 1-28. Полученные соединения соответствуют линейным и разветвленным участкам цепей полисахаридов.

В ходе работы были изучены новые методы построения a-L-фукозидной связи с использованием моно- и олигосахаридных отмечено

стереоконтролирующее влияние ацильных заместителей при О-Ъ в структуре фукозил-доноров Использование оптимально защищенных moho-, ди- и тетрасахаридных блоков позволило осуществить эффективный синтез три-, тетра-, гекса- и октасахаридов по конвергентным схемам сборки углеводных цепей [1+2], [2+2], [2+4] и [4+4], соответственно.

Синтезированные олигосахариды 1-28 являются ценными модельными соединениями для структурных, конформационных и биохимических исследований природных фукоиданов.

Публикация и опробация работы. По результатам диссертации опубликованы 7 статей и 1 принята к печати. Отдельные части работы были представлены на V молодежной научной школе-конференции по органической химии (Екатеринбург, 2002), XVII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Казань, 2003), VI молодежной научной школе-конференции по органической химии (Новосибирск, 2003), XXII Международном симпозиуме по углеводам (Глазго, 2004).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на /'^страницах и состоит из введения, литературного обзора, посвященного методам построения 1,2-г/иогликозидной связи и проводившимся ранее синтезам фрагментов фукоиданов, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка цитированной литературы.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Целевые соединения и стратегия их синтеза

В данной работе при выборе целевых соединений, соответствующих участкам цепей фукоиданов, нами учитывались не только линейные размеры молекул, но и такие тонкие детали структуры как тип гликозидной связи между моносахаридными звеньями, наличие разветвлений и положение сульфатных групп.

Различают два типа основных цепей фукоиданов: первые построены преимущественно из повторяющихся (1-»3)-а-связанных фукозных остаков, а для вторых характерно чередование (1-»3)- и (1-»4)-а-гликозидных связей между фукозными звеньями Вариации в расстановке заместителей в основной цепи связаны с различием путей биосинтеза этих полисахаридов в разных видах водорослей и беспозвоночных. Так, остатки моносахаридов (фукозы, ксилозы, глюкозы, глюкуроновой кислоты, маннозы), сульфатные и ацетильные группы могут находиться либо при 0-2, либо при 0-4 интернальных фукозных остатков. Соотношение фукозы и сульфата варьируется в пределах от 1 -0,7 до 1-1,5

В качестве целевых структур в данной работе были выбраны несульфатированные и избирательно сульфатированные фукоолигосахариды 1-28, родственные обоим указанным выше типам цепей фукоиданов. Это линейные тетра- (19-23), гекса- (24-27) и октасахариды (28), 2,3-разветвленные тетрасахариды (16-18), а также все составляющие их ди- (1-7) и трисахариды (8-15). Сульфатные группы в сульфатированных соединениях расположены при

0-2 или при 0-4 фукозных остатков.

Ключевым этапом синтеза олигосахаридов является регио- и стереонаправленное построение гликозидной связи между углеводными фрагментами. В ходе сишеза соединений

1-28 решение проблемы региоизбирательности гликозилирования заключалось в использовании либо моногидроксильных гликозил-акцепторов, либо диольных соединений, гидроксильные группы в которых существенно различаются по реакционной способности (экваториальная и аксиальная).

ОРг

ОРг

ОРг

01*

но

1

гя-ЗО^а

ЗН,»(«г»Н

»ЭО,N8, Й^-Н 5 Я1 - Н, Я2 = ЗОзИа

61?»Н

7Г1* 803Ыа

8 Я1 - й* = Н

9 Я1 = вОзМа, ^ » Н 10К' = Н, Я'-ЗО^а

12 Я*-вО>На, ^»Н

13 1»' ■ Н, Я1« 80>Ка

14И»Н 15(г»30,№

ОРг

ОРг

17 И1 ■ 30,№, I*1» н 1в Я1 ■ Н, » вО]Ма

20 ^ ■ БОзЫа, ^-Н

21 й1 - Н, Я' - вО^а

221?«Н 23 I* » 80,Ма

ОРг

Ме

Н1

НО

24 ■ Н

25 I* » 30,Ма

26 К « Н

27 I» ■ 50]Ма

28 I» « вО^а

Фукозные остатки в целевых олигосахаридах 1-28 соединены 1,2-чкс-(а)-гликозидной связью. При проведении гликозилирования необходимо учитывать, что такие факторы, как строение гликозил-донорных и гликозил-акцепторных блоков, природа промотирующей системы и растворителя, температура, оказывают решающее влияние на стереохимический результат реакции. В связи с этим разработка методов стереоизбирательного построения а-фукозидной связи являлась предметом отдельного исследования в рамках настоящей диссертации, посвященного детальному изучению стереоконтролирующего влияния заместителей в гликозил-донорах.

Наличие несоучаствующего заместителя при 0-2 в гликозил-доноре является необходимым требованием для создания 1,2-^мс-гликозидной связи. В случае же использования доноров, содержащих соучаствующую ацильную группу при 0-2, образующийся в ходе реакции гчикозил-катион (катион I) может быть стабилизирован за счет анхимерного содействия ацильного заместителя (катион II), что способствует образованию 1,2-транс-гликозидов (Схема 1) Поэтому в данной работе были использованы точько 2-О-бензилированные производные, а в качестве а-стереоконтролир>ющего фактора было исследовано соучастие ацильных заместителей, распотоженных при О-3 и при О-4 в фукозил-донорах

1,2-цис

-728£Г<2Г

^ ,2-транс КОН

Схема 1 Влияние природы заместителя при 0-2 в структуре гликозил-донора на стереоизбирательность реакции гликозилирования

Синтез крупных олигосахаридов путем последовательного введения моносахаридных фрагментов в молекулу связан с трудностью отделения продуктов от исходных соединений. В связи с этим для получения тетра-, гекса- и октасахаридов нами были использованы конвергентные схемы [2+2], [2+4] и [4+4] сборки углеводных цепей, соответственно.

Синтез изомерных олигосахаридов, несущих сульфатные группы при 0-2 или при О-4 фукозных остатков, представлялось наиболее удобным проводить исходя из общего предшественника. В качестве таковых для серий линейных и разветвленных олигосахаридов были использованы соединения, содержащие ортогональные 2-О-бензильные и 4-0-ацильные защитные группы в фукозных звеньях. Такая расстановка защитных групп позволяла обеспечивать и необходимый стереохимический результат гликозилирования.

2. Синтез моносахаридных предшественников

Целевые олигосахариды 1-28, построенные из остатков Ь-фукопиранозы, были синтезированы из общего моносахаридного предшественника аллил-а-Ь-фукопиранозида 29. Использование аллильной группы для защиты аномерного центра, обусловлено тем, что, с одной стороны, она может быть избирательно удалена в присутствии ацильных, алкильных, бензильных, синильных заместителей, а с другой - восстановлена в пропильную группу или трансформирована в агликон-спейсер. Это позволяет переводить защищенные аллил-гликозиды как в соответствующие полуацетали, используемые в синтезе более сложных молекул, так и в пропил-гликозиды или гликоконъюгаты, широко применяемые при проведении биологических исследований.

Фукозные остатки в целевых олигосахаридах соединены (1-»2)-, (1-»3)- и (1-*4)-гликозидными связями. В связи с этим для обеспечения региоизбирательности реакции

* га-

1гон

<ж

я - с<ж-

к

с,

гликозилирования из аллил-фукозида 29 был получен ряд моносахаридных фукозил-акцепторных блоков, содержащих свободные гидроксильные группы при С-3 (в 30 и 31), С-4 (в 32), С-2 (в 34), а также 3,4-диольный фрагмент (в 35) (Схема 2).

ОАМ

О АН 0А11

28

30 Я « Ас ---»■ 32 « Вг, = Н

31 Р - Вг ---- 33 Я1 = Ас, Я2 = Вг

и

IV

ОАМ

ОАМ

ОАМ

V

VI

I ОВг ВгО

35

36

34

Схема 2. I' (ЕЮ)3СМе (для 30) (ВО)3СРЬ (для 31), ТзОН; №Н, ВпВг, ДМФА; 80% АсОН, 85% для 30, 83% для 31; М- ВгС1, Ру, 2% НС1 в МеОН, 70%, Ш АсС1, Ру, 95%; IV (МеО)2СМег, Т$ОН, 90%, V: №Н, ВпВг, 80% АсОН, 85%; VI ВгС1, Ру, 85%

При проведении синтеза моносахаридных блоков была использована возможность избирательной функционализации 3,4-г/ис-диольной группировки в структуре аллил-фукозида 29. Так, для получения соединений 30 и 31 триол 29 первоначально переводили в циклический 3,4-ортоэфир, который далее 2-О-бензилировали. В полученном сполна защищенном производном региоизбирательно раскрывали ортоэфир с высвобождением экваториальной гидроксильной группы при С-3. 3-0-Бензоилирование фукозида 30 и последующее 4-О-дезацетилирование продукта в условиях кислотного метанолиза приводили к фукозил-акцетору 32, содержащему свободную гидроксильную группу при С-4. Постановка изопропилиденовой защиты на 3,4-г/мс-диольную группировку аллил-фукозида 29 приводила к ацетониду 34 (90%). Диол 35 был получен удалением изопропилиденовой защиты в 2-О-бензилирванном производном соединения 34.

Использование оловоорганических производных аллил-фукозида 29 позволило избирательно защитить гидроксильные группы как только при С-3, так и одновременно при С-2 и С-3. Действием дибутилоловооксида (ВигЭпО) на аллил-фукозид 29 и последующей обработкой полученного интермедиата избытком бензилбромида в присутствии тетрабутиламмонийбромида (Ви^Вг) получали смесь З-О-бензилированного производного 37 (35%) и 2,3-ди-О-бензилированного фукозида 38 (55%) (Схема 3). Для синтеза 2,4-ди-О-бензилированного аллил-фукозида 39 оловоорганическое производное обрабатывали эквивалентным количеством гся/го-метоксибензилхлорида, далее полученное соединение

бензилировали, после чего удаляли временную иора-метоксибензильную защитную группу. Выход фукозида 39 составил 70%.

I 0№

0А11

9А" 0А11

_ J ш I

29

37 Я1 ■ И, № ■ Вп ОВп „ ОВп

38Я'"К1=Вп

3» 40

Схема 3. Г: ВигвпО, 2,2 экв. ВпВг, ВщМВг, 35% для 37 и 55% для 38; п: ВигЭпО, р-ОМе-ВпС1, Ви^Вг; N814, ВпВг, 80% АсОН, 70%, Ш. ВгС1, Ру, 86%.

Для синтеза фукозил-донорных блоков соединения 29, 31, 35, 38 и 39 были переведены в сполна защищенные производные 33, 36, 40-44 (Схемы 2-4). Исчерпывающим бензилированием аллил-фукозида 29 было получено 2,3,4-три-О-бензилированное производное 41. Ацетилирование соединения 31 приводило к аллил 2-О-бензил-З-О-ацетил-4-0-бензоил-фукопиранозиду 33. Действием хлорангидридов бензойной, пара-нтро- и пара-метоксибензойной кислот в присутствии пиридина на 2,3-ди-С-бензилированный фукозид 38 получали серию 4-О-ацилированных производных 42-44. Бензоилированием моногидроксильного производного 39 и 3,4-диола 35 получали фукозиды, несущие бензоильные группы только при О-3 (40) и одновременно при О-З и 0-4 (36).

ОА11 ОАН

42 Я « Вг

'Д^ОВП Г»! Мв2^2/-0Вп 43й = в1но2-р

I ОВп

ВлО ЯО

41

Схема 4.1: ЫаН, ВпВг, ДМФА, 90%; II: ЯС1, Ру, 75-85%, Ш: ВгС1, Ру, 82%.

Удаление аллильной защиты в фукозидах 33, 36, 40-44 проводили действием хлорида палладия (Р<Ю2) в метаноле с образованием полуацеталей 45 с выходами 76-85% (Схема 5). Последние далее были переведены в бромиды 46 и в трихлорацетимидаты 47, которые были получены в виде смеси а- и Р-изомеров, что было подтверждено данными спектров 'Н-ЯМР. Так, в аномерной области спектров 'Н-ЯМР соединений 46 и 47 были обнаружены два дублета: константа спин-спинового взаимодействия (КССВ) J\l7 одного из них составляла 3,3-3,5 Нг, что характерно для а-конфигурации, а КССВ J\¿ другого - 8,7-9,4 Нг, что соответствует р-конфигурации.

0А11

I Ой'

ЯЧ> 33,36,40-44

ЛчОН

Мв7^0Вп -

I Ой1 кю

45

Вп

1«)

мн

Я^овп СС1' I ОР1

Мо

46а й1 ■ Я? ■ Вп 466 й1 » Вп, « Вг 46в Я' > Вп, И2 > ВхЫОз-р 48г ^ - Вп, - ВхОМе-р 46д И1 • Я3 » Вг 46* Я1 - Ас, ^ • Вх 46ж ^ = Вг, = Вп

47а Я1» Я9« Вп 476 К1 • Вп, Я* • Вх 47« Я1 - Ас, Я1 - В1 47ж Я1 ■ Вх, Я* ■ Вп

Схема 5.1: РЙС12, МеОН, 76-85%; И: СВг«, РРЬ3, 95%, III: СС13СЫ, йВи, 90-95%.

3. Исследование влияния природы заместителей в моносахаридных фукозил-донорах на стереоизбирательность гликозилирования

Для синтеза целевых соединений 1-28 необходимо было использовать эффективные а-фукозилирующие агенты. Как было отмечено выше, наличие несоучасгвующего заместителя при 0-2 в гликозил-донорах является важным условием для построения 1,2-г/ис-гликозидной связи. Кроме того, согласно литературным данным, наличие ацильного заместителя при 0-4 в Э-галактозил- и Ь-фукозил-донорах также способствует образованию 1,2-г/ыс-гликозидов. Этот стереохимический эффект объясняли стабилизацией гликозил-катиона I в результате анхимерного содействия заместителя при 0-4 с образованием гликозил-катиона Ш, атака нуклеофилом которого возможна только с а-стороны (Схема 6). Поэтому первоначально в качестве фукозил-доноров нами были исследованы серии бромидов 46а-е и трихлорацетимидатов 47а,б,е, содержащих несоучаствукяцую бензильную группу при 0-2, а при 0-4 - либо несоучаствуюшую (бензильную), либо соучаствующую (ацильную).

осор"

X

с

ОСОЯ'

ЯО

V

я-

III

от

ОСОР" 1,2-цис

СИГ оя

Схема в Стереоконтролирующве влияние ацильного заместителя при О-4 в фукозил-донорах.

В качестве модельного фукозил-акцептора был использован ацетонид 34, содержащий свободную гидроксильную группу при С-2 (Схема 7). Гликозилирование бромидами 46 проводили при 20°С в дихлорметане (СН2О2) с использованием цианида ртути (Щ(СК)2) в качестве промотора и бромида ртути (HgBr2) в качестве катализатора. Выходы дисахаридов составили 70-75% {Таблица 1). Реакции с трихлорацетимидатами 47 проводили при ~30°С в

СНгСЬ с использованием триметилсилилтрифлата (TMSOTÍ) в качестве катализатора. Дисахаридные продукты были выделены с выходами 82-87%. Фукозшшрование донорами 47 при более низких температурах приводило к уменьшению выхода О-гликозида, при этом доминирующим направлением реакции становилось образование a-связанного Л'-гликозида (например, 50 из 47е).

Соотношение образующихся в ходе реакций а- и p-изомерных дисахаридов 48 и 49 было определено по соотношению интегральных интенсивностей сигналов аномерных протонов Н-Г в спектрах 'Н ЯМР. Выбранные сигналы являются дублетами с характеристическими величинами КССВ J¡2, составляющими 3,3-3,6 Hz для a-изомеров и 7,5-8,3 Hz для р-изомеров.

оаи „.„

I WАН од„

46/47 34

48 49

Схема 7. I для 46: Hg(CN)2. HgBr2, СН2С12. 20°С, 12-24 часа, 46:34 1,5:1, 70-75%; I для 47: 0,1М р-р TMSOTf, CHjClj, -30°С, 5 минут, 47:34 1,1:1, 82-87%.

Таблица 1. Результаты реакции гликозилирования ацетонида 34 донорами 46 и 47.

Опыт Донор X R1 R2 a:p*

1 46а В г Bn Bn 1:1

2 466 Вг Bn Bz 3,5:1

3 46в Вг Bn BzNOrP 1,9:1

4 46г Вг Bn BzOMe-p 5:1

5 46д Вг Bz Bz 20:1

6 46е Вг Ac Bz только a

7 46ж Вг Bz Bn 13:1

8 47а OC(NH)CCI3 Bn Bn 1,4:1

9 476 OC(NH)CCI3 Bn Bz 4:1

10 47е OC(NH)CCIj Ac Bz только a

11 47ж OC(NH)CCI3 Bz Bn 12:1

♦Соотношение изомеров определялось с помощью методов спектроскопии 'Н ЯМР.

Как мы и предполагали, наличие ацильного заместителя при 0-4 в структуре фукозил-донора увеличивало выход а-связанного изомера (опыты 2-6, 9-11, Таблица 1), в то время как гликозилирование 2,3,4-три-О-бензилиро ванными донорами проходило с низкой стереоизбирательностью (опыты 1,8, Таблица 1). Наилучший результат в серии доноров, несущих

ацильную группу только при О-4 был достигнут при использовании А-ОАгшра)-метоксибензоилированного бромида 46г (а:(3 5:1). Это объясняли тем, что электронодонорнная метоксильная группа, находящаяся в тю/ю-положении бензоильного заместителя, усиливает стабилизизацию гликозил-катиона V (Рисунок 1) вследствие положительного мезомерного эффекта.

Неожиданным результатом была значительно большая а-стереоизбирательность гликозилирования при использовании 3,4-ди-О-ацилированных фукозил-доноров 4бд,е и 47е. Мы предположили, что в случае этих соединений в ходе реакции наряду с катионом V образуется катион VI (Рисунок Г), стабилизированный в результате анхимерного содествия ацильной группы при 0-3. Как представленно на Рисунке 1, взаимодействие катиона VI с нуклеофилом пред почтительно с а-стороны.

Дня проверки этого предположения и сопоставления стереоконтролирующего влияния ацильных заместителей при 0-4 и 0-3 нами были проведены реакции гликозилирования донорами 46ж и 47ж, содержащими соучаствующую бензоильную группу только при 0-3. Результаты реакций (а:|5 13:1 и 12:1) позволяют сделать вывод о том, что стереоконролирующий эффект заместителя при О-З превышает таковой для заместителя при 0-4,

Нестабилизированный Стабилизированный Стабилизированный

катион IV катион V катион VI

Рисунок 1. Нестабилизированный (IV) и стабилизированные (V и VI) фукозил-катионы.

Для подтверждения этой гипотезы были проведены молекулярно-механические расчеты1 величин энергии стабилизации (ДЕ) катионов V и VI с использованием силового поля ММ+. Результаты расчетов (Таблица 2) хорошо согласовывались с экспериментальными данными и свидетельствовали, что образование бициклических катионов V и VI является энергетически выгодным процессом, причем способность заместителя при 0-3 стабилизировать гликозил-катион действительно выше, чем у заместителя при 0-4 (ср. №2 и №5-7).

Таким образом, нами обнаружен новый стереохимический эффект, который позволяет расширить круг известных методов стереоизбирательного а-Ь-фукозилирования.

1 Расчеты проведены А.Г. Гербстом (ИОХ РАН)

Таблица 2. Сопоставление рассчитанных величин энергий стабилизации (ДЕ)* катионов V и VI и экспериментальных результатов фукозилирования донорами 4ба-ж и 47а,б,е,ж.

Заместители Катион ДЕ (ккал/моль) а:0 46, X - Вг, а:р 47, X = ОС(МН)СОз)

1 Вп Вп IV 0 1:1 1,4:1

2 Вп Вг V -3,6 3,5:1 4:1

3 Вп ВгЫОгр V -2,1 1,9:1 -

4 Вп ВгОМе-р V -4,7 5:1 -

5 Вл Вп VI -8,9 131 121

6 Вг Вг V VI -4,1 -9,9 }- 20:1 -

7 Ас Вг V VI -4,3 -11,3 только а только а

*ДЕ = ЕП0ЛИ(стабилизированный катион) - ЕПОли(нестабилизированный катион)

Как следует из данных Таблицы 1, наиболее эффективными являлись фукозил-доноры, содержащие 2-0-бензильный, 3-0-ацетильный и 4-0-бензоильный заместители. Такой набор защитных групп оказался оптимальным и для выполнения синтезов большинства целевых соединений, поскольку было возможно избирательное высвобождение гидроксильных групп на отдельных этапах синтеза для их дальнейшего гликозилирования или сульфатирования. Использование фукозил-трихлорацетимидатов удобнее, чем бромидов из-за меньшей стабильности последних. Поэтому в дальнейшем для построения а-фукозидной связи был использован донор 47е.

Для изучения влияния реакционной способности гидроксильных групп в гликозил-акцепторах на стереоизбирательность фукозилирования имидатом 47е были проведены реакции взаимодействия этого соединения с рядом нуклеофилов. В качестве последних были использованы первичные спирты (метиловый и аллиловый), моногидроксильные аллил-фукозиды 31 и 32, содержащие свободные гидроксильные группы при <9-3 (экваториальную) и при 0-4 (аксиальную), а также диол 37, содержащий свободную экваториальную гидроксильную группу при 0-2 и аксиальную при О-4.

X

1 ОАс ВгО

НМ' ОВп

н60Вп I I ОАс

0А11

ОВп

ВгО

о>

10Вг

ОА11 ОВп

Ме

52

Й^-ОВп I ОАс ВгО

53

Таблица 3. Результаты реакций гликозилирования донором 47е.

Акцептор Продукты Выход

1 метанол а,р-метил-фукозиды 90% 1:2,5

2 аллиловый спирт а,р-аллил-фукозиды 90% 1:1

3 37 51 79% только а

4 31 52 87% только а

5 32 53 85% только а

♦Соотношение изомеров определялось с помощью методов спектроскопии *Н ЯМР.

Гликозилирование трихлорацетимидатом 47е моносахаридов 31, 32 и 37 проходило с высокой стереоизбирательностью. а-Связанные дисахариды 51-53 образовывались с выходами 79-87% {Таблица 3). Конфигурация гликозидной связи была определена по величине КССВ составляющей 3,4 Нг. В случае 2,4-диола 37 гликозилирование проходило региоселективно по экваториальной гидроксильной группе с образованием (1->2)-связанного дисахарида 51. Более низкая стереоизбирательность реакций в случаях метанола и аллилового спирта может быть связана с их большей реакционной способностью из-за стерических и электронных факторов. Вследствие этого атака первоначально образующегося нестабилизированного гликозил-катиона IV становится доминирующим процессом (Рисунок 1).

4. Синтез дисахаридов 1-7

Синтез изомерных дисахаридов, различающихся положением сульфатных групп в фукозных остатках (при 0-2 или при 0-4), а также соответствующих несульфатированных аналогов был проведен исходя из общего углеводного предшественника, содержавшего ортогональные защитные группы при 0-2 (бензильную) и при 0-4 (бензоильную). При получении дисахаридов 1-7 были отработаны методики избирательного высвобождения гидроксильных групп при 0-2 и 0-4, сульфатирования, деблокирования и выделения сульфатированных соединений, использованные далее при получении более крупных олигосахаридов.

Так, из дисахарида 52 была синтезирована серия (1—>3)-связанных дисахаридов 3-5 (Схема 8). Каталитический гидрогенолиз соединения 52 и последующее дезацилирование продукта 54 приводили к соединению 3. Сульфатированием диола 54 и удалением защитных групп в соединении 55 получали дисахарид 4, содержащий сульфатные группы при 0-2 фукозных остатков.

Для синтеза 4-О-сульфатированного изомера 5 в соединении 52 первоначально были удалены все ацильные заместители. Избирательное бензоилирование экваториальной

гидроксильной группы в терминальном фукозном остатке триола 56 проводили через промежуточное образование оловоорганического интермедиата, полученного обработкой 56 ВигвпО. Наличие бензоильной группы при О-У в соединении 57 подтверждалось слабопольным сдвигом сигнала протона Н-3' в спектре 'Н ЯМР. Сульфатирование соединения 57 и удаление защитных групп в продукте 58 приводили к дисахариду 5 с выходом 56%. Наличие сульфатных групп в соединении 4 при 0-2 фукозных остатков, а в соединении 5 - при 0-4, подтверждалось слабопольными сдвигами сигналов соответствующих протонов Н-2 и Н-4 в спектрах 'Н ЯМР.

Аналогичный подход был успешно использован в синтезе (1->4)-связанных дисахаридов 6 и 7 исходя из соединения 53, а также (1-»2)-связанных дисахаридов 1 и 2 из соединения 51 (Схема 5).

ОА11

о АН

ВХ01 —- „,0?

ВгО

I ОАс |0Н!

№0 . 56 Я1 • 1Р « Н

<

55 й " ЗО^Ыа—¡2—^ 4 57№»Н,(Р»В1

^"58Н,«30,Ма>Н»«В2 А«!н

0А11 оРг

О0®1 I Ховг

|0Ас ГоАс

ВгО ВгО

0Л

« ^ 62 ■ Н, Я2 ■ Вг

60 Я •30,Ыа—7

43 № - 80,№, № • Вг

I, III ,

Схема в. I: Н2, Рб/С, 1 час, 80%; II; ЭОз ру, ДМФА, АлпЬегШе (N8'), 82-85%; III: 0,4М МаОН, 40°С, 8590%; IV: 0,1М МеО№ в МеОН, 85% для 56, 88% для 61; V. Ви28пО, ВгС1, 80% для 57, 77% для 62.

5. Синтез 2,3-разветвленных трисахаридов 8-10

Построение 2,3-разветвленного трисахаридного скелета было осуществлено в результате региоизбирательного монофукозилирования более реакционносопсобной экваториальной гидроксильной группы в дисахаридном 3,4-диоле 64 (Схема 9). Последний был получен удалением изопропилиденовой защиты в соединении 48д. Использование трихлорацетимидата 47е как фукозилирующего агента приводило к стереоселективному

образованию а-гликозидной связи. Трисахарид 65 был выделен с выходом 80%. Конфигурация вновь созданной гликозидной связи подтверждалась величиной КССВ 3,5 Нг в спектре 'Н ЯМР. Бензоилированием трисахарид 65 был переведен в сполна защищенное производное 66. Наличие бензоильного заместителя при 0-4 восстанавливающего остатка в 66 указывало, что при взаимодействии соединений 64 и 47е происходило региоизбирательное построение (1-»3)-, но не (1->4)-связи.

47»

Схема 9. Г 0,1М ТМЭСШ в СН2С12, -30°С, 82%; 1г Н2, Рй/С, 78-84%; Ш' 0,4М №ОН, 40°С, 85-90%. IV ВгС1, Ру, 80%; V: ЭОз-ру, ДМФА, АтЬегМе (N8*), 75% для 68, 78% для 71; VI: 0,1М МеО№ в МеОН, 80%; VII: ВигЭпО, ВгС1,82%.

Удалением защитных групп в соединении 65 был получен трисахарид 8. Каталитический гидрогенолиз соединения 66, сульфатирование образовавшегося продукта 67 и последующее удаление защитных групп в 68 приводили к трисахариду 9, содержащему сульфатные группы при 0-2 фукозных остатков.

Для синтеза 4-О-сульфатированного изомерного трисахарида 10 в соединении 65 действием метилата натрия в метаноле были удалены все ацильные защитные группы (65-»69). Далее для избирательной защиты экваториальных гидроксильных групп пентаол 69 действием двухкратного избытка Ви^ЭпО был переведен в станнилиденовое производное, которое бензоилировали избытком бензоилхлорида с образованием 3',3"'-ди-0-бензоилированного грисахарида 70 с выходом 82%. Наличие бензоильных заместителей при О-З обоих терминальных остатков было подтверждено слабопольными сдвигами сигналов соответствующих протонов Н-3 Сульфатирование триола 70 и удаление защитных групп в образовавшемся соединении 71 приводили к целевому трисахариду 10.

6. Реакии глнкозилирования дисахаридными донорами

Синтез крупных тетра-, гекса- и октасахаридов был проводен с использованием олигосахаридных гликозил-донорных и гликозил-акцепторных блоков. Как и в случае

сочетания моносахаридов, стратегическими являлись проблемы регио- и стереонаправленного построения гликозидных связей.

Фукозные звенья в линейных олигосахаридах соединены (l-v3)- или (1->4)-гликозидными связями, а в разветвленных - (1->2)- и (1->3)-связями. Ретросинтетический анализ этих соединений показал, что их сборку из олигосахаридных блоков оптимально проводить с построением (1 —>3)-гликозидной связи, поскольку в этом случае нуклеофильным центром является боолее реакционноспособная экваториальная гидроксильная группа при С-3.

В качестве общего предшественника гликозил-акцептора 72 и гликозил-донора 73 был использован (1-»3)-связанный дисахарид 52, содержащий ортогональные У-О-ацетильную и аллильную защитные группы. Избирательное дезацетилирование соединения 52 действием раствора HCl в метаноле приводило к моногидроксильному дисахариду 72, содержащего свободную гидроксильную группу при С-3 терминального фукозного остатка (80%). Удаление аллильной защитной группы в дисахариде 52 действием хлорида палладия (PdCb) в метаноле и последующий перевод полученного полуацеталя в трихлорацетимидат 73 проходили с общим выходом 71%. Аналогичные манипуляции с защитными группами были проведены в ходе синтеза (1->4)-связанных дисахаридных блоков 74 и 75 из общего предшественника 53 (Схема 10).

NH

.о-«

И, II. ^-«¿-ОВП

*" BzoT

-SiS^OBn

I OAc BzO

73

OA1I OAII

«/ .л». u.T-iiY1 CCI,

•^¿-OBn I ла.

OBn

¿OBz . ' ¿OBz »■"' . OOBZ

BiO BzO

OBn

'OBn 1 OAc

BzO

74 «3 75

Схема 10.1- 2% НС1 8 МеОН, 80% для 72, 78% для 74; II, Р<1С12, МеОН; III, CCIзCN, ОВи, 71% для 73, 70% для 75 (суммарный выход на две стадии 1 и II)

Эффективность изомерных (1->3)- и (1->4)-связанных дисахаридных гликозил-доноров 73 и 75 была изучена в реакциях гликозилирования метанола, аллилового спирта,

моносахарида 31, содержащего свободную гидроксильную группу при С-3, а также в реакциях [2+2]-сочетания пар дисахаридов (73 + 72) и (75 + 74) (Схема 11).

Гликозилирование проводилось при -30°С в СНгСЬ с использованием ТМЭОТГ в качестве катализатора. При более низкой температуре, как и в случае моносахаридных фукозил-трихлорацетимидатов, наблюдалось уменьшение выхода О-гликозидов и доминирующее образование а-связанных Л'-гликозидов (73—>76, 75—>80).

ме 7

-ОВп

BzO

»2

I ОАс BzO

78 R = a NH(CO)CCI, 77а R ■ а ОМе 776 R в (J ОМ* 78a R - а О АН 786 R - Р OAtl

R

ОВп

BzO

OAII

BzOj

•^si-овп

ОВп 79

R

ОВп

О1

MeSi£¿0Bn

I ОАс BzO

80 R » о NH(CO)CCI,

81aR»aOMe

816R-0OM»

ОАИ ОВп

BzO]

1 AD»

I OAc BzO

OBn

Схема 11. i- 0,1M TMSOTf в CH2CI2, -30°C, 85% для 84, 83% для 85.

Дисахаридные трихлорацетимидаты 73 и 75 оказались эффективными а-гликозилирующими агентами при использовании в качестве акцепторов моно- и дисахаридов, содержавших экваториальные щцроксильные группы. Реакции [1+2]- и [2+2]-гликозилирования проходили с образованием только a-связанных три- и тетрасахридов, соответственно (Таблица 4). Высокая стереоизбирательность этих превращений может быть объяснена образованием стабилизированных гликозил-катионов типов V (в случае донора 73, где R1 - защищенный фукозный заместитель при 0-3, Рисунок 1) и VI (в случае донора 75, где R2 - защищенный фукозный заместитель при 0-4, Рисунок /), нуклеофильная атака которых возможна только с a-стороны. Для дисахаридных катионов V и VI были рассчитаны величины энергий стабилизации (ДЕ), которые составили -5,8 ккал/моль и -11,0 ккал/моль, соответственно. Кроме того, не следует исключать возможности стереоконтролирующего влияния фукозного заместителя (при О-З в случае 73, при 0-4 в случае 75), который может

16

создавать стерические препятствия для подхода гликозил-акцептора с р-стороны. Более низкая стереоизбирательность реакций с метанолом и аллиловым спиртом, как и в случае моносахаридного трихлорацетимидата 47е, по-видимому, связана с большей вероятностью нуклеофильной атаки нестабилизированного гликозил-катиона типа ГУ (Рисунок 1).

Таблица 4. Результаты гликозилирования донорами 73 и 75

Донор Акцептор Продукты Выход а:3*

1 73 метанол а,р-метил-глихозиды 77а,б 90% 1:1,5

2 73 аллиловый спирт а,р-аллил-гликозиды 78а,б 88% 1:1

3 73 31 79 87% только а

4 73 72 84 85% только а

5 75 метанол а,р-метил-гликозиды 81а,б 90% 1:1,2

6 75 31 83 83% только а

7 75 74 85 85% только а

'Соотношение изомеров определялось с помощью методов спектроскопии 'Н ЯМР.

7. Синтез линейных три- и тетрасахаридов 11-15,19-21, 25 и 26

Для получения линейных три- (11-15) и тетрасахаридов 19-21, 25 и 26 была проведена последовательность превращений, аналогичная использованной в ходе синтеза дисахаридов 1-7. Несульфатированные и избирательно сульфатированные олигосахариды получали из общего углеводого предшественника. Таковыми для построенных из повторяющихся (1—>3)-связанных фукозных остатков три- (11-13) и тетрасахаридов (19-21) стали соединения 79 и 84, соответственно (Схема 12). Удалением защитных групп в 79 и 84 были получены несульфатированные олигосахариды 11 и 19. Избирательное высвобождение гидроксильных групп при С-2 фукозных остатков в 79 и 84, и их последующее сульфатирование и деблокирование образовавшихся соединений 87 и 89 приводило к олигосахаридам 12 и 20, содержащим сульфатные группы при 0-2 фукозных остатков.

Обработка соединений 79 и 84 раствором метилата натрия в метаноле приводила к удалению сложноэфирных групп только в терминальном фукозном остатке. Дальнейшее дебензоилирование субстратов в этих условиях затруднено, по-видимову, вследствие их ограниченной растворимости в метаноле. Замена растворителя на диметилсульфоксид (ДМСО) и использование 0,1 М водного раствора КаОН позволили провести это превращение с хорошими выходами 80%. Избирательное бензоилирование экваториальной гидроксильпой группы при С-3 в терминальном остатке полученных полиолов 90 и 93 (стадия V на Схеме 12), сульфатирование аксиальных гидроксильных групп и последующее деблокирование приводили к олигосахаридам 13 и 21, содержащим сульфатные группы при 0-4 фукозных остатков.

0All

Ме

R'oj

'p2Z-OBn

BzO

L R'oj M*S=2Z-OBH

I OR* R'O

11 ■ 1219 ■ 20 -

- OD

_ 87

_Ü'C,

п R1 R*

79 1 All Вп

86 1 Р Г Н

87 1 Рг SO,Na

84 2 All Bn —

88 2 Рг Н

89 2 Рг SO,Na

X

У

•»С,

n R' Ra

90 1 H H

91 1 H Bz

92 1 SO,Na Bz-

93 2 H H

94 2 H Bz

95 2 SO,Ni Bz-

I.U.

I, Ii.

13

Схема 12. i: H2, Pd/C, 80% для 86, 78% для 88, II: 0,4M NaOH, 40°C, 85-90%, iii: S03 py, ДМФА, Amberlite (Na*), 75-80%; iv: 0,1M NaOH в ДМСО, 80%; v: Bu2SnO, BzCl, 80% для 91,76% для 95.

Три- (14, 15) и тетрасахариды (22, 23), соответствующие линейным участкам цепей фукоиданов, построенным из чередующихся (1-»3)- и (1—>4)-связанных фукозных звеньев, были получены из соединений 83 и 85, соответственно (Схема 13).

Ol

ОРг OR

BzO I

I О Ас

OBz OR

BzO j

"S^Si'oR

1 ЛВ.

OR

¿OBz ^O

-OR

С

96 R » H -

14

97 R - SO,Na "

15

l0Ac

•c

OBz

i

OR

98 R = H -

25

99 R-SO,Na-

28

Схема 13 I: H2, Pd/C, 80% для 96, 75% для 98, II. S03 py, ДМФА, Amberlite (Na*), 78% для 97, 80% для 99; Iii' 0,4M NaOH, 40°C, 85-90%.

8. Синтез разветвленных тетрасахаридов 16-18

Синтез 2,3-разветвленного тетрасахарида 100 был проведен по схеме [2+2] сборки углеводной цепи с использованием дисахаридного 3,4-диола 64 и трихлорацетимидата 73 (Схема 14). Реакция проходила с высокой регио- и стереоизбирательностью - выход тетрасахарида 100 составил 82%. Конфигурация вновь созданной гликозидной связи подтверждалась величиной КССВ .//•■,г■• 3,5 Нг в спектре !Н ЯМР. Бензоилированием

тетрасахарид 100 был переведен в сполна защищенное производное 101. Наличие бензоильного заместителя при 0-4 восстанавливающего остатка в 101 подтверждало то, что при взаимодействии соединений 64 и 73 проходило региоизбирагельное построение (1 —>3)-, но не (1->4)-связи.

Из соединения 100 в результате превращений, аналогичных использованным в синтезе 2,3-разветвленных три сахари дов 8-10, были получены несульфатированный и избирательно сульфатированные тетрасахариды 16-18 (Ср. Схемы 14 и 9).

О All

"ZrSj-o

lo OB

73 * но- I ---Ь-T^OR'

OBn

Mel

19 ORS

R!0

Me 7^-07 f^U-овп

-J. OR' R20

— 100 R'« All, Rä"Bn, R' = H---104 R1 ■ Ra = H

C... - |UW m ^Ji ■ on — •

vil Г

, 101 R' = All, R! = Bn, R> - Bz * 105 R' » Bz, R2 = H

"C V (

~ 102 R' - Pr, R* = H, R3 * Bz V 106 R, . Bz R2 . so Na ibJiV ig

17 -4-юз R' ■ Pr, R2 =■ SO,Na, R> s Bz

Схема 14 i 0.1M TMSOTf в CH2CI2, -30°C, 82%, ii Н2, Pd/C, 78-84%, И! 0,4М NaOH, 40°С, 85-90%, iv BzCI, Ру 80%, v S03.py, ДМФА, Ambertite (Na*), 75-80%, vi 0,1M NaOH в ДМСО, 80%, vii Bu2SnO, BzCI, 77%.

9. Синтез линейных гекса- и октасахаридов 24-28

Успешное использование дисахаридных блоков в синтезе три- и тетрасахаридов обосновало возможность проведения сборки гекса- и октасахаридных цепей по конвергентным схемам [2+4] и [4+4].

Изомерные тетрасахаридные акцепторы 107 и 111, несущие свободную гидроксильную группу при С-3 терминального фукозного остатка, были получены н результате избирательного З-О-дезацетилирования соединений 84 и 85, соответственно [2+4]-Сочетание пар соединений (73+107) и (75+111) приводило к образованию только а-связанных гексасахаридов 108 и 112 с выходами 80 и 82%, что еще раз продемонстрировало высокую эффективность (1->3)- и (1-»4)-связанных дисахаридных трихлорацетимидагов 73 и 75 как а-гликозилирующих агентов Из соединения 108 далее были получены несульфатированный и избирательно сульфатированный гсксахариды 24 »I 25, построенные из повторяющихся (1-»3)-а-фукозных остатков, а из соединения 112 - гексасахариды 26 и

27, в которых чередуются (1-»3)- и (1 —>4)-гликозидные связи между а-фукозными звеньями (Схема 15).

Мл'.

О All

'frsd- ОВп

BzOj

^p^Z-OBn

BzO Mer^O

lo BzOj

I OH BzO

OBn

38*

BzO'

OR'

BzOj1

OR2

BzO

OAc

"'fpsic

Bzi0H

OOBz

MepfiioBn BzOj "'fi^t-OBn OOBz

ÄsioBn M4es=ai

I------¿0-

OR1 OR2

OOBz OR2

BzOj

-Ol

О OBz

Ue'j

'oR2

BzO0"

107 -

108 R' « All, R2 - Bn »C iv

109 R1» Pr, R2 • H -

<

75,1

■24

Iv

110 Ri ■ Pr, R2 ■ SO,Na—25

< »c

112 R1 = All, R2 • Bn

113 R' - Pr, R2 ■ H '

26

Iv

114Ri »Pr, R2 = SO,Na27

Схема 15. r 0,1M TMSOTf в CH2CI2, -30°C, 80% для 108, 82% для 112, Ii' H2, Pd/C, 78-84%, Ш: S03 py, ДМФА, Amberlite (Na*), 75-80%, iv 0,4M NaOH, 40°C, 85-90%.

Сборка октасахарида 28 по схеме [4+4] предпочтительнее, чем по схеме [2+6], поскольку препаративное отделение гель-фильтрацией октасахаридного продукта от тетрасахаридов эффективнее, чем от гексасахаридов. Удаление аллильной защиты в тетрасахариде 84 и последующий перевод образовавшегося полуацеталя в трихлорацетимидат приводили к донорному блоку 115 с выходом 74% (Схема 16). [4+4J-Гликозшщрование проходило с высокой стереоизбирательностью. Линейный (1->3)-а-связанный октасахарид 116 был получен с выходом 80%. Далее он был переведен в октасульфатированное производное 28 с выходом 49%.

"•psz.«*

BzoT _,

BzOj

Bzol

3

-OR2

OAc

<

116 R1 = All, R2ss Bn

117 R1 - Pr, R2 » H

• 118 R' ■ Pr, R2» SO,Na-»- 28

Схема 16. i: PdCI2, MeOH; CCI3CN, DBU, 74%; Ii. 0,1 M TMSOTf в CH2CI2, -30°C, 80%; iii: H2, Pd/C, 70%; iv S03 py, ДМФА, Amberlite (Na*), 78%; v: 0,4M NaOH, 40°C, 90%.

20

10. Области использования олигосахаридов 1-28

Синтезированные олигосахариды 1-28 являются ценными модельными соединениями для структурных, конформационных и биохимических исследований природных фукоиданов. Так, характеристики спектров 'Н и 13С ЯМР соединений 1-28 образуют представительную базу данных, необходимых для исследования фукоиданов. Эти данные уже были использованы при установлении структуры фукоиданов из бурых водорослей Fucus evanescens2 и Fucus distichus3

В лаборатории химии гликоконъюгатов ИОХ проводится конформационный анализ олигосахаридов 1-28 для выявления зависимости конформации гликозидной связи в ряду данных соединений от таких структурных характеристик, как тип межфукозных связей (1->2, 1—>3, 1—>4), наличие сульфатных и фукозных заместителей, длины олигосахаридной цепи. Обнаруженные закономерности и неизвестные ранее конформационные эффекты позволят сделать выводы об особенностях пространственной организации природных фукоиданов, что важно для понимания их биологического действия.

Кроме этого, с использованием синтезированных олигосахаридов были начаты биохимические исследования с целью определения участков цепей фукоиданов, ответственных за противовоспалительную, антикоагулянтную и антиангиогенную активности.

Выводы

1 Проведен регио- и стереонаправленный синтез избирательно сульфатированных и несульфатированных фукоолигосахаридов 1-28, соответствующих линейным и разветвленным участкам цепей природных полисахаридов фукоиданов.

2. Изучено влияние природы заместителей в моно- и олигосахаридных фукозил-донорах на стереоизбирательность реакции а-гликозилирования и впервые показано стереоконтролируюшее влияние ацильного заместителя при 0-3 в фукозных остатках, что позволяет расширить круг известных методов синтеза 1 Д-г/мс-фукозидов

3 Показана эффективность сборки a-L-фуко-тетра-, -гекса- и -октасахаридов по конвергентным схемам [2+2], [2+4] и [4+4], соответственно

4 Синтезированные олигосахариды 1-28 являются ценными модельными соединениями для структурного и конформационного анализа природных фукоиданов, а также для опредепения фармакофорных группировок в этих полисахаридах

2 M I. Bilan, A A. Grachev, N Е. Ustuzhanina, A.S. Shashkov, N.E Nifantiev, A.I Usov, Structure of a fucoidan from the brown seaweed Fucus evanescens C.Ag , Carbohydr Res., (2002), 337, 719

3 M I. Bilan, A A Grachev, N E Ustuzhanina, A S. Shashkov, N.E. Nifantiev, A.I Usov, A highly regular fraction of a fucoidan from the brown seaweed Fucus distichus L , Carbohydr. Res (2004), 339, 511.

Основное содержание диссертации изложено в следующих работах:

1. A.G. Gerbst, N.E. Ustuzhanina, A.A. Grachev, D.E. Tsvetkov, E.A. Khatuntseva, N.E. Nifantiev, Effect of the nature of protecting group at 0-4 on stereoselectivity of glycosylation by 2,3-di-O-benzyl-fucosyl bromides//Mend. Commun., 1999,114-116.

2. E.A. Khatunseva, N.E. Ustuzhanina, G.V. Zatonskii, A.S. Shashkov, A.I. Usov, N.E. Nifantiev, Synthesis, NMR and conformational studies of fucoidan fragments. 1: Desulfated 2,3- and 3,4-branched trisaccharide fragments and constituting disaccharides// J. Carbohydr. Chem., 2000, 19(9), 1151-1173.

3. A.G. Gerbst, N.E. Ustuzhanina, A.A. Grachev, E.A. Khatuntseva, D.E. Tsvetkov, D.M Whitfield, A. Berces, N.E. Nifantiev, Synthesis, NMR and conformational studies of fucoidan fragments 3: effect of benzoyl group at О-З on stereoselectivity of glycosylation by 3-0- and 3,4-di-O-benzoylated 2-O-benzylated fticosyl bromides// J. Carbohydr. Chem., 2001, 20(9), 821-831.

4. A.G. Gerbst, N.E. Ustuzhanina, A.A. Grachev, N.S. Zlotina, E.A. Khatuntseva, D.E. Tsvetkov, A.S. Shashkov, A.I. Usov, N.E. Nifantiev, Synthesis, NMR and conformational studies of fucoidan fragments 4: 4-mono- and 4,4'-disulfated (l-3)-a-L-fucobioside and 4-sulfated fucoside fragments// J. Carbohydr. Chem., 2002,21(4), 313-324.

5. A.G. Gerbst, N.E. Ustuzhanina, A.A. Grachev, E.A. Khatuntseva, D.E. Tsvetkov, A.S. Shashkov, A.I. Usov, M.E.Preobrazhenskaya, N.A.Ushakova, N.E. Nifantiev, Synthesis, NMR and conformational studies of fucoidan fragments 5: Linear 4,4',4"-tri-0-sulfated and parent non-sulfated (l-3)-fucotrioside fragments// J. Carbohydr Chem., 2003,22(2), 37-50.

6. Гербст А.Г., Грачев A.A., Устюжанина H.E., Хатунцева Е.А., Цветков Д.Е., Усов А.И., Шашков A.C., Преображенская М.Е., Ушакова H.A., Нифантьев Н.Э., Синтез, ЯМР и конформационные исследования фрагментов фукоиданов. VI. Фрагменты, содержащие а-(1-»2)-связанное фукобиозидное звено// Биоорганическая химия, 2004, 30, 156.

7. A.A. Grachev, A.G. Gerbst, N.E. Ustyuzhanina, E.A. Khatuntseva, A.S Shashkov, AI. Usov, N.E. Nifantiev, Synthesis, NMR and conformational studies of fucoidan fragments 7: influence of length and branching on the conformational flexibility of linear (l->3)-linked oligosaccharide chains// J. Carbohydr. Chem., 2005,24, 85-99.

8 N.E. Ustyuzhanina, V.B. Kiylov, A.A. Grachev, N.E. Nifantiev, Efficient convergent synthesis of tetra-, hexa- and octasaccharide fucoidan fragments, Tetrahedron, 2005.

9. Устюжанина H.E., Гербст А.Г., Хатунцева E.A., Нифантьев Н.Э., Синтез линейных трисахаридных фрагментов фукоиданов// Тезисы докладов V молодежной научной школы-конференции по органической химии (Екатеринбург), 2002.

10. Устюжанина Н.Е., Гербст А.Г., Грачев A.A., Хатунцева Е.А., Усов А.И., Цветков Д.Е.,

Шашков А С., Преображенская M Е., Ушакова Н.А., Нифантьев Н.Э, Синтез и конформационный анализ фрагментов фукоиданов// Тезисы докладов XVII Менделеевского съезда по общей и прикладной химии (Казань), 2003.

11. Устюжанина H Е., Гербст А Г , Хатунцева Е.А., Нифантьев Н.Э., Стереонаправленный синтез тетрасахаридных фрагментов фукоиданов// Тезисы докладов VI молодежной научной школы-конференции по органической химии (Новосибирск), 2003.

12. N.E. Ustyuzhanina, V.B. Krylov, А.А. Grachev, N.E. Nifantiev, Stereoselective synthesis of tetra- and hexasacchande fucoidan fragments// Тезисы докладов XXII Международного Симпозиума по углеводам (Глазго), 2004

Принято к исполнению 05/05/2005 Исполнено 06/05/2005

Заказ № 838 Тираж 150 экз

ООО «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 Москва, Балаклавский пр-т, 20-2-93 (095) 747-64-70 www autoreferat ru

РНБ Русский фонд

2006^4 7895

» -8 5 60

Часть 1. Введение

Часть 2. Литературный обзор

2.1. Введение: реакция гликозилирования

2.2. Влияние природы уходящей группы на 7 стереоизбирательность 1,2-г/ис-гликозилирования

2.3. Влияние природы заместителя при С-2 на 10 стереоизбирательность гликозилирования.

2.4. Влияние природы заместителей при С-3, С-4, С-5 и С-6 10 на стереоизбирательность 1,2-г/г/с-гликозилирования.

2.5. Проводившиеся ранее синтезы фрагментов фукоиданов 21 Часть 3. Обсуждение результатов

3.1. Целевые соединения и стратегия их синтеза

3.2. Синтез моносахаридных предшественников

3.3. Исследование влияния природы заместителей 45 в моносахаридных фукозил-донорах на стереоизбирательность гликозилирования

3.4. Синтез дисахаридов 1

3.5. Синтез 2,3-разветвленных трисахаридов 8

3.6. Реакции гликозилирования дисахаридными донорами

3.7. Синтез линейных три- и тетрасахаридов 11-15,19

3.8. Синтез разветвленных тетрасахаридов 16

3.9. Синтез линейных гекса- и октасахаридов 24

3.10. Области использования олигосахаридов 1-28 67 Часть 4 Выводы 69 Часть 5 Экспериментальная часть 70 Часть 6 Список литературы

Список используемых сокращений

Et- этил Ви - бутил Ph - фенил Ас - ацетил АН - аллил Вп - бензил Bz - бензоил

ДБУ - 1,8-диазабицикло[5.4.0]-ундец-7-ен

DDQ - 1,2-дихлоро-4,5-дицианохинон

NIS - N-йодсукцинимид

TBDMS - трет-бутилдиметилсилил

Tf - трифторметилсульфонил

TsOH - /7-толуолсульфокислота

TMS - триметилсил

DMTST - диметил(метилтио)сульфонилтрифлат

ДМФА - диметилформамид

ДМСО - диметилсульфоксид

IDCP - йодциколлидинперхлорат

Ру - пиридин

ТГФ - тетрагидрофуран

ЭА - этилацетат

ПЭ - петролейный эфир

Часть 1.

Углевод-белковые взаимодействия определяют протекание многих важных физиологических процессов. В связи с этим представляется перспективным использование доступных природных олиго- и полисахаридов и их модифицированных производных для получения фармацевтических препаратов. Среди интенсивно исследуемых природных углеводных макромолекул вызывают интерес полисахариды фукоиданы, выделенные из бурых водорослей и морских беспозвоночных. Эти биополимеры эффективно ингибируют опосредованные L- и Р-селектинами воспаления [1-3], препятствуют процессам тромбообразования и свертывания крови [4-6], проявляют антиангиогенный эффект [4,7-9], блокируют бактериальную и вирусную адгезию на клетках млекопитающих [10-12]. Такой широкий спектр физиологической активности обусловлен, по-видимому, тем, что отдельные участки углеводной цепи фукоиданов мимикрируют природные лиганды белковых рецепторов.

Основные цепи фукоиданов построены преимущественно из остатков а-L-фукопиранозы. Наличие сульфатных и ацетильных групп, углеводных заместителей (остатков фукозы, ксилозы, глюкозы, глюкуроновой кислоты, маннозы) вносит существенное разнообразие в их структуру, маскирует регулярней» их цепей и значительно усложняет установление строения этих полисахаридов с использованием известных химических и физико-химических методов.

Направленный синтез и изучение свойств фрагментов представляется перспективным подходом к выявлению взаимосвязи структуры и свойств фукоиданов. Синтетические олигосахариды являются ценными модельными соединениями: их спектральные (ЯМР) данные необходимы для установления строения полисахаридов, конформационный анализ позволит сделать заключение об особенностях пространственной организации углеводных цепей фукоиданов, а биохимическое исследование позволит выявить участки цепи, ответственные за физиологическую активность полисахаридов.

Целыо диссертационной работы являлась разработка эффективного блочного синтеза несульфатированных и избирательно сульфатированных фукоолигосахаридных фрагментов фукоиданов. Для создания представительного набора фрагментов в качестве объектов синтеза были выбраны олигосахариды, родственные как линейным, так и разветвленным участкам цепей. Соединения различаются количеством моносахаридных звеньев (от двух до восьми), типом гликозидных связей [(1—>2), (1—>3), (1—»4)], степенью сульфатирования, положением сульфатных групп (при 0-2 или при 0-4).

Работа выполнена в лаборатории химии гликоконъюгатов (№52) Института органической химии имени Н.Д. Зелинского РАН. Диссертация состоит из 6 частей: введения, литературного обзора, посвященного методам построения 1,2-^ис-гликозидной связи и проводившимся ранее синтезам фрагментов фукоиданов, обсуждения результатов, экспериментальной части и списка цитированной литературы.

Нумерация соединений дается арабскими цифрами жирным шрифтом, причем соединения, схемы и таблицы в части 2 "Литературный обзор" и в части 3 "Обсуждение результатов" нумеруются независимо.

Часть 2.

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

2.1. Введение

Стереоизбирательное построение гликозидной связи является ключевым моментом в синтезе олигосахаридов. В общем виде реакция гликозилирования представляет собой замещение агликона в молекуле гликозил-донора нуклеофилом (гликозил-акцептором), в качестве которых могут выступать О-, N-, С-нуклеофилы и другие. Наиболее широкое распространение в синтезе природных олигосахаридов и гликоконъюгатов получила реакция О-гликозилирования (Схема 1). Нуклеофил (молекула спирта) может подойти к гликозил-катиону I либо с верхней, либо с нижней стороны плоскости пиранозного цикла. В зависимости от взаимной ориентации вновь образованной гликозидной связи и связи (С-2 - X), где X = О, N, различают 1,2-цис- и 1,2-т/?анс-0-гликозиды. Примерами соединений первого типа являются моносахаридные остатки с конфигурациями a-D-глюко. а-Р-галакто. ft-P-манно. Их изомеры по аномерному центру - (З-Р-глюко, Р-Р-галакто, а-Р-манно - соответствуют 1,2-т/?ш/с-0-гликозидам.

OR psC*

Y X

ROH

Г 00

ROH

X = COR' V cj) орт оэфир

ROH J

Wo

1,2 -цис

1,2-r ране ii

Схема 1. Влияние природы заместителя при С-2 в структуре гликозил-донора на стереоизбирательность реакции гликозилирования.

Стереонаправленный синтез 1,2-трш/с-О-гликозидов в большинстве случаев успешно проводится с использованием гликозил-донорнов, содержащих заместитель при С-2 (X), способный стабилизировать гликозил-катион I за счет анхимерного содействия. В качестве таких заместителей могут выступать О-ацетильные, О-бензоильные, iV-фталимидные группы и некоторые другие [13-19]. Например, в случае соединений с ацилокси-группой при С-2, в результате такого содействия образуются стабилизированные катионы типа И, взаимодействие которых с нуклеофилом предпочтительно со стороны, противоположной заместителю при С-2 (Схема 1). Побочной реакцией, в частности, может быть образование циклических ортоэфиров в результате присоединения остатка спирта по С-2 диоксоланового цикла (путь 4) [17-19].

Более сложной синтетической задачей является построение 1,2-цис-О-гликозидной связи. Отсутствие такого мощного стереоконтролирующего фактора, как соучаствующий заместитель при С-2, заставляет искать иные пути стереоконтроля. В этой ситуации, как правило, сочетание каждой пары донорного и акцепторного блоков является предметом для детального исследования и требует поиска оптимальных условий реакции.

Образование 1,2-*/ис-0-гликозидов в случаях Сахаров с a-D-глюко и а-D-галакто конфигурациями термодинамически более выгодно, чем образование соответствующих транс-изомеров, вследствие аномерного эффекта [20-22]. Однако, при кинетическом контроле реакции нуклеофильная атака со стороны, противоположной заместителю при С-2, оказывается предпочтительной. Соотношение образующихся в ходе реакции стереоизомеров может зависеть от следующих факторов: (1) структура гликозил-донорна и (2) гликозил-акцептора, (3) природа растворителя и (4) промотирующей системы, (5) температура реакции.

В настоящем литературном обзоре будут рассмотрены примеры влияния природы заместителей в гликозил-донорных блоках на стереоизбирательность 1,2-г/г/с-гликозилирования (2.2 - 2.4). Природные полисахариды фукоиданы построены преимущественно из остатков L-фукопиранозы, соединенных 1,2-z/wc-O-гликозидной связью. Поскольку предметом данной диссертации был синтез олигосахаридных фрагментов этих биополимеров, отдельный раздел литературного обзора посвящен рассмотрению проведенным ранее синтезам фрагментов фукоиданов.

1. A. Science, 258, 964 (1992).

2. Foxall, С.; Watson S. R.; Dowbenko, D.; Lasky, L. A.; Kiso, M.; Hasegawa, A.; Asa, D.; Brandley, B.K. J. Cell Biol, 117, 895 (1992).

3. Preobrazhenskaya, M. E.; Berman, A. E.; Mikhailov, V. I.; Ushakova, N. A.; Mazurov, A. V.; Semenov, A. V.; Usov, A. I.; Nifant'ev N. E.; Bovin, N. V. Biochem. Molecul. Biol. Int., 43, 443 (1997).

4. Pereira, M. S.; Mulloy В.; Mourao, P.A. J. Biol. Chem., 274, 7656 (1999).

5. Nishino, Т.; Nagumo, T; Kiyohara, H.; Yamada, H. Carbohydr. Res., 211, 77 (1991).

6. Nardella, A.; Chaubet, F.; Boisson-Vidal, C.; Blondin, C.; Durand, P.; Jozefonvicz, J. Carbohydr. Res., 289, 201 (1996).

7. Hanenberger, R.; Jakobson, A. M. Glycoconjugate J., 8, 350 (1991).

8. Matou, S.; Helley, D.; Chabut, D.; Bros, A.; Fischer, A.-M. Thrombosis Res. 106, (4-5), 213 (2002).

9. Matsubara, K.; Xue, C.; Zhao, X.; Mori, M.; Sugawara, Т.; Hirata, T. IntJMol Med. 15(4)., 695 (2005).

10. Beress, A.; Wassermann, O.; Bruhn, L.; Beress, E. N; Kraiselburd, L. V.; Gonzalez, G. E.; Motta, De; Chavez, P. I. J. Nat. Prod., 56,478 (1993).

11. Ponce, N. M. A.; Pujol, C. A.; Damonte, E. В.; Flores, M. L.; Stortz, C. A. Carbohydr. Res., 338, 153 (2003).

12. Wilaiwan Chotigeat; Suprapa Tongsupa; Kidchakan Supamataya; Amornrat Phongdara Aquaculture, 233, (1-4)., 23 (2004).

13. Goodman, L. Adv. Carbohydr. Chem. Biochem., 22, 109 (1967).

14. Nukada, Т.; Berces, A.; Zgierski, M. Z.; Whitfield, D. M. J. Am. Chem. Soc., 120, 13291 (1998).

15. Fife, Т. H.; Bembi, R.; Natarajan, R. J. Am. Chem. Soc., 118, 12956 (1996).

16. Banoub, J.; Boullanger, P.; Lafont, D. Chem. Rev., 92, 1167 (1992).

17. Lindhorst, Т. K. Essentials of Carbohydrate Chemistry and Biochemistry, Wiley-VCH: New York, (2000).

18. Bochkov, A. F.; Zaikov, G. E. Chemistry of the O-Glycosidic Bond: Formation and Cleavage; Pergamon Press: New York, (1979).

19. Boons, G. J.; Hale, K. J. Organic Synthesis with Carbohydrates', Sheffield Academic Press: Sheffield, (2000).

20. Wolfe, S.; Whangbo, M. H.; Mitchell, D. J. Carbohydr.Res., 69, 1 (1979).

21. Tvaroska, I.; Bleha, T. Adv. Carbohydr. Chem. Biochem., 47,45 (1989).

22. Lemieux, R. U. Pure Appl. Chem., 25, 527 (1971).

23. Lemieux, R. U.; Hendriks, К. В.; Sick, R. V.; James, K. J. Am. Chem Soc., 97, 4056(1975).

24. Lemieux, R. U.; Driguez, H. J. Am. Chem. Soc., 97,4069 (1975).

25. Lemieux, R. U.; Ratcliffe, R. M.; Can. J. Chem., 57, 1244 (1978).

26. Lemieux, R.U.; Hayami J., Can. J. Chem., 43, 2162, (1965).

27. Andersson, F.; Fugedi, P.; Garegg, P. J.; Nashed, M. Tetrahedron Lett., 27(33)., 3919(1986).

28. Takeo, K.; Uemura, K.; Mitoh, H. J. Carbohydr. Chem., 1,293 (1988).

29. Paulsen, H. Angew. Chem., 94, 184, (1982).

30. Matsuzaki, Y.; Ito, Y.; Nakahara, Y.; Ogawa, T. Tetrahedron Lett. 34, 1061 (1993).

31. Forsgren, M.; Norberg, T. Carbohydr. Res., 116, 39 (1983).

32. Takeo, K.; Maeda, H. J. Carbohydr. Chem., 7, 309 (1988).

33. Garegg, P. J.; Helland, A. C. J. Carbohydr. Chem., 12, 105 (1993).

34. Norberg, Т.; Ritzen, H. Gly со conjugate J. 3, 135 (1986).

35. Crich, D.; Sun, S. J. Am. Chem. Soc., 120, 435 (1998).

36. Benakli, K.; Zha, C.; Kerns, R. J. J. Am. Chem. Soc., 123, 9461 (2001).37 (a). Crich, D.; Smith, M. J. Am. Chem. Soc., 123, 9015 (2001).

37. Crich, D.; Smith, M. J. Am. Chem. Soc., 124, 8867 (2002).

38. Paulsen, H.; Lockhoff, O. Chem. Ber. 114, 3102 (1981).

39. Srivastava, V. K.; Schuerch, C. J. Org. Chem. 46, 1121, (1981).

40. Betaneli, V. I.; Ovchinnikov, M. V, Bachinowsky, L. V.; Kochetkov, N. K.; Carbohydr. Res., 84, 211 (1980).

41. Backinowsky, L. V.; Balan, N. F.; Shashkov, A. S.; Kochetkov, N. K.; Carbohydr. ■Дет., 84, 225 (1980).

42. Crich, D.; Sun, S.; Tetrahedron, 54, 8321 (1998).

43. Crich, D.; Smith, M. Org. Lett.,. 2,4067 (2000).

44. Crich, D.; Sun, S. J. Org. Chem., 62, 1198 (1997).

45. Crich, D.; Cai, W. J. Org. Chem., 64,4926 (1999).

46. Wolfrom, M. L.; Lineback, D. R. In Methods in Carbohydrate Chemistry and Biochemistry, Vol. 2; Whistler, R. L.; Wolfrom, M. L., Eds.; Academic Press: New York London, 341 (1963).

47. Kochetkov, N. К.; Klimov, E. M.; Malysheva, N. N.; Demchenko, A. V. Carbohydr. Res., 212, 77 (1991).

48. Kopper, S.; Zehavi, U. Carbohydr. Res., 193, 296 (1989).

49. Madsen, R.; Udodong, U. E.; Roberts, C.; Mootoo, D. R.;Konradsson, P.; Fraser-Reid, B. J. Am. Chem. Soc.,\\l, 1554 (1995).

50. Silva, D. J.; Wang, H. M.; Allanson, N. M.; Jain, R. K.;Sofia, M. J. J. Org. Chem., 64, 5926 (1999).

51. Ishikawa, Т.; Fletcher, H. G. J. Org. Chem., 34, 563 (1969).

52. Fretchet, J. M.; Schuerch, C. J. Am. Chem. Soc., 94, 604 (1972).

53. Fukase, K.; Kinoshita, I.; Kanoh, Т.; Nakai, Y.; Hasuoka, A.; Kusumoto, S. Tetrahedron, 52, 3897 (1996).

54. Houdier, S., Vottero, P. J. A. Carbohydr. Res., 232, 349 (1992).

55. Green, L. G.; Ley, S. V. In Carbohydrates in Chemistry and Biology, Vol. 1; Ernst, В.; Hart, G. W.; Sinay, P., Eds.; Wiley-VCH: New York, 427 (2000).

56. Fei, C. P.; Chan, Т. H. Tetrahedron Lett., 28, 849 (1987).

57. Eby, R.; Schuerch, C.; Carbohydr. Res., 34, 79 (1974).

58. Dejter-Juszynski, M.; Flowers, H. M.; Carbohydr. Res., 23, 41 (1972).

59. Zuurmond, H. M.; Laan, S. C. van der; Marel, G. A. van der; Boom, J. H. van, Carbohydr. Res., 215, cl (1991).

60. Eby, R.; Schuerch, C.; Carbohydr. Res., 34, 79 (1974).

61. Boeckel, C. A. A. van; Beetz, Т.; Aelst, S. F. van Tetrahedron, 40,4097 (1984).

62. Lemieux, R. U. Adv. Carbohydr. Chem. Biochem., 9, 1 (1954).

63. Shmidt, R.R. Angew. Chem., 98, 213 (1986).

64. Crich, D.; Cai, W.; Dai, Z.; J. Org. Chem., 65, 1291 (2000).

65. Yamanoi, Т.; Nakamura, K.; Takeyama, H.; Yanagihara, K.; Inazu, Т.; Bull. Chem. Soc. Jpn., 67, 1359 (1994).

66. Demchenko, A.; Rousson, E.; Boons, G.-J. Tetrahedron Lett., 40, 6523 (1999).

67. Tosin, M.; Murphy, P. V. Org. Lett., 4, 2002

68. Koto, S.; Miura, Т.; Hirooka, M.; Tomaru, A.; Iida, M.; Kanemitsu, M.; Takenaka, K.; Masuzawa, S.; Mijaji, S.; Kuroyanagi, N.; Yagishita, M.; Zen, S.; Yago, K.;Tomonaga, F. Bull. Chem. Soc. Jpn., 69, 3247 (1996).

69. Kovac, P.; Palovcik, R. Carbohydr. Res., 54, Cl 1 (1977).

70. Hirsch, J.; Koos, M.; Kovac, P. Carbohydr. Res., 310, 145 (1998).

71. Wiesner, K.; Tsai, T. Y. R.; Ren, A.; Kumar, R.; Tsubuki, V. Helv. Chim. Acta, 66, 2632,(1983).

72. Tsai, T. Y. R.; Jin, H.; Wiesner, K. Can. J. Chem., 62, 1403 (1984).

73. Heras, F. G. De las; Fernandez-Resa, P.; J. Chem. Soc., Perkin Trans, 1, 9031982).

74. Mulloy, В.; Ribeiro, A.-C.; Alves, A.-P.; Vieira, R. P.; Mourao, P. A. S. J. Biol. Chem., 269,22113 (1994).

75. Percival, E.; McDowell, R. H. Chemistry and Enzymology of Marine Algal Polysaccharides', Academic Press: London, 157 (1967).

76. Percival, E.; McDowell, R. H. Encyclopedia of Plant Physiology. New Series. Plant Carbohydrates, Vol 13B; W. Tanner and F.A. Loewus, Eds., Springer-Verlag: Berlin, 276(1981).

77. Percival, E. Carbohydr. Res., 7, 272 (1968).

78. Jain,R. K.; Matta, K. L. Carbohydr. Res., 208, 51 (1990).

79. Jain, R. K.; Matta, K. L. Carbohydr. Res., 208, 280 (1990).

80. Jain, R. K.;Matta, K. L. Tetrahedron Lett., 31, 4325 (1990).

81. Ludevig, M. Thiem, J. Synthesis, 56 (1998).

82. Patankar, M. S.; Oehninger, S.; Barnett, Т.; Williams, R. L., Clark, G. F. J. Biol. Chem., 268,21770 (1993).

83. Nishino, Т.; Nagumo, Т.; Kiyohara, H.;Yamada, H. Carbohydr. Res., 211, 77 (1991).

84. Usov, A. I.; Smirnova, G. P.; Bilan, M. I.; Shashkov, A. S. Bioorgan. Khim. 24, 437(1998).

85. Chizhov, A. O.; Dell, A.; Morris, H. R.; Haslam, S. M.; McDowell, R. A.; Shashkov, A. S.; Nifant'ev, N. E.; Khatuntseva, E. A.;Usov, A. I. Carbohydr. Res., 320 108 (1999).

86. Nagaoka, M.; Shibata, H.; Kimura-Takagi, I.; Hashimoto, S.; Kimura, K.; Aiyama, R.; Ueyama, S.; Yokokura, T. Glycoconj. J., 16, 19 (1999).

87. Sakai, T; Ishizuka, K; Shimanaka, K; Ikai, K; Kato, I; Mar Biotechnol (NY)., 5(6)., 536, Epub (2003).

88. Pereira, M. S.; Mulloy, В.; Mourao, P. A.; J. Biol. Chem., 274, 7656 (1999).

89. Berteau, O.; Mulloy, B. Glycobiology, 13 (6)., 29R (2003).

90. Chevolot, L.; Foucault, A.; Chaubet, F.; Kervarec, N.; Sinquin, С.; Fisher, A.-M.; Boisson-Vidal, C. Carbohydr. Res., 319, 154 (1999).

91. Bilan, M. I.; Grachev, A. A.; Ustuzhanina, N. E.; Shashkov, A. S.; Nifantiev, N. E.; Usov, A. \.\Carbohydr. Res., 337, 719 (2002).

92. Bilan, M. I.; Grachev, A. A.; Ustuzhanina, N. E.; Shashkov, A. S.; Nifantiev, N. E.; Usov, A. I. Carbohydr. Res., 339, 511 (2004).

93. Hua, Y.; Gu, G.; Du, Y. Carbohydr. Res., 339, 867 (2004).

94. Ushakova, N. A ; Preobrazhenskaia, M. E.; Nifant'ev, N. E.; Usov, A. I.; Pochechueva, Т. V.; Galanina О. E.; Bovin. N. V; Вопросы мед. хим. ,45(5)., 3751999).

95. Petitou, M. "Drugs based on carbohydrates " в "Synthetic oligosaccharides ", ACS, Washington, DC, (1994).

96. Van Boeckel, C. A. A.; Petitou, M. Angewandte Chemie, Int. Ed. Engl., 1671 (1993).

97. Khachigian, L. M.; Parish, C. R.; Cardiovasc. Drug Rev., 22(1).,1 (2004).

98. B. Mulloy, A.-C. Ribeiro, A.-P. Alves, R. P. Vieira, P. A. S. Mourao, J. Biol. Chem. 269,22113,(1994).

99. Garegg, P. E.;Norberg, Т.; Carbohydr. Res., 52, 235 (1976).

100. Takeo, K.; Aspinall, G. O.; Brennan, P.; Chatterjee, D. Carbohydr. Res., 150, 133 (1986).

101. Hanessian, S.; Roy, R. Can. J. Chem., 63, 163 (1985).

102. Byramova, N. E.; Ovchinnikov, M. V.; Backinovsky, L. V.;Kochetkov, N. K. Carbohydr. Res, 124, C8 (1983).

103. Grindley, Т. В.; "Application of stannyl ethers and stannyl acetals in oligosaccharide synthesis" в "Synthetic oligosaccharides", ACS, Washington, DC, (1994).

104. Boons, G.J.; Castle, G.H.; Clase, G.A.; Grice, P.; Ley, S.V.; Pinel, C.; Synlett, 913 (1993).

105. Helm, R.F.; Ralph, J.; Anderson, L. J. Org. Chem., 56, 7015 (1991).

106. Ogawa, Т.; Yamamoto, H. Carbohydr. Res., 137, 79 (1985).

107. Ek. M., Garregg P.J., Hulbert H., Oscarson S., J. Carbohydr. Chem., 2, 305, (1983).

108. Kashem, A.; Anisuzzaman, M.; Whistler, R.L., Carbohydr.Res., 61,511 (1978).

109. Hayashi, H, J. Am. Chem. Soc., 95, 8749 (1973).

110. Schmidt, R. R; Kinzy, W. Adv. Carbohydr. Chem Biochem., 50, 21 (1994).

111. Helferich, В., Zirner, J. Chem. Ber., 95, 2604 (1962).

112. Rademann, J.; Schmidt, R. R. J. Org. Chem., 62, 3650 (1997).

113. Toukach, F., Shashkov, A. Carbohydr Res, 335(2), 101 (2001).

114. Гордон, А., Форд, P. Спутник химика, Москва, из-во "Мир" (1976).